TW491710B - Pharmaceutical compositions for use in inhibition of keratinocyte differentiation containing hydroxy fatty acid amides and retinol - Google Patents

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491710 A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明領域 本發明係關於含醯胺及類視色素之護膚組合物，並關於 涉及將此等組合物應用於皮膚上之化妝方法。 發明背景 視網醇（維生素A)係一種人體中自然產生之内源性化合 物，其對正常上皮細胞之分化係屬必須。天然的及合成性 維生素A付生物已經廣X使用於許多皮膚病症之治療中， 以作為皮膚修復劑或者皮膚再生劑，視網酸則經使用於許 多皮膚症狀之調理中，例如··面皰，皺紋，牛皮癖，老人 斑以及脫色，可參見於，例如：Vahlquist，A等人發表於 /«MW· Da顧M/·期刊，第 94 本中，由 Holland D.B.及 Cunliffe W.J· (1990)所出版，刊登於第496頁至第498頁之 文獻；Ellis，C.N·等人發表之”視網醇於皮膚上之藥理作用 (Pharmacology of Retinols in Skin)”，Vasel，Karger，第 3本，（1 989)，第249頁至第252頁；L〇we，N.J·等人發表之 ”視網醇於皮膚上之藥理作用（Pharmac〇l〇gy 〇f RetinQls & 81〇11),’’第3本’（1989)，第240頁至第248頁；？(：丁專利申 請案號第WO 93/19743號。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -^---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 線 一般相信使用視網醇或視網醇之酯類將具有優於視網酸 之效果，人骱中自然產生之視網醇咸信較視網酸安全，一 般相信使用視網醇或視網醇之酯類會比使用視網酸來得有 效。視網醇係内源性化合物，視網醇之酯類會於活體内水 解而產生視網醇，本發明部分而言基於以下之發現··視網 醇或視網酯之摻合物，當與羥基脂肪酸之醯胺併用時，對 -4- 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 491710 A7 --—________B7 五、發明説明（2 ) 角質細胞之分化作用會產生加成性抑制力，誠脂肪酸酿 胺與視網醇或視網酷併用之效果，係類似於視網酸之效 果，因此，羥基脂肪酸醯胺與視網醇或视網酯之混合物於 使用上較視網酸容易且較為安全。

Thornfeldt(美國專利第5,〇57,5〇丨號）揭示一種丘疹與鱗 屑疾病與濕疹之治療方法，其中使用一種含倍半萜烯及 0.025%至35%之單羧基脂肪酸 '酯或醯胺之組合物，該組 合物亦可包括類視色素。Th〇rnfeldt教示特定之類視色 素，即，異二類視色素，三類視色素，依類視色素（皆為 視網酸之立體異構物形式）及依類視色素酯（三甲氧基苯基 視網酸之酯類形式）對於丘疹與鱗屑疾病具有經證實之功 效。PCT申請案WO/9325 177(寶鹼公司）揭示一種局部施用 於皮膚之組合物，其包含特定之婦酸羧酸醯胺冷卻劑，亦 可包含例如視網酸及其衍生物（順式及反式）之類視色素。 PCT申請案WO/9403 156(隆寶蘭公司）揭示一種局部組合 物，其包含羊毛酸或其衍生物以作為治療預防不純皮膚疾 病（例如受到丘疹、膿泡與濕疹侵害之皮膚）之活性成分； 該組合物亦可含〇·〇25-〇·1%之類視色素。歐洲專利申請案 第0 388 275號（Pierre Fabre化妝品公司）揭示一種治療皮 脂腫囊之組合物，其包含烷基羧酸醯胺及鋅鹽（可為視網 醉辞）。

Klaus等人（美國專利第48號）揭示使用特定之錯 合叛驢胺以治療及預防贅虎、皮膚病及皮膚老化。van Scott等人（美國專利第4,380,549號）及Yu等人（美國專利第 -5- 本紙張尺度ϋ用巾關家鮮（Α4· ( 21()>< 297公楚） "' L-------φ裝------訂-----φ線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 491710 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（3 ) 4,363,815號）揭示以羧酸或其醯胺治療面皰型、鱗片型、 易裂型皮膚。EP 0 582 458揭示使用N，N-(1，4C烷基）月 桂醯胺。EP 0 559 304揭示使用含具有至少25個碳原子 之醯胺，以作為皮膚潤滑劑。Beauquey等人（美國專利第 5,308,55 1號）揭示一種皮膚之清洗劑及調理劑，除其餘成 分之外，尚包含8-1 6C脂肪酸之1-4C烷醇醯胺。英國專利 說明書第1，126,289號（Hoffman-La Roche)揭示一種儲存型 維他命之製法，其包含維他命A醇或維他命A酯，乳化 劑，及選自單羧酸的醇或二烷基醯胺（例如N，N-二乙基-乙 酿醯胺，N，N-二甲基-乙醯醯胺或n，N-二甲基-甲醯醯胺） 之溶劑，該維他命之製法具有非常高之維他命含量，例 如’最低濃度為250,000維他命A/ml。此外，289號申請案 並未包含或提及順丁晞醯胺。 於更早申請之歐洲專利申請案EP 〇 742 005 (Unilever公 司’優先權日1995年5月8日），其公告日為1996年11月13 曰（在本發明優先權日之後）揭示脂肪酸醯胺與視網醇或視 網酿之摻合物，然而，歐洲專利申請案第〇〇5號案並未教 示每基脂肪酸之醯胺。 上述所揭示之先前技藝並未提及基於羥基脂肪酸醯胺與 視網醇或視網酯之協同性摻合物之皮膚調理組合物，更未 有任一之上述先前技藝解決對有效的視網酸替代品之需 求。 本發明部分而言包含一種皮膚調理組合物，其包括： L---------φ裝------訂-----φ線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -6 -

撓性 質感 形。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491710 五、發明説明（ ⑻自o’ocnmo%的選自由視網醇及視網§旨之類視色 素·， ⑸自0·0001°/❶至50%的羥基脂肪酸醯胺；以及 (c) 一種化妝品可接受媒液。 本發明進一步提供一種調理皮膚之化妝方法，包含局部 施用本發明之組合物於皮膚上。本發明亦提供一種模擬視 網酸於皮膚上之功效的化妝方法，包含局部施用本發明之 組合物於皮膚上。 本發明中之用語”調理”，意指避免及處理一或多種下列 情形：乾燥型皮膚，光易傷害型皮膚，具皺紋之外表，老 人斑，老化肌膚。本發明之組合物亦有用於增加角質層之 美白皮膚，控制皮脂分泌，以及一般性地增加皮膚 該組合物亦可用以改善皮膚鱗片化以及表皮分生情 本發明組合物中所存在之羥基脂肪酸醯胺，實質地改^ 了視網醇或視網酯之效果，即，經基脂肪酸醯胺實質地立 加了視網醇或視網酯影響上皮細胞分化作用之能力。經』 脂肪酸醯胺於單獨使用時，不具或僅具小小的影響上皮舍 胞分化作用之能力；對皮膚之較大助益則係當羥基脂肪g 酿胺與視網醇或視網酯併用時。 簡單而言，本發明至少一部份係基於視網醇或視網酯赛 起基脂肪酸醯胺摻合的協同效果之發現。 根據本發明，藉由併入實質有效量之羥基脂肪酸醯胺至 含有视網醇或視網酯之組合物中，可實質改善該組合物之 -7 本纸張尺( CNS ) A4^_2-iGx297^y (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 一裝.

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—- I 491710 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（5 功效。此外’视_或視網酿可包含於含. .中，以平衡不使㈣胺的類似調配物之效果。 較佳具體實施彳ϋ描述 本發明組合物中包含-種選自由视網醇、視網酯及彼等 之混合物所组成之群的化合物，以作為第一必要成分。 該用語"視網醇"除其餘已知種類之外尚包括下列^網醇 異構物.全-反·视網醇，13_順-視網醇，11-順-視網醇， 9-順-視網醇，3,4_二去氫_視網醇；較佳之異構物係全-反-視網醇，13-順_視網醇，9_順_視網醇，允仁二去氫_視 網醇；最佳者係全_反·視網醇，因其係商業上可廣泛獲得 者。 " 視網酯係視網醇之酯類，該用語”視網醇，，係如上所定 義。適用於本發明中之視網酯係視網醇之ci-c：3()酯類，較 佳係其CVCm酯類，最佳係其C2、C3、及c16酯類，因彼等 係商業上可最廣泛獲得者。視網酯之實例包括、但不限 於：棕櫚酸視網酯，甲醯視網酯，乙醯視網酯，丙醯視網 酉旨’丁 SS視網g旨，戊醯視網醋，異戊醯視網g旨，己g同酸視 網酯，庚酮酸視網酯，辛酮酸視網酯，壬酮酸視網酯，癸 酮酸視網酯，十一酮酸視網酯，月桂酸視網酯，三癸酮酸 視網酯，十二酮酸視網酯，十五酮酸視網酯，十七酮酸視 網S旨’硬脂酸視網g旨，異硬脂酸視網S旨，十九銅酸視網 酯，花生酸視網酯，山荼酸視網酯，羊毛酸視網酯，油酸 視網酯，視網醇内酯，乙二醇視網酯，羥己醯基視網酯， 肉桂醯基視網酯，酒石酸視網酯。 -8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 琴

、1T 491710 五、發明説明（6本發明中所適用之較佳醇類，係選自棕糊酸視網醋，甲 酿視網酯以及乙酷視網醋，因其係商業上最可廣泛獲得且 取便宜者。羊毛酸視網酷亦可使用，因其具備良好之功 效。 視網醋及/或視網酿於本發明组合物中之用量係〇〇〇1% 至10%，較佳係0.01%至1%，最佳係〇 〇1%至〇 5%。 本發明組合物中所含之第-v拓上、 ,^ 、 弟一必要成分，係經基脂肪酸之 醯胺，該羥基脂肪酸之醯胺具有下列結構： OH ΟI II r1 R4一 CH一 R3—c—ncT\r〆 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 其中Ri ’ R2 ’ R4分別係選自氫及具i至20個碳原子之羥 基化脂族飽和或不飽和、直鏈或具支鏈氫_碳鏈； 尺3係·（CH2)n，其中η係自〇至1 8之整數。 較佳地，R! ’ R2，R4分別係選自氫及具2至2〇個碳原子 者，更佳係具2至15個碳原子者，最佳係具3至13個碳原予者。 較佳地，羥基脂肪酸之醯胺係心或卩_羥基脂肪酸之醯 胺，即，η係0或1。 本發明組合物中所包含之最佳羥基脂肪酸係：月桂醯胺· 單乙醇醯胺，（^γβ-羥基醯胺（2-羥基-Cu·醯胺），Ν_羥乙 基-2·羥基-C10醯胺，12-羥基-Ν + 2-羥乙基）十八烷基醯 訂 -9- 491710 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（7 ) 胺’以及馬油之單乙醇醯胺。 酿胺於本發明組合物中之含量係0 0001〇/〇至50〇/〇，較值 係0.01%至10%，最佳係0 1%至5%。 也.軚品接受嫫淦 本發明之組合物亦包含一化妝品可接受媒液，以作為組 合物中活性成分之稀釋劑、分散劑或載劑，是以，當其施 用於皮膚上時，可便利組合物之塗佈。 不同於水或者除了水以外之媒液，可包括液體或固體乳 化劑’溶劑’保濕劑，增稠劑及粉末。尤佳之非水性載刻 係聚二甲矽氧烷及/或聚二甲苯基矽氧烷。本發明中適用 之石夕嗣係彼等於25°C下具有自10至l〇,〇〇〇 mm2/s(分托）黏 度者’特別需要者係低黏度及高黏度矽酮之混合物，此等 石夕酮係購自通用電子公司、商品名為Vicasil S]E&SF者， 以及購自道康寧公司之2〇〇及5 00系列。矽酮於本發明組合 物中之用量佔組合物重之5%至95%，較佳係25%至 90%。 化妝品可接受媒液通常佔組合物重之5 %至9 9.9 %，較佳 係2 5 °/〇至8 0 %，且於無其他調整劑存在下，可供補足組合 物量之用。較佳地，媒液係為佔組合物之至少5〇重量％、 最佳係至少8 0重量％之水，較佳地，本發明組合物中係含 至少50重量％、最佳係60至80重量％之水。 視需要添加之皮膚增益材料及化妝品調整劑 可存在油或者油性物質，以與乳化劑共同構成油包水乳 液或水包油乳液，此大部分取決於所使用乳化劑之平均親 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐 i请先閱讀背面之注意事項存填寫本寅〕 -裝· ΐτ 491710

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 水性·親脂性平衡值（HLB)。 本發明組合物中較佳包含防曬劑，防曬劑包括彼 用錄斷紫外線者。例示性之化合物如PABa、肉桂酸醋 及水楊酸酯之衍生⑯，例如，可使用辛基甲氧基肉桂酸』 及2-羥-4-甲氧基苯基酚酮（即已知之氧基苯酮），辛基甲氧 基肉桂酸酯及2·羥-4-甲氧基苯基酚酮係商業上可獲得者， 商p口名刀別為pars〇1 MCX及Benz〇phen〇ne-3。乳液中所使 用的防曬劑之確實用量可依所欲的於太陽光uv輻射下之保 護程度而改變。 另一種較佳之視需要成分係選自必須脂肪酸（EFAs：), 即，彼等對所有細胞之血漿膜形成係屬必須之脂肪酸。當 角貝細胞EF A不足，會使細胞呈高預活化狀態，供應EF a 則可解決此節，EF A亦可提昇上皮細胞之磷脂生化合成， 並提供脂類於上皮細胞之障蔽形成。此必須脂肪酸較佳係 選自羊毛酸，γ-羊毛酸，同相羊毛酸，鈮酸，二十碳-(η-6,9，13)-三烯酸，花生油晞酸，羊毛酸，二十碳五烯 酸’己埽酸及彼等之混合物。 尚有另一種較佳之視需要成分，其係選自吡咯類，例 如’順吡咯，雙颯吡咯，布三聚合吡咯，酮康絲吡咯，麥 康絲峨咯，依康絲吡咯，印他康絲吡咯，氟康絲吡咯，三 聚康絲吡咯，丁氧康絲吡咯，硫康絲吡咯，尼龍康絲吡 咯，及彼等之混合物。吡咯於本發明組合物中之含量，可 為0 · 0 0 1 %至5 0 %，較佳係〇. 〇 〇 1 %至1 〇 %，最佳係0 · 1 %至 5%。 -11 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇χ 29*7公楚：） ! 裝------訂-----線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 外 1710 A 7 ^-----------B7_ 五、發明説明（9 ~ ^ 礼化劑係通常併入本發明化妝品組合物中者，此等乳化 f可為總組合物自0.5重量％至50重量％、較佳係介於5重 里％至30重:r %之間。於一般化學分類中，乳化劑係歸類 為酯類，脂肪酸及醇，多元醇及烴。 酯類可為單-或二-酯類，可接受之脂肪酸二-酯類包括己 —酸二丁酯，癸二酸二乙酯，二異丙基二聚物，及琥珀酸 —辛酯，可接受之具支鏈脂肪酸酯包括2_乙基_己基十二烷 酉曰，硬脂酸異丙酯，及棕櫚酸異硬脂酸酯；可接受之三鹼 酸酯包括三異丙基三羊毛酸酯及三月桂基擰檬酸酯；可接 文足直鏈脂肪酸酯包括月桂基棕櫚酸酯，己内醯基十二 酯，油醯基幼克酯及硬脂酸油酸酯。較佳之酯類包括椰子 基辛醒酯/辛基酯（椰子基辛醯酯及椰子基辛基酯之混合 物），丙二醇醚乙醯醋，二異丙基己酿酷及十六燒基辛嗣 酯。 適§之月曰肪鉍及醇包括彼等具有1〇至2〇個碳原子之化合 物，此等化合物中特佳者係十六垸基、十二燒基、標搁基 及硬脂酸基醇及酸。 可作為乳化劑之多元醇係線性及具支鏈烷基多羥基化合 物，例如，丙二醇，甘露醇及甘油係較佳者，亦可使用聚 合性多元醇，例如聚丙二醇及聚乙二醇。丁二醇及丙二醇 係特佳可作為渗透加速劑者。 可作為乳化劑之烴類之例子，係彼等烴鏈上具有12至3〇 個碳原子者，特定之例子包括礦物油，石油膠，蜂膠及異 化白蠟油。 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公趁） L----------_裝------訂-----^線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、發明説明（1〇 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本發明之化妝品組合物中所含的其他類功能性成分係為 二，劑，增稠劑通常存在佔組合物重之自01重量％至20重 量％，較佳係自0.5重量％至10重量％。增稠劑之例子為經 父聯之聚丙烯酸酿物質，可獲自B.F· G〇〇ddch公司，商品 名為carbopol。可使用之膠係例如黃原膠，加連膠，凝 膠，刺梧桐膠，f白及大豆膠等。在特定之情況下，增稠 功能可藉由矽酮或乳化劑之添加來達成，例如，黏度超過 1〇分耗之㈣膠，以及具有雙重功能的如硬脂酸甘油醋等 酉I類。 粉末亦可併入本發明之化妝品組合物中，此等粉末包 括白咢粕，滑石粉，鬲嶺土，殿粉，齊黏土，經過化學 改質之鎂鋁矽酸鹽，經過有機性改質之蒙托土，水合矽酸 I呂’發煙珍石’銘澱粉辛醯基琥珀酸酯，以及彼等之混合 物。 其他凋整劑次要成分亦可併入本發明之化妝品組合物 中’此等成分包括著色劑，珠光劑及香水，此等其餘調整 劑次要成分之用量可佔組合物重之自〇 〇〇1重量％至高達2〇 重量〇/〇 〇 fa合物之馇用 本發明之化妝品組合物主要係欲作為局部施用於人類皮 膚上之製品，尤其欲作為條理皮膚及使皮膚光滑、避免或 降低敏紋或老化皮膚之外表之製劑。 使用時，係將小量之組合物（例如1至丨〇〇毫升）自適當之 容器或使用器取出並施用於皮膚外露之區域，及，若需 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公餐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ’裝· 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（11 ) 要’以手或手指或適♦之# 上。 遇田<裝置均勻塗佈及/或塗抹於皮膚 及包— ^發明之局部皮膚處理組合物可適#地調 當容器中m 者〈需求及配合其黏度包裝於適 中，礼液或霜可包裝於瓶子或滾球使用器 ^噴霧推進讀裝置中，或者接有適於手 f器中’當组合物為霜時，僅可以儲存 = 子或掃出瓶中，例如試管或加蓋喷霧器。 夂K开瓦 此組合物亦可包裝於彼等例如描述於美國專利 5,〇63,057號之膠囊中。 因此，本發明亦提供一種如本文中所定義的含有化妝上 可接受組合物之密閉容器。 下列特定實例進一步例示本發明。 致並及方法 將人類角質細胞（經胰蛋白酶處理並單離自新生兒前額肌 膚）於Dulbecoo 改質液（DME) Hams F12 (1 : 1)介質/1Q%胎 牛血漿中、及於經照射之小鼠成纖維細胞之存在下進行培 養，以建立各別的角質細胞複製體，將細胞於上述條件下 培養，直至第二傳代產生為止，然後將之冷凍備用。在替 換至購自 Clonetics公司（San Diego，CA)的含 0.15 mM#5 之 無血漿MCDB 1 53基底介質角質細胞增生介質（KGM)、或 者購自GIBCO公司的含〇.〇9 mM鈣之無角質細胞介質 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^ ~ _ ^裝 訂-----線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12 ) (KSFM)足則’先將冷凍之第二傳代角質細胞溶化並植入上 述；丨負中’並繼續培養5天。第7天時，當細胞已有80- 90%匯合後’將之予以胰蛋白化並植入無血漿介質中進行 許多不同試驗。 轉谷胺班胺蘇測定 接-谷胺醯胺眸測皮惠AJT細胞之分化 在上皮細胞 < 最終分化過程，1 5 nm厚之蛋白質層（已知 之角化套（CE))係形成於細胞外型之内面，CE係由許多不 同之蛋白負所構成，由於經至少一種上皮細胞中之轉谷胺 醯胺酶（TGases)之催化作用形成Νε_(γ_谷胺醯胺基）賴胺酸 異一胜肽鍵而叉聯鍵結在一起。轉谷胺醯胺酶〖（TGasa U 係豐藏於上皮細胞之分化層中，尤其係柱狀層，然不存在 於未分化之基礎上皮細胞層中，因此，轉谷胺醯胺酶j係 上皮角質細胞分化作用最有用之產生源，高TGases I含量 代表更多的分化狀態。以ELISA為主之TGases測定（使用 TGases I抗體）係用以分析下列實例中經培養之角質細胞之 分化狀態。 就實例1而言，係利用以下操作程序： 將角貝細胞（經上述方法培養）植入9 6個井狀盤中，其密 度須為母200 μΐ介質每井中有3,000個細胞。待培養4天後 更換介質為含有測試物質（每次測試用6個複製品）之介 貝’於另外的72小時後’介質係經發氣，並將平盤儲存 於-70 °C下。自冷凍器中移出平盤，並以Pbs清洗細胞，添 加100 μΐ之消毒水，將細胞於-70°C下冷凍以進行冷;東再造 -15- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) — —^1 ....... — - - 5 ....... 1 二 -—1' 線 4^1710 A7 --------- B7 五、發明説明（13 ) 然後落化。細胞係於室溫（R/T)下以PBS/3% BSA(清洗緩 衝液’牛血液樣本）培養1小時，然後以新的清洗緩衝液洗 務。以購自Biomedical公司、經以1 : 2,000清洗緩衝液稀 釋 < 第一抗體單複製體抗人體谷胺醯胺酶小鼠抗體（IgG) 於-37 C下培養1小時，然後以清洗緩衝液清洗2次。接著 以50 μι的經以！ ： 4,〇〇〇清洗緩衝液稀釋之第二抗體殘 '^又過氧化酶共輛抗小白鼠I g G，購自A m e r s h a m公司）於 37 C下培養1小時，然後以清洗緩衝液清洗2次。以基底溶 液（4愛克鄰-苯晞二胺及3 3 μι的3〇% h2〇^1〇毫升〇1 M 榉棣酸酯中緩衝至pH 5 〇)於室溫（R/T)下及黑暗中（以鋁泊 包住）培養細胞5分鐘，添加50 μΐ的4N H2S04後反應停 止。於492 nm處自平盤讀出計上讀出樣本之吸收度，在6 個複製樣本中，將4個以兩種抗體處理，另2個僅以第二抗 月豆處理（即’測走鍵結酵素共輛A b之背景）。τ g a s e s係利用 每/人處理扣除背景校正所得之讀數定之，並記錄曝置於兩 種抗體中的平均值土s.d.。 於實例2中，係利用以下操作程序： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將角質細胞（經上述方法培養）植入96個井狀盤中，其密 度須為每200 μΐ介質每井中有3,〇〇〇個細胞。待培養4天後 更換介質為含有測試物質（每次測試用6個複製品）之介 貝，於另外的7 2小時後，介質係經發氣，並將平盤儲存 於-70 C下。自冷凍器中移出平盤，並以pBS清洗細胞3 次，添加100 μΐ之消毒水，將細胞於-7(rc下冷凍以進行冷 滚再造然後溶化。細胞係於室溫（R/T)下以pbs/3% -16- 本^張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2i〇X297公釐)' " ----- 491710 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（14 ) B S A(清洗緩衝液’牛血液樣本）培養1小時，然後以新的 清洗緩衝液洗條。以購自Biomedical公司、經以1 : 2,000 清洗緩衝液稀釋之第一抗體單複製體抗人體谷胺醯胺酶小 鼠抗體（IgG)於-37°C下培養1小時，然後以清洗緩衝液清洗 2次。接著以50 μΐ的經以1 : 4,〇〇〇清洗緩衝液稀釋之第二 抗體（Fab殘段，過氧化酶共軛抗小白鼠IgG ,購自 Amersham公司）於37°C下培養卜〗、時，然後以清洗緩衝液 清洗2次。以基底溶液（4毫克鄰-苯晞二胺及3.3 μΗ々3〇% Η2〇2於10毫升〇·ΐ Μ擰檬酸酯中緩衝至ρΗ 5.0)於室溫（R/T) 下及黑暗中（以鋁泊包住）培養細胞5分鐘，添加5 〇 μΐ的4N Ηβ〇4後反應停止。於492 nm處自平盤讀出計上讀出樣本 之吸收度，在6個複製樣本中，將4個以兩種抗體處理，另 2個僅以弟一抗體處理（即，測定鍵結酵素共輛a b之背 景）。轉谷胺醯胺酶之測定係利用每次處理扣除背景校正 所得之讀數定之，並記錄曝置於兩種抗體中的平均值 土 s · d · 〇 DNA測定 經細胞處理後之TGase I測定會受到細胞數目之影響，亦 即，細胞數目越多，測得之TGase-1量便越多。利用將相 同井中TGase I之量正常化至與細胞之DNA含量相同，便 可消除因為細胞數目不同造成之變異。DNA量係細胞數目 特別有用之指標，包括對角質細胞而言亦然，因為各個細 胞皆有其本身之功能及相同之基因組，因此可定出DNA之 量。細胞壁之DNA總量，係直接正比於細胞壁中之細胞數 -17- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .•裝. 訂 k 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 491710 A7 ____B7 五、發明説明（15 ) 目，DNA之定量係用以正常化TGase之數值至細胞數目。 將角質細胞植入96個井狀盤中，其密度需為每200 μΐ介 質每井中含有3,000個細胞。待培養4天後更換介質為含有 測試物質（每次測試用6個複製品）之介質，於另外的72小 時後，介質係經發氣，並將平盤儲存於_70°C下至少1 ·5小 時。將平盤自冷凍器中移出並溶化3 〇分鐘。添加1 〇〇 μ1的 Hoechst染料（1 μΐ/ml最終濃度），然後培養細胞丨5分鐘，蓋 上並自螢光計中讀出吸收度（360 nm及460 nm)。移出染料 溶液，並以測定TGase中所製備之PBS清洗培養井。 實例1 變角質細胞之分生作用狀態，視網酸比視網碎更有故^ 添加視網酸（RA)及視網醇（R〇H)後、對轉谷胺醯胺酶量 正常化至細胞DNA含量之影響係經測試，列於表1中。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} |裝· 訂 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -18- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 491710

A B 五、發明説明（16) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 | 2.5x1〇'm ROM 1 2 · 5x10.’Μ RA 1 2.5xlO**M R0H 2 · 5χ10.·Μ RA I 2.5χ10'?Μ R0H 1 2·5χ10〇Μ ΚΛ 控制組 卜理 Ό ：—· CD CD Η η-* 1—* ο Η-* csj 二 〇 ^ ο 1+ 1+ VO 1+ A Η-' Η· GX . Ι-τ- l-r 丨h ο LH ι 〇 ο 二 Ο OJ ο 二 ο wNJ Ο !-* ο ?〇 b. H ^-N u— Q r'r/ yi ι o V — U"l LH 二 -Ο ep o ο ο <?Ρ cr3 c〇 <^> 一 o O'p > σ9 • *·供一 X Ο Ο Ο ο Ο Ο Ο Ο ο Ο ο 〇 1 -〇 c Ο Ι-* Ο Μ Ο 1—^ Ο Η Ο Η Ο C/) hr.* 、寺，| ο ο ο ο ο o o 〇 —Ό ο ο ο ο ο ο CO 1 ο ο Η-4 }—1 ί~* Ο ί〇 | X o —~D ο ο ο ο ο o ο 1 ο ο ο o I—* 二 5 ο Η-* α 二 ο Η-* ο »—* ο 2 !」 —L/· K o —*3 ο ο ο ο ο o 1 ο ο ο ο ο 2 厂一 ·/； ο Η ο !—* ο h-^ ο Η-* ο Η O IsJ 二 L/, -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ----.----Φ衣------1T----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁). 491710 A7 B7 CH3(CH2)9CH— 五、發明説明（17 ) 所有經測試之視網酸濃度，即，2·5 X ι〇-7 μ，2.5 X 1〇·8 Μ，2 · 5 X 10 9 μ，相對於乙醇控制組而言，降低了角質細 胞之分生作用，而就每一個相關濃度：2.5Χ 1〇·7 μ，2.5Χ 1(Γ8 Μ，2·5 X ΙΟ·9 Μ視網醇處理而言，其改良度亦增加。 轉谷胺酿胺酶含量之減少係取決於視網酸及視網醇之劑 量，此與於改變角質細胞分生狀態下、視網酸比視網醇更 有效之論點一致。 實例2 鱼_基脂肪酸之醯胺舆視網酵可加成性抑制角眢細胞之金 作用 對TGase I量正常化至細胞DNA含量之影響係以相關於經 以測試化合物進行72小時處理後始測定之。該醯胺係購自 Quest International公司，C13p-羧酸醯胺具有下列結構·

?H ch2-c nh2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 20 準 標 一家 國 國 I中 用 適 一度 尺 張 紙 本 格 491710 A7 B7 五、發明説明（18 ) n r： 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 2.5xl〇eM ROM + 10'"M C丨3 β -沒酸酿胺 10% C13-P-羥酸醯胺 2.5χ10··Μ 视印1 W CO X Ι-» 〇 sf 5 處现 11.36 土 2.Ή (62%> 18. 53 ：!： 4 . 58 (101%) ( · 6 2 士 2 . 9 9 (7 9 ?;) 1·05 士 1.05 (6%) 18.42 士 3. 士0 (100%) 平均 TGasc/ρΝΛ X 控制 ％) j I 0.001 0.875 0.001 0.001 1 ~3 1¾ < m «.- ··· * "T | 1 j 0.001 ] 1 0.001 ί —_ . ^ 1 0.001 0.001 p fri vs 2.5 '< 1〇'# Μ KOI 1 0.001 0.001 - [ 0.001 1 0.001 p f/j. v：; ?..5 x 10·*ΓνίΙ(Λ 1 0.001 1 0.001 0.001 0.075 ί> IA vs' 10·· C13-P-羥酸醯胺 1^2A弇羞眾@ C13〒l^爵爵漭箄//j Ifl^TGasc/DNA 殮 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 491710 A7 B7 五、發明説明（19 ) 2 · 5 X 1 〇 8 Μ之視網酸對壓抑角質化τ g a s e I含量相當有效 (相對於6控制％而言），2·5 X ΙΟ·8 Μ之視網醇比視網酸 (79%)無效，而1〇·8 MtCuP-羧酸醯胺當單獨使用時，對 角質化TGase I含量不具抑制力。然2.5 X ΙΟ·8 Μ之視網醇+ 10 8Μ之Cid-瘦酸Si胺抑制角質化TGase I含量至62%控制 量，因此，Cup-羧酸醯胺與視網醇對角質細胞分化作用具 有類似於視網酸功效之加成酷胺性效果。 對TGase I量正常化至細胞DNA含量之影響係以相關於經 以測試化合物進行72小時處理後始測定之。所使用”月桂 醯胺ΜΕΑΠ*月桂醯胺單乙醇醯胺，購自Corda化學公司， 月桂醯胺MEA具有下列結構：

Ch3ch-Ln<CH~CH2'〇H OH Η (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 491710 A7 B7

五、發明説明（2Q 經 濟 部 中 央 標 準 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製

遺爵•赛> .泣 毕:’ ί> CV 41 請 先 閱 讀 背 'έ 之 注 意 事 項 再 填 寫 本 頁 斧 to Cd 訂 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 491710 A7 _______B7 五、發明説明（21 ) 2·5 X 1〇_7 M之視網酸對壓抑角質化TGase j含量相當有效

(73控制），2.5 X 1 〇·7 Μ之視網醇及1 〇·6 Μ之月桂醯胺MEA 當單獨使用時，對角質化TGase I含量較不具抑制力。然 2·5Χ1(Γ7 M之視網醇+ 1〇-6M之月桂醯胺mea抑制角質化 TGase I含量至72〇/〇控制量，因此，月桂醯胺mea與視網醇 對角質細胞分化作用具有類似於視網酸功效之加成性效 果。 實例1及2顯示，與劑量無關，視網酸減低了角質細胞之 分化作用。於實例丨至2中，視網酸係作為正控制組以及與 其餘化合物分析比較之參考組。視網醇對於抑制角質細胞 之分化作用方面很明顯地較為無效。 然而’根據貫例1及2之結果，其包含之非可預期性效果 係：視網醇或視網酯對培養角質細胞之影響力可大為提昇 至接近視網酸者，其係藉由將視網醇或酯與羥基脂肪酸之 醯胺摻合而達成，該化合物本身單獨使用時不具功效。上 述結果顯示羥基脂肪酸之醯胺與視網醇及視網酯併用，可 減^角質細胞之分化作用，以及模擬視網酸之效果。 實例3 - 8係例示本發明之組合物，此等組合物可依習知方 法予以製備，適合供作化妝品用途，尤其，此等組:物= 適合於敏紋、粗輪、乾燥、裂開、老化及/或經UV傷害之 本膚之用途中，以改善皮膚外觀及觸感，本發明之組= 亦適合於使用於健康之皮膚丨，用以避免或者延遲衰老現 -24 - 本紙&度適财關家標^公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 491710 五、發明説明（22 ) 實例3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 此實例係例示併入本發明組合物之高内相油包水乳液。 %w/w 視網醇 0.5 全氫化揶子油 3.9 c13p-羧酸醯胺 5 Brij 92* 5 Bentone 3 8 0.5 MgS047H20 0.3 丁基化羥甲酮 0.01 香水 適量 水 至100 *Brij 92係聚環氧乙烯⑵油醯醚。 實例4 此實例係例示併入本發明組合物之水包油面霜。 %w/w 視網醇 0.15 礦物油 4 月桂醯胺ME A 1 Brij 56* 4 Alfol 16RO* 4 三乙醇胺 0.75 1，3-丁二醇 3 -25- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 線-- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 491710

7 B 五、發明説明（23) 黃原膠 0.3 香水 適量 丁基化羥曱酮 0.01 水 至100 *丑1^56係十六醇？〇£(10)。 Alfol 16RO係十六醇。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 會例5 此實例係例示本發明之含醇乳液。 %w/w 棕搁酸視網酯 0.15 N-羥乙基-2-羥基-C16醯胺 0.1 乙醇 40 香水 適量 丁基化羥甲酮 0.01 水 至100 實例ό 此實例係例示包含本發明組合物之另 一種含醇乳液。 議_____鬚_^ 議灘釀漏^ 、 ' ' ^ ' %w/w.......一'一…'了 視網醇 < 0.15 Ν-羥乙基-2-羥基-C16醯胺 丨 0.1 乙醇 ， 40 抗氧化劑 1 0.1 香水 適量 水 至100 -26- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 491710

A B 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（24 ) 實例7 此實例係例示併入本發明組合物之防曬霜。 %w/w 棕櫚酸視網酯 0.01 12-羥基-N-(2-羥乙基）十八烷基醯胺 0.1 碎酉同油200 cts 7.5 甘油單硬脂酸酯 3 十六烷基硬脂酸醇 1.6 聚環氧乙烯-(20)-十六烷醇 1.4 黃原膠 0.5 Parsol 1789 1.5 戊基甲氧基琥珀酸酯(Pairsol MCX) 7 香水 適量 色素 適量 水 至100 會例8 此實例係例示併入本發明組合物之非水性護膚組合物。 __儀囊隱難 :;丨:丨:丨:丨:丨:丨:丨?i:i:丨:丨:丨:丨1¾丨:y攝ΐ:丨纏适 %w/w / \ 視網酸 0.15 馬油之單乙醇醯胺 1 矽酮膠SE-301 10 矽酮流體3452 20 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

491710 A7 B7 五、發明説明（25 ) 矽酮流體3443 55.79 角鯊烯 10 羊毛脂 0.01 膽固醇 0.03 2-¾基- η-辛S同酸 0.7 維他命Ε羊毛醯脂 0.5 草油 0.5 乙醇 2 二甲矽酮聚合物，其具有至少50,000之分子量，及於 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) i裝. 25°C下至少10,000分托之黏度，購自GEC公司。 二甲梦酉同環狀五聚物，購自Dow Corning公司。 二甲碎酉同環狀四聚物，購自Dow Corning公司。 訂 線--! 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. 申請專利範b

   1. 一種供抑制角質細胞用之醫藥組合物，包含·· ⑻0.001%至10%的視網醇； ⑸0.0001%至50%的羥基脂肪酸醯胺，係選自包括乳醯 胺-單乙醇醯胺，（：13-泠_羥基酸醯胺，Ν-羥乙基-2-羥基- C10醯胺，1 2 -羥基(2 -羥乙基）十八醯胺和 蓖麻油之單乙醇酿胺；以及 (C) 一種化妝品可接受媒液。 2·根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該醫藥組 合物係用以治療選自包括乾性皮膚，受光照射致損傷皮 膚、皺紋、老人斑、皮膚老化、面皰粉刺、皮膚暗沈、 乾癖及遺傳性過敏皮膚病之皮膚病症。 --ϊ---------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 曛 經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 -29- 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格（21〇x297公釐）