FI80801C - Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning - Google Patents

Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning Download PDF

Info

Publication number
FI80801C
FI80801C FI870122A FI870122A FI80801C FI 80801 C FI80801 C FI 80801C FI 870122 A FI870122 A FI 870122A FI 870122 A FI870122 A FI 870122A FI 80801 C FI80801 C FI 80801C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
ett
fragment
och
conjugate
antibody
Prior art date
Application number
FI870122A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI870122A0 (fi
FI80801B (fi
FI870122A (fi
Inventor
Pirkko Vihko
Marja Soedervall
Reijo Vihko
Original Assignee
Innofarm Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Innofarm Oy filed Critical Innofarm Oy
Priority to FI870122A priority Critical patent/FI80801C/fi
Publication of FI870122A0 publication Critical patent/FI870122A0/fi
Priority to PCT/FI1987/000163 priority patent/WO1988005537A1/en
Publication of FI870122A publication Critical patent/FI870122A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI80801B publication Critical patent/FI80801B/fi
Publication of FI80801C publication Critical patent/FI80801C/fi

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

80801
Monoklonaalisen vasta-aineen tai sen fragmentin ja kela-toivan aineen konjugaatti, sen valmistus ja käyttö Tämä keksintö koskee fluorisoivalla aineella merkattua monoklonaalisen vasta-aineen tai sen fragmentin ja kela-toivan aineen konjugaattia in vitro-diagnostiikkaa varten.
Immunologiset menetelmät ovat tulleet standardimenetelmiksi kliinisessä kemiassa, erikoisesti määritettäessä biologisesti aktiivisia yhdisteitä, joiden pitoisuudet ovat alhaisia. Radio-immunoassayt ovat eniten käytettyjä määritysmenetelmiä. Radioaktiivisille leimoille on etsitty vaihtoehtoja niiden terveydellisen haitan ja useissa tapauksissa lyhyen säilyvyysajan vuoksi. EP-hakemukset 0184899 ja 0186947 koskevat paramagneettisia varjoaineita in vivo-diagnostisia, esim. NMR- menetelmiä varten, joka aine erään keksinnön suoritusmuodon mukaan voi olla kela-toivan aineen kautta polymeeriseen tai polymeroituun hiilihydraattiin tai polymeroituun sokerialkoholiin tai sen johdannaiseen sidottu paramagneettinen metalli. Eräs vaihtoehto radioaktiivisille leimoille on fluorisoiva leima. Eräät lantanidi-ionit, erikoisesti Eu3+ ja Tb3+, muodostavat voimakkaasti fluorisoivia kelaatteja sopivien . . orgaanisten monihampaisten ligandien esim. etyleenidiami- notetraetikkahapon (EDTA) ja dietyleenitriaminopentaetik-kahapon (DTPA) kanssa.
Patenttijulkaisussa WO 84/03698 on kuvattu Eu3+:aa kela-toivia DTPA-johdannaisia, joita voidaan liittää vasta-aineisiin in vitro diagnostiikkaa varten. Kelatoivat yhdisteet, esim. N1- ja N2-(p-isotiosyanatobentsyyliJdietylee-nitriamiinitetraetikkahappo, syntetisoidaan työläällä ne-. . livaiheisella menetelmällä, jossa joudutaan käyttämään työturvallisuuden kannalta ärsyttäviä ja myrkyllisiä rea- 2 80801 gensseja (bromietikkahappo ja tiofosgeeni). Synteesin toisessa vaiheessa syntyy isomeeriseos. Isomeerit erotetaan toisistaan HPLCrllä ja synteesisarjaa jatketaan puhtailla isomeereillä. Eu3+ kelatoidaan synteesisarjan kolmanteen vaiheeseen (I Hemmilä et ai., Anal. Biochem. 197 (1984) 335), sekin monivaiheisesti.
DTTA:n isosyanaattijohdannaisen Eu3+-kelaatin annetaan reagoida vasta-aineen kanssa. Reaktio on hidas (yli yön, 4°C) ja konjugaatioaste on huono, noin 10 %, mistä johtuen reagenssia on käytettävä runsaasti ylimäärin (kelaat-ti/vasta-aine = 60:1). Tästä syystä sitoutumaton kelaatti on poistettava geelisuodatuksella. Tällä suhteella konju-gaatti sisältää 7 Eu3+/lgG.
US-patentti 4,454,106 koskee DTPA:n liittämistä vasta-aineeseen seka-anhydridimenetelmällä ja saadun konjugaatin leimaamista mm. fluorisoivalla metallilla, esim. Eu3+. Patentissa kuvatulla menetelmällä saadaan n. 1,5 DTPA/ IgG. Tämä sitoutumissuhde on saatu testaamalla H^In-• leimalla. Patentissa ei ole kuitenkaan esimerkkiä Eu3+:n : käytöstä leimana. Eu3+-leimauksesta ei ole myöskään kir- ; jallisuudessa esimerkkiä DTPA-anhydridien kohdalla, joten leimausta ei voida kuvitella suoritetun jollakin aikai-’ semmin kuvatulla tavalla. Lisäksi esim. TR-FIA:n herk- . . kyyttä ei saada vielä riittäväksi suhteella 1,5 Eu3+/lgG, vaan within-assay ja between-assay variaatiot ovat suuret .
DTPA:ta on liitetty proteiineihin myös käyttäen DTPA:n i · 3 80801 syklistä anhydridiä (cDTPAA) (I), jonka kaava on 0 0 0 yH-CH2 ch28oh O N-CH2Ch2-n-CH2CH2-N O (i) C-CH^ \h,-/
H S
(Hnatowich et ai., Int. J. Appi. Radiat. Isot. 33 (1982) 327). US-julkaisu 4,479,930 (Hnatowich) koskee disyklisen anhydridin käyttöä kelatoivana aineena radioaktiivista metallia varten. Tarkoituksena on aikaansaada stabiileja radioaktiivisesti leimattuja biologisia molekyylejä in vivo-analyysejä varten. cDTPAA:n käytöllä on monia etuja. Se on helposti yhdellä vaiheella syntetisoitavissa oleva aine. Sitä on saatavissa myös kaupallisesti (Sigma, Aldrich). Se on yksiselitteinen kuivissa olosuhteissa stabiili aine toisin kuin seka-anhydridi (US-pat. 4,454,106), joka on valmistettava aina juuri ennen käyttöä. Menetelmän toistettavuus on epästabiilisuuden takia huono, ja syntyneelle anhydridille ei ole luotettavaa analyysimenetelmää.
Toisaalta cDTPAA on niukkaliukoinen yhdiste. Hnatowich on käyttänyt pienten cDTPAA-määrien annostelussa kloroformi-suspensiota. Epähomogeenisesta seoksesta annostelu ei ole kovin tarkkaa tällä menetelmällä.
Tämän keksinnön mukaiselle konjugaatille on ominaista, että kelatoiva aine on mono- tai bisyklinen DTPA.
Time-resolved fluoroimmunoassay:ssa (TR-FIA) käytetään hyväksi eroa spesifisen signaalin ja ei-spesifisen taustan fluoresenssin elinaikojen välillä, jolloin signaali-. . kohinasuhde paranee. Melkein kaikissa julkaistuissa mene telmissä käytetään Eu3+ leimattua vasta-ainetta, josta 4 80801 sitoutunut Eu3+ kvantitoidaan dissosiatiivisen fluoresenssin kehittymisen jälkeen. Wallac-LKB on patentoinut DELFIA-menetelmän (Dissociative Eu Fluorescence Enhancement FIA (EP 64484).
Tämä keksintö yksinkertaistaa patentissa WO 84/03698 kuvattua menetelmää, jossa usealla synteesivaiheella saatu Eu3+-DTTA-kelaatti liitetään vasta-aineeseen 12 h:n reak-tioajalla +4°C:ssa. Tässä keksinnössä proteiinista muodostetaan ensin DTPA-konjugaatti mono- tai bisyklisellä anhydridillä. Bisyklinen anhydridi on joko kaupallinen tuote tai valmistettu Eckelmanin mukaan (Eckelman et ai., J. Pharm. Sei. 64 (1975) 704). Monosyklinen anhydridi on valmistettu Halpernin mukaan (Radioimmunoimaging and Ra-dioimmunotherapy, Ed. S W Burchiel & B A Rhodes, Elsevier 1983, s. 198-9). Tyypillisesti derivaattaa tehtäessä mono-tai bisyklinen anhydridi liuotetaan kuivaan DMSOihon, toisin kuin Hnatowich, jolloin täydellisen liukenemisen seurauksena pienien määrien pipetointitarkkuus on hyvä. Tästä homogeenisesta liuoksesta pipetoidaan sopiva määrä vasta-aineen bikarbonaattiliuokseen. Reaktioaika on l h huoneenlämpötilassa. Näin saatua vasta-aineen DTPA-deri-vaattaa voidaan käyttää erilaisiin diagnostisiin tarkoi- * . tuksiin in vitro ja in vivo.
. TR-FIA:ssa Eu3+-kelaatin on oltava riittävän stabiili mutta helposti dissosioituva happamissa olosuhteissa. Mitä useampihampainen kompleksinmuodostaja on, sen stabiilimman kompleksin se muodostaa. Tällaisista komplekseista dissosioituminen on myös hidasta. On kuitenkin havaittu (I Hemmilä, Lanthanides as Probes for Time-resolved Fluo-rometric Immunoassays, Thesis 1986), että neljä kelatoi-vaa happoryhmää sisältävästä epäsymmetrisestä N'-bentsyy-li-DTTA:sta Eu3+ dissosioituu nopeammin (1 min) kuin vastaavasta symmetrisestä N2-bentsyyli-DTTA:sta (20 min).
li 5 80801 Käytettäessä DTPA:n syklistä anhydridiä vasta-aineen DTPA-derivaatan valmistamisessa syntyy epäsymmetrinen, neljä kelatoivaa happoryhmää sisältävä konjugaatti (II), jonka rakenne on vastaava kuin N'-bentsyyli-DTTA-konju-gaatilla (III). Vain DTTA:n proteiiniin liittävä ryhmä ja sidos ovat erilaiset
HOOC
j) ^H2 CHjCOOH yCHjCOOH
Prot-NH-C-Nft/OVcH2“N-CH2CH2-N-CH2CH2N (III) ^—' CH2cooh
HOOC
p ch2 ch2cooh ch2cooh Prot-NH-C-H-CH2CH2Hl-CH2CH2“1i ch2cooh (II) Näin ollen syklisellä anhydridillä valmistettu vasta-aineen DTPA-derivaatta on verrattavissa N-bentsyyli-DTTA-derivaattaan käytettäväksi TR-FIA:aan. Syklisellä anhydridillä työskentely on yksinkertaisempaa ja hyvin paljon nopeampaa. Kaupallisen tai yhdellä helpolla synteesivai-heella valmistetun DTPA-anhydridin annetaan reagoida vasta-aineen kanssa 1 h huoneenlämmössä.
. . Ylimäärä DTPA:ta poistetaan dialysoimalla samalla kun puskuri vaihdetaan leimaukseen sopivaksi. Kelatoiva aine lisätään kaupallisesti edullisesti saatavana kloridina. EuCl3:ta ei tarvitse käyttää ylimäärin vaan testattua sopivaa määrää, joten geelisuodatusta ei tarvitse suorittaa. Sen sijaan patenttijulkaisussa WO 84/03698 kuvattu reagenssi valmistetaan työläästi neljällä synteesivai-heella. Synteesissä syntyy kaksi isomeeriä, joista vain toinen muodostaa nopeasti dissosioituvan Eu-kelaatin. Tästä seuraa, että käyttökelpoisen kelaatin saanto isomeerien erotuksen jälkeen on huono. Lisäksi, koska konju- β 80801 gaatioaste on huono, työläästi syntetisoitavan reagenssin kulutus on suuri. Lisäksi, koska kelatoitava metalli liitetään tässä keksinnössä viimeisessä vaiheessa, samaa vasta-aineen DTPA-konjugaattia voidaan käyttää eri diagnostisiin tarkoituksiin, sekä in vitro että in vivo valitsemalla metalli kuhunkin tarkoitukseen sopivaksi.
Johdannaisten teossa on käytetty PAP:n (Prostatic Acid Phosphatase) monoklonaalisen vasta-aineen puhdistettua F(ab')2-fragmenttia ja puhdistettua kokonaista vasta-ainetta sekä SHBG:n (Sex Hormone Binding Globulin) puhdistettua monoklonaalista vasta-ainetta. Bisyklinen DTPA on ollut Sigman valmistama. Mono cDTPA:n olemme valmistaneet itse. Dimetyylisulfoksidi (DMSO) on SNEA:n tai Aldrichrn valmistamaa.
Esimerkki 1 DTPA:n liittäminen monoklonaaliseen vasta-aineeseen 1) Proteiinin käsittely
Puhdistettu monoklonaalinen PAP-vasta-aine käytetään sellaisenaan tai pilkotaan pepsiinillä F(ab')2:ksi, joka puhdistetaan käyttäen proteiini-A-Sepharose-4B-affini-teetti-kromatografiaa. Saatu F(ab')2-fraktio (0,02 M PBS-puskurissa, pH 8,0) tai kokonainen monoklonaalinen vasta-aine (IgG) konsentroidaan Amiconin konsentrointilaitteel-la ja dialysoidaan NaHCO3-puskuriin, pH 8,0. Dialysoitu näyte kylmäkuivataan ja pakastetaan. F(ab')2 liuotetaan veteen juuri ennen käyttöä siten, että proteiinikonsen-; traatioksi tulee 10 mg/ml ja NaHC03:n konsentraatioksi 0,1 M. SHBG-vasta-aine on käytetty kokonaisena (IgG).
li 7 80801 2) Derivaatan teko A. cDTPA/F(ab')2-derivaatta/lgG-derivaatta
Konjugaatioreaktiota varten cDTPAA liuotetaan kuivaan DMSO:iin, josta pipetoidaan haluttu määrä proteiiniliuok-seen. Liuosta sekoitetaan 30 s-1 min ja inkuboidaan huoneenlämmössä 1 tunti. Liuoksen pH tarkistetaan. Näyte dialysoidaan 0,1 M Na-sitraattipuskuriin, pH 5 vapaan DTPA:n poistamiseksi. Esim. cDTPA/F(ab')2/IgG = 5 tehtäessä cDTPA-DMSO-liuosta (17,85 mg/ml) pipetoidaan 5 /ui proteiiniliuokseen, jossa 5 mg F(ab')2 tai IgG/0,5 ml.
Lisättäessä DMSOra proteiiniliuokseen on otettava huomioon, ettei DMS0:n määrä ole yli 5 % proteiiniliuoksen tilavuudesta .
B. mono cDTPA/F(ab1)2-derivaatta/IgG-derivaatta
Tehdään vastaavasti kuin syklinen derivaatta. Mono cDTPAA lisätään DMSO-liuoksessa proteiiniliuokseen.
Esimerkki 2 PAP-vasta-aineen tai sen F(ab')2-fragmentin DTPA-konju-gaatin leimaus EuCl3:lla
Leimaus suoritettiin käyttäen 10 M Eu:ta suhteessa vasta-aine-DTPA-konjugaattiin. Kun leimausta suoritetaan patentissa WO 84/03698 kuvatulla Eu-DTPA-johdannaiskelaatilla, käytetään sitä 160 M ylimäärin suhteessa vasta-aineeseen.
EuCl3 (Fluka 46130) liuotettiin 0,1 M natriumsitraatti-puskuriin, pH 5-6, 2,75 mg EuCl3/ml, 15 min ennen käyttöä. vasta-aineen tai sen fragmentin DTPA-konjugaatti liuotettuna 0,1 M natriumsitraattipuskuriin (10 mg konju- s 80801 gaatti/ml, pH 5-6) sekoitettiin sopivaan määrään EuCl3-natriumsitraattiliuosta ja inkuboitiin 1 h huoneenlämpö-tilassa. Leimaantumis-% on 98.
Esimerkki 3 SHBG-vasta-aineen DTPA-konjugaatin leimaus EuCl3:lla
Vasta-aineen DTPA-johdannainen oli valmistettu käyttäen suhdetta DTPA/IgG = 20:1. EuCl3 (Fluka 46130) liuotettiin 0,1 M natriumsitraattipuskuriin pH:ssa 6. Leimaus suoritettiin käyttäen Eu:ta noin 10 M suhteessa IgG-DTPA-johdannaiseen huoneenlämpötilassa yhden tunnin ajan.
Esimerkki 4
Vertailun vuoksi leimattiin SHBG-vasta-aine patenttijulkaisussa WO 84/03698 kuvatulla Eu-kelaatilla. Tällöin käytettiin Eu-kelaattia 160 M ylimäärin suhteessa vasta-, . aineeseen. Muut leimausolosuhteet olivat: 50mM K2HP04, pH = 9,4, inkubaatio yli yön +4eC:ssa. Leimatun vasta-aineen erotus suoritettiin geelisuodatuksella ylimääräisen : kelaatin poistamiseksi.
Inkuboinnin jälkeen reaktioseos kaadettiin geelisuodatus-kolonniin (Sepharose 6B 1,5 cm x 30 cm, ylhäällä Sephadex 6-25, 1,5 cm x 5 cm). Eluointi suoritettiin käyttämällä 0,05 M Tris-HCl, 0,9 % NaCl, 0,1 % NaN3 (ph 7,75, 25°C) eluointipuskurina.
Fluoresenssi määritettiin siten, että otettiin 10 /ul:n näyte 200 /ul:aan Delfia Enhancement-liuosta. Ravistelun jälkeen mitattiin fluoresenssi Arcus fluorometrilla. Eu-; : pitoisuus laskettiin käyttämällä arvoa 0,2 pmol Eu = 106cps vertailuarvona.
9 80801
Vertailutulokset: Käytettäessä EuCL3-leimaa saatiin seuraavat määrä Eu-mo-lekyylejä kiinni vasta-aineisiin:
Eu-molekyylit/proteiinimolekyylit cDTPA/F(ab')2 (5:1) 1,9-2,0 CDTPA/F(ab')2 (10:1) 2,7 cDTPA/IgG (10:1) 2,4 cDTPA/IgG (20:1) 3,7 (esim. 3) CDTPA/IgG (50:1) 6,9 m-CDTPA/IgG (300:1) 11,0
Patenttijulkaisun WO 84/03698 esimerkissä leimattaessa 60 M ylimäärällä Eu-kelaattia saadaan 7 Eu-molekyyliä/IgG ja nostettaessa suhdetta 160-500 M ylimäärin Eu-kelaattia ei suhde nouse yli 10 Eu-molekyyliä/IgG. Suhteella 160 M Eu-kelaattia ylimäärin saatiin 9,3 Eu-molekyyliä yhteen vasta-ainemolekyyliin (esim. 4).
Esimerkkien 3 ja 4 leimat testattiin SHBG Delfia kit menetelmällä käyttäen suunnilleen samaa proteiinipitoisuutta molempien leimausten laimennuksessa. Tämä tarkoittaa lyhyesti sitä, että mikrotiitterilevyjen kaivot päällystettiin polyklonaalisilla anti-SHBG-vasta-aineilla. ver-tailutulokset ja leimaukset pipetoitiin kaivoihin ja in-kuboitiin, pestiin ja mitattiin Delfia Enhancement-liuos-ta käyttäen.
80801 SHBG-vertailuliuokset EuCl3-leimaus Eu-kelaatti-leimaus nmol/1 (esim. 3) cps (esim. 4), cps 0 3197 4281 6,25 43535 81940 12,5 77255 147983 25 146026 263334 50 238831 442793 100 389177 841566 200 787518 1579440 SHBGtn TR-FIA toimi samalla tavoin molemmilla leimauksilla ja niiden erotuskyky eri standardien suhteen oli yhtä hyvä.
Erään sovellutuksen mukaan keksintö koskee myös menetelmää kelatoivan aineen ja biologisen molekyylin välisen konjugaattiasteen määrittämiseksi. Konjugaattiasteella tarkoitetaan moolisuhdetta kelatoiva aine/biologinen molekyyli. Konjugaattiaste määritellään tavallisesti siten, että konjugaatin kelatoiviin ryhmiin liitetään jokin radioaktiivinen isotooppi. Tämä määritystapa on kuitenkin hankala ja epätarkka johtuen isotooppien lyhyestä puoliintumisajasta. Kun sen sijaan, kuten tässä keksinnössä, liitetään Eu:ta kelatoiviin ryhmiin ja mitataan fluoresenssi, voidaan konjugaattiaste määrittää hyvin tarkasti ja yksinkertaisesti.
li

Claims (6)

1. Fluorisoivalla aineella merkattu monoklonaalisen vasta-aineen tai sen fragmentin ja kelatoivan aineen konju-gaatti in vitro-diagnostiikkaa varten, tunnettu siitä, että kelatoiva aine on mono- tai bisyklinen DTPA.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen konjugaatti, tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine tai sen fragmentti on SHBG-antigeenin vasta-aine tai sen fragmentti .
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen konjugaatti, tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine tai sen fragmentti on PAP-antigeenin vasta-aine tai sen fragmentti.
4. Patenttivaatimusten 1-3 mukainen konjugaatti, tunnettu siitä että fluorisoiva aine on Eu.
5. Menetelmä patenttivaatimusten 1-4 mukaisen konjugaatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että biologinen molekyyli ja kelatoiva aine ensiksi liitetään yhteen, jonka jälkeen konjugaatin leimausta suoritetaan fluori-soivalla aineella.
6. In vitro-diagnostinen immunologinen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään patenttivaatimusten 1-4 mukaista konjugaattia analyytin antigeenin määrittämiseksi.
FI870122A 1987-01-14 1987-01-14 Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning FI80801C (fi)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI870122A FI80801C (fi) 1987-01-14 1987-01-14 Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning
PCT/FI1987/000163 WO1988005537A1 (en) 1987-01-14 1987-12-08 Conjugate of biological molecules and a chelating agent

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI870122A FI80801C (fi) 1987-01-14 1987-01-14 Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning
FI870122 1987-01-14

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI870122A0 FI870122A0 (fi) 1987-01-14
FI870122A FI870122A (fi) 1988-07-15
FI80801B FI80801B (fi) 1990-03-30
FI80801C true FI80801C (fi) 1990-07-10

Family

ID=8523765

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI870122A FI80801C (fi) 1987-01-14 1987-01-14 Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning

Country Status (2)

Country Link
FI (1) FI80801C (fi)
WO (1) WO1988005537A1 (fi)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5792444A (en) * 1989-05-09 1998-08-11 The General Hospital Corporation Labeled chemotactic peptides to image focal sites of infection or inflammation
EP0709100A1 (en) * 1994-09-30 1996-05-01 Nihon Medi-Physics Co., Ltd. Contrast agent, containing several detection groups per molecule

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4647447A (en) * 1981-07-24 1987-03-03 Schering Aktiengesellschaft Diagnostic media
US4479930A (en) * 1982-07-26 1984-10-30 Trustees Of The University Of Massachusetts Amines coupled wth dicyclic dianhydrides capable of being radiolabeled product
US4668503A (en) * 1982-07-26 1987-05-26 Trustees Of University Of Massachusetts Process for labeling amines with 99m Tc
NL194579C (nl) * 1983-01-21 2002-08-05 Schering Ag Diagnostisch middel.
SE465907B (sv) * 1984-11-01 1991-11-18 Nyegaard & Co As Diagnosticeringsmedel innehaallande en paramagnetisk metall
DD229595A1 (de) * 1984-12-14 1985-11-13 Adw Ddr Verfahren zur herstellung von mit chelatbildnern gekoppelten biomolekuelen
WO1987007955A1 (en) * 1986-06-17 1987-12-30 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Homogeneous fluoroassay methods employing fluorescent background rejection and water-soluble rare earth metal chelate fluorophores

Also Published As

Publication number Publication date
FI870122A0 (fi) 1987-01-14
WO1988005537A1 (en) 1988-07-28
FI80801B (fi) 1990-03-30
FI870122A (fi) 1988-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4808541A (en) Determination method utilizing reagents covalently labelled with essentially non-fluorescent lanthanide chelates in combination with time-resolved fluorescence spectroscopy and the reagents to be used in the method
Heirwegh et al. Recent advances in the separation and analysis of diazo-positive bile pigments
US4476229A (en) Substituted carboxyfluoresceins
Mukkala et al. The synthesis and use of activated N-benzyl derivatives of diethylenetriaminetetraacetic acids: alternative reagents for labeling of antibodies with metal ions
Bailey et al. Terbium chelate for use as a label in fluorescent immunoassays
US4082738A (en) Cyanocobalamin derivatives
JPS58757A (ja) 同位体を使用しない免疫検定を実施する方法、ラベルされた分析物とかかる検定に使用するキット
US4337339A (en) Process for preparation of folic acid derivatives
JPH02504640A (ja) 表面カップリング官能性を有するイットリウム、ランタニドおよびアクチニドの大環状錯体
JPH0137693B2 (fi)
CA1152490A (en) Beta-galactosyl-umbelliferone-labeled protein and polypeptide conjugates
CN105572095A (zh) 一种人血清白蛋白的检测试剂及定量检测方法
US20210395606A1 (en) Chromophoric structures for macrocyclic lanthanide chelates
CN101865917A (zh) 三碘甲腺原氨酸的检测试剂盒及其使用方法
JPH09504505A (ja) プテリン誘導体およびその製法と利用法
FI87022C (fi) Maerkta och maerkningsbara reagenser foer fluorometriska bestaemningar
Yang et al. Time-resolved fluorescence immunoassay with measurement of a europium chelate in solution: dissociation conditions and application for determination of cortisol
JP3713087B2 (ja) ハプテンのイムノアッセイおよびそれに使用可能なハプテントレーサー抗体複合体ならびにそれらの製造方法
EP0100543B1 (en) Method for quantitative analysis of low molecular weight components contained in protein-containing liquid sample
US6190923B1 (en) Diethylenetriamine-N,N′,N″-triacetic acid derivatives
FI80801C (fi) Konjugat av en monoklonal antikropp och anvaendning. eller ett fragment daerav och ett kelaterande aemne, dess framstaellning
US3983099A (en) Thyroxine-and triiodothyronine-tyrosine dipeptide derivatives
US11614445B2 (en) Background blockers for binding assays
CN102539761A (zh) 一种促甲状腺素定量检测试剂盒(时间分辨荧光免疫法)制备方法
US3891669A (en) Thiol-group detecting fluorescence reagents

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: INNOFARM OY