TW472149B

TW472149B - Labeled chemotactic peptides to image focal sites of infection or inflammation

Info

Publication number: TW472149B
Application number: TW084103229A
Authority: TW
Inventors: Alan J Fischman; Howard F Solomon; Claudia K Derian; Gary J Bridger; John D Higgins Iii
Original assignee: Gen Hospital Corp; Ortho Pharma Corp; Johnson Matthey Inc
Priority date: 1993-10-22
Filing date: 1995-03-31
Publication date: 2002-01-11
Also published as: ZA948300B; BR9407879A; NZ329594A; KR960705592A; JPH09504526A; PL314109A1; AU699273B2; HUT75056A; WO1995011045A1; KR100355424B1; CA2173972A1; CN1077439C; EP0732944A1; FI961737A; IL137129A0; CN1141002A; NO961532L; NZ275964A; US5792444A; PL177585B1

Description

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明背景：發明範圍：本發明係關於趨化性肽以及它們在偵測個體之感染及發炎位置與治療組織傷害的用途。先前技藝之詳細說明：發炎乃在多種組織傷害形態下發生。此一組織傷害可因微生物侵襲，自體免疫過程，組織或器官異體移植排斥 ’或諸如熱，冷，放射能量，電或化學刺激之外在影響傷害’或機械性外傷而引起。無論起因或身體位置如何，因而發生之發炎反應是相當類似的，其包括官能與細胞調節之複雜組合，微循環中渉及之變化，流體之流動，以及發炎細胞（淋巴球）之匯集與活動。此一反應型式構成天生宿主防禦機轉對抗感染之重要部份，而且，雖然它具有其他因發炎過程所致之組織傷害的"損失（cost) V)，但其最後仍促進其後之修補過程。在微生物感染下，或在某些型態組織傷害後，可溶性化學物質竭力使發炎反應（包括複雜的系列結果）叢生》在發炎位置中之血流提高，且在微血管滲透性提高下而使流體從血液中流出。此一流體之局部分泌至受傷位置包括血漿蛋白質（其通常以相當低速率離開微血管）。淋巴球亦經由微血管進入發炎位置，其均藉由被動及活化過程。發炎細胞滲出液最先主要包括多形核（PMN )白血球（亦稱爲嗜中性白血球或粒性細胞）。其次’在發炎滲入液本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） »3. 3.1〇,〇〇〇 I--------—裝------訂------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 - 472149 Α7 Β7 經濟部中央標準局負工消費合作社印製五、發明説明（2 ) 中可發現單核細胞，淋巴細胞，及血漿細胞β 感染及發炎位置之辨認與特徵化對人類及獸類用藥之臨床診斷是重要的。在早期局部感染中，經常必需尋找具有僅僅是發燒和體重減輕之臨床症狀的個體之"被掩蔽發炎位置"。相似地，在罹患自動免疫疾病（諸如，類風濕性關節炎）之病人，或排斥組織或器官異體移植之接受者中’辨識發炎位置，定義它們之程度大小，以及監視治療開始後之變化的能力對有效臨床看護而言是很重要的》然不出乎意料之外地，已更爲致力於發展很多技術以期辨識位置及評估發炎過程之程度大小。這些技術包括傳統X -射線技術，CAT掃描，以及各種放射性核素掃描 ° (Sutton, A Textbook of Radiology and Imaging, 3rd Ed., Churchill Livingston (1980); Maysey et a 1. , Clinical Nuclear Medicine Ed.， W.B. Sanders ( 1983)。業已使用之放射性核素掃描技術之實例包括： 1 · 67鎵，其結合至血漿蛋白，鐵傳遞蛋白（在注射後 )且易於集中於慢性發炎位置； 2 · 111銦-標記之粒性細胞，其當再度注入宿主時將積聚於發炎位置上； 3 . 可放射標記之箝合物，其通入胞外液中，然後，可積聚於流體積聚位置上；以及 4· 鉈掃描或所謂之第一程放射核素血管照片以評估血流提高區域。傳統核藥物技術係使用以下放射性藥物以供感染發炎 ----------裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 線本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -5 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（3 ) 照影之用。e7G a檸檬酸鹽，η標記白血球’ 9f5mT c標記白血球’以及η標記人類多株I g G。雖然這些藥劑之每一種可在特定情況下產生有用的結果’ 但仍有相當的改良空間。 67Ga檸檬酸鹽可與“Μ η - I gG (MW : 1 5 0 kD) —齊機械化分類爲標記蛋白質，因爲，在靜脈內注射之後，67G a檸檬酸鹽輕易地轉箝合至循環鐵傳遞蛋白（MW : 1 OOkD)及血漿中之乳糖鐵（ lactoferrin) (MW :〜.1 0 0 k D )。用標g己蛋白質照影之發炎是在發炎位置內之積聚與從正常組織清除之速率差異結果（Juweid，M. et al.，Eur. J. Nucl. Med. 19: 159-165 (1992))。使用這些試劑，最適宜之病灶偵測逋常發生於注射後2 4小時或水上（由於從正常組織及血液清除之優先洗滌之故）。

Thakur et al.，已深入分析及討論以體外嗜中性球標記（Sem. Mucl. Med. 1 4: 1 07- 1 1 7 ( 1 984 ))爲基礎之方法。在此一方法中，個體之嗜中性白血球係用r _射線放射性核素標記（以111 I η爲核素）。前述經標記嗜中性白血球可供體內動力研究以及發炎點之照影。此一技術之一缺點是在其體外標記前，必需移除及分離嗜中性白血球〇白血球產生多種控制發炎反應程度大小及期間長短的媒介物，且在它們之表面上帶有多種可結合至化學媒介物及存在於發炎液中之其他蛋白質上且有所反應的受體。前本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 !-1 I n ϋ 1 I I I I I II 訂 I— I— '-^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（4 ) 述受體-媒介物交互作用在控制發炎位置內之白血球功能而言是重要的。發炎性媒介物中的趨化性因子，亦稱爲化學誘引劑（chemoattractants)，其具有誘起Ρ Μ N — s 及巨噬體之直接移動及活化的能力（一般評論見於： Roitt et al., Immunology, Gower Medical Pub., London (1985))° 111 I n標記之白血球曾經是高度成功的照影劑，但卻必需重要的製備時間及血液處理。因爲經放射標記細胞在注射後必需偵測化學誘引劑信號，然後，再移動至發炎位置，因此需要幾小時之集中時間而進一步加長研究時間。而且，放射量測定之考慮限制可投服放射活性之數量，經常導致不良品質照影。雖然可使用較高劑之99mT c標記白血球，但一般適用性受到放射活性在非檫的器官中之積聚作用所限制》注射與病灶偵測間之時間長短可藉由發展結合至循環發炎細胞以及已存在發炎位置上之細胞上的低分子量放射藥物而顯著降低。具這些特性之備用分子包括：IL-8 ( Baggiolini, M., et al., J. Clin. Invest. 84(4): 1045-1049 (1989))，血小板因子一4 (Deuel，T.F· et al. , Proc. Natl. Acad. Sc i. USA 78(1)： 4584-45 87 ( 1981))及肽，N —甲醯基—甲硫胺醯基一白胺醯基一苯基丙胺酸（For_MLF) (MW 4 3 7 )( Showe11, Η. J., et a 1., J. Exper. Med. 1 43:1 1 54- 1 1 6 9 ( 1 9 7 6 ); Sch i f fraann, E. , et a 1. , Proc. Natl. (請先閱讀背面之注^^項再填寫本頁) -β Γ % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 472149 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（5 )

Acad. Sci. USA 72:1059-1062 (1975); Williams, L.T. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 74:1204-1208 ( 1977))。 F o r _ML F是一種細菌產物，其藉由結合至白血細胞膜上之高親和力受體上而引發白血球之化學吸引（ Williams, L.T., et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 74:1204-1208 (1977); Showell, H.J., et al., J. Exper. Med. 143:1154-1169 (1976); Schiffmann, E., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72:1059-1062 ( 1975))。這些受體係存在於PMN / s及單核吞噬細胞上。雖然很多體外結構-活性研究已證實這些小的N_甲醯基一甲硫胺醯基肽類之很多合成同系物以相當於或大於天生肽類之親和力結合至嗜中性白血球及巨噬體上（Niedel ,J. et al., J. Biol. Chem. 255:7063-7066 (1980); O’Flaherty, J.T. , et a 1. , J. Immunol. 1 20:1 326-1332 (1978); Rot, A. , et a 1. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7967-7971 (1987); Iqbal, M., et al., FEBS 165:171-174 (1984))，但是體內生化分布及生物活性研究已相當受限制。當粒性細胞回應化學誘引劑梯度時，受體之親和力在其他受體表現時降低直到細胞達到發炎位置爲止，在該處化學誘引劑之濃度最高（Snyderman， R., et al., Rev. Infect. Dis. 9：S562-S569 (1987); Fletcher, Μ.P. , J. Immunol. 128:941-948 ( 1 988 ); Niedel, J. , et a 1. , J. Biol. Chem. 1 0:7 0 0 - 7 1 0 ( 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I. I 裝 I ——訂I HI 線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) . 一 8 - 472149 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製五、發明説明（6 ) 1979))。因爲F 〇 r - ML F之極小分子大小（MW 437)，它的分子結構可輕易處理以設計最適宜之照影劑。很多種細菌可產生1或多種趨化性分子，小的肽類，較大的蛋白質，或脂質（Klein，J.，Immunology: The Science of Self- Nonself Discrimination, Wiley Interscience，New York ( 1 982))。例如，大腸桿菌已知產生潛在趨化性分子，具有含經保護胺基之小的雜原子肽類作爲它的活性成份。前述肽類業經合作且證實係爲 PMN > s之潛在化學誘引劑。這些趨化性肽類最廣爲人知的是F 〇 r — ML F及某些相關四肽（Schiffman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72:1059-1062 (1975 );8〇1^1【11181161&1.，美國專利 4,427,660 (1984))。這些肽類之結構-功能研究建議檩的分子表面上立體專一性受體之存在（Becker, E.L.，Am_ J. Pathol. 85: 3.85-394 (1976));前述受體隨後再用經放射標記甲醯基肽類 (作爲配位基）偵測（Williams et al. / Proc. Natl. Acad, Sci. USA 74:1204-1208 (1977))。其次，合成具有結構N —甲醯基—N 1 e — L e u — Phe— N1 e — Tyr-Lys之趨化性肽，其可用 125I ，在Ty r殘基上標記至較高比放射活性，且經證明強力結合至人類嗜中性白血球之受體上（Niedel et al .,J. Biol. Chem. 254:10700-10706 (1989))。細菌細胞亦可誘使宿主細胞產製趨化性因子（例如，本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ^^1 -I ^—^1 - - m I n ^^^1 n (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T. 線 9 472149 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（7 ) 藉由宿主補體系統之活化成份），引起趨化性分子（ C5 a及C5b 6 7)之局部產製。一旦免疫反應繼而發生於宿主內，I gG抗體分子亦可供作爲趨化性因子（如同經活化T淋巴細胞所產生之分子一般地）。不同的趨化性分子對不同之PMN > s (例如，嗜中性白血球，嗜鹼細胞，嗜曙紅細胞）.，肥大細胞，單細胞/巨噬體，或淋巴細胞（其係根據發炎細胞種類上之適當受體而定）。趨化性肽類嘗爲多種結構-活性研究（集中於測定和受體結合與活性有關之分子專一特性）之焦點所在（ Deuel, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78(1):4584-4587 (1981); O'Flaherty, J.T., et al., J. Immunol. 1 20: 1 326- 1 332 ( 1 978 ); Rot, A.，et al.， Pro. Natl. Acad. Sci. USA 84:7967-7971 (1987); Iqbal， M.， et al·， FEBS 165: 17卜174 (1984))。大多數之這些研究已集中注意力於F o r - ML F序列中之天然胺基酸的取代作用；但是，嘗有人指出加長之肽類及荷咼度負電荷之肽類（Fischman，A.J., J. Nucl. Med. 32:483-491 (1991); Toniolo, C., et al., Biochem. 23:698-704 (1984))之受體結合及活性的EC 5。/ s少於或等於天然肽。通常，這些結構一活性研究結果已確認雖然在N—端之改良對受體結合與活性有深遠之負面影響，但C —端改良卻影響最少（Spisani, S.，et al.， Inflammation 1 0:3 6 3- 3 6 9 ( 1 9 8 6 ))。此外，受體結合與生化活性係高度相關聯的（Deuel, T.F., et al. , Proc. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3. !0,〇〇〇 -----------Λ —裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、«!_ ，線 -10 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（8 )

Natl. Acad. Sci. USA 78(1):4584-4587 (1981);

Sch i f fmann, E. , et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72:1059-1062 (1975))。根據這些數據已提出受體-肽錯合物之構型模式，其中，僅N -端4個胺基酸殘基係與受體交互作用（卩犷661'，1?.<1.，61；31.，81〇(：116111.21:257-263(1982))。吾人已證實F〇 r— MLF之合成同系物（C —端經改良）以相等或大於天然肽之親和力結合至嗜中性白血球及巨礎體（Deuel, T.F.', et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78(1):4584-4587 (1981); Schiffmann, E., et a 1. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72： 1 05 9- 1 062 ( 1975))； Niedel, J. et al., J. Biol. Chem. 255:7063 -7066 (1980))。因此，在C—端包含標記部份使能製備· 具有保存受體結合之放射標記同系物。此一感染照影方法具有優於目前使用放射性藥物之幾種理論性優點》注射及病灶偵測之時間間隔實際上可藉由這些小分子結合至循環粒狀細胞，以及結合至已存在感染位置上之白血球的能力而降低。肽之低分子量（ < 1 0 0 0道耳吞）使其能夠更迅速地擴散至感染及發炎區（與經標記蛋白質及白血球相比較）。此外，粒狀細胞之當場立即標記消除了細胞功能之改變（其係由傳統標記方法所伴生）且省略血液處理（其對個人及病人是先天危險的）。

Zoghbi et al·，J. Nuc. Med. 22:32 ( 1 98 1 )使用本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 83.3.10,000 I..-------—裝-- (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 、π 11 472149 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（9 ) 偶合至肽之蛋白質鐵係遞蛋白而以^1 η標記F 〇 r — M L F且建議此一試劑有希望選擇性標記人類嗜中性白血球。雖然此一方法有效解決了標記選擇性問題，但它並未解決從個體移出細胞，在體外處理它們以及再灌輸它們的問題。 . . 有一報導揭示一種嘗試藉由直接注入經1 2 5 I —標記之 Ν —甲酸基一N1 e — Leu — Phe — N 1 e —

Tyr — Lys至兔子以固定體內無用之膿瘡（Jiang ： et al.，Nucl. Med. 2 1:1 1 0- 1 1 3 ( 1 982 ))。雖然獲致有效之標記比值（膿瘡-對-肌肉），但此一試劑之使用引越暫時性嗜中性白血球減少症，隨之，反彈爲嗜中性白血球增多症。作者了解必需進一步發展以避免嗜中性白血球減少症/嗜中性白血球增多症之副作用而令此一方法可供臨床上使用。此外，1251不能良好造影且此一參考資料未揭示或建議較好之照影同位素，諸如，123I ，mi η ，或 99m T c 。

Morgan et al.在美國專利4 9 8 6 9 7 9中揭示一種增強積聚於發炎組織位置上之標記數量的方法。其優點是白血球上表面抗原標記物在其活化下之向上調節。揭示一種使用包含親和性標記與放射性核素標記（共軛至白血球）之趨化性肽照影的方法，以及和增強有關之照影用途。這些作者未能揭示合成拮抗劑之任何合成方法或者前述拮抗劑未能用以避免嗜中性白血球之反應。雖然以上技術可能提供可用的資料，但它們亦可能導 ^ -----—、1T------銀 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 12 _ 83. 3.10,000

/—\ Z \_一 I Θ h p - u e L i Y I X 經濟部中央標準局貞工.消費合作社印製

基 .代取接 .1彐二或記標 ’ > ，及示基基列以所護殘序，構保酸子 1 結基基隔或下 : 胺胺間 ο 以中示示示示示式 X Y z n W 472149 A7 ___B7 五、發明説明（10 ) 致不能爲人接受之高頻率僞正及僞負結果，需要不能爲人接受之處理及加工數量，或者伴生不能爲人接受之副作用。因此’吾人認爲仍需更直接，更敏感且更專一性之偵測和定出感染發炎位置之方法的技術，尤其是可系列進行評估在治療時間內，對治療之反應的技術。發明總論：本發明係關於照影感染或消炎位置之實際上無侵略性方法，其係根據全身注射至動物體內之可偵測的經標記趨化性肽類積聚於局部發炎位置上的發現而獲致。更特定而言，本發明係關於一種偵測個體之感染或發炎位置的方法，其包括： a .投服該個別以診斷有效數量可偵測之經標記趨化性肽：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 . —^------#------0---------^—-------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -13

472149 A7 . B7五、發明説明（η ) -〔Κ〕v— Μ 1 式中： Κ示媒介官能基， y示0或1 ，以及 Μ 1示診斷可偵測之標記；以及其中，趨化性狀實際上積聚於感染或發炎位置上且實際上不積聚於未感染或發炎之位置上；以及 b .偵測趨化性肽。在較理想體系中，本發明係關於一種偵測個體之感染或發炎位置的方法，其包括： a .投服該個體以診斷有效數量可偵測之經標記趨化性肽： X-Y-Leu-Phe - [Z)n-W 1.---------—裝------訂------線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝基護保基 : 胺中示示中式 X Υ 其 R - Η Ν 〇 = C I Η 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -14 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（l2) R1 示苄基，烷基，或—CH2— CH2— R2—CH3 以及 Ο ο

II II R2 示—S —，一 S —，— S — 或—Ο —，

II ο ζ示間隔子基團， • η示〇或1 ，以及 W示下列結構式所示標記或連接取代基： -〔Κ〕ν- Μ 1 式中： Κ示媒介官能基， V示0或1 ，以及 Μ 1示診斷可偵測之標記；以及式中，趨化性肽實際上積聚感染或發炎位置且實際上不積聚於未感染或發炎位置上；以及 b .偵測趨化性肽。在另一體系中，本發明係關於可偵測之經標記趨化性肽：

X-Y-Leu — Phe -〔Z〕n-W 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -----------裝—------訂------踩 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（l3 ) 式中： X示以下結構式所示之胺基保護基： R 3 - C = R 4 其中，R3係選自氫原子，烷基，烯基，炔基，烷氧基，芳氧基及胺基且R4示氧或硫原子， Y示胺基酸殘基， Z示選自（Ci-e)脂族二胺，〔R6〕m，及其混合物，其中，R6示胺基酸殘基而m示大於或等於1之整數，n 示0或1 ，以及 W示以下結構式所示之標記或連接取代基： —〔Κ〕v - Μ 1 其中： Κ 示 DTPA，EDTA，或 HYNI C， y示1 ，以及 M1 示 Χ11Ι η 或 99mTc ; 且其中趨化性肽實際上積聚於感染或發炎之位置上且實際上不積聚於未感染或消炎之位置上。治療組成物包含亦在本發明範圍內之前述趨化性肽類，雖然對前述組成物而言，包括可偵測部份並非總是必要本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐} 83.3.10,000 II-------—裝------訂------線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -16 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 ------ Β7 五、發明説明（14 ) 的。更特別的是’本發明係關於包含以下趨化性肽類之治療組成物： -X - Y-Leu-Phe -〔Z〕n_〔T〕α 式中： X示以下結構式所示之胺基保護基： R 3 - C = R 4 其中’ R3係選自氫原子，烷基，烯基，炔基，烷氧基，芳氧基，以及胺基且R4示氧原子或硫原子， Υ示胺基酸殘基， Ζ示間隔子序列，其選自（C^e)脂族二胺，〔R6〕^ ’及其混合物，其中，R6示胺基酸殘基且m示大於或等於1之整數； η示〇或1 ;以及 ί Τ示治療劑，且α示〇或；I ; 且其中，趨化性肽實際上積聚於感染或發炎位置上且實際上不積聚於未感染或發炎之位置上。本發明因此係關於一種偵測個體之感染或發炎位置之體內方法。此一方法包括投服個體以可偵測之經標記趨化性肽類，其中，肽實際上積聚於感染及發炎位置上，但不本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -------------- (請先聞讀背面之注^^項再填寫本頁) 訂線 -17 - 4m^g· .正補充本年月η 二：第84103229號專利申請案中文説明書修正頁换., 民國85年2月呈 P'D 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製五、發明説明（ 1 15) 1 、積聚於未感染未發炎之位置上 0 1 1 本發明亦包括已結合適當箝合分子與可偵測標記之各 1 1 種趨化性肽類 0 1 請 1 1 先閲 I 讀 1 固圖示之簡要說明：背 1 圖是示出之 1 1 四種 •Mrif 趨化性肽類 ( 與 D Τ Ρ A 共軛）與人注意 1 I 類嗜中性白血球結合之分析結果的固圖形 9 分析是 —種競爭事項 S. 1 1 性結合分析 « 其中 > C 3H〕F 〇 r - -ML F是被較高濃 ~rr 填本 1 裝度之未經標記肽所取代〇頁 1 圖 2 是示出四種趨化性肽類 ( 與 D Τ Ρ A 共軛）藉由 1 1 人類嗜中性白血球刺激超氧化物產製之分析結果的圖形 0 1 | Μ L F 是涵括在本分析中以供比較之用 0 訂 I 圖 3 由趨化性肽同系物產生超氧化物人類 1 1 I Ρ Μ Ν 〆 S 用單一之 Η Β S S 或所示濃度肽在 3 7 °C 下 1 1 1 m 養 1 0 分鐘隨之測定鐵細胞色素 ( f e r r i C y t 〇 c h r 〇- 1 1 me ) 0 Λ 1 最大超氧化物產製 % =Ε / Μ X 1 0 0 1 1 式中 Ε 示在所示濃度肽存在下產生之超氧化物數量而 Μ 1 | 示肽所產生之最大超氧化物數量〇 F 0 r — N 1 e L F Κ 1 I — Η Υ Ν I C ； Η Ρ 1 F 〇 r — Μ L F K — Η Υ Ν I C 1 1 I ： Η Ρ 2 ; F 0 r — Μ L F Ν Η ( C Η 2) 6 N Η — 1 1 Η Υ Ν I C Η Ρ 3 F 〇 r — Μ L F — ( D ) K 一 1 1 Η Υ Ν I C ： Η Ρ 4 〇 1 1 ΓΕΠ 圖 4 : 趨化性肽同系物對 F 0 r — Μ L C 3H〕F ( 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -18 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 !___〜_B7 Γ ^〜----------_ 五、發明説明（16) ~ ㈣则 "" I ， 'jy 參結合至人類PMN，s )之作用。堯- s ( 8 X 1 〇5 )用孵養緩衝液或所示濃度肽，在Γ5 nM F 0 r— ML 〇η〕f存在下，24°C下孵養45分鐘隨之’測定專一性F 〇 r — ML 〔3H〕F結合。

最大 F o r 〜ML〔3H〕F 結合％=E/CX 10 0 式中’ E示在所祆濃度未經標記肽之存在下結合之專一性 c pm而C示在只有緩衝液存在下之f 〇 r — ML〔3H 〕卩的專一性cPm結合》Fo r— N1 eLFK — HYNIC :Hpi ; For— MLFK — HYNIC ·· HP2;For 〜MLFNH(CH2)6NH-HYNIC :HP3 ; For — MLF— (D) K — Η Y N I C : Η P 4。圖5 :肽濃度對放射化學產率（％ )和比活性（ mC i/Moi? e)之作用。所示係爲Fo r— MLF — (D ) K — Η Y N I C之數據。類似結果係用所有測試肽類獲得。圖6 :在經大腸桿菌感染之家鼠中的經99inTc標記肽類之標的-對—背景（T / B )比值。數據係利用在經感染肌肉中之％ I D/克數除以在對側正常肌肉中之對應值而算出。在所有情況下，感染係在注射2 4小時前完成。每一點是5 — 6動物之平均值（SEM)的平均值土標準誤差。 H. II I I - I -I- I!1*^1!. - - - - - - I— 、言. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） μ 472149 五、發明説明（π) A7 Έ7 止補充本济奸π% 圖7 :大腿經大腸桿菌I薬~乏~冤'子射9 T C -標記之趨化性肽同系物的代表性r -照相機影像。影像是在注射約/ m C i 99m T c標記Η P 2後1 7小時取得。感染是在注射2 4小時前產生的。圖8 :大腿經大腸桿菌感染之兔子在注射9 9mT c -標記HP 2 1 7小時後之生化分布（b.iodistribution )。數據係以平均％注射劑量/組織克數表示。誤差值示爲S EM。感染是在注射99mT c -標記HP 2前2 4小時產生的。圖9 :經大腸桿菌感染之兔子在注射99mT c -標記 HP4後1 7小時之標的一對一背景（T/B)比值》數經濟部中央標準局員工消費合作社印製 D /克數除以對側正常情況下，感染乃在注射言，數據包括來自6動來自6動物之6樣品。肺臟，肝臟，脾臟，腎點的4種製劑之％注射 )之實驗摘要）的製程和-5分鐘以及在注射 5，10和20分鐘作 1 eYK — DTPA 對末梢W B C數量係以基 {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 據係利用在感染肌肉或膿中之％ I 肌肉中之對應值而計算出。在所有 2 4小時前完成。對經感染肌肉而物之2 8樣品·。對膿而言，數據是圖10 :示出HP3在血液，臟及胃腸道中，在注射後之4時間劑量/克數。圖1 1 :此係實例8 5 (以後圖示。收集血液樣品以供在一1 5 後 0.25，ΰ·50，1，3, 血液測量。圖 12 : ForNl eLFN 猴子之末梢WB C值的作用。全部本紙张尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（2丨0 X297公釐） 472143 A7 B7 五、發明説明（i8) 隊

準值之百分比表示。使用4種劑量之肽（n g/kg) P:肽注射；V:載體注射。圖1 3 :大腿發炎之Rhesus雌猴，在注射99mT

標記（F t

L u P h -Ν Η -( CH2) β— ΝΗ — HYN I C後3和1 2小時之r —照射機影像。所有影像均對最亮之照片標準化。圖14:大腿深部受大腸桿菌感染之兔子在同時注射 9 9·» Tc-HP及^1 η -標記白血球後6和1 8小時之 r —照相機影像。所有影像對早期e9mT c — HP影像中之全部.計次數目標準化。感染乃在注射2 4小時前完成的 fWT 圖 ·‘在注射 6和1 8小時後，來自閃爍圖之 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) R Ο I分析的經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Tc— HP 和 α11Ι n— WBC ^ s 的標的對背景比值。每一點是6動物之平均值土 S EM。在所有情況下，動物係在注射放射性追踪劑前2 4小時·受到感染。圖1 6 :利用直接放射活性測定，對注射99m T c -HP和n— WBC — s 1 8小時後之切除組織樣品的標的一對一背景比值。圓圈代表9 9m T c — Η Ρ之所有數值（6動物之30樣品），大圓圈代表平均值土 SEM»小正方形代表“Μ n— WBC > s之所有數值（6動物之3 0樣品），大正方形代表平均值士 SEM 。在所有情況下，動物係在注射2 4小時受到感染。圖17 :對注射90mTc— HP及mi η — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -21 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（19 ) W B C ^ s 1 8小時之切除組織樣品利用直接放射活性測試法所測得之膿一對正常肌肉比值。每一點是6動物之平均值土 S EM »在所有情況下，動物係在注射前2 4小時受到感染。較理想體系之說明： >發炎^及"發炎位置"用語係用以代表個人因組織傷害（不管是以下因素或病因）而發生之症狀和其位置。此一組織傷害可起因於微生物侵襲，自體免疫過程，組織或器官異種移植排斥，或諸如熱，冷，放射性能量，電或化學刺激之傷害性外在影響，或機械性外傷。不管起因或身體部份爲何，繼起之發炎反應是相似的·，其包括功能及細胞調節之複雜組合，渉及微循環之變化，體液之移動，以及發炎細胞（白血球）之匯集及活化。 "感染"一詞係指受到細菌，病毒，黴菌，原生動物，及其他微生物之侵襲》 "個體〃一詞意欲包括動物，例如，哺乳類，尤其是人類。 "激動劑"如本文中所用地係指結合至受體並刺激受體功能之趨化性肽類。 "拮抗劑"如本文中所用地係指避免受體刺激之趨化性肽類。趨化性肽（拮抗劑）對細胞受體具有親和力且藉由與其結合而避免細胞產生反應。 "診斷上有效"之劑量如本文中所用地意指所投服之本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 --------—^.------1T------#. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -22 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 Β7 五、發明説明（20 ) 可偵測的經標記趨化性肽數量足以偵測出超過及大於任何背景訊號之感染或發炎位置。通常，可偵測之經標記趨化性肽的診斷劑量將依各種考慮因子（諸如’病人之年齡，症狀，性別，以及疾病程度’反指本（coun'terindications)，若有的話，以及其他變數）而變，且可由診視之醫師調整》劑量可在約 0 . Oleg/kg至約2000//g/kg間變化，宜爲約 0 ._lj«g/kg 至約 l〇〇〇jtig/kg。 "終端-經改良之趨化性肽〃一詞意欲包括，但不限於，具有以下通式之分子：

X — Y_Leu — Phe —〔Z〕n— W 式中： X示胺基保護基， Y示胺基酸殘基， Z示間隔子序列， η示0或1 ;以及 W示標記或連接取代基。在以上通式中，X示胺基保護基，亦即，保護胺基之基團，且可爲任何可供此一目的用之熟悉此藝之士習知的許多基團。以下概要圖示說明幾種有用的合成途徑，藉由該等途徑可將胺基保護基加至趨化性肽上：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 —---------裝— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂' 線- -23 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（22 ) 通常’在構想趨化性肽（"C P")上之胺基保護基 (亦即，N -端保護基）時，最正確的是將該部份視爲單一單元而非利用&間隔子〃而從CP分離之、龐大"基團。可能的是保護基之這二部份經由立體，靜電及疏水性交互作用而與受體產生交互作用。因此，保護基之整體組成最後將決定C P之活性》此一觀念是藉由經胺甲酸正丁酯保護之C Ρ活性幾近1 0倍小於對應之經正丁基脲保護之 C Ρ的觀察結果所支持。這二個保護基團具有相同之脂族側鏈，但不同的鍵結角度，旋轉程度以及靜電特性。將胺甲酸酯（胺基甲酸酯）之CP Ν —保護轉換成脲時，可能改變Ν —端之所有形狀。脲將具有不同的鍵結角度與顯著較小之旋轉自由度（羰基- Ν鍵結之旋轉小於羰基_〇鍵結之旋轉）。這些作用對整體接合至CP_受體可能具有些許作用。 C P之N —端靜電行爲將因併入腺而產生變化。這些靜電差異可能導致受體間之氫鍵交互作用改變。脲之整體大小和胺甲酸酯並無明顯差異。但是，再度地，可能有一例外情形是爲脲之受阻滯旋轉可能鎖定它在特定構型上（其對接合至受體內有顯著的作用）。此和形狀之關聯大於尺寸大小。可能，C P之N -端使用脲保護基之最合宜理由是在脲在更廣闊條件範圍下較胺甲酸酯安定。因此，它在高度酸性條件下之安定性使得在C -端上之連接子部份上的化學轉形範圍較廣闊。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ---------—裝------訂------，線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 25 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（23) . 其他相關之胺基-保護基亦在本發明之範圍內，諸如 :包含雜原子之脲，硫脲，磺醯胺，磷醢胺’胍，及礦酶脲。文獻揭示多種其他胺基-保護基，例如，第三丁氧_ 基，乙醯基，笮氧羰基，甲醯基，硫代甲醯基，氰醯胺基及甲氧幾基。有效之趨化劑（若它們是爲激動劑或拮抗劑）亦由使用異丁氧羰基及烷基（c3- ce支鏈和環狀）胺甲醯基保護它們之胺基終端而製成。多種適供趨化性肽類使用之胺基-保護基列於下文中。保護基之合成方法參見Protecting Groups In Orga-nic Synthesis# ; John Wiley & Sons： New York, 1981 ;第6章》 a .胺基甲酸酯：胺基甲酸環丙基甲酯胺基甲酸一1 —甲基一1 _環丙基甲酯胺基甲酸二異丙基甲酯胺基甲酸一2—甲硫基乙酯胺基甲酸一1 ，1 一二甲基丙炔酯胺基甲酸第三戊酯胺基甲酸環戊酯胺基甲酸環己酯胺基甲酸一 9 —苟基甲酯本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS)A4規格（210x297公釐） 83. 3.10,000 ----------ά------IT------^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) ~ 26 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（24 ) 胺基甲酸-1 一金剛烷酯胺基甲酸-1 ，1-二甲基一2 ，2-三氯基乙酯胺基甲酸_2 ，2，2 —三氯基乙酯胺基甲酸_ 1 -甲基一1 一苯基乙酯胺基甲酸-2，4 一二氯基笮酯甲醯胺及其對應硫代甲醯胺 P塞吩甲醯胺金剛烷基甲醯胺 4 一溴基丁醯基甲醯胺肉桂醯基甲醯胺菸鹼醯基甲醯胺脲類它們對應之硫脲及其對應之氰基胍衍生物苄基脲 2，4 —二氟基苯基脲某基脲苯基脲二苯基脲丙基脲雜脲類本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 83. 3.10,000 ----------裝------訂------旅 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 27 - 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 472149 A7 B7 五、發明説明（25 ) 磺醯胺苯磺醯胺二甲氧基苯磺醯胺甲苯磺醯胺苄磺醯胺三氟甲基磺醯胺磷醯胺苯磷醯胺二甲氧基苯磷醯胺甲苯磷醯胺笮磷醯胺三氟甲基磷醯胺在本發明之較理想體系中，X示 R 3 - C = R 4 式中，R3選自氫原子，烷基，烯基，炔基，烷氧基，芳氧基，及胺基而R4示硫屬，宜爲氧原子或硫原子。當R3示烷基之情況下，它宜爲烷基，更宜爲 I; ,~裝訂線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐）一 28 - 83. 3.10,000 472149 A7 B7 五、發明説明（26 ) (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) C3 — β烷基，亦即，甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，己基或其異構體，例如，異丙基，異丁基，第二丁基，第三丁基，新戊基’ 2 -乙基丁基，等。以異丁基與第三丁基爲最理想。當R3示烯基之情況下，它宜爲C2_6烯基，更宜爲 C2 — 4烯基’亦即，乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基及其異構體，例如，異丙烯基，異丁烯基，第二丁烯基，第三丁烯基，新戊烯基，2 -乙基丁烯基，等。當R3示炔基之情況下，它宜爲C2_6炔基，更宜爲 C2_4炔基’亦即’乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基，己炔基及其異構體，例如，異丙炔基，異丁炔基，第二丁炔基，第三丁炔基’新戊炔基，2 —乙基丁炔基，等。當R3示烷氧基之情況下，它宜爲Cl_e烷氧基，更宜爲C2 — 4烷氧基，亦即，甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基’戊氧基，己氧基，或其異構體。當R 3示芳氧基之情況下，它宜爲苄氧基，亦即，φ 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製一 CH2_0_，其中，苯基（φ)可經取代或未經取代〇當R3示胺基之情況下，它宜爲_N (H) R5所示基團，其中’ R5係選自氫原子，烷基，環烷基及芳基。當R5示烷基之情況下，它宜爲烷基，更宜爲 C3-4烷基’亦即，甲基，乙基，丙基，丁基或其異構體，例如’異丙基，異丁基，第二丁基，第三丁基》當R5示環烷基之情況下，它宜爲環戊基，環己基，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -29 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 Β7 五、發明説明（27 ) 金剛烷基，苯基，或聯苯基’更宜爲環己基或苯基’該等基團可經取代或未經取代° 在以上所示通式中之γ示胺基酸殘基且可爲適供此目的之任何前述殘基。在本發明之較理想體系中’ Y示〇

II -NH-CH-C-R 1 式中： R1示笮基，烷基，或一 CH2_CH2— R2— (：113及 0 0

II II R2 示—S_，_S_，— S —或 _0 —。

II 〇當R 1示烷基之情況下，它宜爲C i _ β烷基，亦即，甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，己基或其異構體，例如，異丙基，異丁基，第二丁基，第三丁基，新戊基，乙基丁基，等。更宜爲在R1示烷基之情況下，它係爲 C 3 - 4院基。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3. !0,〇〇〇丨~~訂線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -30 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（28 ) 在本發明之另一較理想體系中，Y示4 一胺基四氫吡喃一4 —羧酸（Th p) 。Thp產生人類嗜中性白血球之趨化劑同系物，但不刺激超氧化物產製。所製得及測試之肽係爲甲醯基一Thp — Leu-Phe— OMe。在以上通式中，Z示任何有用長度之間隔子序列。依 n = 0或1而定地，Z可能存在或不存在》當！1 = 1時， Z是存在的且宜爲脂族二胺或〔Re〕m，其中，R8示胺基酸殘基而m示大於或等於1之整數，宜爲1 - 3之整數。Z亦可爲脂族二胺與〔R6〕之組合體。在Z示脂族二胺之情況下，它宜爲脂族二胺，例如，伸甲二胺，伸乙二胺，伸丙二胺，伸四甲二胺，伸五甲二胺，以及伸六甲二胺。更理想的是，當Z示脂族二胺之情況下，它將爲具有4 一 6個碳原子者，例如，伸四甲二胺（亦稱爲屍胺（cadaverine))，伸五甲二胺（亦稱爲腐胺（putrescine)，下文中以P u表示），以及伸六甲二胺。當Z示〔R 6〕⑺之情況下，依m值而定地而具有1或多個胺基酸殘基。當存在2或更多個胺基酸殘基之情況下，它們可能是相同或不相同的。包含間備子序列之胺基酸可爲熟悉此藝之士習知之任何胺基酸。例如，R 6可爲（單獨或組合地）精胺酸，麩胺酸，賴胺酸，門冬胺酸，纈胺酸，半胱胺酸，白胺酸，異白胺酸，正白胺酸，甲硫胺酸，組胺酸，脯胺酸，色胺酸，酪胺酸，門冬醯胺，麩胺醯胺，絲胺酸，丙胺酸，甘胺酸或苯基丙胺酸。用爲實施本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 ΙΊ~ II I I I11 n 11 111111 ^ (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) -31 鯉濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（29) 本發明之間隔子序列之較理想胺基酸殘基是（單獨或綜合地）正白胺酸，酪胺酸，門冬胺酸，賴胺酸’白胺酸及苯基丙胺酸。如上所述地，W示標記或連接取代基。w示實施本發明中所用趨化性肽可藉由偵測標記的部份。"可偵測標記 "—詞意指趨化性肽已連接可診斷之可偵測標記於其上。熟悉此藝之士已知有許多不同的標記及標記方法。可用於本發明中之標記種類實例包括放射活性同位素順磁性同位素，以及可利用正子射出局部X -射線檢法（P E T )照影之化合物。熟悉此藝之士將知道結合至本發明中所用趨化性肽類之其他適當標記。此外，這些標記與至趨化性肽之結合可使用熟悉此藝之士常用之標準技術進行。爲供體內診斷造影之用，可使用之偵測儀器種顧是選擇給定放射性核素之主因。所選擇之放射性核素必需具有可利用給定儀器種類偵測之衰變形態。逋常，任何肉眼診斷照影用之傳統方法可依照本發明使用。選擇體內診斷用放射性核素之另一重要因子是它的半生期必需足夠長而使其在標記組織之最大吸收時間仍可被偵測出，但亦必需足夠短以使宿主之有害輻射減至最小。在一較理想體系中，供體內照影內之放射性核素並不射出顆粒，卻產生在140-200keV範圍內之光子，其易爲傳統r -照相機偵測出。爲供體外偵測之用，放射性核素可利用直接或間接的媒介官能基結合至趨化性肽上。媒介官能基（其經常用以本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 83. 3.10,000 II-------—^1-----1T------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472143 A7 B7 五、發明説明（3〇 ) 結合金屬離子放射性同位素與趨化性肽類）是箝合劑，二伸乙三胺五乙酸（D T P A ) (Hnatowich, D. J·， Int. J, Appl. Raddiat. Isot.，33:32 7-332 ( 1 9 82 ))及伸乙二胺四乙酸（EDTA)。其他連接Tc至肽類上之一般箝合劑包括二后配位基（1 )，官能化cyclams( 2 )， N 2 S 2配位基（3 )，以及N 3 S配位基（4 )。或者是，反應性硫醇可經由亞胺基硫醇烷（5 )連接至賴胺酸殘基或硫醇殘基可使包含1或多個c y s殘基之胺基酸序列共軛至肽上。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、言可結合至趨化性肽類上之金屬離子實例是99mTc ， 3 I , 1 3 1 J ，9 7R u，E i7Cu > 67 G a » 125 I ， G a ， 72A s > 89 Z r ，及 2 ° 1 T 1 。以 9 9 m T c 和經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 111 I η爲較理想。 .u1〗η -標記之趨化性肽類係爲家鼠中局部感染位置之外在照影用有效試劑（Fischman，A.J.，J. Nucl. Med. 32:483-491 (1991))。但是，肽類之短生化半生期本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 33 _ 83. 3.10,000 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（31 ) 減低了 111 I n ( t i / 2 = 6 7 . 7小時）之造影有用性。因其短的物理半生期，高度專一活性’優異照影性質’低成本，以及廣泛可fe用性，使得99m T c成爲標記趨化性肽類之理想放射性核素。雖然多種技術已被用於0 9m T c 標記中，但阱基菸鹼醯胺基（HYN I C )曾是最有希望的。肼基菸鹼酸（S HNH)之活性琥珀醯亞胺酯已成功地被用以衍化蛋白質中之賴胺酸殘基之ε —胺基。這些含簡單錯合物（具有Tc (V)合氧基核心，諸如， 99mT c -葡基庚酸酯）之共軛體的赙養導致定量標記（ Abrams, M.J., et al., J. Nucl. Med. 31". 2022-2028 ( 1990))。含99mT c之巨分子的標記可分成三種主要方法：直接標記，雙官能基箝合物，以及預成形箝合物。使用 HYN I C ( SHNH)連接子之目前較理想標記方法是使用錨狀配位基，例如，在箝合先質存在下，還原過鍀酸鹽而形成易解離之90mT c -先質錯合物（本文中稱之爲 ^錨狀配位基'，其隨之再與雙官能基經改良CP之金屬結合基團反應而形成9 9mT c — C P共軛物。如上所述地，99mT c _葡基庚酸酯錨狀配位基可用於業經S HNH 基團之放射標記蛋白質（Schwartz, D.A.，et al.，Bioconjugate Chem. 2:333-336 (1991))。但是，此需要 6 0分鐘孵養及大於2 5mC i / mg之專一活性以獲致大於9 0 %之放射標記產率。聚羥基胺基酸麥黃酮可用爲經 SHNH改良多肽及蛋白質之c標記用之更有效及本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 I-^--------^_------、1Τ------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 34 - 472149 Α7 Β7 經濟部中央標準局負工消費合作社印製五、發明説明（32) 輕便之標記先質β 麥黃酮，三（羥基甲基）甲基甘胺酸，及其同系物可與供自.動形成9 emT C先質之氯化亞錫還原劑一起調製於水溶液（PH6-8)中。形成、Tc —麥黃酮"錨狀配位基之分析係在I TL C — S G條狀物上（類似99»*T c _葡基庚酸酯分析），使用食鹽水定量原始處之T c S η 以及使用甲•乙酮定量溶劑前端之過鍀酸酯。c -麥黃酮〃之溶液（36 1^/111)2先質，50//8/111$氯化亞錫’ΡΗ6.0)，在類似9 9mTc_葡基庚酸酯之條件下放射標記經S Η N Η改良之I g G至9 0 % (在室溫下幾分鐘內）。此外，、Tc —麥黃酮〃溶液可在大於 1 5 OmC i / mg蛋白質之專一活性下獲致>9 0% I g G- SHNH之放射性標記（和T c -葡基庚酸酯相較之下）。使用在高專一活性下之定量標記在經S Η N Η 改良之小分子（例如’ C Ρ — s )之標記中是更重要的。經Η Y N I C改良之肽類可利用以下一般方法標記：在攪拌同時將等體積之產生器洗提出c 04-（ 3 OmC i / mj?)加至Sn/麥黃酮之剛製好溶液（ 72 11^/111又麥黃酮，卩117.〇-7.2，1〇〇//2 /m^ SnC 芡 2· 2H2〇) »99mTc -麥黃酮之產製係利用ITLC — SG 1x8cm條狀物，使用分別測定膠體或過鍀酸酯之食鹽水或甲•乙酮洗提液測定。 99m T c —麥黃酮不需等待肽溶液即加入。1 mg / m又肽 . \ 溶液（例如，i b 〇 c M L F — Η Y N I C腙）可由溶解 ^^^1 —-ϋ ^^^1 n -11- 1 (請先閲讀背面之注項再填寫本頁)

-*1T 線本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉Α4規格（210X297公釐） 83. 3. !〇,〇〇〇 -35 - 472149 經濟部中央梯準局員工消費合作社印製 83· 3. !0,〇〇〇 A7 B7 五、發明説明（33 ) 1呢肽於6 Ο Ο e L乙醇中並加入4 Ο Ο β L稍微酸性水而製成。靜置3 0分鐘以去保護腙之下，肽用乙酸酯緩衝液（Ρ Η 5 . 2 )稀釋（1 : 1 0 ) 。99mT c -肽共軛體係由混合100/zL 99mTc —麥黃酮與1 5mL肽溶液而製成。孵養1小時之後，99mT c —肽之產率百分比係利用I T I C-SG條狀物，使用2 5%w/w N a C β溶液爲洗提液測定，在此情況下，99mT c —肽仍保留在原處而所有其他物質則被洗提至溶劑前端。適當趨化性肽類之實例包括（但不限於）： Ν 一 F 0 r — N 1 e - -L e u - -P h e - -N 1 e — T y r — L y S — D T P A Ν — F 0 r — M e t - -L e u - -P h e - -P u — D 丁 P A Ν — F 0 r — N 1 e - -L e u - -P h e - -L y s — D Τ P A Ν — F 0 r — N 1 e - -L e u - -P h e - -L y s ( N H 2 ) — D Τ P A Ν — F 0 r — M e t - -L e u - -P h e - -L y s 一 D Τ P A Ν — F 0 r — M e t - -L e u - -P h e - -D — L y s (

NH2) - DTPA

N-Ac-Nl e-Leu-Phe-Lys (NH2) -D T P A

N-苄酯基-Me t— Leu-Phe —甲酯 IB〇C-L —甲硫胺醯基（亞硕）一L — Leu~L 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -36 - ----------參------、1T------0 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 B7 五、發明説明（34) _Phe-L_賴醯胺 I BOC — L — 正白胺醯基一L — L e u_L_Ph e — L 一賴醯胺 N— Fo r — L —甲硫胺醯基（亞硕）-L-Le u — L _Phe_DTPA — L — Ly s N — F o r — L — 甲硫胺酸基（硕）一 L — L e u — L — Ph e—N~DTPA — L~Ly s N —異丁基脲一 Me t — L e u — Ph e—羧酸酯異丁氧羰基一Me t — L e u — Ph e — N — DTPA — L y s N — F o r — (D) — Me t— Leu — Phe — Lys 醯胺，溶劑化 t— BOC — N1 e — Leu — Phe — Lys ，溶劑化 N — F o r —甲硫胺酶基—亞硕一 L e u — P h e — L y s醯胺，溶劑化 N — F o r —甲硫胺酿基—碉―L e u — Ph e — Ly s 醯胺，溶劑化

經濟部中央標準局員工消費合作社印I N —甲胺醯基—Me t— Leu — Phe — Lys 醯胺，溶劑化 N-三甲基乙醯基Me t— L e u-Ph e — Ly s醯胺，溶劑化異丁氧羰基—Me t_Leu_Phe_Lys醯胺，溶劑化 N — F 〇 r—N 1 e - L 6 u — Phe — N 1 e— Ty r 83. 3.10,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -37 - 472143 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（35 ) 1 I — Ν e- D Τ Ρ A - -L y s 1 1 ’異丙基脲_ Μ e t — L e u 一 P h e — L y s — s Η Ν Η 1 1 — Β 0 C Ν 1 I 請 1 異丙基脲- Μ e t — L e u — P h e 一正丙基 •~* 胺 — 先間 1 I 讀 I I A S Ρ - s Η Ν Η H B r 背 1 1 之異丙基脲- Μ e t — L e u — P h e — L y s — A s Ρ — 注意 1 事 1 S Η Ν Η Η Β r 項再填 I 1 異丙基脲- Μ e t 一 L e u _ P h e 一 L y s S Η Ν Η 寫袭頁 1 Η Β r 1 Ν — 苯基脲 — Μ e t — L e u — P h e 1 1 異丙基脲- Μ e t — L e u — P h e — 丙烷二胺 — 1 | S Η Ν Η 訂 I Ν — 正丁基 — 硫腺 — M e t — L e u — P h e 1 I Ν — 正丁基脲一 P h e — L e u 一 P h e — L e U — 1 1 1 Ρ h e 1 \ 線 1 Ν — 異丙基脲 — P h e — L e u — P h e — L e u — Ρ h e - C 〇 0 H 1 1 i Β 0 C - Μ e t — L e u — P h e — c 0 0 H 1 I i Β 0 C - Μ e t — L e u 一 P h e ( 醯胺基 ( 丙醯胺基 1 I ) 羧基〔（丙基）羧基） ] — (醯胺基丙醇 S P Ν Η ) 酯 1 Ν — 異丁基脲 — M e t — L e U — P h e — 羧酸酯 1 1 Ν — 正丙基 — 脲 — M e t — L e u — P h e 1 1 Ν — 第三丁基脲 ~ M e t — L e u — P h e 1 1 Ν — 正丁基 — 脲 — M e t — L e u — P h e 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 472143 五、發明説明（36 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 i Β 0 C 一 Μ e t 一 L e U — P h e — ( 醯胺基乙氧基乙基 C 3 — 醢胺基 ] — 6 — 丙儲醛腙 ) — 吡啶 N — i B 0 C 一 Μ e t — L e U — P h e — S P N Η — 硫酯 N — 異丙基脲 — Μ e t — L e U — P h e N — i B 0 C — Μ e t 一 L e U — P h e 一伸丙基二胺一 S Ρ N Η 環己基 — 脲 — Μ e t — L e u — Ρ h e — C 0 0 Η N 一正丁基胺基甲酸酯 — Μ e t — L e u — P h e — 甲酯 N — i Β 0 C 一 Μ e t — L e U — Ρ h e 一甲酯 N — 甲基胺甲酸酯 — M e t — L e u — P h e — 甲酯 N — 金剛烷基脲 — Μ e t — L e u 一 P h e N — 肉桂醯基 — Μ e t 一 L e u — Ρ h e P 一甲苯基脲 — Μ e t 一 L e u — Ρ h e Μ — 甲苯基脲 — Μ e t — L e u — Ρ h e Ν — 肉桂醯基 — Ρ h e — L e u — Ρ h e — L e U — Ρ h e 除了辨 m 及定出局感染與發炎之位置以外 > 本發明方法還可用以監控個體之發炎過程 0 因此 > 藉由測定發炎位置之尺寸變化或變小或其數量，可能測出以消除感染或其他發炎過程起因之特定治療法 > 或是和發炎過程本身有關之特定治療法是爲有效的 0 在另 1~~· 體系中 > 本發明係用以診斷發炎位置之特定優先起因。在此一方法中’疑似具有發炎位置之個體先行給本紙尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 83. 3.10,000 ~ 39 - 472143 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（37 ) 予診斷有效數量之趨化性肽（如前所述），再以照相方式照影以測定位置之存在與位置。實施本發明中所用之趨化性肽類可爲激動劑或拮抗劑。在某些情況下，一定之肽可能兼具兩種功能（依使用濃度而定）。肽類 i Bo c— MLFK 和 i Bo c— MLFK — DTPA拮抗自由基從嗜中性白血球之經F o rMLF刺激釋出，以及粘著經活化嗜中性白血球至體內血管內皮細胞上。拮抗劑活性係使用11 1 I η連接子D T P A改良C —端而保持不變。這些狀類不具有任何激動劑活性。一種體內照影研究進行比較激動劑肽甲醯基-正白胺醯基-白胺醯基-苯基丙胺醯基-正白胺醯基一酪胺醢基 -賴胺酸—DTPA (For-Nl eLFNl eYK-DTPA)及拮抗劑肽 i Bo c— MLFK — DTPA。經u1〗n —標記之肽很迅速地局部固定於感染位置上。前述局部固定係藉由r -照相機影像及組織生化分布兩種方式證實。二肽類間之主要差異是激動劑肽局部固定於諸如，肺，脾，及骨髓之區域中，其代表細胞活化及界限（ margination)，但拮抗劑之肽則否。激動劑之肽誘使全血細胞計數（嗜中性白血球）之暫時減少，而拮抗劑中之肽並不具有任何顯著作用。這些結果係如激動劑對拮抗劑所預期的。激動劑之肽證明超過5小時以上之改良標的對背景比值，而拮抗劑之肽類則最多作用1小時。此乃建議較高結合親和力（如同與激動劑之肽一般地）可能導致經本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ---------^------^------線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -40 472149 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（38) 改良之標的對背景比值以及具有治療上優點。這些結果亦令人感興趣的，因吾人先前未知拮抗劑是否具有照影能力 0前述能力對熟悉此藝之士而言並非顯而易知的，因爲可能經由激動劑之活化作用可能是結合與照影所必需的。據發現此並非是該情況。拮抗劑之肽七—6〇(：-?116-1^611-?^16-L e u — Ph e抑制嗜中性白血球媒介之溶小體酶之釋出。此外，其他胺基甲酸酯N-端保護基不轉化肽類成爲洁抗劑而非激動劑（甲氧羰基及苄酯基）。N -端i B 〇 c 保護基亦適供拮抗劑之肽而C -端賴胺酸經D T P A改良之i B 〇 c肽仍保有適當之生化活性。本發明藉由證實粘著至內皮之和疾病有關嗜中性白血球功能以及自由基之釋出受到拮抗劑i B 〇 c — MLFK 抑制而增進此藝。此一肽亦局部固定於體內罹病位置上。此外，它確實如此而不改變白血細胞數目。這些結果是和粘著級聯（adhension cascade)—保護拮抗劑肽，以及潛在的其他拮抗劑（作爲感染/發炎疾病之治療和診斷劑 )之使用相符合。肽骨幹改良·· 用其他化合物取代上述通式之L e u或P h e部份之一亦在本發明之範圍內。 a .白胺酸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 --------I#------、tT------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 41 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 Β7 五、發明説明（39 ) 用二丙基甘胺酸（D p g )取代白胺酸殘基產生人類 •嗜中性白血球之化學誘引劑同系物。所製得及測試之肽是甲醯基一Me t— Dpg — Phe-〇H。用1—胺基環己烷羧酸（Ac ce )取代白胺酸殘基產生兔子嗜中性白血球中之溶小體釋出之潛在誘發劑同系物。所製得及測試之肽是甲醯基一Me t — Ac ce — P h e — Ο Η。 b .苯基丙胺酸：用z _脫氫苯基丙胺酸（z — P h e )取代苯基丙胺酸殘基產生由兔子嗜中性白血球產生之經刺激超氧化物同系物。所製得及測試之化合物是甲醯基一 Me t — L e u —z — Phe— OMe 〇製備骨幹改良用之取代胺基酸的文獻參考資料列於下面： a) 4—胺基四氫吡喃—4 一羧酸（甲硫胺酸取代）係揭示於 Torrini et al., Indian Journal of Peptide Protein Research 38:495-504 ( 1 99 1 ); b )二丙基甘胺酸和1-胺基環己烷羧酸（白胺酸取代）係揭本於 Dentino et al_, The Journal of Biological Chemistry 28:18640-18468 (1991)； c ) z -脫氫苯基丙胺酸（苯基丙胺酸取代）係使用 C h a u h a n e t a 1 ·，T e 1: r a h e d r ο η 4 4 : 2 3 5 9 - 2 3 6 6 ( 1 9 8 8 )中揭示之方法製成；本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐)"""" ~ 8Γ3. !〇,〇〇〇 ------1T-------M. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 Β7 五、發明説明（4〇 ) d ) 2 -胺基滿酮一 2 -竣酸（苯基丙胺酸取代）係揭示於Gavuzzo et a 1. , Indian Journal of Peptide Protein Research 37:268-276 (1991);以及 e )苯胺基甘胺酸（苯基丙胺酸取代）係如Kraus et a 1. , European Journal of Medicine Chemistry 27:19-2 6 ( 1 9 9 2 )中所述製成。在本發明之另一體系中，趨化性肽類可爲、治療上共軛的"且用以輸送治療劑至感染或發炎位置。、治療上共軛的"一詞意指趨化性肽類係共軛至治療劑上。依此一方式所用之治療劑係關於發炎之優先因子（例如，感染生物或腫瘤）或關於發炎過程本體之組成。用以治療發炎之試劑實例是類固醇和非類固醇性抗發炎藥物。很多非類固醇性抗-發炎藥物會抑制前列腺素合成。依本發明方法，可偶合至趨化性肽類之其他治療劑是藥物，放射性同位素，卵磷脂，毒素，及抗微生物藥劑》所投服之治療劑量是治療有效之數量且易由熟悉此藝之士決定。劑量亦依受體之年齡，健康，及體重，同時治療之種類（若有的話），治療次數，以及所希望之作用性質（諸如，抗-發炎作用或抗菌作用）而定。卵磷脂是結合至碳水化物之蛋白質，通常是源自植物。很多卵磷脂亦可凝集細胞且幾種會刺激淋巴球。箆麻毒素是一種毒性卵磷脂，其業已藉由結合α -鏈（其和毒性有關）至抗體分子以使能夠位置-專一性地傳送毒性作用而在治療上使用。在本發明之體系中，箆麻毒素α —鏈係本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 1^------11------線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -43 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明Ui ) 與趨化性肽共軛。毒素是由植物，動物及微生物產生之毒性物質，其在足夠劑量下會致命。白喉毒素（由Corynebacterium diphtheriae產生）包含可分離之α和副單元。毒性成份可結合至趨化性肽且用以位置-專一性的傳送至感染或發炎反應位置上。根據本發明方法使用之可結合至趨化性肽以供治療之用的放射性同位素實例是125I ，131I ，9°Y，67G u 1 7 B i ，21 1 A t ，212 p b ，47 S c ，1 86 R e > Y Re ，105R h ,153 S m 及 1 09 P d 。. 可用以實施本發明之抗菌藥是抑制感染性微生物（諸如，細菌，病毒，黴菌，及寄生物之物質（Goodman, A. G. et al., 1985，同上），且可爲任何熟悉此藝之士習知者。照影趨化性肽類或非經腸道投服之治療-共軛趨化性肽類之組成物包括無菌水性或非水性溶液，懸浮液及乳液。非水性溶劑之實例係爲丙二醇，聚乙二醇，植物油（諸如，橄欖油），及可注射有機酯（諸如，油酸乙酯）。水性載體包括水，醇/水溶液，乳液或懸浮液（其包括食鹽水及緩衝介質），非經腸道載體（其包括氯化鈉溶液， Ringer’s葡萄糖，葡萄糖及氯化鈉，乳化之 Ringer’ s或固定油）。亦可存在防腐劑及其他添加物，諸如，抗菌劑，抗氧化劑，箝合劑，及惰性氣體。一般見於Remington’s Pharmacentical Science,第 16版，Mac Eds· 1 980。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐) 83 3 10 000 -44 - , ---------¢------、玎-------ά. (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) 472143 經濟部中央梂準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（42) 本發明之照影趨化性肽類或治療-共軛之趨化性肽類之組成物可由任何獲致所欲目的之方式投服。例如，投服可藉非經腸道（其包括皮下，靜脈內，肌內，腹膜內，經皮’或經頰）途徑。或者同時地，可使用口服β照影用可偵測之經標記趨化性肽類之較理想投服方式是靜脈內途徑。趨化性肽可以單一巨丸，或藉由緩慢輸液（宜爲靜脈內，使用完全緩慢輸液之蠕動方式）投服。本發明可用以偵測在多種身體部位（其包括，但不限於肌肉，血管壁、，腹部，骨盤，骨頭，接點或肺部）上之感染或發炎。本發明可用以診斷由任何多種微生物所致之感染，或因前述感染，或外傷，自體免疫過程，或腫瘤所引起之發炎。本發明亦可用爲一種評估感染或發炎之治療效率以及反應。以上揭示內容通常說明本發明。更完整之了解可由參考以下特定實例（其在本文中係用以說明而已，除非另外指明，否則不用以限制本發明範圍）而獲致。實例1 : 實驗性細菌感染之局部位置的造影：趨化性肽Ν —甲醯基—Ν 1 e_L e u — Ph e — N 1 e_Ty r — Ly s係使用此藝中習知之標準固相方法合成（Merrifield，R.B·，J. Am. Chem. Soc. 15: 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 一 45 - I-I I I II 訂— · 線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（43 ) 2149-2154 (1963); Stewart, J.M., and Young, J.D., Solid Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman & Commany, San Francisco, CA (1969))。C —端賴胺酸之 ε —胺基係用DTPA，使用環狀酐改良。初期之肽及 DTPA衍生物之EC 50是近乎相同（約1 〇 _9M )，其代表用D T P A衍化未影響肽之生化活性。（所有經測試肽類得到類似結果）。此一結果是極令人訝異的，因爲吾人預期引入高度負電荷之D T P A基團將大大地改變前述小肽類之性質。肽易於用111 I η作放射性標記❶ 6雙Spragne-Dawley家鼠在實驗中，用1 0 8活的大腸桿菌感染至它們左大腿內。感染2 4小時後，注射約 100/zCi經標記肽（5-lOeg)。系統r -照相機照出在感染位置上之放射活性相關局部化影像，尖峰聚集發生於1小時（標記_對_背景比值爲約4 . 0)。在 2小時處，活性值強度已降低而在2 4小時處，病灶幾乎不能辨識出》這些結果證實了此一新試劑感染動物之發炎局部位置的照影實用性。實例2 : 白血球結合之生化分布與趨化性肽類之生化活性白血球結合：4種與DTPA共軛之趨化性肽類利用競爭性結合分析法（其中，〔3H〕For_MLF以漸增濃度之未標記肽取代）分析與人類嗜中性白血球之結合本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ----------1------"-------0 (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) 46 ^翁」 . 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 Μ Β7 H2 本年月a 五、發明説明（44 ) (Babior, B.M. et al., J. Clin. Invest. 52：741 ( 1973))。結果示於圖1中。三種非一D T P A衍生之肽類涵括在本分析中以供比較之用。 SOD產製：分析4種與DTPA共軛之趨化性肽類藉由人類嗜中性白血球刺激之超氧化物產製（Pike, M.C. e t a 1 ·，M e t h 〇 d s i η E n z y m ο 1 · 1 6 2 : 2 3 6 . ( 1 9 8 8 ))。這些結果示於圖2中。ML F涵括在本分析中以供比較之用。體內嗜中性白血球過少症：二種與D T P A共軛之趨化性肽類以約1 0 -倍高於標準造影劑量之劑量投服至家鼠。在注射前5分鐘及注射後1 ，2 ，5 ，1 0，1 5和 3 0分鐘收集（經由尾靜脈）末梢血液》所有研究動物均未明顯誘起嗜中性白血球過少症" 實例3 - 5 : 以下實例3 — 5示出肽，異丁氧羰基-甲硫胺醯基-白胺醯基-苯基丙胺醯基-N -二伸乙基三胺五乙醯基-賴胺酸（i B 〇 c — MLFK — DTP.A)是藉由局部固定於體內局部感染位置上之F 〇 r ML F的一種嗜中性白血球.活化作用之拮抗劑。發生局部化而不改變白血球數量實例分離出之人類嗜中性白血球（2. 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ^ϋ· —^n Is - --11 -Ϊ 1 - i -1 - i m- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 0 5)在用 -47 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（45 ) 1 Ο η M Fo rMLF ’在2 . 8"Μ胺基苯二醯肼（自由基依賴性化學螢光之放大劑）存在下刺激前，先用i β M iBoc— MLFK-DTPA 預孵養分鐘。反應在這些分析條件下完全受到抑制。其後研究證實抑制作用係劑量依賴性的，而I c 5。爲〇 . 2 β Μ。實例4 : 在局部感染之兔子模式中比較肽拮抗劑，i Β 〇 c -ML FK — DTPA與肽激動劑，甲醯基一正白胺醯基— 白胺醯基-苯基丙胺醯基-正白胺醯基一酪胺醯基一賴胺

酸- DTPA (ForNl eLFNl eYK — DTPA )。局部感染係使用大腸桿菌誘發於每一兔子（2 - 3kg )之後腿中。其過程請見實例1 00B。24小時後，令一組兔子（n = 3)接受肽拮抗劑i Bo c— MLFK — DTPA，而第2組兔子（n = 3 )接受肽激動劑 Fo rN 1 eLFN 1 eYK — DTPA。肽類用 η標記至專一活性約爲400//C i//zg肽。每一兔子係用酮胺一甲苯卩塞嗪麻醉且經由邊緣耳靜脈注射 100j«Ci或0 · 25j«g肽。以下參數係在5 ，15 ，3 0及6 0分鐘測定：白血球數量，全身照影，以及在 6 0分鐘時，殺死動物以測定組織生化分布。激動劑肽誘起白血球數目暫時減少而拮抗劑肽則否。局部感染位置在早如注射激動劑或拮抗劑後1 0分鐘即可偵測出。生化分布示出激動劑肽較高量積聚於脾及肝臟中（和拮抗劑肽相本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 1--------餐------1T-------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 48 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 Β7 五、發明説明（46 ) 較下）。二種肽類均迅速積聚於腎臟中。血液值對拮抗劑而言稍微較高，其可能代表此一肽之較長生化半生期。經感染肌肉比值在4:1至7:1範圍內，其代表顯著吸收至感染肌肉位置內。激動劑肽標記-對-背景比值在5小時以上經改良，而拮抗劑肽比值在1小時處達最高。此可能反映出激動劑之較高結合親和力。前文證明拮抗劑趨化性肽可以迅速局部固定於局部感染位置上，因而具經感染或發炎位置之診斷性照影實用性。此外，這些數據代表肽拮抗劑用以治療渉及此一特定受體之疾病的潛在用途。實例5 : 在嗜中性白血球一內皮細胞粘著分析法中評估未共軛之肽i B 〇 c— MLFK。在此一分析中，將5 —羧基螢光素二乙酸鹽標記之嗜中性白血球（5 X 1 05)加至包含融合性人類肚臍靜脈內皮細胞之4 8分格淺盤之分格中。在用30nM F 〇 rMLF刺激前1 0分鐘加入濃度爲1 0//M之i B 〇 c-MLFK肽。粘著百分比係由孵養2 5分鐘之後，洗去未連接之嗜中性白血球而測出。此肽在此一濃度下抑制66%粘著。其次，檢視0 . 1_ 3 . 0 # Μ間之濃度。此一肽以劑量相關方式抑制嗜中性白血球粘著至內皮細胞，且I C 5。爲約14/ζΜ。粘著之抑制將減低白血球（諸如，嗜中性白血球）之滲入罹病位置，因而限制發炎所伴生之組織傷害。這些數據提供進一步證據以支持肽拮抗劑在治療經活化白血球所伴生之疾病本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 --------i-----i,^------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -49 472143 A7 __B7 五、發明説明（47 ) 的用途。實例6 — g 8 : 本發明範圍內之其他CP > s重複實例5之方法。結果示於表1中。在表中，ΜΡ〇是髓過氧物酶分析， "記號意指在3 Ο β Μ下無作用，Α + 〃記意指在3 0 从Μ下之正作用，而"N . T · 〃意指未測試》 I"^-------1^------1Τ-------^, (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)Α4規格（2丨0X297公釐） 83. 3.10,000 一 50 - 472149 A7 B7 五、發明説明（48 )

表I 經濟部中央標準局員工消費合作社印製實例序列 E C 5〇 ’ M 白由基激動劑 E C 5〇 * /ί M 自由雜抗劑 I C〇〇 * βΙΛ MPO釋出 E C so 1 W M 糖麵劑 E Cb〇 * jti M 粘著拮抗劑 I C e〇 1 Μ M 6 Ν (Ν —甲苯礎醯脲）-MLF .45 - 2 . 5 - 3.1 7 1^-金剛院基脲-^1^ .87 - 1.8 - .68 8 L e u-A1 a-SHNH-Bo c >100 - — 一 9 tBOC — Phe-Leu — Phe 5 . 6 - 7 . 1 5 — 17 10 N (N—異西廳）_FLF • 6 X — 3.1 6.7 N=2 11 FMOC-白胺酸 7 . 8 - 15.5 20 1 2 N (乙嫌基胺甲麵）-ML F <10e—12 .01 5 — .006 — 13 N-^S-«-MLF 2.0 - 5.6 12.6 14 苯基-痛_MLF .4 - 5.7 5 . 1 15 FMOC-MLF .48 - 5.1 25.8 16 t BOC-M(D) LF >80 - - 17 tBOC-MAc (5) cF 8.8 — 48 6.5 N-2 18 異丙麵一FLFLF_Ly s-Ly s -SHNH 15.7 - 29.5 19 甲醯苯—MLF-Ly s —SHNH 4e-l2 N=1 .05 — II--------¾衣------ΐτ------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨0X297公釐） 51 83. 3.10,000 472149 A7 B7 五、發明説明（49 )表I 一續經濟部中央標準局員工消費合作社印製實例序列結合 E C 5〇 1 /ί M 帥基獅爾 E C©〇 * /ί M 帥基拮抗劑 I Cb〇 * jtiM MPO職 E Cp〇 1 β^Α mmmjm E Cg〇 1 jtiM 粘著通劑 I C B〇 * jW M 20 N-N-異丙纖-FLFLF .59 - 2.6 2 1 咖甲酿基—MLF 1 . 8 - 17.5 7 4 N = 1 22 異丙繊M-Ac5c —F 13,5 - 5.1-50 20.2 23 N-肉 MS—MLF .04 .005 75.5 .004 - 24 Ν —Ν—異丙纖-M-L-六氫-F .3 1 - 5 - 6 - 3 . 7 25 -Μ- L _ F 1.7 - 9 6 . 2 26 H y n i c >100 >100 - - N . T . 27 N-丁麵-MLF-Ly s -SHNH .X 1 .1 7 N . T . .039 - 28 異丙纖-MLF —Ly s-SHNH 8.5 >100 - 2.2 1.5 >30 29 異丙麵一 M LF — Lys_Asp-SHNH 4 >100 - .25 .73 >30 30 N -異西趣-ML F _丙t胺-SHNH 9 >100 - 2.2 -- >30 * 31 異两麵—M L F -IOTSZ：胺— A s p-SHNH 4.5 2 - .4 1 . 1 >30 木溶解度問題用適尺張紙本準標家國一國 (CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 i------IT-------旅 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -52 - 472149 A7 B7 五、發明説明（50 ) 表I —續經濟部中央標準局員工消費合作社印製實例序列 E C5〇，wM 自由基激動劑 E C so ’ 汉 Μ 帥_抗劑 I C bo * ίί Μ ΜΡΟ細 Ε C so 1 /i Μ 粘著漏劑 Ε Ce〇 * Μ Μ 粘著捨抗劑 I C Β〇 * /i M 32 異Η痛-MLF-Ly s-SHNH —B 〇 c .03 .1 2 Ν . Τ . .013 — 33 異两基脲-FLFLF_hys-SHNH 2 . 5 - 14.5 - 7-82 34 N (N-苯基脲-ML-六_F .02 — 1.9 + Ν=1 - 3 5 環己廳—MLF_Ly s -SHNH 1.9 >100 - 2.2 N . T . 36 Formyl-ML F-L y s-SHNH .17 -35 - 37 i Bo c-MLF-SPNH 0.15-5 - 10-30 Ν . Τ . >30 38 i Boc-MLF-O-SPNH 0.15—5 一 5-6 .4 ρΗ5 +(可變化的） >30 39 i Bo c-MLF-S-SPNH 0.6-22 - 3-3 . 5 Ν . Τ . >30 40 i Bo c—MLF—可麵娜體 0.12 + >10 1.6 - 41 i Bo c-MLFK 20 - 10 — 16 42 i Bo c-MLFK —DTPA 4.5 - — 43 三甲基乙醯基—MLFK >10 一 Ν . Τ . Ν . Τ . - 44 1^-胺甲薩-从1^ >10 10 Ν . Τ . Ν . Τ . - 45 Fo r-M (02) -LFK 1 + Ν . Τ . 0.6 - 46 For-M(0)-LFK 5 — 10 + Ν . Τ . 2 — nm ^^^1 ^^^1 ^^^1 n if ^^^1 ^^1(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂線本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 53 - 83. 3.10,000 472149 A7 B7 五、發明説明（51 ) 表Ϊ 一續經濟部中央標準局員工消費合作社印製實例序列結合 E C 5〇 1 /i M 帥基涵劑 E Cs〇 * jti M 自由基拮抗劑 I C 5〇 * /ί M MPO細 E C 5〇 * ίί M 粘著麵剤 E C 5〇，jti Μ 粘著拮抗劑 I C 5〇 1 w Μ 47 t-Boc-Nle-LFK — - N . T . N . T . — 48 For- (D)M-LFK — ~ N . T . N . T . — 49 i Boc-N1 e~LFK ?- — N . T . N . T . - 50 i Bo c—M(0) -LFK ?— - N . T . N . T . - 5 1 MeOCO-MLF-COOMe 2.4 3.8 N . T . + 7 . 6 52 nBo c-MLF-COOMe 3 5.8 N . T . + 4.5 53 i Bo c-MLF-COOMe 7.5 - N . T . - 7 54 i Bo c-MLF-OH 0.3 — 6.3 55 CBZ-MLF-COOMe >10 - N . T . N . T . - 56 t Bo c-MLF 3 - 15 N . T . 3.9 57 t Bo c-M1 e LF 3 - 15 N . T . 2.5 58 t Bo c-F (D) LF (D) LF 5 N . T . N . T . - 1.3 59 F o rMLF 0 . 02 5-0 . 6 .007 60 Fo rMLFK 0.007 .0 1 4 61 異西麵-ML F A3 多聚體 1.2 - 6.7 N-l +(可變化的） — 术溶解度問題 I— I I 訂 I 線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 54 472149 A7 B7 五、發明説明（52) 表1_續經濟部中央標準局負工消費合作社印製實例序列結合 E Cg〇 1 /ϋΜ 自由基激動劑 E C so，Μ Μ 自由基撇劑 I Cs〇 ' ίίΜ MPO黜 E C5〇，jwM 麟灘J劑 E C5〇 » βΜ 粘著拮抗劑 I C 5〇 * w Μ 62 異两基腺一MLF A2多聚體 • 4 3 90 N=1 -333 - 63 N—甲基腺-MLF 3.4 - 4.8 N = 1 — 6 . 3 64 N-Z-S^Si-MLF 1.2 - 9 N=1 — 2.5 6 5 N-T«Si-MLF 0.34 - 0.58 + (可變化的） - 66 異丁麵-ML F X . 5 - 3.5 N . T . 21-5 67 第三丁纖-ML F 3.3 - 1.8 N . T . 9 - 4 68 N —N-丁基-雜 _MLF .5 - 5.0 - 4.4 69 N-丁痛-FLFLF 0.2 - 0.63 - 2 . 2 70 N-H»-MLF 2.5 - 2.8 N . T . 13 71 異两纖-ML F 2.25 - 5 · 4 N . T . 1 5 4 72 異丙痛-FLFLF 0.25 一 0.48 - 1.6 .44 73 異河麵-MLF-Ly s 16.8 >100 100 N = 1 — >30 74 異丙廳-M L F - JOT基二胺乙麵 2 - 3 ~ 30 N-l 75 環己基腺-MLF - - N . T . - 76 N-^Mi-MLF .05/.02 .15/1.5 -/- .02/.05 -

Hi I n 訂 ! 备 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2H)X297公釐） 83. 3.10,000 55 - 472143

7 7 A B 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（53) 表I —續實例序列 E C5〇 > mM 自由基麵劑 E C so 1 ii M 自由基拮抗劑 I Cs〇 * jtiM MP〇mi E C bo · βΜ 粘著麵劑 E Cs〇 1 jtiM 牆捨抗劑 I C bo 1 Μ 77 N-^*-MLF .8 - 2.6 N=1 - 12.6 78 N-MS-MLF 2.4 — 32 N = 1 ~ 8.8 79 正丁基-醯胺基-MLF .1 2-7 可變化的 - 20 N = 1 — 9.6 80 甲焼擴醯基-MLF 24 一 7 0 N=1 - >100 81 正丁基基-MLF 1.9 一 12 N=1 — 1.8 82 苯—基-MLF 2.1 ~ 7 N-l — 8.6 N=2 83 異 TlSif—M ( s = 〇 ) L F 30.3 — >100 N-l 一 >100 84 異丁麵—ML F 2 - 0 - 3.6 - 6 - 1 85 N —N-4-(縫苯麵-MLF 7 e-6 N=1 < .0 1 - <.001 N==l - 86 P—甲_— <0,1 N=1 .01 - + - 87 P-甲苯基脲—MLF < .0 1 7e-4 N=1 — .003 — 88 M—甲苯基腺—MLF .09 1.2 - 4 · 5 89 N (N—苯基WMi) —MLF 1.5 9 . 5 >100 N = 2 90 4 -竣基_ 2 —綠基酿一 MLF 21.7 44 >100 N = 2 91 4-殘基-P»^-MLF 5.5 26 >30 N=2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐）83. 3.10,000 -56 - 472149 A7 B7 五、發明説明（54 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製表I—續實例序列結合 E C 5〇 * /i M 白由基激動劑 E C 5〇 * ii M 帥基拮抗劑 I Cs〇 1 βΜ MPOPtB E C so 1 ii M 粘著麵削 E C 5〇 1 M 粘著桔抗劑 I C bo ' ίί M 92 -MLF 1.6 10/>l00 - + N-l - 93 • 6 5 - 2.6 11.6 94 N (N—異丙擁—FLFLF-两院二胺—SPNH .42 - 5.0 —N-l - 95 N-肉桂醯基—FLFLF .002 - 0.38 1.5 96 N-N -嫌丙麵-MLF .26 >100 4.9 N=4 .064 N = 2 - 97 N (M) -MLF 5.9 - - 溶解度問題溶解度問題 98 N-iEli-MLF 1.9 2.9 -· .62 N=1 - ---------—裝------訂------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 57 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（55 ) 實例9 9 : . 在以下實例中，Met — Leu — Phe氫氯酸鹽係利用傳統溶液相方法（Bodansky, Μ.與Bodansky，A. 1 984， ''The Practice of Peptide Synthesis^ , Spri-nger Verlag，紐約）合成。異氰酸酯係由Aldrich取得。未供應之異氰酸酯係利用所要胺與三光氣（triphos，來自 Aldrich)之標準反應製成。所有1H — NMR光譜係在 Bruker 30MHz 儀器上，在 DMSO d6 或 M e 0 H d3中記錄且相對於TMS內在標準物示出。 N _端脲-經脲保護之肽利於藉由解離胺基-肽類與適當異氰酸酯反應而以高產率製成。N -正丁基_N > _ 甲硫胺醯基-白胺醯基-苯基丙胺酸一脲之合成實例示於下面。將1 . 〇g Me t— Leu — Phe—氫氯酸鹽 (2 . 2mMo 1 )懸浮於1 〇mj乾燥DMF中且加入 2 . 2 當量（〇 . 70mj?，5 . OmMo 1)乾燥三乙胺，隨之，加入1 . 25當量（0 . 31mL，2 . 8 mMo1)異氰酸正丁酯。反應混合物在室溫下攪拌16 小時，其後，在旋式蒸發器上移除DMF。所得殘餘物溶入Imp甲醇中，再於迅速攪拌下加入1 5mj? IN HC艾。過濾所得白色固體（0.8 lg，71%)，用水洗滌，再於真空中乾燥過夜。 FABMS :理論值（c25H4oN405S )，實測值5 0 9 ( Μ + 1 )。 1 H NMR (MeOH > d6) ： <5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -58 - III _裝訂線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（56 ) 8.12(d，J = 8Hz. ，1H)， .8.01(d，J=8Hz.，lH)， 7.21 ( m，5 Η )， 4 · 6 2 ( m，1 Η )， 4 · 3 Ο ( m，1 Η )， 4 · 2 5 ( m，1 Η )， 3 · 1 7 ( m，4 Η )， 2.45 (t > J=7Hz >2H)， 1 · 9 5 ( m，1 H )， 1 . 7 7 ( m > 2 H )， 1 . 4 0 ( m > 6 H )， .9 2 ( m，9 H )。實例1 0 0 : 此一實例證明9 9m T c -標記之趨化性肽同系物是感染局部位置之外在照影用有效試劑。合成4種肼基菸鹼醯胺（HYN I C )衍生之趨化性肽同系物，For-Nl eLFK-HYNI C (HP1 )，For— MLFK-HYNIC(HP2) ，For —MLFNH (CH2)6NH-HYNI C (HP3)及 Fo r—MLF (D) K-HYNI C (HP4)且體外評估生化活性及受體結合。 . 材料及方法：本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -59 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472143 A7 B7 五、發明説明（57 ) 肽合成及定其特徵：合成N — F 〇 r -正白胺醯基—白胺醯基一苯基丙胺醯基一賴胺酸_NH2 ，N_For —甲硫胺醯基一白胺醯基一苯基丙胺醯基一賴胺酸，N — F 〇 r -甲硫胺醯基 -白胺醯基-苯基丙胺醯基-二胺基己醯基。和N -F 〇 r —甲硫胺醯基—白胺醯基一苯基丙胺醯基一 D —賴胺酸一N Η 2並利用標準固相技術（Merrif ield，R. B. J .Am. Chera. Soc. 15:2149-2154 (1963); Stewart, J.M •，及 Young, J.D·，Solid Phase Peptide Synthesis, W. H. Freeman & Company, San Francisco, CA (1969))，如 Fischman， A.J_， J. Nucl. Med_ 32:483-491 (1991) 所述純化。所有試劑係由商售來源取得最高可使用級數。這些化合物之菸鹼醯基肼共軛係如以下Η P 3所述進行。經濟部中央標準局員工消費合作社印製於 186 mg N — For— Met — Leu — Phe —二胺基己基醯胺中加入2ιηβ二甲基甲醯胺（DMF) 及60#L二異丙基乙胺，隨之，加入lmj? DMF中之1 54 mg琥珀醯胺基-6 - t-B 〇 c -肼基肶啶—3 —羧酸(Abrams, M. J. , et a 1. , J. Nucl. Med. 31: 2022-2028 (1990)。混合物變成黃色且肽於短時間內溶解。2小時後，將乙醚-石油醚加至反應混合物中並丟棄上層β加水至油狀殘餘物中以使其形成固體。固體用5 % 重碳酸鈉，水及乙酸乙酯洗提而得1 8 3mg重之產物。t — B0C保護基藉由在20°C下用包含0 . lm對一甲苯酚之5mj?三氟基乙酸（TFA)攪拌粗產物1 5分鐘而 83. 3.10,000 ---------—f.-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 線- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 60 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（58 ) 移除。用TFA延長處理而導致較高量副產物。TFA利用旋式蒸發器移除.且加乙醚至殘餘物中以沉澱出去保護之肽。產物利用逆相HPLC，在2 . 5x50cm Whatman 0DS-3管柱上，用0 .1%TFA中之乙腈梯度液洗提。綜合含主要成份之部份且移除溶劑而得所要產物。肽利用UV及質譜，以及胺基酸分析而定其特徵。細胞組成物：人類末梢血液多形核白血球（PMN / s )係藉由在 3 % 葡聚糖（Pharmacia, Nutley，NJ)中沉降-，隨之，在 Lymphoprep (Organon Teknika，Durham, NC)上梯度離心而分離出。細胞組成物如Wright染色樣品之光學顯微術評估地包含>95%PMN/S。

For-MLF受體結合分析： N —甲醯基一甲硫胺醯基一白胺醯基_苯基丙胺酸（ For—MLF) ，N —甲胺醯基一正白胺醢基一白胺醯基—苯基丙胺酸（F 〇 r_N 1 e LF)和N_甲醯基— 正白胺醢基一白胺醯基-苯基丙胺醯基-正白胺醯基一酪胺醯基—賴胺酸（For— N1 eLFNl eYK)係得自 Sigma (St. Louis，M0)。Fo r-ML〔3H〕F ( 6 0 C i / mm ο )係得自 New England Nuclear ( Boston，MA)°

分離出之人類s (得自健康志願者）’ 8X 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 羞批衣 —^ I ^ IH (請先閱讀背面之注^^項再填寫本頁) -61 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（58 ) 移除。用TFA延長處理而導致較高量副產物。TFA利用旋式蒸發器移除.且加乙醚至殘餘物中以沉澱出去保護之肽。產物利用逆相HPLC，在2 . 5x50cm Whatman 0DS-3管柱上，用0 .1%TFA中之乙腈梯度液洗提。綜合含主要成份之部份且移除溶劑而得所要產物。肽利用UV及質譜，以及胺基酸分析而定其特徵。細胞組成物：人類末梢血液多形核白血球（PMN / s )係藉由在 3 % 葡聚糖（Pharmacia, Nutley，NJ)中沉降-，隨之，在 Lymphoprep (Organon Teknika，Durham, NC)上梯度離心而分離出。細胞組成物如Wright染色樣品之光學顯微術評估地包含>95%PMN/S。

分離出之人類s (得自健康志願者）’ 8X 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 羞批衣 —^ I ^ IH (請先閱讀背面之注^^項再填寫本頁) -61 - 472149 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（60) 存在下孵養6 0分鐘。孵養之後，細胞懸浮液之澈底混合部份在0 . 4mj?微離心管中之0 . 2m)Z HBSS/ B S A : Lymphoprep ( 1 : 1 )上分層且其內含物在 1 5 0 0 0 r pm 下離心 4 分鐘（Microfuge E，Beckman ,Columbia, MD)。該管冷凍於液態氮中且分離細胞丸粒。放射活性利用r 一計數測定。非專一性結合是在5 β Μ 未標記Fo r— N1 eLFNl eYK或對應之未標記肽存在下之殘餘結合放射活性數量。非專一性結合約占全部結合之1 0 %。超氧化物產製分析：大戟二萜醇（phorbal )肉豆蔻酸酯乙酸酯（Ρ Μ-Ά )及細胞鬆弛素B係得自Sigma (St. Louis, M0)。超氧化物釋出係利用2 9 · 5/mmoj2/L/cm之消光係數，監控鐵細胞色素C之超氧化物歧化酶一可抑制性還原反應而分析。簡而言之，分離出之人類嗜中性白血球用 Hank’s 均衡鹽類溶液（HBSS) (GIBCO，Grand Island, NY) ，HBSS單獨地或含漸增濃度之肽（ HP1 ，HP2，HP3，HP4，For— N1 eLF ，F o r—MLF 或 N — N1 eLFNl eYK (在 1 nM至ΙβΜ範圍內），在ΙΟβΜ細胞鬆弛素B加上或減去超氧化物歧化酶（5 0 V g/mL )的存在下，在 3 7 °C下孵養1 0分鐘。鐵細胞色素C之還原反應係利用光譜術測定。 I.---------.裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂- 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 63 - 83.3.10,000 472143 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明Ui ) HYN I C衍生之趨化性肽類的99mTc標記 99mT c —過鍀酸鹽（99Μ 〇 / 99mT c -產生器）及葡基庚酸亞錫鹽（Glucoscan)係得自New England Nuclear (Boston，ΜΑ)。使用99mT c —葡基庚酸鹽提供放射標記阱基菸鹼醯胺共軛肽所必需之T c (V)合氧基物質。於冷凍乾燥組件中加入在0 . 9% Na CiZ中之約2 . 5mj?之99mTc過鍀酸鹽。最後放射活性濃度爲 5_1 OmC i/mL且產物之放射化學純度係利用立即之薄層矽膠層析（ITIC— sg)，使用丙酮及0.9 % N a、C j?作爲流動相溶劑測定。以下過程係用以使用9 9m T c放射標記趨化性肽同系物。將約0 . 2mg肽溶入二甲基亞砚中並用 0 · 1M乙酸鹽緩衝液（pH5 . 2)稀釋溶液至最後濃度0 . ling/mj?。0 . 5m)H太溶液放入清潔之玻璃瓶中並加入0 · 5m$ 99mTc —葡基庚酸鹽》迅速翻轉混合物並讓其靜置於室溫下1小時。放射化學純度係利用 ITI C_sg，在三種溶劑系統：丙酮，0 · 9% NaC$，及丙酮：水（9:1)中測定。 99m T c標記之肽同系物亦利用逆相Η P L C，使用二系統分析。系統Α採用Beckman C18逆相管柱（5从’ 4 · 5 X 4 6ram，Beckman, Columbia, MD)，其含以下洗提條件：溶劑A :在5 OmM乙酸鹽中之5%乙睛’ PH5 . 2 ;溶劑B :在50mM乙酸鹽中之50%乙睛本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 ---------''裝------訂------耒 (請先閲讀背面之注^η項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（62 ) ，PH5 · 2 ;梯度液：0%B 至 1〇〇%Β (在 20 分鐘內）；流速：2mj?/mi η。系統B採用Vydac Ci8 逆相管柱（300A，5 以，4 · 5ramx25cm ’

Vydac )，含以下洗提條件：溶劑A :水中之0 . 1 %三氟基乙酸；溶劑B :乙腈中之0 . 1%三氟基乙酸；梯度 :0%B至1〇〇%Β (在10分鐘內）：流速：2mL / m i η。U V吸收係用Mi lton-Roy/LDC流通光譜術監控而放射活性則使用 Beckman 170 (Beckman，Columbia MD )監控。記錄二偵測器之輸出物並使用雙管道積分器分析 (Waters Model 746 Data Module, Waters, Marlboro, MA ) ° 專一活性之最大化：爲了避免由藥學劑量趨化性肽同系物伴生之嗜中性白血球減少症，99m T c -標記之趨化性肽的專一活性最大心以致在9 9m T c之照影劑量下，所投服肽之最後質量遠低於活性之已知。E C 5。濃度（〜2 0 /z Μ ) » 在先前洗提後5小時洗出99mT c產生器以使0βΤ c 之比率爲最少，同時保持eemTc洗提液>300mC i 。T c之質量與99T c及99mT c之相對比值係使用產生器動力方程式結合所使用之99Μ 〇 / 9 “T c產生器的已知歷史而計算出。如以上所述製得9 9 m T c -葡基庚酸酯 (T c - G Η )。約 180//g 趨化性肽（MW: 720 )溶入50mL DMS0中並用0.1M乙酸鹽緩衝液本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 81 3.10,000 ---------1^------1T------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 65 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（63 ) (PH5 · 2)稀釋至lOOeg/mL之最後濃度。部 ’份之肽溶液系列用乙酸鹽緩衝液稀釋以產生從2至8 〇从g/m$之濃度範圍。肽標記係先由加入〇.5mL 99mT c - G Η至等體積乙酸鹽緩衝液中之肽內。迅速地翻轉溶液且於室溫下孵養1小時。肽標記之含量係利用 I T L C 一 s g ’使用三種各別溶劑系統測定：丙酮， 0 . 9%NaCj?，及丙酮：水（9 : 1)。標記肽之專一活性係使用以下關係式計算：（％RCYxmCi present) / //Mo 芡 e s 肽 X 1 〇〇 )。體內研究：在動物中進行三種研究：A)爲了定義在健康動物中之放射標記肽同系列之體內分布，使用每一同系物進行生化分布研究；B )爲了測定放射標記肽同系物局部固定於發炎局部位置上的能力，組織放射活性測定是在罹患大腸桿菌感染之家鼠中進行；以及C )爲了評估放射標記肽類之感染照影性質，在大腸桿菌感染之家鼠進行r -照相機照影。 A.在正常家鼠中之生化分布： 2 4隻重約1 5 0 g之正常Sprague-Dawley雄家鼠組 (Charles River Breeding Laboratories, Burlington M A )各注射以約5 // C i每一種9 9 m T c標記之肽以測定在.5，3〇，60及12 0分鐘之生化分布（每一種肽在本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -66 - ---------^------1T-------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（64 ) 每一時點中’在6隻動物中評估）。血液，心臟，肺臟，肝臟，脾臟’胃’腎臟，胃腸道，骨骼肌，睾丸，及骨骼之樣品經稱重且用恰當型態之r -計數器（LKB型 # 1 2 8 2 ’ Wal lac Oy，Finland)測定放射活性。爲了校正放射活性衰變，同時計算幾部份注射劑量。結果以每克之注射劑量百分比表示。 B .經感染家鼠之研究使用大腸桿菌之單一臨床分離物產生局部感染。在胰蛋白酶黃豆瓊脂片上，3 7°C下孵養細菌過夜且各別純系用無菌0.9% NaC$稀釋以製備包含約2xl09 有機物/ m L之混濁懸浮液。Sprague-Dawley雄性家鼠（重約 1 5 0 g，Charles River Breeding Laboratories, Burlington JIA)用酮胺麻醉並於左後大腿注射以0 . 1 mj?包含約2X1 0 8有機物之懸浮液。接種細菌2 4小時之後，感染大腿嚴重腫賬之動物經由側面尾靜脈注射約5//Ci (3pMoles) 9 0mT c標記之肽。在注射後3 0和1 2 0分鐘，由頸部切斷殺死5隻1組之動物。組織取樣，放射活性測定，以及結果之計算均如以上所述進行。 C .照影經感染之兔子爲了使用放射標記之趨化性肽類測定在對這些試劑之嗜中性白血球減少作用敏感之動物中的感染局部化作用實 ------------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) Γ " % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（65) 用性，在罹患局部大腸桿菌感染之兔子中進行照影研究。 .在這些研究中使用高度專一活性之99mT c -標記之趨化性肽類。6隻新英格蘭雄性白兔（重量：2 — 3g)用酮胺及甲苯瞎嗪（1 5 · 0及1 . 5mg/kg)麻醉且於左後大腿肌注射以1 . OmL約2x1 〇9大腸桿菌懸浮液。接種2 4小時後，感染大腿嚴重腫脹之兔子經由側面耳靜脈注射以600 — 1 OOOeC i經HPLC純化之 99m Tc_ 標記—HP2 (專一活性 >1 0000mCi //zMoje ，如上所述地，利用HPLC而由未標記之肽分離出）。動物用酮胺及甲苯H塞嗪（1 5 · 0及1 . 5 mg / kg )麻醉且在注射後0 _ 3小時及1 6 — 1 7小時，使用廣角 r —照相機（Technicare Omega 500，Solon,

Oh i ο )系列地閃光照像，該照相機裝有平行孔視準儀且接至專業電腦（Technicare 560，Solon, Ohio)上。在預設時間5分鐘/次記錄影像，具有1 5%視窗中心以包括14 0 k e V之99mT c光尖峰。爲了定出標記肽之局部化特徵*進行感興趣之中心（region-〇f-interest ( R0I)分析以較以時間爲函數之感染大腿與對側正常大腿肌影像。在取得最後影像之後，動物利用過劑量之戊巴比妥殺死並稱出血液，心臟，肺臟，肝臟，脾臟，腎臟，胃，小腸’睾丸，骨骼，骨髓，正常骨骼肌，經感染骨骼肌，以及膿汁樣品之重量且如上所述地測定放射活性。爲了校正放射活性衰變，同時計算放射劑量部份。結果以注射劑量本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 --------—裝------訂------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -68 - 472143 A7 _B7__ 五、發明説明（66 ) /克百分比表示。爲了測定循環中之細胞結合活性數量’ •.離心血液且分離細胞與血漿。細胞用0 · 9 % N a C ^ 洗滌且測定細胞與上清層中之殘餘放射活性》爲測定感染位置上之細胞結合活性，膿汁用0 . 9% Na Cj?洗滌二次並測定細胞與可溶部份中之殘餘放射活性。統計方法：

照影與生化分布研究結果係利用直線型變數分析（其中，器官與時間是分類變數）評估；％1 D /器官=器官+時間+器官X時間。肽濃度之post-hoc比較係利用Duncan’ s新穎多重範圍測試法進行（Duncan, D. B.，Biometrics 11:1-42 (1955))。每一F 值第 1 個在底下的數字是第1種分類變數（η - 1)，第2個分類變數 (m - 1 )，或交互作用（n — l)x(m— 1)的自由度數目。第二個寫在下面的數字是自由度之殘餘程度數目 (觀察總數，nxm)。所有結果以平均值土SEM表示 ----------—裝------訂------線 (請先閱讀背面之注^項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製異處質優m。以η 係 5 峰物 1 收系 3 吸。同及性合肽 8 特符性 6 .團物化 2 基產趨在 C 肽之示 I 之生顯 Ν 期衍析 Υ 預 C 分 Η 和 I V 之現 N U 肽發 Υ。種據 Η 成 4 析種製{分 4 度收酸 : 有純吸基 : 成所及大胺果合率最.及結肽產之譜 83. 3. !〇,〇〇〇本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 69 - 41214.α-·_ 修正 . 本年月曰 85。，2, If 五、發明説明（67) 趨化性肽同系物之生化活性：超氧化物產製分析之結果示於圖3中。產生5 0%最大反應之肽濃度（E C5。）示於表Π中，肽類HP 2， HP3 ，及HP4具有等於或大於Fo r— MLF ( 1 0 0 η Μ )之能力。Η P 1之潛能至少是較低值大小》因此，超氧化物產製之潛能順序是爲HP 2 >HP 3 > HP4>>HP1。表 π 超氧化物產製之E C 5。> S與趨化性肽同系物之結合親和力超氧化物結合肽產製親和力 η Μ η Μ n. 1-- - I..... ·1 —I- — - - I - I ! - - 1 -- ------- ----- . HI (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製

8 2 5 一—I 1—I 00 CD ο · · ο ο 4 0 0 0 2 3 1 ο 2 0 ο ο ο ο 0 1 4 6 0 2 0 L〇 IX 00 IX K Y 6 ΙΑ Ν F F L L Fee L 1 ~~_ MNN - I I 1 2 3 4 Γ r r p p p p o o o HHH H F F F 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（ΙΙΟΧ297公釐） -70 - 補充 85. 2. 27

月B A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明〔68) 1 肽類之效率 ( 定義爲超氧化物陰離子之最大數量 )對 1 1 所有測試肽類而普是相似的且在 2.07-3-80 1 1 m 0 又所產生0 2 / 1 0 8細胞 /1 0分鐘範圍內。所有 /«—s I I 肽請類之效率係小於大戟二萜醇肉豆蔻酸酯乙酸酯（P Μ A 先閱 I ή 1 ) — Ρ Μ N 氧化性釋放之不相關活化劑，其在0 . 1 β Μ 背面 1 I 濃之 1 度下產生 2 2 • 9 m m 〇 j? 所產生之0 2-/ 1 0 6 細胞注意 1 I / 1 0分鍾之最大反應。事項 1 1 开填 1 寫本装 I 趨化性肽同系物與趨化性誘引劑受體之結合貝 1 1 圖4 示出Η Y N I C衍生之趨化性肽同系物抑制 1 1 F 0 r — Μ L〔 3 Η〕 F以類似產生超氧化物陰離子之潛 1 1 能大小結合至完整之人類Ρ Μ N s。產生 Fo r — 訂 | Μ L 〔3H〕 F與人類Ρ Μ Ν ' • S ;結合之5 0 %抑制作用 1 I 所需之肽濃度（ Ε C 5 0 )示於表 Π中。肽類Η P 2， 1 1 I Η Ρ 3及 Η Ρ 4 的 E c 5D值類似於六肽F 〇 r — 1 1 Ν 1 e L F Ν 1 e Y K。Η P 1 對化學誘引劑受體之親和 Γ 力雖然約 1 0 0 倍低於此一系列中之其他HYNIC 衍生 1 1 之肽類，潛能卻僅 2 倍低於F 0 r — M L F。三肽 F 〇 r 1 1 — Ν 1 e F 之潛能 1 0 0倍以上大於六肽及F 〇 r — 1 | Μ L F。因此，對化學誘引劑受體之親和力大小爲Η Ρ 3 1 1 > Η P 2 > HP 4 > > Η Ρ 1 〇 99mTc-HP2 之 1 1 I Ε C & 5 Ο綺 < 10 η Μ 〇 1 1 I 爲了測定99 m T c :標記對受體結合之作用’未經標記 1 1 Η Υ Ν I C 一狀取代 β 9 m T c標記之肽的能力係使用如上 1 1 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210X297公釐） -71 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 __B7_ 五、發明説明（69 ) 所述之分析條件評估。由這些實驗結果證明取代5 0 % 9 9m T c標記之肽的嗜中性白血球結合所需的未經標記肽濃度約爲10倍高於使用For-ML〔3H〕F作爲追踪劑之時所需者。若是放射標記物包含1個以上之肽單元 /T c 一葡基庚酸酯且結合是共同操作的話，可解釋此一結合渴望之提高。使用99mT c之放射標記在立即薄析-矽膠條狀物上，在用以監控放射標記之溶劑系統中，99mT c標記之肽及c —葡基庚酸酯之 Rf 值是·· 0 . 9% NaC)^-9βmTc—肽：0.0 ，99mTc —葡基庚酸酯. 〇 ;丙酮一99mTc -肽= 1 · 〇，99mTc —葡基庚酸酯=〇 . 〇 ;而丙酮：水（ 9 : 1) 一 99mTc 一肽=1 . 〇，WnTC -葡基庚酸酯 =0 . 0。第3種系統使尖峰產生尾巴現象減至最少，產生較明確之99mT c —肽帶（和僅有丙酮比較之下）。對所有991"1'〇_肽組成物而言，11'[(：證明>9 0%之放射活性是在孵養1小時之後，由肽伴生。使用Η P L C 系統Α分析標記之肽類證明99mT c —葡基庚酸酯， e0mT c - Η P 1 ，99mT c - Η P 2 ，99mT c — Η P 3 和Tc— HP 4之主要放射活性尖峰的駐留時間分別爲 0. 3-0.5，14. 37，11.25， 15 . 11 及 12 . 96 分鐘。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -72 - ---------^------1T------^ (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁)

Α7 Β7 五、發明説明（70) 專活性之最大化作用·· 99Μ 〇 / 99mT c產生劑洗提產生4 5 6 m C i之總活性。Tc之總數量爲3 · 4nMo 1 e s ，99Tc對 99mT c之比值爲1 · 5 3 : 1而99mT c之專一活性經計算1 34000mC i /微莫耳。99mTc -葡基庚酸酯 (T c 一 G Η )係如上製備，製備時之放射活性濃度爲 >1 50mC i/mL。99"*1'(：一01!之放射化學純度利用立即薄層層析術測定係爲>9 5% (使用丙酮及 0.9% N a C 芡）。趨化性肽激動劑同系物之藥理潛能需要高度專一活性放射標記以減低注射溶液中所存在肽之絕對數量。理想上而言，此一專一活性值必需不必純化即可獲致》圖5扼要說明肽濃度對標記產物之作用。由這些數據顯見反應混合物之最後肽濃度對放射化學產率有明顯地影響；在低於 1 Ο/zg/mL之肽濃度下，標記產率差。當結果係相對於反應混合物中之肽-對-T c莫耳比值表示時，很明顯地，當此一比值升高時，放射化學產率％提高且專一活性降低。使用此一方法可能獲致> 1 0 0 0 OmC i /莫耳之專一活性；但是，放射化學產率降低至實際上低於1 0 4 g/mL之肽濃度。在< 1 0 之肽濃度下，需要純化步驟以移除未結合之99mT c。未反應Θ9™Τ c葡基庚酸酯和99raT c Or之移除可以逆相Sep-Paks完成。專一活性之進一步提高可利用Η P L C (使用系統B )移本紙張义度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） I H - 11 n 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部t央標準局員工消費合作社印製 -73 - 472149 A7 __B7____ 五、發明説明（71 ) 除未反應之肽而得。因爲對應於9 0m T c標記肽，未經標記之肽，及99mT c —葡基庚酸酯之尖峰使用此一 Η P L C系統解析極佳，故可分離無載體之放射標記肽。在這些情況下，放射標記肽之專一活性僅受限於來自 9 T c產生劑之洗提液的專一活性而已。在正常家鼠中之99mT c趨化性肽類的生化分析： 4種99mT c標記趨化性肽同系物之生化分布示於表 ΙΠ中。在所有體內實驗中’動物可忍受靜脈內注射以放射標記之趨化性肽同系物而無明顯不良作用。除了腎臟，胃，及胃腸道以外，所有肽類之組織濃度隨時間減低。 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 衄濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -74 - 472143

血液 5 1·17±0·070 1·18±0.056 1.01±0.056 3 Ο 0.82±0·0 1 9 0.67±0·036 0.55±0.017 60 0·67±0_016 0·57±0·033 0.47±0.035 120 0.52±0·010 0·48±0.015 0·39±0.015 Ο·78±0.046 Ο.48土Ο.052 Ο·36土Ο·012 Ο· 31±〇.Ο 1 Ο 心臟 5 0.75±0·045 0.50±0.019 0·.72±0·089 30 0.50±0·010 0.32±0.016 0·27±0.021 6 Ο 0.4 0.± 0.012 0.28±0.018 0·29±0..0 26 120 0·37±0·028 0.26±0·013 0.25±0.024 Ο.42±0·027 Ο.22±〇·024 Ο. 20±0.Ο 13 Ο. 16±〇. Ο 12 肺臟 5 1.54±0.122 0·85±0·043 10·65±1.473 1·11±〇·〇99 30 0_63±0.043 0·78±0·032 8·45±0·818 0.61±0·071 60 0.64±0·039 0_46±0·030 5.10±0.449 0·49±0.026 120 0.46±0.026 0.50±0.025 2·44±0.435 0·37±0.027 經濟部中央標準局員工消費合作社印製肝臟 5 0.76±0·056 0·99±0·023 5.72±0.467 3 Ο 0·53±0.012 0·62±0.019 4·81±0.205 6 Ο 0.45±0·012 0.50±〇·〇22 4·60±0·101 120 0·43±0_016 0.58±0·026 4.75土0.175 脾臟 5 0·34±0.014 0_35±0·023 2.27±0.281 30 0.30±0.012 0·39±0.045 2.28±0.231 6 Ο 0.26±0·006 0·25±0·013 3·11±0·191 1 2 Ο Ο · 2 5 ± Ο · Ο Ο 7 Ο . 2 9 ± Ο . Ο 2 Ο 3 · Ο 1 ± 〇 . 2 2 Ο 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） Ο.74±〇091 Ο·52±〇·022 Ο · 51±0.〇 1 Ο Ο.46±〇·016 Ο· 3 5±〇041 Ο · 27±0 · Ο 17 Ο· 3 2±〇. 〇17 〇·27±〇·〇〇9 83. 3.10,000 ---------^------1Τ------0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)- 75 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 Α7 ___ Β7 五、發明説明（73 ) 表m—續器官時間 HPl HP2 HP3 HP4 (min) 腎臟 5 3 . 08±0· 092 3 · .30±0 173 1·90土0·199 3.67±0436 30 5 , 13±0. 28 2 4 . .82±0·246 1·68±0·064 5.22±0.139 60 5 , 16±0 . 115 4 _ 36±0. 2 1 3 1·63±0057 5 . 3 6±0· 178 1 2 0 5 _ .6 8 ± 0 , ,143 4 . 17+0.121 1·60±0.030 4.74±0·201 胃 5 0 . ,17±0 _ _ 024 0 . 10±0·004 0·38土0.053 0 · 1 9土0 . 0 1 1 30 0 . ,12±0 _ ,012 0 . 15±〇·〇1〇 0·56±0·029 0.09±0.023 60 0 _ ‘15±0.013 0 _ 10±0005 0.51土0.034 0.15±0.017 120 〇. ,16±0.015 〇. 11±0·011 0.39土0·008 0.15±0.012 胃腸道 5 0.20±0.013 0.25±0.012 0.33±0_038 0·16±0·005 3 0 0.3 2土0.026 0.64±0·074 0.64±0·046 0·32±0·039 6 0 0·23±0·020 0.64±0·089 0·70±〇·〇50 0.39±0·030 120. 032±0.028 0.72±0·055 0.81±0.047 0·41±0·035 華丸 5 0·15±0·010 0·12±0.008 0·12±0·011 0.19±0.006 30 0·14±0_005 0_11±0·003 0. 1 1±0. 006 0. 14±0Ο 15 6 Ο 0·13±0·005 0.1 0±0.006 0·11±0.004 0.1 3±0·008 120 0·14±0·003 0·10±0·003 0·10±0·005 0.11±0·004 肌肉 5 0.32±0·013 0.25±0·020 0·23±0.015 0·27±0.017 3 Ο 0.·2 2±0·004 0.17±0·018 0·10±0.005 0·17±0·0 1.3 6 Ο 0.19±0·008 0.14±0·016 0.12±0·012 0·15±0·009 120 0.20土0.012 0·15±0·014 0.10±0·007 0.12土0.006 骨胳 5 0.55士0.026 0_39±0·011 0.39±0·023 0·37土0.038 30 0·41±0_009 0·32±0.013 0.26±0.017 0.37±0.019 6 Ο Ο. 33±0·007 Ο 30±0.020 Ο·28±0. 023 Ο. 34±0·009 120 0·32±0·011 0·28±0.012 0.24±0·017 0.28±0·009 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公羞） 83. 3.10,000 ---------^------tr----^-----^ (請先閱讀背面之注$項再填寫本頁) -76 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（74 ) 在血液中，ANOVA證明肽類（F3,70 = '56.79 ，Ρ<0·00 0 1 )及時間（F3, 7〇 = 252 . 01 ，p<0 . 0001)的顯著主要作用；但是，肽與時間之交互作用並不顯著。血液中之肽濃度高低順序爲：11?1>11?2>11?3>11?4( P<0.01)。在心臟組織中，ANOVA證明肽，（ F3,64=44 . 36，p<0 . 0001)及時間（ F3,β4=98 · 06，p<0 . 0001)之顯著主要作用，及肽與時間之顯著交互作用（F 9，β4= 3 6 _ 9， Ρ<0·001)。在肺中，AN〇VA證明肽（ F3，e57〇=183 . 25，ρ<0 . 〇〇〇1)及時間（ F3，e5=24 . 5 6，ρ<0 . 000 1 )之顯著主要作用’以及肽與時間之顯著交互作用（F9，e5=l 3 . 80 p<0 . 0001) 。肽之濃度順序爲：HP3>> HP1=HP4 = HP2 (P<0 . 01)。在肝臟中， ANOVA 證明肽（F3,e5=1000 . 00，P< 〇 · 0001)及時間（F3,e5=12 . 80 ’ p< 〇 . 0001)的顯著主要作用；但是，肽與時間之交互作用並不顯著。如同在肺中一般地，肽類之濃度高低順序爲：HP3>>HP1=HP4>HP2 (p<0 · 01 )°在脾臟中，ANOVA證明肽（F，e 33 = 431 . 00，p<〇 . 0001)之顯著主要作用以及肽與時間之顯著交互作用（F9, 63=4 . 6 4，p< 0.0001)。在此一器官中，時間之主要作用並不顯 --------- 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210X297公A ) 83. 3.10,000 -77 - I 裝 —訂 —— — —— I) ^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（75 ) 著。肽類之濃度高低順序爲：HP3>>HP2=HP4 ’ =^1?1(?<〇.01)。在腎臟中，八1^0¥入證明肽（F3,69=291 . 58，p<0 · 0001)及時間 (F3，e9=40 · 14，p<0 . 0001)之顯著主要作用，以及肽與時間之顯著交互作用（F 9. 69 = 10 . 94，p<0 . 0001)。肽類之濃度高低順序爲：HP4 = HP1>HP2>>HP3，P<0 . 01 )。在胃中，ANOVA 證明肽（F3,53=202.98 ，P<0 . 0001)及時間（F3,53=3 . 10，p< 0 · 0 5 )之顯著主要作用，以及肽與時間之顯著交互作用（F9,53=5 . 56 ’ p<0 . 0001)。肽類之濃度高低順序爲：HP3>HP4 = HP2 (P<0 . 01 )。在胃腸道中，ANOVA證明肽（F3，e2 = 66 . 30，p<0 . 0 001)及時間（F3，e2 = 36 . 32，p<0 . 0001)之顯著主要作用’以及肽與時間之顯著交互作用（F9,e2=5 . 56 ’ P< 0.005)。肽類之濃度高低順序爲：HP3=HP2 >ΗΡ4 = ΗΡ1 (ρ<0·01)。在睾丸中’ ANOVA 證明肽（F3，e7=26 . 97 ’ Ρ< 0 .0001)及時間（F3，e7=14 . 97 ’ Ρ< 0 . 0 0 0 1 )之顯著主要作用，以及肽與時間之顯著交互作用（F9，e7=477，p<0 . 001)。肽類之濃度高低順序爲：11?4 = 11?1>^[?3=1^?2(口< 0· 0 1 )。在骨骼肌中，ANOVA證明肽（F3,59 = 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -78 - — H.— ! 裝—— —訂 ^線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 B7 五、發明説明（76 ) 48 . 70 ’ p<〇 . 0001)及時間（F3,59 = 97 . 69，ρ<0 ·00 01)的顯著主要作用；但是，肽與時間之交互作用並不顯著。肽類之濃度高低順序爲 • HP1>HP2 = HP4>HP3 (p<0 . 01) 0 在骨骼中，ANOVA證明肽（F3，e8=3 0 . 1 5， P<0 · 0001)及時間（F3，e8=52 . 84，p< 0 . 000 1 )之顯著主要作用，肽與時間之顯著交互作用（卩3，08=5.15，〇<〇.〇〇〇1)。肽之濃度高低順序爲：HP1>HP4 = HP2 = HP3 (p< 0.01) ° 9 9mT c趨化性肽類在感染家鼠肌肉中之局部化作用：在正常及感染大腿肌肉中之9 0mT c標記趨化性肽同系物組織濃度示於表IV中。 I.---------參-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂旅經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83. 3.10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2!0X297公釐） -79 - 472149 A7 _B7_ 五、發明説明（77 )

' 表IV 在正常和感染家鼠肌肉中之0emT c —標記之趨化_頃的組織濃度 (%ID/臟克數土SEM) 時間肽 m (分鐘） HP 1 HP 2 HP3 HP4 正常 30 0.16±0.009 0 1 1土0.003 0.05±0.009 0·13±0.007 120 0 . 10±0.006 〇.07±0.004 005±0·005 0.13±0.1025 感染 30 0 ,39±0. .013 0 _ .28土0 , .013 0 · >11±0| .007 0 , .42±0049 120 0 _ ,21土0 , .008 0 _ .16±0, 007 0 _ 1 0±0 , .004 0 . .32±0.019 —^IT.ii (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 80 B7 五、發明説明（78) ANOVA 證明肽（F3,25=56 · 51 ，P< 0 · 0001)及時間（F3,25=59 . 4 5 ，p< (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 〇 _ 0 0 0 1 )之顯著作用以及肽與時間之顯著交互作用 (F3,25=6 . 74，ρ<〇 · 〇〇5)。在正常肌肉中 ’ΗΡ1 (Ρ<0· 01)及 ΗΡ2 (ρ<0 . 05)之澳度與時倶減，而Η Ρ 3和Η Ρ 4之濃度保持不變。在注射3 〇分鐘後，正常肌肉中之HP 1濃度較高（Ρ < 0 . 01)於其他肽類且HP2之濃度高（P<0 . 01 )於HP 3。在1 2 0分鐘時，正常肌肉中之HP4濃度高（p<0.01)於HP2及HP3;而HP1之濃度高（ρ<0·01)於 HP3。經濟部中夬標準局員工消費合作社印製在感染肌肉中，ΗΡ1(Ρ<0.01) ，ΗΡ2( Ρ<0·01)及ΗΡ4(Ρ<〇.05)之濃度隨時間降低而Η P 3濃度（其在二時間點之積聚值最低）則保持不變。在注射30分鐘後，ΗΡ1和ΗΡ4之濃度高（ρ <0.01)於ΗΡ2和ΗΡ3之濃度；而ΗΡ2之濃度高（ρ<0 . 01)於 ΗΡ3。在 120 分鐘時，ΗΡ4 之濃度·高（Ρ<〇.〇1)於 ΗΡ1’ΗΡ2 和 ΗΡ3; '而ΗΡ1之濃度高（Ρ<0 . 〇1)於ΗΡ3 » 標的一對一背景（Τ/Β)比值（％ I D/克感染肌肉/% I D/克正常肌肉）示於圓6Φ。ANOVA證明肽（F3.22=5 . 87 ’ Ρ<0 · 005)之顯著主要作用。但是，時間之主要作用以及肽與時間之交互作用並不顯著《ΗΡ4之Τ/Β比值顯著大於ΗΡ2(ρ< ^紙張尺度ϋ國國家標準(CNS ) Α4規格（210X297公釐）

五 79) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 0.05) ，ΗΡ1(ρ<〇·〇1)及 HP3(P< 0.01)。因此，HP4證明不僅感染組織中之絕對濃度最高，而且注射後之二時間點的T / B比值亦最高。相反地，HP 3在感染肌肉中之絕對濃度最低且T/B比值亦最低。兔子之局部感染位置的照影：在兔子中，高量99niT c — HP 4於注射後，立即在肺臟，肝臟及脾臟中偵測出。肺活性隨時間降低而在注射 1 - 3小時後，放射活性之局部積聚在感染大腿中見及。注射後4小時之T / B比值爲〜4 : 1。在注射1 6小時後（圖7)，全部病灶之平均T/B比值提高至10/1 而局部區域爲> 2 0 : 1。此外，某些腸部積聚在稍後（ > 4小時）時間點見及。注射1 6小時，細胞結合之殘餘循環放射活性百分比經測出爲約2 5 % 。相反地，膿汁部份證明約9 0 %之放射活性係伴隨W B C — s而生》注射後1 7小時之組織濃度（％ I D /克）（如同利用直接組織計量所測定地）示於圖8中。最高濃度係爲在脾臟 > 肺臟=腎臟（P<0.01) "T/B比值，（ % I D/克感染肌肉或膿汁/% I D/克對側正常肌肉）示於圖9中。膿汁及感染肌肉之平均T/B值分別爲 2’ 5 _ 7 8 : 1 (最大值4 8 . 5 4 : 1而最小值 8. 84:1)及 14.17:1(最大值 25. 64: 1而最小值4 . 78 : 1)。本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐）~ -82 - ϋ. - - i I. - - -:- I I -! -- ! I -- - - ί —SI 1 —— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製五、發明説明 (80 ) 1 1 I ,討論 : 1 1 刖文說明 Η Y Ν I C衍生之趨化性肽同系物可使用 1 I 請 1 θ Θ m T 2 - '•葡基庚酸酯作爲τ c - — ( V ：合氧基核心2 农源先閲 1 1 而用高度活性之 θ Θ m τ 輕易地標記。此外 9 ir T C — 標背 A 1 I 之 1 記之肽類是大腿深部感染之實驗模式中 y 局部感染位置之注意 1 1 外在照影用有效試劑 0 事項再 1 1 i 在所合成之 4 種 Η Υ Ν I C 肽類中 9 3 種 ( Η Ρ 2 > § 寫裝 Η P 3 和 Η Ρ 4 ) 具有類似六肽 ( F 0 r — 頁 1 1 Ν 1 e L F Ν 1 e Υ Κ )之受體結合 E c 5 0 9 而 Η Ρ 1 是 1 1 在 F 0 r — Μ L F 之倍因子內〇所有 Η Υ N I C 共飯肽對 1 1 化學誘引劑受體之親和力大於 F 0 Γ — Μ L F 0 受脑體結合訂 | 潛能大小順序爲 Η Ρ 3 > Η P 2 > Η Ρ 4 > F 0 r — 1 1 Ν 1 e L F Ν 1 e Υ Κ > F 〇 r — Μ L F > Η P 1 > 1 1 I F 0 r 一 Ν 1 e L F 〇在F 〇 r — Μ L F 中用 Μ e t 取 1 ! 線 1 代 N 1 e 對受體結合之親和力降低 1 0 — 1 5 倍 ο 但是 9 在 C — 端用 — L y S 一 Η Υ Ν I C 進一步衍化產生較強之 1 1 受體結合〇 1 Η P 2 Η P 3 和 Η Ρ 4 之超氧化物產製的 Ε C 5 0 值 1 I 係 2 — 8 倍強於肽及 For — Μ L F ο F 0 r — Ί I Ν 1 e L F 證明潛能三倍低於 F 0 r — Μ L F 0 和 Η P 1 1 1 之受體結合強於 F 0 r 一 Ν 1 e L F 之作用相反地 9 超氧 1 1 化物產製之 Ε C 5 0 S 係提高 5 倍 ( 和 F 0 r — Μ L F 與 1 1 F 0 r — Ν 1 e L F N 1 e Y K 比較之下 ) 〇 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 83 - 472149 A7 B7 五、發明説明（8i ) 當按照肽受體交互作用之建議模式說明時，這些數據建議在第4胺基酸殘基上之ΗΥΝ I C衍生可導致構型混亂而影響受體結合與超氧化物產生。最引人注目之觀察是在位置2上以Me t取代N 1 e之作用，其導致受體結合之EC5。提高1 5倍以上（超過F 〇 r — MLF)及 3 0 0倍以上（超過.六肽）以及活化之E C 5。提高1 〇倍以上。因爲先前述及之趨化性肽同系物而言，此一取代具最小之作用，所以，此一結果最爲顯著。以D — Ly s取代L_Ly s所產生之受體結合的EC 5〇提高2倍且活化的E C5。提高5倍亦支持此一假說。在此一位置上，以1 ，6 —二胺基己烷取代L — Lys僅導致結合之丑（：5。輕微降低以及活化之E C 5。提高3 — 4倍。用99inT c標記 ΗΥΝ I C共軛之肽導致親和力之明顯提高。99mT c -ΗΥΝ I C肽結合分析實驗結果證明未標記肽之濃度（需要取代5 0% 99™Tc肽之嗜中性白血球結合所需）是約經濟部中央標準局員工消費合作社印製 20倍高於使用Fo rML〔3H〕F作爲追踪劑時。若放射標記物質包含1個以上肽單元/T c -葡基庚酸酯且結合是共同操作的話，則可解釋此一結合傾向之提高。類似之結合提高已見於四聚體之趨化性肽同系物之報導中（ Kraus, J.L.，et a 1. , Biochem. Biophys, Res. Comm. 124:945-949 (19 84 ))»這些結果亦證明C —端對衍化作用之強朝作用》這些觀察建議，除了對感染照影之優異放射藥物之外，ΗΥΝ I C肽類亦充作進一步說明Fo r— MLF與其 83. 3.10,000 0¾ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 84 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（82 ) 受體結合所伴生之分子交互作用的模型化合物。 . 在HYN I C衍生之趨化性肽同系物專一活性之最大化中，焦點主要在於處理放射核，99Mo/99mT c放射性核產生劑之洗提物的來源。獲致高專一活性 99mT c 之潛在問題是長期99T c (基態，t 1/2〜 32 : 483 — 491 (1991))合成及純化。菸鹼醯基胼衍生之趨化性肽同系物，N_甲醯基_m e t — 1 e u — Ph e — 1 y s— HYN I C係如下所述製成。將包含60/zL二異丙基乙胺之1 . 〇mL二甲基甲醯胺（DMF)中的琥珀醯胺基_6 — t — B 〇 c —阱鮏 D比陡一3 —竣酸（154mg，mMo 1 e)加至2m芡 DMF 中之 N — F 〇 r — Me t— Leu — Phe— Ly s (186mg，mMole)懸浮液中。肽迅速溶解且於 2小時以後，加入乙醚-石油醚。丟棄上層且加水至殘餘物中，使其形成固體。固體用5%重碳酸鈉，水及乙酸乙酯洗滌。粗產物之產率爲1 8 3 mg。粗產物在2 0°C下與 5mp三氟基乙酸（TFA，包含〇 . lmi?對一甲苯酚 )一起攪拌以移除保護基。利用旋式蒸發移除TFA且加入乙醚以沉澱出經去保護之肽。產物利用逆相HPLC，在2 . 5x50cm Whatman 0DS-3管柱上純化（用乙睛至0 . 1% TFA梯度液洗提）。綜合含主要成份之各部份且移除溶劑而產生所要產物。

最後產物之化學純度係利用TLC，HPLC，UV 光譜，質譜，及胺基酸分析法評估。結合至人類本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -85 - ! 裝訂線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 472149 A7 B7 五、發明説明（83 ) PMN< s上之化學誘引劑受體以及超氧化物產製之 E C 50係如 Pike, M.C.，和 Snyderman，_R.，Methods Enzymol. 1 62:236-245 ( 1 988 ); Pkie, M.C. , et al., Blood 67:909-913 (1986);及Fischman，A. J.，et al_， J. Nucl. Med. 32:483-49 1 ( 1 9 9 1 )中所述進行。用99mT c標記：爲了避免投服藥學劑量之趨化性肽同系物所伴生之嗜中性白血球減少作用，Η Y N I C衍生物係在最大專一活性之條件下，用9 9m T c標記。藉由獲致高度專一活性照影劑量之99mT c ，肽之注射量遠低於E C 5。（〜2 0 ^ Μ )。在先前洗提後5小時洗提出99Μ 〇 / 99mT c產生劑而產生〜500//C i之總活性》Tc之質量大小以及 c對99™T c之相對比例係利用Lamson et al.，J. Nucl. Med. 7:639-641 ( 1 975 )之方法計算出。在典型洗提中，Tc之總數量是爲約3nMo 1 e s ，99Tc對 99mTc之比值爲〜1 . 5 : 1且99™Tc之專一活性〉 100 ，OOOmCi/jtiMo^e °99mTc —葡基庚酸酯（T c — GH)係由葡基庚酸亜錫（Glucoscan，

DuPont )製成以提供標記肼基菸鹼醯胺共軛肽之Tc (V )合氧基物質（Pike，M.C.，et al·, 'Blood 6 7:9 09-9 1 3 (1986))。將約2 . 5mL食鹽水中之99mTc —過鍀酸鹽加至冷凍乾燥過之實驗組件中且放射活性之最後濃度爲本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 -86 - 裝 n n n ϋ n I n 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（84 ) 15 0mCi/mL (在製備時）。產物之放射化學純度利用立即薄層矽膠層析法（I TL C_ s g )，使用丙酮及食鹽水作爲流動相溶劑測出> 9 5 %。約 180jt/g 趨化性肽（Fo r— Me t— Leu — Ph e-NH - (CH2) β-ΝΗ-ΗΥΝ I C (MW ： 720)溶入50j^L DMSO中且用〇 . IN乙酸鹽緩衝液（pH5 . 2)稀釋至最後濃度爲10#g/mL 。將0.5mL肽溶液放入乾淨之玻璃瓶中且加入〇.5 m L 9 9mTc -葡基庚酸酯。迅速翻轉混合物且使之靜置於室溫下經1小時。肽標記含量利用I T L C — s g，使用3種各別溶劑系統：丙酮，食鹽水及丙酮：水（9 : 1 )監控。99mT c標記之肽利用在C 18管柱（5仁， 4 . 5 X 4 6ram，Beckman, Columbia，MD)上之逆相層析（用二成份梯度液洗提）純化。洗提條件爲：溶劑A -50mM乙酸鹽中之5%乙睛，PH5 . 2 ;溶劑B — 50mM乙酸鹽中之50%乙腈’PH5.2;梯度液：在20分鐘內，0%至1〇〇%Β ;流速2mL/mi η 。放射標記肽之專一活性利用以下關係式計算：（％回收 XmCi現在的）/(肽之βΜο芡esxl〇〇)。動物模式： 4隻雄性恆河猴（重量〜1 〇吆）分別用溶於〇 . 2 m 5非熱原性食鹽水中之4種劑量

Fo rNl eLFN 1 eYK-DTPA (10 > 000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ! I 裝 I 訂線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 87 - 2 7 4

經濟部中央標準局員工消費合作社印— 五、發明説明（85) ;1000; 100及10ng /kg)評估。每一動物用所有4種劑量之肽處理，在每一劑量之間休息1週。動物用酮胺/甲苯卩塞嗪麻醉並於8 0分鐘內系列的收集0 . 5 mL靜脈血液樣品。每一實驗包括4種注射-載體，肽，肽，載體。基準線血液樣品係在第一次注射前1 5和5分鐘與每次注射後之0 . 25，0 . 5，1，3 * 5，10 和2 0分鐘抽取。恰在收集2 0分鐘血液樣品之後，進行次一注射。血壓，脈搏，以及呼吸速度在整個實驗期間內監控。白血球數量（CBC)，白血球數量微分值，紅血球數量，以及填充細胞體積對每一血液樣品測定。此外，監控動物之活動力及外觀，進食情形與體重°實驗摘要之概要說明示於圖1 1中。使用2隻成熟雌性恆河猴（重約1 0 kg )於照影實驗中。因爲這些動物先前已用於使用其他放射性藥物之照影實驗中，所以，它們在引入麻醉期間內，在後大腿已接受多種肌內注射。這些注射導致顯著程度之無菌發炎。照影：在輕量酮胺麻醉（5. 5 mg/ kg)下，動物經腿動脈靜脈內注射以約0 . 5mC i 99mT c —標記之肽（ < 2 . 0 n g / kg )。在注射放射標記肽後之5分鐘， 3 0分鐘，1小時及1 9小時，動物用酮胺/甲苯卩塞嗪（ 15 . 0和1 . 5mg/kg)麻醉且全身使用廣角r-照相像（裝有平行孔高解析度低能量視準儀，其係內接於專業本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐）一 88 - ---^-------1-------1T (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（86) 電腦系統（Technicare Gemini 700， Technicare 560， Solon, OH))閃光照像。所有影像係以1 0 c m / m i η 之掃描速率，使用集中於99mT c光—尖峰（1 4 0 k eV)之1 5%視窗取得。注射前_5分鐘以及注射後 1 ，3，5和1 5分鐘，收集血液樣品並測定C B C。感興趣區域遍集：整隻動物，心臟血液混合物，肺臟，肝臟，脾臟，腎臟，小腸，骨頭，正常肌肉，及感染肌肉；再計算計數密度（CPM/照片）。結果以組織一對一血液混合物，％注射劑量/克數（％ I D/g )及標的對背景比值（發炎大腿/對側大腿）表示。統計方法：照影研究結果係利用變數分析（ANOVA)，隨之，Duncan’s新穎多重範圍測試法（Duncan，D.B. Biomet-rics 1 1:1 -42 ( 1 955 ))之分析統計評估。結果： HYN I C衍生之肽係以優異產率及化學純度製成。最後產物在TL C和HP L C上顯出單一譜帶。UV分析顯示在2 6 8及3 1 5 nm處之最大吸收值。質譜m/z = 671。胺基酸分析與所預期產物（Me t — 1 . 〇〇 •Leu-1 .〇〇；Phe-〇.97；Lys-1 · 0 0 )相符合。放射標記肽的專一活性 >20 · 〇〇〇mCi///M〇ie (HPLC 純化之後本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（2ΐ〇χ297公釐） 83. 3.10,000 I.-------1¾.------1T------^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁·) 89 - 47祖麵 A7 B7 满 X) --—一·〆五、發明説明（87) )。在人類PMJSf/.s上之化學誘引劑受體結合及超氧化物產生之體外分析分別產生2 . 0及2 0nM之EC50° (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製圖 1 2 示出 Fo rNi eLFN 1 eYK — DTPA 誘起猴子中之明顯劑量相關性嗜中性白血球減少反應。在 2個最高劑量肽（1 0 0 0 0和1 0 0 0 n g/kg)下’ 白血球數量在一旦注射後降低至約對照組之約4 0%且在第二次用肽刺激時回復至對照組之6 0 — 8 0 %。在第二次注射肽之後，白血球數量降低至對照組之4 0 — 5 0% β使用最高劑量，白血球數量回復至對照組之8 0% (第二次注射載體時）且於第1次注射載體8 0分鐘後之研究結束時達到對照組之9 0 %。在1 0 0 0 n g / kg劑量下，白血球數目回復至對照組之9 0% (在第二次注射載體時）且研究結束時回復至基準線β在1 0 0 n g. / kg劑量 .之後，白血球數目一旦注射後降低至對照組之約70%且於第二次肽刺激時回復至基準線。第二次注射載體時，白血球數目回復至基準線。使用最低劑量之肽（1 0 n g/ kg )，白血球減少程度小且在每二次注射肽之後3分鐘內回復至基準線。注射任何劑量肽之後並無任何動物產生明顯不良作用。未偵測出對微分WB C數目，血壓，脈搏次數，或呼吸次數之.顯著作用。圖1 3示出猴子在注射約1 . OmC i 99mT c 檩記肽3和1 5小時之目前，之前和之後影像。在早期影像中，在肺臟，肝臟，脾臟及骨骼中放射活性之濃度高（本紙張兄度適用肀國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ ~ -90 - 鯉濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（88 ) 和白血球細胞結合相等）。高量放射活性亦集中於腎臟及膀胱中。較低濃度見於肌肉’及胃腸道中。此外，發炎位置在此時用肉眼可輕易看見（T/B〜3 : 1)。在此一肽劑量下，對W B C值並無任何明顯作用》在後期照影期間，肺活性降低，但在其他器官中之放射铒性分布仍保持相當固定。注射1 5分鐘後，在發炎位置上之放射活性積聚顯著降低。在二次照影時間，類似型態之生化分布見於其他動物中》討論：此一實例確證，和兔子中一般地（O’Flaherty, J.T. ，et al·，J. Immunol. 1 1 8:1 586- 1 58 9 ( 1 9 77 ))，激動劑趨化性肽在猴子中誘起明顯的暫時性嗜中性白血球減少症。但在小於1 0 n g / kg之肽劑量下，此一作用並不明顯。最初可能發生活化嗜中性白血球之少許最輕微留空白，如同在肺活性隨時間降低所示地。當注射標記 HYN I C衍生之趨化性肽至具有溫和無菌發炎病灶之猴子時，生化分布型態和放射標記之白血球細胞之生化分布型態極其相近.似且發炎中心可在注射3小時內輕易偵測出 (標的一對一背景比值爲〜3:1)。藉由在高度專一活性（>20，000mCi//zMoj?e)下之放射標記，在照影劑量之放射性藥物中之肽總質量可降低至嗜中性白血球降低之臨界值；在20000mC i/#Mo芡e 下，在10kg動物中之〇 . 5mCi注射等於<2ng/ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 1II 裝訂 .線 (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) -91 ~ 鯉濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（89 ) kg之肽劑量。假設血液體積爲體重之8%且球容積爲5 0 %，此一劑量之肽回應初始循環濃度6 Ο P Μ (其低於受體活化之E C 5〇二倍以上）。如所預期地，此一劑量之肽對末梢白血球值無影響。此一實驗確認放射標記之趨化性肽同系物係爲對其嗜中性白血球減少作用敏感之動物的有效照影劑》當在兔子中研究這些肽類之特徵化感染照影時獲致類似結果（ Babich, J.W.，et al.，（委託公開））。雖然無菌發炎位置在注射3小時後是高度顯著的，但標記一對一背景比值在注射1 2小時後急遽降低》此和具有局部大腸桿菌感染位置之兔子研究結果（其T/B比值在注射3小時後爲約3 : 1且於1 2小時提高至2 0 : 1 之高）顯著不同。此一差異之可能解釋包括病灶強度不同及細菌感染與無菌感染間的差異。若未來研究證明此一病灶動力學差異的話，則試劑之實用性可顯著提高，因爲感染和無菌發炎間之差異是可能的。實例1 0 2 : 在此一實例中，比較及對照在急性細菌感染中之含傳統111 I η —標記白血球之T c —標記之激動劑趨化性肽類的感染局部化性質》因兔子對趨化性肽類之嗜中性白血球減少作用的已知敏感性而選擇它》

99mT c —標記之甲醯基一甲硫醯基一白胺醢基一苯基丙胺醢基一賴胺醯基—阱基菸鹼醯胺（90mTc — HP 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 ---------；-I^------、1T------ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -92 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（9〇 ) )之生化分布及感染照影性質係和罹患大腸桿菌感染之兔 '子中的ηΜ η —標記白血球（mi n— WBC e s )相比較。6隻動物組注射以/ m C i 9 em T c - Η P加上 Ο . Ο 5 m C i “Μ n-WBC / s 並從注射後 3-6小時及1 8小時取得系列閃光照相。取得最後影像後’ 殺死動物且測定生化分布。在所有照影時間下，99mT c — Η Ρ和11"!!-W B C > s之分布係類似的且感染位置可用兩種放射性藥物以肉眼輕易地檢視。標記（感染肌肉）對背景（對側正常肌肉）比值（T / Β )在注射後3，6和8小時分別爲 :3.38±0.46，3.80±0.37，及 10 . 875±1 · 44 (90mTc—HP)以及 1.71±0.04，1.81土0.26，和3.79 ±0 . 83 ("Μ n-WBC' s) 。T/B ’s 之平均比值（99mTc-HP 對 mi n-WBC > s )爲 2 · 99±1 . 88 (無任何低於單一之值）。直接組織取樣計算出之T/B > s很明顯99mTc— HP大於 J11I n-WBC， s (33 · 6 : 1至8. 1 : 1 ， p <0 _ 0 1)。這些差別主要係由於感染肌肉中之e0mT c_HP之較高絕對積聚作用（〇 · 1〇2%1 . D ./ g 對 0 . 024%I .D./g，p<〇 _ 〇1)非正常骨骼肌中之積聚作用差異。這些結果顯示99mT c — HP產生大於或等於用 n-WBC / s可獲致之標的-對一背景比值，其本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 -93 - ’ ^ .^iT^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央梯準局員工消費合作社印製 472149 A7 £7__ 五、發明説明（91 ) 可能係由於感染位置之絕對積聚作用提高的結果^ 物質及方法：所有無機鹽類係得自Fischer Scientific Co. ITIC 砂膠層析條狀物係得自Gelman Laboratoies (Ann Arb-or’ MI) 。111 I n — Oxine係得自 Amersham Inc. (Arlington Heights, IL) 。葡基庚酸亞錫組件（Glucoscan )及991^〇/99">1'(：產生劑係得自〇1^〇111:放射性藥物部 (Bi 1 1 erica, ΜΑ )。所有其他試劑係由商售來源取得最高使用級數。肽合成：利用標準固相技術合成及純化N — F 〇 r —甲硫胺醯基-白胺醯基-苯基丙胺醯基-賴胺酸。此一肽（N -Fo r— Me t— Leu — Phe — (N— ε — HYN I C) Ly s (HP)之菸鹼醯基阱共軛係如Babich， J.W.， et al·, J. Nucl. Med. 33:910 (1992) 所述製成。產物在2 · 5 x 5 0 c m Whatman ODS-3管柱上，逆相HPLC純化，使用0.1%TFA中之乙睛梯度液洗提。綜合包含主要成份之各部份且移除溶劑而得所要產物。肽利用UV及質譜以及胺基酸分析法定出特徵。 HYN I C衍生之趨化性狀類之99mTc標記使用9 9mTc葡基庚酸酯提供放射標記阱基菸鹼醯胺本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -94 - . 裝訂線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83.3.10,000 472149 A7 __B7__ 五、發明説明（92 ) (Abrams, M.J., et al., J. Nucl. Med. 31:2022-2028 (1990))共軛肽所需之T c ( V )合氧基物質。於冷凍乾燥組中加入Ο . 9% NaCj?中之約2 . 5mL 99mT c —過鍀酸鹽。最後放射活性濃度爲1 〇〇mC i /m L且產物之放射化學純度利用立即薄層矽膠層析法（ I T L C - s g )，使用丙酮及0.9%NaCiM乍爲流動相溶劑測定。使用以下方法，用99mT c放線標記趨化性肽同系物。將5mL之lmg/mL肽溶液轉置至乾淨玻璃瓶中。將 500aL之〇 . 1M乙酸酯緩衝液（pH5 . 2)加至肽溶液中，隨之，500从L 99mTc —葡基庚酸酯。迅速翻轉混合物且使之靜置於室溫下1小時。放射化學純度利用HPLC，使用C18—逆相管柱（300A，，4.5mmx25cm，Vydac )及以下洗提條件測定：溶劑A : 0 . 1%水中之三氟基乙酸；溶劑B :乙睛中之 1 05年）之組成。因爲99Tc是8 7% ββΜο衰變及 10 0% 99mT c崩解而直接產生的，所以，總有某些數量載體可用以在標記反應中競爭。專一活性 > 1 0，0 0 OmC i / V莫耳之99mT C標記趨化性肽同系物可輕易製成，但來自其他9 9mT c之標記肽的 Sen-Pak分離是必要的。除了使99mT c來源適宜之外，若標記肽之趨化性純化條件亦適宜的話，則可獲致更高的專一活性。使用HP L C系統，對應於99mT c標記之肽，未標記之肽以及99mT c —葡基庚酸酯之尖峰可本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------餐------訂------^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -95 - 4f2l4i : A7 B7 五、發明説明（93) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 清楚解析而分離出無載體之放射標記肽。在這些情況下，放射標記肽之專一活性僅受限於9 9m T c產生劑之專一活性。因此，根據99mT c之理論專一性活性’ 99mT c標記 HYNIC衍生之趨化性肽同系物之最大專一活性是約 5 0 0 ，OOOmCi/β莫耳。雖然獲致在慣常實施中之此一專一活性值是不可能的，但其必需可能製備專一活性類似99mT c -葡基庚酸酯（用以標記）之放射標記肽類。因爲專一活性>1000 0 OmC i/y莫耳之 9 9™T c —葡基庚酸酯可以慣常基礎製成，但在此一專一活性值下之肽類必需是可能的（若使用HP L C純化的話 )° 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝因爲HYNIC葡基庚酸酯配位基僅占鑤離子配位球之二個位置，所以，標記產物最可能包含其他基團。一般咸信葡基庚酸酯藉由充作 ''輔配位基^而扮演此一角色。因爲趨化性肽類之低分子量，鍀標記用之輔配位基對這些分子之生化分布有深奧的影響。爲了評估此一可能性，測定99mTc標記之HP 2和HP 3 (用4種不同輔配位基 -葡糖二酸酯，葡基庚酸酯，甘露醇，及葡糖胺-放射標記）的生化分布。用不同配位基放射標記之方法是和使用葡基庚酸酯之方法相同。在所有情況下，放射標記肽之 HPLC分析顯示單峰。圖1 0示出HP 3之這4種組成物在血液，肺臟，肝臟，脾臟，腎臟及胃腸道中，在注射後之4個時間點上的％注射劑量/克數。雖然在大部份組織中偵測出之生化本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 96 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 A7 B7 五、發明説明（94 ) 分布差異小’但最大可能差異（p<〇 · 01)見於肺臟 (葡糖二酸酯’葡基庚酸酯>甘露醇>>葡糖胺）；肝臟 (葡糖二酸酯，葡基庚酸酯，甘露醇>>葡糖胺腎臟 (甘露醇〉>葡糖二酸酯，葡基庚酸酯，葡糖胺）：脾臟 (葡糖二酸酯’葡基庚酸酯>甘露醇>>葡糖胺）：以及胃腸道（葡糖二酸酯，葡糖胺>>葡基庚酸酯>>甘露醇 )。用Η P 2類致類似結果。有幾種使用放射標記趨化性肽類於感染照影的嘗試（

Fischman， A.J·， J. Nucl. Med. 32:483-491 (1991); McAfee, J.G., et al., Semin. Nucl. Med. 14:83-106 (1984); Thakur, M.L., et al., Semin. Nucl. Med. 14:107-117 (1984); Zogbbi, S.S., et al., J. Nucl. Med. 22:P32 ( 1 9 8 1 ))。但是，使用這些研究時可使用之放射標記方法產生相當低專一活性之試劑，其乃需要藥理數量之照影用肽。這些肽之劑量經證明在兔子中產生嚴重之暫時性嗜中性白血球減少在（〇’Flaherty，J.T.，et al·，J. Immunol. 1 1 8:1 586- 1 5 89 ( 1 9 77 ))。使用本發明之放射標記技術可完全消除這些潛在不良作用。在兔子中，對趨化性肽類之嗜中性白血球減少作用高度敏感之物質（Η P L C純化過之99mT c Η P 4 )在注射後1小時內局部固定於大腸桿菌感染之局部位置上且在15小時達到最大T / Β比值。放射標記之HYNIC方法提供製備具有極高專一活性之99mT c標記肽類及蛋白質之獨特及有效率方法。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0父297公釐） 83. 3.10,000 ----------I------、訂^------4 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 97 - 472149 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（95 ) 在所獲致之高度專一活性下’必需可能在顯著低於嗜中性白血球減少反應之E C 5 0的肽濃度下進行照影實驗° 例如，使用SEP — PAK純化過之肽（〜10，000 mC i/从莫耳），20mC i之注射劑量包含約2 nMo 1 e之肽。在70公斤重個體中，此代表<30 pMo J? e s/kg之活射劑量。基於使用恆河猴之研究’ 此數量之肽遠低於誘發顯著嗜中性白血球減少之劑量。使用HPLC純化物質可提高安全極限至約1〇倍。實例1 0 1 : 此實例證明放射標記之激動劑趨化性肽同系物是猴子發炎位置之有效照影試劑。藉由在高度專一活性下放射標記可避免這些試劑之嗜中性白血球減少作用。評佔非人類之靈長類中，趨化性肽同系物之體內生化活性，生化分布，以及發炎照影性質。評估在正常恆河猴子中，嗜中性白血球減少反應的劑量依賴性。使用 eemTc —標記之胼基菸鹼醯胺（HYN I C)衍生之趨化性肽同系物研究猴子中之生化分布及發炎照影。在正常動物中之研究證明肽誘起動物中之清楚劑量依賴性嗜中性白血球減少症。白血球數目幾乎在注射後立即發生且迅速恢復至基線。未見及對不同WB C數目，血壓，脈搏速率，或呼吸速率之顯著作用。在所測試之最低劑量肽（1 0 n g/kg)下，嗜中性白血球之減低情形最小。Η Y N I C衍生之肽以優異及純度製成，具有類似天然本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 83.3.10,000 ----------Ε------1Τ------^ (請先閲讀背面之注^Κ項再填寫本頁) 98 - 472149 A7 B7 五、發明説明（96 ) 肽之生化活性，以及易於在2 0，0 0 0 m C i / ；aMoj?e之專一活性下標記。當〜〇 . 5mCi ( < 2 · 0 n g /kg)之放射標記肽注射於猴子之殺過菌之局部發炎位置中時，見及類似放射標記W B C / s之生化分布形態且未偵測出嗜中性白血球減少症。在注射3小時以後，發炎位置顯而易見，T/B爲〜3:1。物質： N —甲，醯基一甲硫胺醯基-白胺醯基一苯基丙胺酸（ ForMLF) ，N—甲醯基-正白胺醯基一白胺醯基一苯基丙胺醯基-正白胺醯基-酪胺醯基-賴胺酸（F 〇 r N1 eLFNl eYK)，大戟二萜醇肉豆蔻酸酯乙酸酯 (Ρ Μ A )，及細胞鬆弛素B係得自Sigma (St. Louis, M0) 。Fo rML 〔3H〕F (60Ci/mmo 芡）及 99mT c ( 99M ο / 99™T c -產生劑）得自 New England Nuclear (Boston，MA) 。Hank’s均衡鹽類溶液（ HB S S )係得自 G.I B C 0 (Grand Island，’ NY)。經濟部中央標準局員工消費合作社印製肽合成及定其特徵： N —甲醯基-甲硫胺醯基-白胺醯基一苯基丙胺酸_ 賴胺酸及N —甲醯基一正白胺醯基一白胺醯基一苯基丙胺醯基一正白胺醯基一酪胺醯基_賴胺醯基一 D T Ρ A利用標準固相技術（Merrifield，R.B. J. Am. Chem. Soc. 15:2149-2154 (1963); Stewart, J.M. et al·， Solid 83. 3.10,000 —--------裝— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 99 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 B7 五、發明説明（97 )

Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman & Company, San Francisco, CA (1969))，如先前所述（Fischman， A.J.，etal.，J. Nucl. Med. 0 . 1% 三氟基乙酸；梯度液：0%B至1〇〇%Β(1〇分鐘內）：流速2mL /分鐘。U V吸收係由流經光譜計（Mi It on-Roy/LDC， Boca Raton, FL)監控且使用放射性同位素偵測器（Beckman 170， Beckman， Columbia, MD) 監控。記錄來自二偵測器之輸出值並利用雙管道積分器（Waters Models I 7 4 6 d a t a m o d u 1 e，W a t e r s，M a r 1 b o r ο，M A ) 〇 9 em T c - Η P之可注射溶液利用以上所述Η P L C 系統，從未標記Η P分離出9β™Τ c - Η P。溫和加熱肽溶液且於N 2流下乾燥。將殘餘物溶入等張性注射用食鹽水中。注射液樣品利用Η P L C分析》 83. 3.10,000 ---------— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -旅- -100 - 472149 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（98 ) 且將細胞再度懸浮於5mL食鹽水中。在攪動同時逐滴加入 500mC i "Μ n-Oxine 並於 37°C 下孵養 60 分鐘（間或加以攪動）。讓細胞沉降且將丸粒再度懸浮於血小板較少之血漿（PPP)中，在450xg下離心5 分鐘，再度懸浮於P P P中以供注射之用。細胞標記效率係計算爲加至細胞丸粒（其在使用P P P洗滌一次，隨之，從標記介質分離後仍保持細胞結合不變）中之初始 mi η — oxine活性。感染模式：所有研究使用New Zealand雄性白兔子（重量： 2 . 2 - 3 . 0 kg )。來自單一臨床分離物之大腸桿菌在胰蛋白酶黃豆瓊脂片上成長過夜且各別純系用無菌正常食鹽水稀釋以產生包含約1X1011生物體/ 0 . 5mL之混濁懸浮液（用光譜計測定）。0 . 5 m L細菌懸浮液之接種物深部注射至兔子之左大腿肌肉中。接種2 4小時以後，感染大腿嚴重腫脹之兔子由對側耳靜脈注射以放射性藥物。6隻動物注射以/ m C i e9mT c-HP (>5000mCi/；«Mo 芡 e)及〇 . 0 5 m C i mi n標記之白血球。照影：在注射放射標記試劑後之3，6和1 8小時，動物用酮胺/甲苯P塞瞭（15 . 0及1 . 5mg/kg)麻醉且使用本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 ----------1------,17------線 (請先閱積背面之注意事項再填寫本頁) 101 472149 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（99 ) 廣角r 一照相機（具有平行孔介體能量視準儀，接至專業電腦系統（Techn.icare Gemini 700，Technicare 560， Solon, Ohio )取代之後全身閃光照相。同時地，η 1 I η 和e9raTc影像係以雙光子模式，使用1 5%以1 40 keV (99mTc)及 247keV (uMn)光峰爲中心的視窗獲得。在注射3和6小時之後，2組影像係以預設時間5分鐘/次獲得。注射1 8小時後，照影時間延長至1 0分鐘/次》感興趣區域遍集感染區及對側正常肌肉 (背景）。結果以標對-對-背景比值（感染大腿/對側大腿）表示。直接組織取樣：取得最後影像後，動物用過劑量之戊巴比妥鈉殺死且測定生化分布。稱出血液，心臟，肺臟，肝臟，脾臟，腎臟，腎上腺，胃，胃腸道，睾丸，骨骼，骨髓，正常肌肉，感染肌肉，及膿汁之重量且用分格型r -計數器（ L K B 型 # 1 2 8 2，Wal lac Oy，Finland )測定放射活性。爲了校正放射活性衰變且使能計算出在每一器官中之放射活性濃度（作爲所投服劑量之分數），同時計算幾部份之注射劑量。結果以每克之注射劑量百分比（ % I . D . / g )，感染對正常肌肉比值以及濃汁對正常肌肉比值表示。爲了測定循環中及感染位置上之放射活性，血液與膿汁樣品在Lymphoprep上，利用梯度離心細分。血漿再進一 ---------^— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T -線_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4规格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -102 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 472149 A7 ____B7_^_ 五、發明説明（100 ) 步在Sephadex G-100( 1 . 〇 X 2 5 cm)管柱上細分，用PBS (pH7 . 4)洗提》管柱使用"Μ η — I gG ，n — F(ab 一）2，125Ι -人類白蛋白，及 e9mTc_DTPA 洗提。影像研究：進行影像研究以計算η之1 7 4 k e V光子橫越至99mT c窗內以及99mT c之1 4 0 k e V橫越至 111I n窗內的數量。簡而言之，在動物注射之時， m I η與T c (相同比值注射液）之樣品和2 5 0 m L食鹽水澈底混合於標準輸入袋子中。影像放在離開照影桌5公分高處且取得在二視窗中之影像。由沿著袋子周圍之感興趣區域計算出橫越因子且用以校正"·"T c及 111 I η影像。統計方法：照影與生化分布結果係利用變數分析法（ANOVA )，隨之Duncan’ s新穎多重範圍測試法（Du n can, D.B., Biometrics 1 1:1 -42 ( 1 955 ))作統計評估。對照影數據而言’採用雙一樣式（two-way ) ANOVA (具有線性模式，其中，"注射後時間"與"放射性藥物〃（99mTc 一11?或111111一'^8(：/3)是分類變數）；1'/3 ==時間+放射性藥物+時間X放射性藥物。對生化分布數據而言，採用雙—樣式ANOVA (具有線性模式，其中本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ' ^3. 3. !〇,〇〇〇 --------------^------1T------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 472149 A7 _B7_______ 五、發明説明（101 ) ’器官與放射性藥物是分類變數；％ Ϊ . D . /克=器官 +放射性藥物+器官X放射性薬物。此外，111 1 n -WBC — s對99™Tc - HP之標記一對一背景比值利用線性回歸法比較。所有結果以平均值I S E Μ表示。結果：肽合成：阱基菸鹼醢胺衍生之趨化性肽以優異產率及純度製成。UV分析出在2 6 8和3 1 5 nm處之最大吸收。質譜和胺基酸分析（Me t — 1 . 00，Leu-l · 〇〇， Phe — 〇 . 97，Lys — 1 . 00)和預期之共軛肽產物相符合。放射性藥物：經濟部中央標準局員工消費合作社印製 I T I C和Η P L C分析證明在赙養1小時後，伴隨肽而產生> 9 0 %放射活性。未經純化之99m T c — Η Ρ 之專一活性經計算爲>3 ，000mCi/jaM.〇ee。使用如上所述之純化方法，專一活性提高至> 1 0 0 0 0 mCi. / vMoj?eo 在這些實驗中使用η -白血球標記方法導致標記效率約爲7 0% (純化前）及最後放射化學純度> 9 5 影像研究： 83.3. !〇,〇〇〇 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -104 - 472443 Α7 Β7 五-Γ發^^明（1吟影像研究證明注射放射性藥物3小時之後，在 99™Tc視窗中偵出之5%光子是由η提供。注射 1 8小時後，在99mT c視窗中偵出之1 7%光子係由 111 I η提供。在二次照影時間，在11 1 I η窗口中偵得之 2 %光子係由99raT c提供。所有影像資料均對這些溢出作用（Spillover effect)作校正。照影：圖1 4示出在共同注射99mTc— HP及ηΜ η — WB C > s後6和1 8小時，兔子之代表性，橫越校正過後期影像。在二照影時間下，二放射性藥品之全部生化分布是近乎相同的。高濃度之二種試劑在肺臟，肝臟，脾臟，及腎臟中偵出。二種追踪劑在肌肉與胃腸道中之濃度較低。經濟部中央橾準局員工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 由照影資料顯見99mT c — Η P在注射6和1 8小時顯著地局部固定於感染位置上。二試劑之Τ/Β比值在時間（Ρ<0 · 01)內顯著提高。在二照影期間， 99mTc-HP之丁 / Β比值顯著大於（ρ<0 . 01) n-WBC > s。二種放射性藥物之標記對背景比值示於圖1 5中》注射後6小時，T / B 99mT c -Η P等於注射後1 8小時之111 I η - W B C / s。丁 / Β 之平均比值c - HP 對 1Χ1Ι η — WB C > s ) 是2 . 99±1 . 88，無任何低於單數之值。本紙張尺度適用中國國家棟準（CNS ) A4規格（2I0X297公釐） -105 - 472149 A7 B7 五、發明説明（l〇3 ) 直接組織取樣： 99mTc— HP與η1】 η —標記之WBC一 s的生化分布（％ I . D . / g )(利用注射1 8小時後之直接組織放射活性測定）示於表V中。 —— — 1 — I I I 訂線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 -106 - 472149 A7 B7 五、發明説明（l〇4 ) '表 V :兔子中之99mT c和1n—WBC > s之生化分布 (% I · D . /g平均值土 S ΕΜ) 器官

T c - Η P 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 9 9m 血液 0 • 0 3 7 土 0 0 0 3 0 1 2 7 士 0 0 2 9 心臟 0 0 4 3 士 0 0 0 5 0 0 2 4 土 0 0 0 4 肺臟 0 1 9 2 土 0 0 3 7 0 1 2 0 土 0 0 0 7 肝臟 0 2 0 7 士 0 0 1 3 0 1 4 8 士 0 0 2 0 脾臟 0 6 0 1 土 0 0 2 5 2 0 8 0 土 0 2 3 7 腎臟 0 • 1 3 6 土 0 0 2 1 0 0 8 6 土 0 0 1 6 腎上腺 0 • 1 0 3 土 0 0 1 8 0 1 3 9 土 0 0 2 6 胃 0 • 0 5 0 土 0 0 0 8 0 0 1 3 土 0 0 0 3 胃腸道 0 0 4 7 土 0 0 0 5 0 0 1 8 土 0 0 0 4 睾丸 0 • 0 1 8 士 0 0 0 1 0 0 2 8 土 0 0 0 3 肌肉 0 0 0 3 土 0 0 0 1 0 0 0 4 土 0 0 0 1 骨髓 0 1 5 9 土 0 0 1 3 0 3 5 8 土 0 1 0 7 骨骼 0 0 3 3 土 0 0 0 4 0 0 3 9 土 0 0 0 7 感染肌肉 0 1 0 1 土 0 0 0 8 0 0 2 4 土 0 0 0 2 膿汁 0 1 8 8 士 0 0 3 4 0 0 3 5 土 0 0 0 8 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 83. 3.10,000 107 - 4 丨殳------------------j

一明説明（105) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在此時發現這二種追踪劑在幾種組織中之濃度有顯著的差異。99>nT C —檩記之趨化性肽較高量積聚於感染肌肉（ρ < Ο . Ο 1 )，膿汁（ρ < 〇 . 〇 1 )，心臟（ρ <0.05)，肝臟（ρ<0.05)，胃（ρ< 0 · 01)及胃腸道（ρ<0 · 05)中。較高量 mi η — WBC / s見於血液（ρ<〇 . 〇 5)，脾臟 (ρ<0 . 01)及睾丸（ρ<〇 . 01)中。在正常骨骼肌，骨骼，骨髓，肺臟，.腎上腺或腎臟中未發現任何顯著之差異。 ·Μ濟部中央標準局員工消費合作社印製血液細分之結果證明在2時間點上，僅〜2 5 %循環 99mT c放射活性係伴隨白血球而生，然大於8 5 %之 uilη放射活性係結合至白細胞上。對二放射性核而言，結合至血液細胞是最少的（<2%)。相反地，膿汁之細分證明對99mT c及11 Μ η而言，約9 0 %放射活性係伴隨WB C / s而生。血漿之管柱層析證明〉9 5%之 99mT c放射活性（其未結合至用表觀分子量 150000(IgG部份）洗提出之WBC>s上）；在解離肽之洗出位置上未偵測出任何放射活性。來自管柱之放射活性大於9 0 %。圖1 6示出利用直接放射活性測定法測定注射1 8小時之切除組織樣品上的9 9raTc— HP及η -WBC > s之感染肌肉對正常肌肉比值圖形。90mT c — HP之感染肌肉對正常肌肉之平均比值高於η-WBC 一 s (33.6:1 對 8.1:1 ，Ρ<0·01 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) Α4規格（210Χ25»7公釐） -108 -

五、發明説明（ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) )。此一差異係出自於99™Tc-HP (0 . 102 % I . D . /g)在感染肌肉中之絕對積聚提高（和 1 11 I η — W B C 一 s ( 〇 . 〇 2 4 % I . D . / g )比較）而非在正常骨骼肌中積聚的差異（0 . 0 0 3 I . D ./g (”mTc_HP)對 0 . 004 %I .D./gCmin— WBC^s)。回歸分析法無法證明e9mT c — HP與^"1 η — WB C積聚間之顯著關聯（r2 = 0 _ 076)。膿汁對對側正常肌肉比值（利用注射後1 8小時’直接放射活性測定法測定）示於圖1 7中。99mT c - HP 之平均膿卄對正常肌肉比值爲6 1 . 8 ±1 1 . 0 5而 n-WBC 一 s 之比值爲 9 . 32 土 2 . 50 ( p<0.0 1) »99mTc-HP在膿汁中之較大積聚作用（0.188 土 0.034%I.D./g)(和 11JI n— WBC^ s (0 . 035±0 . 008 %I .D./g)比較之下）是 99mTc - HP 之 T/B 比值較高的主因。經濟部中央標準局員工消費合作社印製討論：此一實例證明99mT c -標記之趨化性肽對兔子中之細菌感染的照影優於mi η — WBC/ s 。在感染肌肉及膿汁中之99mT c —標記之趨化性肽（％ I . D · / g )大於n— WBC > s。此外，在所有照影時間下，99mT c — HP之標的—對-背景比值較大。注射後6 本紙珉尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x297公慶） -109 - 472143 Α7 Β7 五、發明説明（107 ) 小時，9 9 m T c - Η P之T / B比值等於注射後1 8小時之"1】n— WBC ' s ，由此暗示99mT c —標記之趨化性肽可提供感染照影之迅速變化。由於正常肌肉積聚作用之差異，99mTc— HP之優於mi n— WBC 's主要係由於感染位置上之99raT c - Η Ρ的濃度較高。現在已完全說明本發明之後，熟悉此藝之士了解可在相同參數，濃度及條件之不偏離本發明精神與範圍且無不當實驗之廣泛範圍下進行本發明。雖然本發明已就其特定體系說明，但吾人了解其可能作進一步的改良。本案期望涵括本發明之任何變化，用途或改編（原則上根據本發明之原理）且包括在本發明所屬技藝中之已知或傳統實施內且可使用後文所附申請專利範圍中所示之前文基本特性的偏離本揭示內容者。 ----------^-------tr-------0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 83. 3. 10,000 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -110

Claims

472149 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍附件（A ):; 第84103229號專利申請_ 中文申請專利範圍修正; 民國9 0年1 1月修正 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 . 一種可偵測之經標記趨化性肽： X-Y-Leu-Phe - (Z]n- [KJ -M1 其中： X係爲胺基保護基，其係選自胺基甲酸酯，甲醯胺，硫代甲醯胺，脲，硫脲及其對應之氰基胍衍生物，磺醯胺及磷醯胺， Y係選自Nf j? e ，M e t或P h e之胺基酸殘基； Z係爲間.子序列，其係選自C α s脂族二胺，R 6及其混合物其中R β係一個或多個相同或不同之胺基酸殘基 » η爲0或J·，且〔Κ〕一Μ 1係爲一標記或連接取代基，其中·’ 經濟部智慧財產局負工消費合作社印製 Κ爲中間:官能基胼基菸鹼醯胺（HYNIC)，且 Μ 1爲可:偵測之標記；其中該趨北性肽當投服至動物體內時本質上係積聚於感染或發炎部也，且本質上係不會積聚於未感染或發炎之部位如申請專利範圍第1項之可偵測之經標記趨化性肽本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 472143 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其中：丨 X係爲胺|基保護基，其係選自胺基甲酸酯，甲醯胺，硫代 ί (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 甲醯胺，i脲，硫脲及其對應之氰基胍衍生物，磺醯胺及磷醯胺， Y係〇 II —NH—·CH—C— 其中 R 1 係苄:基，Ci-5烷基，或—CH2-CH2— s — ch3 I ) 2 係間ί隔子序列，其係選自C i _ β脂族二胺，R β及其混合物’其i中Ra係一個或多個相同或不同之胺基酸殘基， η 爲0丨或1 ，且〔Κ〕— ΙΜ1爲一標記或連接取代基，其中：經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製 Κ爲中間:官能基肼基菸鹼醯胺（HYNIC)，且 Μ 1爲可i偵測之標記；其中該趨丨化性肽當投服至動物體內時本質上係積聚於感染或發炎部涖，且本質上係不會積聚於未感染或發炎之部位〇 3 .;如申請專利範圍第1或2項之肽，其中 X係爲 R 本紙張尺度適用中國國家；^準（CNS ) A4规格（210X297公釐） . 丨 -2 - 472143 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其中R 3係選自氫嫌基 C 炔基 C 基 .£5院氧基，芳院氧基，諸如爷氧基，即Φ — CH2_0 及胺羞，諸如一 N ( H ) R 5，其中R 5係選自氫，烷環烷基及芳基，且R4係硫屬。 I 4 .:如申請專利範圍第3項之肽，其中係氧或硫 • |如申請專利範圍第2項之肽，其中R :係一 C Η C Η 2 - S - C Η 6 .如申請專利範圍第5項之肽 7 ·:如申請專利範圍第2項之肽喃。 8 .如申請專利範圍第6項之肽係以二丙;基甘胺酸取代。其中Y係Μ _ e t 。其中R 1係四氫晴其中該亮胺酸殘基 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9 ·;如申請專|利範圍第6項之肽，其中該亮胺酸殘基係以1 -丨胺基環己烷羧酸取代。 1 0;·如申請專利範圍第6項之肽，其中該苯丙氣酸殘基係以：Z -脫氫苯丙氨酸取代。 1如申請專利範圍第6項之肽，其中該苯丙氨酸殘基係以：2 -胺基品滿酮-2 -竣酸取代。 1 2卜如申請專利範圍第6項之肽，其中声苯丙氨酸殘基係以|苯胺基甘胺酸取代。 ^ 1 3丨.如申請專利範圍第1項之肽，其中〇爲1 ，z gR6 ’Ml«多個相_不同之胺基酸殘基私紙張尺度適用中國國家_準（CNS) A4規格（210x297公着） 472149 A8 B8 ! C8 _____:_ D8 夂、申請專利範圍 1 4| •如申請專利範圍第1 3項之肽，其中R0中之一個胺基!酸殘基係選自正亮胺酸，酪胺酸，門冬胺酸，離胺酸，亮胺酸，及苯·丙氨酸。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 5:.如申請專利範圍第1 3項之肽，其中中之二個或多:個相同或不同之胺基酸殘基係個別選自正亮胺酸 ’酪胺酸| ’門冬胺酸’離胺酸，亮胺酸，及苯丙氨酸。 1 6厂如申請專利範圍第1項之趨化性肽，其中該可偵測之經|標記趨化性肽係選自 I … 異丙基脲:-M. e t — Le u. - Phe — Ly s — SHNH -B 〇 C，異两基脲ί—M e. t.— L e u — P h e —正—丙基二胺 As p — SHNH HBr ， ! 異丙基脲—Met - Leu — Phe — Lys — a。 I O p ~· SHNH： HBr> 異两基脲丨一 Me t_._— L e u — Ph e — Ly s — HBr > :¾ I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製異两基腺I一 Me t — L e u — P h e -丙院二胺〜 SHNH； HBr» 1 7、如申請專利範圍第1項之肽，其中M 1 A + ： 51有放射活性同I位素。 i 1 8j.如申請專利範圍第1 7項之肽，其中Μ , I 卞-Μ 係 111 I η 珠 99m T c。 1 9 :.如申請專利範圍第1項之肽，其中& 1 < 丨包含_ 磁性同位_或可藉由正子射出局部X -射線檢法（丨 ' v p E τ

472149 ABCD 七、申請專利範圍 )照相之丨化合物。 2 0卜如申請專利範團第1 7項之肽，其中投服係非經腸道的：。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本筲) 2 1卜如申請專利範圍第1 9項之肽，其中投服係非經腸道的I。 2 2 : ·如申請專利範圍第2 0項之肽’其中非經腸道投服係包卜括經真皮內，皮下，肌內，腹膜內，或靜脈內注射。： 2 3|.如申請專利範圍第2 1項之肽，其中非經腸道投服係包i括經真皮內，皮下，肌內，腹膜內，或靜脈內注射。丨 2 4|.如申請專利範圍第2 2項之肽.，其中投服係藉由漸次灌进。 2 5 ·如申請專利範圍第2 3項之肽，其中投服係藉由漸次灌丨注》 2 6匕如申請專利範圍第2 4項之肽，其中.漸次灌注係藉由利1用蠕動方式的靜脈內途徑。經濟部智慧財產局i工消費合作社印製 2 7'如申請專利範圍第2 5項之肽，其中漸次灌注係藉由利;用蠕動方式的靜脈內途徑。 2 8丨.如申請專利範圍第1 8項之肽，其中動物是指人類。 2 9、如申請專利範圍第1項之肽，其中M1包括放射活性同I位素。 3 〇i.如申請專利範圍第1項之肽，其中該放射活本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210 X 297公釐）丨 -5 - 472149 A8 B8 , C8 , D8 ___' 六、申請專利範圍性同位素|是1 11 I η或99mT c。 3 li.如申請專利範圍第1項之肽’其中Ml包含順磁性同位崖或可藉由正子射出局部X —射線檢法（P E T (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) )照相之化合物。 3 2 .如申請專利範圍第1項之肽’其中 K — Μ 1額外地包含L ’其中L係爲連接至Μ 1之錨狀配位基（^ancillary ligand)。 3 3 .如申請專利範圍第3 2項之肽1其中錨狀配位基包含葡:基庚酸酯，麥黃酮（tricine) ’或其他肽單元〇 3 4…如申請專利範圍第3 3項之肽’其中該其他肽單元保爲1 X — Y:- Leu-Phe -〔Ζ〕„-〔Κ〕“-Μ1 其中〔Κ ;〕y — Μ 1係爲一標記或連接取代基，且其中Κ 爲Η Υ Ν , I C ，y爲Γ，且Μ 1爲診斷上可偵測之標記。 3 5 . —種趨化性肽經濟部智慧財產局Λ工消費合作社印製 X:- Y— Leu-Phe —〔Ζ〕η— Κ 其中：丨 X係爲胺基保護基，其係選自胺基甲酸酯，甲醯胺，硫代甲醯胺，脲，硫脲及其對應之氰基胍衍生物，磺醯胺及磷醯胺，該保護基具有結構 ; R 3- C = R 4 其中R 3係選自氫，C ι_β烷基，C 2_β烯基，c 2-β炔基，本紙張尺度適用中國國家操準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 472149 A8 B8 C8 D8 申請專利韓圍 Ci-esfeT：氧基’芳院氧基’諸如1氧基，即Φ — CH2 - 0 —，及胺基’諸如—N ( H ) R 5，其中r s係選自氫，烷基，環烷基及芳基，且R 1 2係氧或硫， Υ 係 Me:t ，Phe 或 Nj?e ， Z係爲間隔子序列，其係選自C i _ e脂族二胺，R 6及其混合物’其中R β係一個或多個相同或不同之胺基酸殘基 > η爲0或1 ， Κ係爲連接取代基，其中：. Κ係中間官能基肼基菸鹼醯胺（Η Υ Ν I C )，其中該趨北性肽當投服至動物體內時本質上係積聚於感染或發炎部涖’且本質上係不會積聚於未感染或發炎之部位 ----------------1T------0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本貢) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3 7丨·如申請專利範圍第3 6項之肽，其中該甲硫胺酸殘基係i以4 一胺基四氫卩塞喃—4 —竣酸取代 3 8 . 如串請專利範圍第3 6 項之肽 1其中該亮胺酸殘基係以二丙基甘胺酸取代〇 3 9 . 如串請專利範圍第3 6 項之肽， 1其中該亮胺酸殘基係以1 — 胺基環己院羧酸取代〇 4 0 ；. 如串請專利範圍第3 6 項之肽，其中. 該苯丙氣酸殘基係以 Z — 脫氫苯丙氣酸取代〇 4 1 ;. 如串請專利範圍第3 6 項之肽，其中該苯丙氨私紙張尺度適用中國國家;^準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 7 - 1 6 i .如申請專利範圍第3 5項之肽，其中γ係 2 Μ 47214^ Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍酸殘基係以2 -胺基喆滿酮-2 -羧酸取代。 4 2, •如申請專利範圍第3 6項之肽，其中該苯丙氨酸韙基係:以苯胺基甘胺酸取代。. 4 3 : ·如申睛專利範圍第3 5項之肽，其中n爲丄且 Z爲R β卜 4 4卜如申請專利範圍第3 5項之肽，其中11爲1， Ζ爲R6:’且尺6含有一個或多個相同或不同之胺基酸殘 4 5 ·如申請專利範圍第4 4 —個胺基酸殘基係選自正亮胺酸，胺酸，亮胺酸，及苯丙氨酸。經濟部智慈財雇^Μ工消贫合作社印狄項之肽，其中R严中之酪胺酸，門冬胺酸，離項之肽，其中R 6中之基係個別選自正亮胺酸胺酸，及苯丙氨酸。. 項之肽，其中Κ額外地狀配位基。項之肽，其中該錨狀配或其他肽單元。項之肽，其中該其他肽 4 6 :.如申請專利範圍第4 4 二個或多個相同或不同之胺基酸殘，酪胺酸，門冬胺酸，離胺酸，亮 4 7丨.如申請專利範圍第4 6 包含L…其中L係爲連接至Κ之錨 4 8丨·如申請專利範圍第4 7 位基係包括葡基庚酸酯，麥黃酮， 4 9 .如申請專利範圍第4 8 單元係爲 Κ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) X：-Y-Leu-Phe - ( z 其中，Κ係連接取代基，且其中κ爲HYN I C » 5 Ο ·如申請專利範圍第3 5項之趨化性肽，其中Κ 額外地包i含-Μ 1 ，其中Μ 1係爲診斷上可偵測之標記。本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -8 - 4?2143 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 5 1 : ·如申請專利範圍第5 0項之趨化性肽’其中 Μ1 係 99?Tc 或 “Μη。 5 2 :.如申請專利範圍第5 0項之肽，其中.K 一 Μ 1 額外地包含L，其中L係爲連接至Μ1之錨狀配位基。 5 3…如申請專利範圍第5 2項之肽，其中該錨狀配位基係包含葡基庚酸酯，麥黃酮或其他肽單元。 5 4…如申請專利範圍第5 3項之肽，其中該其他肽單元係爲： X-Y-Leu-Phe — 〔Ζ〕其中，〔Κ〕ν — Μ 1係爲一標記或連接取代基，且其中 Κ爲Η Υ : Ν I C，.]>爲1 ，且Μ 1爲診斷上可偵測之標記 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本萸) Μ 1 〔K〕經濟部智慧財產局员工消費合作社印製 5 或發炎含量之接受之 5 或發炎含量之接受之 5 或發炎含量之可接受 5 : · —種用於診斷或治療上以偵測或治療感染及/ 診斷上或治療上有效部如位之藥學組成物其係包含申請專利範圍第1項之趨化性肽，及一藥學上可載體種用於診斷或治療上以其係包含項之趨化性肽，及一藥學上可部:位之藥學組成物，如申請專利範圍第2 載體。 —種用於診斷或部1位之藥學組成物，如I申請專利範圍第3 之:載體。偵測或治療感染及/ 診斷上或治療上有效治療上以其係包含 7項之趨化性肽，及一藥學上偵測或治療感染及/ 診斷上或治療上有效本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（ 210X297公釐） 472149 Asp Η B r ， A8 B8 C8 D8 申請專利範圍 5 8 :.—種趨化性肽，其係選自 i — BO:C — L —甲硫胺醯基（亞® ) — L — L e u — L -Phe丨-L -離醯胺， i —BO:C — L -正亮胺醯基—L — L e u — L — Phe —L 一離:醯胺，異丙基脲―Me t— Leu — Phe — Lys-SHNH -B 0 C : * 異丙基脲—Me t — L e u - P h e -正—丙基二胺— S Η N Η 異丙基腺:—Me jt—Leu — Phe — Lys—Asp — S Η N Η; Η B r，異丙基腮一 Me t — L e u — Ph e — Ly s — SHNH Η B r (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 異丙基腮M e t — L e u P h e —丙烷二胺經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 P h e — L e u S Η N Η： Η B r N —正一:丁基脲—Phe — Le u — Phe — Le u P h e ' N —異丙.基脲—Ph e— L e u — Ph e — L e u — Phe — COOH，及 N —肉桂.酸基一 P h e — L e u Phe，. 其中該趨北性肽係以可偵測之標記物加以標記，且其中該趨化_性K當投服至動物體內時本質上係積聚_於感染或發炎部位，且本質上係不會積聚於未感染或發炎之部位私紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 10 472149 Α8 Β8 C8 D8 經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製六、申請專利範圍〇 5 9 .如申請專利範圍第5 8項之肽，其中該可偵測之標記物係爲放射活性同位素。 6 0 ·如申請專利範圍第5 9項之肽，其中該放射活性同位素係爲mi η或eemTc。 6 1 .如申請專利範圍第5 8項之肽，其中該可偵測之標記物係爲順磁性同位素或可藉由正子射出局部χ _射線檢法（Ρ Ε Τ )照相之化合物。 6 2 · —種用於診斷或治療上以偵測或治療感染及/ 或發炎部位之藥學組成物，其係包含診斷上或治療上有效含量之如申請專利範圍第5 8項之肽，及一藥學上可接受之載體。： 6 3 | —種用於診斷或治療以偵測或治療感染及/或發炎部位之藥學組诚物’其係包含診斷上或治療·上有.效含量之組成物，該組成物係包含趨化性肽：X - Υ- Leu-Phe -〔Ζ〕η~κ -〔M2〕w 其中： X係爲不丨同於N -甲醯基或t — B 0 C之胺基保護基，其係選自胺_甲酸酯，甲醯胺，硫代甲醯胺，脲，硫脲及其對應之氰|基胍衍生物，磺醯胺及磷醯胺，該保護基具有結構 R 3 — C = R 4 1 其中R 3係選自氫，C卜β烷基’ c 2_e烯基，c 2_6炔基，本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210 X 297公鼇] ~~ ~~ ' ----------I —------訂------.# (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 11 472149 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 c he烷氧基，芳烷氧基，諸如笮氧基，即Φ — C Η2— 0 —，及胺基，諸如一 N ( H ) R 5，其中R 5係選自氫，烷基，環烷基及芳基，且R4係氧或硫， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Y係爲選:§Nj? e ’ Me t或P h e之胺基酸殘基； Z係爲間;隔子序列’其係選自C i - 6脂族二胺，R β及其混合物，其中R 0係一個或多個相同或不同之胺基酸殘基 > η爲0或1 ， Κ爲中間官能基胼基菸鹼醯胺（HYNIC)， Μ 2係爲診斷上或治療上之放射性同位素，且 «爲0或1 : 其中該趨化性肽當投服至動物體內時本質上係積聚於感染或發炎部位，且本質上係不會積聚於未感染或發炎之部位〇 6 4 ·如申請專利範圍第6 3項之組成物，其中μ 2 係選自 0 9 m T c - 1 2 3 I > 1 2 5 I .ISM . θ 7 R u . 6 a G a ，8 9 Z r - 72 A s ，9 0 Y，8 7 C u ，2 0 1 T 1 ，2 1 ^ b i > 2 1 1 A t，2 1 2 P b，47 S c，1 1 1 I n 及 1O0P d。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6 5 ·如申請專利範圍第6 3項之組成物，其中n爲 1且Z爲R 8。 6 6 !.如申請專利範圍第6 5項之組成物，其中R β 中之一個胺基酸殘基係個別選自正亮胺酸，酪胺酸，門冬胺酸，離胺酸，亮胺酸，及苯丙氨酸。 6 7 ·如申請專利範圍第6 5項之組成物，其中R β 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X297公釐） 12 - 472149 ABCD 六、申請專利範圍中之二個或多個相同或不同之胺基酸殘基係個別選自正亮胺酸，酪，胺酸，門冬胺酸，離胺酸，亮胺酸，及苯丙氨酸〇 6 8 .如申請專利範圍第6 3至6 7項中任一項之組成物，其係適宜非經腸投藥。 ----------1------ΐτ------'0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 13