TW442452B - Serine protease inhibitors having an alkynylamino side chain - Google Patents

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442452 A7 B7__ 五、發明説明（1 ) (請先閲讀背面之注f項再填寫本頁) 本發明係關於一具有炔基胺基側鏈之絲胺酸蛋白酶抑 制劑，含彼之醫薬組成物，以及此抑制劑供治療或預防與 凝血酶有關之疾病的用途。 絲胺酸蛋白酶是在血液凝固級聯（cascade)中尤其 扮演重要角色之酶。此蛋白酶群之組員是例如凝血酶，胰 蛋白酶，VI la，IXa，Xa，XIa ，XI la 因 子及蛋白質C。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 凝血酶是會在凝固級聯中規律S後步驟之絲胺酸蛋白 酶。凝血酶之首要功能是裂開血纖維蛋白原以產生血纖維 蛋白，後者因交聯而形成一不溶之凝膠。此外，凝血酶在 級聯早期中藉活化V及VIII因子以規律其產製。其在 細胞程度上亦具有重要作用，在此其作用在特定受體上以 引起血小板集合，內皮細胞活化和纖維母細胞增生。因此 ，凝血酶在止血和血栓形成中具有中央調節角色。因爲凝 血酶之抑制劑可以具有廣範圍之治療應用，故在此領域已 進行廣泛硏究。在絲胺酸蛋白酶之合成抑制劑的發展中， 且更特定地是在凝血酶之含成抑制劑的發展中，對於被蛋 白酶以類似於天然受質者之方式來確認的小的合成肽已漸 增興趣。結果，已製備新的類肽抑制劑，如凝血酶之過渡 態抑制劑。 持續不衰地有對於更有效且更選擇性之絲胺酸蛋白酶 抑制劑之硏究，以得到可以較低劑置投服且具有更少且更 小之嚴重副作用的抑制劑。再者，口部生物可利用性令人 特別地注意。有效的靜脈內凝血酶抑制劑在需要與凝血酶 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 产 442452 g 五、發明説明（2 ) 有關之疾病的治療的急性照顧中，在臨床上是有效的。但 是，特別地，與凝血酶有關之疾病的預防，如心肌梗塞， 血栓及中風需要常期治療，較佳藉口部投以抗凝血劑。 在先前公告中所揭示之大部分的類肽凝血酶抑制劑含 有精胺酸側鏈。凝血酶抑制劑亦可以含有類胺酸側鏈，而 非精胺酸，如 Jones 等人之 J. Enzyme. I.nhibition, !( 1995)，43 - 60所揭示之抑制劑1<—1^6-〇 — (：113 — P r 〇 — Lys — COOH及其衍生物及Lewis等人之 Thrombosis and Haemostais, 74 ( 4)(1995),1107-12 所 揭不之 N — Me_D — Ph e — Pr o — Ly s— X，X 是駿醯胺或銨酸。此外，Brady等人之Biciorganic & Medical Chemistry, 3(1995) ,1063-78描述 D — P h e — Pr o— Ly s —醛酯。其它之凝血酶抑制劑揭示於W〇 9 4 / 2 5 G 5 1，其中賴胺酸或精胺酸側鏈以胺基環 己基部分。已知含有精胺酸或賴胺酸之凝血酶抑制劑的問 題是其具有低的口部生物利用性。 現已發現絲胺酸蛋白酶抑制劑，特別是凝血酶，X a 及VI la抑制劑，其具有炔胺基側鏈，係依式I :

A-B-X-NH-CH-C(0)Y 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------0¾.-I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央樣率局貝工消費合作社印製 ' 4 4 2 4 5 2 a? B7 五、發明説明（3 ) 其中 A是Η，任意經取代之D，L 翔基乙醯基， R 1 » R 1 — 0 - C ( 0 ) -，R 1 - C (〇) —，R1 — SO 2- * R200C - (CHR2) m-s〇E- » R 2 0 0 C — (CHR2) w—，H2NC0 — (CHR2) m —,或一N保謨基，其中R1擇自（1^12C)焼基，

(2 — 12C)烯基，（2-12C)炔基及（3 — 8C )環焼基，這些基團可以任意地被〈3 — 8 c )環焼基， (1_6C)院氧基，酮基 ’ OH，C〇〇h，CF3或 鹵原子取代，且來自（6 — 1 4C)芳基，（7 — 1 5C )芳烷基及（δ — 1 6 )芳烯基，其芳基可以任意地被（ 1一6〇)焼基.，（3-8(^)環燒基，（1 — 6〇)焼 氧基，OH，C00H，CF3或鹵素取代；每一 R2基獨 立示Η或具有與R1相同的意義：m是1 ，2或3 : B 是一鍵，式一 NH-CH〔（CH2 ) PC ( 0 ) 0H〕一 C (0)—之胺基酸或其酯衍生物且p是〇，1 ，2 或 3，_N ( (1-1 2C)烷基—CH2— C0-，—N( (2-12C)烯基）一 CH2-C0 —，— N ((2 — 1 2C)炔基）—CHz—CO —，— N (笮基 )- CH2CO - * D-l - Τ ί q，D-3-Ti q， D — At c »Ai c »D— 1— Pi q >D— 3 — Pi q 或具有疏水性，碱性或中性側鏈之L —或D -胺基酸，其 胺基酸可以是任意被N_ ( 1 — 6 C )烷基取代的；或A 和B —同是R3R4N — CHR5— C (0)—殘基，其中 本紙張尺度適用中國國家檫準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） --------ολ— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

I 4 42 45 2 Α7 Β7 五、發明説明（4 ) R3 和 R4 獨立示 R1，Ri-O — (C〇) _，R1—。（ Ο) -，R S Ο » R 2 0 0 C - { C H R 2 ) S 0 2-，R 20 0 C - (CHR2) „>-，H2NC0 —( CHR2) m—或N_保護基，或R3和R4之一連接至R5 以與其所鍵結之’N — C 〃一同形成5 —或6 —員環，該 環可與一脂族或芳族6員環稠合；且R.5是一疏水性，碱 性或中性側鏈； X是具有疏水性側鏈之L —胺基酸，絲胺酸，蘇胺酸 ，一任意含有一擇自N，0或S之另外雜原子且任意裤（ 1 — 6 C )烷基，（1 一 6 C )烷氧基，爷氧基或酮基取 代之環性胺基酸，或X是—NR2 — CH2— C (0)—或 以下片段 ^

(請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁J

或 ,(ch2)\ -NH-CH ,N-CH2-C(0)- W -NH( /N-CHrC(0)-0 鯉濟部中央標準局貝工消費合作社印製 基，或Y是一擇自 其中n是2 ，3或4 ，且W是CH或N : 其中 Y 是 Η，一 CHF2，— CF3，一 CO — NH — (1 — 6 C)伸烷基—C6H5，— C00R6且 Rs是 H 或 (1 — 6 C )烷基，_C0NR7R8且R7及R8獨立是Η 或（1 _ 6 C )烷基或R 7及R 8—同是（3 _ 6 C )伸烷 _唑，2 -瞎唑啉，2 -苯並瞎唑 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 442452 五、發明説明（5 ) ，2 —噁唑，2 —噁唑啉及2 —苯並噁唑之雜環，該雜環 可以任意地被（1 — 6C)烷基，（1 一 6 C)烷氧基或 酮基所取代； r 是 0，1，2 或 3， 或其前藥或其醫蕖上可接受之鹽是有效而選擇性之抑 制劑。此外，某些本發明化合物在口服後顯示良好之生物 利用性。 本發明化合物有用於治療且預防凝血酶中介及與凝血 酶有關之疾病。這包括多種在其中凝血集聯被活化之血栓 形成的及血栓形成前的狀態，包括但不限於深靜脈血栓形 成，肺栓塞，血栓性靜脈炎，由血栓形成或栓塞所致之.動 脈的閉合，在血管造形術或血栓溶解期間或之後的動脈再 閉合，在動脈受傷或侵入性心臟手續後之再狹窄，手術後 靜脈的血栓形成或栓塞，急性或慢性之動脈硬化，中風， 心肌梗塞，癌症及轉移及神經變性疾病。本發明化合物亦 可在體外血路中，如滲析及手術中所需者作爲抗凝血劑。 本發明化合物亦可作活體外抗凝血劑。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 依本發明之較佳化合物具有式I ，其中X是一具有疏 水性側鏈之L —胺基酸，絲胺酸，蘇胺酸或—NR2_ C Η 2 — C (Ο) — 〇 其它較佳之式I化合物是那些，其中Α如前所定義； B 是一鍵，式—NH — CH〔 （CH2)PC (0) OH〕一 C (Ο) _之胺基酸或其酯衍生物且p是Ο，1 ，2 或 3，— Ν ( (1 — 6C1 烷基）-CH2-C0 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐）

經濟部中央標準局舅工消費合作社印聚 A7 B7 五、發明説明（6 ) ，—N ( (2 — 6C)稀基）—CH2— CO —，—N ( 苄基）- CHs— CO -，D-l— Ti q，D—3 —

Ti q — At c >Ai c *D— 1— Pi q >D— 3 —Pi q或一含有疏水性側鏈之D-胺基酸，其胺基酸可 以任意地被N —（ 1 一 6 C )烷基取代： 或 A 和 B —同是 R3R4N — CHR5 — C (〇)-殘 基： 且X是一任意含有一擇自N，0或S之另外雜原子且 任意地被（1—6C)烷基，（1 一 6C)烷氧基，苄氧

基或酮基取代之環性胺基酸，或X是一 NR2 — CH2_C / (0 ) —或片段

最佳者是式I化合物，其中A是Η，2_羥基-3 — 環己基一丙醯基，9 一羥基-芴—9 —羧基，R1，R1 — S〇2-»R20〇C - (CHR2) m-S〇2，R200C (CHR2) m-，H2NC0 — (CHR2) ™ -或 N - 保 護基，其中R1擇自（1—12C)烷基，（2—12C )烯基，（6 — 14C)芳基，（7 — 15C)芳烷基及 (8 -1 6 )芳烯基；每一 R 2基獨立是Η或具有與R1相 同之意義； 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公嫠） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁}

......S . 4 ^ 442 4 5 2 A7 ________B7 五、發明説明（7 ) B 是一鍵，D_l~Ti Q，d_3— Ti q，D -Atc,Al c ，D— 1~~Piq，D— 3 —：Piq，或 —具有疏水性側鏈之D ~~胺基酸.，骸胺基酸可以任意地被 N — ( 1 — 6 C )烷基取代； 或A 和 B —同是 R3R4N 一 chR5_c (〇)-殘 基： Y 是—C0 — NH — ( χ — 6C)伸烷基 _C6H5, -C Ο 0 R ，— C0NR7R8，或 γ 是一璆自 2 _ 瞎唑 ，2 —哺唑啉’ 2 —苯並_唑，2 —嚼哩，2 —囉哩咐及 2 -苯並囉唑之雜環。 特別佳者是那些化合物，其中A是11，只；1—3〇2 — ，R200C-(CHR2)m—; B 是一鍵，D_l~Ti Q，D— 3— Ti q，d — Atc>Aic,D-l-Diq，D—3— PiQ,或 一具有疏水性側鏈之D -胺基酸； 或 A 和 B —同是 R3R4N — CHR5— C (〇)—, 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 (請先鬩讀背面之注#^項再填寫本頁) 其中至少R3和R4之一是R2〇〇C — (CHR2) n—或 R1— S〇2 —且其它獨立是（1 — 12C)焼基，（2 — 12〇)嫌基，（2 — 12€!)決基，（3 — 8〇：)環焼 基，（7-15C)芳烷基，R1— S〇2—或 R2〇〇c —(C H R 2 ) τη —，且R 5是一疏水性側鏈； Υ 是一 CO — NH — ( 1-6C)伸烷基—C6h5, _C〇〇R6且 R6是 Η 或（1 一 3C)烷基， —C〇NR7R8，尺7及尺3獨立是Η或（1.一 3 C )烷基 本紙張尺度逋用中國國家標率（CNS ) Α4规格（210X297公釐） 經濟部中央標準局舅工消費合作社印製 p 442 45 2 at __B7五、發明説明（8 ) 或尺7和尺8—同是（3 — 5C)伸烷基，或Y是一擇自2 —P塞唑，2 _苯並卩塞唑，2 —噁唑或2 -苯並噁唑之雜環 0 當A是R200C— (CHR2)m—時，較佳地B是 一具有疏水性側鏈之D -胺基酸； .或 A 或 B — 同是 R3R4N — CHR5 - C (0)-殘 基，其中R3和R4至少一者是R2〇〇C — (CHR2)m —且另一者獨立是（1 一 12C)烷基，（3_8C)環 烷基，爷基，R1— 3〇2或尺200(： — (CHR2)m — * 且X是2 _吖丁啶羧酸，脯胺酸，哌可酸，4 一噠唑 烷羧酸，3，4 一去氫脯胺酸，2 —八氫蚓跺羧酸，或一 〔（3 — 8C)環焼基〕— CH2— C (0)—。 最佳者是化合物，其中A是H0〇C — CH2_; B 是 D — Phe，D — Cha，D — Coa，D — Dpa ， p—Ci?— D— Phe ， p— 0 甲基一D— P.he ，p — 0 乙基一0 — ？116，0 — ]^芡6，111 — Cj?-D-Phe ， 3 ， 4 -二一0 甲基一 D-Phe ， D ~ C h g ； 或 A 和 B —同是 R3R4N — CHR5_C (0)—殘 基，其中R3和R4至少一者是H00C_CH2—且另一 者獨立是（1 — 4C)烷基，（1 — 4C)烷基—S〇2 一或 H00C — CH2 —且 R5是（3 _ 8 C )環院基》( 3 — 8C)環烷基（1 — 4C)烷基，苯基，苄基，其任 ---------ο裝— {請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 1T. m r 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 11 p 442452 a? ___B7 五、發明説明（9 ) 意以氯或（1 一 4 C)烷氧基取代。 特別佳的是那些化合物，其中Y是選自2 —卩塞唑，2 一苯並卩塞哩，2 -噁唑或2 一苯並噁唑。 當A是R1 — S〇2_時，較佳地B是一鍵，D - 1一 T 丨 q ,D— 3— Ti Q » D — A t c » A i c，D— 1 -Pi d，D - 3 - Pi Q或一具有疏.水性側鏈之D--胺 基酸； 或 A 和 B — 同是 R3R4N — CHR5- C (0)—殘 基，其中R3和R4至少一者是〇2 —且另一者獨立 是（1 一 1 2C)焼基或 R1_~S〇2—; X是2 一吖丁啶羧酸，脯胺酸，呃可酸，4 一卩塞哩燒 羧酸，3，4 一脫氫-脯胺酸，2-八氫吲躲羧酸或片段 ,(CH' -NH- j -NH-〇U〜^N-CH2-c ⑼ 0 I .... 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 最佳者是那些化合物，其中A是乙基_ S 〇2 —或笮 基—S 0 2 —; B 是一鍵，D — Ph e ’ D — C.ha，D — Coa ’ D — Dpa ，P— C 芡一 D-Phe , p_〇 甲基一 D_ Ph e，p—〇 乙基一D-Ph e，D-N^e，m — Cj-D-Phe ，3 ，4-二一0 甲基一D — Phe ， D - C h g ; 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁〕 -12 - 4 4 2 4 5 2 A7 B7 五、發明説明（1G ) 或 A 和 B —同是 R3R4N — CHR5— C (Ο)—殘 基，其中R3和R4至少一者是乙基一 S 〇2或苄基一S 〇2 _且另一者獨立是（1 _ 1 2 c )烷基或Rl— s〇2一且 R5是（3 — 8C)環燒基’ （3 — 8C)翠焼基（1— ‘ 4C).院基，苯基，笮基，二苯甲川基，該基團可以任意 地被氯或（1 - 4 C )烷氧基取代。最隹者是那些化合物 ，其中 γ 是一CO — NH— CH2— CeHs’ _C0.— NH — CH2CH2-C6H5或-C0NR7R8，R7 及 R8 獨立是Η或（1-3C)烷基或R7和R8—同是（3 — 5C)伸烷基，或Υ是擇自2-睡唑基，2-苯並_唑基 ，2 —噁唑基或2 -苯並噁唑。最佳地，在式I化合物中 r是1 。 在A部分定義中所定義之N _保護基是任何用於肽中 之N —保護基。合適的N -保護基可發現於T. W.

Green and P.G.M. luts: Protective Groups in Organ-i c S y n t h e s i s，S e c o n d E d i t i ο n ( W i 1 e y , N Y , 1 9 9 1 )及於

The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 3E. Gross and J. Meienhofer, Eds., (Academic Press ,N e w Y o r k , 1 9 8 1 )中0 任意經取代之D，L π —羥基乙醯基一詞意謂式 HO_CRaRb— C (0)之基，其中Ra^Rb獨立示Η ，疏水性側基，或尺&和尺13—同形成一 5 —或6 —員環， 其任意與一或二脂族或芳族6 -員環稠合，且5 —或6 — 員環由碳原子和任意之一擇自&，0及S之雜原子所組成 本紙張尺度適用肀國國家橾準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) -13 - A7 B7 4 4 2 4 5 2 五、發明説明（11 ) 。較佳的D，α α —羥基乙醯基是2 -羥基一3 —環己 基一丙醢基一及9 一羥基一芴—9 _羧基。 (請先閣讀背面之注意事項再填寫本頁) (1 — 1 2C)烷基一詞意謂一具有1至1 2碳原子 之分枝或不分枝之烷基，如甲基，乙基，特丁基，異戊基 ，庚基，十二烷基及萁類。較佳之烷基是（1 — 6 C )烷 基，即具1 一 6碳原子者。在R6，R7，及R 8定義中最 佳者是（1 一 3C)烷基，即具1 — 3碳原子者，如甲基 ，乙基，異丙基。（2—12C)烯基是一具有2至12 碳原子之分枝或不分枝之不飽和烴基。較佳者是（2 -6 C )烯基。實例是乙烯基，丙烯基，烯丙基及其類。 (1 - 6 C )伸烷基一詞意謂_具有1 0至6碳原子 之分枝或不分枝之伸烷基，如—（CH2) 且m是1至 6，-CH (CH3) -，- CH (CH3) _ (CH2) -等。在Y定義中較佳的伸烷基是伸乙基和伸甲基。 (2 — 1 2 C )炔基是一含有一個三鍵且具有2至 1 2碳原子之分枝或不分枝之羥基。較佳者是（2 - 6 C )炔基，如乙炔基及丙炔基。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (6 — 1 4C)芳基是6至1 4碳原子之芳族部分。 芳基可以進一步含有一或多個雜原子，如Ν，S或0。芳 基實例是苯基，菓基，（異）喹啉基，芘滿基及其類。最 佳者是苯基。 (7 — 1 5C)芳烷基及（8_I 6C)芳烯基是分 別被一或多個芳基取代之烷基和烯基，其碳原子總數分別 是7至15及8至16。 — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -14 - 442452 A7 B7

η 五、發明說明（12) (1 一 6 C )烷氧基一詞意謂具1 — 6碳原子之烷氧 基，其烷基部分具有先前定義之意義。 (3 _8 C)環烷基意謂一具有3 — 8碳原子之環烷 基，即環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基或環辛 基。環戊基和環己基是較佳的環烷基》 鹵素一詞意請氟，氯，溴或碘。 酯.衍生物一詞意謂任何合適之酯衍生物，較佳地（1 —4 C )烷基酯，如甲基一，乙基—或特丁基酯。 1—及3 — Ti q分別意請1 ，2，3，4一四氫異 喹啉—1 一或—3_羧酸；1 一及3-P i q分別是1 — 及3 -羧基全氫化異瞎啉：At c是2 —胺基四氫化棻一 2 —羧酸；A i c是胺基喆滿羧酸；P h e苯基丙胺酸； Cha是環己基丙胺酸；Dpa是二苯基汚胺酸；Coa 是環辛基丙胺酸；Chg是環己基甘胺酸；Nj? e是正白 胺酸》 疏水性側鏈一詞意謂任意被一或多個（3 - 8 C )環 烷基或（6 — 14C)芳基（其可以含有一雜原子），如 環己基，環辛基，苯基，吡啶基，某基，四氫棻基及其類 所取代之（1 — 1 2 C )烷基，該疏水性側鏈可任意地被 取代基，如鹵素，三氟甲基，低碳烷基（例如甲基或乙基 )，低碳烷氧基（如甲氧基），苯氧基，苄氧基及其類所 取代 在各定義中，經取代一詞意請：被一或多取代基所取 代 15 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部中央擦_扃貝工消費合作社印製 f 4 4 2 4 5 2 A7 __£7_ 五、發明説明（13 ) 具有碱性側鏈之胺基酸是例如，但不限於精胺酸和賴 胺酸，較佳是精胺酸。具有中性側鏈之胺基酸一詞係指胺 基酸如蛋胺酸硼及其類。 環性胺基酸是例如2 —吖丁啶羧酸，脯胺酸，哌可酸 ，：L·—胺基—1—羧基-(3 - 8C)環烷（較佳地4C ，5C及6C) ，4 -哌啶羧酸，4 —.噻唑烷羧酸，3， 4 -去氫-脯胺酸，偶氮脯胺酸，2 —八氫吲跺羧，及其 類。較佳是2_吖丁啶羧酸，脯胺酸，呃可酸，4-_唑 烷羧酸，3，4 一去氫脯胺酸及2-八氫吲跺羧酸。 前藥一詞意謂一化合物，其中式I化合物之脒基被例 如羥基或（1 — 6C)烷氧羰基保護。 本發明進一步包括一種製備式I化合物的方法包括 偶合經合適保護之胺基酸或胺基酸類似物，接著除去保護 基。 依式I之化合物可以以一普通供此種化合物之方式來 製備。具有炔基胺基側鏈之經修飾胺基酸以類似於已知供 其它胺基酸之方法來導入。 就此而論，經Ν α合適保護（若存在有反應性側鏈， 則側鏈被保護）之胺基酸衍生物或肽被活化且在溶液中或 在一固體載劑上偶合至經羧基合適保護之胺基酸上。α — 胺基酸功能之保護通常藉尿烷功能，如對酸不安定之特丁 氧羰基（Boc)，笮氧羰基（Ζ)及經取代之類似物或 對碱不安定之9 —芴基-甲氧羰基（Fmo c )而發生。 乙基亦可藉催化性化作用而除去。其它合適的胺基保護基 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-16 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4 4 2 4 5 2 kl _____B7_ 五、發明説明（14 ) 包括Nps，Bmv，Bpoc，Msc，等。胺基保護 基之良好概覽在 The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3 E. Gross and J. Meienhofer, Eds., (Academic Press, New York, 1981)中給予。駿基之保 護可以藉酯形成作用，如對碱不安定之酯，如甲基一或乙 基酯，對酸不安定之酯，如特丁基酯，或對氫解不安定之 酯如苄基酯而發生。頼胺酸側鏈功能之保護可以藉使用前 述基團來完成。經合適保護之胺基酸或肽的羧基的活化可 以藉疊氮化物，混合之酸酐，活性酯或碳化二醯亞化方法 ，特別並添加催化性或抑制消旋化化合物，如1 一羥基苯 並三唑，N -羥基丁二醯亞胺，3 —羥基_ 4 一酮基一3 ，4-二氫—1，2，3 —苯並三嗪，N —羥基一 5 —原 冰片烯—2，3 —二羧醯亞胺而發生。參見例如The Peptides, Analysis, Sythesis，Biology (見以上）及 Pure and Applied Chera. 59(3), 331-344 (1987)° 可以是自由碱形式之本發明化合物可以醫藥上可接受 之鹽形式由反應混合物中離析出。醫藥上可接受之鹽亦可 以藉著以有機或無機酸，如氫氯酸，氫溴酸，氫碘酸，硫 酸，磷酸，乙酸，丙酸，乙醇酸，馬來酸，丙二酸，甲燒 磺酸，富馬酸，丁二酸，酒石酸，檸檬酸，苯甲酸和抗壞 血酸來處理式I之自由碱而得到。 本發明之化合物可以具有一或多個不對稱碳原子，且 因此可以以純的對映異構物，或對映異構物之混合物或— 含有非對映異構物之混合物形式來得到。供得到純的對映 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂

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V -17 - 442452 μ B7 五、發明説明（15 ) 異構物的方法在此技藝中是習知的，如由光學活性酸和消 旋混合物中得到之鹽的結晶作用，或使用不對稱管柱之層 析術。對非對映異構物而言，可以使用直相或逆相管柱。 本發明化合物可以經腸或非經腸地投服，且對人類而 言，是在0 . 0 0 1 — 1 0 Omg/每公斤體重，較佳地 Ο . 0 1 — 1 0 m g /每公斤體重之每日劑量範圍內。混 以醫藥上合適之輔劑，如標準引證資料Gennaro et al ., Eemington*s pharmaceutical Sciences, (18th e d ,, Mack Publishing Ccimpany, 1990,特別參見 Part 8 : Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture ).中所述者，化合物可壓成固體劑型，如丸劑，錠劑，或 加工成膠襄或坐藥。藉醫藥上合適之液體，化合物可以以 溶液，懸濁液，乳液形式，如用來作爲注射製劑或作爲噴 劑，如一鼻噴劑。 供作爲劑量單位，預期使用塡料，顔料，聚合粘合劑 及其類。通常任何不千擾活性化合物功能之醫藥上可接受 之添加劑可以被使用。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^^1. n n 1 — 1^1 ·-·- H /.....' (請先閲¥面之注意事項再填寫本頁) d- 合適之載劑（組成物可與之一同投服）包括乳糖，澱 粉，纖維素衍生物及其類，或其混合物，其以合適量被使 用° 本發明進一步藉以下實例說明。 實例 —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一 OH，_賴胺炔醯一〇Me 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS) A4規格（210x297公着） -18 - 442452 A7 B7 K本1年τα 五、發明說明（ΐ6) 及一賴胺炔醯-（2一瞎哩基）意謂下式之殘基 ΝΗπ -NH-CH-C(O)-Υ 其中 Y分別是C〇〇H ’ 〇CH3及2 —噻嗤基《 Az t = 2—吖丁陡羧酸；Boc==特丁氧羰基 =苄氧羰基；Bzl=书基。 C b z 實例1 H00C — CH2— D — Cha — P r 〇 -賴朦炔醯—（ 齊 ip W i !才 k 2 —噻唑基） (a) 1 —胺基—4_氯—2 — 丁炔氫氣 1，4 —二氣—2— 丁炔（73 . 8 6 0 0毫升）中。添加六胺且反應混合物 2 . 5小時，而後在5 °C下冷卻2 4小時 出（220克）。錯合物之乙醇（1升） (1 8 0毫升）在室溫下攪拌2 4小時。 濾出且濾液在減壓下濃縮直至結晶開始6 化物 克）溶在氯仿（ 在迴流下加熱 。六胺錯合物爐 溶液與濃氫氯酸 沈澱之氯化銨被 添加乙醚，而後 經沈澱之1 _胺基—4 —氯一2 — 丁炔之氫氯化物。由乙 醇/醚中之再結晶提供1 _胺基—4 —氯一 2 — 丁炔氫氣 化物（5 9 . 7 5克）。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟'部中央標準局員工消費合作社印裝 4 4 2 4 5 2 A7 B7_ 五、發明説明（17) TLC : Rf = 0 . 6 0 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇/ 水 70/30/5 v/v/v。 (b) 1—乙醯基胺基一 4_氯_2_ 丁炔 1 _胺基_ 4 一氯一 2 — 丁快氣氯化物（5 9 . 7 5 克）溶在1 0%乙酸鈉水溶液（3 3 5毫升）中。添加乙 酸乙酯（_5 0 0毫升），且在室溫下逐滴添加乙酸酐（ 70毫升）。25%乙酸鈉水溶液被添加成pH5且溶液 在室溫下攪拌3 0分鐘。乙酸乙酯層被分離，且水層以乙 酸乙酯萃取二次。經結合之有機層以水，鹽水洗且在硫酸 鈉上乾燥，過濾且眞空蒸發，產生1 :-乙醯基胺基一4 -氯_2 —丁炔之黃色漿（58 . 8克）。 TLC : Rf = 0 . 9 9 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇/ 水 70/30/5 v/v/v。 (C )乙醯胺基（4 一乙醯胺基一2_ 丁炔）一丙二酸二 乙酯 在一冷的（0 °C )氫化鈉（6 0 %於礦油中之懸濁液 ，3 . 4 8克）之二噁烷（7 0毫升）溶液中逐滴添加絕 對.乙醇（7 0毫升）。使混合物加溫至室溫且逐滴添加二 乙基乙醯胺丙二酸鹽（2 0 . 5克）之二噁烷（7 0毫升 )溶液。添加碘化鈉（9 . 0 7克）且在室溫下逐滴添加 1 一乙薩胺基一4 —氯_ 2 — 丁快（1 1克）之二卩惡焼溶 液。在添加另外的1 0 0毫升乙醇後，混合物再迴流2 . 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) 訂 ο -20 - f 442452 J77 五、發明説明（18 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 5小時。反應混合物被冷卻且所形成之沈澱物被濾出。.使 用在矽石上之層析術（洗提劑：乙酸乙酯/甲醇 9/1 v/v )純化，產生乙醯胺基（4_乙醯胺基_2 —丁 炔基）一丙二酸二乙酯（1 5 . 9克）〇 TLC: =0. 25，矽膠，乙酸乙酯。 (d) 2，6 —二胺基一 4 一己炔酸二氫氯化物（H —賴 胺炔酸二氫氯化物） 乙醯胺基（4 _乙醯胺基_ 2 — 丁炔基）_丙二酸二 乙酯（7 . 64克）溶在乙酸（140毫升）及6M氫氯 酸溶液（2 9 0毫升’）之混合物中，且在9 5 °C下加熱過 夜。混合物眞空濃縮。殘餘物由乙醇/水中結晶以產生結 晶粉末狀之2，6 —二胺基—4 一己炔酸二氫氯化物（ 4 . 0 克）0

(e) Boc —賴胺炔醯（Cbz) - OH 添加硫酸銅（I I )五水合物（2 8 7毫克）至2， 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 6 -二胺基_ 4 _己炔酸二氫氯化物（5 0 0毫克）之二 噁烷/水 3/2 v/v (17毫升）的溶液中且藉添 加2 Μ氫氧化鈉溶液將ρ, Η調至9。在室溫下逐滴添加N 一（苄氧羰基氧基）一丁二醯胺（5 7 3毫克）之二噁烷 (1 0毫升）溶液，同著2 Μ氫氧化鈉溶液，以保持ρ Η 在約9 一 9 · 5。在添加完成後，反應混合物在室溫下攪 拌過夜。混合物被過濾且由此所得之沈澱物懸浮於二噁烷 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X297公釐） -21 - '44245 2 ' A7 A 7 B7 五、發明説明（19 ) 中（2 0毫升）。添加二碳酸二特丁酯（5 Ο 0毫克）且 藉添加4Μ氫氧化鈉溶液將pH調至1 2 — 1 3。反應混 合物在室溫下攪拌過夜。混合物被過濾且濾液以水稀釋。 添加4 Μ氫氯酸溶液直至p Η 2且水層以二氯甲烷萃取二 次。經結合之有機層以水洗且在硫酸鈉上乾燥且溶液藉蒸 發除去，產生Bo c. —賴胺炔醯（Cb.z) — ΟΗ ( 5 4 0毫克）。 TLC : Rf = 0 . 7 0 ，矽膠，乙酸乙酯/吡陡/ 乙酸 / 水 63/20/6/1 1 v/v/v。 (f ) Boc —賴胺炔醯（Cbz) - NMeOMe 添加N，0 —二甲基一羥基胺氫氯化物（3 6 3毫克 )及〔2_ (1H —苯並三唑—1_ 基）_1 ，1 ，3， 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 3 —四甲基脲錨四氟溴酸鹽〕（1 . 2克）至Bo c —賴 胺炔醯（Cbz)— ΟΗ(1 . 4克）之二氯甲烷（5 0 毫升）溶液中且藉添加N，N —二異丙基乙基胺將pH調 至9 — 1 〇。反應混合物在室溫下攪拌1小時。混合，物順 序地以冷的2 Μ氫氯酸溶液，水，5%碳酸氫鈉水溶液及 水洗。有機層在硫酸鈉上乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉著 在矽石上之層析術（洗提劑：乙酸乙酯/庚烷 3/2 ν/ν)純化以產生Boc_賴胺炔醯（Cbz) — ΝΜ eOMe (1 . 37 克）。 TLC : = 0 . 7 0 ，矽膠，乙酸乙酯/庚烷 4/1 v / v 。 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -22 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裂 κ 4 4 2 4 5 2 a? __ Β7五、發明説明（2G ) (g) Boc —賴胺炔醯（Cbz) —（2—瞎唑基） 逐滴添加2 —溴瞎唑（1 . 7 8克）之乙醚（1 〇毫 升）溶液於一冷的（―7 8T)正丁基鋰（1 0 . 9毫莫 耳）之乙醚（1 0 . 9毫升）的經攪拌溶液中.。在溶液已 在-7 8 °C下攪拌3 0分鐘後，緩慢地添加B 〇 c —賴胺 炔醯（Cbz) — NMeOMe (1 . 37克）之乾的四 氫呋喃（1 5毫升）溶液。混合物在—7 8 °C下攪拌1小 時，而後添加5 %碳酸氫鈉之水溶液。使混合物加溫至室 溫且各層被分離。水層以乙醚萃取。經結合之有機層以水 洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉著在矽石上 之層析術（洗提劑：乙酸乙酯/庚烷 1/1 v/v) 純化以產生Bo c —賴胺炔醯（Cb z ) _ ( 2 —卩塞唑基 )(1 · 2 1 克）。 TLC : Rf = 0 . 7 2 ，矽膠，乙酸乙酯/庚烷 3/1 v / v。 (h ) Η —賴胺炔醯（C b 2 ) — ( 2 —噻唑基）. T F A Bo c —賴胺炔醯（Cbz ) - ( 2-瞎唑基）（ 1 2 1克）溶在三氟乙酸（ TFA) /二氯甲烷（ 15毫升；1/1 v/v)中且在室溫下攪拌1小時。 在蒸發除去溶劑後，粗製之胺以定產量地離析成一黃色油 ，且立即使用以製備N_Boc_N —(特丁氧羰基甲基 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂_ m m. r 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） -23 - 442452 A7 B7 五、發明説明（21 ) —D_Cha — Pr 〇 —賴胺炔醯（Chz ) — (2 —睡 唑基）。 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) TLC : Rf二0 . 2 5，矽膠，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸 / 水 63/20/6/1 1 v/v/v/v。 (i ) H — D — Cha — OMe . HC J^ 在冷（一 2 0°C)且乾的甲醇（9 5毫升）中逐滴 添加蓝硫醯氯（28毫升）。添加Cha—OH.HCiZ (4 0克）且反應混合物在迴流下加熱5小時。混合物眞 空濃縮且與甲醇共蒸發（3次）。殘餘物由甲醇/乙醚中 結晶，產生H-D-Cha-OMe .HC5之白色結晶 粉末（4 0 . 9克）。 TLC : Rf = 0 · 6 6，矽膠，正丁醇/乙酸/水 10/1/3 v/v/v0. 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (i ) N —（特丁氧羰基甲基）一D — Ch a_〇Me 添加特丁基溴乙酸酯（3 6克）於H_ D_Ch a — 01\/16.11(：文（40.9克）之乙睛（400毫升）經 攪拌溶液中。混合物之p Η以N，N —二異丙基乙基胺調 至8 . 5。混合物在室溫下攪拌1 6小時且眞空蒸發。殘 餘物溶在二氯甲烷中且溶液以水洗，在硫酸鈉上乾燥且眞 空蒸發。在矽膠上於庚烷/乙酸乙酯 9/1 (v/v) 中之層析術提供6 4克N -(.特丁氧羰基甲基）一D-C h a — Ο M e 0 ' 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） -24 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4424 5 2 A7 ___ B7 _五、發明説明（22 ) TLC : = 0 . 2 5，矽膠，乙酸乙醋/庚烷 1/1 v / v。 (k) N —(特丁氧羰基甲基）_N — Bo c — D — C h a — Ο M e N —(特丁氧羰基甲基）一D — Cha_OMe ( 6 4克）及二碳酸二特丁酯（4 0.3克）之N，N —二 甲基甲醢胺（5 0 0毫升）溶液的PH以N，N —二異丙 基乙基胺調節至8 . 5。混合物在室溫下攪拌1 6小時。 溶劑眞空除去。添加二氯甲烷及水至殘餘物。有機層被分 離，以冷的1N氫氯酸，水，5%碳酸氫鈉及水洗。有機 層在硫酸鈉上乾燥且濾液蒸發成N -(特丁氧羰基甲基） — N — B 〇 c _D — Ch a— ΟΜ — e之不定形固體，產量 5 9 · 6 克。 TLC : Rf = 0 . 50，矽膠，乙酸乙酯/庚烷 1/1 v / v。 (5) N -(特丁氧羰基甲基）一 N-Boc — D — C h a - Ο Η Ν_ (特丁氧羰基甲基）一Ν — Bo c — D_Ch a _〇Me (59 . 6 克）之二噁烷/水 9/1 (v/v )(9 0 0毫升）溶液以充份之6 N氫氧化鈉處理以在室 溫下保持Ρ Η在1 2歷6小時。在酸化後，混合物倒入水 中且以二氯甲烷萃取。有機層以水洗且在硫酸鈉上乾燥。 本紙張尺度逍用中國國家標準（CMS ) Α4規格（210X297公釐） (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) 訂 ο

I 25 - 442452 A? B7 ------- 23 五、發明说明（） 爐液蒸發且產生5 4克Ν·—（特丁氧羰基甲基）一 N — Bo c— D — Ch a~OH° TLC : Rf = 〇 · 6 0，矽膠，二氯甲烷/甲醇/ 9/1 v / v 0 (m) N—(特丁氧羰基甲基）一 N_Bo c—D_ C h a — O S u N_ (特丁氧羰基甲基）一 N — Bo c—D — Ch a 一 〇H(12 . 5克）之乙腈（200毫升）溶液以N — 羥基丁二醯胺（4 · 1克）及1- (3-二甲基胺基丙基 )_ 3 —乙基碳化二醯亞胺氫氯化物（6 . 8 4克）在室 溫下處理過夜。反應混合物蒸發至乾且殘餘物溶在乙酸乙 酯。有機相以水洗，在硫酸鈉上乾燥且濃縮以提供活性酯 ，其直接用於次一步驟中。 (η ) N —(特丁氧羰基甲基）一N — Bo c — D —

Ch a — Pr 〇 — OH 經濟部t央楯準局貝工消費合作社印製 Η-Pro — (7 5 克）溶在 100 毫升水中。反應混合物之p H以1 N氫氧化鈉溶液調至8 ，在此之後，逐滴添加N —(特丁氧裁基甲基）_N_ Boc— D — Cha — OSu (溶在 1 0 0 毫升 N，N-二甲基甲醯胺中）。反應在室溫下，在pH約8下攪拌過 夜。反應混合物被冷卻且以1N氫氯酸調至pH約2。水 層以乙酸乙酯萃取。在機層以水洗，在硫酸鈉上乾燥且眞 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） 26 442452 at B7 五、發明説明（24 ) ‘ 空蒸發。使用一梯度乙酸乙酯/甲醇— (v / v )之矽膠純化提供1 1 . 〇克所要之二肽。 TLC : Rf = 0 . 8 1，矽膠，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸/水 163/20/6/11 v/v/v/v。 (.〇 ) N — Bo c— N —(特丁氧裁基甲基）一 D —

Cha — Pro —賴胺炔醯（Cbz) — (2— _ 唑基） N_Bo c — N —(特丁氧羰基甲基）一D — Cha —Pr o— OH ( 1 3 1克）溶在乾的N，N-二甲基 甲醯胺（1 5毫升）中。在添加三乙胺（7 5 0" J?)之 後，反應混合物置在氮氣下且冷卻至一 1 5 °C。隨後添加 氯甲酸異丁酯（3 5 2 " $ )且使混合物在一 1 5 °C下攪 拌1 5分鐘。H-賴胺炔醯（Cb z ) — ( 2-Ρ塞嗖基） • TFA ( 1. 1 5克）溶在乾的Ν，Ν —二甲基甲醯胺 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (1 0毫升）中且逐滴添加至冷的混合酸酐溶液中，藉添 加三乙胺保持pH在8 . 5。反應混合物在_1 5 °C下攪 拌3 0分鐘。反應混合物蒸發至乾。殘餘物溶在乙酸乙酯 中且順序地以水，5 %碳酸氫鈉水’溶液，水及鹽水洗，在 硫酸鈉上乾燥且眞空蒸發。殘餘物藉著在矽石上之層析術 純化（洗提劑：二氯甲烷/甲醇95/5 . v/v)以產 生N — Boc-N —（特丁氧羰基甲基）一D-Cha — Pro -頼胺炔醯（Cbz) — (2— Pf唑基）（ 1 _ 7 7 克）。 本紙張尺度適用中國國家椟率（CNS > A4規格（210X297公釐} -27 - 442452 A7 __B7_ 五、發明説明（25 ) (p ) H00C — CH2— D — Ch a — P r 〇— 賴胺炔 醯—（2 —噻唑基） N-Bo c— N —(特丁氧羰基甲基）一D-Ch a —Pro —賴胺炔醢（Cbz )-(2 - U塞唑基）（ 1 . 7 7克）以三氟乙酸/硫代苯甲醚.1 0/1 v / v (2 0毫升）在室溫下處理4小時。反應混合物眞空濃縮 且殘餘物溶在水中。水相廣泛地以乙醚洗。水層直接倒在 一製備性 HPLC Supelcosil LC - 1 g - BD 管柱 上，其使用 2 0%A/7 0%B/1 0%C 至 2 0%A/ 5 0%B3 0%C之梯度洗提系統，在4 0分鐘內，以. 20毫升/分鐘之流速。（A: 0.5M磷酸鹽緩衝劑， 口112.1，：6:水，（：：乙腈/水 3/2 v / v ) 。二非對映異構物之產量： 3 0 0 毫克.Massa :ESI*: 518 . 5 〔AH〕+; 259 . 8 [AH2)2^

R t ( L C ) : 28 . 81 分鐘；20%A/80%B 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 至 2 0%A/2 0%B/6 0%C 於 4 0 分鐘內 5 0 0 毫克.Massa: ES I+: 5 18 . 5 〔AH〕* ；259 . 8 [AH2)2*

R t ( L C ) : 29 . 88 分鐘；20%A/80%B 至 2 0%A/2 0%B/6 0%C 於 4 0 分鐘內 實例2 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2I0X：297公釐） -28 - A7 B7 44245 2 五、發明説明（26 ) N — Me— D — Ph e — Pr 〇-賴胺炔醯Ψ〔COCO 〕-Ο Η (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} (a) Boc -賴胺炔醯（Cbz) — OMe 添加〔2 -（1H —苯並三唑）—1 ，1，3，3 — 四甲基脲鏘四氟硼酸鹽〕（1 . 8 3克)至Bo c -賴胺 炔醯（Cbz)— 0H(2 . 15克）於二氯甲烷二甲醇 9 : Ί ( 2 5毫升）之混合物中所成之溶液中且藉添加N ，N—二異丙基胺將pH調至7 — 8。反應混合物在室溫 下攪拌1小時。混合物以1N氫氯酸，水，5%碳酸氫鈉 溶液及水洗。有機層在無水硫酸鈉上乾燥，過濾且眞空濃 縮。殘餘物藉著在矽石上於乙酸乙酯/庚烷6./ 4 v / v中之層析述而純化。產量2 . 1 7克。

Rf = 0 . 5，+矽膠，乙酸乙酯：庚烷3/1 v / v 0 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (b )乙醯氧基-3 -(特丁氧羰基胺基）_ 7 -(苄氧 羰基胺基）一庚一 5 —炔腈 在_7 8°C下，於一 2克Bo c —賴胺炔醢—OMe 之6 0毫升二氯甲烷的攪拌溶液中添加1 8 · 2毫升二異 丁基鋰氫化物之預冷溶液（1 . 0M之己烷溶液），其速 率使溫度保持在一7 0 °C以下。溶液攪拌二分之一小時。 混合物倒入檸檬酸的水溶液中且以二氯甲烷萃取。經結合 之萃取液以水，5 %碳酸氫鈉溶液及水洗，在無水硫酸鈉 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐} -29 - ^ 44245 2 B7 五、發明説明（27 ) 上乾燥且過濾。濾液眞空濃縮以產生2 . 2 5克油。粗製 之產物溶在2 5毫升二氯甲烷中。溶液冷卻至〇°C，且添 加0 . 3 1克苄基三乙基銨氯化物，1 . 2毫升乙酸fF及 2 . 5克氡化鈉之7 5毫升水溶液。混合物在0 _ 5 °C下 激烈攪拌3 0分鐘。有機層被分離，以水洗二次，在無水 硫酸鈉上乾燥且蒸乾。殘餘物在矽石上於庚烷：乙酸乙酯 8 : 2 (v/v)中層析且產生1.4克2-乙醯氧基 一3 —（特丁氧羰基胺基）一 7 —（笮氧羰基胺基）一庚 —5 -炔睛。

Rf=0. 6，矽膠，於庚烷：乙酸乙酯1/1 v / v中。 (c) H —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 Ο Η 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在一 2 0°C下，6 . 5克氣態氯化氫導入1. 4克之 2 —乙醢氧基一3- ( 丁氧羰基胺基）—7 —(笮氧羰基 胺基〉一庚—5 —炔腈於乙醚/甲醇 9/1 v/v之 混合物中所成之溶液。混合物在0 _ 4°C下攪拌過夜。混 合物而後冷卻至一 2 0 °C，且添加6 . 7 5毫升水。反應 混合物在2 0°C下攪拌4小時。有機層被分離。水相之 pH以1N氫氧化鈉調至1 0，接著以1- 丁醇萃取。經 結合之萃取液以鹽水洗且眞空濃縮且給予6 5 0毫克H-賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 0H。 R f = 0 _ 1 7 ，於乙酸乙酯/吡啶 乙酸/水 6 本紙張尺度適用t國國家榇準（CNS)A4規格（ 210X297公釐） -30 - 442452 A7 B7 五、發明説明（28 ) 3/2 0/ 6/11 v/v/v/v。

(d) N — Bo c— N— Me— D — Ph e— OH (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 商業上可獲得之H — N_Me—D_Ph e — OH ( 1 1克）溶在二噁烷/水 1/2 (1 65毫升）之混合 物中，接著添加二碳酸二特丁酯（1 9 . 1克）。反應混 合物之pH使用氫氧化鈉作爲碱以保持在8 . 5 — 9。其 次，反應混合物眞空濃縮且殘餘物溶在乙酸乙酯中。有機 相以0 . 1N氫氯酸及飽和氯化鈉洗，在硫酸鈉上乾燥， 過濾且蒸乾以得17.1克產物。 TLC:Rf=0.35，矽膠，二氯甲烷/醇 8 /2 v / v 0 (e ) N — Bo c— N— Me — D — Ph e— Pr o —

OH 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 依供N —(特丁氧羰基甲基’）一 N — Boc— D — Ch a — Pr o— OBz j?合成所述之程序（參見實例1 )偶合 N_Bo c-N-Me - D-Ph e - OH ( 17 .1 克）及 H — Pro-OMe .HCj? (10 . 1 克）。所得之二狀 N — Boc - N_Me — D _Plie —

Pr o— OMe (2 2 . 6克）溶在二噁烷/水 9/1 (2 0 0毫升）中且以4N氫氧化鈉（2 1 . 7毫升）在 室溘下處理過夜。反應混合物以3 Q Q毫升冰水稀釋，使 用4 N氫氯酸來酸化（p Η 2 )且以二氯甲烷萃取。經結 本紙張尺度適用肀國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公嫠） -31 - ，442 4 5 2 A7 B7 經濟部中央標準局ΪΚ工消費合作社印製 五、發明説明（29) 合之有機層以飽和氯化鈉洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾且蒸 乾以得粗製之產物。由乙醚/庚烷 2/3 v/v中結 晶提供純的 N—.Bo — Me — D_Ph e_Pr 〇 -0 Η ( 1 2 . 6 克）。 TLC : Rf = ΰ . 2 〇 ，矽膠，甲苯/ .乙酸乙酯 6 / 4 v / v 。 (f ) N — Boc-N-Me—D-Phe-Pro -賴 胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 OH 添加氯甲酸異丁酯（〇 . 1 〇 1克）至在一 2 0°C下 N-Bo c-N-Me-D-Ph e-Pr 〇-〇H (. 0 . 195克）之N，N —二甲基甲醢胺<l〇毫升）的 溶液中，且混合物之P Η以三乙胺調至8。H —賴胺炔醯 ((Cbz)^〔CHOHC〇〕_OH(0 . 3 克）之 N，N —二甲基甲醯胺（1 〇毫升）溶液（其pH以三乙 胺調至8 . 5〉在一2 0 °C下添加至反應混合物中。混合 物攪拌過夜。反應未完成，因此N — Bo c—N— Me — D-Phe-Pr〇-〇H(293毫克）之N，N—二 甲基甲醯胺（5毫升）之溶液在0°C下N —羥基丁二醯亞 胺（95毫克）及1 ，3 —二環己基碳化二醯亞胺（pH 8 . 5 )處理且被添加至反應混合物中。混合物在室溫下 攪拌4小時。揮發物眞空除去。殘餘物溶在二氯甲烷中。 溶液以水洗，在硫酸鈉上乾燥且蒸乾。殘餘物在矽膠上於 乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水 -63/5/1.5/ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ;裝_ i- 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 442452 A7 B7 30 OH P r o —賴胺 五、發明説明（ 2.75 v/v/v/v中被層析。餾份被收集且得到 0 · 2 6 克 N — B〇c— N — Me — D — Phe— Pro —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕— OH。 R f = 0 · 2 4，於乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水 63/5/1-5/2+.7 5 v/v/v/.v 中，在砂 石上。 (g) Boc— N— Me— D — Phe — Pro —賴 胺块醢（Cbz)V〔 COCO〕一 N~Bo c— N— Me - D — Ph e {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 炔醯（C b z ) Ψ〔 )之2 0毫升二氯甲 CHOHC〇〕一OH(2 6 0 毫克 烷的溶液 乙醢氧基 以 1，1，1 並碘氧雜茂（ 毫克）。混合 硫酸鈉溶液及水洗。有機層 在無水硫酸鈉上乾燥且蒸乾以得到0 _ 3 5克N — ：B 〇 c 1_ 二氮一 1 ’ 2 —苯 )-3 ( 1 Η )-酮 拌三又二分之一小時 (18 0 ，以硫代 benziodoxol 物在室溫下攪 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 R f = 0 . 3 6 6 3 / 2 0 / 6 /1 N-Me— D-Ph e — P r 〇 —賴胺炔醯（Cb z ) Η，同著一些試劑之分解產物。 ，於乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水 1 v/v/v/v中，在矽石上。 (h ) N— Me-D-Ph e — Pr 〇_ 賴胺炔醯屮〔 COCO] - 0 Η N _ Bo c — N— Me — D 一 Phe — Pro —賴胺 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7 ’ 4 4 2 4 5 2 B7 五、發明説明（31 ) 缺醯f〔COCO〕— 0H ( 〇 . 3克）於三氟乙酸/硫 代苯甲醚 10/1 v/v (10毫升）混合物所成的 溶液在室溫下攪拌4小時。反應混合物眞空濃縮，溶在水 中且以乙醚洗。殘餘物眞空乾燥且得到4 3 0毫克粗製之 N — Me-D-Ph e-Pr 〇 —賴胺炔醯^〔COCO 〕-0H，其在一製備性 HPLC Supelcosil LC-

1 8-DB 管柱，使用 A2 0%; B8 0%; CO%至 A 2 0% ; B7 0%; Cl 0%之梯度洗提系統，在4 5分 鐘內以2 0毫升/分鐘之流速來純化。 二非對映異構物之產量： 53 . 7 毫克；MS :FAB+429 · 1 [ Μ + Η )； FAB-426 9〔Μ-Η〕 R t ( L C ) : 15 . 25 分鐘：A: 20%:B: 80 %;C: 0% 至 A: 20%:B: 20%:C: 60% 於 4 0分鐘內 51 · 6 毫克：MS :FAB 十429 ， 1 〔M+H〕； F A B ' 4 2 6 . 9〔M-H〕 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) R t ( L C ) : 16 . 30 分鐘；A: 20%:B: 80 %;C: 0% 至 A: 20%:B: 20%;C: 60% 於 4 0分鐘內 實例3 N-Me-D — Ch a — Pr o-賴胺炔醯Ψ〔COCO 〕一◦ Η 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4^^· ( 210X297公嫠） -34 - » 442 45 2 五、發明説明（32 )

(a) N — Me— N — Boc~ D — Cha — Pr 〇 — OH

依實例2 ( e )中所述之相同程序，由N — Me_N —Bo c_D_Cha — OH 及 H_Pr o_.OMe . HCi?開始製備 N_Me— N — Bo c -D-Cha-P r o — Ο H 0 TLC:Rf=0.26，矽膠，乙酸乙酯/甲醇 4/1 v / v。 (b ) Bo c —賴胺炔醯（Cb ζ ) Ψ〔CHOHCO〕 —〇M e 經濟部中央標準局貝工消費合作社印^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 —乙醯氧基_3_ (特丁氧羰基胺基）一 7—(苄 氧羰基胺基）一庚-5 —炔睛（3 6克〉於乙醚/甲醇 3/1 v / v ( 1升）中所成之溶液被冷卻至_ 2 0 。氣態氯化氫通經此溶液直至達到3 Μ ( 1 0 9克）之濃 度，在此之後，混合物在0 _ 4 °C下攪拌過夜。添加水（ 17 0毫升），其速率使溫度保持在5 °C以下。其次，使 反應混合物溫度上升且在室溫下攪拌另外之5小時。‘有機 相被分離。水層之pH以稀釋之氫氧化鈉調至1 0，接著 以1 -丁醇萃取。經結合之萃取液以鹽水洗，在硫酸鈉上 乾燥且蒸乾以得到Η —賴胺炔醯（C b z ) Ψ〔 (：1^011(：0〕一01^6(5 8克）。添加二碳酸二特丁 酯（18 . 4克）至H —賴胺炔醯（CbZ)f〔 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 35 A7 B7 442452 五、發明説明（33 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) CHOHCO〕一 OMe ( 5 8克）之甲醇溶液中且pH 藉添加三乙胺而調至8。反應混合物在室溫下攪拌。在反 應完成後，其被眞空濃縮。殘餘物溶在乙酸乙酯中且以 1 N氫氯酸溶液及鹽水洗。有機層在硫酸鎂乾燥，過濾且 蒸發。殘餘物藉著在矽石上之層析術（洗提劑.：庚烷/乙 酸乙酯 7/3 v/v至乙酸乙酯至.乙酸乙酯/甲醇 8/2 v / v之梯度）來純化。各餾份被收集且得到 4 . 7 6克Boc —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔 CHOHCO) - OMe 〇 TLC : Rf =0 . 4 0 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 9/2 v / v 0 再者，一副產物被離析且特徴化爲B 〇 c -賴胺炔醯 (Cbz)^〔CHOHCO〕—OBu (0 . 94 克） Ο TLC : Rf = 0 . 4 7，矽膠，二氯甲烷/甲醇 9/1 v / V。 ' 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

(〇)只-賴胺炔醯（（：52)氺〔(：110 11〇0〕一 0 M e ： T F A 依實例1 h中所述之方法，B o c —賴胺炔醯（ Cbz)Ψ〔CH〇HCO〕一OMe(500毫克）轉 變成標題化合物（5 0 0毫克），且立即用於偶合。 TLC : = 〇 . 1 2 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 95/5 v/v。 — 本紙適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ ~ 〇0 ' A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 ☆ 442452 五、發明説明（34 ) (d) N_M.e— N — Boc— D — Cha — Pro —賴 胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 OMe 在一 N_Me—N — Bo c— D — Ch a — Pr ο — OH ( 5 4 6毫克）之N，N —二甲基甲醯胺.（1 0毫升 )溶液中順序地添加1一羥基苯並三哩（2 0 2毫克）， 9 二環己基碳化二醯亞胺（3 0 8毫克）及Η —賴胺炔醯（ Cbz) ^CCHOHCOJ - OMe .TFA (5 1 6 毫克），在此之後溶液pH以三乙胺調至8。反應混合物 在0 °C下攪拌1小時且而後保持在室溫下過夜。混合物冷 卻至-2 0°C且二環己基脲過濾除去。濾液蒸發至乾。殘 餘物溶在乙酸乙酯中且順序地以1 N氫氯酸，水，5 %碳 酸氫鈉及水洗，在硫酸鈉上乾燥且眞空濃縮。殘餘物在:F夕 石上於作爲洗提劑之庚烷/乙酸乙酯 ( v/v )中層析，。含有 N— Me— N — Bo c— D — Ch a — Pr 〇-賴胺炔醯（Cb z〉Ψ〔CHOHCO 〕_〇Me之餾份被收集且蒸發。產量：5 4 4毫克。 TLC : Rf = 0 . 3 9 ，政膠，二氯甲焼/甲醇 95/5 v/v。 (e) N— Me— N — Boc— D — Cha — Pr〇 - 賴 胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 0H N — Me—. N — Bo c— D — Ch a — Pr 〇 —賴胺 炔醯（（：匕2)平〔（：11011匸〇〕一0訄6(544毫 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

-37 - $ 442452 經

央 標 準 貝 工 B7 合 作 社 印 製 五 、發明説明 ( 35 ) 1 克 ) 溶 在 噁 焼 / 水 7 / 3 ( V / V ) ( 1 3 毫 升 ) 中 1 1 且 在 室 溫 下 以 2 Ν 氫 氧 化 鈉 溶 液 ( 0 • 6 1 毫 升 ) 處 理 1 1 | 小 時 〇 反 應 混 合 物 以 水 ( 3 0 毫 升 ) 稀 釋 9 添 加 2 N 氫Γ 氯 1 I 酸 直 至 P Η 2 且 水 層 以 二 氯 甲 院 萃 取 0 經 結 合 之 有 機 相 以 請 先 1 閲 I 水 鹽 水洗 且 在硫 酸 鈉 上 乾 燥 過 濾 且 眞 空 濃 縮 以 提 供 所 讀 背 I © | 要 產 物 0 產 量 5 6 0 毫 克 0 之 注 1 I 意 1 I T L C R £ — 0 . 4 7 矽 膠 ， 二 氣 甲 烷 / 甲 醇 / 事 項 1 I 再 4 / 1 V / V 〇 丨f 本 J 裝 頁 V_^ 1 I ( f ) N 一 Μ e — N — Β 0 C — D — C h a — P r 0 — 賴 1 1 I 胺 炔 醯 ( C b Ζ ) 平 C C Η 0 Η C 0 ) — 〇 Η 1 1 1 N 一 Μ e — Ν — Β 0 C — D — C h a Ρ r 0 — 賴 胺 1 訂 炔 醯 ( C b Z ) Ψ ( C Η 0 Η C 0 ) 一 0 Η ( 5 0 0 毫 克 1 1 ) 溶 在 2 3 毫 升 0 5 Μ 1 — 羥 基 一 1 f 2 — 苯 並 氧 1 1 雜 茂 — 3 ( 1 Η ) — 酮 1 一 氧 化 物 之 二 甲 基 亞 m 溶 液 中 1 1 且 在 室 溫 下 攪 拌 Μ 夜 0 反 應 混 合 物 以 硫 代 硫 酸 鈉 ( 〇 I 1 * 2 5 克 ) 之 1 5 0 毫 升 水 溶 液 驟 停 以 冰 浴冷卻 9 在 1 I 此 之 後 溶 液 之 Ρ Η 以 2 Ν 氣 氯 酸 調 至 2 0 水 層 以 二 氯 甲 1 1 I 院 萃 取 且 經 結 合 之 有 機 層 以 一 飽 和 氯 化 鈉 溶 液 洗 0 有 機 相 1 1 在 硫 酸 鈉 上 乾 燥 /PTC 5 過 濾 且 眞 空 蒸 發 以 得 到 粗 製 之 N — Μ e I 1 一 N ~ B 0 C — D 一 C h a — Ρ r 0 一 賴 胺 炔 醯 ( C b Z 1 1 ) C C 0 C 0 ] — 0 Η 0 1 I T L C R f = 0 7 1 9 矽 膠 > 乙 酸 乙 酯 / 吡 啶 / 1 1 I 乙 酸 / 水 8 8 / 3 1 / 1 8 / 7 V / V / V / V 0 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4规格（210X297公釐）

-38 - 44245 2 A7 B7 五、發明説明（36 ) (g ) N— Me— D — Ch a-Pr 〇 —賴胺炔醯Ψ〔 COCO) - Ο Η 粗製之 Ν— Me-N-Bo c-D-Ch a-P r ο —賴胺炔醯.（Cb z ) Ψ〔COCO〕一 OH在如實例 2 h所述之相同條件下處理，以在Η P L C純化後提供 1 7 5毫克非對映異構物彤式之純的N— Me —D —

Ch a— Pr 〇 —賴.胺炔醯 Ψ〔COCO〕— OH。

Rt(LC) : 22 . 19 及 22 · 83 分鐘，20 %Α，8 0%Β 至 2 0%Α，2 0% 及 6 0%C，於 4 0 分鐘內。 實例4 3.，3 —二苯基丙醯基一Pr 〇 —賴胺炔醯Ψ〔COCO 〕-Ο Η

(a) 3，3 -二苯基丙醯基一脯胺醯—OH 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 依實例2 e中所述之相同程序，使用3，3 —二苯基 .丙酸（5 · 0 克）及 H — Pro— OMe .HC5 ( 3 . 6 6克）製備3，3 —二苯基丙醯基—脯胺醢—〇H (5 . 2 克）。 T L C : R f = 〇 . 6 5，矽膠，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸/水 63/20/0/11 v/v/v/v° 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -39 - r 442 4 5 2 B7 五、發明説明（37 ) (b) 3，3 —二苯基丙醯基一 Pro —賴胺炔酿（ Cbz)〔CHOHCO〕—〇Me 依實例3中所述之相同程序，3，3 —二苯基丙醯基 —脯胺醢二0H ( 6 4 8毫克）與H —賴胺炔醯（Cb z )Ψ〔CHOHCO〕一OMe·TFA(722毫克） 偶合以在純化後提供經保護之三肽，3，3 -二苯基丙醯 基一Pr 〇 -賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 0Me(1.13 克）。 TLC :.Rf = 0 · 4 0 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 9 5/5 v / V 0 .(c) 3，3 —二苯基丙醯基一Pro —賴胺炔醯ψ〔 COCO) - Ο Η 依實例3 ( e )中所述之相同程序皀化3，3 —二苯 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

基丙醣基一 Pr 〇 —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔 CH0HC0'〕一 OMe ( 8 6 0毫克）。粗製產物在二 氯甲烷中，使用如實例2 g中所述之1 ，1 ，1 一三乙醯 氧基一 1，1—二氫一 1，2 —苯並碘氧雜茂一3 (1H )_酮（5 9 4毫克）來氧化。隨後在TFA及硫代苯甲 醚（實例2 h )中之去保護，得到非對映異構物混合物形 式之3，3 —二苯基丙醯基一 pr 〇 —賴胺炔醯氺〔 COCO〕—OH(229毫克）。

Rt (LC)=20.31 分鐘，20%A，60% B及2 0%C至2 0%A，8 0%C ,於3 0分鐘內。 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐）~~ -40 - 4 4 2 4 5 2 五、發明説明（3S ) 實例5 苄基S〇2— norLeu (環）_G1 y —賴胺炔醯中 〔C 0 C 0〕— 〇 Ηn o r Leu (環）意謂下式之結構片段 1 JCH2)4 A \-NH-CH N-CH2-C(0)-ο 經濟部中央樣準局員工消費合作杜印製 (a ) Ν-Βο C—L — cr 一胺基一 e:—己內醯胺 在（1〇 克）二嚼院/水（2/1 v/v) (30 毫升）的攪拌溶液中添加1 N氫氧化鈉溶液（7 · 8毫升 )，接著添加二碳酸二特丁酯（1 8 . 8克）。混合物在 室溫下攪拌16小時且眞空濃縮。殘餘物溶在乙酸乙酯中 且以水和鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾且眞空蒸發。粗 製物質以己烷精製，過濾且眞空乾燥以產生N — B 〇 c — L— α —胺基—ε —己內醯胺（16克）。 TLC : Rf = 0 . 8 5，矽膠，乙酸乙酯/庚烷1/1 v / v 〇 (b)B〇c — norLeu (環〉Gly— 〇Me N — B〇 c — L — α —胺基一 ε —己內醢胺（1 〇克 )溶在二氯甲烷（1 〇 〇毫升）中。在一 2 0°〇下，緩慢 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 41 - ^ 442452 A7 B7 _____ 五、發明説明（39 ) 地添加1M 雙（三甲基甲矽烷基）醯胺之四氫呋哺/環 己烷（1/1 v / v ) (1當量）溶液且混合物攪拌 3 0分鐘。隨後添加溴乙酸甲酯（4毫升）且混合物在室 溫下攪拌2小時。添加另外的雙（三甲基甲矽烷基）醯胺 .四氫呋喃/環己烷（1/1 v/v )以驅使反應完成。 混合物以二氯甲繞稀釋且以1N 氬氯酸，水，5%碳酸 氫鈉溶液及鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾且眞空蒸發。 殘餘物藉著在矽石上之層析（洗提劑：庚烷/乙酸乙酯 6/4 7/丫）純化以產生1^-6.0{：-11〇1：1^611 (環）—Gly-0Me(12 克）。 TLC : Rf = 0 . 5 5 ，矽膠乙酸乙酯/庚烷 6/4 v / v 0 (c)窄基 S〇2— norLeu (環）—Gly — Ο M e Ν — Boc — norLeu (環）—G1 y— OMe (5 · 4克）溶在5 0%TFA/二氯甲烷 1/1 ( v /v) (40毫升）中且在室溫下攪拌1小時。反應混合 物眞空蒸發。粗製之胺溶在二氯甲烷（4 0毫升）中且冷 卻（〇°C)且添加笮基磺醯氯（3 . 4 3克）。添加三乙 胺以在反應期間保持pH在8。混合物在室溫下攪拌1小 時，在此之後，混合物眞空濃縮。殘餘物溶在乙酸乙酯中 且以5 %碳酸氫鈉溶液，水和鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥， 過濾且眞空蒸發以產生笮基S〇2— η 〇 r L e u (環） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) r丨丨 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -42 - 442452 A7 B7 五、發明説明（40 ) 一 G 1 y 一 〇 Μ β (6 T L C ： R f = 〇 9/1 ν / ν 0 1克）〇 8 8，矽膠，二氯甲烷/甲醇

(d)爷基 SOa—norLeu (環）一 Gly— OH 爷基 SO2- η o r Le u (環）—G 1 y - 〇Me (6 . 1克）之1 0 0毫升二噁烷/水 9 / 1溶液以充 4足之1 N氫氧化鈉處理以在室溫下保持在1 3歷2小時 。在酸化後，混合物倒入水中且以二氯甲烷萃取。有機餍 以水洗且在硫酸鈉上乾燥。過濾，接著蒸發溶劑得所要之 化合物（6.3克）。 TLC : Rf = 0 . 7 3，矽謬，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸 / 水 63/20/6/1 1 v / v / v / v 〇 .(e )爷基 S〇2— η 〇 r Leu (環）一G 1 y —賴胺 炔醯Ψ〔COCO〕— OH

依實例3中所述之相同程序，由苄基SO J- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作衽印製 L e (環） G 1 y ~ Ο Η ( 3 5毫克）及Η —賴胺炔醯（Cb ζ ) Ψ〔CHOHCO〕— OMe. TFA ( 5 2 0毫克）開始，製備標題化合物。經保護之 二肽（6 2 5毫克）被學化，氧化且去保護（參見實例4 )以在HP LC純化後提供純的非對映異構物混合物形式 之卞基 S〇2— norLeu (環）—G1 y 中〔（：〇(：〇〕一〇}1(6 8毫克）。 賴胺炔醯 &紙張尺度適财關家標準（CNS ) A4规格（2lGX297公整） -43 - 442452 五、發明説明（41 ) R t ( L C ) =25.9分鐘，20%八，80%丑 至2 0%A，2 0%B及8 〇%c，於4 0分鐘內。 實例6 乙基S〇2— D — Ch a — ΡΓ 〇 -賴胺炔醯Ψ〔 1 COCO] - OMe (a) Boc— D — Cha~pro —. 0 P a c ( —〇 P , a c =苯乙醯酯） 依實例2中所述之類似方式，使用B o c — D —

Ch a—OH 及 H_Pr o~〇pac，製備 Bo c-D-Cha-Pro-OPac 〇 TLC : Rf = 〇 . 5 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇9 5 / 5 v / v 0 (b )乙基 S〇2— D — Ch a — Pr o —〇Pac 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ---------LwII (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Boc— D — Cha - Pro — OPac (3 . 8 克 )溶在5%TF A. /二氯甲烷（2 5毫升）中且在室溫下 攪拌.3 0分鐘。反應混合物眞空蒸發。粗製之胺溶在二氯 甲烷（50毫升〉且乙磺醯氯（〇 . 8毫升）在一78 °C 下添加。添加三乙胺以在反應期間保持在PH在8 °混合 物在0 Ό下攪拌3小時，在此之後，添加水（2 5毫升） 。在室溫下在另外攪拌3 0分鐘之後，反應混合物眞空濃 縮。殘餘物溶在乙醚中且以1N氫氯酸溶液，水，5%碳 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公嫠） 44 442 45 2 at B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（42 ) 酸氫鈉溶液及鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾且眞空蒸發 。以甲醇精製粗製之物質，產生乙基S〇2— D — Ch a —Pro— OPac (3 · 0 克）0 TLC : = 〇 · 6 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 95/5v/v。 (c )乙基 S〇2— D — Ch a — P r o — OH 在乙基 S〇2—D — Ch. a — P r o — OP c ( 1 0克）之四.氣呋喃（2 5 0毫升）溶液中添加1 M四丁 基銨氟化物之四氫呋喃（8 4毫升）溶液。反應混合物在 室溫下攪拌3 0分鐘且倒入水中（1升：）。水溶液以乙酸 乙酯萃取。經結合之有機層順序地以1 N氫氯酸溶液及水 洗，在硫酸鈉上乾燥且眞空濃縮。殘餘物藉著由乙酸乙酯 /二異丙醚中之結晶作用而純化，以產生乙基S 〇2— D -Cha-Pro—OH(6. 0 克）〇 TLC : Rf = 0 . 2 ，矽膠，乙酸乙酯/吡啶/乙 酸 / 水 163/20/6/11 v/v/v/v。 (d )乙基S〇2-D-Ch a-Pr 〇 -賴胺炔醯少〔 COCO〕- OMe 如實例3 (d)中所述之乙基S〇2— D — Cha — Pr o — OH ( 5 1 5毫克）及Η —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 OMe之偶合提供經保護之三肽（ 5 5 0毫克）。氧化，接著去保護（參見實例2 )則在 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中画國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐}

A7 B7 442452 五、發明説明（43 ) Η P L C純化後，得到所要之非對映異構物形式之產物（ 1 3 0毫克〉。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Rt(LC) = 3 8 · 2 及.3 8 . 5 分鐘，2 0%Α

• I ，80%Β 至 20%Α，2〇%Β 及 6〇%c，於 40 分 鐘內。 實例7 _ 乙基S〇2— D-Ch a — P r 〇 -賴胺快醯中〔

I COCO] - Ο Η 以類似於實例6之方式，乙基.SO+2— D — Ch a — P r 〇 —賴胺炔醯 Ψ〔CH0HC0_〕，一0Me ( 5 5 0 毫克）被集合。隨後依實例3及2中所述之方法直化，氧 化且去保護會在HP LC純化後提供1 8 0毫克乙基 S〇2— D — Ch a — Pr 〇 -賴胺炔醯Ψ〔COCO〕 - OH (非對映異構物混合物〉。

R t(LC) = 35 . 7 及 36 . 0 分鐘，20%A ，80%3至2 0%八，20%6及60%° 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實例8

l—Pi q — Pro —賴胺炔醯 f〔C〇CO〕一 OH (a) 2 - Cbz - (4aR，8aR)—全氫化異喹啉 —1 (R，S) - 羧酸（=N — (Cbz)— 1 — P i Q - 0 Η ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 46 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 442452 .a? ___：_Ξ__— 五、發明説明（44 ) 如EP 0 6 4 3 0 7 3實例1中所述，已合成 (Cbz ) -1~P i q-OH° TLC : Rf = 〇 . 8 5，矽膠，乙酸乙酯/妣啶/ 乙酸/水 63/20/6/1 1 v/v/v/v 0 (b) N — (Cbz) — 1— Pi q — Pro — OH 依實例2中所述之方法偶合N— ( C b z ) — 1 一

PiQ — OH(500 毫克）及 Η-Pro — OtBu ( 2 7 0 毫克）會產生 N — (Cbz ) —1— P i q — Pr〇~OtB.u(634 毫克）。 在室溫下，於二氯甲烷（1毫升），三氟乙酸（3毫 升），苯甲醚（〇 . 1 5毫升）之混合物中完成特丁酯之 去除歷1小時。反應混合物在低溫下眞空濃縮且殘餘物$ 在水中，p Η 9 . 5。.水層以乙醚洗，在此之後，水層藉 2Μ氫氯酸溶液酸化成ΡΗ2 . 5。水層以乙酸乙酯萃取 且有機相以鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥且眞空濃縮以產生1^ -(Cbz)— 1— PiQ—〇H(588 毫克）。 T L C : R f . 5 4，矽膠，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸/水 60/3/1/2 v/v/v/v。

(c) 1— Pi Q — Pr〇 —賴胺炔醯平〔COCO〕一 OH .依實例3中所述之方法使N— (Cbz ) — 1 — Ρ ΐ q — Pr o — OH ( 4 7 8毫克）與賴胺炔醯部分偶 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (请先閱讀背面之注意事項再填寫本貰) 訂 Λν -47 - 442452 經濟部中央梯準局員工消費合作社印製

五、發明説明（45 ) 合。經純化之經保護三肽（6 6 7毫克）被岂化’氧化且 去保護（參見實例2 )以在HPLC純化後提供1 一 P i q— Pr 0 -賴胺炔醯屮〔COCO〕一 0H之單一 異構物（3 3毫克）° Rt(LC) = 20 . 08 分鐘，20%A’ 80% B 至 2 0%A，2 0%B 及 6 0%C。 實例θ HOOC — CH2— D-Ch a — P ro-賴胺炔醯 Ψ〔 COCO) - Ο Η 依實例3中所述之方法，6 8 5毫，克Ν —(特丁氧羰 基甲基）一N — Bo c— D — Ch a~P r ο— ΟΗ (參 見實例1 )偶合至H —賴胺炔醯（Cb z ) Ψ〔 CHOHCO〕一 OMe . TFA (參見實例 3C)，在 此之後，經保護之三肽（6 5 8毫克）被皂化，氧化，去 保護且純化以產生1 5 8毫克非對映異構物混合物形式之 HOOC — CH2— D-Ch a-Pr 〇~ 賴胺炔醯 ψ〔 COCO) - Ο Η 0 R t ( L C ) : 22，3 分鐘 20%A, 8〇%B 至 20%A，20%B 及 60%C。 實例1 0 H0〇C — CH2—D — Ch a— N —環戊碁—g 1 y — 賴胺快醯屮〔COCO〕— OH (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4说格（210X297公釐） -48 - 442452 at _____B7_ 五、發明説明（46 ) (-a ) N — 環戊基一 G I y — OMe H — Gly — 〇Me .HCJ2 (4 6 . 4 克）溶在 4 0 0‘毫升甲醇中，添加環戊酮（3 4克）及氟硼氫鈉（ 14克）且使反應在室溫下進行16小時。反應混合物以 6N氫氯酸驟冷直至pH2且在室溫下攪拌3 0分鐘。在 減壓下蒸發除去溶劑，殘餘物溶在水中且以乙醚洗。添加 6 M NaOH溶液將pH調至ρΗ>1 〇 ，產物以二氯 甲烷萃取，以鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾且在減壓下 濃縮。化合物由乙酸乙酯中結晶成HC j —鹽形式。產量 :4 3 5 克0 TLC : Rf = 0 _ 7 1，矽膠，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸/水 88/31/18/7 v/v/v/v。 (b) N — （特丁氧羰基甲基）一N-Bo c — D_ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Ch a-N -環戊基—G 1 y-〇H 依實例1中所述之供二肽部分的程序，使用N —(特 丁氧羰基甲基）一N — Bo c — D — Cha— OH及 N — 環戊基一G1 y—OMe以製備N —（特丁氧裁基甲基）

_N — Bo c— D-Ch a— N —環戊基—G 1 y-OH Ο TLC : Rf = 0 . 3 0 ，矽膠.，二氯甲烷/甲醇 9 / 1 v / v 。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐’) -49 - 442 4 5 2 a7 I 修正 > _ - _B7 j韶亦+' 五、發明說明（Μ) (c) HOOC — CH2— D — Cha-N —環戊基- G1 y —賴胺炔醯 Ψ〔COCO〕一 OH 依實例3中所述之方法，N —（特丁氧羰基甲基）- N-B 〇 c — D — Cha — N —環戊基一G 1 y-ΟΗ ( 547毫克）偶合至Η —賴胺炔醯（Cbz) Ψ〔 CHOHCO〕一〇Me . TFA (參見實例 3 (c)) ，在此之後，經保護之三肽（6 6 0毫克）被皂化，氧化 ，去保護且純化以產生2Ί 2毫克之非對映異構物混合物 锻式之 Η 0 ◦ C _ C_H2 — D - C h.a — N —環戊基— GI y —賴胺炔醯 Ψ〔COCO〕一 OH。R^：(LC) = 28 · 5 及 29 . 1 分鐘，20%A ，80%B 至 20%A，2 0%B 及 60%C。實例1 1 HO0C — CH2— D — Ch e — P r 〇 —賴胺炔醯识〔 C O C Ο〕一 Ο Η 依實例1 0中所述之程序，使用Ν~ (特丁氧羰基甲 基）一 N — B 〇 c-D — Phe—OH 及 H — p f 〇 —◦ Β ζ 1 . HCj?製備Ν —(特丁氧羰基甲基）—ν — —Bo c— D — Phe — P r ο — 0H。 TLC : Rf = 〇 . 63 ,砂膠，乙酸乙醋/0比卩定/ 乙酸/水 664/31/18/7 v/v/v/v。 HOOC — CH^-D-Phe — P r 〇 —賴胺炔醯巫〔

-----------裝--- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) si· -丨線.' >< 本紙張尺度適用中國國家^準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -50 - 442 45 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（48 ) C 0 C 0〕- Ο Η 依實例3中所述之方法，6 7 7毫克Ν-(特丁氧羰 基甲基）一N — Bo c — D — Ph e_P r o_OH 偶合 至 H — 賴胺炔醯（Cb z ) Ψ〔CHOHCO〕一OMe .T F A，在此之後，所得之三肽（.8 1 4毫克）被皀化 ，氧化，去保護且藉HP LC純化以得到非對映異構物混 合物形式之 HOOC — CH2— D — Ph e— Pr 〇 —賴 胺炔醯氺〔COCO〕一OH ( 2 8 4毫克）。 -

Rt(LC)=16 . 1 及 17 . 0分_，20%A ，8 0%6至20%八，2 0%6及60%(：。 實例1 2 Η 0 0 C - C Η 2 - D - p — C j? — P h e / - P r 〇 -賴 ... / ! 胺炔醯 Ψ〔 C 0 C 0〕一 Ο Η / / (a) Ν —（特丁氧殿基甲基）_Ν — Boc— D — p —

CJ?-Ph e-OH 依實例1中所述之類似程序，H_D_p_Cj?_ Ph e_0H . HCi? ( 1 0克）轉變成N —(特丁氧羰 基甲基）一N — Boc-D-p-C 爻一Phe — OH。 產量：1 6 · 7克。 TLC : = 0 . 2 7 ，矽膠，乙酸乙酯/甲醇 9 / 1 v / ν 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） —----------ν—1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7__五、發明説明（49 ) (b ) N —(特丁氧羰基甲基）—N — Bo c — _D — p — C5—Phe-OSu (Su=丁二醯胺） N —(特丁氧鐵基甲基）一N — Boc— D — p — Cj? — Phe — OH (1 4 . 6 7 克）之 2 5 0 毫升乙睛 溶波在室溫下以N -羥基丁二醯胺（4 · 1 1克）及1 — (3 —二甲胺基丙基〉一 3 —乙基羰化二醯亞胺氫氯化物 (6 . 86克）處理過夜。反應混合物蒸發至乾且殘餘物 溶在乙酸乙酯中。有機相以水洗，在硫酸鈉上乾燥且濃縮 以提供19.1Ί克之活性酯，其直接用於以下步驟中。 (_c ) N —(特丁氧羰基甲基）一 N:—Bo c— D_p — Ci2-Phe-Pr〇-0H H — Pro— OH.HC 芡（10 . 79 克）溶在毫 升N，N —二甲基甲醯胺及ί 0 0毫升水中。反應混合物 之ρ Η以1 Ν氫氧化鈉溶液調至8 ，在此之後，逐滴添加 Ν —(特丁氧羰基甲基）一N-Boc_D — p— C芡一 Phe-OSu (19 .11克），其溶在120毫升N ，N_二甲基甲醯胺中。在室溫，pH約8下，反應被攪 拌過夜。反應混合物被冷卻且以1 N氫氯酸調至ρ Η約2 。水層以二氛甲烷萃取。有機相以水洗，在硫酸鈉上乾燥 且眞空蒸發。使用梯度乙酸乙酯/甲醇 9/1—1/1 之矽膠純化會提供7 . 0 4克所要之二肽。 TLC : Rf = 0 . 2 4 ，矽膠，乙酸乙酯/甲醇 8/2 v / ν 。 442452 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 策- 訂 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS > A4規格（210X297公釐） 52 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 442452 五、發明説明（5Q) (d)HO〇C_CH2_D_p_C5-Phe-pr 〇 —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一 OH 依實例3中所述之方法，N —（特丁氧M基甲基）一 N-Bo c-D-p-C^-Ph e-Pr o - OH { 5 0 0毫克）與Η -賴胺炔醯（C b ζ ) Ψ〔 CHOHCO〕一 〇Me .TFA偶合，在此之後’所得 之三肽（5 7 2毫克）被S化，氧化，去保護且藉 HP L C純化以得到非對映異構物混合物形式之H〇〇C —CHz— D — P — CJ?-Ph e — Pr 〇 —頼胺炔醯 Ψ 〔COCO〕— 〇H(129 毫克）。

Rt(LC) = 22 . 3 及 23 · 1 分鐘，20A， 8 0%A，8 0%B 至 2 0%A，2 0%B 及 6 0%C〇 實例1 3 HOOC — CH2-D-Ch a-P r 〇-_ 胺炔醯 Ψ〔 COCO] - N H 2 以實例1中所述者製備N —（特丁氧羰基甲基）一 N —Boc— D-Cha-Pro-OH。以實例 3 (b) 中所述者製備Bo c —賴胺炔醯（Cb z ) Ψ〔 CHOHCO〕— OBu 〇 (a) Boc —頼胺炔醯（Cbz)^〔CH0HC0〕 -0 Η ° 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· -53 - t 442452 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（51 ) 在 Bo c —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕 _OBu (320毫克）之二噁烷/水 9/1 v/v 之混合物（1.12毫升）的溶液中添加1毫升氫氧化鈉 溶液。反應混合物在室溫下攪拌3小時。混合物藉添加 1 N氫氯酸溶液調至p Η 7且蒸發除去大部分之二噁烷。 混合物倒入冷水中且以乙酸乙酯萃取。經結合之有機層以 水洗，在硫酸鎂上乾燥，過濾且眞空蒸發，產生3 0 8毫 克 Boc —賴胺炔醯（Cbz)W〔CHOHCO〕一 OH。 TLC : Rf = 〇 _ 4 6 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 8 / 2 v / v 0 1 (b) Boc —賴胺炔醯（Cbz〉^〔CHOHCO〕 —N Η 2 添加1 —羥基一苯並三唑水合物（1 1 7毫克），Ν —甲基嗎啉（132yJ?)，氯化銨（107毫克）及1 一（3_二甲基胺基丙基）_3—乙基碳化二醯亞胺氫氯 化物（1 8 6毫克）至Bo c_賴胺炔醯（Cb ζ ) Ψ〔 CHOHCO〕一 OH ( 3 0 8 毫克）之 Ν，Ν — 二甲基 甲醯胺（16 .. 6毫升）溶液中。反應混合物在室溫下 攪拌3小時。混合物倒入水中且以乙酸乙酯萃取。經結合 之有機層以1 Ν氫氯酸溶液，水，5 %碳酸氫鈉溶液及水 洗。有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾且蒸發。殘餘物藉著在 矽石上之層析術（洗提劑：二氯甲烷/甲醇 98/2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 0Τ 54 經濟部4-夬標準局員工消費合作社印製 442452 ^77 五、發明説明（52) v/v至9 6/4 v/v的梯度）以產生Bo C —賴胺 炔醯（C.b z )平〔CHOHCO〕一 NH2( 1 1 7 毫 克）。 TLC : Rf = 〇 . 1 4 ，矽膠，二氯甲烷/申醇 9 7/3 v / v。

(c) N —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 N Η 2 < T F A 以實例1 , ( h )中所述者製備Η _賴胺炔醯（（：62· )Ψ〔CHOHCO〕- NH2. TFA〇 (d) N -(特丁氧羰基甲基）_N — Bo c— D — Cha — Pro -賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔 CHOHCO) - NH2 添加1 一羥基_苯並三唑水合物（5 0毫克）及二環 己基碳化二醯亞胺（6 0毫克）至0°C之N —（特丁氧羰 基甲基）一N-Boc-D-Cha-Pr ο— OH ( 119 . 6毫克）之N，N —二甲基甲醚胺（2毫升）溶 液中。反應混合物在0°C下攪拌0 . 5小時。Η -賴胺炔 醯（Cbz) CHOHCO〕一NH2.TFA ( 1 0 0毫克）之N，N —二甲基甲醯胺（1毫升）溶液（ 其pH以N，N_二異丙基乙基胺調至8 )添加至此冷溶 液中。在1小時後，使混合物加溫至室溫且攪拌過夜。反 應混合物冷卻至-2 0°C，過濾且濾液在減壓下濃縮。殘 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -rr_ ...\ ...Mr 55 · 442452 五、發明説明（53 ) 餘物溶在乙酸乙酯中且以5%碳酸氫鈉溶液，水，2%檸 檬酸水溶液及鹽水洗。有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾且蒸 發。殘餘物藉著矽石上之層析術（洗提劑：二氯甲烷/甲 醇 97/3 v/v至95/5 v/v之梯度）來純 化以產生N —(特丁氧羰基甲基）一N — Bo c—D — Ch a-Pr 〇 —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO 〕一]^112(9 3.5毫克）。 TLC : Rf = 0 . 3 4，较膠，二氯甲烷/甲醇 95/5 v/v0 (e) N -(特丁氧羰庫甲基）一N-,Boc-D-Ch a — Pr 〇 —賴胺缺:酿（Cbz ) Ψ〔 C O C 〇〕-Ν Η 2 以實例2 (g)中所述者製備Ν —（特丁氧羰基甲基 )—N — Bo c—D — Ch a— P r 〇 —賴胺炔醯（ Cbz)^〔COCO〕-NH2〇 混合物以硫代硫酸鈉溶液，5 %碳酸氫鈉溶液及水洗 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注項再填寫本頁) 〇 TLC : Rf = 0 3 8 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 95/5 v / ν 0 (f ) H00C — CH2— D — Ch’a — Pr 〇— 賴胺炔 醯Ψ〔coco〕一nh2

如實例2 (h)中.所述者製備HOOC — CH2 — D 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐、 -56 - A7 A7 442452 B7____ 五、發明説明（54) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) —Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一NH2。 水層直接倒在一使用2 G%A，7 0%B，1 0%C至 2 0%A，3 0%B，5 0%C 之製備性 HPLC DeltaPak管柱上，歷時4 0分鐘，以5 0毫升/分鐘之流 速。 (A:0 . 5M磷酸鹽緩衝劑pH2 1 ，B:水：C: 乙睛/水=3/2 v/v) ，87毫克N—(特丁氧羰 基甲基）一N-Bo c-D — Ch a-P r 〇‘—賴胺快醯 (Cb z ) ^.〔C0C0〕一 NHs 產生 3 5 毫克 HOOC — CH2— D-Ch a - Pr o -賴胺炔醯 Ψ〔 > coco] - νη2〇

Massa ： C I*: 4 7 8 . 4〔M-H” ； C I '： 4 7 6.4 { Μ — H〕- R t ( L C ) = 2 1 . 10 及 21 . 41 分鐘（非對 映異構物混合物）；20%八，80%6，0%(：至20 %A，20%B，60%C，歴時 40 分鐘。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實例1 4 H0 0C-CH2-D — Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醢屮〔 COCO) - 0 E t 如實例1中所述者製備N—(特丁氧羰基甲基）一N —Boc— D — Cha — Pro— OH。如實例 3 ( b ) 中所述製備Bo c —賴胺炔醯（Cb z ) Ψ〔 CHOHCO〕— OMe。 本紙張尺度適用中國國家橾隼（CNS ) A4規格（210X297公釐〉 ~ 57 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 442452 A7 _B7___ 五、發明説明（55 ) (a) Η —賴胺炔醯（Cbz) TCCHOHCO〕一 〇 E t . H C i? 在一 2 0°C下Boc —賴胺炔醸（Cbz ) Ψ〔 CHOHCO〕一 〇Me (2 . 1 4 克）溶在 3M氫氯酸 之乙醇（i ο 〇毫升）溶液中。反應後，混合物在室溫下 攪拌6小時，其眞空濃縮產生H-賴胺炔醯（Cbz ) Ψ 〔CH0HC0〕一〇Et .HC 艾（2 . 36 克）0 TLC:.Rf = 〇 . 17及0 . 25 (非對映異構物 混合物），矽膠*二氯甲烷/甲醇 95/5 v/v。 (b ) N -(特丁氧羰基甲基）一N-Bo c-D —

Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醯（Cb ζ ) Ψ〔 CHOHCO) - OEt 如實例13(d)中所述者，但使用三乙胺而非N， N —二異丙基乙基胺，由Η —賴胺炔醯（Cb ζ〉Ψ〔 CHOHCO〕一 OEt .HCi? (2 . 4 0 克）及 Ν- (特丁氧羰基甲基）一N-Bo c-D-Ch a-P r ο —OH ( 2 . 3 8克）製備N_ (特丁氧羰基甲基）一N —Boc— D — Cha— Pro —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ 〔CHOHCO〕一 OEt。粗製之產物藉著在矽石上之 層析術（洗提劑：庚烷/乙酸乙酯 1/1至二氯甲烷/ 甲醇 97/3 v/v至95/5 v/v梯度）純化 以產生N —(特丁氧羰基甲基）一 N-Bo c-D_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公嫠） —^^1 fi n n n I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 11-" 訂 -58 - '442452 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 五、發明説明（56 ) Ch a— P r 〇 -賴胺炔醯（Cb 2 ) ^〔cH〇HCO 〕-〇Et(1.2U)〇 TLC : Ri = 0 ‘ 5夕膠，二氯甲焼/甲醇 95./5 v/v。 (c ) N —(特丁氧羰基甲基）一N__b〇 c_D__Ch a—Pr o-賴胺炔醯（cbz ) Ψ〔 COCO) - Ο E t 、 如實例13 ( e )中所述者製備.n —(特丁氧羰基甲 基）一N — Bo c_D — Ch a— p r 〇 —賴胺炔醯（ Cbz)^CCOCO)~OEt〇 ; T L C : R f = 〇 · 5 1 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 97/3 v / v 0 (d ) HOOC-CHz - D — Ch a — P r 〇 - 賴胺抉 醯▽〔（：000〕— OEt 如實例1 3 ( f )中所述者製備HOOC — CH2 - D — Ch a-Pr 〇 —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕— OE t 。水層直接倒在一使用2 0%A，8 〇%B，0%C至 2 0%A，5 4%B，2 6%C之梯度洗提系統之製備性 HPLC管柱上，歷時4 5分鐘，以8 0毫升/分鐘之流 速。 (A: 〇 . 5M磷酸鹽緩衝劑pH2 .1 ，B:水，C: 乙睛/水：3/2 v/v) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -59 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 4 4 2 4 5 2 B7 五、發明説明（57 ) 2 9 3毫克N —(特丁氧羰基甲基）一 n-Bo c — D — Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醯（Cbz ) ψ〔COCO 〕—OEt 產生 6 2 毫克 HOOC - CH2— D — Cha —Pro—賴胺炔醯^〔COCO〕一 〇Et 。

Massa : ESI+: 507.9〔MH〕+ Rt(LC)=26 45 及 27 · 30 分鐘（非對 映異構物混合物）：2 0%A，8.0%B，〇%C至2 0 %A，20%B，60%C，歷時 40 分鐘。 實例1 5 HOOC — CHz— D — Ch a — Pr〇 —賴胺炔酿 ψ〔 C O C Ο〕—（ 1 _ 吖丁啶） 如實例1中所述者製備N_ (特丁氧羰基甲基）—N _Bo c_D — Ch a_Pr o — OH。如實例 1 3 中所 述之類似方式，由Bo c —賴胺炔醯（Cb z ) Ψ〔 CHOHCO〕一〇Bu開始製備Ν—(特丁氧羰基甲基 ) _N — Bo c_D_Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醯屮〔 COCO〕_ ( 1—吖丁啶）。毫克n —(特丁氧羰基甲 基）一 N - Boc-D — Cha - Pro —賴胺炔醯（ Cbz ) Ψ〔COCO〕—（ 1 一吖丁啶）之去保護（參 見實例1 3 ( f ))會在Η P L C純化後得到1 〇 5毫克 產物。 HPLC條件：De丨taPak管柱，使用2 0%Α，8 0 %B，0%C 至 20%A，45%B，35%C 之梯度洗 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐） (請先閎請背面之法意事項再填寫本頁) -訂 -60 - 442452 A7

五、發明說明（58) 提系統，歷時4 5分鐘，以8 0毫升/分鐘之流速。 (A : 0 . 5 Μ磷酸鹽緩衝劑p Η 2 _ 1，B :水，C : 乙腈/水 3/2 ν/ν)

Massa：FAB+： 5 18 · 3 [M+H)+； FAB~ ;516 2 CM + H)-

Rt(LC) = 26 · 24 及 26 . 70 分鐘（非對 映異構物混合物）·· 20%A，80%B，0%C至20 %A，’ 60%C，歷時 40 分鐘。 實例1 6 HOOC — CH2— D — Cha— N —環戊基—G 1 y — 賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一（1—吖丁啶） 依實例1中之程序製備N —(特丁氧羰基甲基）一 N 一 Bo c—D - Cha— N —環戊基—丙胺酸。 以如實例1 5中所述之類似方式製備N-(特丁氧鐵 基甲基）一N - Boc— D — Cha— N —環戊基一 G1 y —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一（1—吖丁啶）。 40 1毫克N —(特丁氧羰基甲基）一N — B 〇 c— D — Cha-N —環戊基一G 1 y —賴胺決醯Ψ〔COCO〕 —(1 —吖丁啶）之去保護會在HP L C純化後得到 1 0 7毫克產物。

Mas s a ： F A B + ' 5 4 6 . 2 [M+H〕+; FAB-;544.0〔M + H〕-

Rt(LC) =35 . 85 分鐘：2〇%A，80% —61 — {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 4 4 2 4 5 2 _B7_ 五、發明铳明（59 ) B，0%C 至 2 0%A，2 0%B，6 0%C，歷時 4 0 分鐘。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例1 7 HOOC — CH2-D — Ch a— Pr 〇 —賴胺炔醯平〔 COCO) - N H C Η 2 P h 以如實例1中所述者製備N —、特丁氧羰基甲基）一 N-Boc— D — Cha-Pro-OH。以如實例 3 ( c )中所述者.製備H —賴胺炔醯（Cbz)V〔 CHOHCO〕—OMe.TFA〇 (a) N —(特丁氧羰基甲基）—N - Bo c— D —

Ch a— Pr o —賴胺炔醯（Cb z ) Ψ〔 CHOHCO) - OMe 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 以如實例1 3 ( d )中所述之類似方式，由Η -賴胺 炔醯（Cbz ) - Ψ〔CHOHCO〕一OMe . TFA (1 . Ο 9克）及N_ (特丁氧羰基甲基）_N — Bo c —D — Cha-Pro —〇H ( 1 . 1 8 克 0 製備 N —( 特丁氧羰基甲基）一N — Bo c— D-Ch a— P r ο — 頼胺炔醯（Cb z ) f〔CHOHCO〕一 OMe。粗製 之產物藉著在矽膠上之層析術（洗提劑：庚烷/乙酸乙酯 4/6至3/7 v/v梯度）而純化以產生N -(特 丁氧羰基甲基）一 N_Bo_c_D-Ch a_Pr 〇 — 賴 胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一OMe ( 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -62 - 44245 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五'、發明説明（60 ) 0 · 9 9 克）0 TLC : Rf = 〇 . 5，矽膠，二氣甲烷/甲醇9 5 ^ 5 v / v ° (b) N —(特丁氧羰基甲基）—N — B〇c+一 D — Cha — Pro -賴胺炔醯（Cbz)V〔 CHOHCO) - OH 在N_ (特丁氧羰基甲基）一 N — B〇 c_D_ Ch a-P r.〇_ 賴胺炔醢（Cb z )中〔CHOHCO 〕〜01^6(〇.98克）之二噁烷/水 9/1 V / v < 2 0毫升）溶液中添加1 N氫氧化鈉溶液。混合物倒 入冷水中，藉添加1N氫氣酸溶液調至PH2且以乙酸乙 酉旨萃取。經結合之有機層以水洗，在硫酸鎂上乾燥，過濾 且眞空蒸發，產生1 ‘ 〇 5克N—(特丁氧羰基甲基）一 N — Bo c — D — Ch a — P r 〇 —賴胺炔醯（Cb ?) ^ [CHOHCO) - 0H° TLC:Rf = 〇 . 4 ，矽膠，乙酸乙酯/甲醇 7 /3 v / v 0 (c ) N —(特丁氧羰基甲基）_N — Bo c— D — Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔 CHOHCO) - NHC H 2P h 添加1 一羥基一苯並三唑水合物（15 0毫克），N 一甲基嗎啉（150"又），苄基胺（155"又）及1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .· f-

I 」 •Ό-· - 63 _ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^ 4 4 2 4 5 2 B7 五、發明説明（61 ) —(3 —二甲基胺基丙基）一 3 _乙基碳化二醯亞胺氫氯 化物（1 9 0毫克）至N —(特丁氧羰基甲基）—N -Boc — D — Cha—Pr 〇— 0 賴胺炔醯（Cbz ) Ψ 〔CH0HC0〕一 0H (5 0 2 毫克）之 N，N —二甲 基甲醯胺（1 6 ._6毫升）溶液中。反應混合物在室溫下 攪拌1 7小時。混合物倒入冷的1 N氫氯酸溶液中且以乙 酸乙酯萃取。經結合之有機層以水，5 %碳酸氫鈉溶液及 水洗。有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾且蒸發以產生N-( 特丁氧羰基甲.基）—N — Bo c— D-Ch a-Pr 〇 — 賴胺炔醯（Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 NHCH2Ph (5 12 . 4 毫克）。： TLC : Rf = 0 . 5 ，矽膠，二氯甲烷/甲醇 95/5 v/v。 (d) N—(特丁氧羰基甲基）—N — Bo c— D-Ch a — Pr 〇 —賴胺快醢（Cb ζ ) Ψ〔 COCO] - NHCHsPh 以如實例1 3 ( e )中所述者製備N —（特丁氧羰基 .甲基）—N — Bo c—D — Ch a — P r 〇 —賴胺炔.醯（ Cbz ) Ψ [COCO] - NHCHsPh 〇 TLC : 二0 . 3 2，矽膠，二氯甲烷/甲醇 97/3 v/v。 (e ) HOOC — CH2 - D — Ch a-賴胺块酸ψ〔 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本I·')

1 44245 2 at _B7_^_ 五、發明説明（62 ) COCO) - N H C Η 2 P h 以如實例1 3 ( f )中所述者製備HOOC-CHs —D — Ch a — Pr 〇 —賴胺炔醯 Ψ〔COCO〕一 N H C Η 2 P h 〇

Rt(LC) = 39 . 5 分鐘：20%A，80%B ，0%C 至 20%A，20%B，60%C，歷時 40 分 鐘。 實例1 . 8 H〇〇C-CH2-D_Ch a-Pr 〇賴胺炔醯屮〔 COCO) - N (CH3) 2 以如實例1 7中所述之類似方式，由N —（特丁氧羰 基甲基）_N_Bo c—D — Ch a — Pr 〇 —賴胺決醯 (Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 OH 開始，製備 HOOC — CH2— D — Ch a — Dr 〇 —賴胺炔醯屮〔 COCO) - N ( C H a ) 2 °

Rt(LC) = 32 , 84 分鐘：20%A，80% 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) ，0%C 至 20%A，20%B，60%C，歷時 40 分 鐘。 實例1 9 HOOC — CHs— D — Dp a — P r 〇 —賴胺炔醯—（ 2 _卩塞唑基） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -65 ~ A7 B7 442452 五、發明説明（63) (a) Boc— D — Dpa_Pro— OBzj? 在3〇(：—1) — 0卩压一0丑（5.2克）之1^，〜

_二甲基甲醢胺（5 0毫升）的冷（0 eC ·)溶液中順序地 添加1 一羥基苯並三唑（3 · 1克），二環己基碳化二醯 亞胺（3.3 毫克），H-Pro-〇Bz5.HCj2( 4 . 0 7克）及三乙胺（2 . 4 6毫升）◊混合物在0°C 下攪拌1小時且保持在室溫下過夜。混合物冷卻至_ 2 0 °(：且過濾除去二環己基脲。濾液蒸發至乾。殘餘物溶在乙 酸乙酯中且順序地以5 %碳酸氫酸，水及鹽水洗，在硫酸 鈉上乾燥且眞空濃縮。殘餘物在矽膠上層析（洗提劑：庚 院 / 乙酸乙酯 4/6 v / v ) ，j^，Boc-D-

Dpa- Pro — OBzJ? (8 . 7 克）° TLC : Rf = 0 . 9 5，矽石，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸 / 水 520/31/18/7 v/v/v/v°

(b) Boc— D — Dpa— Pro— OH 添加1 0%鈀/炭（1克）至Boc— D_Dpa — Pro -OBz交（7 . 0克）之甲醇（14 0毫升）溶 液中。混合物在室溫，大氣壓下氫化1小時。鈀觸媒過濾 除去且溶劑在減壓下蒸發除去以產生B 〇 c — D_D p a -Pro-〇H(5 · 5 克）0 T L C : R f = 0 . 5 9，矽石，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸 / 水 520/31/18/7 v/v/v/v° 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） --------Λ東-- (請先閲讀背面之注意事頃再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -66 - 44245 2 A7 B7 五、發明説明（64 ) (c ) Bo C— D — Dpa-Pr 〇 —賴胺炔醯—（2- _唑基） 依實例2 2中所述之程序進行Boc— D — Dpa — Pr ο— OH及Η —賴胺炔醯（Cbz ) — ( 2 —噻唑基 ).TFA間之經混合酸酐的偶合（參見實例1 )，產生 N-B 〇 c—D - Dp a — P r 〇 -賴胺炔醯—（2 — U塞 唑基）（_5 6 0毫克）。 TLC : Rf = 0 . 1 ，矽石，甲苯/乙酸乙酯 3 / 7 v / v 。 (d.)H-D — Dpa-Pro-頼胺炔醯（C b z ) ~ (2 — ϋ塞唑基）.T F A N-Bo c - D — Dp a— Pr 〇 — 賴胺炔醯一（_2 -P塞唑基）（5 6 0毫克）溶在乾的二氯甲烷（2. 5毫 升）及三氟乙酸（2 . 5毫升）中且在室溫下攪拌1小時 。溶液眞空濃縮且與甲苯共蒸發以產生H_D_Dp a — Pro — Lys (Cbz)-(2 -瞎唑基）.TFA( (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- ..广 η, 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 6 7 0毫克）。 T L C ： R f 1/1 v / v 0 51，矽石，甲苯/乙酸乙酯 e ) N -(特丁氧羰基甲基）一D._Dp a-Pr 〇-賴胺炔醯（C b z ) — ( 2 —瞎唑基） H-D — Dp a — Pr o — Ly s (Cbz) -(2 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -67 - A7 B7 442452 五、發明説明（邱） (請先閲讀背面之注意事頃再填寫本頁) —噻唑基）.TFA ( 5 7 0毫克）溶在乙腈（1 〇毫升 )中，添加溴乙酸特丁酯（141^52)。溶液以N，N 一二異基乙基胺保持在p Η 8且在室溫下攪拌2天。反應 混合物眞空濃縮，溶在乙酸乙酯中，以水及鹽水洗，在硫 酸鎂上乾燥且再次濃縮。殘餘物在矽石上使用乙酸乙酯/ 甲苯四分之一作爲洗提劑而層析，產生Ν —（特丁氧羰基 甲基）一 D — Dpa — Pr 〇 —賴胺炔醯（Cbz )—( 2 - P塞唑基）（4 9 9毫克〉。 TLC : Rf = 0 . 4 7 ，矽石，二氯甲烷/甲醇 9.6 / 4 v/v/v0 (f ) H00C-CH2-D — Dp a — Pr 〇 —賴胺炔 醯_ ( 2 —卩塞唑基） 依實例2 2中所述之程序進行N_ (特丁氧羰基甲基 )—D — Dpa — Pro -賴胺快酿（Cbz) — (2 — 瞎唑基）之去保護及純化。二非對映異構物混合物的產量 :1 7 7毫克。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Rt(LC) =32 . 57 及 33 . 22 分鐘，20 %八及8 至 2 0%A，2 0%B 及 6 0%C，於 4 0分鐘內。 實例2 0 HOOC — CH2— D-Ch a — N —環戊基一G 1 y — 賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一nh2 本紙浪尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） A7 I 442452 B7 五、發明説明（ 依實例1中之供二肽製備的程序，製備N —（特丁氧 鑛基甲基）一N — Bo c — D — Ch a— N —環戊基—丙 胺酸。 以如實例1 3中所述之類似方式，由B 〇 c —籁胺炔 醯（Cb.z ) Ψ〔CHOHCO〕一OMe 開始製備 N-(特丁氧鑛基甲基）_N_Bo c— D_Ch a — N —環 戊基—G1 y —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一 NH2。

Rt(LC)=34 . 09 分鐘；20%A，80% B，0%C 至.2 0%A，2 0%.B，6 0%C，歷時 4 0 分鐘。 實例2 1 HOOC — CH2-D — Ch a— Pr o—释胺炔醯 Ψ〔 COCO〕— NHCHs 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閎讀背面之注意事項再填寫本頁) 以如實例1 7中所述之類似方式，由N —（特丁氧羰 基甲基）— N — Bo c — D — Ch a — Pr 〇-賴胺炔醯 (Cbz ) Ψ〔CHOHCO〕一 OH 開始，製備 HOOC — CH2_D_Ch a_Pr 〇 —頼胺炔醯伞〔 COCO〕— NHCH3°

Rt(LC)=29 . 61 分鐘：20%A，80% B，0%C 至 2 0%A，2 0%B 及 6 0%C，歷時 4 〇 分鐘。 實例2 2 本紙張尺度適用中國國家榇準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -69 - 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印裝 ^ 442 4 5 2_b7_ 五、發明説明（67) N-Me-D-NiZ e-Pr 〇 -賴胺炔醯一(2 — 哇 基 (a) H-D-N^e-OMe .HCi? 在2 7 0毫升之冷卻至—1 5°C的甲醇中，添加1 8 .2克亞硫醢氯9隨後’使溫度升至一 1 Q°c，而後保持 恆定歷2 0分鐘，在此之後，添加1 0克H — D — Ni?e 一 Ο Η。溫度緩慢上升且在迴流下保持恆定5小時。產物 '由甲醇和乙醚，在4°C下結晶出且此產量1 2 . 9克。 TLC : Rf = 〇 . 6 1 ，矽石，正丁醇/乙酸/水 1 0/1/3 v/v/v。 (b) Boc-D — N 芡 e— OMe H-D-N5e-〇Me .HCJ? (12 . 9 克）溶 在2 0 0毫升乾甲醇中，接著添加二碳酸二特丁酯（ 15 · 5克）及三乙胺（19 . 8毫升）。反應在室溫下 攪拌3小時，在此之後混合物眞空濃縮。其次，殘餘物溶 在乙酸乙酯中且以水洗。產物在矽石上使用庚烷/乙酸乙 酯_ 3/1 v/v而層析。產量：16 . 9克。 TLC : = 0 . 5 5，矽石，庚烷/乙酸乙酯 3 / 1 v / v 0 (c ) N— Me—Bo c— D — NJ? e— 〇Me

Boc-D — Ni?e — OMe (1 6 . 9 克）在氮氣 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注頃再填寫參頁) 裝- 古 -70 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 442 45 2 五、發明説明（68 ) 下溶在2 0 0毫升乾N，N —二甲基甲醯胺中。其次，甲 基碘（2 4 . 9毫升）被添加，冷卻至〇 ，添加氫氧化 鈉（3 . 3 1克，6 0%油分散液）且使混合物在室溫下 反應16小時。混合物眞空濃縮，溶於乙酸乙酯中，以 0·1Ν氫氯酸，水，碳酸氫鈉（5%)及水洗，乾燥且 再次濃縮。此舉產生18 .8克烷基化的產物。 TLC : Rf = 0 . 5 6，矽石，庚焼/乙酸乙酯 3/1 v / v 0

(d ) N-Me — Bo c-D-NiZe-OH N— Me-B〇c— D — N 芡 e—:OMe (18 克） 溶在400毫升二噁烷/水 9/l(v/v)中且溶液 pH以IN NaOH調至1 2 °使反應進行2小時，保 持p Η恆在1 2下°完成程序包含以氫氯酸酸化’在冰上 冷卻，添加額外的水（4 0 0毫升）且以二氯甲院萃取。 有機層以鹽水洗，乾燥’過濾且眞空蒸發。此舉產生 1 8 . 9 克。 TLC : Rf = 0 . 2 6 ’矽石，二氣甲焼/甲醇 9 / 1 v / v 0

(e ) N— Me — Bo c— D — NJ2 e — Ργ ο— OH 首先，由 N — Me — B o c — D — N e — OH 開始 製備N - 丁二醯亞胺酯。1 8克之此衍生物溶在乙腈（ 2 5 0毫升）中添加乙基—3 —〔 3 —二甲胺基）丙

本紙織適細綱率（㈣贈幻〜I I--------^— /1· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 442452 A7 經濟部中央標率局員工消費合作社印裝 B7_五、發明説明（卯） 基〕一碳化二醯亞胺氫氯化物（EDC I ) ( 1 4 . 5克 )及N -羥基丁二醯亞胺（HONSu) (8 . 7克）。 反應在室溫下需1 6小時，在此之後，溶劑除去，殘餘物 溶在乙酸乙酯中且以水洗且乾燥。此舉產生2.4 .3克粗 製之ONSu酯。其次之步驟是將脯胺酸HCJ?( 2.0 . 9克）溶在3 0 0毫升N，N —二甲基甲醯胺及 3 0 0毫升水中且PH以2N NaOH溶液調至8。 ONSu酯之溶液（24 . 3克於300毫升N，N —二 甲基甲醢胺中.）被逐滴添加至此P Η爲8之溶液中。反應 在5小時後完成，在此之後，有機溶劑大部分藉減壓下之 蒸發而除去。添加額外的水（3 0 0毫，升）且混合物被酸 化。產物以乙酸乙酯萃取且以水洗。乾燥，過濾及濃縮後 ，得到黃色油狀之產物，2 2 . 2克。粗製之產物在矽石 上使用乙酸乙酯/甲醇 8/2 ν/ν作爲洗提劑而層 析。產量：13. 2克。 T L C : R f = 0 . 6 5，矽石，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸/水=163/20/6/11 v/v/v/v。 (f ) N— Me— Bo c— D — Ni? e — Pr 〇 —賴胺炔 醯（Cbz) — (2 —瞎唑基） N— Me— Boc— D — NJ2e — Pr o — OH ( 3 7 6毫克）溶在乾的N，N —二甲基甲醯胺（3毫升） 中。在N，N —二異丙基乙基胺之添加後，反應混合物置 於氣氣下冷卻至一 2 0°C。隨後添加氯甲酸異丁酯（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .萊. _:_丨严. --.訂— 72 A7 B7 442452 五、發明説明（70 ) ---------Λ 袁II {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 3 6 p P )且使混合物在—2 0°C下攪拌1 5分鐘。Η 一賴胺炔醢（Cbz〉一（2-ΡΙ唑基）.TFA (參見 實例1 )溶在乾的N，N —二甲基甲醯胺（3毫升）中且 逐滴添加至此冷的混合酸酐溶液中，藉添加N，N —二異 丙基乙基胺保持PH在8 , 5。反應混合物在一2 0°C下 攪拌1 5分鐘且在室溫下1小時。反應混合物蒸發至乾。 殘餘物溶在乙酸乙酯中且順序地以5 %碳酸氫鈉水溶液， 水及鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥且眞空濃縮。殘餘物藉著在 矽石上之層析.術（洗提劑：乙酸乙酯/庚烷 1/1 V /v )而純化以產生 Bo c-N — Me — D_Nj? e — Pro -賴胺炔醯（Cbz) — <2 - P塞唑基）（408 毫克）。 TLC : Rf = 0 . 2 1 ，较石，乙酸乙酯/庚院 1/1 v / v 0 (g ) N_Me— D — Nj? e — P r 〇 —賴胺炔醯一（2 一噻唑基） 經濟部中央棣準局負工消費合作社印製 依實例1 p中所述之程序製備B 〇 c — N — Me — D —N又e—P r 〇 -賴胺炔醯（Cb z ) — ( 2 “D塞吨基 )(408毫克）。粗製之產物倒在一使用20%A/ 8 0%B至2 0%A，3 0%B/5 0%C之梯度洗提系 統的製備性HPLC Delt p.a ck Cl 8RP管柱上，歷 時4 0分鐘，以8 0毫升/分鐘之流速。 二非對映異構物之產量： 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（2Ϊ0Χ297公釐） -73 - 442452 A7 B7 五、發明説明（71 ) 1 05 毫克 Rt(LC) =1 9 . 17 分鐘，2 0% A，8 0%B 至 2 0%A，2 0%B 及 6 0%C，於」4 0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 分鐘內。 1 0 0 毫克 Rt(LC) = 2 1 · 4 7 分鐘，2 0% A，80%B 至 20%A，20%B 及 60%C，於 40 分鐘內。 實例2 3 N-Me-D — Ph e-Pr 〇 —賴胺炔醯一（2 — d塞唑 基）

(a) N— Me—Boc— D — Phe — Pro— OH 依實例2中所述之程序，由H_D — Ph e — OH開 始，進行 N— Me— Bo c— D — Ph e— Pr o— OH 之合成。 經濟、部中央標準局員工消費合作社印製 (b ) N— Me.— D — Ph e — P r o —賴胺快醯—（2 一 0塞唑基） 依實例2 2中所述之程序進行N— Me— Bo c_D -Ph e— Pr o— OH 及 Η —賴胺炔醯一（Cb z )— (2 —噃唑基）.T F A間之經混合酸酐的偶合（參見實 例1 )，去保護且純化。 二非對映異構物之產量： 8 9 毫克 Rt(LC) = 8 · 4 5 分鐘，2 0%A， 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -74 - 44245 2 A7 ___B7_ 五、發明説明（72 ) 60%B及20%C至100%C，於40分鐘內。 6 3 毫克 Rt(LC) =1 0 . 89 分鐘，2 0%A ，6 0%B及2 0%C至1 0 0%C，於4 0分鐘內。 實例2 4 N— Me— D — Cha — Pr 〇 —賴胺炔醯一（2 —噻哇 基） ( a ) N— Me— Bo c— D — Ch a — P r 〇— OH /依實例3中所述之程序，進行N— Me— Bo c_D -Cha— Pro-OH 之合成。 (b ) N - Me— D — Ch a— Pr o -賴胺炔醯 一（2 P塞唑基） 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 依實例2 2中所述之程序，進行N - Me_Bo c — D-Cha — Pro— OH 及 Η —賴胺炔醯（Cbz)— 一（2 _噻唑基）間之經混合物酸酐的偶合（參見實例1 )，去保護及純化。 二非對映異構物之產量： 1 4 0 毫克 Rt(LC) =1 2 . 93 分鐘，20% A，60%B 及 20%C 至 100%C，於 40 分鐘內。 139 毫克 Rt(LC)=14 . 31 分鐘，20% A，60%B 及 20%C 至 100%C，於 40 分鐘內。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -75 ' 442452 ,B7 _ 五、發明説明（73 ) 實例2 5 、-. 乙基S〇2-D-Ch a-Pr 〇 -賴胺炔醯—（2瞎嗤" 基）

(a )乙基 S〇2— D — Ch a_Pr ο —〇H 依實例6中所述之程序，由Bo c — D-Ch a — OH及H-P r o — OP a c開始，進行乙基S〇2— D 一 Ch a — Pr o-OH 之合成。 (b )乙基S〇2— D — Ch a — Pr o —賴胺炔醯一（ 1 2 _ U塞嗖基） 依實例2 2中所述之程序，進行乙基S〇2— D — C h a-Pr o— OH 及 Η —賴胺炔醯（Cbz ) — ( 2 — II塞唑基）.T F A間之經混合酸酐的偶合（參見實例1 ) ，去保護且純化。 非對映異構物之產量：1 2 7毫克。

Rt(LC) = 44 52 及 45 . 58 分鐘，20 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ------------- (請先閲讀背面之注意事頃再填寫本頁) .Λ %A，8 0%B 至 2 0%A，2 0%B 及 6 0%C，於 4 0分鐘內。 實例2 6 2 -丙基戊醯基一Asp (OMe) — Pro —賴胺炔醯 —(2 -瞎唑基） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 442452 g 五、發明説明（74 )

(a) B〇c~~Asp (OMe) — OH H — Asp (OMe) — 〇H(10 . 0 克）溶於二 噁烷/水 2/1 ( 1 5 0毫升）中且在冰中冷卻。逐部 分地添加碳酸氣鈉（4 . 6克）及二碳酸二特丁酯（ 1 3 . 1克）。混合物攪拌1 6小畤，同時p Η以碳酸氣 鈿保持在8 . 5。添加水（4 0 0毫升）混合物廣泛地以 庚烷洗，在冰中冷卻，以1 Ν氫氯酸酸化成ρ Η 2 . 5且 以乙酸乙酯（3 0 0毫升）萃取。有機層以水及鹽水洗， 在硫酸鈉上乾.燥，過濾且眞空蒸發，產生Bo c— As ρ (OMe)-OH(10.2 5 克） TLC : = 〇 . 5 8，矽石，」乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸 / 水 163/20/6/11 v/v/v/v。

(b) Boc— Asp (OMe) — Pro-OBziZ 以如W 0 9 5 / 3 5 3 1 2實例1中所述者，但以 N—乙基嗎啉代替N—甲基嗎啉，合成BOC-Asp ( OMe ) — Pr 〇 — OBzi? 0 TLC : Rf = 0 . 4 0 ，矽石，二氯甲烷/甲醇 95/5v/v0 (c) H — Asp (OMe) — Pr 〇— OBzj?. H C J2

Boc— Asp (OMe) - Pr〇_0Bz)2 ( 7 · 2 5克）溶在乾的乙酸乙酯（2 5毫升）中且在冰中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS } A4规格（210X297公釐） ------------ (請先閱請背面之注$項再填寫本頁) -β _h. -77 - 442452 a? B7 五、發明説明（75 ) 冷卻。以氫氯酸（4 5毫升）飽和之乙酸乙酯被添加且混 合物在0 °C攪拌5小時。藉氮氣流除去過多的氫氯酸且所 得溶液眞空濃縮，產生白色固體狀之H_A s p ( OMe )—Pro-OBz 爻.HCJ?(6.21 克）。 TLC : Rf = 〇 · 1 7，矽石，二氯甲烷/甲醇 95/5 v/v。 (d) 2_ 丙基戊醯基一Asp (OMe) - Pro — Ο B z il 在 0°C 下添加 H — A& p (OMe)— Pro-OBzi2.HC义（6.21克），乾的二氯甲烷（1 0 毫升）及N，N —二異丙基乙基胺（2 0 0 " $ )至2 — 丙基戊酸酐之溶液（其已藉溶解2 —丙基一戊酸（ 1 · 6 3毫升）於乾的二氯甲烷（1 5毫升）中而製備） 中，在冰中冷卻，添加1，3 —二環己基碳化二醯亞胺（ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 . 1 1克）且攪拌此溶液5分鐘。混合物在室溫下攪拌 ，藉添加N，N —二異丙基乙基胺保持在pH在8 . 5歷 16小時，在此之後，添加0.5當量丙基戊酸酐且 溶液攪拌另外之4小時。而後，過濾除去1，3 -二環己 基脲。濾液眞空濃縮且殘餘物溶在乙酸乙酯中。此溶液順 序地以氫氯酸，飽和碳酸氫鈉及鹽水洗，在硫酸鈉上乾燥 且眞空濃縮。殘餘物藉著在矽石上使用甲苯/乙酸乙酯 8/2 v/v/作爲洗提劑之層析術而純化，產生2_ 丙基戊醯基一Asp (OMe) — Pro-OBzi?( 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -78 - 442452 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 五、發明説明（76 ) 6 . 5 4 克）0 TLC : Rf = 0 . 6 5，矽石，二氯甲烷/甲醇 95/5 v/v0 (e) 2 —丙基戊醯基一Asp (〇Me) - Pro — OH . 添加1 0 %鈀/炭（7 5 0毫克）至2 —丙基戊醯基 —Asp (〇Me)-Pr〇-〇BzJ? (705 毫克） 之甲醇（1 0毫升）溶液中。混合物在大氣壓並室溫下氫 化二小時。過濾除去鈀觸媒且在減壓下蒸發除去溶劑，產 生 2 —丙基戊醯基—Asp (〇Me):— Pro — OH( 5 8 0毫克）。 TLC : = 0 . 4 8，矽石，乙酸乙酯/吡啶/ 乙酸 / 水 163/206/6/11 v/v/v/v 0 (f) 2 — 丙基戊醯基—Asp (OMe) —Pro —賴 胺炔醯一（2 —卩塞唑基） 依實例2 2中所述之程序，進行2 —丙基戊醯基一 Asp (〇Me)—Pro — OH 及 Η -賴胺炔醢（ Cb ζ ) _ ( 2 —卩塞唑基）.TFA間之經混合酸酐間的 偶合，去保護且純化。 二非對映異構物混合物的產量： 18 6毫克1^(1^(：)=23.16及24.30 I';袁-- : 一 --V ί請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 訂 :一 0Ί. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -79 - 442 45 2 A7 B7 五、發明説明（77 ) 分鐘，20%A，60%B 及 20%C 至 100%C，於 4 0分鐘內。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例2 7 1 - P i g - Pr 〇 -賴胺炔醯一（2 —噻唑基）

(a) 1— Pi q— Pro— 0H 依實例8中所述之程序，進行1-Pi g-Pr o — 0 Η之合成。. (b ) 1 _P i g_P r 〇 —賴胺炔齡一（2 — Ρ塞哩基） 依實例2 2中所述之程序，進行1— P i g — Pr ο —OH及Η -賴胺炔醯（Cbz) — (2_睡唑基）. TFA間之經混合酸酐間之偶合（參見實例1)，去保護 且純化。 二非對映異構物之混合物： 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 9 2 毫克 Rt(LC)二 2 3 . 75 分_，2 0%A ，8 0%Β 至 2 0%A，2 及 6 0%C，於 4 0 分 鐘內。 97 毫克 Rt(LC)=25 . 72 分鐘，20%A ，80%B 至 20%A，20%B 及 60%C，於 40 分 鐘內。 實例2 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 80 442452 at :歡，7 乃” _ B7_l- . LL—」_ 五、發明說明（78) HO〇C — CH2— D-Cha-N —環戊基-G 1 y — 賴胺炔醯—（2 -噻唑基） (a) N_ (特丁氧羰基甲基）一 N-3Boc— D —

Ch a— N~ 環戊基—G 1 y - OH 依實例1 0中所述之程序，由H — D — Ch a — OH • HC$開始，進行N—(特丁氧羰基甲基）_N —

Bo c— D — Cha— N —環戊基一 G 1 y — OH 之合成 (b) HOOC — CH2— D-Cha— N -環戊基— G 1 y —賴胺炔醯一（2 —卩塞唑基） 依實例2中所述之程序，進行N —(特丁氧羰基甲基 )一 N — B 〇 c— D — Cha— N —環戊基一 G 1 y — 〇1^及11—賴胺炔醯（（：132) — (2—睡唑基）· 丁 F A間之經混合酸酐間的偶合（參見實例1 )，去保護 且純化。 二非對映異構物之產量： 10 7毫克尺七（1^(：)=20.39及2〇.82 分鐘，20%A，60%B，20%C 至 l〇〇%C，於 4 0分鐘內》 實例2 9 H0〇C-CH2— D-Phe-P r 〇 —賴胺炔醯 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -81 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 442452 五、發明説明（79) 2 —噻唑基）

(a) N —(特丁氧羰基甲基）—N — ：Boc_D-Phe — Pro— OH 依實例1 1中所述之程序，由H_D — Phe_OH .HCi?開始，進行N -(特丁氧羰基甲基）一>1-Bo c—D — Ph e — Pr o—OH 之合成。 (b ) HOO.C — CH2— D — Ph e— P r 〇 —賴胺炔 醯_ ( 2 — Pi唑基） 依實例2 2中所述之程序，進行化一（特丁氧羰基甲 基）—N — Boc — D- Phe-Pro-OH及H — 賴 胺炔醯（Cbz ) - ( 2 — D塞唑基） TFA間之經混合 酸酐的偶合，去保護且純化。 二非對映異構物之產量： 143 毫克 Rt(LC)=24 . 98 分鐘，20% A，80%B，2 0%A，20B 及 60%C，於 40 分 鐘內。 149 毫克 Rt(LC) = 26 . 91 分鐘，20% A，80%B 至 20%A 至 20%B 及 60%C，於 40 分鐘內。 實例3 0 HOOC-CH2-D — p-CJ2—Ph e -賴胺炔醯- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-82 - 經濟部中央標準局負工消費合作杜印製 A7_4 4 2 4 5 2_b7_五、發明説明（8〇 ) (2 -噻唑基） (a) N —(特丁氧羰基甲基）一N-Boc-D-p — C5-Phe-Pr〇-〇H 依實例1 2中所述之程序，由 Ph e — OH . HCJ?開始，進行N_ (特丁氧羰基甲基 )—N — Bo c— D — p— Cj? — Ph e — Pr 〇— OH 之合成。 { b ) HOOC-CH2-D-p-C5-Ph e~ P r o —賴胺炔醯-(2 -卩塞哩:基） 依實例2 2中所述之程序，進行N -（特丁氧羰基甲 .基）一N — Bo c— D— p— Ci? — Ph e— Pr 〇 — OH及H —賴胺炔醯（Cbz) — (2 —噻唑基）. T F A間之經混合酸酐間的偶合（參見實例1 )，去保護 且純化 0 二非對映異構物之產量： 187 毫克 Rt(LC)二 28 . 86 及 30 · 63 分鐘，2 0%A 及 8 0%B 至 2 0%，2 0%B 及 6 0% C，於4 0分鐘內。 實例3 1 再者，以下化合物可以藉使用本發明之方法製備： ---------Λ.笨！ {請先閔讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 h.:丨_ | r— 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -83 - A7 A7 442452 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 B7 五、發明説明（81 ) —H0 0C-CH2-D — Ch a — P e c —賴胺炔醯 Ψ [COCO] - 0 Η -H00C-CH2 — D — Ch a-Pe c —賴胺炔醯一 (2 _睡唑基）

-HO〇C — CH2-D — Cha - (N -環己基）一 G 1 y -賴胺.炔醯Ψ〔COC〇〕一〇H -H00C-CH2-D-Cha -（N—學己基）_ G 1 y —賴胺炔醯—（2_噻唑基） —HOOC — CH2_D — Cha — (N — 環丙基）_

G1 y —賴胺炔醯氺〔COCO〕_0H 一 HOOC - CH2_D_Cha -（N —琴丙基）_ G 1 y —賴胺炔醯一(2 —卩塞唑基）

-N-Me-D — Phe — (N —環戊基）-G1 y -賴 胺炔醯 Ψ〔 C 0 C 0〕一 Ο H —N— Me—D — Phe — (N—環戊基）—G1 y —賴 胺炔醢_ ( 2 —卩塞唑基） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-84 - 442452 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（82 )

-2 -丙基一戊醯基一 As p (OMe ) — Pr 〇-賴胺 炔醯 Ψ〔 COCO〕— OH -2 —丙基一戊醢基一 A s p -P r o -賴胺快醯Ψ〔 COCO) - Ο Η —2_丙基—戊醯基一 As p_Pr 〇_賴胺炔醯—（2 —P塞唑基） -2 —羥基—3 —環己基一丙醢基一P:r ο -賴胺炔醯Ψ 〔COCO〕- 0Η —2 _羥基一 3 —環己基一丙醯基一 P r ο —賴胺炔醯一 (2 _瞎唑基） 一 l_P.i q — (Ν —環戊基）_G1 y_賴胺炔醯Ψ〔 COCO) - Ο Η 一 1_P i (Ν—環戊基）—G 1 y —賴胺炔醯一（ 2 —瞎唑基） 一二苯基丙醯基一 Pr 〇 -賴胺炔醯_ ( 2_瞎唑基） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事頃再填寫本頁)

-85 - 4 4 2 4 5 2 a? _ B7_ 五、發明说明（83 ) -N— Me-D — N5 e — Pr 〇 —賴胺炔醯屮〔 COCO] - 0 Η —乙基S〇2—D — Ph e — P r ο —賴胺块酿平〔 COCO) - Ο Η 一乙基 S〇2-D — Ph e—Pr ο —賴胺炔醯一（2-Ρ塞唑基）

一乙基 S〇2-N (Me) - D- Cha — Pro -賴胺 炔醯Ψ〔COCO〕一 OH —乙基 S〇2— N (Me) - D- Cha-Pro -賴胺 炔醯一（2 _瞎唑基） 一乙基 S〇2-N (Me ) - D- Ch a — Pr o —賴胺 ---------------ΐτ------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 醯 炔 基 唑 噁 1 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ο c 2 ο He c (-Ψ c 醯 o 炔 0胺 H 賴

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D a h c ο f p c 醯 o 炔 ο胺 Η 賴 2 * Η 2 c ( H o

e Μ /V N

D a h c o Γ p 本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -86

經濟部中央標準局員工消費合作社印I 442452 五、發明説明（84) -HOOC-CH2-N (Me ) - D- Ch a-Pr ο 一賴胺炔酿_ ( 2 —噁唑基） 實例3 2 抗凝血酶分析 凝血酶（因子I I a )是一在凝固集聯中之因子。 本發明化合物之抗凝血酶活性藉著以分光光度計測量 由凝血酶所放.出之色原基質S - 2 2 3 8的水解速率而分 析。此種在緩衝劑系統中之抗凝血酶活性的分析被用來分 析測試化合物之I C 5。値。 測試介質 特羅美塞胺一N a c J2 —聚乙二醇6 0 0 (1^〇11^1:11-amine-NaCl-polyeUylene glycol 600，TNP )緩衝劑 。參考化合物：I 2 5 8 1 (Kabi)，載劑：TNP緩衝 劑。溶解作用可以用二甲基亞硕，甲醇，乙醇，乙腈或特 丁醇來輔助，這些物質在最高達最終反應混合物之2 .5 .%的濃度下不會有不利的效果。 技術 試劑 1.特羅美塞胺一NaCp (TN)緩衝劑。緩衝劑 之組成：特羅美塞胺（參）6 , G 5 7克（5 0毫莫耳） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） <請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) r.衣_ 釘 -87 - A7 B7 442452 五、發明説明（85 ) ，NaCj?5.844克（10 0毫莫耳），水加至1升 。溶液之pH以HCj? .( 1 0毫莫耳/升）在3 7°C下調 至 .TNP緩衝劑：聚乙二醇6 0 0溶在TN緩衝劑 中以得到3克/升之濃度。 3 .S-2238 溶液：一瓿 S — 2238 (25 毫 克；Kabi Diagnostica,瑞典）溶在2 0毫升TN緩衝劑 中以得到1 . 2 5毫克/毫升（2毫莫耳/升）之濃度。 凝血酶溶液：人類凝血酶（1 6 0 0 〇 nkat/瓿： Centraal Laboratorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam ，荷蘭）溶在TNP緩衝劑中以得到8 3 5 nkat/毫升之儲備溶液。在將要使用前，此溶液以T N P 緩衝劑稀釋以得到3 . 3 4 nkat/毫升之濃度。 一*所用之所用成份皆爲分析級的. —對水溶液而言，使用超級純的水（M i 1 1 i — Q品質 測試及參考化合物溶液之製備 測試及參考化合物溶在Μ丨1 1 i 一 Q水中以得到 1 0_2莫耳/升之儲備濃度。每一濃度以載劑逐步稀釋成 1 〇-3，1 0-4及1 〇-5莫耳/升之濃度。此稀釋液（包 括儲備溶液）用在分析中（在反應混合物中之最終濃度。 分別是 3 · 1 0~3; 1 0~3: 3 . 1 〇-4; 1 〇_4: 3 . 1 Ο-5; 1 Ο.5: 3 · 1 0.6 及 1 Ο-6 莫耳 / 升）。 良紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ---------1' 求__ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -88 - A7 B7 442452 五、發明説明（86 ) 程序 (請先閱讀背面之注f項再填寫本頁) 在室溫下0 . 〇 7 5毫升及0 . 〇 2 5毫升測試化合 物或參考化合物溶液或載劑交替地以吸量管吸取入微滴定 皿之洞中且這些溶液分別以〇.115毫升及 .0 . Ο I 6 5毫升TNP緩衝劑稀釋。一份〇 * C) 3 0毫 升S — 2 2 3 8溶液被添加至每一洞中且皿在—保溫器（ Am ersh am)中，在3 7°C下，伴著搖盪下被預熱且預先保 溫1 0分鐘。.在預先保溫後，藉添加〇 〇 3 〇毫升凝血 海溶液至每—洞而開始S — 2 2 3 8之水解。皿在3 7 C 下保溫（伴著搖盪3 0秒）。在保溫1分鐘後開始，每2 分鐘測量每一樣品在4 0 5 nm下之吸光度，共歷9 0分 鐘，此係使用動力微滴定皿讀計（Twinreader plus,

Flow Laboratories ) 0 所有資料收集在一使用LOTUS-MEASURE之I BM個人 電腦中。對每一化合物濃度（以mo 1 . β—1反應混合物 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 表示）且對空白組而言，吸光度對反應時間（單位：分鐘 )作圖。 反映之評估 對每一最終濃度而言，最大吸光度由分析作圖計算得 到。使用logit轉換分析，依Hafner等人（人「2。6丨!11-

Forsch/Drug Res. 1977; 27(11):187 1 -3),計算 I C 5〇値 (最終濃度，以"m〇 1 . — 1表示，引起空白組之最大吸光 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -89 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _4 4 2 4 5 2_b7_ 五、發明説明（耵） 度的5 0 .%抑制）。 在下表中，列有本發明化合物之I C 5。値： 實 例 I C S 〇 -値（a Μ ) 1 0.56 3 4 . 3 1 1 5 1 5 0 . 7 2 7 4.64 3 0 5 . 1 .幕-- c (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 90

Claims (1)

1. 經濟部智蒽財是局負工消骨合作社印製 中文申請專利範圍修正本 民國8 9年9月修正 1 . 一種具有式I之化合物 Η - 中是 } 其 Α ο /__V C

   A-B-X-NH-CH-C^O)Y C 8 τ—I | τ—_ -2( ο 基 TX ， c S -醯 丙 基 苯 二 或 ( m 1 ) C 2 Η ο c ο Η c -2 ο ο ο s j C 8 I Hi 基 烷 I } 基 c t卞 2 ， (請先閱讀背面之注意事項再魂寫本頁) 訂 C 基 烷 \1/ C 8 2 或 1 爲m 且 Η c I H N I 式 鍵1 是 B H o c B h c 2 或取 酸素 基鹵 胺經 之’ - e \Jy h 〇 p 2 物 e H生 h C 衍 p i 酯之 t 其代 且 D } 或 ο 1 ( 是 c P N y 或1 a G p 之 D代 ’ 取 q 經 i I p N I ， 3 o I r D p ’ 是 Q X 段 片 下 ; 以 e 或 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公楚：） 442452申請專利範圍 A8 B8 CS D8 ,(ch2)\ -NH-CH 一 N-CHrC(0)-

   其中η是2 ，3或4 ; Υ 是—C ◦一 NH — (1 — 6C)伸院基一CsH5 ，一 C〇ORs (其中 Re是 Η 或（1 — 6C)烷基）， —C〇NR7R8 (其中R7及R8各獨立爲Η或（1 — 6C )烷基，或R 7及R 8—同形成伸丙基），或Υ是2 —噻唑 基； r是1或2 ; 或其其藥學上可接受之塩。 2 .如申請專利範圍第1項之化合物 經取代之G 1 y。 3 .如申請專利範圍第1項之化合物 其中X是N — 其中 B是一鍵，Cha ，Phe ，經鹵素取代之Phe D-l-PiQ'D-3 Q D p a ，或 N 1 e 請 閱 讀 背 面 之 事 項 再 填r. 寫、 本 頁 經濟部智蒽財/$.局具工消#合作社印製 4 .如申請專利範圍第3項之化合物*其中A是H， (1 — 8C)烷基一S02—，笮基一S02~ ，H〇〇C -((：112)[11—或（1 一 8C)烷基一〇0C— (CH2 Y 是一CO — NH — （ 1一6 C)伸烷基一CeH5, -C00R6 (其中Re爲Η或（1-3C)烷基）， ，—CONR7R8 (其中R7與R8各獨立爲Η或（1 一 3C)烷基，或R7與R8—同形成伸丙基•或Υ是2-口塞 唑基。 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）-2 - -44 -2 4 5 2--- 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再，填k本頁) 5 .如申請專利範圍第4項之化合物，其中A是 H〇OC — (CH2) m —或（1 — 8 C)院基一00C — (C H 2 ) m-:且X爲Ρ Γ 〇或N —經取代之G 1 y » 6 ·如申請專利範圍第5項之化合物，其中A是 HOOC — CH2; B 爲 D — Phe ，D-Cha ，D — D p a ，ρ — Cl— D — Phe >m-Cl-D — Phe 或 D — N 1 e。 7 .如申請專利範圍第6項之化合物，其中Y是2 — 噻唑基。 8 .如申請專利範圍第4項之化合物，其中A是（1 一 8C)焼基—S〇2 - 或爷基— S〇2— ; X 是 P r 〇 ’ N —(環戊基）—Gly 或 norLeu (環.）一Gly 9.如申請專利範圍第8項之化合物，其中A爲乙基 —S02 —或爷基 _S〇2 —。 1 0.如申請專利範圍第9項之化合物，其中Y是— co~nh-ch2-c6h5> - co-nh-ch2~ 經濟部智葸財產局员工消費合作社印製 C H2— CeH5或一C ONR7R8，其中R7及R8各獨立 是H或（1 — 3C)烷基，或R 7和R8 —同形成伸丙基* ，或Y是2 —卩塞唑基。 1 1 ·如申請專利範圍第1至1 〇項中任一項之化合 物，其中r是1 。 1 2 _ —種用於治療或預防與凝血酶有關之疾病的醫 藥組成物’其包括作爲活性成份之如申請專利範圍第1至 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS } A4说格（210X297公釐) -3 - * 44245 2 gs8 六、申請專利範圍 1 1項中任一項之化合物及藥學上適合之辅劑。 (請先闖讀背面之注意事項再r^本頁) 經濟部智慧財是局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（2丨Ο X 297公釐） —4 —

   申請曰期 附件二A :第86102261號専利申諝案中文說明書修正頁民國89年9月呈 86 年 2月 25日 案 號 86102261 \ +.Ί ···.- 5:7 類 /ζι, C〇^. (> 2%2 ^%〇 欄由本局填註 442452 If鋈專利説明書 發明 新型 名稱 發明 創作 人 中文 英文 姓名 國籍 住、居所 姓 名 (名稱） 具有炔基胺基侧鍵之絲胺酸蛋白酶抑制劑 ierine protease inhibitors having an alkynylamino side chain ⑴安頓 * 丹 Adang, Anton Egbert Peter* (1)荷蘭 (1)荷蘭安和芬塞頓布洛克路七+七號 Le Sage ten BroeKlaaa 77, 5615 CR Eindhoven, the Netherlands ⑴艾克佐諾貝爾公司 Akzo Nobel N*V, 裝 訂 經濟部贫麓財走^择工^費合作社印製 三、申請人 國 住、居所 (事務所） 代表人 姓 名 (1)荷蘭 ⑴苘蘭六八二四亞漢雒蒈路i：十六號 Velperveg 76> 6824 BM Arnhem, The Netherlands ⑴彿♦赫曼 Hermans, F. G. Μ, 皮♦布洛恩斯Brons, Ρ· Κ· 本紙張尺皮適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 χ：297公釐） 442452 A7 B7

   η 五、發明說明（12) (1 一 6 C )烷氧基一詞意謂具1 — 6碳原子之烷氧 基，其烷基部分具有先前定義之意義。 (3 _8 C)環烷基意謂一具有3 — 8碳原子之環烷 基，即環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基或環辛 基。環戊基和環己基是較佳的環烷基》 鹵素一詞意請氟，氯，溴或碘。 酯.衍生物一詞意謂任何合適之酯衍生物，較佳地（1 —4 C )烷基酯，如甲基一，乙基—或特丁基酯。 1—及3 — Ti q分別意請1 ，2，3，4一四氫異 喹啉—1 一或—3_羧酸；1 一及3-P i q分別是1 — 及3 -羧基全氫化異瞎啉：At c是2 —胺基四氫化棻一 2 —羧酸；A i c是胺基喆滿羧酸；P h e苯基丙胺酸； Cha是環己基丙胺酸；Dpa是二苯基汚胺酸；Coa 是環辛基丙胺酸；Chg是環己基甘胺酸；Nj? e是正白 胺酸》 疏水性側鏈一詞意謂任意被一或多個（3 - 8 C )環 烷基或（6 — 14C)芳基（其可以含有一雜原子），如 環己基，環辛基，苯基，吡啶基，某基，四氫棻基及其類 所取代之（1 — 1 2 C )烷基，該疏水性側鏈可任意地被 取代基，如鹵素，三氟甲基，低碳烷基（例如甲基或乙基 )，低碳烷氧基（如甲氧基），苯氧基，苄氧基及其類所 取代 在各定義中，經取代一詞意請：被一或多取代基所取 代 15 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 442452 A7 B7 K本1年τα 五、發明說明（ΐ6) 及一賴胺炔醯-（2一瞎哩基）意謂下式之殘基 ΝΗπ -NH-CH-C(O)-Υ 其中 Y分別是C〇〇H ’ 〇CH3及2 —噻嗤基《 Az t = 2—吖丁陡羧酸；Boc==特丁氧羰基 =苄氧羰基；Bzl=书基。 C b z 實例1 H00C — CH2— D — Cha — P r 〇 -賴朦炔醯—（ 齊 ip W i !才 k 2 —噻唑基） (a) 1 —胺基—4_氯—2 — 丁炔氫氣 1，4 —二氣—2— 丁炔（73 . 8 6 0 0毫升）中。添加六胺且反應混合物 2 . 5小時，而後在5 °C下冷卻2 4小時 出（220克）。錯合物之乙醇（1升） (1 8 0毫升）在室溫下攪拌2 4小時。 濾出且濾液在減壓下濃縮直至結晶開始6 化物 克）溶在氯仿（ 在迴流下加熱 。六胺錯合物爐 溶液與濃氫氯酸 沈澱之氯化銨被 添加乙醚，而後 經沈澱之1 _胺基—4 —氯一2 — 丁炔之氫氯化物。由乙 醇/醚中之再結晶提供1 _胺基—4 —氯一 2 — 丁炔氫氣 化物（5 9 . 7 5克）。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

   本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 442 4 5 2 a7 I 修正 > _ - _B7 j韶亦+' 五、發明說明（Μ) (c) HOOC — CH2— D — Cha-N —環戊基- G1 y —賴胺炔醯 Ψ〔COCO〕一 OH 依實例3中所述之方法，N —（特丁氧羰基甲基）- N-B 〇 c — D — Cha — N —環戊基一G 1 y-ΟΗ ( 547毫克）偶合至Η —賴胺炔醯（Cbz) Ψ〔 CHOHCO〕一〇Me . TFA (參見實例 3 (c)) ，在此之後，經保護之三肽（6 6 0毫克）被皂化，氧化 ，去保護且純化以產生2Ί 2毫克之非對映異構物混合物 锻式之 Η 0 ◦ C _ C_H2 — D - C h.a — N —環戊基— GI y —賴胺炔醯 Ψ〔COCO〕一 OH。R^：(LC) = 28 · 5 及 29 . 1 分鐘，20%A ，80%B 至 20%A，2 0%B 及 60%C。實例1 1 HO0C — CH2— D — Ch e — P r 〇 —賴胺炔醯识〔 C O C Ο〕一 Ο Η 依實例1 0中所述之程序，使用Ν~ (特丁氧羰基甲 基）一 N — B 〇 c-D — Phe—OH 及 H — p f 〇 —◦ Β ζ 1 . HCj?製備Ν —(特丁氧羰基甲基）—ν — —Bo c— D — Phe — P r ο — 0H。 TLC : Rf = 〇 . 63 ,砂膠，乙酸乙醋/0比卩定/ 乙酸/水 664/31/18/7 v/v/v/v。 HOOC — CH^-D-Phe — P r 〇 —賴胺炔醯巫〔

   -----------裝--- (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) si· -丨線.' >< 本紙張尺度適用中國國家^準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -50 - 442452 A7

   五、發明說明（58) 提系統，歷時4 5分鐘，以8 0毫升/分鐘之流速。 (A : 0 . 5 Μ磷酸鹽緩衝劑p Η 2 _ 1，B :水，C : 乙腈/水 3/2 ν/ν) Massa：FAB+： 5 18 · 3 [M+H)+； FAB~ ;516 2 CM + H)- Rt(LC) = 26 · 24 及 26 . 70 分鐘（非對 映異構物混合物）·· 20%A，80%B，0%C至20 %A，’ 60%C，歷時 40 分鐘。 實例1 6 HOOC — CH2— D — Cha— N —環戊基—G 1 y — 賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一（1—吖丁啶） 依實例1中之程序製備N —(特丁氧羰基甲基）一 N 一 Bo c—D - Cha— N —環戊基—丙胺酸。 以如實例1 5中所述之類似方式製備N-(特丁氧鐵 基甲基）一N - Boc— D — Cha— N —環戊基一 G1 y —賴胺炔醯Ψ〔COCO〕一（1—吖丁啶）。 40 1毫克N —(特丁氧羰基甲基）一N — B 〇 c— D — Cha-N —環戊基一G 1 y —賴胺決醯Ψ〔COCO〕 —(1 —吖丁啶）之去保護會在HP L C純化後得到 1 0 7毫克產物。 Mas s a ： F A B + ' 5 4 6 . 2 [M+H〕+; FAB-;544.0〔M + H〕- Rt(LC) =35 . 85 分鐘：2〇%A，80% —61 — {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 442452 at :歡，7 乃” _ B7_l- . LL—」_ 五、發明說明（78) HO〇C — CH2— D-Cha-N —環戊基-G 1 y — 賴胺炔醯—（2 -噻唑基） (a) N_ (特丁氧羰基甲基）一 N-3Boc— D — Ch a— N~ 環戊基—G 1 y - OH 依實例1 0中所述之程序，由H — D — Ch a — OH • HC$開始，進行N—(特丁氧羰基甲基）_N — Bo c— D — Cha— N —環戊基一 G 1 y — OH 之合成 (b) HOOC — CH2— D-Cha— N -環戊基— G 1 y —賴胺炔醯一（2 —卩塞唑基） 依實例2中所述之程序，進行N —(特丁氧羰基甲基 )一 N — B 〇 c— D — Cha— N —環戊基一 G 1 y — 〇1^及11—賴胺炔醯（（：132) — (2—睡唑基）· 丁 F A間之經混合酸酐間的偶合（參見實例1 )，去保護 且純化。 二非對映異構物之產量： 10 7毫克尺七（1^(：)=20.39及2〇.82 分鐘，20%A，60%B，20%C 至 l〇〇%C，於 4 0分鐘內》 實例2 9 H0〇C-CH2— D-Phe-P r 〇 —賴胺炔醯 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -81 f 442452 A5 B5 四、中文發明摘要（發明之名稱： )具有炔基胺基側鏈之絲胺酸蛋白 酶抑制劑本發明係關於具有式I之化合物

   A-B-X-NH-CH-C(0)Y 中是 其A R R ~ R D ， 之I 代一 取0 經< 意C 任| > ο HI 基 醯 乙 基 羥 - ί. ^—^1 —I— m 1 ..1 ,'*-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁各欄) R > Η基 2C 護 0C 保 s ΙΝ οι ο m 2 SJ R Η c Η N 自 擇 1 R 中 其 } I 2基 o2R 烷 ο c Η ) S c c C R ο或 ο 2 , R i 荚文發明摘要（發明之名稱：SERINE PROTEASE INHIBITORS HAVING AN ALKYNYLAMINO SIDE CHAIN) The invention relates to a compound having the formula I nh2 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 A-B-X-NH_CH-q〇)Y (I) wherein A is optionally substituted D,L α-hydroxyacety!, R1, R'-O-CiO)-, R^CiO)-, R200C-(CHR2)m-S02-, R2OOC-(CHR2)m-, H3NCO-(CHR2)m-t or an N-protecting group, wherein R1 is selected from (l'12C)alkyl, (2-12C)alkenyl, (2-12C)alkynyl and (S-SCJcycloalkyl, which groups may optionally be substituted with (3-8C)cycloalkyl, (l-6C)alkoxy, oxo, OH, COOH, CF3 or halogen, and from (6-14C)aryI, (7-l5C)aralkyI and (8-16)aralkenyl, the aryl groups of which may optionally be substituted wth (I-6C)alky1, (3-8C)cycloalkyl, (I-6C)alkoxy, OH, COOH, CF3 or halogen; each group R2is independently H or has the same meaning as R1； m is 1, 2 or 3; B is a bond, an amino-acid of the formula -ΝΗ-0Η[(0Η2)ρ0(Ο)ΟΗ]Ό{Ο)- or an ester derivative thereof and p being 0, 1，2 or 3» -N((l，12C)alkyI)»CHz-CO，， -N((2-12C)alkenyl)-CH2-CO-, -N((2-12C)aIkynyl)-CHi-CO-, -NfbcnzylJ-CHj-CO-, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aict D-1-Piqr D-3-Piq or a L* or D-amino acid having a hydrophobic, basic or M氏張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（21〇><297公釐） -2 -

   經濟部智蒽財是局負工消骨合作社印製 中文申請專利範圍修正本 民國8 9年9月修正 1 . 一種具有式I之化合物 Η - 中是 } 其 Α ο /__V C

   A-B-X-NH-CH-C^O)Y C 8 τ—I | τ—_ -2( ο 基 TX ， c S -醯 丙 基 苯 二 或 ( m 1 ) C 2 Η ο c ο Η c -2 ο ο ο s j C 8 I Hi 基 烷 I } 基 c t卞 2 ， (請先閱讀背面之注意事項再魂寫本頁) 訂 C 基 烷 \1/ C 8 2 或 1 爲m 且 Η c I H N I 式 鍵1 是 B H o c B h c 2 或取 酸素 基鹵 胺經 之’ - e \Jy h 〇 p 2 物 e H生 h C 衍 p i 酯之 t 其代 且 D } 或 ο 1 ( 是 c P N y 或1 a G p 之 D代 ’ 取 q 經 i I p N I ， 3 o I r D p ’ 是 Q X 段 片 下 ; 以 e 或 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公楚：）