JP2000517300A - キニノゲナーゼ阻害剤としてのジペプチド性ベンズアミジン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）： ［式中、基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶ならびにｌ、ｍおよびｎは明細書中に記載されたものを表す］の化合物、ならびにその製造方法を記載する。新規の化合物は、病気の制圧に適切である。さらに式（ＩＩ）： ［式中、基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶ならびにｌ、ｍおよびｎは請求項１記載のものを表す］の化合物および式（ＩＩＩ）：

Description

【発明の詳細な説明】 キニノゲナーゼ阻害剤としてのジペプチド性ベンズ アミジン 本発明は、新規のベンズアミジン、その製造およびトリプシン類似のセリンプ ロテアーゼ、特にトロンビンおよびキニノゲナーゼ、例えばカリクレインの拮抗 阻害剤としての使用に関する。本発明は、該化合物を有効成分として含有する医 薬品、ならびに該化合物のトロンビン阻害剤、抗凝血剤としておよび抗炎症剤と しての使用にも関する。 トロンビンはセリンプロテアーゼのグループに属し、かつ末端酵素として血液 凝固カスケード中で中心的な役割を果たす。内因性ならびに外因性の凝固カスケ ードは、複数の強化段階を経由してプロトロンビンからのトロンビンの生成につ ながる。トロンビン触媒作用による、フィブリノーゲンからフィブリンへの分割 は、次いで血液凝固および血小板の凝集を導き、これ自体は、血小板因子３およ び凝固因子ＸＩＩＩの結合ならびに一連の高活性メディエイタによりトロンビン 形成を強化する。 トロンビン形成およびトロンビン作用は、白色の動脈内血栓ならびに赤色の静 脈内血栓の発生の際の中心的な現象であり、ひいては薬剤の潜在的に効果的な攻 撃点となりうる。トロンビン阻害剤は、ヘパリンとは反対に、補因子と無関係に 遊離トロンビンの作用と同時に血小板との結合作用を完全に抑制する。これらは 急性期で、経皮経管冠動脈形成（ＰＴＣＡ）およびリーシス後の血栓塞栓の現象 を防止し、かつ抗凝血薬として体外循環（心臓−肺−機械、血液透析）で、使用 される。これらは一般に、例えば外科手術後の血栓症予防のために使用すること もできる。 合成アルギニン誘導体が、プロテアーゼであるトロンビンの活性セリン基と相 互作用することによりトロンビンの酵素活性に影響を与えることが公知である。 その中でＮ末端アミノ酸がＤ形で存在するＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇをベースとす るペプチドは、特に有利であることが判明した。Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ− イソプロピルエステルは、拮抗作用を有するトロンビン阻害剤として記載されて いる（C．Mattson等、Folia Haematol，109,43〜51、1983）。 Ｃ末端アルギニンの、アルデヒドへの誘導は、阻害剤作用の強化につながる。 そのため「活性」セリンのヒドロキシル基をヘミアセタール的に結合する能力の ある数多くのアルギナールが記載されている（ＥＰ１８５３９０）４７９４８９ 、５２６８７７、５４２５２５；ＷＯ９３／１５７５６、９３／１８０６０）。 ペプチド性ケトン、フッ素化アルキルケトンならびにケトエステル、ホウ酸誘 導体、リン酸エステルおよ びα−ケトカルボン酸アミドのトロンビン阻害作用は、同様に前記のセリン−相 互作用で説明することができる（ＥＰ１１８２８０、１９５２１２、３６２００ ２、３６４３４４、４１０４１１、４７１６５１、５８９７４１、２９３８８１ 、５０３２０３、５０４０６４、５３０１６７；ＷＯ９２／０７８６９、９４／ ０８９４１）。 J．Oleksyszyn等によりJ．Med．Chem．37、226〜231(1994)に記載されている ペプチド性４−アミジノフェニルーグリシンホスホネートージフェニルエステル は、その他のセリンプロテアーゼに対して不十分な選択性を有する不可逆的トロ ンビン阻害剤である。 ＤＥ３１０８８１０、ＷＯ９３／１１１５２およびＥＰ６０１４５９には、ア グマチンひいてはアルギニン誘導体が記載されており、これらはセリンプロテア ーゼの活性セリンと相互作用を行うことができない。 ＷＯ９４／２９３３６、ＥＰ０６０１４５９およびＷＯ９５／２３６０９は、 その後の発展を記載しており、この場合、アグマチン基はアリールアミジン基に より置換されている。 キニノゲナーゼは、キニノゲンから血管作用性ペプチド、いわゆるキニン（ブ ラジキニン、カリジンおよびＭｅｔ−Ｌｙｓ−ブラジキニン）を遊離するセリン プロテアーゼである。キニノゲンは、多機能性蛋白質であり、これは凝固のカス ケード反応および炎症で現 れる。阻害剤として、該物質は細胞をシステイン−プ，1985，FEBS Lett．182，310-314）。 重要なキニノゲナーゼは、血漿カリクレイン、組織カリクレインおよびマスト 細胞トリプターゼである。 キニン、例えばブラジキニンおよびカリジンは、血管作用性ペプチドであり、 これは数多くの生物学的プロセスに影響を与える。これらは炎症プロセスで重要 な役割を果たす。血管透過性の向上によりこれらは低血圧および水腫をもたらす 。さらにこれらは極めて有効な発痛オータコイドであり、かつ細胞メディエイタ として喘息、アレルギー性鼻炎および関節炎の病態生理学において重要な意味を 有する（K.D．Bhoela，C.D．Figueroa，K．Worthy，Pharmacological Reviews 1 992，44，(1),1-80）。 炎症プロセスの原因であるメカニズムとは無関係に、血管から循環血液の全て のプロテイン系を含有する液体が滲出する。このことは、血管からの血漿液の滲 出が、喘息、関節炎および炎症による内部疾患のような病気において１つの役割 を果たすことを意味している。特にアレルギー性プロセスではこの場合、マスト 細胞−トリプターゼを遊離する（Salomonsson等、Am．Rev．Respir．Dis.，1992 ，146，1535-1542）。 アルギニン−クロロメチルケトンＨ−（Ｄ）−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＨ₂ ＣｌおよびＨ−（Ｄ）− Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＨ₂−Ｃｌは、KettnerおよびShawにより血漿カリク レイン阻害剤として記載されている（Biochem．1978，17，4778-4784およびMeth ．Enzym．1981，80，826-842）。 ベンズアミジンおよびベンジルアミンの種々の合成誘導体は、血漿カリクレイ ンの阻害剤として有利であることが判明し、その際、ベンズアミジンは実質的に より強力な阻害作用を有している（F．Markward，S．Drawert，P．Walsmann，Bi ochemical Pharmacology 1974，23，2247-2256）。 ＰＫＳＩ−５２７、Ｎ−（トランス−４−アミノメチルシクロヘキシルカルボ ニル）−Ｌ−フェニルアラニン−４−カルボキシメチル−アニリドの塩酸塩は、 前記のキニノゲナーゼのための効果的な阻害剤である（Wanaka，Ohamoto et al. ，Thromb．Res．1990，57(6)，889-895）。 本発明の対象は、式Ｉ： ［式中、基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶な らびにｌ、ｍおよびｎは以下のものを表す： ｌは、０または１、 ｍは、０、１または２、 ｎは、０、１または２、 Ｒは、ＨまたはＣ_{1 〜4}−アルキル−、 Ｒ¹は、ＨＯＯＣ−、Ｃ_{1 〜6}−アルキル−ＯＯＣ−、ベンジル−ＯＯＣ−また は−ＯＨ、 Ｒ²は、Ｈ−、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−またはＲ¹−（ＣＨ₂）ｍ−、 Ｒ³は、Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、これは−ＯＨまたは−ＣＯＯＨによ り置換されていてもよい、 Ｒ⁴は、Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、ＨＯＯＣ−Ｃ_{1 〜4}−アルキレン−、 Ｒ⁵は、Ｃ_{1 〜8}−アルキル−、シクロアルキル−（ＣＲ⁸Ｒ⁹）_r−（ｒ＝０また は１、Ｒ⁸、Ｒ⁹＝Ｈ−、シクロアルキル−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−）、その際 、シクロアルキル基の４つまでのＣＨ₂−基は互いに無関係にＣＲ¹⁰Ｒ¹¹（Ｒ¹⁰ ＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、Ｒ¹¹＝Ｃ_{1 〜4}−アルキル−）により、および ／またはＣＲ⁸Ｒ⁹に結合したシクロアルキル基のＣＨ−基はＣＲ¹²（Ｒ¹²＝Ｃ_{1 〜4} −アルキル−）により置換されていてもよく、および／または環中の１つま たは２つのＣ−Ｃ単結合はＣ＝Ｃ二重結合により置換されていてもよく、 Ｒ⁶は、Ｈ−、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−あるいは Ｒ⁴およびＲ⁵は、一緒になって−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ（Ｒ⁷）−（Ｒ⁷＝Ｈ−、 フェニル−またはシクロヘキシル−）、 Ｒ²およびＲ⁵は、一緒になって−ＣＨ₂−ＣＨ₂−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂ −、その際、１つの水素原子はＣ_{1 〜4}−アルキル−、フェニル−またはシクロ アルキル−により置換されていてもよい］の化合物ならびに生理学的に認容性の 酸とのその塩である。 −ＮＲ⁴−Ｃ（Ｒ⁵Ｒ⁶）−ＣＯ−により記載されるアミノ酸基は、有利には（ Ｄ）−立体配置であり、３，４−ジヒドロプロリンもしくは４，５−ジヒドロピ ペコリン酸は有利には（Ｌ）立体配置である。 式中で、基： が、ＨＯＯＣ−（ＣＨ₂）_t−（ｔ＝１、２または３）、（ＨＯＯＣ−ＣＨ₂）₂− ＣＨ−、（ＨＯ−ＣＨ₂）₂ＣＨ−、ＨＯＯＣ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、Ｈ ＯＯＣ−ＣＨ（ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨ）−、ＨＯＯＣ−ＣＨ（Ｃ_{1 〜4}−アルキル） −、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−ＯＯＣ−ＣＨ₂−、ベンジル−ＯＯＣ−ＣＨ₂−であり、 かつ式中で、基： が、（Ｒ^a、Ｒ^b＝Ｈ）シクロヘキシル−またはＣ_{1 〜4}−アルキルー）（Ｒ^c、Ｒ^d、Ｒ^e 、Ｒ^f、Ｒ^g、Ｒ^h＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、その際、環のＣＨ₂−基は 、１回または２回置換されていてもよい）、 （Ｒⁱ＝フェニル−またはシクロヘキシル−）、 （Ｒ^j＝シクロペンチル−、シクロヘプチルー、１−アダマンチル−、１−ノル ボルニル−、１−ビシクロ[2.2.2]オクチル−、ネオペンチル−、ｔ−ブチル− 、ジイソプロピルメチル−または１−（１，４−シクロヘキサジエニル） を表し、その際、前記の成分が有利にはＤ−立体配置であり、 ｌが、０であり、かつ Ｒが、Ｈ−またはＣＨ₃ である式Ｉの化合物は有利である。 さらに、式中で基：が、ＨＯＯＣ−（ＣＨ₂）_t−（ｔ＝１、２または３）、（ＨＯＯＣ−ＣＨ₂）₂− ＣＨ−、（ＨＯ−ＣＨ₂）₂ＣＨ−、ＨＯＯＣ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、Ｈ ＯＯＣ−ＣＨ（ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨ）−、ＨＯＯＣ−ＣＨ（Ｃ_{1 〜4}−アルキル） −、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−ＯＯＣ−ＣＨ₂−、ベンジル−ＯＯＣ−ＣＨ₂−であり、 かつその際、基： は、 （Ｒ^a、Ｒ^b＝Ｈ、シクロヘキシル−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−）（Ｒ^c、Ｒ^d、Ｒ^e 、Ｒ^f、Ｒ^g、Ｒ^h＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、その際、環のＣＨ₂−基は 、１回または２回置換されていてもよい）、 （Ｒⁱ＝フェニル−またはシクロヘキシル−）、 （Ｒ^j＝シクロペンチル−、シクロヘプチル−、１−アダマンチル−、１−ノル ボルニルー、１−ビシクロ[2.2.2]オクチル−、ネオペンチル−、ｔ−ブチル− 、ジイソプロピルメチル−または１−（１，４−シクロヘキサジエニル） を表し、その際、前記の成分が有利にはＤ−立体配置であり、 ｌが、１であり、かつ Ｒが、Ｈ−またはＣＨ₃ である式Ｉの化合物は、さらに有利である。 式： ［式中、ｌ＝０または１およびＲ＝ＨまたはＣ₁〜Ｃ₄−アルキル、特にＣＨ₃を 表す］の構造要素を有する化合物もまた有利である。 中間化合物として、式ＩＩ： ［式中、基：は、ＨＯＯＣ−（ＣＨ₂）_t−（ｔ＝１、２または３）、（ＨＯＯＣ−ＣＨ₂）₂− ＣＨ−、（ＨＯ−ＣＨ₂）₂ＣＨ−、ＨＯＯＣ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、Ｈ ＯＯＣ−ＣＨ（ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＯＨ）−、ＨＯＯＣ−ＣＨ（Ｃ_{1 〜4}−アルキル） −、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−ＯＯＣ−ＣＨ₂−、ベンジル−ＯＯＣ−ＣＨ₂−であり、 かつ基： は、 （Ｒ^a、Ｒ^b＝Ｈ、シクロヘキシル−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−）（Ｒ^c、Ｒ^d、Ｒ^e 、Ｒ^f、Ｒ^g、Ｒ^h＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、その際、環のＣＨ₂−基は 、１回または２回置換されていてもよい）、 （Ｒⁱ＝フェニル−またはシクロヘキシル−）、 （Ｒ^j＝シクロペンチル−、シクロヘプチル−、１−アダマンチル−、１−ノル ボルニルー、１−ビシクロ[2.2.2]オクチル−、ネオペンチルー、ｔ−ブチル− 、ジイソプロピルメチル−または１−（１，４−シクロヘキサジエニル） を表し、その際、前記の成分は有利にはＤ−立体配置であり、 ｌは、０または１であり、かつ Ｒは、Ｈ−またはＣＨ₃−である］ の化合物は有利である。 さらに中間段階として、式： ［式中、ｌおよびＲは請求項１に記載したものを表し、かつＹはＮ−保護基、Ｎ −末端保護された、または保護されていないアミノ酸またはＨ−を表す］の化合 物は重要である。 式ＩＩＩの有利な化合物は、式中で、 Ｙが、Ｂｏｃ−、Ｂｏｃ−Ｃｈａ−、Ｈ−Ｃｈａ−、Ｂｏｃ−Ｃｈｇ、Ｈ−Ｃ ｈｇまたはＨを表し、 ｌ＝０または１およびＲ＝ＨまたはＣＨ₃を表す化合物である。 以下の物質が特に有利である： ここでは、例中と同様に以下の略号を使用する： amb＝アミジノベンジル Boc＝ｔ−ブチルオキシカルボニル Cha＝シクロヘキシルアラニン Chea＝シクロヘプチルアラニン Chg＝シクロヘキシルグリシン Dch＝ジシクロヘキシルアラニン Dpa＝ジフェニルアラニン Me＝メチル Pyr＝３，４−デヒドロプロリン Dep＝４，５−デヒドロピペコリン酸。 −ＮＲ⁴−ＣＲ⁵Ｒ⁶−ＣＯ−が、シクロヘキシルアラニン基である場合には、 個々の炭素原子を以下のように表す： 式Ｉの化合物は、そのままで、または生理学的に認容性の酸とのその塩の形で 存在していてもよい。そのような酸の例は以下のものである：塩酸、クエン酸、 酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フマル酸 、コハク酸、ヒドロキシコハク酸、硫酸、グルタル酸、アスパラギン酸、ピルビ ン酸、安息香酸、グルクロン酸、シュウ酸、アスコルビン酸およびアセチルグリ シン。 式Ｉの新規の化合物は以下の適応症の際に使用することができる： その病理機構が、直接的または間接的にトロンビンの蛋白分解作用に由来する 病気、 その病理機構が、トロンビンに依存した、レセプタおよびシグナルトランスダ クションの活性化に由来す る病気、 刺激（例えば、ＰＡＩ−１、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、Ｐ−セレクチ ン、ＩＣＡＭ−１、組織因子）または細胞体中での遺伝子発現の阻害（例えば、 平滑筋中でのＮＯ−合成）と平行して現れる病気、 トロンビンのミトゲン作用に由来する病気、 上皮細胞（例えば血管内皮細胞）の、トロンビンに依存した収縮性および透過 性の変化に由来する病気、 トロンビンに依存した、血栓塞栓現象、例えば深い静脈血栓症、肺塞栓症、心 筋梗塞または脳梗塞、心房細動、バイパス閉塞、 播種性血管内血液凝固症候群（ＤＩＣ）、 血栓溶解薬、例えばストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、 ｔ−ＰＡ、ＡＰＳＡＣ、動物の唾液腺からのプラスミノーゲンアクチベーターな らびに全ての前記の物質の組み換え型および突然変異型を用いる混合薬剤投与の 際の再閉塞および再潅流時間の短縮のため、 ＰＴＣＡ後の早期の再閉塞およびその後の再狭窄の出現、 平滑筋細胞の、トロンビンに依存した増殖、 ＣＮＳ中の活性トロンビンの蓄積（例えばＭ．アルツハイマーの際）、 腫瘍成長ならびに腫瘍細胞の付着および転移に対して。 特に新規の化合物は、トロンビンに依存した血栓塞栓症、例えば深い静脈血栓 症、肺塞栓症、心筋梗塞および脳梗塞および不安定なアンギナの治療および予防 のために、さらに播種性血管内血液凝固症候群（ＤＩＣ）の治療のために使用す ることができる。さらに該化合物は、再潅流時間の短縮および再閉塞時間の延長 のために、血栓溶解薬、例えばストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキ ナーゼ、ｔ−ＰＡ、ＡＰＳＡＣおよびその他のプラスミノーゲンアクチベーター との組み合わせ療法のために適切である。 その他の有利な適用領域は、経皮経管冠動脈形成後のトロンビンに依存した、 早期の再閉塞およびその後の再狭窄の防止、トロンビンに誘発された平滑筋細胞 の増殖の防止、ＣＮＳ中の活性トロンビンの蓄積（例えばアルツハイマー症の際 ）の防止、腫瘍抑制および腫瘍細胞の付着および転移につながるメカニズムの防 止である。 新規の化合物は、人工表面、例えば血液透析膜およびこのために必要なチュー ブシステムおよび導管ならびに体外循環の酸素発生器、ステントおよび心臓弁の 被覆のためにも使用することができる。 新規の化合物は、さらに、その病理機構が直接的にまたは間接的にキニノゲナ ーゼ、特にカリクレインの蛋白分解作用に由来する病気の際に、例えば炎症性疾 患、例えば喘息、膵臓炎、鼻炎、関節炎、蕁麻疹およ びその他の内部炎症性疾患の際に使用することができる。 新規の化合物の特別な利点は、プロリンと３，４−デヒドロプロリンとを交換 することにより、およびピペコリン酸と４，５−デヒドロピペコリン酸とを交換 することにより、改善された薬理作用を示し、ひいてはＷＯ９４／２９３３６に 記載されている化合物から区別することができる。 本発明による化合物は、通常の方法で、経口または非経口（皮下、静脈内、筋 肉内、腹腔内、直腸）投与することができる。適用は、スチームまたはスプレー で鼻−咽頭腔部に行ってもよい。 投与量は患者の年齢、状態および体重ならびに適用方法に依存する。通常、１ 人あたりの有効成分の一日量は経口投与の場合、約１０〜２０００ｍｇおよび非 経口投与の場合、約１〜２００ｍｇである。前記の投与量は、１日２〜４回の分 割投与量で、またはデポー剤の形で１日１回投与することができる。 新規の化合物は、慣用の製剤投与形で、固体状または液体状で、例えば錠剤、 フィルム錠剤、カプセル、散剤、粒剤、糖衣錠、座薬、液剤、軟膏、クリームま たはスプレーとして使用することができる。これらのものは通常の方法で製造す る。その際、有効成分は通常の製薬助剤、例えば錠剤バインダー、充填剤、保存 剤、錠剤崩壊剤、流れ調整剤、軟化剤、湿潤剤、分散 剤、乳化剤、溶剤、遅延剤、酸化防止剤および／または噴射ガスを用いて加工す ることができる（H．Sucker et al.:Pharmazeutische Technologie，Thieme-Ver lag，Stuttgart，1978）。このようにして得られた適用形は、有効成分を通常０ ．１〜９９重量％の量で含有している。 実験の部 式Ｉの化合物を図式Ｉ〜ＩＩＩに相応して記載することができ、その際、Ａは 、 を表し、Ｂは、を表し、Ｃは、 を表し、Ｄは、 を表し、かつＥは、図式中に記載のものを表す。基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵ およびＲ⁶ならびにｌ、ｍおよびｎは、前記のものを表す。 成分Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは、有利には予め別個に構成し、かつ適切に保護され た形（図式Ｉ〜ＩＩＩを参照のこと）で使用する。 式Ｉの化合物は、相応して保護された構成要素Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥから出 発して図式Ｉ〜ＩＩＩにより製造することができる。 図式Ｉは、アミンＨ−Ｄ−ＣＮとＮ−保護されたアミノ酸Ｐ−Ｃ−ＯＨとの、 Ｐ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへのカップリング、Ｎ−末端保護基のＨ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへの分 割、Ｎ−保護されたアミノ酸Ｐ−Ｂ−ＯＨのＰ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへのカップリ ング、保護基ＰのＨ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへの分割、引き続き場合により保護され た（Ｐ）−Ａ−Ｕ−構成要素（Ｕ＝脱離基）でのアルキル化または（Ｐ）−Ａ’ −Ｕ（Ｕ＝アルデヒド、ケトン）での還元性アミノ化または適切な（Ｐ）−Ａ” −Ｃ＝Ｃ−誘導体での（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへのマイケル付加による分 子Ｉの直線状の構造を記載している。ニトリル官能基のアミジン基への変換は、 古典的なピンナーの合成（R．Boder，D.G．Neilson，Chem．Rev．1962，61，179 ）を経由して、または中間段階としてイミノチオエステル塩を経由して進行する 、変更を加えたピンナーの合成（H．Vieweg et al.，Pharmazie1984，39，226） を経由して、または直接、A．Eschenmoser Helv．Chimica Acta69（1986）1224 の方法により行う。引き続き分子中にまだ存在する保護基を有利には酸性の加水 分解により分離する。 成分ＤがＨ−Ｄ−ＣＯＮＨ₂として合成中に組み込む場合、保護された中間段 階でアミド官能基のニトリル官能基への脱水を行う。 図式ＩＩは、分子Ｉの直線状の構造を、アルキル化、還元性アミノ化またはＨ −Ｂ−Ｐの、場合により保護された適切な相応するＡ−構成要素に対する（Ｐ） −Ａ−Ｂ−Ｐへのマイケル付加、Ｃ−末端保護基の（Ｐ）−Ａ−Ｂ−ＯＨへの分 離、Ｈ−Ｃ−Ｐとの（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｐへのカップリング、Ｃ−末端保護基 の（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｃ−ＯＨへの分割、Ｈ−Ｄ−ＣＮの、（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｃ− Ｄ−ＣＮへのカップリングおよび前記中間生成物の、図式Ｉと同様の最終生成物 への変換を記載している。 さらに遊離のＮＨ−官能基をＢに有する化合物（Ｐ ）−Ａ−Ｂ−Ｐの場合、該化合物はＣ−末端保護基の分割の前にさらに１つの適 切な保護基を有していなくてはならない。そのつど使用される保護基は互いにオ ルト位でなくてはならない。 Ｈ−Ｄ−ＣＮ−構成要素の代わりに、Ｈ−Ｄ−ＣＯＮＨ₂、Ｈ−Ｄ−Ｃ（ＮＨ ）ＮＨ₂、Ｈ−Ｄ−Ｃ（ＮＰ）ＮＨ₂、Ｈ−Ｄ−Ｃ（ＮＰ）ＮＨＰもまた使用する ことができ、その際、第一の場合にはカップリングした中間生成物（Ｐ）−Ａ− Ｂ−Ｃ−Ｄ−ＣＯＮＨ₂を（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへ脱水する。 図式ＩＩＩは、収束合成による化合物Ｉを表すための極めて効果的な方法を記 載している。相応して保護された成分（Ｐ）−Ａ−Ｂ−ＯＨおよびＨ−Ｃ−Ｄ− ＣＮは、互いにカップリングされ、かつ生じた中間生成物（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｃ− Ｄ−ＣＮを図式Ｉと同様に最終生成物へ変換する。 Ｎ−末端保護基として、Ｂｏｃ、ＣｂｚまたはＦｍｏｃ、有利にはＢｏｃを使 用し、Ｃ−末端保護基は、メチル、ｔ−ブチルおよびベンジルである。複数の保 護基が分子中に存在している場合、該基は同時に分離するべきでないならば、互 いにオルト位でなくてはならない。中間生成物が構成要素Ｃを含有している場合 、Ｃｂｚ−およびベンジル保護基は不適切である。 必要なカップリング反応ならびに保護基の導入および分割の通常の反応は、ペ プチド化学の標準条件により実施する（M．Bodanszky，A．Bodanszky”The Prac tice of Peptide Synthesis”，第２版、Springer Verlag Heidelberg，1994） 。 Ｂｏｃ−保護基はジオキサン／ＨＣｌまたはＴＦＡ／ＤＣＭを用いて、Ｃｂｚ −保護基は水素化分解により、またはＨＦを用いて分離する。エステル官能基の 鹸化は、アルコール性溶剤中またはジオキサン／水中でＬｉＯＨで行う。ｔ−ブ チルエステルは、ＴＦＡで分離する。 反応はＤＣを用いて制御し、その際、通常は以下の溶離剤を使用する： Ａ． ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５ Ｂ． ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９：１ Ｃ． ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８：２ Ｄ． ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／５０％ＨＯＡｃ ４０：１０：５ Ｅ． ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／５０％ＨＯＡｃ ３５：１５：５ カラムクロマトグラフィーによる分離が記載されている場合、この分離はシリ カゲルを介しており、このために前記の溶離剤を使用した。 逆相ＨＰＬＣ分離は、アセトニトリル／水およびＨＯＡｃ緩衝液で実施した。 出発化合物を以下の方法で製造した： 構成要素Ａとしてアルキル化のために例えばα−ブロモ酢酸−ｔ−ブチルエス テル、β−ブロモプロピオン酸−ｔ−ブチルエステル、α−ブロモプロピオン酸 −ｔ−ブチルエステル、γ−ブロモ酪酸−ｔ−ブチルエステル、α−ブロモ酪酸 −ｔ−ブチルエステル、ＴＨＰ−保護されたブロモエタノール、ＴＨＰ−保護さ れたγ−ブロモプロパノール、α−ブロモ−γ−ブチロラクトンを、還元性アミ ノ化のために例えばジヒドロキシアセトン、アセトンジカルボン酸−ジ−ｔ−ブ チルエステルを、およびマイケル付加のために、例えばアクリル酸−ｔ−ブチル エステル、メタクリル酸−ｔ−ブチルエステル、フマル酸−ｔ−ブチルエステル を使用する。前記のｔ−ブチルエステルは、市販されていない場合には、G．Ura y，W．Lindner Tetrahedron 1988，44，4357-62により相応するカルボン酸から 製造する。 Ｂ−構成要素： アミノ酸の一般的な、および特殊な合成に関して文献中に種々の可能性が提供 されている。このための概要は特に、Ｅ１６ｄ巻／第１部−Houben-Weyl,第４０ ６頁以降に記載されている。 しばしば使用される原料はベンゾフェノンイミン酢酸エチルエステル、アセト アミドマロン酸ジエチルエステルおよびイソニトリル酢酸エチルエステルであっ た。 種々のグリシン誘導体およびアラニン誘導体の製造は、例えばイソニトリル酢 酸エチルエステルおよび装用するケトンならびにアルデヒドから出発して行った （H．-J．Praetorius，J．Flossdorf，M.-R．Kula，Chem．Ber．1975，108，307 9参照）。 ２−ノルボルニルグリシン、アダマンチルアラニン、γ−メチルシクロヘキシ ルアラニン、４−イソプロピルシクロヘキシ−１−イルアラニン、４−メチルシ クロヘキシ−１−イル−アラニンおよび４−メチルシクロヘキシ−１−イル−グ リシンの合成は、相応する２−ホルミルアミノ−アクリル酸エチルエステルを経 Chem．1977，1174）、イソシアン酢酸エチルエステルから出発し、それぞれカル ボニル化合物、２−ノルボルナノン、１−ホルミルアダマンタン、１−ホルミル −１−メチル−シクロヘキサン、１−ホルミル−４−イソプロピルシクロヘキサ ン、１−ホルミル−４− メチル−シクロヘキサンおよび４−メチルシクロヘキサノンと一緒に下記の一般 的方法により行われた。 ２−ホルミルアミノアクリル酸エチルエステルの合成のための一般操作方法 ＴＨＦ１５０ｍｌ中のカリウム−ｔ−ブチレート１００ミリモルに、０〜−１ ０℃でＴＨＦ５０ｍｌ中のイソシアン酢酸エチルエステル１００ミリモルの溶液 を滴下した。１５分後に同じ温度でＴＨＦ５０ｍｌ中の相応するカルボニル化合 物１００ミリモルを添加し、反応混合物をゆっくりと室温に上昇させ、かつ溶剤 を回転蒸発器で除去した。残留物を水５０ｍｌ、酢酸１００ｍｌおよびＤＣＭ１ ００ｍｌと混合させ、生成物をＤＣＭで抽出した。ＤＣＭ相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾 燥し、溶剤を回転蒸発器で除去した。ほぼ純粋で析出した生成物は、必要ならば カラムクロマトグラフィーによりシリカゲル上（溶離剤：エーテル／石油エーテ ル混合物）上でさらに精製できた。 ２−ホルミルアミノ−アクリル酸エチルエステルから出発するアミノ酸塩酸塩 の一般的方法 ２−ホルミルアミノ−アクリル酸エチルエステル１００ミリモルを氷酢酸２０ ０ｍｌ中でＰｄ／Ｃ（１０％）−水素を用いて完全に変換するまで水素化した。 次いで、触媒を濾別し、酢酸を可能な限り回転蒸発器で除去し、かつ残留物を中 濃度塩酸２００ｍｌを用いて５時間還流に加熱した。塩酸を回転蒸発器で除去し 、生成物を真空中５０℃で乾燥し、かつ数回エーテルでさらに洗浄した。塩酸塩 は薄く着色した結晶として析出した。 ２−ノルボルナノン１６．５ｇ（１５０ミリモル）から出発して、２−ノルボ ニルグリシン−塩酸塩２６．６ｇが得られた。１−ホルミルアダマンタン１９． ７ｇ（１２０ミリモル）から出発して、アダマンチルアラニン−塩酸塩２６．０ ｇが得られた。１−ホルミル−１−メチル−シクロヘキサン１２．６ｇ（１００ ミリモル）から出発して、γ−メチルシクロヘキシルアラニン−塩酸塩１６．６ ｇが得られた。４−メチルシクロヘキサノン１６．８ｇ（１５０ミリモル）から 出発して、（４−メチル）−シクロヘキシルグリシン塩酸塩２５．９ｇが得られ た。 トランス−１−ホルミル−４−メチルシクロヘキサン１５ｇから出発して、ト ランス−４−メチルシクロヘキシ−１−イル−アラニン−塩酸塩１８ｇが得られ た。 ３，３−ジメチル−１−ホルミルシクロヘキサン９ｇから出発して、３，３− ジメチルシクロヘキシ−１−イル−アラニン−塩酸塩１０ｇが得られた。 合成に必要なアルデヒド、１−ホルミル−３，３−ジメチルシクロヘキサンは 、MoskalおよびLensen（Rec．Trav．Chim．Pays-Bas 1987，106，137-141）に従 って製造した。 ｎ−ヘキサン中のｎ−ブチルリチウムの溶液（７２ｍｌ、１１５ミリモル）を １０分以内に−６０℃で無水ジエチルエーテル２８０ｍｌ中のリン酸ジエチルイ ソシアノメチル（１７ｍｌ、１０５ミリモル）の撹拌溶液に滴下した。生じた懸 濁液を−６０℃で１５分間さらに攪拌し、かつ１０分以内に無水ジエチルエーテ ル１００ｍｌ中の３，３−ジメチルシクロヘキサノン（１３ｇ、１０５ミリモル ）の溶液を添加し、その際、温度を−４５℃以下に保った。反応混合物を０℃と し、この温度で９０分間攪拌し、かつ慎重に３８％塩酸水溶液１５０〜２００ｍ ｌを加えた。完全に加水分解させるために、室温で１５時間、激しく攪拌した。 有機相を分離し、それぞれ２００ｍｌの水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および 飽和塩化ナトリウム溶液を用いて洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾 別し、かつ回転蒸発器で濃縮して溶剤を除去した。得られた残留物をそれ以上精 製しないでアミノ酸の合成のための出発物質として使用した。 Ｂｏｃ−（Ｄ）−α−メチル−シクロヘキシルアラニン Ｂｏｃ−（Ｄ）−α−メチル−Ｐｈｅ−ＯＨ３．４ｇ（１２．２ミリモル）を ＭｅＯＨ１００ｍｌ中、５０℃で、Ａｌ₂Ｏ₃上の５％Ｒｈ２５０ｍｇの存在下で ２４時間、１０バールで水素を用いて水素化した。濾過および溶剤除去の後、Ｂ ｏｃ−（Ｄ）−α−メチル −Ｃｈａ−ＯＨ２．８ｇが得られた。 Ｂｏｃ−（３−Ｐｈ）−Ｐｒｏ−ＯＨは、Ｊ．Ｙ．Ｌ．チュンら(J.Y.L．Chun getal.，Ｊ．Org．Chem．1990，55，270)の方法と同様にして合成した。 Ｂｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−Ｄｃｈ−ＯＨの製造 Ｂｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−Ｄｐａ−ＯＨ（１ミリモル）をＭｅＯＨ １２ｍｌ中で 触媒量の５％Ｒｈ／Ａｌ₂Ｏ₃と一緒に５バールで水素化した。濾過および真空中 での溶剤除去の後に、生成物が定量的収率で得られた。 Ｈ−（Ｄ，Ｌ）−Ｃｈｅａ−ＯＨの製造 シクロヘプチルメタノールとメタンスルホン酸クロリドとから製造されたシク ロヘプチルメチルメタンスルホナート４．０ｇ（１９．３９ミリモル）を、ベン ゾフェノンイミングリシンエチルエステル４．９ｇ（１８．４７ミリモル）、乾 燥した微粉砕炭酸カリウム８．９ｇ（６４．６５ミリモル）および無水アセトニ トリル５０ｍｌ中の臭化テトラブチルアンモニウム１ｇ（３ミリモル）と一緒に １０時間、不活性ガス雰囲気中で還流させながら加熱した。その後、炭酸カリウ ムを濾別し、濾液を蒸発乾固し、粗生成物を直接エタノール４０ｍｌ中の２Ｎ塩 酸２０ｍｌを用いて室温で１．５時間攪拌しながら加水分解した。反応溶液を希 釈した後に、酢酸エステルを用いて酸性範囲内においてベンゾフェノンを抽出し 、引き続きアルカリ性範囲内（ｐＨ＝９）でＨ−（Ｄ，Ｌ）−Ｃｈｅａ−ＯＥｔ をＤＣＭで抽出し、溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、回転蒸発により濃縮し た。収量３．７ｇ、理論値の約９５％。 （Ｄ）−（１，４−シクロヘキサジエン−１−イル）ａｌａ−ＯＨの製造は、 Ｇ．ジビリコフスキら(G.Zivilichovsky，V．Gurvich，J．Chem．Soc．PerkinTr ans I 19，（1995）2509-15)により行った。 Ｈ−（Ｄ，Ｌ）−β，β−Ｍｅ₂Ｃｈａ−ＯＨの製 77，1174-82に従って行った。 上記のアミノ酸は、一般に公知の方法により、水／ジオキサン中のジ−ｔ−ブ チル−ジカーボネートを用いてそれぞれのＢｏｃ−保護形に変換し、引き続き酢 酸エステル／ヘキサン混合物から再結晶するかまたはシリカゲル上のカラムクロ マトグラフィー（溶離剤：酢酸エステル／石油エーテル混合物）により精製した 。 Ｂｏｃ−保護アミノ酸は、Ｂ−構成要素として図表Ｉに従って使用した。 上記のアミノ酸は、Ｂ−構成要素として一部は相当するベンジルエステルにも 変換し、適当な保護されたＡ−構成要素と結合させ、かつまだ遊離のＮ−Ｈ−官 能基を有する化合物を引き続きＢｏｃ−基を用いて保護した。ベンジルエステル 基を脱水素し、かつ構成要素Ａ−Ｂ−ＯＨを結晶化、塩析出ならびにカラムクロ マトグラフィーにより精製した。この経路を、例としてｔ−ＢｕＯＯＣ−ＣＨ₂ −（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈａ−ＯＨについて以下に記載する。 （Ｄ）−シクロヘキシルアラニンベンジルエステルの合成 トルエン２２００ｍｌ中のＤ−シクロヘキシルアラニン−塩酸塩１００ｇ（４ ８１ミリモル）、ベンジルアルコール１０４ｇ（９６２ミリモル）およびｐ−ト ルエンスルホン酸一水和物１１０ｇ（５７７ミリモル）の懸濁液を水分離器を用 いてゆっくりと還流するまで加熱した。温度範囲８０〜９０℃で、塩化水素の発 生ならびに懸濁液の透明溶液への溶解が観察された。水が分離されなくなったら （約４時間）、トルエン５００ｍｌを留去し、反応混合物を一晩冷却し、生じた 残留物を濾別し、かつそれぞれヘキサン１０００ｍｌを用いて２回洗浄した。次 いで、得られた残留物（１９５ｇ）をジクロロメタン２０００ｍｌ中でスラリー 化し、水１０００ｍｌを添加し、攪拌下で５０％カセイソーダを少しづつ加えて ｐＨ９〜９．５に調整した。有機相を分離し、これを２回、それぞれ水５００ｍ ｌを用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し、かつ濾液を濃 縮し、これにより生成物１ １５ｇ（９４％）が透明な油状物として得られた。 Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニルメチル）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニン ベンジルエステル： （Ｄ）−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル１１５ｇ（４４０ミリモル ）をアセトニトリル２０００ｍｌ中に溶解し、室温で炭酸カリウム６０８ｇ（４ ．４０ミリモル）およびブロモ酢酸−ｔ−ブチルエステル９４ｇ（４８４ミリモ ル）を添加し、かつこの温度で３日間攪拌した。炭酸塩を濾別し、さらにアセト ニトリルでさらに洗浄し、母液を濃縮し（３０℃、２０ミリバール）、残留物を メチル−ｔ−ブチルエーテル１０００ｍｌ中に取込み、かつ有機相を５％クエン 酸および飽和炭酸水素ナトリウム溶液を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウ ム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し、濃縮し、かつ得られた油状物（ｌ６８ｇ）を直 接次の反応に使用した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニルメチル）−（Ｄ）−シクロヘ キシルアラニン−ベンジルエステル： 前の合成で得られた油状物（１６８ｇ、４４７ミリモル）をアセトニトリル１ ４００ｍｌ中に溶解し、炭酸カリウム粉末６１８ｇ（４．４７モル）およびジ− ｔ−ブチルジカーボネート１０７ｇ（４９２ミリモル）を添加し、室温で６日間 、攪拌した。炭酸カリウムを吸引濾過し、アセトニトリル約１０００ｍｌで洗浄 し、かつ濾液を濃縮した。所望の生成物２３０ｇが得られた。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニルメチル）−（Ｄ）−シクロヘ キシルアラニン−シクロヘキシルアンモニウム塩： Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチルオキシカルボニルメチル）−（Ｄ）−シクロヘ キシルアラニン−ベンジルエステル１１５ｇを純エタノール１０００ｍｌ中に溶 解し、かつ２５〜３０℃において活性炭上の１０％Ｐｄ９ｇの存在下で２時間、 常圧で水素を用いて水素化した。濾過し、回転蒸発器で溶剤を除去した後に、黄 色の油状物１００ｇ（２６０ミリモル）が得られ、これをアセトン１６００ｍｌ 中に取込み、かつ還流するまで加熱した。加熱浴を取り除き、かつ滴下漏斗を用 いて迅速にアセトン中のシクロヘキシルアミン２７ｇ（２７３ミリモル）の溶液 を加えた。反応混合物を室温に冷却すると、所望の塩が晶出した。固体を濾別し 、アセトン２００ｍｌで洗浄し、最終精製のためにもう１回アセトンから再結晶 した。残留物を真空乾燥室中３０℃で乾燥した後に、所望の塩７０．２ｇが白色 粉末として得られた。 Ｃ−構成要素として使用される（Ｌ）−３，４−デヒドロプロリンは、購入し て入手でき、（Ｄ，Ｌ）−４，５−デヒドロピペコリン酸は、A．Burgstahler， C.E．Aiman，J．Org．Chem．25，(1960)，489またはC ．Herdeis，W．Engel，Arch．Pharm．326，（1993）297に従って製造され、かつ 引き続き（Ｂｏｃ）₂Ｏを用いてＢｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−Ｄｅｐ−ＯＨに変換した 。 Ｄ−構成要素の合成はＤＥ−４４４３３９０に記載されている。 実施例１ Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル− ３，４−デヒドロプロリル−（４−アミジノ）−ベンジルアミド： Ｂｏｃ−３，４−デヒドロプロリル−４−シアノベンジルアミド： Ｂｏｃ−３，４−デヒドロプロリン（４．７ｇ、２２．０ミリモル）および４ −シアノベンジルアミン（４．１ｇ、２４．２ミリモル；ＤＥ−４４４３３９０ ）をジクロロメタン（２５ｍｌ）中に溶解した。該溶液を０℃に冷却し、かつエ チルジイソプロピルアミン（２６．４ｍｌ、１５４ミリモル）を添加した。引き 続き、酢酸エチルエステル中５０％無水プロパンホスホン酸（２３．３ｍｌ、１ １０ミリモル）を徐々に滴加した。０℃で１時間、および室温で３０分間、さら に撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、かつ希釈した硫酸水素ナト リウム溶液（３回）、希釈した炭酸水素ナトリウム溶液（３回）、飽和塩化ナト リウム溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥後、水流真空中で濃縮した。粗 生成物７．４７ｇが得られ た。 ３，４−デヒドロプロリル−４−シアノベンジルアミド： 前記の試験から得られたＢｏｃ−３，４−デヒドロプロリル−４−シアノベン ジルアミド（７．４７ｇ）の粗生成物をジクロロメタン（８８ｍｌ）中に溶解し 、かつエーテル性塩酸溶液（８８ｍｌ、５Ｍ）を添加した。引き続き室温で１． ５時間撹拌した。溶剤を水流真空中で留去した。残留物にジクロロメタンを２回 添加し、かつ溶剤を水流真空中で改めて留去した。引き続きジエチルエーテルと 共に２回撹拌した。粗生成物５．３２ｇが得られた。 Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−ＢＯＣ）−（Ｄ）−シク ロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４−シアノベンジルアミド： ｔ−ＢｕＯＯＣ−ＣＨ₂−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈａ−ＯＨ（７．５９ｇ、 １９．６８ミリモル）およびＨ−Ｐｙｒ−４−シアノベンジルアミド（５．１９ ｇ、１９．６８ミリモル）をジクロロメタン（１００ｍｌ）中に溶解し、かつエ チルジイソプロピルアミン（１２．７２ｇ、９８．４ミリモル）を添加した。該 溶液を０℃に冷却し、かつ酢酸エチルエステル（２０ｍｌ）中５０％無水プロパ ンホスホン酸を２０分で滴加し、０〜１０℃で３時間撹拌後、ジクロロメタン（ １００ｍｌ）で希釈し、１０％硫酸水素ナトリウム溶 液（３回）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２回）および水で洗浄した。硫酸ナ トリウム上で乾燥後、溶剤を水流真空中で留去した。淡褐色の油状物として１３ ．２８ｇが得られた。 Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シク ロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４−アミノチオカルボニルベ ンジルアミド： 前記の試験から得られたｔ−ＢｕＯＯＣ−ＣＨ₂−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈ ａ−Ｐｒｙ−４−シアノ−ベンジルアミド（１３．２８ｇ）をピリジン（７０ｍ ｌ）およびトリエチルアミン（１２ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却し、かつ該溶 液を硫化水素で飽和させた（溶液は緑色に着色した）。引き続き室温で４８時間 撹拌した。過剰の硫化水素を窒素で排除し、かつ溶剤を水流真空中で留去した。 残留物をジエチルエーテルに溶解し、かつ２０％硫酸水素ナトリウム溶液で３回 、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２回）および水で洗浄した。硫酸ナトリウム上 で乾燥後、溶剤を水流真空中で留去した。粗生成物（１４．３ｇ）をフラッシュ クロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール＝５０：１まで ジクロロメタンの勾配）で、精製した。収量：１３．３ｇ（わずかに溶剤を含有 ）。 Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ −Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４ −Ｓ−メチルイミノカルボニルベンジルアミド： 前記の試験から得られたｔ−ＢｕＯＯＣ−ＣＨ₂−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈ ａ−Ｐｙｒ−アミノチオカルボニル−ベンジルアミド（１３．３ｇ）をジクロロ メタン（１３５ｍｌ）中でヨウ化メチル（７．９７ｍｌ、１２６．９０ミリモル ）を添加した。室温で２４時間撹拌後、溶剤を溶剤を水流真空中で留去した。淡 褐色の油状物１５．７３ｇが得られた。 Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シク ロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４−アミジノベンジルアミド 前記の試験から得られたｔ−ＢｕＯＯＣ−ＣＨ₂−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈ ａ−Ｐｙｒ−４−Ｓ−メチルイミノカルボニル−ベンジルアミド塩酸塩（１５． ７３ｇ）をアセトニトリル（１２９０ｍｌ）に溶解し、かつ酢酸アンモニウム（ ３．２５ｇ、４２．３ミリモル）を添加した。引き続き５０℃で１．５時間加熱 した。反応混合物を水流真空中で濃縮し、かつジクロロメタンを添加した。析出 した塩を濾別し、かつ濾液を水流真空中で濃縮した。帯黄色の泡状物１５．１７ ｇが得られた。粗生成物をイオン交換体（Fluka、注文番号００４０２、ポリマ ー担体上のアセテート）を 介して酢酸塩に変換した。収量：１３．３ｇ。 Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル −３，４−デヒドロプロリル−（４−アミジノ）−ベンジルアミド： ｔ−ＢｕＯＯＣ−ＣＨ₂−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈａ−Ｐｙｒ−４−アミジ ノ−ベンジルアミド−ヒドロアセテート（１３．３ｇ）をジクロロメタン（２０ ０ｍｌ）中に溶解し、かつエーテル性ＨＣｌ（４５ｍｌ）を添加した。室温で２ 時間撹拌後、水流真空中で蒸発乾固させた。残留物にジクロロメタンを２回添加 し、かつ溶剤を水流真空中で留去した。粗生成物１１．６ｇが得られた。 粗生成物の一部（３ｇ）をイオン交換体（Fluka、注文番号００４０２、ポリ マー担体上のアセテート）を介して酢酸塩に変換した。こうして得られた生成物 （２．９ｇ）をフラッシュクロマトグラフィーで精製した（シリカゲル、ジクロ ロメタン：メタノール：５０％酢酸＝４０：１０：２を介してジクロロメタン： メタノール：５０％酢酸＝３５：１５：５までジクロロメタン：メタノール＝４ ：１の勾配）。黄色の油状物が得られ、該油状物を水に溶解した。濾過後、濾液 を凍結乾燥した。収量：無色の固体２．１３ｇ。ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：４ ５６。 例１と同様にして以下のものを製造した。 ２． Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（ Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−（４−アミジノ） −ベンジルアミド： ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：４４２。 ３． Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ，Ｌ）−シクロヘプチル アラニル−３，４−デヒドロプロリル−（４−アミジノ）−ベンジルアミド： ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：４７０。 ４． Ｎ−（ヒドロキシカルボニルーメチレン）−（Ｄ）−ｔ−ブチルアラニル −３，４−デヒドロプロリル−（４−アミジノ）−ベンジルアミド： ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：４３０。 ５． Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラ ニル−４，５−デヒドロ−ピペコリル−（４−アミジノ）−ベンジルアミド： ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺）：４７０。 新規の化合物の抗血栓作用をラットの動静脈シャントで示した。この実験でガ ラス毛管を動静脈シャント中で人工トロンボゲン表面として使用し、かつ血栓を 引き起こした。麻酔処理（ウレタン２５％、２×８ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）した ラットを仰向けにして温度 。開放した右頸い動脈および頚静脈に短いポリエチレンカテーテル（Portex、Ｐ Ｅ５０）を移植し、生理ＮａＣｌ溶液で満たし、かつ鉗子で閉鎖した。カテーテ ルの自由な端部をトロンボゲン表面として作用する、長 さ２０．０ｍｍのガラス毛管（内径１．０ｍｍ）により結合する。試験物質の適 用は、ｉ．ｖ．、ｓ．ｃ．、ｐ．ｏ．または輸液として行うことができる。試験 物質または溶剤（対照）を用いた所望のインキュベーション時間の後でシャント をクリップの除去により開いた。シャントを通過する血流はシャント温度の急速 な上昇に導き、これをガラス毛管の中間地点で測定する。室温の体温への上昇は シャントの通過性の指標である。温度をシャントの閉鎖まで連続的に記録する。 シャントの開放の際および実験の終わりに付加的に血液サンプルを血漿中の抗− ＦＩＩａ−活性の測定のために取る。 イヌにおける薬物動態学および凝固パラメータ 試験物質を意識のある雑種犬 へ投与する直前に等張食塩水液に溶解する。適用容量は静脈内ボーラス注射のた めには０．１ｍｌ／ｋｇおよび経口投与のためには１ｍｌ／ｋｇであり、これは 食道ゾンデを介して行う。１．０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与の前ならびに５、１０ 、２０、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０、３００および３６ ０分（必要ならば４２０、４８０分および２４時間後）後に、もしくは４．６４ ｍｇ／ｋｇの経口投与の前ならびに１０、２０、３０、６０、１２０、１８０、 ２４０、３００、３６０、４８０分および２４時間後に、静脈血のサンプル（２ ｍｌ）をクエン酸塩の小管に取る。サンプル採取 後直接、エカリン時間(Ecarinzeit)(ＥＣＴ＝エカリン(ecarin)凝固時間)を全血 液中で測定する。遠心分離による血漿の調製後に、血漿のトロンビン時間および 活性化された部分的なトロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ＝活性化した部分的な トロンボプラスチン時間）をコアグロメータ(Koagulometer)を用いて測定する。 付加的に抗−ＦＩＩａ−活性（ＡＴＵ／ｍｌ）および物質の濃度をその抗−Ｆ ＩＩａ−活性により血漿中で色素産生（Ｓ−２２３８）トロンビンアッセイを用 いて測定し、その際ｒ−ヒルジンおよび試験物質を用いた検量線を使用する。 試験物質の血漿濃度は、薬物動態学的なパラメータの算出の根拠である：最大 血漿濃度の時間（Ｔｍａｘ）、最大血漿濃度；プラズマ半減期、Ｔ_0.5；曲線の 下の面（ＡＵＣ）；試験物質の吸収部分（Ｆ）。 凝固−パラメータ： エカリン時間（ＥＣＴ＝エカリン凝固時間）：クエン酸塩で処理した血液１０ ０μｌを３７℃で２分、コアグロメータ中でインキュベーションする（ＣＬ８、 ７℃）したエカリン試薬（Pentapharm）１００μｌを添加後にフィブリンクロッ トの形成までの時間を測定する。 活性化したトロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ＝活 性化したトロンボプラスチン時間）：クエン酸塩で処理した血漿５０μｌおよび ＰＴＴ試薬５０μｌ（Pathrobin、Behring）５０μｌを混合し、かつ３７℃で２ 分間コアグロメータ中でインキュベーションする（Ｃ 熱（３７℃）した塩化カルシウム５０μｌの添加後に、フィブリンクロットの形 成までの時間を測定する。 トロンビン時間（ＴＴ）：クエン酸塩で処理した血漿１００μｌを３７℃で２ 分間コアグロメータ中でインキュベーションする（ＣＬ８、球形、Bender & Hob ン試薬（Boehringer Mannheim）１００μｌを添加後にフィブリンクロットの形 成までの時間を測定する。 前記の試験で新規の化合物は良好な作用を示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 7/02 Ａ６１Ｐ 11/02 11/02 11/06 11/06 17/00 17/00 19/02 19/02 29/00 29/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 207/22 Ｃ０７Ｄ 207/22 211/78 211/78 Ｃ０７Ｋ 5/00 Ｃ０７Ｋ 5/00 5/02 5/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ， ＪＰ，ＫＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＵＡ，ＵＳ (72)発明者 ヘルムート マック ドイツ連邦共和国 Ｄ―67067 ルートヴ ィッヒスハーフェン ノイシュタッター リング 80 (72)発明者 トーマス プファイファー ドイツ連邦共和国 Ｄ―67459 ベール― イッゲルハイム フォルストシュトラーセ 43アー (72)発明者 ヴェルナー ザイツ ドイツ連邦共和国 Ｄ―68723 プランク シュタット ビスマルクシュトラーセ 22 ベー (72)発明者 トーマス ツィールケ ドイツ連邦共和国 Ｄ―67459 ベール― イッゲルハイム アカツィエンシュトラー セ 12 (72)発明者 ハンス ヴォルフガング ヘフケン ドイツ連邦共和国 Ｄ―67069 ルートヴ ィッヒスハーフェン ダムシュテュッカー ヴェーク 37 (72)発明者 ヴィルフリート ホルンベルガー ドイツ連邦共和国 Ｄ―67434 ノイシュ タット ゴルデナー ヴィンケル 14 【要約の続き】 ［式中、基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶なら びにｌ、ｍおよびｎは請求項１記載のものを表す］の化 合物および式（ＩＩＩ）：［式中、ｌおよびＲは請求項１記載のものを表し、かつ ＹはＮ−保護基、Ｎ−末端保護された、または保護され ていないアミノ酸またはＨを表す］の化合物を記載す る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式Ｉ： ［式中、基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶ならびにｌ、ｍおよびｎは以 下のものを表す： ｌは、０または１、 ｍは、０、１または２、 ｎは、０、１または２、 Ｒは、ＨまたはＣ_{1 〜4}−アルキル−、 Ｒ¹は、ＨＯＯＣ−、Ｃ_{1 〜6}−アルキル−ＯＯＣ−、ベンジル−ＯＯＣ−また は−ＯＨ、 Ｒ²は、Ｈ−、Ｃ₁〜₄−アルキル−またはＲ¹−（ＣＨ₂）ｍ−、 Ｒ³は、Ｈ−、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−、これは−ＯＨまたは−ＣＯＯＨにより置 換されていてもよく、 Ｒ⁴は、Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−、ＨＯＯＣ−Ｃ_{1 〜4}−アルキレン−、 Ｒ⁵は、Ｃ_{1 〜8}−アルキル−、シクロアルキル−（ＣＲ⁸Ｒ⁹）_r−（ｒ＝０また は１、Ｒ⁸、Ｒ⁹＝Ｈ−、 シクロアルキル−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−）、その際、シクロアルキル基の４ つまでのＣＨ₂−基は互いに無関係にＣＲ¹⁰Ｒ¹¹（Ｒ¹⁰＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−ア ルキル−、Ｒ¹¹＝Ｃ_{1 〜4}−アルキル−）により、および／またはＣＲ⁸Ｒ⁹に結合 したシクロアルキル基のＣＨ−基はＣＲ¹²（Ｒ¹²＝Ｃ_{1 〜4}−アルキル−）により 置換されていてもよく、および／または環中の１つまたは２つのＣ−Ｃ単結合は Ｃ＝Ｃ二重結合により置換されていてもよく、 Ｒ⁶は、Ｈ−、Ｃ_{1 〜4}−アルキル−あるいは Ｒ⁴およびＲ⁵は、一緒になって−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ（Ｒ⁷）−（Ｒ⁷＝Ｈ−、 フェニル−またはシクロヘキシル−）、 Ｒ²およびＲ⁵は、一緒になって−ＣＨ₂−ＣＨ₂−または−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂ −、その際、１つの水素原子はＣ_{1 〜4}−アルキル、フェニル−またはシクロア ルキル−により置換されていてもよい］の化合物ならびに生理学的に認容性の酸 とのその塩。 ２．病気の制圧の際に使用するための請求項１記載の式Ｉの化合物。 ３．以下のもの： その病理機構が、直接的または間接的にトロンビンの蛋白分解作用に由来する 病気、 その病理機構が、トロンビンに依存した、レセプタおよびシグナルトランスダ クションの活性化に由来す る病気、 刺激または細胞体中での遺伝子発現の阻害と平行して発現する病気、 トロンビンのミトゲン作用に由来する病気、 上皮細胞の、トロンビンに依存した収縮性および透過性の変化に由来する病気 、 トロンビンに依存した血栓塞栓現象、 播種性血管内血液凝固症候群、 血栓溶解薬での補助薬剤投与の際の再閉塞および再潅流時間の短縮のため、 ＰＴＣＡ後の早期の再閉塞およびその後の再狭窄の出現、 平滑筋細胞のトロンビンに依存した増殖、 ＣＮＳ中の活性トロンビンの蓄積、 腫瘍成長ならびに腫瘍細胞の付着および転移に対する医薬品を製造するための 請求項１記載の式Ｉの化合物の使用。 ４．表面の被覆のための請求項１記載の式Ｉの化合物。 ５．以下のもの： その病理機構が直接的または間接的にキニノゲナーゼ、特にカリクレインの蛋 白分解作用に由来する病気、 炎症性疾患、例えば喘息、膵臓炎、鼻炎、関節炎、蕁麻疹およびカリクレイン が１つの役割を果たすその 他の内部疾患 に対する医薬品を製造するための請求項１記載の式Ｉの化合物の使用。 ６．式： ［式中ｌ＝０または１およびＲ＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキルを表す］の構造断 片を有する化合物。 ７．式： ［式中、式中、基Ｒ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶ならびにｌ、ｍおよび ｎは請求項１記載のものを表す］の化合物。 ８．式：［式中、ｌおよびＲは、請求項１記載のものを表し、かつＹはＮ−保護基、Ｎ− 末端保護された、または保護されていないアミノ酸またはＨ−をあらわす］の化 合物。 ９．式： ［式中、ｌ＝０または１およびＲ＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−を表す］の構 造断片を有するセリンプロテアーゼの阻害剤。 １０．式： ［式中、ｌ＝０または１およびＲ＝Ｈ−またはＣ_{1 〜4}−アルキル−を表す］の構 造断片の、セリンプロテアーゼ阻害作用を有する化合物の全体構造の構成要素と しての使用。