TW442471B - Novel benzamidines - Google Patents

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44247 1 A7 _____B：7 五、發明説明（1 ) 本發明係關於新穎¥脒、其製備及其作爲類胰蛋白酶絲 胺酸蛋白綠’特別是凝血酶及激肽原酶，競爭性抑制劑的 用途。本發明也關於含此化合物作爲活性成分的醫藥組合 物，及關於此化合物作爲凝血酶抑制劑、抗凝血劑及抗炎 劑之用途。 凝血酶屬絲胺酸蛋白酶類，於血液凝固的_聯_反應中 作爲終酶（terminal enzyme )具中心作用。内在的及外在的 一聯_凝血反應都會經由多個放大階段（amplifying sUges ) 導致凝血酶先質（prothrombin)生成凝血酶。纖維素原受凝 血酶催化裂解成纖維素，然後開始血液凝固及血小板凝 集’並因血小板因子3及凝血因子χιπ及大量高活性傳遞 質的結合，進而增強凝血酶的生成a 經濟部中央標率局貝工消費合作社印製 凝血酶的生成及作用是發展成白 '動脈及紅、靜脈血栓 的中心事實，所以可能是藥物作用的有效點。與肝素相. 反’凝血酶抑制劑是獨立的輔因子，能同時完全抑制游離 態的凝血酶的影響並抑制結合於血小板上的凝血酶。凝血 酶抑制劑在經皮經管腔冠狀惰脈成形術（PTCA )及鬆懈術 後能預防血栓栓塞的發生，並於體外循環（心肺機，血液 透析）中有抗凝血劑作用。一般也可用作血检的預防，例 如手術後使用。 現已知道，合成的精胺酸衍生物藉與蛋白酶凝血酶的活 性絲、胺酸殘基的交.互作用影響凝血酶的酶活性。以phe_ Pro-Arg爲基礎的肽，其中N-端的胺基酸爲右旋形式，現 已證明特別有益。據稱，D-Phe-Pro-Arg異丙基酯爲競爭性 -4 - 本紙張尺度適用中國國隶榇準（CNS ) A4規格（2ΐ〇χ297公釐） 442471 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 ft7 五、發明説明（2 ) 的凝血酶抑制劑（C. Mattson et al.，Folia Haematol, 109 (1983) 43-51)。 精胺酸於C端衍化成搭導致抑制效果的增強。所以，多 數的精胺酸醛能結合絲胺酸的"活性"羥基成爲半縮醛（EP 185390，479489，526877，542525 ; WO 93/15756， 93/18060)。 肽酮，氟化的烷基酮及_酯的抑制凝血酶活性，硼酸衍 生物，磷酸酯及α -酮羧醯胺的抑制凝血酶活性也可以此 絲胺酸的交互作用解釋（ΕΡ 118280，195212，362002， 364344 ， 410411 ， 471651 ， 589741 ， 293881 ， 503203 ， 504064，530167 ; W0 92/07869，94/08941)。 J. Oleksyszyn 等於 J. Med, Chem. 37 (1994) 226-231 所述的 4-甲脒基苯基甘胺酸膦酸二苯酯是不可逆轉的凝血酶抑制 劑，是不宜選用的其他絲胺酸蛋白酶。 DE 3 108 810，WO 93/1 1 152 及 ΕΡ 601 459 敘述胍基丁 胺，因之精胺酸衍生物不能與絲胺酸蛋白酶内的活性絲胺 酸交互作用。 WO 94/29336，EP 0 601 459 及 WO 95/23609 代表另一發 展，其中胍基丁胺由芳基脒殘基代替。 激肽原酶.（kininogenases )是絲胺酸蛋白酶，可由激肽原 肽釋出作用於血管的肽，稱作激肽（缓激肽，胰激肽，及 Met-Lys-緩激55肽）。激肽原是多功能蛋白質，見於凝血 及發炎反應。作爲抑制劑，激肽原酶保護細胞免於受半耽 胺酸蛋白酶的傷害（Miiller Esterl，FEBS Lett. 182 (1985) -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2丨〇父297公釐） (請先閱讀背面之注意事項t寫本頁) -裝· 訂 4 42 4 7 A7 B-7 五、發明説明（3 ) 310-314) ° 重要的激肽原酶是血漿激肽釋放酶，組織激肽釋放酶及 肥大細胞tryptase。 激肽，如緩激肽及胰激肽，是作用於血管的肽，影響多 種生物反應。在發炎過程中有重要作用。藉了增進血管的 滲透性，可導致血壓過低及水腫。此外，激肽也是很有效 的產生痛的自體有效物質（autacoids )，對氣喘、過敏性鼻 炎及關節炎的病理生理學的細胞遞質極爲重要（K.D. Bhoola, C.D. Figueroa, K. Worthy, Pharmacological Reviews M (1992) 1-80)。 不管發炎過程中的機轉，含循環血液中所有蛋白質系統 的液體由血管脱出β這意謂血漿液體之由血管脱出涉及於 多種疾病，如氣喘，鼻炎及炎性内科疾病β此外，過敏性 病變中還特別釋出肥大細胞tryptase (Salomonsson et al.， Am. Rev. Respir. Dis., 1992, 146. 1535-1542 )。 精胺酸氯甲基酮 H-(D)-Pro-Phe-Arg-CH2Cl 及 H-(D)-Phe-Phe-Arg-CH2-Cl被Kettner and Shaw説作是血裝激肽釋放酶 (Biochem. 11 (1978) 4778-4784 及 Meth· Enzym. Μ (1981) 826-842)。 經濟部中央橾準局負工消費合作社印製 苄脒及芊基胺的各種合成的衍生物現已被證明是血漿激 肽釋放酶抑制劑，苹脒有更強的抑制效果（F. Markward，S. Drawert, P. Walsmaim Biochemical Pharmacology 23. (1974) 2247-2256) 〇 PKSI-527, N-(反式-4-胺基甲基環己基羰基）-L-苯基胺基 -6 - 本紙張尺度適用中國国家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - .ΑΓ 4 4247 五、發明説明（4 A7 B7 丙酸-4-羧基曱基醯苯胺，也是有效的激肽原酶抑制劑 (Wanaka, Ohamoto et al., Thromb. Res., 57. (1990) 889-895)。 本發明係關於式I之化合物 H2 R4 R5

Rl—(Cfl2)m— C — (CH2)n — N — C—CO — N (CHa)! R3 R6 CCr CH2 I,

R

各<NH 經濟部中央標準局舅工消費合作社印裝 其中R 下： 1 m n R R1 R2 R3 R4 R5 R1 R2 ’ R3 ’ R4 ’ R5及R6，及1 ’ m與n之意義如 0或1， Ο，1 或2， Ο，1 或 2， Η或Ci.4"*燒基_， HOOC- ’ Ci_6·燒基-OOC-，宇基-OOC-，或 _〇jj， Η-，Cm-烷基-或 Ri-CCHsk-， H_或Ck烷基-，其可經-OH或-COOH取代， Η·，CN4-坑基-，HOOC-C^c伸燒基-， Cw烷基-，環烷基-(CR8R9)r-，（r = 0 或 i，Rs， R9=H-，環燒基-或Cm-貌基-)，其中環烷基内至 多4個CH2基可分別經CR10R" (R10=H-或Cl-4貌基 -’ 娱*基_)置換且/或環娱*基中與CR8R9鎖 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） 442 4 7 A7 E7 五、發明説明（5 ) 結之CH基可經烷基-)置換，且/或 環内一或二個C-C單鍵可經C=C雙鍵置換， R6 H-，Cw-烷基-或 R4及R5 共同羌-CH2-CH2-CH(R7)-，（R7=H-，苯基-或環已 基-) R2及R5共同是-CH2-CH2或-CH2-CH2-CH2-，其中一個氫原 子可經Ci-4-烷基-，苯基-或環己基-置換， 及其與生理上可耐受的酸形成的鹽》 以_NR4-C(R5R6；)-CO_代表的胺基酸較佳有（D)構形，3,4-脱氫脯胺酸及4,5-脱氫哌啶酸較佳是（L)構形。 較佳的式I化合物是這樣的化合物，其中 C讀先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. R2 i 訂 R1 — (GH2)ni ——C — (CH2)n — 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 R3 是 HOOC-(CH2)t- (t=l，2 或3)，（1100(：-(3112)2-(：11-，（110-CH2)2CH- » HOOC-CH2-CH(COOH)- » HOOC-CH(CH2-CH2-OH)-，HOOC-CHCC】.*-燒基-)，Cu-燒基-OOC-CH2-，苄 基-OOC-CH2-， R4 Η5 及是 I丨 --Ν - C - C0- R6 —8 " 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 442471 A7 B7 五、發明説明（6 )

Re Rf

Ra Rb

Rc NH —

Rh .，Rb=H，環己基或Ci-4-燒基，） ’心，Rd，Re，Rf，Rs，Rh=H-或 b 烷基-，其中此環之(：112-基 g·以是單-或二取代的），

Re Rf

Rd-^^— H9

I

NH -— CH — CO R1 ,(R1=苯基'或環己基0 rr

N -CH-CO

RD NH "~~ CH CO ' 經濟部中央梯準局貝工消費合作社印製 {Ri *=環戊基-，環庚基，卜金剛燒其 1-正伯基-，1-雙環[2.2.2]辛基， 新戊基-，三級丁基-，二異丙基 基-或1-(1，4_環己二烯·基-)) 此處此等結構單元較佳是右旋構形， 1 是0及 R 是 H-或 CH3-。 更佳的式I化合物是這樣的化合物，其中 R2 I . ,Rl ——（CH2)m — C ——(CH2)n 一

I H3 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X29*7公楚) 2 4 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製4 4 7 A7 B7 五、發明説明（7 是HOOC-(CH2)t- (t=l，2 或3)，（1100<：-(：112)2-(：11-，（110-CH2)2CH- » HOOC-CH2-CH(COOH)- » HOOC-CH(CH2-CH2-OH)-，HOOC-CHCCw 烷基）-，Cu-烷基-OOC-CH2·，苄基 -OOC-CH2- ’ 及是

Re Ri

R& Rb

Rh Re Rf Rd- m · 1 —CH 一 Ri

CH Rj

CH r5I I N C COI R6 ^Rc，Rd，Re，，nh=H-或 bu-烷基-，其中此環之CHj 可以是單-或二取代的）， co一 (R1=苯基-或環己基-) CO . (Rj =環戍基-’壤庚基’ 1·金剛故基-， 1-正葙基-，1-雙環[2.2.2]辛基-， 新戊基二級丁基-，二異丙基甲 基-或卜（1,4-環己二烯基-)) 10- 各紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） :442471 A7 B：7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 J. :w-l 五、發明説明（8 ) 此處此等結構單元較佳是右旋構形， 1 是1及 R 是 H-或 CH3-。 也佳的是具有下式的結構元素的化合物

R /4-λ κη CO—ΝΗ—CVi2—\ y~〈 νη2 其中1是0或1，R是Η或Cu-烷基，特別是CH3。 較佳的中間體是式II化合物 R2 R4 R5

~{CH2)n - N- C-CO

Kch2): R3 R6

CO II, R CH2

其中 R2 R1 ——(CH2)m — C — (CH2), R3 11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇Χ297公釐） 442 4 7 及是 ? is. -n 7 (Rc，R*1，Re , Rf , R8，Rh=H-或 Cu-烷基-，其中此環之CH2基 可以是單-或二取代的）， 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（9 ) 是HOOC-(CH2)t- (t=l，2 43)，（HOOOCH2)2-CH-，（HO- ch2)2ch-，hooc-ch2-ch(cooh)-，hooc-ch(ch2-ch2- OH)-，HOOC-CHCCu-烷基）-，Cm-烷基-OOC-CH2·，苄基-OOC-CH2-， R4 R5

N - C - CO R6

Re Rf R9 Ra

Rc 一 NH 一 A —C〇—, (Ra，0 = ，環己基-或。^ 烷基 _)

Rh

Re Rf Rd-^^-R9

NH — CH — CO Γτ

N —CH

Rj R1 c〇— , (Rl =苯基-或環己基-)

CH -CO (Rj =環戊基-，環庚基’卜金剛烷基-， 卜正：fl基-，卜雙環[2.2.2]辛基-， 新戊基-，三級丁基·，二異丙基曱 基-或1-(1，4·環己二烯基_)) -12 本紙張尺度逋用中國國家榇準（CNS M4规格（210X297公楚） 442471 A7 B7 ..¾. 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（10 ) 此處此等結構單元較佳是右旋構形， 1 是0或1及 R 是 Η -或 CH3-。 更佳的中間體是下式化合物 R Y— （CH2)1 R I /-U hi， CO—nh—ch2-^ y—CM 其中1及R之意義如申請專利範園第1項所述，Y是N 保護基，N-端保護的或未保護的胺基酸或Η-。 較佳的式III化合物是這樣的化合物，其中 Υ 是 Boc-，Boc-Cha-，H-Cha-，Boc-Chg-，H_Chg 或 Η， 1 是0或1，及R是H或CH3。 下列物質是特佳的： 1. HOOC-CH2-(D)-Cha-Pyr-NH-4-amb 2. HOOC-(CH2)2-(D)-Cha-Pyr-NH-4-amb 3. (HOOC-CH2)2CH-(D)-Cha-Pyr-NH-4-amb 4. (HO-CH2)2CH-(D)-Cha-Pyr-NH-4-amb 5. HOOC-CH2-CH(COOH)-(D)-Cha-Pyr-NH-4-amb 6. HOOC-CH2-(D)-Chg-Pyr-NH-4-amb 7. HOOC-CH2-(D)-(iv-Me)Cha-Pyr-NH-4-ainb 8. HOOC-CH2-(D,L)-(l-Me)Cha-Pyr-NH-4-amb 9. HOOC-CH2-(D,L)-(^ ,y5-Me2)Cha-Pyr-NH-4-amb 10. HOOC-CH2-(D，L)-(反式 4-Me)Cha-Pyr-NH-4-amb -13- (請先間讀Jbs:面之注意事項寫本頁) ^ 裝ΐτ^'>-------1. -^^1 1^1 1^1 Hi v^i - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 442471 A7 B7 五、發明説明（！1 ) 11. HOOC-CH2-(D，L)-環庚基丙胺酸-Pyr-NH-4-amb 12. 11000：-0：112-(1)，1〇-1-金剛烷基丙胺破-1^1'-1'«1-4-&11^ 13. HOOC-CH2-(D，L)-2-i 葙基甘胺酸-Pyr-NH-4-amb 14. HOOC-CH2-(D,L)-(3,3-Me2)Cha-Pyr-NH-4-amb 15. HOOC-CH2-(D)-三級丁基丙胺酸-Pyr-NH-4-amb 16. HOOC-CH2-(D，L)-(l，4-環己二烯-1-基）丙胺酸-Pyr-NH_ 4-amb 17. HOOC-CH2-(D)-Cha-Dep-NH-4-amb 18. HOOC-CH2-(D)-Chg-Dep-NH-4-amb 19. HOOC-CH2-(D,L)-Dch-Pyr-NH-4-amb 此處及實例所用縮窝爲： amb = 脉基爷基 Boc = 三級丁基氧基羰基 Cha = 環己基丙胺酸 Chea = :環庚基丙胺酸 Chg = 環己基甘胺酸 Dch = 二環己基丙胺酸 Dpa = 二苯基丙胺酸 Me = 曱基 Pyr = 3,4-脱氫脯胺酸 Dep = 4,5-旅症酸 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 在-NR4-CR5R6-CO-是環己丙胺酸殘基時各破原子是如下 之排列： 14 - 本紙張尺度適用中國國家椟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） v 4 4247 Α7 Β7 五、發明説明（12 )

C，

CO 經濟部中决標準局員工消費合作社印製 式i化合物可以其原形存在或以其與生理上可耐受的酸 所成的鹽的形式存在》此類酸的例是‘鹽酸，擰檬酸，酒 石酸，乳酸，磷酸，甲烷磺酸，醋酸，甲酸，馬來酸，富 馬酸，丁二酸，羥基丁二酸，硫酸，戊二酸’草酸，抗壞 血酸及乙醯基甘胺酸。 此新穎式I化合物可用於下列適應症： - 其發病機轉直接或間接來自凝血酶的蛋白分解影響的 疾病， • 其發病機轉來自有賴於凝也酶活化的受體及信號轉換-的疾病， - 因細胞體内基因的表現受刺激[例如.受p1，j>dgF (衍生自血小板的生長因子），P_選擇蛋白，jCAMd， 组織因子]或抑制（例如平滑肌細胞内N 〇之合成）而致 之疾病， - 由凝血酶有絲分裂原影響而引起的疾病， - 由上皮細胞（例如血管内皮細胞）因凝血酶而致的收縮 .及渗透改變而引起的疾病， "111凝血酶變化而致的血栓栓塞疾病，如深靜脈血栓，. 肺栓塞’心肌或腦血栓，心房纖維性顫動，侧流阻 15 太.械银 β 法 ίί ffl 士 田 BE1 士 / \ A 目故/P *) 1 Λ VΛ 款、

一 ,J \ 2 4 4 4 7 A7 B7 五、發明説明（13 塞， - 散佈性血管内凝血（DIC)， - 再阻塞，及與血栓落解劑共同使用以減少再灌注時’ 例如鏈激酶，尿激酶，尿激酶前體，t-PA，APSAC， 由動物唾液腺所取的纖溶酶原，以及所有此等物質的 重组的與轉化的形式， -pTCA後早期再阻塞及晚期再狹窄的出現， 有賴於凝血酶的平滑肌細胞的增生， - 中樞神經系統内活性凝血酶的累積（如愛茲海默氏病 時）， - 腫瘤生長’及預防腫瘤細胞的黏連於轉移。 此新穎化合物特別可用於與凝血酶有關的血栓栓塞疾病 之治療與預防，例如深靜脈血栓，肺栓塞，心肌或腦梗塞 及不安定的心绞痛’也用於治療散佈性血管内凝血. (DIC )。此等化合物還適於和血栓分解劑，如鏈激酶，尿 激酶’展激酶前體，t_pA，APSAC，及其他纖溶酶原活化 劑混合使用以縮短再灌住時並延長再阻塞時。 另一較佳使用範圍是預防經皮經血管腔冠狀血管成形術 後的因凝血酶引起的早期再阻塞及晚期再狹窄，預防凝血 酶引起的平滑肌細胞增生，預防中樞神經系統内活性凝血 酶的累積（如愛茲海默氏病），控制腫瘤及預防導致腫瘤細 胞黏連及轉移的機轉。 此新穎化合物也可用於塗覆人造表面，如血透析膜及血 透析所需的插管系統及線，及血管外循環所用的氧合器、 -16 本纸法尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 請 先 閱 讀 背 A 之 注 意 事 項 再广 裝 訂 經濟部中央樣率局貝工消费合作社印装 4424 7 A7 B7 五、發明説明（14 ) -- 移置片固定膜及心瓣膜表面《 此新穎化合物還可用於其發病機轉直接或間接源於激肤 原酶，特別是激肽釋放酶的疾病，例如發炎性疾病，如氣 喘，胰臟炎，鼻炎，闕節炎，蓴麻疹及其他内科發炎疾 病。 此新穎化合物的特殊優點在於’由於以3 4_脱氫脯胺酸 代替脯胺酸及以4,5-脱氫哌啶酸代替哌啶酸，其顯示改良 的藥理效果，所以不同於W0 94/29336所述的化合物。 本發明化合物可以習用方法經口或非經腸（皮下，靜脈 内，肌肉内，腹腔内，直腸）給予。也可以經鼻咽腔以氣 或喷霧給予。 劑量視年齡、病情、病人體重及給予方式而異。—般而 S ’母個病人每夭活性成分的劑量是約1〇_2〇〇〇毫克經口 給予’及約1-200當克非經腸給予。此劑量可分成2至4個-單一劑给予或以長效形式每天給予一次。 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 此新穎化合物可以習用的固體或液體形式使用，例如， 未塗覆的或塗覆的錠，膠囊，散，顆粒，塞劑，溶液， 膏’霜，或噴霧劑。此等劑形係以習用方式生產。生產 時，活性劑可與習用的醫藥助劑混合，如結合劑，填充 劑，防腐劑，.錠崩潰劑，流調整劑，增塑劑，濕潤劑，分 散劑，乳化劑，溶劑，釋出延緩劑，抗氧化劑，及/或推 進氣體（參考 H. Sucker et al·，Pharmazeutische Technologie， TMeme-Verlag，Stuttgart, 1978)。以此法所得給予形式一般 含0.1至99%重量比的活性成分。 -17- 本紙張·尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2ί〇Χ297公釐） A7 B7 五、發明説明（15 ) 實驗部分 式I化合物可以方案ι-m所示方法製備， R2> I 其中 A 是 R1 — (CH2)m — c — (CH2)n_ R3 R4 R5 I"

c — CO R6 C是 (CH2)i o

R D是 經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 E之意義如各方案内所示。各基團R，R1，R2，R3，R4， R5及R6，及1，m與n之意義如前述。 結構單元A，B，C及D較佳是臨時分別合成，並以經適 宜保護的形式使用（見方案I-III)。 此式I化合物可用如方案I-III所示適宜保護的結構單元 A，B，C，D及E起始製備。 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（2ipX297公釐） if #424 7 t 五、發明説明（伯）

方案I (P)

(P) (P) (P) <p) H A7 B：7

A

B

C

D E P P (〇) Η Ρ Η 〇Η Η-

CN -CN CN CN CN < < 5 NH2 s«烷基 m NH nh2 NH NH2 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (P =保護基’（p) =保護基或H，（u) =脱離基或，在適宜 時，酿或酮，見下述j 方案I説明分子I之線性组合，其係以胺H_D_CN偶合於 N-保護的胺基酸p-C-OH上生成P-C-D-CN ,排除N-端的保 護基生成M-C-D-CN，再偶合於N-保護的胺基酸p-B-OH上 生成P-B-C-D-CN，排除保護基p生成h-B-C-D-CN，再用 未保護的或保護的（P)，A-U結構單元（U=酿，酮）或用（P)-A、U (U=醛，酮）作還原胺化，或用適宜的（p)_A"-C=C衍 生物行Michael加成反應，生成（P)_A-B-C-D-CN。或以傳 -19

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) 格（210X297公釐） 7 4 2 4 A7 E7 五、發明説明（17 統的 Pinner 合成（R. Boder，D.G. Neilson, Chem. Rev.红 (1962) 179 )或以改良的Pinner合成經由亞胺基硫酯鹽中間 體（H. Vieweg et al.，Pharmazie 39. (1984) 226 )將此腊官能 度轉化成脒基，或直接用A. Eschenmoser，Helv. Chimica Acta (1986) 1224方法將此腈官能度轉化成脒基。然後 除去仍存於分子上的保護基，較佳是以酸加水分解完成。 如果結構單元D是以H-D-CONH2接入合成中，醯胺脱水 成腈官能度係發生於保護的中間體上。

方案II

請 先 閱 讀β 背 之 注 意 Φ 項 再Ρ 填L· 素裝 I 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (Ρ \ A B c D E ί Ρ ί - (U) H / ρ ι P fT*\ ------p \ι ) 丄 (^) ί Ρ 1 UiJ ii CN \c t f P \ UN \1 ) nh2 ^S-烷基 (F) (p V \1 ) u ^ nh2 ^nh nh2 方案II説明分子I之線性組合，其係藉Η-Β-Ρ以烷基化 訂 20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（21.0Χ297公釐） 442 4 7 A7 B7 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 1 _ -Μ. il

五 '發明説明（18 ) 還原胺化或Michael加成於適宜的未保護的或保護的結構 單元A上生成（p)-A-B-P，除去C端的保護基生成（P)-A-B-0H ’再偶合於H-C-P上生成（p)-A-B-C-P，除去C端的保護 基生成（P)-A-B-C-OH，再偶合於H-D-CN上生成（P)-A-B-C-D-CN，以此中間體反應製得方案I所示終產物。 由於化合物（P)-A-B-P仍於B上有游離態NH官能度，此 化合物在除去C端的保護基前必須供應適宜的保護基β每 一情形所用的保護基必須是彼此是正交的。 作爲 H-D-CN 的替代，也可用11-〇-(：0]^112，11-1 C(NH)NH2 ’ H-D-C(NP)NH2，H-D-C(NP)NHP，偶合的中間 體（P)-A-B-C-D-CONH2先脱水成（p)-A-B-C-D-CN。 方案III (p) (P) (P) (P)- (p). Η ·

B

C

D Ε

•CN <

S νη2 S-烷基 NH ^NHm2 NH NH2 方案III説明很有效率的以會聚合成製備化合物I的2 法°將適宜地保護的結構單元（P)-A-B-OH及H-C-D-CN伯 合到一起，再以所得中間體（P)-A-B-C-D-CN反應製得方負 < 21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX297公釐） 4424 7 Α7 Β7 五、發明説明（19 ) I終產物。 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 再Γ 寫焚 本衣 頁 所用N-端保護基是Boc，Cbz或Fmoc，較佳是Boc，C端 的保護基是甲基，三級丁基及辛基。如果分子中有多個保 護基，如果要同時除告，這些保護基必須是正交的ί如果 中間體含結構單元C，Cbz及芊基不是適宜的保護基。 所需偶合反應及其他引入與取除保護基的反應是在肽化 學標準條件下進行（見 M. Bodanszky，A. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis", 2nd Edition, Springer Verlag Heidelberg, 1994) o 訂

Boc保護基是用二嘮烷/HC1或TFA/DCM除去，Cbz保護 基是用H F作加氫分解除去。酯官能度的水解是用LiOH於 醇溶劑或於二哼烷/水内進行。TFA用以裂解三級丁基 反應係用TLC測定，一般是用如下的移動相： Α. DCM/MeOH 95 5 Β. DCM/MeOH 9 1 C. DCM/MeOH 8 2 D. DCM/MeOH/50 % HOAc 40 10:5 Ε. DCM/MeOH/50 % HOAc 35 15:5 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 在述及以柱色譜分析作分離時，此等分離是用上述移動 相於二氧化矽膠上進行。 反相HPLC分離是用乙腈/水及HO Ac緩衝液進行。 起始物質可用如下方法製備： 用於燒基化的結構單元A的例是α -溴醋酸三級丁酯，p _ 22 本纸張尺度適用中國國家標率（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 4424 7 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 i-f A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 溴丙酸三級丁酯，溴丙酸三級丁酯，r _溴丁酸三級丁 酯，溴丁酸三級丁酯，THP-經保護的溴乙醇，ΊΉΡ-經 保護的溴丙醇，α -溴-r-丁内酯，用於還原性胺化的是二 羥基丙酮，丙酮二羧酸二三級丁酯，用Michael加成反應 的是丙烯酸三級丁酯，甲丙烯酸三級丁酯，富馬酸三級丁 酯。不能購得的三級丁基酯可用類似G. Uray，W. Lindner,

Tetrahedron 41 1988 4357-4362方法由對應的羧酸製得。 B結構單元： 有關胺基酸的一般及特殊合成的各種可能的方法見諸文 献中。尤爲人注意的是 Houben-Weyl，Volume E16d/Part 1，406頁及其後所述者。 常常使用的前體是二苯基亞曱基甘胺酸乙基酯，乙醯胺 基丙二酸二乙酯，及異氰基醋酸乙酯。 例如，各種甘胺酸及丙胺酸衍生物是由異氰基醋酸乙酯' 及適宜的酮或越起始（見 H.-J· PrStorius，J. Flossdorf, M.-R. Kula Chem. Ber. l〇8 (1975) 3079)。 2-正蕕基甘胺酸，金剛基丙胺酸，r -甲基環己基丙胺 酸，4-異丙基-1-環己基丙胺酸，4-甲基-1-環己基丙胺酸， 及4-甲基-1-環己基甘胺酸之合成係經由對應的2-甲醯基胺 基丙烯酸乙黯（U. Schijllkopf and R. Meyer, Liebigs Ann. Chem. 1977，1174)完成，以異氰基醋酸乙酯及相關的羰基 化合物2-正葙酮，1-甲醯基金剛烷，1-甲醯基-1-曱基環己 烷，1·甲醯基-4-異丙基環己烷，1-甲醯基-4-甲基環己烷及 4-甲基環己酮以下述一般方法合成： -23- 本紙張尺度適用中國國家摞隼（CMS ) A4規格（2l〇X297公釐） A7 五、發明説明（21 ) _合成2 -甲酿基胺基丙缔酸乙醋之通法 將100毫莫耳異氰基醋酸乙酯於50毫升THF内之溶液於 0至-10 C滴加於100毫莫耳三級丁氧化钟於150毫升THF内 之溶液中。15分鐘後於相同溫度加10〇毫莫耳適宜的羰基 化合物於50毫升THF内之溶液，任此反應混合物缓慢升至 室溫，於迴轉蒸發器内汽提去溶劑。將殘餘物與5〇毫升 水’ 100毫升醋酸及100毫升DCM混合，用DCM萃取產 物β將DCM相於Na2S〇4上乾燥，再於迴轉蒸發器内汽提 去溶劑。生成之產物幾乎是純的，但如需要，可進一步以 二氧化矽膠作柱色譜分析（移動相：醚/石油醚混合物）β 製備胺基酸鹽酸鹽之通法係由2-甲醯基胺基丙烯酸乙酯起始 將100¾莫耳2-甲酿基胺基丙烯酸乙醋用( 10%)及 氫於200毫升冰醋酸内氫化，直至反應完全。然後濾除催 化劑’於迴轉蒸發器内盡可能汽提去醋酸，殘餘物於2〇〇' 聋升5〇%的濃鹽酸内回流5小時。於迴轉蒸發器内汽提去 鹽酸’然後將產物於5 0°C減壓·乾燥，再用醚洗數次。生成 之鹽酸鹽爲灰色結晶。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 26.6克2-正葙基甘胺酸鹽酸鹽係用16.5克（150毫莫耳）2-正葙酮起始製得。26.0克金剛烷基丙胺酸鹽酸鹽係用19.7 克（120毫莫耳）1-曱醯基金剛烷起始製得。166克厂甲基 環己基丙胺酸鹽酸鹽係用12.6克（1〇〇毫莫耳）〗_甲醯基_i-甲棊環己烷起始製得。25.9克4-甲基環己基甘胺酸鹽酸鹽 係用16.8克（150毫莫耳）4-甲基環己酮起始製得。 1 8克反式-4-甲基-1-環己基丙胺酸鹽酸鹽係用1 5克反式- -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（fcNS ) A4規格（210X297公釐）

Mr 4 42 4 71 A7 B7 五、發明説明（22 ) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 1-甲醯基-4-甲基環己烷起始製得。 克3,3 -—甲基*4 -環己基丙胺酸鹽酸鹽係用9克3J -二甲 基-1·甲醯基環己烷起始製得。 合成所需越·1-曱酿基-3,3-二甲基環己燒係以Moskal and Leusen (Rec. Trav. Chim. Pays-Bas l〇6 (1987) 137-141 所述 方法爲基礎製備： 於-60°C將正丁基鋰於正己烷内之溶液（72毫升，115毫 莫耳）用10分鐘滴加於異氰基甲基膦酸二乙酯（17毫升， 105毫莫耳）於280毫升無水乙醚内之攪拌的溶液中。然後 將生成之懸浮液於-60°C攪拌15分鐘，再用10分鐘加3,3_ 二甲基環己酮（1 3克，105毫莫耳）於1〇〇毫升無水乙醚内 足溶液，同時保持溫度低於·45 5C。任反應混合物升至0 C，於此溫度擺拌9 〇分鐘後，小心加150-200毫升38%強 度的鹽水溶液。將此混合物於室溫強烈攪拌1 5小時至· 完全水解。分離出有機相，用各200毫升的水及飽和碳酸 風納水;谷液及飽和氣化鋼溶液洗。於硫酸鎂上乾燥，過 濾，並於迴轉器内濃縮除去溶劑。生成之殘餘物不必純化 即作爲起始物以合成胺基酸。 Doc-(D)- α-甲基-環己基丙胺酸： 將3.4克（12.2毫莫耳）6〇«:-(0)-心曱基>^1]^-011於100毫升 MeOH内在有250耄克5% Rh/Al2〇3之存在下於50。〇在1 〇巴 氫壓下氫化2 4小時。過濾’汽提去溶劑，生成2 8克B〇c_ (D)-a-甲基-Cha-OH。 iH-NMR (DMSO-d6，（ippm): 12 (很廣信號，c〇〇H); ! 'ο 8 -25- I , ^ 1、1 裝------訂--- (請先閲讀背面之注項寫本頁) -ίν * I In · -ί 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 442471 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 五、發明説明（23 ) (25H; 1.35 (s，Boc)，1.30 (s，Me)) 以類似 J.Y.L. Chung 等（J.Y.L. Chung et al. J. 〇rg. Chem. 1990, ϋ, 270 )所述方法合成 Boc-(3-Ph)-Pr〇-〇H。

Boc-(D,L)-Dch-OH之製備： 將Boc-(D，L)-Dpa-OH (1毫莫耳）在12毫升MeOH内用催 化量的5% Rh/Ah〇3在5巴壓力下氫化。過濾，減壓除去溶 劑，生成定量的產物。 H-(D，L)-Chea-OH之製備： 將4.0克甲烷磺酸環庚基甲酯（19.39毫莫耳用環庚基甲 醇及甲烷磺醯氯製備）與4.9克二苯基亞甲基甘胺酸乙基醋 (18_47毫莫耳），8·9克乾而磨細的碳酸鉀粉（64.65毫莫耳） 及1克溴化四丁基銨（3毫莫耳）於50毫升無水乙腈内在惰 性氣體下回流1 0小時。然後過濾出碳酸#Ρ，將濾過物蒸 發至乾’粗製產物用20毫升2當量的鹽酸在40毫升乙醇内· 於室溫攪拌1.5小時水解。將反應溶液稀釋，然後用醋酸 乙酯在酸性範圍肉萃取二苯基酮，再用DCM在鹼性範園 (ρΗ=9 )萃取H-(D，L)-Chea-OEt，將此溶液在硫酸鎂上乾燥 並於迴轉蒸發器内濃縮。產.出3.7克，理論上的95%。 以 G. Zivilichovsky, V. Gurvich J. Chem. Soc,，perkin Trans I 12 (1995) 2509-15所述方法製備D-(l, 4-環己二烯基）Ala-OH。 以 U. Sch'dllkopf，R. Meyer, L, Ann. Chem. (1977) 1174-82 所述方法製備丑-(0,!<)-;3，-]^620^-011» 將該等胺基酸用二碳酸二-三級丁酯於水/二噚烷内以習 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇Χ297公釐）

4424 7 1 Α7 Β7 五、發明説明（24 ) 用方法轉化成Boc保護過的形式，再用醋酸乙酯/己烷混 合物重結晶或於二氧化矽膠上作柱色譜分析純化（移動 相：醋酸乙酯/石油醚混合物）。 此B 〇 c經保護的胺基，酸作爲如方案j所示之B結構單元使 用。 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 『 t i,.; 作爲B結構單元的該等胺基酸在一些情形下也轉化成對 應的芊基酯並聯於經適宜保護的A結構單元上。在有仍爲 游離態的N-H官能度的化合物的情形，再用B〇c基團保 護，再形加氫作㈣去爷基醋基團，〃重结晶、鹽沉澱或 柱色譜分析純化結構單元α_β_οϊι。此一過程以如下之 tBuOOC-CH2-(Boc)(D)Cha實例説明。 (D)-環己基丙胺酸苄基酯之合成： 將100克（481毫莫耳）〇_環己基丙胺酸鹽酸鹽，1〇4克 (962毫莫耳）苄基醇及11〇克（577毫莫耳）單水合對甲苯靖. 酸於2200毫升甲苯内之懸浮液用水分離器加熱至回流。於 80-90°C溫度範圍内見有氣化氫排出，懸浮液溶解，成爲 澄清溶液。在不見有水分離出時（約4小時），蒸餾出5〇〇 毫升甲苯，任反應混合物冷卻過夜，濾除生成之殘餘物， 用己跪洗一次，每次用1000毫升。再將生成之殘餘物 (195克）懸浮於2000毫升二氣曱燒内，加1000毫升水後， 缓慢加50%強度的氫氧化鈉溶液並同時攪拌使ρ η調整至9胃 9.5。分離有機相，用水洗二次’每次用5〇〇毫升，於硫酸 鈉上乾燥，過濾除去乾燥劑，濃縮成115克（94%)生成之 產物，爲灰色油體。 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） #42471 A7 B：7 五、發明説明（25 ) N-(三級丁基氧基羰基甲基）_(D)-環已基丙胺酸芊基酯： 將115克（440毫莫耳）（D)-環己基丙胺酸苄基酯溶於2〇〇〇 毫升乙腈内，於室溫加608克（4.40莫耳）碳酸鉀及94克 (484毫莫耳）澳醋酸三級丁酿，此混合物於此溫度携拌3 天。濾除碳酸鹽，用乙腈洗，將母液濃縮（30°C，20毫 巴），殘餘物溶於1000毫升甲基三級丁基醚内，用5%強度 的·檸檬酸及飽和碳酸氫納溶液萃取有機相。將有機相於硫 酸鈉上乾燥，過濾除去乾燥劑，濃縮，所得油體（168克） 直接用於下一反應。 N-Boc-N-(三級丁基氧基羰基甲基）-(D)-環己基丙胺酸爷基 酯： 將前一合成所得油體（168克’ 447毫莫耳）溶於14〇〇毫升 乙腈内，加618克（4.47毫莫耳）碳酸曱粉及1〇7克（492毫莫 耳）二碳酸二-三及丁酯後，於室溫攪拌6天β吸濾除去碳 酸钾，用約1000毫升乙腈洗，過濾，濃縮，製得230克所 需產物。 N-Boc-N-(三級丁基氧基羰基甲基HD)-環己基丙胺酸環己 基銨鹽： 經濟部中央榇準局員工消費合作.社印製 將115克N-Boc-N-(三級丁基氧基羰基甲基）-(D)-環己基丙 胺酸苄基酯溶於1000毫升純乙醇内，在有9克10% Pd/活 性碳之存在下在大氣壓氫下於25-30°C氫化2小時。過濾並 於回轉蒸發器除去溶劑後製得100克（260毫莫耳）黃色油 體，將此油體溶於1600毫升丙酮内，加熱至回流。除去熱 浴，經由滴加漏斗迅速加2 7克（273毫莫耳）環己胺於丙酮 -28- 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 4 4247 A7 B? 五、發明説明（26 ) 内的溶液。將反應混合物冷至室溫結晶出所需的鹽。濾出 此固體，用200毫升丙酮洗，最終純化時用丙.酮重結晶。 殘餘物於眞空於約30°C乾燥，製得所需的鹽70.2克，爲白 色粉。 作爲C結構單元的（L)-3,4-脱氫脯胺酸可由市場購得， (D，L)-4,5-脱氫哌啶酸可以 J. Org· Chem_ 21 (1960) 489 或 C. Herdeis, W. Engel Arch. Pharm. 326 (1993) 297 所述方法製 得，再用 Boe20轉化成Boc-(D，L)-Dep-OH。 D結構單元之合成見DE 444 33 90内之説明。 實例1 N-羥基羰基甲基-(D)-環己基丙胺醯基-3,4-脱氫脯胺酸4-脒 基爷基酿胺：

Boc-3，4-脱氮捕胺酸4 -風基卞基臨胺： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 將Boc-3,4-脱氫脯胺酸（4.7克，22.0毫莫耳）及4-氰基爷 基胺（4.1克，24.2毫莫耳；DE 444 33 90)溶於二氯甲烷 (25毫升）内。將此溶液冷至〇°C，加乙基二異丙基胺（26.4 毫升’ 154毫莫耳）。然後再緩慢滴加5〇%強度的酷酸乙酯 内的丙烷膦酸酐（23·3毫升，110毫莫耳）。此混合物於〇-C 攪拌1小時’再於室溫攪拌30分鐘’然後用二氣甲烷稀 釋，用稀硫酸氫鈉溶液洗（3x)，用稀碳酸氫鈉溶液洗 (3x)，再用飽和氯化鈉溶液洗。於硫酸鈉上乾燥，然後於 水泵眞空下濃縮。製得粗製產物7.47克。 3,4-脱氫脯胺酸4-氰基苄基醯胺： 將前一實驗所製得B〇c-3,4-脱氫脯胺酸4-氰基苄基醯胺 _____ -29- 本紙張纽適用中國國家標準（CNS ) A4· ( 2iGx297公酱） --- 442 4 7 A7 B7 五、發明説明（27 (7.47克）溶於二氣甲烷（88毫升）内，加醚鹽酸（88毫升， 5M)。然後將此混合物於室溫攪拌1.5小時。水泵眞空下 蒸餾去溶劑。殘餘物用二氣甲烷混合二次，水泵眞空下蒸 餾去溶劑。然後在攪拌下用乙醚萃取。製得5.32克粗製產 物0 N-(三級丁氧羰基甲基）-(N-Boc)-(D)-環己基丙胺醯基_3,4-脱氮膽胺酸4 -氨基爷基酿胺： 將 tBuOOC-CH2-(Boc)-(D)-Cha-OH(7_59 克，19.68 毫莫耳） 及H-Pyr-4-氰基芊基醯胺（5.19克，19.68毫莫耳）溶於二氯 甲坡（100毫升）内，加乙基二異丙基胺（I2.72克，98.4毫 莫耳）。將此溶液冷至〇C ’用20分鐘滴加5 0%強度的丙燒 膦酸酐於醋酸乙酯（20毫升）内之溶液，於〇-l〇°C攪拌3小 時後，此混合物用二氯曱烷（100毫升）稀釋，用10%強度 的硫酸氫鈉溶液（3x )，飽和碳酸氫鈉溶液（2x )及水洗。_ 於硫酸鈉上乾燥，水泵眞空下蒸餾去溶劑β製得13.2 8克 灰標色油體。 Ν-(三級丁氧羰基甲基）-(N-Boc)-(D)-環己基丙胺醯基_3,4_ 脱氫脯胺酸4-胺基硫羰基芊基醯胺： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 將前一實驗所製得 tBuOOC-CH；r(Boc)-(D)-Cha-Pyr 4·氰基 苄基醯胺粗製產物（13,28克）溶於吡啶（70毫升）及三乙基 胺（1 2毫升）内，將此溶液冷至〇eC，用硫化氫飽和（溶液 變成綠色）。然後於室溫攪拌4 8小時。用氮代替過多的硫 化氫.，水泵眞空下蒸餾去溶劑。殘餘物溶於乙醚内用20% 強度的硫酸氫鈉溶液洗3次，飽和碳酸氫鈉溶液（2x )及水 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2!0X297公釐） 4424 7 Α7 Β7 五、發明説明（28 洗》於4u酸鈉上乾燥，水泵眞空下蒸餾去溶劑。粗製產物 (14_3克）作閃色譜分析純化（二氧化矽膠，二氣甲燒至二 氯甲烷：甲醇= 50:1梯度）。產出：13.3克（含少量溶劑）。 N-(二級丁氧羰基甲基）-(N-Boc)-(D)-環已基丙胺醯基_3,4一 脱氫脯胺酸4-曱基硫羰亞胺醯基芊基醯胺： 將甲基破（7.97毫升，126.90毫莫耳）加於二氣甲烷（135 毫升）内之前一實驗所製得的 ί_ΒιιΟ〇(：-〇：Η2-(Β〇(〇-(；ϋ；)-(：1^-Pyr-胺基硫羰基笮基醯胺（13.3克）内。於室溫攪拌24小時 後’水泵眞空下蒸餾去溶劑。製得15.73克灰黃色油體。 N-(二級丁氧羧基曱基）-(N-Boc)-(D)-環.己基丙胺酿基_3,4_ 脱氫脯胺酸4-脒基苄基醯胺： 將前一實驗製得的 t-BuOOC-CH2-(B〇c)-(D)_Cha-Pyr 4-甲 基硫羰亞胺醯基芊基醯胺鹽酸鹽（15.73克）粗製產物溶於 乙腈（1290毫升）内，加醋酸錄（3.25克，42.3毫莫耳）。然· 後將此混合物於5 0 °C加熱1.5小時，水系眞空下濃縮後， 加二氯甲烷。濾除沉澱之鹽，濾過物於水泵眞空下濃縮。 製得15.17克黃色泡沫《於離子交換器上將此粗製產物轉 化成醋酸鹽（Fluka，Order No· 00402，聚合物支撑上的醋酸 鹽）。產出：13,3克。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 N-(羥基羰基甲基）-(〇)-環己基丙胺醯基-3,4-脱氫脯胺酸4- 脉基竿基趨胺： 將 t-BuOOC-CH2-(BocHD)-Cha-Pyr 4-脒基苄基醯胺氫醋 酸鹽（13.3克）溶於二氣甲烷（200毫升）内，甲醚HC1 (45 毫升）。於室溫攪拌2小時後，於水泵眞空下蒸發至乾。 -31- 本紙伕尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（2〗0X297公嫠） ιί 2 2 4 4 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 4 71 ( -4 7 1 a? -—_______ B? ^__ 五、發明説明（29 ) 殘餘物與二氯甲烷混合二次，水泵眞空下蒸餾去溶劑。製 得粗製產物11.6克。 將部分粗製產物（3克）於離子交換器上轉化成醋酸鹽 ((Fluka，Order No. 004.02，聚合物支撑上的醋酸鹽）。所得 產物（2.9克）用閃色譜分析純化（二氧化矽膠，梯度由二氯 甲烷：曱醇= 4:1經二氯甲烷：曱醇：50〇/〇強度的醋酸 =40:10:2至二氯曱烷：甲醇：50%強度的醋酸=35:15:5)。 製得黃色油體，再將此油體溶於水内。過濾，將濾過物凍 乾。產出：2.13 克，無色固體。FAB-MS (M+H+): 456。 以類似實例1方法製得以下化合物： 2. N-(羥基羰基曱基）-(d)-環己基甘胺醯基-3,4-脱氫脯胺 酸4·脒基芊基醯胺： FAB-MS (M+H+): 442 3· N-(羥基羰基甲基）-(.D,L)-環庚基丙胺醯基-3,4-脱氫脯_ 胺酸4-脒基苄基醯胺： FAB-MS (M+H+): 470 4. 1^-(經基凝基甲基）-(〇)-三級丁基丙胺醯基-3,4-脱氫脯 胺酸4-脒基苄基醯胺： FAB-MS (M+H+): 430 5. N-(羥基羰基甲基）-(D)-環己基丙胺醯基-4,5-脱氫哌啶 酸4-脒基芊基醯胺： FAB-MS (M+H+): 470 此新穎化合物的抗凝血酶效果於鼠之動靜脈分流顯示出. 來。於此實驗中，動靜脈分流中的玻璃毛細管有人工產生 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X297公嫠） 4424 7 1 A7 B7 五、發明説明（ 30

-T 經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 凝血酶表而的作用，引起血栓。將麻醉（胺基甲酸乙酯 25%，2x8 *克/公斤，腹腔内）的鼠仰臥固定於溫度 被控制的台上。將右頸動脈及頸靜脈曝露，於其内植入短 I乙烯導管（Portex，PE 50 )，導管内裝進生琛食鹽水溶液 然後夹起。導笮的自由端聯於内直徑〗·〇毫米長毫米 的破堝毛細管上，此毛細管有產生凝血酶表面的作用。試 驗物質可以靜脈内、皮下 '經口或輸液給予。以試驗物質 或溶劑（對照）經所需培養時間後，除去央使分流開放。流 經分泥的血液導致溫度急速升高’此溫度係於玻璃毛細管 中央測得。由室溫升至體溫顯示分流.是開放的。連續士錄 溫度直至分流變成關閉。此外，在分流開放時及實驗完了 時採取血樣供測定血漿内抗-FIIa活性。本案之化合物2顯 示在施用化合物後之60分鐘内於老鼠中具625s延長之 ecarin凝結時間。 於狗之藥物動力學及凝血參數 將試驗物質溶於等張食鹽水内，立刻給予有意識的雜種 狗。給予的容積是0.1毫升/公斤供靜脈内一次注射，1毫 升/公斤供經口灌入。在靜脈給予前及給予1 . 〇毫克/公斤 後5’ 10，20，30，45，60，90，120，180，240， 3 00及3 60分鐘後（如有需要並在420，480分鐘及24小時後） 採靜脈血樣（2宅升）入含檸檬酸鹽的管内，或經亡給予前 及給予4.64 毫衷/公斤後 1〇，20，30，60，120，180， 240，300 360，480分鐘及24小時後，採靜脈血樣入含 檸檬酸鹽的管内。採樣後立即測定全血的ecarin時（ECT = ecarin凝時）。以離心破成血漿後，用凝血計測定血漿凝血 酶時及活化的部分凝血致活酶時（APTT )。 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------ο衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 4 424 7 1 A7 經濟部中央標準局肩工消費合作社印製 五、發明説明（31 ) 還以產色素（S-2238)凝血酶鑑定藉anti-F Ila在血漿内的 anti-F Ila活性測定（ATU/ml)活性及試驗物質的濃度，此係 使用r -水蛭素及試驗物質的效對製圖測定。 試驗物質在血漿内的濃度是計算藥物動力學參數：最大 血漿濃度時（T max)’最大血漿濃度；血·漿半衰期5 ;曲 線下面積（AUC );試驗物質的吸收部分（F )的基礎。 凝血參數： Ecarin時（ECT = ecarin凝時）；將100微升用摔權酸鹽處 理過的血液於37 °C在凝血計（CL 8，球形’ Bender & Hobein，Munich, FRG)内培養2分鐘。加100微升先溫過的 (37°C ) ecarin試劑（Pentapharm )後，測定至纖維蛋白凝塊 生成的時間。 活化的部分凝血致活酶時（APTT ):將50微升檸檬酸鹽 處理過的血漿及50微升PTT試劑（Pathrombin, Behring)混’ 合'，於 37 °C 在凝血計（CL 8，球形，：Bender & Hobein， Munich, FRG)内培養2分鐘。力口 50微升先溫過的（3 7°C )氯 化鈣後，測定至纖維蛋白凝塊生成的時間。 凝血酶時（TT ):將100微升用擰檬酸鹽處理過的血漿於 37°C 在凝血計（CL 8，球形，Bender & Hobein，Munich, FRG )内培養2分鐘。加100微升先溫過的（37°C)凝血酶試 劑（Boehringer Mannheim)，測定至纖維蛋白凝塊生成的時 間0 此新穎化合物在這些試驗中顯示良好效果。 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 請 先 閔 項 本 頁

1T

Claims (1)

1. 8 8 8 8 ABCD

   “24认 11384號專利申請案 中文申請專利範圍修正本(89年1〇月) -申讀利调 rj 1. 一種式I化合物 R2 r4 rs r^i N (CH2)l

   I I I R1—(CH2)m- c —(CH2)n — N— c—CO - I I R3 R6 其中R，Ri，R2 ’ R3，r4，尺5及RS，及1，m與！！之意義 如下： 1 0 或 1， m 0，1 或 2， η 0，1 或 2， R H或C1.4-烷基-， R1 HOOC-，（：卜6-烷基-OOC-，芊基-OOC-，或 _〇H， R2 H-，Cw烷基或Ri-(CH2)m-， R3. H-或Cm-烷基-，其可經-OH或-COOH取代， R4 H-，Cw-烷基-，HOOC-Ct-4-伸烷基-， 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印装 R5 Cw烷基-，環烷基-(CR8R9)r-，（r = 0 或 1，R8， R9=H-，環烷基-或匚丨^-烷基-)，其中環恍基内 至多4個CH2基可分別經CR10R11 (RI0=H-威Cl·4-燒 基-，R^Cm-烷基-)置換且/或環炼基中與 CR8R9鍵結之CH暴可經CR12 (RiLCw-炼基-)置 換，且/或環内一或二個C-C單鍵可.經C=C雙鍵 本紙張尺度逋用令國國家梂準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 4424 7 A8 B8 C8 D8 趄濟部中央檁準局員工消费合作社印«. 六、申請專利範圍 置換， R6 H-，C〖_4-烷基-或 R4 及 R5 共同是-CH2-CH2-CH(R7)-，（R7=H-，苯基-或環 己基-) R2及R5共同是-CH2-CH2或-CH2-CH2-CH2- ’其中一個氳 原子可經-烷基-，苯基-或環己基-置換， 及其與生理上可耐受的酸形成的鹽。 2. —種用於作為類胰蛋白酶絲胺酸蛋白酶競爭性抑制劑之 醫藥组合物，其包含根據申請專利範圍第1項之式I化合 物及醫藥可接受之鹽。 3. 根據申請專利範圍第1項之式I化合物，其係用於製造下 列用途之藥物： •其發病機轉直接或間接來自凝血酶的蛋白分解效應 的疾病， ，其發病機轉來自依賴凝血酶活化受體及信號轉換的 疾病， *與體細胞内基因表現之刺激或抑制有關之疾病， -因凝血酶有絲分裂效應而引起的疾病， •由上皮細胞因凝血酶改變收縮及滲透而引起的疾 病， •因凝血酶而致的血_检栓塞疾病， •散佈性血管内凝血， -再阻塞’及與血栓溶解劑共同使用以減少再.灌注時 間， -2- 本紙張尺度璁用中國國家揲準（CNS ) A4规格（21.0X297公釐） ---------^------?τ-------咬；y (锖先聞讀背面之注意事項再瑱寫本夷) 44247, A8 B8 C8 D8 κ、申請專利範圍 • PTCA後出現之早期再阻塞及晚期再狹有， •平滑肌細胞因凝血酶造成的增生， *中樞神經系統内活性凝血酶的累積， *腫瘤生長，及預防腫瘤細胞的黏連與轉移。 4.根據申6青專利知圍第1項之式I化合物，其係用於製造下 列用途之藥物： •直接或間接源自激肽原酶，特別是激肽釋放酶，的 蛋白分解效應的發病機轉的疾病， *發炎性疾病如氣喘，胰臟炎’鼻炎，關節炎，荨麻 疹及其他涉及激肽釋放酶的内科疾病β 5- —種下式之化合物 R2 R4 R5 I CO z^,\ I R ! m I ch2 I I I R1—(CH2)ro— c -(CH2)n - N — c- CO I I R3 R6

   經濟部中央橾準局貝工消費合作社印裂 其中R，，r4 ,尺5及r6，及1，m與n之意義 如申請專利範圍第丨項所述。 -3- 本纸·張尺度遴用中囷國家椟準（aS > A4规格（2丨〇 X 297公釐） 44247 Λ8 38 C8 D8 申請專利範圍 6.—種下式之化合物 Υ- N. (CH2)； III, CO — NH ——CH2 CN 其中1及R之意義如申請專利範圍第1項所述，而Y是N 保護基，N-端受保護或未受保護的胺基酸或Η-。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部尹夬樣隼局貞工消費合作社印裝 4 本紙張尺度適用中國國家標丰（€呢>久4規格.（210><297公釐） 4424 7 1 A7 B7 五、發明説明（ 30 -T 經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 凝血酶表而的作用，引起血栓。將麻醉（胺基甲酸乙酯 25%，2x8 *克/公斤，腹腔内）的鼠仰臥固定於溫度 被控制的台上。將右頸動脈及頸靜脈曝露，於其内植入短 I乙烯導管（Portex，PE 50 )，導管内裝進生琛食鹽水溶液 然後夹起。導笮的自由端聯於内直徑〗·〇毫米長毫米 的破堝毛細管上，此毛細管有產生凝血酶表面的作用。試 驗物質可以靜脈内、皮下 '經口或輸液給予。以試驗物質 或溶劑（對照）經所需培養時間後，除去央使分流開放。流 經分泥的血液導致溫度急速升高’此溫度係於玻璃毛細管 中央測得。由室溫升至體溫顯示分流.是開放的。連續士錄 溫度直至分流變成關閉。此外，在分流開放時及實驗完了 時採取血樣供測定血漿内抗-FIIa活性。本案之化合物2顯 示在施用化合物後之60分鐘内於老鼠中具625s延長之 ecarin凝結時間。 於狗之藥物動力學及凝血參數 將試驗物質溶於等張食鹽水内，立刻給予有意識的雜種 狗。給予的容積是0.1毫升/公斤供靜脈内一次注射，1毫 升/公斤供經口灌入。在靜脈給予前及給予1 . 〇毫克/公斤 後5’ 10，20，30，45，60，90，120，180，240， 3 00及3 60分鐘後（如有需要並在420，480分鐘及24小時後） 採靜脈血樣（2宅升）入含檸檬酸鹽的管内，或經亡給予前 及給予4.64 毫衷/公斤後 1〇，20，30，60，120，180， 240，300 360，480分鐘及24小時後，採靜脈血樣入含 檸檬酸鹽的管内。採樣後立即測定全血的ecarin時（ECT = ecarin凝時）。以離心破成血漿後，用凝血計測定血漿凝血 酶時及活化的部分凝血致活酶時（APTT )。 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------ο衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1T 8 8 8 8 ABCD

   “24认 11384號專利申請案 中文申請專利範圍修正本(89年1〇月) -申讀利调 rj 1. 一種式I化合物 R2 r4 rs r^i N (CH2)l

   I I I R1—(CH2)m- c —(CH2)n — N— c—CO - I I R3 R6 其中R，Ri，R2 ’ R3，r4，尺5及RS，及1，m與！！之意義 如下： 1 0 或 1， m 0，1 或 2， η 0，1 或 2， R H或C1.4-烷基-， R1 HOOC-，（：卜6-烷基-OOC-，芊基-OOC-，或 _〇H， R2 H-，Cw烷基或Ri-(CH2)m-， R3. H-或Cm-烷基-，其可經-OH或-COOH取代， R4 H-，Cw-烷基-，HOOC-Ct-4-伸烷基-， 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印装 R5 Cw烷基-，環烷基-(CR8R9)r-，（r = 0 或 1，R8， R9=H-，環烷基-或匚丨^-烷基-)，其中環恍基内 至多4個CH2基可分別經CR10R11 (RI0=H-威Cl·4-燒 基-，R^Cm-烷基-)置換且/或環炼基中與 CR8R9鍵結之CH暴可經CR12 (RiLCw-炼基-)置 換，且/或環内一或二個C-C單鍵可.經C=C雙鍵 本紙張尺度逋用令國國家梂準（CNS ) A4规格（210X297公釐）