EA022121B1

EA022121B1 - Ингибиторы трипсиноподобных сериновых протеаз, их получение и применение

Info

Publication number: EA022121B1
Application number: EA201270703A
Authority: EA
Inventors: Петер Херолд; Мохаммед Дагхиш; Стьепан Желакович; Фридрих-Александер Людвиг; Клаудиа Райхельт; Александер ШУЛЬЦЕ; Андреа Швайнц
Original assignee: Зе Медисинс Компани (Лейпциг) Гмбх
Priority date: 2010-01-28
Filing date: 2011-01-28
Publication date: 2015-11-30
Also published as: CN102858744A; EP2528895A2; EA201270703A1; JP5709902B2; WO2011094496A3; EP2528895B1; CA2788417A1; US9611290B2; EP2528895A4; CN102858744B; NZ601521A; US20110301196A1; US20140073573A1; CA2788417C; MX345259B; WO2011094496A2; ES2569983T3; MX2012008813A; AU2011210802A1; US8598206B2

Abstract

В изобретении предложены соединения, имеющие приведенную ниже формулу, которые являются эффективными ингибиторами плазмина и калликреина плазмы человека и которые могут быть использованы для предупреждения потери крови и в качестве компонентов фибриновых клеев. Кроме того, в изобретении предложены способы получения и применения данных соединений.

Description

Изобретение относится к области органической химии, к сериновым протеазам (в частности, к плазмину и калликреину плазмы) и гемостазу и к терапевтической модуляции каскада коагуляции крови и фибринолиза.

Уровень техники

Плазмин (ЕС 3.4.21.7, фибринолизин) представляет собой трипсиноподобную сериновую протеазу, которая осуществляет расщепление белков по остаткам аргинина или лизина; основными субстратами плазмина являются фибрин и белки внеклеточного матрикса (ВКМ), такие как фибронектин. Другие субстраты плазмина включают различные белки базальной мембраны, например ламинин и коллаген типа IV, и зимогены, такие как предшественники урокиназы и матриксных металлопротеиназ. В крови плазмин является ответственным, в частности, за фибринолиз, так как расщепляет фибрин с образованием растворимых фрагментов. Плазмин активируется путем расщепления его зимогена (неактивного предшественника), плазминогена в результате действия активаторов плазминогена, главным образом, сериновых протеаз, таких как урокиназа, ΙΡΆ (тканевый активатор плазминогена) и калликреин плазмы (ЕС 3.4.21.34; кининогеназа, РК).

Эндогенные ингибиторы плазмина, такие как а₂-макроглобулин и а₂-антиплазмин, ослабляющие антикоагулянтное действие активаторов плазминогена, играют ключевую роль в регуляции фибринолиза. Некоторые патологические состояния (гиперплазминемии) характеризуются дисрегуляцией плазмина и спонтанной активацией фибринолиза. Имеющая место деградация фибрина, закрывающего раны, усиливается продуктами деградации фибриногена, обладающими антикоагулянтными свойствами, что приводит к серьезным нарушениям гемостаза.

Для лечения таких патологических состояний в клинической практике используют антифибринолитические лекарства; к широко используемым антифибринолитическим агентам относятся синтетические аминозамещенные карбоновые кислоты, такие как парааминометилбензойная кислота, εаминокапроновая кислота и транс-4-(аминометил)циклогексанкарбоновая кислота (транексамовая кислота). Данные соединения блокируют связывание плазминогена с фибрином и таким путем ингибируют образование плазмина, но они не являются прямыми ингибиторами плазмина и не ингибируют активность уже образованного плазмина. Антифибринолитическим средством прямого действия является апротинин (ТКА8УЕОЕ™, Вауег А.С., Рсхсгкизсп). полипептид, состоящий из 58 аминокислот, получаемый из легких крупного рогатого скота. Апротинин ингибирует плазмин с константой ингибирования 1 нМ, но является относительно неспецифическим: эффективно ингибирует трипсин (К₁ = 0,1 нМ), калликреин плазмы (К₁ = 30 нМ) и в меньшей степени ряд других ферментов.

Апротинин используют главным образом для уменьшения потери крови, особенно при хирургических вмешательствах на сердце с использованием аппарата искусственного кровообращения (АИК), где использование апротинина заметно снижает необходимость в периоперационном переливании крови (8ойЬа е1 а1., Ехрей Кем. СагФоуазс. Ткет., 4, 151-160, 2006). Апротинин также используют для предотвращения потери крови при проведении других операций, например при трансплантации органов; апротинин также используют вместе с фибриновыми клеями.

Использование апротинина имеет некоторые недостатки. Так как апротинин выделяют из органов крупного рогатого скота, в принципе существует риск заражения патогенными микроорганизмами и развития аллергических реакций. Риск наступления анафилактического шока относительно низкий при первом введении апротинина (0,1%), но увеличивается до 4-5% при повторном введении в течение 200 суток. Имеются данные, что введение апротинина вызывает увеличение количества случаев возникновения побочных эффектов при прямом сравнении с ε-аминокапроновой кислотой или транексамовой кислотой (Мапдапо е1 а1., Мете Епд1. 1. Мей., 354, 353-365, 2006). Введение апротинина приводит к увеличению в два раза количества случаев повреждения почек, требующего проведения диализа, и увеличению количества случаев инфаркта миокарда и апоплексического удара по сравнению с контрольной группой. На основании результатов рандомизированного исследования ВАКТ (В1оой Соикетуайоп Икшд АпОПЬппо1у0с5 ίη а Капйопи/ей Тгйа1), согласно которому в группе пациентов, перенесших хирургические вмешательства на сердце высокого риска, получавших апротинин, показатели смертности были выше по сравнению с группой пациентов, получавших лизиновые аналоги (Регдиккоп е1 а1., Νθ№ Епд1. 1. Мей., 358, 2319-2331, 2008), обращение данного лекарства было приостановлено.

В литературе описан ряд синтетических ингибиторов плазмина. 8апйегк (8апйегк апй 8е1о, 1. Мей. СЬет., 42, 2969-2976, 1999) описал производные 4-гетероциклогексанона, обладающие относительно слабой активностью, с константами ингибирования плазмина >50 мкМ. Хие (Хие апй 8е1о, 1. Мей. СЬет., 48, 6908-6917, 2005) описал пептидные производные циклогексанона, имеющие значения ИК₅₀ >2 мкМ, однако о дальнейших исследованиях в данном направлении не сообщалось. Окайа (Окайа е1 а1., СЬет. РЬагт. Ви11., 48, 1964-1972, 2000; Окайа е1 а1, Вюогд. Мей. СЬет. Ьей, 10, 2217-2221, 2000) и Ткийа (Ткийа е1 а1., СЬет. РЬагт. Ви11., 49, 1457-1463, 2001) описали производные 4-аминометилциклогексановой кислоты, ингибирующие плазмин со значениями ИК50 >0,1 мкМ, однако о клиническом использовании данных ингибиторов не сообщалось.

- 1 022121

5>1иг/еЬесЬег с соавт. описали серию сульфонилированных по Ν-концу бензамидиновых пептидомиметиков, оказывающих различные действия на сериновые протеазы. Данный класс соединений включает ингибиторы фактора Ха, которые могут быть использованы в качестве антикоагулянтов и антитромботических средств (патент США № 6841701); ингибиторы урокиназы, которые могут быть использованы в качестве опухолевых супрессоров (публикация заявки на патент США № 2005/0176993, патент США № 6624169); ингибиторы калликреина плазмы (РК), фактора Х1а и фактора Х11а, которые могут быть использованы в качестве антикоагулянтов и антитромботических средств (публикация заявки на патент США № 2006/0148901); и ингибиторы матриптазы, которые могут быть использованы в качестве опухолевых супрессоров (публикация заявки на патент США № 2007/0055065).

Константы ингибирования некоторых соединений, оказывающих влияние на активность плазмина, опубликованы в отчетах нескольких исследований, посвященных изучению ингибиторов протеаз, вовлеченных в коагуляцию. Однако поскольку изучалась возможность использования данных соединений в качестве антитромботических средств, предпочтительно анализировали соединения с низким уровнем ингибирования плазмина. Например, ингибитор тромбина мелагатран (те1ада!гап) ингибирует плазмин со значением К₁ = 0,7 мкМ, а соединение Н317/86 с родственной структурой имеет значение константы ингибирования 0,22 мкМ (СикЮГккоп е! а1., ТЬготЬ. Нает., 79, 110-118, 1998). Однако ввиду того, что оба соединения ингибируют протеазу, тромбин намного сильнее (К₁ <2 нМ), результирующим эффектом от введения является ингибирование коагуляции. Возможность использования таких соединений в качестве прокоагулянтов, например, для уменьшения потери крови при хирургических вмешательствах на сердце, не отмечена ни в одной из данных публикаций.

Как отмечено выше, апротинин ингибирует не только плазмин, но также калликреин плазмы (РК). РК представляет собой многофункциональную трипсиноподобную сериновую протеазу, имеющую несколько известных физиологических субстратов. Соответственно, РК путем протеолитического расщепления может высвобождать из высокомолекулярного кининогена вазоактивный пептид брадикинин и активировать зимогены, такие как фактор свертывания крови XII, проурокиназу, плазминоген и проММР 3. Поэтому предполагается, что система РК/кинин играет важную роль в развитии многих патологических состояний, например тромбоэмболических осложнений, синдрома диссеминированной внутрисосудистой коагуляции, септического шока, аллергии, постгастрорезекционного синдрома, артрита и АКО§ (респираторного дистресс-синдрома у взрослых) (Тайа е! а1., Βίο1. РЬагт. Ви11., 24, 520-524, 2001).

Соответственно, апротинин, оказывая ингибирующее действие на РК, ингибирует высвобождение пептидного гормона брадикинина, что в свою очередь приводит к активации рецептора брадикинина В2 и вследствие этого к различным эффектам. Индуцируемое брадикинином высвобождение 1РА. ΝΟ и простациклина из эндотелиальных клеток (§сЬта1ет, 1. С1ш. 1иуе81., 109, 1007-1009, 2002) оказывает влияние на фибринолиз, кровяное давление и воспалительные процессы. Это дает возможность предположить, что системные воспалительные процессы, которые могут иметь место в качестве побочных эффектов при хирургических вмешательствах, могут быть уменьшены путем ингибирования высвобождения брадикинина.

В литературе описаны различные бисбензамидины, такие как пентамидин и родственные соединения, и сложные эфиры ω-амино- и ω-гуанидиноалкилкарбоновых кислот в качестве ингибиторов РК, имеющих значения К₁ в микромолярном диапазоне (АкдЬаг е! а1., ВюсЫт ВюрЬук Ас!а, 438, 250-264, 1976; Мигата!и апй Рир, ВюсЫт. ВюрЬук. Ас!а, 242, 203-208, 1971; Мигата!и апй Рир, ВюсЫт. ВюрЬук. Ас!а, 268, 221-224, 1972; ОЬпо е! а1., ТЬготЬ. Кек., 19, 579-588, 1980; Мигата!и е! а1., Норре-8еу1ег'к Ζ. РЬукю1. СЬет., 363, 203-211, 1982; §а!оЬ е! а1., СЬет. РЬагт. Ви11., 33, 647-654, 1985; Тепо е! а1., СЬет. РЬагт. Ви11., 39, 2930-2936, 1991).

Первые описанные селективные конкурентные ингибиторы РК (Окато!о е! а1., ТЬготЬ. Кек., §ирр1. VIII, 131-141, 1988) были получены на основе аргинина или фенилаланина, данные ингибиторы РК имеют значения К₁ приблизительно 1 мкМ. Несколько статей, посвященных разработке конкурентных ингибиторов РК, опубликованы Окайа с соавт., наиболее активные соединения, полученные на основе транс4-аминометилциклогексанкарбонил-РЬе-4-карбоксиметиланилида, имеют значения константы ингибирования приблизительно 0,5 мкМ (Окайа е! а1., Вюро1утетк, 51, 41-50, 1999; Окайа е! а1., 2000, Ткийа е! а1., 2001). Данные ингибиторы РК характеризуются тем, что имеют относительно высокие значения К₁.

АЪадак-Майт с соавт. описали целый ряд 4-амидиноанилидов, которые являются сильными ингибиторами РК с константами ингибирования приблизительно 1 нМ (патент США № 6472393). Ап!опккоп с соавт. также описали целый ряд амидиновых и гуанидиновых ингибиторов РК в патенте США № 5602253. 5>1иг/еЬесЬег с соавт. описали 4-амидино- и 4-гуанидинобензиламины в качестве ингибиторов РК, некоторые из которых являются ингибиторами фактора Ха (публикация заявки на патент США № 2005/0119190), некоторые из которых оказывают незначительное ингибирующее действие на плазмин (публикация заявки на патент США № 2006/0148901), и некоторые из которых являются двойными ингибиторами плазмина и РК (публикация РСТ № 2008/049595). Данные ингибиторы являются родственными ингибиторам, описанным в настоящей заявке, но отличаются от них своей структурой.

Эуах Согр. разработала селективный ингибитор калликреина плазмы, ЭХ-88 (экаллантид (еса11ап- 2 022121 ΐίάβ), Ка1Ъйот™), для лечения острых приступов при наследственном ангионевротическом отеке. Экаллантид представляет собой маленький рекомбинантный белок, который был идентифицирован с использованием технологии фагового дисплея на основе первого домена Кити ингибитора пути тканевого фактора (ΤΡΡΙ) человека. Экаллантид проходит фазу II клинических испытаний, где изучается возможность его использования для уменьшения потери крови при кардиохирургическом вмешательстве с использованием аппарата искусственного кровообращения (ЬеЬтапп, Ехрей Θρίη. ΒίοΙ. ТНсг.. 8, 1187-1199, 2008).

В настоящее время остается необходимость в низкомолекулярных веществах, подходящих для терапевтического использования, которые обратимо и конкурентно ингибируют плазмин и калликреин плазмы с высокой эффективностью и специфичностью, и в данном изобретении предложены такие соединения. Соответственно, соединения согласно настоящему изобретению являются подходящими для модулирования и/или поддержания гемостаза в различных ситуациях, в частности, в процессе и после хирургического вмешательства с использованием аппарата искусственного кровообращения, трансплантации органов и других обширных хирургических вмешательств. Можно ожидать, что соединения согласно настоящему изобретению в качестве ингибиторов калликреина плазмы также будут снижать высвобождение кинина и тем самым подавлять опосредуемые кинином воспалительные реакции и индуцируемое кинином высвобождение 1ΡΆ из эндотелиальных клеток. Последний эффект позволяет предложить дополнительный механизм подавления фибринолиза.

Сущность изобретения

Найдено, что соединения общей формулы I

где X, К и η являются такими, как определено ниже, являются эффективными селективными ингибиторами плазмина и калликреина плазмы. Соответственно, в настоящем изобретении предложены соединения формулы I, способы получения соединений формулы I и фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы I. В изобретении также предложены способы ингибирования плазмина и/или РК у пациента, способы терапевтической модуляции каскада коагуляции крови и фибринолиза, в частности способы предупреждения и лечения потери крови у пациента путем введения соединений формулы I.

Дополнительно в изобретении предложены способы применения данных соединений в изготовлении лекарств для ингибирования плазмина и/или РК у пациента, лекарств для терапевтической модуляции коагуляционного каскада и фибринолиза, в частности для предупреждения и лечения потери крови у пациента. Субъекты, для лечения которых могут быть использованы композиции согласно изобретению, включают, без ограничения, пациентов с гиперфибринолитическими состояниями, а также пациентов, подвергающихся хирургическим вмешательствам по поводу трансплантации органов и хирургическим вмешательствам на сердце, особенно с использованием аппарата искусственного кровообращения.

В вышеприведенной формуле I X выбран из группы, состоящей из Н, СО₂Н и СО₂К', η находится в диапазоне от 0 до 3 и К выбран из группы, состоящей из фенила, пиридила, тетразолила и пиперидинила, К может быть незамещенным или может быть замещенным и иметь один или более чем один заместитель, такой, как подробно описано ниже.

Подробное описание изобретения

В изобретении предложены соединения, имеющие следующую формулу (I):

и их фармацевтически приемлемые соли, где X выбран из группы, состоящей из Н, СО₂Н и СО₂К'; η на- 3 022121 ходится в диапазоне от 0 до 3 и К представляет собой фенил, пиридил, тетразолил или пиперидинил. Группировка К может быть незамещенной или может быть замещенной и иметь один или более чем один заместитель, выбранный из атома галогена, К', ОК', §К', §=(О)К', §(=О)₂К', δ(=Ο)₂ΝΗΚ', δ(=Ο)₂ΝΚ'₂, ΟΝ, ΝΗ₂, ΝΗΚ', ΝΚ'₂, ΝΗδ(=Ο)₂Κ', ΝΗΟ(=Ο)Κ', ΝΗΟ(=Ο)ΟΚ', ΝΗΟ(=Ο)ΝΗΚ', ΝΗΟ(=Ο)ΝΚ'₂, С(=О)К', С(=О)СН₂ОК', СО₂К', ί’(=Ο)ΝΗΚ' или ί’(=Ο)ΝΚ'< и когда К представляет собой пиридил, данный пиридил может представлять собой пиридин-Ы-оксид. Во всех вышеописанных соединениях каждый К' независимо представляет собой С₁-С₄ алкил с разветвленной или нормальной цепью, циклопропил или СР₃. В контексте данного описания термины фенил, пиридил, тетразолил и пиперидинил относятся как к незамещенным, так и к замещенным системам, если особо не указано, что система является незамещенной.

Согласно предпочтительным вариантам осуществления изобретения η имеет значение 2 или 3. К представляет собой предпочтительно фенил, 4-пиридил или 4-пиперидинил. Особенно предпочтительными являются соединения, у которых К представляет собой незамещенный фенил, незамещенный 4пиридил, незамещенный 4-пиридил-И-оксид, 1-ацетил-4-пиперидинил, 1-тетразолил, 1-изопропионил-4пиперидинил или 1-циклопропанкарбонил-4-пиперидинил.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления изобретения η имеет значение 0 и К представляет собой незамещенный фенил. Согласно другим вариантам осуществления изобретения η имеет значение 2 или 3, К представляет собой 4-пиперидинил и атом азота данного пиперидинила имеет заместитель, выбранный из группы, состоящей из С(=О)К', С(=О)СИ₂ОК', СО₂К', С(=О)ХИК' и С(=О)ЦК'₂.

Типичные примеры соединений согласно изобретению описаны в табл. 1.

Таблица 1

- 4 022121

16	Н	0
1.7	Н	2	-о
18	н	3	*—^Ч\|-0
19	н	2	-О-о
2.1	н	2
2.2	н	2
2.3	н	2	)—\ рсн»
2.4	н	2	у—\ у—ОСНз
2.5	н	2	•<н^н
2.6	н	2	•<Ч'
27	н	3	•мч
28	н	3	•О
29	н	2
210	н	2	•οί

οί

2.11	Н	2	ч	ч-	г
2.12	Н	2	ч	Ч-	г
2.13	Н	3	•—Г	Ν—	о
214	Н	3	ч	3^м-	г

Фармацевтически приемлемые соли соединений согласно изобретению предпочтительно получены путем добавления любой кислоты, которая может быть использована для получения фармацевтических солей. Предпочтительные кислоты, которые могут быть использованы для получения солей, включают НС1, НВг, серную кислоту, фосфорную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, трифторуксусную кислоту и паратолуолсульфоновую кислоту.

Заместители у ароматических или гетероароматических колец К включают, без ограничения, один или более чем один заместитель, выбранный из Р, С1, Вг, I, СР₃, К', фенила, ОН, ОК', ОСР₃, СО₂Н, СО₂К, СОМ ПК'. СОЫК'₂, ΝΗ₂, МНК', МК'₂, М18О₂'. МК'8О₂К', МО₂. 8ОК', 8О₂К', 8О₂МН₂. §О₂МНК', 8О₂МК'₂. СЫ, ОСО₂К', ОСОМНК', ОСОМК'₂. МНСОК', МНСО₂К', МНСОМНК', МНСОМК'₂, МНСО₂К', МК'СО₂К', МК'СОМНК' и МК'СОМК'₂, где каждый К' независимо представляет собой С₁-С₄ алкил с разветвленной или нормальной цепью и циклоалкил.

- 5 022121

Соединения общей формулы I могут быть получены путем последовательного взаимодействия аминокислот с 4-амидинобензиламином, который Ν-защищен по амидиногруппе. Обычно подразумевается, что для защиты амидиногруппы может быть использована любая подходящая Ν-защитная группа, известная в данной области техники. Ν-защитные группы, подходящие для защиты амидиногруппы, включают, без ограничения, 1,2,4-оксадиазол-5-он, Ν-Вос, Ν-СЬ/. Ν-бензилокси и Ν-ацетокси. Группы 1,2,4-оксадиазол-5-он, Ν-бензилокси и Ν-ацетоксиамидино являются предпочтительными, так как они легко могут быть получены из соответствующего нитрила.

Соединения согласно изобретению могут быть получены несколькими путями. Предпочтительные подходы для синтеза соединений включают образование амидных и сульфонамидных связей между предварительно синтезированными компонентами. Для синтеза соединений согласно настоящему изобретению могут быть легко адаптированы методики и подходы, описанные в РСТ-публикации № 2008/049595, которая включена в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

В контексте данного описания выражение активированная карбоновая кислота, полученная из указанной кислоты, относится к производным карбоновых кислот, реакционноспособным в отношении аминов, включающим, без ограничения, активные сложные эфиры, смешанные ангидриды и ацилгалогениды, как хорошо известно в области синтеза пептидов. Подходящие примеры включают Νгидроксибензотриазоловые сложные эфиры, О-ацилированные изомочевины, пентахлор- и пентафторфениловые сложные эфиры, ацилхлориды и смешанные ангидриды со сложными моноэфирами угольной кислоты, но не ограничены ими. Предпочтительные активированные карбоновые кислоты представляют собой смешанный ангидрид, полученный в результате взаимодействия с хлормуравьиной кислоты изобутиловым эфиром или Ν-гидроксибензотриазоловым сложным эфиром.

Согласно первой типичной схеме синтеза амидинозащищенный 4-(аминометил)бензамидин, такой как 4-(аминометил)-Л-ацетоксибензамидин (ί), получают из имеющегося в продаже 4-цианобензиламина (Ыю\уа Эспко К.К., 1араи) в соответствии с методикой, описанной в приложении к ЗсШусшП/ с1 а1., 1. ΒίοΙ. СНст., 279:33613-33622 (2004). Альтернативные амидинозащищенные 4-(метиламино)бензамидины включают соединения (ΐΐ), (ίίί) или (ίν), описанные ниже. Данное вещество Ν-ацилируют с использованием активированной карбоновой кислоты, полученной из соединения А

где Р¹ представляет собой аминозащитную группу и X, и и К являются такими, как описано выше. Р¹ может представлять собой любую аминозащитную группу, известную в данной области техники, включая, без ограничения, Ртос, А11ос, Вос, бензилоксикарбонил (СЬ/), 4-нитробензилоксикарбонил (4-ХО₂-СЬ/), трифторацетил, тритил и бензгидрил. Группы Вос и СЬ/ являются предпочтительными. После ацилирования проводят в любом порядке снятие аминозащитной группы Р¹ и снятие защитной группы у бензамидина. Если Р¹ представляет собой бензилоксикарбонильную или бензгидрильную группу, обе защитные группы могут быть удалены одновременно на стадии гидрогенолиза. При мелкомасштабном синтезе конечную очистку полученных ингибиторов предпочтительно осуществляют путем препаративной обратнофазовой ВЭЖХ. Большие количества очищают путем перекристаллизации соединения или его подходящей кристаллической соли, в соответствии с практикой, установившейся в данной области техники.

Вторая типичная схема синтеза включает ацилирование 4-(аминометил)-И-ацетоксибензамидина (ί) (или альтернативно соединения (ΐΐ), (ίίί), или (ίν)) с использованием активированной карбоновой кислоты, полученной из соединения В

- 6 022121

где Р¹ и Р² представляют собой аминозащитные группы и η и К являются такими, как описано выше. Как и в первой схеме синтеза, Р¹ и Р² могут представлять собой любую аминозащитную группу, известную в данной области техники, включая, без ограничения, Ршое, А11ос, Вое, бензилоксикарбонил (СЬ/). 4нитробензилоксикарбонил (4-ЫО₂-СЬ/), трифторацетил, тритил и бензгидрил. Однако в соответствии с данной схемой Р¹ и Р² являются предпочтительно ортогональными, чтобы Р² можно было удалить, не затрагивая Р¹.

После ацилирования аминозащитную группу Р² отщепляют и полученную в результате деблокированную α-аминогруппу сульфонилируют с использованием сульфонилирующего агента формулы С

где X' представляет собой уходящую группу, предпочтительно С1, и X является таким, как определено выше. После сульфонилирования отщепляют, одновременно или в любом порядке, аминозащитную группу Р¹ и защитную группу у бензамидина так, как описано выше.

Третья, предпочтительная, схема синтеза включает ацилирование 4-(аминометил)-Ыацетоксибензамидина (ί) (или альтернативно соединения (ίί), (ίίί) или (ίν)) с использованием активированной карбоновой кислоты, полученной из соединения Ό

где Р¹ и Р² представляют собой аминозащитные группы, такие как описано выше.

Как и в предыдущей схеме, Р¹ и Р² являются предпочтительно ортогональными, чтобы Р² можно было удалить, не затрагивая Р¹. После ацилирования аминозащитную группу Р² отщепляют с получением промежуточного соединения, такого как приведенное ниже соединение Е

В изобретении также предложены соединения, аналогичные соединению Е, такие как

- 7 022121

где Р¹ представляет собой аминозащитную группу, такую как описано выше, которые могут быть получены в соответствии с данной методикой из описанных выше исходных веществ (ίί)-(ν).

Затем промежуточное соединение Е ацилируют с использованием активированного производного карбоновой кислоты, полученного из соединения Р

где X, η и К являются такими, как определено выше. После удаления Р¹ и защитной группы у амидина, таких как описано выше, получают соединение, имеющее структуру, представленную формулой I.

Четвертый способ включает ацилирование Ν-ацилированного амидинозащищенного 4(аминометил)бензамидина, такого как соединение Е, имеющее следующую структуру:

с использованием активированной карбоновой кислоты, полученной из соединения С, имеющего следующую структуру:

где Р¹, Р², η и К являются такими, как определено выше.

В изобретении предложен ряд соединений формулы С и их предшественников, включая, без огра- 8 022121 ничения, следующие примеры:

где Р¹ и Р² независимо представляют собой Н или аминозащитные группы, такие как Вос, Ртос, С'Ь/ и трифторацетил, и К² может представлять собой Н, метил, этил, трет-бутил или бензил. Предпочтительно когда Р¹ и Р² являются ортогональными, чтобы Р² можно было удалить в присутствии Р¹. Особенно полезными в качестве промежуточных соединений являются соединения формулы

где Р¹ представляет собой Н, бензилоксикарбонил или 4-нитробензилоксикарбонил и К² представляет собой Н, метил, этил, трет-бутил или бензил.

В результате ацилирования соединения Е с использованием активированной кислоты, полученной из соединения О, получают промежуточные соединения, такие как соединения Н, имеющие следующую структуру:

Затем у промежуточного соединения Н отщепляют аминозащитную группу Р², которая предпочтительно ортогональна Р¹, и полученную в результате деблокированную α-аминогруппу сульфонилируют с использованием сульфонилирующего агента формулы С, такого как описано выше. После сульфонилирования отщепляют, одновременно или в любом порядке, аминозащитную группу Р¹, любую защитную группу у К и защитную группу у бензамидина так, как описано выше.

Согласно дополнительным вариантам осуществления изобретения любой из описанных выше способов получения соединений осуществляют с использованием альтернативных защитных групп для амидиновой функциональности. Подходящие защитные группы включают, без ограничения, замещенные и незамещенные Ν-бензилокси, Ν-бензоилокси и Ν-бензилоксикарбонильную группы и 1,2,4-оксадиазол-5оновое гетероциклическое кольцо, которые могут быть легко введены с использованием вместо соединения (ί) альтернативных исходных веществ, таких как приведенные ниже соединения (ίί)-(ν):

- 9 022121

(ίν) (ν)

Соединения согласно изобретению могут быть использованы для терапевтической модуляции каскада коагуляции крови и фибринолиза. В контексте данного описания термин терапевтическая модуляция включает как прокоагулянтную, так и антикоагулянтную активность и ίη νίνο стабилизацию или стимуляцию врожденной гемостатической или фибринолитической активности. В частности, данные соединения могут быть использованы для предупреждения или лечения потери крови. Пациенты, нуждающиеся в таком лечении, включают пациентов, подвергающихся хирургическим вмешательствам, особенно хирургическим вмешательствам (таким как хирургическое вмешательство на сердце), которые включают использование аппарата искусственного кровообращения, и пациентов, страдающих приобретенными или врожденными нарушениями гемостаза или фибринолиза.

В изобретении также предложена фармацевтическая композиция, содержащая одно или более чем одно соединение согласно изобретению в комбинации с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. Такие эксципиенты включают наполнители, связующие агенты, смазывающие вещества, консерванты, воду, буферные агенты и разрыхлители, но не ограничены ими. Композиции могут находиться в форме твердых веществ или жидкостей, приготовленных для перорального введения, или растворов или суспензий, подходящих для парентерального введения. В частности, когда композиции, подходящие для перерастворения в забуференном физиологическом растворе, превращены в порошок или лиофилизированы, может быть использован забуференный физиологический раствор, подходящий для парентерального введения.

В изобретении также предложены способы предупреждения потери крови у пациента, которые включают введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества по меньшей мере одного соединения формулы I. Такие пациенты включают, без ограничения, индивидуумов с гиперфибринолитическими состояниями или пациентов, подвергающихся хирургическим вмешательствам по поводу трансплантации органов и хирургическим вмешательствам на сердце, особенно хирургическим вмешательствам с использованием аппарата искусственного кровообращения. Предпочтительно соединение или соединения вводят в форме фармацевтической композиции, такой, как описано выше. Специалистам в данной области техники понятно, что подходящие дозы обычно зависят от конкретного соединения, пути введения, состояния, которое лечат, и гемостатического статуса пациента. В общем случае суточные дозы в диапазоне от 1 до 500 мг являются эффективными. Эффективные уровни дозы можно определить путем проведения исследований по определению оптимальной дозы, которые выполняются в рамках установившейся практики и хорошо известны специалистам в данной области техники. Введение дозы может быть непрерывным (например, через внутривенный катетер), или стандартные дозы могут вводиться один или более чем один раз в сутки, частота введения определяется необходимостью поддерживать эффективную концентрацию ίη νίνο. Предпочтительно подбирают дозу, которая позволяет поддерживать средний уровень в крови от 0,01 до 10 мкг/мл в течение всего периода, на протяжении которого желательно предупредить потерю крови.

В изобретении дополнительно предложены способы ингибирования плазмина и/или РК человека у нуждающегося в этом пациента, включающие введение указанному пациенту эффективного количества одного или более чем одного соединения формулы I. Эффективные дозы определяют так, как описано выше.

В изобретении также предложено применение соединения формулы I для изготовления лекарств для предупреждения потери крови.

Далее следует описание изобретения с помощью примеров. Следующие примеры приведены с целью подробной иллюстрации и объяснения изобретения. Данные примеры не ограничивают объем настоящего изобретения.

Примеры

Аналитическая ВЭЖХ

Переменная Параметры

Устройство - δΐιίιηαάζιι ЬС-10А 5У51еш

Колонка - колонка РЬепотепех Ьипа С₁₈ 100 А, 5 мкм, 4,6 х 250 мм

- 10 022121

Подвижная фаза - А: 0,1% (об./об.) ТФУ в воде; В: 0,1% (об./об.) ТФУ в метаноле

Методика - линейный градиент: 1% В в минуту

Скорость потока - 1,0 мл/мин

Регистрация длины волны - УФ 220 нм

Температура колонки - 25°С

Вводимый объем - 30 мкл

Препаративная ВЭЖХ

Переменная Параметры

Устройство - δΐιίιηαάζιι ЬС-8А кук!ет

Колонка - колонка РЕепотепех Ьипа С₈(2) 100 А, 5 мкм, 30x250 мм

Подвижная фаза - А: 0,1% (об./об.) ТФУ в Н₂О; В: 0,09% (об./об.) ТФУ в метаноле

Методика - линейный градиент: 45% В в течение 120 мин

Скорость потока - 20,0 мл/мин

Регистрация длины волны - УФ 220 нм

Температура колонки - 30°С

Хиральная ВЭЖХ

Переменная Параметры

Устройство - НР АдйеШ 1100 кук!ет

Колонка - колонка СЫга1рак АЭ-Н 5 мкм, 4,6x250 мм

Подвижная фаза - А: гептан; В: изопропанол

Методика - изократический элюент: 85% А/15% В в течение 45 мин

Скорость потока - 1,0 мл/мин

Регистрация длина волны - УФ 220 нм

Температура колонки - 25°С

Вводимый объем - 30 мкл

Тонкослойная хроматография

Тонкослойную хроматографию (ТСХ) полученных ингибиторов выполняли на силикагелевых планшетах (силикагель 60 Р₂₅₄, Мегск, ЭагткШШ. Сегтапу) с использованием следующих систем подвижной фазы (приведены соотношения растворителей по объему):

н-бутанол/уксусная кислота/вода 4/1/1 н-бутанол/уксусная кислота/этилацетат/вода 1/1/1/1 дихлорметан/метанол (ДХМ/МеОН) 5/1 бензол/ацетон/уксусная кислота (ВАЕ) 27/10/05 петролейный эфир (РЕ)/этилацетат (ЕЕ) 1/1

Масс-спектроскопия

Масс-спектры записывали на Ексциге НСТ Ε8Ι-Μ8 (Вгикег ОаЙошск).

Аббревиатуры

4-АтЬа - 4-амидинобензиламид,

Ас - ацетил,

Вос - трет-бутилоксикарбонил,

БСА - бычий сывороточный альбумин,

Βζ1κ - бензилсульфонил, ίΤζ - бензилоксикарбонил, ίΤζ(4-ΝΘ₂) - (4-нитро)бензилоксикарбонил,

ДХМ - дихлорметан,

0^\·(Τζ1ρΓ) - (К)-2-амино-5-(1Н-тетразол-1-ил)пентановая кислота,

ЭС1у(4-Р1ррг) - (К)-2-амино-5-(пиперидин-4-ил)пентановая кислота,

ЭС1у(4-Ругрг) - (К)-2-амино-5-(пиридин-4-ил)пентановая кислота,

ЭС1у(4-Ругргеп) - (К,Е)-2-амино-5-(пиридин-4-ил)пент-4-еновая кислота,

ПЬА1а(4-Р1р) - (К)-2-амино-4-(пиперидин-4-ил)бутановая кислота,

П/ЬйА1а(4-Руг) - (К,8)-2-амино-4-(пиридин-4-ил)бутановая кислота,

ЭРйд - (К)-2-амино-2-фенилуксусная кислота,

ЭРрд - (К)-2-амино-5-фенилпентановая кислота,

ΌΙΕΑ - диизопропилэтиламин,

ДМФА - Ν,Ν-диметилформамид,

ДМСО - диметилсульфоксид,

ЕС - флэш-хроматография,

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография, мета-СРВА - 3-хлорпероксибензойная кислота,

МС - масс-спектроскопия,

ΝΜΜ - Ν-метилморфолин,

- 11 022121

РуВор - бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония гексафторфосфат,

ТЕА - триэтиламин,

ТФУ - трифторуксусная кислота,

ТГФ - тетрагидрофуран,

ТСХ - тонкослойная хроматография,

ТМ8-С1 - триметилхлорсилан.

Синтез предшественников (Е)-метил 2-(трет-бутилоксикарбониламино)-4-(1-бензилоксикарбонилпиперидин-4-ил)бут-2-еноат

К раствору Вос-а-фосфоноглицина триметилового эфира (20 г, 67 ммоль) в ТГФ (80 мл) добавляли 1,1,3,3-тетраметилгуанидин (8 мл, 64 ммоль) при -78°С и перемешивание продолжали в течение 20 мин. Добавляли 2-(4-бензилоксикарбонилпиперидин)ацетальдегид (16 г, 61 ммоль) и данную смесь перемешивали в течение 1 ч при -78°С и в течение 2 ч при 0°С. Полученный раствор разбавляли этилацетатом, промывали 5% водным раствором ΚΗδΟ₄ и солевым раствором. Органический слой сушили (Ыа₂8О₄) и упаривали под вакуумом. Остаток очищали путем ЕС, используя силикагель 60 (40-63 мкм) и градиент 070% этилацетат в циклогексане, с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 24,7 г (93%, белое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 79,8% В; ТСХ: К_г = 0,58 (РЕ/ЕЕ 1:1); МС, вычислено: 432,2; найдено: 455,0 (Μ+Να)+.

Вос-НА1а(4-Р|р|СЬ/|)-ОМс

В колбу Шленка объемом 100 мл, предварительно помещенную в атмосферу аргона, вносили |Β1ι(Τ.ΌΌχδ.δ)-Εΐ-ύιιρ1ΐ05)|0ΤΓ (167 мг, 0,231 ммоль). Затем добавляли дегазированный метанол (50 мл) и данный раствор перемешивали в течение 5 мин. Соединение 3.1 (10,0 г, 23,1 ммоль) вносили в колбу Шленка объемом 1 л, растворяли в метаноле (450 мл) и перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем растворы субстрата и катализатора переносили с использованием канюли в химический реактор из нержавеющей стали объемом 1 л, предварительно помещенный в атмосферу аргона. Химический реактор герметично закрывали, продували аргоном (три цикла продувания: 1 бар/20 бар (10⁵Па/2-10⁶ Па)) и в заключение аргон заменяли водородом (4 цикла продувания: 1 бар/20 бар (10⁵ Па/2-10⁶Па)). Давление водорода в химическом реакторе доводили до 4 бар (4-10⁵ Па) и начинали перемешивание. Через 18,5 ч давление сбрасывали и выпаривали под вакуумом растворитель. Остаток фильтровали через короткую подушку δί0₂ (20 г, этилацетат/н-гептан = 1:3) и выпаривали под вакуумом растворитель с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 9,7 г (97%).

Аналитическая ВЭЖХ: 78,1% В; ТСХ: К_г = 0,74 (ВАЕ); МС, вычислено: 434,2; найдено: 435,0 (М+Н)+.

Энантиомерная чистота (ее): >99,5% (согласно хиральной ВЭЖХ).

Вос-ЬА1а(4-Р1р-[СЬ/])-ОН

Смесь метилового эфира 3,2 (1,7 г, 3,9 ммоль) в диоксане (10 мл) и 1н. водного раствора ЫОН (10 мл) перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и затем нейтрализовали путем добавления 1н. водного раствора НС1. Растворитель выпаривали под вакуумом, остаток растворяли в этилацетате и данный раствор промывали 5% водным раствором ΚΗδΟ₄ и солевым раствором. Органический слой сушили (Ν;·ι₂δΟ₂) и упаривали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 1,65 г (97%, белое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 77,1% В, ТСХ: К_г = 0,4 (ВАЕ), МС, вычислено: 420,2; найдено: 419,1 (М-Н)^-.

- 12 022121

Вос-НА1а(4-Р1р)-ОМе

К раствору соединения 3.2 (2,2 г, 5 ммоль) в метаноле (350 мл) добавляли при комнатной температуре в атмосфере азота 10% Ρά/С (20 мг). Азот заменяли водородом и смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем смесь продували азотом, фильтровали через слой диатомовой земли (Се1йе)™ и выпаривали под вакуумом растворитель с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 1,5 г (99,8%, масло).

ТСХ: К(= 0,49 (4:1:1); МС, вычислено: 300,2; найдено: 301,0 (М+Н)+.

Вос-ЬА1а(4-Р1р-[0«-4^О₂])-ОМе \

О

I

ΗΝ

Вое (3,5)

К раствору соединения 3.4 (1,5 г, 4,9 ммоль) в ТГФ (25 мл) добавляли 4-нитробензилоксикарбонилхлорид (1,1 г, 4,9 ммоль) и ТЕА (0,85 мл, 6 ммоль) при комнатной температуре и данную смесь перемешивали в течение 1,5 ч, поддерживая значение рН реакционной смеси в диапазоне 8-9 путем добавления ТЕА. Растворитель выпаривали под вакуумом, остаток растворяли в этилацетате, промывали 5% водным раствором КН§О₄ и солевым раствором. Органический слой сушили (№-1₂8О₄) и упаривали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 2,35 г (100%, масло).

Аналитическая ВЭЖХ: 76,7% В; ТСХ: К_£ = 0,89 (5:1); МС, вычислено: 479,2; найдено: 480,0 (М+Н)+.

Вос-НА1а(4-Р1р-|СЪх-4^О₂|)-ОН

Соединение 3.5 (2,5 г, 5,2 ммоль) превращали в указанное в заголовке соединение в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.3.

Выход: 2,1 г (85%).

Аналитическая ВЭЖХ: 73,8% В; ТСХ: К(= 0,6 (5:1); МС, вычислено: 465,2; найдено: 465,9 (М+Н)+. Вос-ПС1у(4-Ругргеи)-ОН

К раствору Вос-аллилглицина (1,65 г, 7,7 ммоль) и 4-иодпиридина (1,38 г, 6,75 ммоль) в ДМФА (40 мл) добавляли раствор NаНСΟз (1,7 г, 20,5 ммоль) в воде (20 мл) и данную смесь инкубировали в течение 10 мин при 70°С. Добавляли ацетат палладия (160 мг, 0,7 ммоль) и данную смесь перемешивали в течение 4 ч при 70°С и затем в течение ночи при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали и выпаривали под вакуумом растворитель. В результате очистки путем РС с использованием силикагеля 60 (40-63 мкм) и градиента 0-38% метанол в ДХМ получали указанное в заголовке соединение.

Выход: 2,1 г (94,6%, желтое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 36,1% В; ТСХ: К_£ = 0,45 (1:1:1:1); МС, вычислено: 292,1; найдено: 292,9 (М+Н)+.

- 13 022121

Н-ЭС1у(4-Ругрг)-ОН х АсОН

К раствору соединения 4.1 (5 г, 17 ммоль) в 90% уксусной кислоте (300 мл) добавляли в атмосфере аргона Рб/С (500 мг). Аргон заменяли водородом и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали и выпаривали под вакуумом растворитель. Полученное маслянистое промежуточное соединение растворяли в 1н. растворе НС1 в уксусной кислоте (5 мл) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривали под вакуумом и остаток растворяли в небольшом количестве метанола. Добавляли диэтиловый эфир и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 3,8 г (83,1%, белое твердое вещество).

ТСХ: К(= 0,12 (1:1:1:1); МС, вычислено: 194,2; найдено: 194,6 (М+Н)+.

Вос-ПС1у(4-Р1ррт)-ОН х АсОН (Л^ 3-34)

К раствору соединения 4.1 (2 г, 6,8 ммоль) в 90% уксусной кислоте (50 мл) и этаноле (100 мл) добавляли в атмосфере аргона 10% Р1₂О (200 мг). Аргон заменяли водородом и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали, растворитель выпаривали под вакуумом и остаток растворяли в небольшом количестве метанола. Добавляли диэтиловый эфир и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 1,5 г (62,1%, аморфное твердое вещество).

ТСХ: К_г = 0,43 (1:1:1:1); МС, вычислено: 300,2; найдено: 301,1 (М+Н)+.

Н-ПС1у(4-Р1ррг[СЬ7-4-ХО₂|)-ОНхНС1

К смеси соединения 4.3 (200 мг, 0,55 ммоль) в 1н. водном растворе ЫаОН (2 мл, 2 ммоль), диоксана (8 мл) и воды (5 мл) добавляли при перемешивании 4-нитробензилоксикарбонилхлорид (120 мг, 0,55 ммоль) при 0°С. Значение рН поддерживали в диапазоне 8-9 путем добавления 1М водного раствора ЫаОН. Перемешивание продолжали в течение 2 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток распределяли между этилацетатом и 5% водным раствором КН§О₄. Органический слой промывали 5% водным раствором КН§О₄ и солевым раствором, сушили (Ыа₂8О₄) и упаривали под вакуумом. Полученное маслянистое промежуточное соединение растворяли в 1н. растворе НС1 в уксусной кислоте (5 мл) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривали под вакуумом и остаток растворяли в небольшом количестве метанола. Добавляли диэтиловый эфир и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 79 мг (41,3%, белое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 55,0% В; МС, вычислено: 379,2; найдено: 380,0 (М+Н)+.

- 14 022121

Н-ЭО1у(Т71рг)-ОИ

К раствору СЕх-ЭОт-ОИ (1,33 г, 5 ммоль) в уксусной кислоте (40 мл) добавляли азид натрия (1,5 г, 23 ммоль) и ортомуравьиной кислоты триметиловый эфир (9,8 мл, 90 ммоль) и данную смесь перемешивали в течение 2 ч при 80°С. Растворитель выпаривали под вакуумом и остаток растворяли в этаноле (3 мл). Добавляли 2н. водный раствор ΝαΟΗ и данную смесь перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Значение рН реакционной смеси доводили до 3 путем добавления 2н. водного раствора ИС1 и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, сушили (Ν;·ιδΟ₄) и выпаривали под вакуумом растворитель. Неочищенное промежуточное соединение растворяли в метаноле (75 мл) и этаноле (75 мл) и затем в атмосфере аргона добавляли 10% Рй/С (50 мг). Аргон заменяли водородом и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали и промывали водой. Органический растворитель выпаривали под вакуумом и остаток лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 740 мг (80%, белый порошок).

МС, вычислено: 185,2; найдено: 186,1 (М+Н)+.

Указанное в заголовке соединение получали из соединения 3.1 (10,0 г, 23,1 ммоль) в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.2, с использованием в качестве катализатора [КЬ(СОЭ)(К,К)-Е1-йирЬо8)]ОТ£.

Выход: 9,8 г (98%, масло).

Аналитическая ВЭЖХ: 78,1% В; ТСХ: К_£ = 0,74 (ВАЕ); МС, вычислено: 434,2; найдено: 435,0 (М+Н)+.

Вос-ЭЬА1а(4-Р1р)-ОМе

Соединение 4.6 (3,2 г, 7,3 ммоль) превращали в указанное в заголовке соединение в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.4.

Выход: 2 г (92%, масло).

ТСХ: К(= 0,67 МС, вычислено: 300,2; найдено: 301,1 (М+Н)+.

Вос-ПЬА1а(4-Р1р-[СЬ7-4-МО₂])-ОМе

Соединение 4.7 (2 г, 6,7 ммоль) превращали в указанное в заголовке соединение в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.5.

Выход: 3,2 г (100%).

Аналитическая ВЭЖХ: 76,5% В; ТСХ: МС, вычислено: 479,2; найдено: 478,6 (М-Н)^-.

- 15 022121

11-1)11А1а(4-Р1р-|СЬ/-4-\О_;|)-О\1е НС1

К раствору соединения 4.8 (3,2 г, 6,7 ммоль) в уксусной кислоте (7 мл), добавляли 1н. НС1 в уксусной кислоте (15 мл) и данную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель частично выпаривали под вакуумом и затем добавляли диэтиловый эфир. Твердое вещество отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 2,2 г (81%, белое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 52,8% В; МС, вычислено: 379,2; найдено: 380,0 (М+Н)+.

Н-ЬА1а(4-Р1р-[СЬ7-4-ЫО₂])-4-оксадиазолон-бензиламид х ТФУ

К раствору соединения 3.6 (1,7 г, 3,7 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавляли ΝΜΜ (0,37 мл, 3,7 ммоль) и хлормуравьиной кислоты изобутиловый эфир (0,48 мл, 3,7 ммоль) при -20°С. Данную смесь перемешивали в течение 10 мин и добавляли 3-[4-(аминометил)фенил]-1,2,4-оксадиазол-5-он НС1 (1,2 г, 4,1 ммоль, СА8 1097196-63-8, \УО/2009/005076) и ΝΜΜ (0,41 мл, 4,1 ммоль). Данную смесь перемешивали в течение 1 ч при -15°С, поддерживая значение рН в диапазоне 8-9 путем добавления ΝΜΜ. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и выпаривали под вакуумом растворитель. Остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно 5% водным раствором КН8О₄, насыщенным водным раствором NаНСОз и солевым раствором. Органический слой сушили (№₂8О₄) и выпаривали под вакуумом растворитель. Полученный продукт суспендировали в ДХМ (5 мл) и добавляли ТФУ (3 мл), данную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель частично удаляли под вакуумом и затем добавляли диэтиловый эфир. Полученный продукт отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 1,8 г (74%, белое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 59,2% В; МС, вычислено: 538,2; найдено: 539,0 (М+Н)+.

Соединения, приведенные в табл. 2, получали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 5.1.

- 16 022121

Таблица 2

№	Структура	Предшественники	МС вычислено/ найдено	Аналитическая ВЭЖХ, %в
5.2	^Н^\|РП Д лг СЬг	а) 3.3 и б) САЗ 1097196-63-8	493,5/494,1 (М+Н)⁺	60,2
5.3	Ч ^Н Λ νη₂ 0&ζ(4-Ν0₂)	а) 3.6 и б) СА8 380237-43-4	554,5/555,1 (М+Н)⁺	52,8
5 4	γ υψ-Λ Λ νη₂ ^Ι}Τ СЫ	а) 3.3 и б) САЗ 380237-43-4	509,6/510,1 (М+Н)⁺	57,2

ΒζΙκ-ОРрд-ОН

К смеси ЭРр§ (3 г, 15 ммоль) в 1М водном растворе ЫаОН (15 мл, 15 ммоль), диоксана (100 мл) и воды (30 мл) добавляли одновременно в течение 60 мин раствор Βζΐκ-хлорида (4,4 г, 23 ммоль) в диоксане (10 мл) и 1М водный раствор ЫаОН (25 мл, 25 ммоль) при 0°С. Значение рН поддерживали в диапазоне 8-9 путем добавления 1М водного раствора ЫаОН. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли порциями дополнительное количество Βζΐκ-хлорида (6 г, 31 ммоль) и 1М водного раствора ЫаОН (31 мл, 31 ммоль) при 0°С и поддерживали значение рН в диапазоне 8-9 путем добавления 1М водного раствора ЫаОН. Перемешивание продолжали до тех пор, пока исходное вещество не было полностью израсходовано (согласно ТСХ-анализу). Растворитель выпаривали под вакуумом и остаток распределяли между этилацетатом и 5% водным раствором КН8О₄. Органический слой промывали 5% водным раствором КН8О₄ и солевым раствором, сушили (Ыа₂8О₄) и упаривали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 4 г (75%, белое твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 69,3% В; МС, вычислено: 347,1; найдено: 346,3 (М-Н)^-.

(3 -МсООС)В/.1з-ЭРру-ОН

К суспензии ЭРрд (1,3 г, 6,7 ммоль) в сухом ДХМ (90 мл) добавляли ТМ8-С1 (2 мл, 15,7 ммоль) и ΌΙΕΑ (2,6 мл, 15 ммоль) при комнатной температуре и данную смесь при перемешивании подвергали дефлегмации в течение 1 ч. Полученный прозрачный раствор охлаждали до 0°С и добавляли (3МеООС)Βζ15-хлорид (2 г, 8 ммоль) и ΌΙΕΑ (2,6 мл). Данную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°С и в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривали под вакуумом и остаток растворяли в полунасыщенном водном растворе ЫаНСО₃ (700 мл) и затем экстрагировали этилацетатом. Водный слой подкисляли путем добавления водной НС1 (рН приблизительно 2-3) и экстрагировали этилацетатом. Полученный органический слой промывали 5% водным раствором КН8О₄ и солевым раствором, сушили (Ыа₂8О₄) и упаривали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 2,4 г (88%, аморфное желтое твердое вещество).

- 17 022121

Аналитическая ВЭЖХ: 69,2% В; МС, вычислено: 405,1; найдено: 404,3 (М-Н)^-.

Соединения, приведенные в табл. 3, получали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 6.1 или 6.2.

Таблица 3

№	Структура	Предшественники/ комментарии	МС вычислено/ найдено	Аналити- ческая ВЭЖХ, %В
6.3	О н	о 11	Синтезировали	В	339,1/	38,6
	СЛЛ	ΌΗ	соответствии	с	340,2 (М+Н)⁺
			описанной выше
		Сл
		методикои синтеза
			соединения 6.1	€
			использованием :
			а) Βζίδ-Οΐ и б) соединения 4.5.
6.4	о н	О и	Синтезировали	В	348,1/	33,6
	ст	^ОН	соответствии	с	348,9 (М+Н)⁺
		\ί^,	описанной выше
		СА
			методикои синтеза
			соединения 6.1	с
			использованием :
			а) Βζίδ-Οΐ и б) соединения 4,2 Очищали путем РС.
6.5		о 11	Синтезировали	в	334,1/	31,2
	от	0ΌΗ	соответствии	с	334,9 (М-Н)'
		о	описанной выше
		г·.	методикой синтеза
			соединения 6.1	с
			использованием :
			а) Βζίδ-Ο и б) о,1_ЬА1а(4-Руг). Очищали путем РС.

- 18 022121

6.6	он ΐ СП'Й Γ-<^Ν'·0Βζ{4-ΝΟ₂)	Синтезировали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 6.1 с использованием : а) Βζ1δ-€1 и б) соединения 4.4.	519,2/ 520,0 (М+Н/	75,9
6.7	он СтгЛ Пи	Соединение 6.6 гидрогенизировали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.4	354,2/ 355,0 (М+Н/	35,7
6.8	он ί	Синтезировали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 6,2 с использованием : а) Βζίδ-Ο и б) ϋΡ1ι§.	305,1/ 306,2 (М+Н/	64,1

Βζΐ5-ΌΗΑίΗ(4-Ρίρ[Ο)ζ-4-ΝΘ₂])-ΘΗ

К раствору соединения 4.9 (2,2 г, 5,3 ммоль) и ΌΙΕΑ (2 мл, 11,7 ммоль) в ДМФА (40 мл) добавляли при перемешивании Βζίδ-хлорид (1,1 г, 5,8 ммоль) при 0°С и значение рН поддерживали в диапазоне 8-9 путем добавления ΌΙΕΑ. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и выпаривали под вакуумом растворитель. Остаток распределяли между этилацетатом и 5% водным раствором КН§0₄, органический слой промывали 5% водным раствором КН§0₄ и солевым раствором, сушили (Ν;·ι₂80₄) и упаривали под вакуумом. Большую часть полученного остатка использовали для синтеза соединения 6.10. Остальное количество полученного остатка (100 мг) гидролизовали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.3 с получением указанного в заголовке соединения.

Выход: 80 мг.

Аналитическая ВЭЖХ: 73,9% В; МС, вычислено: 519,2; найдено: 520,0 (М+Н)+.

Βζΐ5-Ό1ιΑ1;·ι(4-Ρίρ)-0Μο

Гидрогенолиз большей части остатка 6.9 осуществляли в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.4 в присутствии 1н. водной НС1 (5 мл). Остаток растворяли в небольшом количестве метанола. Добавляли диэтиловый эфир и фильтровали с получением указанного в заголовке соединения.

- 19 022121

Выход: 2,3 г (>100%, светло-красное твердое вещество).

Аналитическая ВЭЖХ: 39,8% В; МС, вычислено: 354,2; найдено: 355,0 (М+Н)+.

Затем неочищенное соединение 6.10 использовали в реакциях с хлорангидридами, изоцианатами или ангидридами, например, в соответствии с описанной ниже методикой синтеза соединения 6.11; ре-

К раствору соединения 6.10 (100 мг, 0,21 ммоль) и ΌΙΕΑ (0,08 мл, 0,46 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли при перемешивании пропионовой кислоты хлорангидрид (0,02 мл, 0,23 ммоль) при 0°С и значение рН поддерживали в диапазоне 8-9 путем добавления ΌΙΕΑ. Смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре и выпаривали под вакуумом растворитель. Остаток распределяли между этилацетатом и 5% раствором КН80₄. Органический слой промывали 5% водным раствором КН80₄ и солевым раствором, сушили (Иа₂80₄) и упаривали под вакуумом. Указанное в заголовке соединение получали в результате гидролиза полученного неочищенного промежуточного соединения в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 3.3.

Выход: 74 мг (88%, масло).

Аналитическая ВЭЖХ: 59,3% В, МС, вычислено: 396,5; найдено: 397,3 (М+Н)+.

Таблица 4

№	Структура	Предшественники/ комментарии	мс вычислено/ найдено	Аналити- ческая ВЭЖХ, %В
6.12	ОзА-Ч	а) соединение 6,10 и б) уксусный ангидрид	382,2/381,0 (М-Н)·	60,2
	О А?
6.13	(МАЛ. ί %Α₀	а) соединение 610 и б) хлормуравьиной кислоты метиловый эфир	398,1/396,9 (М-Н)’	58,3

- 20 022121

6.14	ОллА. δ ^-°χΑ·_θ	а) соединение 610 и б) метоксиуксусной кислоты хлорангидрид	412,1/411,1 (М-Н)'	54,1
6 15	СсаА. 5 аА. н	а) соединение 610 и б) метилизоцианат	397,2/398,2 (М+Н)*	55,3
6 16	СаА» δ	а) соединение 6.10 и б) диметилкарбаминовой кислоты хлорангидрид	411,2/409,9 (М-Н)'	57,2
6 17	САА»	а) соединение 6.10 и б) циклопропанкарбоновой кислоты хлорангидрид	408,2/409,1 (М+Н)⁺	57,3
6 18		а) соединение 6.10 и б) масляной кислоты хлорангидрид	410,2/409,1 (М-Н)’	63,7
6.19	СаА. δ	а) 6 .10 и б) изомасляной кислоты хлорангидрид	410,2/411,1 (М+Н)⁺	61,2
6.20	στΥ Υφ	а) соединение 6.7 и б) уксусный ангидрид	396,2/397,1 (М+Н)⁺	63,8
6.21	ОТ?-	а) соединение 6.7 и б) хлормуравьиной кислоты метиловый эфир	411,4/412,2 (М-Н)·	71,1

Синтез ингибиторов В/к-ОРр§-ЬА1а(4-Р1р)-4-АтЬа х 2ТФУ

К раствору соединения 6.1 (160 мг, 0,46 ммоль) и соединения 5.2 (280 мг, 0,46 ммоль) в сухом ДМФА (4 мл) добавляли РуВор (265 мг, 0,5 ммоль) и ΌΙΕΑ (220 мкл, 1,2 ммоль) при 0°С. Данную смесь

- 21 022121 перемешивали в течение 15 мин при 0°С и в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривали под вакуумом, остаток растворяли в этилацетате и промывали последовательно 5% водным раствором ΚΗδΟ₄, насыщенным водным раствором ШИСОз и солевым раствором. Органический слой сушили (ΝίνδΟ.-ι) и выпаривали под вакуумом растворитель. Полученное неочищенное промежуточное соединение растворяли в 90% уксусной кислоте (80 мл) и в атмосфере азота добавляли 10% Рй/С (50 мг). Азот заменяли водородом и смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывали и выпаривали под вакуумом растворитель. Добавляли 1н. раствор ИВт в уксусной кислоте (3 мл) и данную смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляли диэтиловый эфир и полученный неочищенный продукт выделяли путем фильтрования и очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ. В результате лиофилизации получали указанное в заголовке соединение.

Выход: 125 мг (31%, белый порошок).

Аналитическая ВЭЖХ: 54,7% В; МС, вычислено: 646,3; найдено: 647,2 (М+Н)+. В7к-ОО1у(4-Рутрг)-ЬА1а(4-Р1р)-4-АтЬа х 3ТФУ

Соединение 6.4 (260 мг, 0,56 ммоль) подвергали взаимодействию с соединением 5.1 (365 мг, 0,56 ммоль) в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 1.1. После обработки насыщенным водным раствором МаИСО₃ и фильтрования получали неочищенное промежуточное соединение.

В результате гидрогенолиза в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 1.1 получали указанное в заголовке соединение.

Выход: 215 мг (39%, белый порошок).

Аналитическая ВЭЖХ: 31,6% В; МС, вычислено: 647,3; найдено: 648,1 (М+Н)+.

В718-ОО1у(4-Ругрг[МО])-ЬА1а(4-Р1р)-4-АтЬа х 2ТФУ

Соединение 6.4 подвергали взаимодействию с соединением 5.1 в соответствии с описанной выше методикой. К раствору полученного неочищенного продукта (100 мг) в ДХМ (10 мл) добавляли метаСРВА (27 мг, 0,15 ммоль) и данную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Добавляли еще одну порцию мета-СРВА (15 мг, 0,075 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 1 ч. Добавляли 39% водный раствор гидросульфита натрия (0,2 мл) и выпаривали под вакуумом растворитель. Остаток растворяли в этилацетате и промывали насыщенным водным раствором МаИСО₃ и солевым раствором. Органический слой сушили (№-ь8О₄) и выпаривали под вакуумом растворитель. Защищенное промежуточное соединение гидрогенизировали и очищали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 1.1. Полученный неочищенный продукт выделяли путем фильтрования и очищали путем обратнофазовой ВЭЖХ. В результате лиофилизации получали указанное в заголовке соединение.

Выход: 7 мг.

Аналитическая ВЭЖХ: 33,4% В; МС, вычислено: 663,3; найдено: 664,1 (М+Н)+.

Соединения, представленные в табл. 5, получали в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 1.1.

- 22 022121

Таблица 5

№	Структура	Предшественники/ комментарии	МС вычислено/ найдено	ВЭЖХ, %В
1.7	н 0 ΜΗ о н } \|н ОГГЛ\^ ТА	а) соединение 5 1 и б) соединение 6 5 Диастереоизомеры разделяли путек препаративной ВЭЖХ	633,3/634,1 (М+Н)⁺	29,7
1.9	Н А ΝΗ о^н ϊ 1 Η ΟΠ'-Αν-^ ТГ О	Синтезировали из соединения 1.7 в соответствии с описанной выше методикой синтеза соединения 1.8	649,3/650,1 (М+Н	31,2

1.4	Υλ	А- 1 ^н 11	Η ?.,	ΝΗ	а) соединение 5.1 и б) соединение 6.2	704,3/705,2 (М+Н)⁺	51,5
ο
1.3			Η Ν.			Соединение 1/	690,3/691,2	47,1
	°'Ъ	А	ί 0	ΝΗ «χΑ*	гидролизовали в соответствии с описанной выше	(М+Н)⁺
		\|Г	Ύ			методикой синтеза
						соединения 3.3.
1.5			Η			а) соединение 5.1 и	638,3/639,1	37,1
					ΝΗ	б) соединение 6.3	(М+Н)⁺
		° ί	Η	ΑΤι	миг
	сАЛ		ύ^ν ο
		Υν ν=ν
1.6			Η Ά			а) соединение 5.1 и	604,7/605,2	41,9
		ί			ΝΗ	б) соединение 6 8	(М+Н)⁺
		V	γ^Η 0	X)	’ТШг
	к	)
2.9			Η Ά			а) соединение 5.3 и	639,4/640,2	34,1
			?		νη₂	б) соединение 6 9	(М+Н)⁺
	О н 0ΤΊ	V	0	X)	^ΝΗ
		5 Η

- 23 022121

- 24 022121

26	н	а) соединение 5.1 и б) соединение 6.16	710,4/711,2 (М+Н)⁺	43,4
ОХ'	§ мА 1	у _т ΑχΑ О
2.10			н \|Л	а) соединение 5.3 и	707,4/708,2	44,5
	ох'	'Л	У ΝΗ φιΟΤ”' О	б) соединение 6 17	(М+Н)⁺
		У
2,12			н А	а) соединение 5.3 и	709,4/710,2	50,1
	ОХ	0	У ΝΗ АсА О	б) соединение 6.18	(М+Н)⁺

2.11			н А	а) соединение 5.2 и	709,4/710,2	50,5
		0	У ΝΗ ςοΑ О	б) соединение 6.19	(М+Н)⁺
	ТЕ
2.8			н Ί	а) соединение 5.3 и	653,4/645,3	35,8
	ОХ-	ф:	У ΝΗ ψυθΑ	б) соединение 6 6	(М+Н)⁺
			^ΝΗ

2.7	н .Ν.	а) соединение 5.3 и б) соединение 6.20	695,4/696,0 (М+Н)⁺	45,7
ОХ'тА	Ψ » УСА о
2.13		А	а) соединение 5 3 и	711,4/712,2	52,8
	ОтУ	Υ ΝΗ, φχΧ	б) соединение 6.21	(М+Н)⁺
	т	О

Определение констант ингибирования плазмина человека (Ь плазмин) и калликреина плазмы человека (Ь РК)

Ингибирующее действие в отношении отдельных ферментов определяли с использованием методики, аналогичной ранее описанной методике (5>1иг/еЬескег с1 а1., ί. Меб. Скет., 40, 3091-3099 (1997)). Оп- 25 022121 ределение ингибирования плазмина человека и калликреина плазмы человека проводили с использованием следующей реакционной смеси при 25°С:

200 мкл ТВ§ (0,05 М трисгидроксиметиламинометан; 0,154 М №С1, 2% этанол, рН 8,0);

мкл субстрата (4 мМ, 2 мМ и 1 мМ тозил-С1у-Ρ^ο-^уз-ρNΑ = СНгото/ут РЬ от БОАО для плазмина и 3 мМ, 1,5 мМ и 1 мМ Н-П-Рго-РНе-Агд-ρΝΑ = §2302 от СНготодетх для РК, растворенные в Н2О);

мкл раствора исследуемого соединения в 50% (об./об.) ДМСО/вода;

мкл раствора фермента (плазмин от Са1ЫосНет: 1,7 мЕД/мл в 0,154 М ΝαΟ + 0,1% БСА (мас./об.); калликреин плазмы от Еηζуте КезеагсН ЬаЪ.: 62 нг/мл в 0,154 М Ν;·ιΟ + 0,1% БСА (мас./об.)).

В случае кинетики нулевого порядка реакцию останавливали через 20 мин путем добавления 15 мкл уксусной кислоты (80% об./об.), и оптическую плотность регистрировали при 405 нм с использованием планшет-ридера (МиΗ^зсаη Азсет™ от ТНегто). В случае кинетики псевдопервого порядка скорость реакции после наступления равновесия определяли путем непрерывной регистрации изменения оптической плотности при 405 нм.

Значения К₁ вычисляли путем подгонки параметров соответствующего уравнения скорости для конкурентного ингибирования с использованием программы СгаРН, версия 4. Значения К₁ вычисляли как средние значения на основе данных по меньшей мере трех экспериментов.

Определение констант ингибирования контрольных ферментов

Человеческий активированный белок С (Н аРС): ингибирование человеческого аРС определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием человеческого активированного белка С, полученного от Еηζуте КезеагсН БаЬогаЮпез, при концентрации 2,2 нМ и Н-П-Ьуз(СЪо)-РгоΑ^§-ρNΑ (РеГасНготе РСа) в качестве субстрата, при концентрации 2 мМ, 1 мМ и 0,5 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Человеческий почечный калликреин (Н иКК): ингибирование человеческого иКК определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием человеческого почечного калликреина, полученного от Ьее Вюзо1ийопз, при концентрации 7,5 нМ и Н-^-Vа1-^еи-Α^§-ρNΑ (§-2266) в качестве субстрата, при концентрации 1, 0,5 и 0,25 мМ; результаты представлены в виде значений К₁(выраженных в наномолях).

Субкомпонент з компонента 1 системы комплемента человека (Н С1з): ингибирование человеческого С1з определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием нативного активированного компонента системы комплемента человека С1з, полученного от Са1ЫосНет, при концентрации 29 нМ и Vа1-§е^-Α^§-ρNΑ (§2314) в качестве субстрата, при концентрации 8, 6 и 4 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Субкомпонент г компонента 1 системы комплемента человека (Н С1г): ингибирование человеческого С1г определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием нативного активированного компонента системы комплемента человека С1г, полученного от Са1ЫосНет, при концентрации 100 нМ и Vа1-§е^-Α^§-ρNΑ (§2314) в качестве субстрата, при концентрации 16, 12 и 8 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Человеческий фактор Па (Н РПа): ингибирование человеческого РПа определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием человеческого α-тромбина, полученного от Εη/уте КезеагсН БаЬогаЮпез, при концентрации 0,1 №Н (Национальный институт здоровья) ЕД/мл и Мезά-СНа-С1у-Α^§-ρNΑ (РеГасНготе 1РА) в качестве субстрата, при концентрации 2, 1 и 0,5 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Человеческий фактор Ха (Н РXа): ингибирование человеческого РXа определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием активированного человеческого фактора X, полученного от Εη/уте КезеагсН БаЬогаЮпез, при концентрации 5 мМЕ/мл и МеΟСΟ-ά-СНа-С1у-Α^§-ρNΑ (РеГасНготе РXа) в качестве субстрата, при концентрации 2, 1 и 0,5 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Человеческий фактор XIа (Н РXIа): ингибирование человеческого РXIа определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием активированного человеческого фактора XI, полученного от Εηζуте КезеагсН БаЬогаЮпез, при концентрации 96 нг/мл и Н-^-^уз(СЪο)-Ρ^ο-Α^§-ρNΑ (РеГасНготе РСа) в качестве субстрата, при концентрации 5, 4 и 2 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Человеческий фактор XIIа (Н РXIIа): ингибирование человеческого α-РXIIа определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием активированного человеческого αфактора XII (активированного фактора Хагемана), полученного от Εηζуте КезеагсН БаЬогаЮпез, при концентрации 50 мЕФЕД/мл (единиц согласно ЕФ (Европейской фармакопее)) и СНΑ-С1у-Α^§-ρNΑ в качестве субстрата, при концентрации 2, 1 и 0,5 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Человеческий тканевый активатор плазминогена (Н ΐ-РА): ингибирование человеческого ΐ-РА определяли в соответствии с методикой, описанной в [0092]-[0098], с использованием рекомбинантного чело- 26 022121 веческого тканевого активатора плазминогена (АсШуке®), полученного от ВоеЬтшдет ШдеШеш, при концентрации 290 ЕД/мл и Ме8-й-СЬа-Ο1у-А^§-ρNА (РеГасЬготе 1РА) в качестве субстрата, при концентрации 4, 2 и 1 мМ; результаты представлены в виде значений К₁ (выраженных в наномолях).

Результаты для типичных соединений согласно изобретению приведены в табл. 6.

Таблица 6

- 27 022121

- 28 022121

- 29 022121

- 30 022121

- 31 022121

Дополнительные ссылки.

В следующих ссылках содержится основная информация, которая может быть полезной для понимания существующего уровня техники в той области, к которой относится настоящее изобретение:

- 32 022121

Азкдуа е( αί., ВюсЫт. Вюркуз. Ас(а 438, 250-264, 1976

СоПепеМЦ/. Ьак. С1т. МеА. 99, 76-83, 1982

Οιχοη, Вюскет. А. 55, 170-171, 1953

Епкзкоп е/«/., 7 ТкготЬ. Наетоз(аз1$ 1, 2490-2496, 2003

Рагеей е(аГ,Агт. Ν. Υ. АсаА. &г. 370, 765-784, 1981

Ргапсн ею!., Νε\ν Еп§1. А. МеА. 349, 1703-1712, 2003

Оапер βίαί, Вюогд. МеА. Скет. Ьеи. 9, 301-306, 1999

ОаггеН е1 а!., Верг. Вез. 52, 60-71, 1998

ΟπΗίη, Рте. ΝαίΙ. АсаА. Вес РВА 75, 1998-2002, 1978

Оин1айяоп е( а!., Иа1иге Веаеиз 3, 649-659, 2004

1$оЪе, В!ом! & Уеззе! 12, 135-138, 1981

Кар1ап, В год Нетозиялз ТкготЪ 4, 127-175, 1978

КеШюг с/«/..,/ Вю1. Скет. 265, 18289-18297, 1990

Кейпег апй ЗЬате, ВюскеппзЫу 17,4778-4784, 1978

Κϋηζεί еюА, Вюогд. МеА. Скет. Ьеи., 12, 645-648,2002

Ιηννεοη ¢7 л/ , Рока Настаю!. (Ьсгрсчу! 109, 52-60, 1982

МигатаШ е(а1. Норре-3еу1ег’з Ζ. Ркузю!. Скет. 363, 203-211, 1982

МигатаСи апй Рир, ВюсЫт. Вюркуз. Ас1а 242, 203 -208, 1971

МигатаСи апй Рир, ВюсЫт. Вюркуз. Асю 268, 221-224, 1972

ОЬпо е1а1., ТкготЪ. Вез. 19, 579-588, 1980

Окайа е! αί., Вюогд. МеА. Скет. Ьеи, 10, 2217-2221, 2000

Окайа α а!., Вюро1утегз 51, 41-50, 1999

КаСпоН, ΒΙοοΑ 57, 55-58, 1981

КоЪтзоп апй 5а1аЬ, Апп. Вер. МеА. Скет. 37, 85-94, 2002

5а1ок ею/, Скет. Ркагт. ВиН. 33, 647-654, 1985

ЗсЬесЫег апй Вегдег, Вюскет. Вюркуз. Вез. Сотт. 27, 157-162, 1967

8ИуегЬег§ апй Кар1ап, ΒΙοοΑ 60, 64-70, 1982

ЗШггеЬесЬегеГо/.^гад/юп.7 МеА. Вю1. Вез.,21, 1929-1934, 1994

ЕкиггеБесЬег ίη?/, А МеА. Скет. 40, 3091-3099, 1997

ЗЫггеЬесЬег е( о/., 2Ы Ркагт. РкагтакоЫег. ЬаЬ. Οια%η 122, 240-241, 1983 5искег Н. е! а!., Ркагтагеи/гзске Тес!то!одю, 2пй сЬсяйаЬоп (1991), Оеоге. ТЫете Уег1а§, 8(иР§аг1

Тайа е/αί, ΒιοΙ. Ркагт. ВиН. 24, 520-524, 2001

Тепо е! а! Скет. Ркагт. ВиН 39, 2930-2936, 1991

ТкготЪ. Вез.. 8ирр1. VIII, 131-141, 1988

У&и4а. е/αί, Скет. Ркагт. ВиН. 49, 1457-1463, 2001 \νδΐΙζ, СтяАаиоп, 110,1-19 - 1-26, 2008 νθ 1994/29336 νο 2000/041531 νθ 2000/058346 νθ 2001/096286 νθ 2001/096366 νθ 2002/062829

- 33 022121

ГСО 2002/014349 ГСО 2003/076391 ГСО 2003/076457 ОР 10212555

ЕР 1364960 и§ 6586405 из 5786328

Подразумевается, что примеры и варианты осуществления изобретения, описанные в данной заявке, приведены только в качестве иллюстрации и что возможны различные модификации или изменения, не выходящие за пределы объема изобретения, которые могут быть предложены специалистами в данной области техники и которые следует относить к сущности и сфере действия данной заявки и объема прилагаемой формулы изобретения.

Все документы, статьи и публикации, на которые есть ссылки в данном описании, включая книги, журнальные статьи, руководства, заявки на патенты, опубликованные заявки на патенты и патенты, в прямой форме включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ или его фармацевтически приемлемая соль, где X выбран из Н, СО₂Н и СО₂К', η находится в диапазоне от 0 до 3 и К выбран из фенила, пиридила, тетразолила и пиперидинила, где К возможно замещен одним или более заместителем, выбранным из атома галогена, К', ОК', δΚ', δ=(О)К', δ(=О)₂К', δ(=О)₂NΗК', δ^^Ν^, ΟΝ, ΝΗ₂, ΝΗΚ', ΝΚ'₂, 1МЖ(=О)₂К', КНС(=О)К', NΗС(=О)ОΚ', ΝΗ^^ΝΗΚ', КНС(=О)КК'₂, С(=О)К', С(=О)СН₂ОК', СО₂К', С(=О)ЯНК' и С(=О)ЯК'₂, где, когда К представляет собой пиридил, данный пиридил может представлять собой пиридин-И-оксид, и где каждый К' независимо представляет собой СЕ₃, С₁-С₄ алкил или циклопропил.
2. Соединение по п.1, в котором К выбран из фенила, 4-пиридила, 4-пиридил Ν-оксида и 4пиперидинила.
3. Соединение по п.2, в котором К выбран из незамещенного фенила, незамещенного 4-пиридила, незамещенного 4-пиридил Ν-оксида и незамещенного 4-пиперидинила.
4. Соединение по п.1, в котором η имеет значение 0 и К представляет собой фенил.
5. Соединение по п.1, в котором η имеет значение 2 или 3 и К представляет собой 4-пиперидинил и в котором атом азота указанного пиперидинила имеет заместитель, выбранный из С(=О)К', С(=О)СН2ОК', СО2К', С(=О)ЯНК' и С(=О)ЯК'2.
6. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль.
7. Фармацевтическая композиция для терапевтической модуляции каскада коагуляции крови или фибринолиза, содержащая одно или более соединение по любому из пп.1-6, дополнительно содержащая один или более фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.

- 34 022121
8. Способ терапевтической модуляции каскада коагуляции крови или фибринолиза, включающий введение пациенту эффективного количества композиции по п.7.
9. Способ лечения гиперфибринолитического состояния у пациента, включающий введение указанному пациенту эффективного количества композиции по п.7.
10. Способ контролирования потери крови у пациента, включающий введение указанному пациенту эффективного количества композиции по п.7.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что указанный пациент подвергается хирургическому вмешательству во время трансплантации органов, хирургическому вмешательству на сердце или хирургическому вмешательству с использованием аппарата искусственного кровообращения.
12. Применение соединения по любому из пп.1-6 для изготовления лекарства для терапевтической модуляции каскада коагуляции крови или фибринолиза.
13. Применение соединения по любому из пп.1-6 для изготовления лекарства для предупреждения потери крови.
14. Применение соединения по любому из пп.1-6 для изготовления лекарства для лечения гиперфибринолитического состояния.
15. Применение соединения по любому из пп.1-6 для изготовления лекарства для предупреждения потери крови в процессе хирургических вмешательств во время трансплантации органов, хирургических вмешательств на сердце или хирургических вмешательств с использованием аппарата искусственного кровообращения.