TW434249B - Enzyme-treated hesperidin, process for producing the same and method of using enzyme-treated hesperidin - Google Patents

Description

434Ι4§ A7 __B7_ 五、發明説明（1 ) 發明赀暑 1 .發明領域 本發明偽有關一種具極佳的水中溶解度之經酵素處理 之柑果及有關其製法及用途。 2.先前技蕤之描述 柑果苷偽式[Π所示的化合物之名稱，為由芸香糖[或 稱L-鼠李糖基-(«-6)-葡萄糖]經jS-鍵結，鍵結於柑果苷 素[或稱5,7,3夂三羥基- 4’-甲氣基黃烷酮於第7位置上而 成者。 m. -- HI I— - - n ,:... (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

A

[核果苷]

訂 麵 經濟部中央橾隼局員工消f合作社印製 含於未成熟的柑橘類果皮中之柑果苷被使用於豳藥及 化粧品中，作為維生素P的來源（維生素P展現各種生理活 性如強化徹血管、防止流血及調節血壓）。柑果甘溶於鹼 性水溶液中，但實質上不溶於水及酸。常溫下，50升水僅 溶解約1克柑果节（約0 . 0 0 2 v / v % )。當柑果甘含於（卽使以 少量）例如罐裝産品之糖漿中時，糖漿會變混濁並損害其 商業價值。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 389 8 2 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 4 3 42 4 9·..： A7 _B7 五、發明説明（2 ) 己有多件可防止因柑果甘的存在而導致糖漿混濁之方 法被提出。 例如，日本專利特開平3-7593號案掲示一種水中溶解 度提昇的之經酵素處理之柑果f,其中傺使_類轉移酵素 ,特別是具有α-葡糖基轉移酶活性之酵素，在作為葡 糖基_類化合物之部分澱粉水解物之存在下作甩於柑果苷 ，以形成式[II]所示之α-葡糖基椎果甘。 [α -蕕糖基柑果甘]

ct-蕕糖基柑果f如式[II]所示，為一種單一化合物（ 其中，葡萄糖（G)的n(l至20)個單元藉由lf4 -鏈結而連續 地鍵結於式[I]所示之柑果甘中的葡萄糖之第4位置）或是 由蕕萄糖單元數目彼此不同之α -葡糖基柑果苷所成的混 合物。 在上述酵素反應中.原料液體中之40至80¾柑果甘在 酵素處理期間轉化為葡糖基柑果节，而20至60¾之柑 果苷維持完整。雖然當與α-翻糖基柑果甘共存時，完整 的柑果f在水溶液中展現相對地高溶解度，但完整的柑果 甘對ct-葡糖基柑果苷之比例昇高時，導致柑果甘在短期 ^^1· ^^^1 -I -_ nn In .I ti / ·! ' (请先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) L1. 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2:0X 297公釐） 4 3 8 9 8 2 43414^ A7 AI B7 五、發明説明（3 )内的不溶及沈澱。可以嘗試其他可防止完整的柑果苷沈澱之方法，其中 經濟部中失標準局員工消费合作社印狀 以粘 中於 液由 溶像 之此 f 果受 柑接 有被 含不 至常 加通 添法 素方 維該 继而 基然 甲 。 羧度 如粘 質的 物液 _ 容 new 17— 粘加 將增 在 用 使 之 質 物 膠 粘 且 趙 ' 的 者 〇 費故 消之 低止 減禁 會被 加傜 添上 之品 質産 物銷 膠外 : 除 為去 法濾 方過 1 如 又例 之法 澱方 饮 離 t分 果用 α 柑使對 的由¥ 整藉果 完 ，柑 止時的 阻澱整 可沈完 之 苷低 用果降 可柑而 他的 ， 其整澱 完沈 當該 例 比 之 苷 果 柑 基 糖 葡 長 段 1 過 經 在 C 於致 由所 偽點 此缺 , 的 液澱 溶沈 全 會 完仍 不甘 供果 提柑 法的 方整 此完 而 ， 然後 間 時 在 法 方 之 離 分 析 層 如 例 由 0 為 法 方 前 液 溶 水 之 果 柑 的 整 完 及 果 柑^ » 可-α 他有 其含 用 使 會決 α 於解 出由為 離 - 單上 點 觀 濟 經 在 法 方 此 而 然 ο 分 部 之 i 柑 基 耱 0 究 研 的 入 深 而 泛 廣 〇 行 受進 接等 被人 不明 而發 加本 增 ， 本題 成問 致等 導此 . 時 .1中 2液 3溶 C之 (Ε甘 酶果 苷 柑 糖整 李完 鼠及 L-f -果 柑 基 糖 0 整 完 持 保 上 質 實 且 化 變 生 産 α 未 柑 使 ΐ 基 現11果 唐 isM 柑 果 I 基 結 α 糖 ， 有 葡 度 解 ί I 溶 I ί 水 式的 及佳 糖極 李，有 ®具 成種 解 一 水生 甘産 果並 (請先聞讀背面之注意事項再填耗本頁) 含 α 於 的 用述 作前 柑 的 述 後 而 素 苷 31/ 柑 基 糖 0 單 的 示 所 間 時 長 放 置 之 使 使 即 且 於 α 基 使 〇 而 甘 ， 果 高 柑 提 的 .度 理 解 處 溶 素 中 酵 水 經 之 得 苷 而 果 I 〇 彬 處明使 之發為 濁本 ‘ 混成者 成完此 造而於 無現關 亦發有 -等 後此 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) Α4規格（210X 297公釐） 5 3 8 9 8 2

43424 I A7 B7 五、發明説明（4 ) •L -鼠李糖作用於柑果苷.以將柑果甘轉化為/9-單葡 糖基柑果甘素之方法已以工業規模製造，以防止罐裝柑果 之糖漿混濁。 然而，未曾有任何之獻揭示本方法之有關作為具有α -L-鼠李糖节SI活性之酵素的柑果苷酶作用於含有cc-葡糖 基柑果节及完整的柑果苷之溶液，使於前述的α-葡糖基 柑果苷之鼠李糖部分完整保留，而專一性地將後述的柑果 甘中之鼠李糖部分水解，使柑果节轉變成/3-單葡糖基柑 果甘素，而提高溶液之水中溶解度。 經濟部中央標準局貝工消f合作社印製 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 日本專利特開平8 -8017 7號案掲示一種預防柑果苷之 晶體沈澱的方法，偽將經溶解的柑果甘添加至含有柑果苷 之溶液中。該日本專利公開案描述該經溶解的柑果苷傲一 種具1至10個或更多葡萄糖部分經由1,4-鍵結而連缠地鍵 結於柑果苷之蒱萄糖部分的第4位置之化合物，並描述該 經溶解的柑果苷可藉使醏轉移酵素[可以是CGTSS (CGTase) 或1,4-ct -D-聚葡萄糖；1,4-α -D-(l,4-聚葡萄糖基）-轉 移酶以.（：.2.4.1.19)，例如由捍薗屬冉2-53薗株之培養而 得者]在環糊精存在下，作用於柑果甘而製得。 然而，該日本專利公開案僅掲示將經瑢解的柑果节與 完整的柑果苷混合，以預防在具柑果节之産品中的柑果苷 晶體沈澱之技術思想。再者，此方法提供一種α-葡糖基 柑果甘與柑果苷之混合物，其中完整的柑果甘保持其完整 。因此.由此方法製備之罐裝産品具有其糖漿漸呈混濁之 缺點。為克服此困難，於該日本專利公開案之宵施例中. 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公慶） 6 3 8 9 8 2 434i4§ A7 ___,_B7 _五、發明説明（5 ) 將α-單葡糖基及ct-二葡糖基柑果甘之部分在使用前予人 單離。然而吾人若意欲以低成本單離該等部分時，可能會 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 困 之 上 術 技 遇逋 之 明 發 i^ig 之 & 中 明¾水 罾^« 。 - 苷 題 α 果 問自柑 等程之 彼製理 的的處 中單素 餒簡酵 技由經 前經得 先可而 決種物 解一合 於供混 在提之 明於苷 發在果 本的柑 目 及 要苷 , 柑 濁 裝 混 罐 或 止 澱 防 沈 於 體 用 晶 地 成 效 造 。有 致途種 不用 一 亦及供 存法提 貯製係 期之的 長 甘 目 使果 一 邸柑另 且種之 , 該 明 佳供發 極提本 度及 解以 係 其 f as, 柑 之 m: 理 處 素 酵 。經 甘供 果提 柑為 之的 理目 癍 一 素又 酵之 經明 的發 濁本 混 果 劑0 之 色 植 劑 色 箸 然· 天 止. 防 有 為 作沭 於摘 用明 適發 Ψ 果 柑 之及 理以 處节 素果 酵柑 經及 明甘 發果 本柑 基 糖 葡之 _ 言 a , 詳 有 含 丨 於 在 擞 持 其 素 f 果 柑 基 糖0 單 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本1) a 份量 ί» 3 1* 之 份 里 。 重素 少 f ε β 5 β 或柑 ,1基 J糖0 單 有 含 法 製 之 f 果 柑 計 3, 的 苛 之理 果份處 柑量素 基重酵 糖.5經 1 ο 發 及本 f 如 ay 以柑 於 在 嫩 特 其 α 使 液 溶 之 用 作酶 f 糖 李 鼠 α 有 含 甘 柑 的 述 後 將 此 0 以 甘 果 柑 及 果為 柑變 基改 糖或 插 化 -鞞 糖 葡 單 柑 有 含 於 用 作0 移 轉 醏 α 使 有由 含藉 之等 理彼 處用 明使 發是 本好 。 依 較 素欲 ， f 於液 果至溶 柑 之 基¥ 果 相 及 甘 果 柑 基 糖 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X2W公釐） 3 8 9 8 2

4 3 42 4 S A7 B7 五、發明説明（6 ) 果甘及α-蒱糖基醏類化合物之溶液而獲得者。 於本發明，較好僳使用具有α-L -鼠李糖苷酶活性之 柑果甘酶作為酵素。 又，於本發明中，較好是如此獲得的經酵素處理之柑 果管含有α -葡糖基柑果节及柑果f以及yS-單葡糖基柑果 甘素，詳言之，以1重童份之α-葡糖基柑果甘計，含有 0.1或更少重量份之柑果苷及0.1至0.5重量份之卢-單葡糖 基柑果苷素。 本發明中，進一步使具有ct-L -鼠李糖苷酶活性之酵 素，特別是柑果节酶作用於含有α-葡糖基柑果苷及柑果 甘之溶液中，以將後述之柑果t轉化為/9-單葡糖基柑果 节。該前述之α-#糖基柑果f可藉由與葡萄糖澱粉_(Ε. C,3,2.1.3)或/3 -澱粉酶（E.C.3.2. 1.2)作用，同時或接箸 與本酵素作用，而轉變為α-單葡糖基及ct-二葡糖基柑果 f。 經濟部中央標华局負工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填商本頁) 藉由本發明方法之操作，可輕易獲得呈包括α-葡糖 基柑果f及Θ -單葡糖基柑果苷素之組成物形式之經酵素 處理之柑果甘，其在水中之溶解度極佳，且不會造成混濁 或晶體沈澱。 再者，可藉由將於溶液中之本發明α-葡糖基柑果甘 施加至預活化的吸附性樹脂管柱如ΗΡ-20及XAD-7,以有效 吸收葡萄糖甘部分，以水洗滌並以酒精水溶液溶離，而獲 得具有α-蒱糖基柑果f含里增加及市售價值提高之經酵 素催化之柑果甘。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐) " ΓΓΓΓ7 8 J 〇 a 〇 ；; 4341^ 9 A7 _B7 五、發明説明（7 ) 本發明經酵素處理之柑果甘當摻混於罐裝柑果之中時 ,可防止罐裝柑果混濁。當本發明經酵素處理之柑果苷摻 混於柑橘類飲料中時，亦可防止柑橘類飲料混濁。再者， 當使經處理之柑果苷與天然箸色劑組合使用時，可防止天 然箸色劑褪色。更進一步，可藉由使此箸色劑與經酵素處 理之柑果苷及經酵素處理之芸香苷及/或L-抗壊血酸同時 使用，而更有效的防止天然著色劑之褪色。 發昍夕詳细説明 經酵素處理之柑果甘及其製法以及用途將詳述於下。 本發明經酵素處理之柑果f含有ct-葡糖基柑果甘及 柑果甘以及/3-單®糖基柑果甘素，詳言之，以1重量份α -葡糖基柑果ΐ計，含有0.1或更少重量份之柑果苷及0.1 至0.5重量份之/3 -單葡糖基柑果甘素。 本發明之特擻在於製造此經酵素處理之柑果苷時，使 含有各別以式U]及[II]表示的a -¾糖基柑果甘及柑果甘 (请先間讀背面之注意事項再填寫本頁) a 有 具 ， 與用 液作 溶 _ 之节 mK 男 柑 是 持 素 酵 之 性 活 m 糖 李 鼠 經濟部中央播準局贸工消费合作社印製 之 示 所 式 為 變 改 或 化 轉 f 果 柑 〇 的 素 述苷 後果 中柑 液基 溶糖 將葡 以 單 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 9 3 8 9 8 2

43424 I Μ __B7 五、發明説明（8 ) [/3 -單葡糖基柑果甘素]

[III] 含有rr -蒱糖甚柑果苷及柑果溶液 任何溶液不論其組成或濃度，只要含有ct-葡糖基柑 果节及柑果甘皆可適用於此酵素處理条統。於欲處理的溶 液中之ct-葡糖基柑果¥的濃度為0.1至30重量％,較好是 1至10重量％,而柑果苷之濃度則為0.0 2至15重量％，較 好是0.2至5重量％ ; 其中，以100重置份ct-蒱糖基柑果苷計，柑果甘含量 為1至2 0 0重量份，較好是1至25重量份。 此溶液之賁例如下述： 經濟部中夬標準局員工消費合作社印製 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) (1) 日本專利待開3-7593號描述含有ct -¾糖基柑果¥ 及完整的柑果苷之溶液，偽藉使豬轉移酵素作為對柑果苷 具α-葡糖基轉移酶活性之酵素，在作為α-葡糖基賭類化 合物之部分澱粉水解物存在下獲得者，及 (2) 具有柑果节對α-葡糖基柑果节之比例降低之溶液 條藉由將上述製得的産品中的柑果甘沈澱，再以過瀘裝置 去除柑果¥而獲得者。 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) /VI規格（210Χ 297公釐) 10 38982 434241 A7 B7 五、發明説明（9 ) 具有rr -I,-鼠垄糖¥醮活袢：>酵1 只要是具有ct-L-鼠李糖f酶活性之任何酵素皆適用 於本發明。此等酵素之實例包含柚苷酶及較佳的柑果甘酶 ,二者皆是可向日本大阪田邊製藥股份有限公司購得者。 此等酵素，較好铬以100重量份之含於含有α-Μ糖基 柑果苷及柑果苷之溶液中之柑果苷計之0.05至50重量份， 更好是1.5至15重量份的量予以使用。 為使酵素作用於此溶液中之柑果甘，通常使溶液在 ΡΗ3至7,較好是ρΗ3至4.及於40至70¾，較好是50至601C 下，浸養0.5至48小時，較好是浸養6至24小時。 當含有α-葡糖基柑果苷及柑果甘之溶液在此等條件 下進行酵素處理時，由於ct-葡糖基柑果节約α-L -鼠李糖 甘酶賁質上不敏感，故溶液中之α-葡糖基柑果甘的濃度 在處理前後不變。 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 如此獲得之經酵累處理的柑果苷含有以1重童份α -葡 糖基柑果f計之0.1或更少重量份之柑果节，較好為0.02 或更少重量份.更好是0至0.01重里份，以及0.1至0.5重 量份之/9-單葡糖基柑果节素，較好是0.15至0.4重量份， 更好是0.15至0.3重置份。 此經酵素處理的柑果节之水中溶解度極佳。例如，其 極少因柑果苷沈澱而形成絮凝物，即使製備成30重童％之 水溶液且隨後使之置於常溫（2 5 ）下4週，同時以肉眼觀 察時亦然。 如此獲得之經酵素處理的ct-涵糖基柑果甘當被攝入 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210XM7公釐） 11 3 8 9 8 2 434； A7 B7 經濟部中央梯準局员工消费会作社印製 五、 發明説明（1 0 ) 1 1 體 内 時 9 展 現 各 種 維 生 素 Ρ之天然活性， 此你因其對體内 1 I 之 酵 素 敏 感 而 釋 出 柑 果 ¥ 之 故 0 於 此 情 形 下 與 維 生 素 C I 1 併 用 > 達 到 維 生 素 P之活性的相乘作用， 包含增強撤血管 Ν 1 I 請 ϊ I 壁 的 抗 性 0 再 者 » 經 酵 素 處 理 之 柑 果 適 用 於 防 止 天 然 箸 先 閱 1 1 1 | 色 劑 褪 色 0 背 1¾ 1 I 之 1 於 此 情 形 下 ， 經 ττι?4< 酵 素 處 理 之 柑 果 ¥ 像 以 經 天 然 著 色 劑 注 意 本 1 | 箸 色 的 産 品 重 量 計 之 0 . 001 至 0 .2 重 童 % t 較 好 是 0 . 00 5至 項 再 η 1 0 . 1重量5 ί之童使用。 裝 頁 1 更 詳 言 之 1 χιχ 柑 果 苷 之 使 用 已 多 次 苜 試 於 箸 色 劑 特 別 1 \ 是 對 紫 外 線 敏 感 U v i 0 S e η si t i v e )之天然著色劑之褪色的 1 1 預 防 上 f 以 作 用 於 褪 色 9 此 係 因 柑 果 苷 在 紫 外 光 區 域 具 有 1 I 特 性 吸 收 光 譜 • 但 在 可 見 光 區 因 1 M. 柑 果 幾 乎 無 色 而 無 顯 箸 訂 1 吸 收 之 故 0 然 而 » 已 證 明 此 等 苜 試 不 成 功 I 此 係 由 於 柑 果 !' I ¥ 在 水 中 之 極 低 溶 解 度 • 使 其 fur m 法 展 現 所 爾 活 性 之 故 0 習 1 I 知 之 經 酵 素 處 理 而 經 改 質 以 增 加 水 中 溶 解 度 的 柑 果 9 因 1 〇 >=*=* 兀 整 的 柑 果 ¥ 沈 澱 及 沈 積 田 損 害 消 費 者 的 興 +HS 趣 » 而 不 被 接 1 1 受 0 1 1 相 反 地 » 本 發 明 經 酵 素 處 理 之 柑 果 由 於 易 溶 於 水 [ 1 且 無 造 成 沈 澱 之 虡 ， 因 此 可 廣 範 地 用 於 防 止 天 然 箸 色 劑 褪 1 1 色 0 特 別 是 其 可 有 效 地 與 類 胡 m S 素 及 類 黃 m % 之 箸 色 劑 1 1 9 例 如 辣 椒 粉 β -胡蘿葡素、 還原蝦紅素、 葡萄果皮萃 1 1 取 物 及 向 曰 葵 黃 t 以 及 其 他 的 著 色 劑 包 含 甜 菜 Μ 黃 素 1 I 梔 子 黃 及 紅 麵 (a n g -k h a k) 同 時 使 用 0 1 ί 於 此 情 形 下 • 與 經 酵 素 處 理 之 香 及 /或L -抗壊血 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 12 38982

434a4I A7 B7 _ 五、發明説明（11 ) 酸或是L -抗隳血酸納中之一者結合使用，而逹到防止褪色 之相乘效果。 (請先閲讀背面之注意事項再填缚本頁) 在使用經酵素處理的柑果苷防止罐裝柑果混濁之情形 下，經酵素處理的柑果节之量以含於罐裝柑果之柑果及糖 漿中之完整柑果甘的1重童份計，為0.1至10重量份，較好 是0 . 1至2重量份，更好是0 . 4至1重量份。 此外，本發明經酵素處理之柑果苷可用以預防柑橘類 飲料例如柑果（溫州蜜柑（Citrus unsh i u)、晚崙西亞橙（ Valencia orange)及葡萄柚等製之一般含有相果¥之飲料 的混濁。於此情形下，經酵素處理的柑果甘之用量，以溶 液中所含完整.相果f之1重里份計，條設於0.1至10重量份 ,較好是0.1至2重量份，更好是0.4至1重量份。 發昍：> 功掛 藉實施本發明，可由使ct-L -鼠李糖甘酶，持別是柑 果苷_作為具有α-鼠李糖甘酶活性之酵素作用於含有《-葡糖基柑果苷及柑果甘之溶液，而極輕易且成本極低的獲 得具有極佳水溶解度之經酵素處理之柑果¥。 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 當長期貯存如此獲得的經酵素處理之柑果苷時亦不會 迪成柑果苷沈澱，此像由於其幾乎不含柑果节，若含有柑 果甘時，其含量亦極少之故，詳言之，相對於1重量份α-插糖基柑果苷，該柑果苷之含量為（Κ1重童份或更少。 本發明經酵素處理之柑果甘可有效防止天然箸色劑褪 色。 當加入本發明經酵素處理之柑果苷時，可有效防止罐 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4現格（210x；!97公釐） 38 9 8 2 13 434^4§ A7 B7 五、發明説明（12 ) 裝柑果及柑橘類飲料混濁。 當攝入體中後，本發明經酵素處理之柑果t的主要成 分α-葡糖基柑果甘經酵素作用釋出具各種維生素P之天然 活性之柑果¥,此偽由於α-葡糖基柑果苷未曝露於ct-L-鼠李糖苷酶以外的酵素之故。 本發明經酵素處理之柑果ΐ可廣泛地使用於食品製品 ,包含飲料及健康食品，以及用於其中含有一種或多種具 生理活性之成份以維持並促進人類健康之生理機能性食品 0 再者，其在紫外線區域之特性吸收上，賦予本發明經 酵素處理之柑果苷可使用作為紫外線吸牧劑。 奮例 Η參考下列實例可更詳細說明本發明，然而，彼等實 例並非用於限制本發明範疇者。 竇例1 - 在室溫（251C)下，將50克柑果甘溶於0.25Ν氫氣化鈉， 加入150克糊精（DE8),使之溶於前述所得溶液。 經濟部中央標华局員工消費合作社印敦 加入4Ν硫酸，將所得物調至ΡΗ9.0,添加含童為15單 元/克糊精固形分之衍生自噛熱脂肪芽抱桿閨（Bacillus st ftarothermophi lus);購自曰本岡山之林原生物化學研 究所公司）之璟糊精聚葡糖轉移酶，於加熱至60Ό的同時 滴加4N硫酸，調至pH7.0,加熱至681G,並反應40小時。 反應完成後，將反應混合物在95C加熱30分鐘，使酵 素不活化，接箸過濾，而得經酵素處理之柑果甘溶液（後 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 3 8 9 8 2 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 14 434'2 I i A7 _'_B7^__ 五、發明説明（13 ) 文稱為"溶液A ”）。 在下述條件下進行溶液A之HPLC(高效能液態層析術， 後文簡稱之HPLC)分析，並證實起始溶液中之柑果苷有72 重童％轉化為ct-葡糖基柑果苷，而其餘28重置％仍保持 兀楚Ο ΗΡΓΠ：>^析修件 使用C18管柱；溶離液為甲醇/水/乙酸混合物（體稹比 30:65:5);檢測，280nm;溫度40C;及流速為0.5ml /分 鐘。 (使用P D A檢測器在紫外光區域為2 0 0至4 0 0 n m檢测的吸 收光譜。） 以4 N硫酸將溶液A調至p H4 . 0，加人2 , 0克” HESPERIDINASE*»2"(為具有a -L -鼠李糖¥酶活性之柑果苷 酶産物，購自曰本大阪，田邊製藥股份有限公司），使之 於6 ο υ.反應6小時。 經濟部中央標準局I工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 反應完成後，將反應混合物在95七加熱30分鐘，使酵 素不活化，接箸過濾，而得經酵素處理之柑果节溶液（後 文稱為”溶液Β ”）。 在上述條件下進行溶液Β之HPLC分析，證實cc-新糖基 柑果苷實質上未發生改變，且於溶液Β中保持完整，而溶 液Α之完整柑果甘之大部份（99重里％或更多）變成；9 -單葡 糖基柑果甘素。 坩串θ-菫«糖某坩果甘素.^-堊蒱搪某柑果甘及《 -頃涵糖甚柑果奸摁亩 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2丨ΟΧ297公釐) ' ~7" 15 38982 A7 434141 B7 五、發明説明（14 ) 以下述方法鑑定柑果甘、/9-單嚭糖基柑果苷素、ct-單葡糖基柑果f及α-葡糖基柑果甘。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 .柑果节 使用柑果甘之真實試劑（曰本，東京之東京化成工業 股份有限公司製）進行鑑定。 2. 召-單葡糖基柑果甘素 首先使柑果苷之真實試劑與α-L-鼠李糖苷_作用， 接箸以HPLC於上述條件卞進行分析。其後，收集緊随著柑 果苷之波峯[RT(滞留時間）=10.90]後方的單波峯溶離份[ RT= 12. 13],水解，並測定插萄糖。此外，證宵此溶離份 之紫外光吸收光譜與柑果f者呈良好吻合，因此證實該單 波峯溶離份為-單葡糖基柑果甘素或柑果柑素-7-葡萄糖 节。 3. ct -單葡糖基柑果甘與ot -葡糖基柑果苷 經濟部中央標準局員工消f合作社印製 於上述條件下，以HPLC分析來自柑果苷之真實試劑的 反應混合物。檢測各波峯溶離份之紫外光吸收光譜，以尋 求彼等與柑果f之紫外光吸收光譜相符者。進一步使該反 應混合物與葡萄糖澱粉酶作用，接箸於上述條件下進行 H PLC分析。結果，各波峯之溶離份普遍得到如前述於柑果 甘（RT=10.90)得到之單波峯UT=10,34)。 待收集該溶離份（RT = 10.34)後，與α -葡糖甘酶（E.C. 3 . 2 . 1 . 2 0 )作用時，證實其具有葡萄糖及柑果甘。因此， 該波峯（RT=10.34)經鑑定為ct-單葡糖基柑果苛，而此波 峯與另一具有較少RT之波峯族群為α -葡糖基柑果甘。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 38982 16 經濟部中央榇準局ts：工消t合作社印製 本紙張尺度適用肀國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 3 8 98 2 A7 __B7 五、發明説明（15 ) 柑果钎、輩a糖某柑果钎袤1 rf-簠蒱葡甚坩果甘及α -¾摧某坩果帑夕測宙 以下述方法測量柑果苷、乃-單葡糖基柑果苷素、a -單葡糖基柑果苷及ct-葡糖基柑果节之重量。 1. 柑果甘 以HPLC分析試樣，並使用日本東京之東京化成工業股 份有限公司製造之柑果甘之真實試劑測定試樣之重里。 2. /3-單葡糖基柑果甘素 以HPLC分析試樣，並測定試樣重量，同時使用柑果甘 之真實試劑估算試樣分子量。 3. α-單葡糖基柑果甘 以HPLC分析試樣，並测定試驗重量，同時使用柑果苷 之真實試劑估算試樣分子量。 4. ct -¾糖基柑果苷溶離份 將1克該溶離份溶於50ral水中，在SV1上施加至IOOidI 之經濃縮的乙酵水溶液活化之）iAD-7,並以水充分洗滌， 其後使該溶離液與200ml之50¾乙醇水溶液作用。自乙醇 分離溶離液、濃縮、乾燥並測定重量。當在Η P L C分析中檢 測溶離液内之柑果苷及/或/9-單蕕糖基柑果f素時，將由 上述第1及2項測得之重量由此溶離液中扣除。 富例2 於經分離製備之作為a-#糖基柑果苷溶液的溶液A中 ，加入0,5ral之” GLUCZYHS NL4.2” [一種葡萄糖澱粉酶産物 (4, 200單位/ niU,購自日本名古屋之天野製藥股份有限公 17 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本I)

43414 I A7 B7 _ 五、發明説明（16 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 司]及2.0g”HESPERIDINASEtt2”（一種柑果苷酶，購自日本 大阪之田邊製藥股份有限公司），以4H硫酸調至PH4.0,並 使之於55C反應48小時。 反應完成後，反應混合物於90 1C加熱30分鐘，使酵素 不活化，接著過濾，而得經酵素處理之柑果苛溶液（後文 稱為”溶液C ”）。 於實例1之條件下，以Η P L C分析溶液C ,證實瑢液C中 之α-葡糖基柑果苷大部份轉變成為α-單葡糖基柑果甘， 而大部份之完整柑果¥ (99%或更多）轉變為/9 -單葡糖基 柑果甘素。 其後，將溶液C加至1.5L之” XAD-7"管柱（經濃縮之乙 醇水溶液活化的具有適當極性之多孔吸附性樹脂），之後 管柱以樹脂體積之2倍大的水洗滌，接箸，使用3L之60(ν/ ν)%乙醇水溶液使該經吸附之成份解吸。 溶離液自乙醇中分離，冷凍乾燥，而得44.8克經酵素 處理之柑果节（後文稱為”固體D")。 曾例3 經濟部中夹標準局貝工消费合作社印製 於經分離製備之經酵素處理之柑果苷溶液Α(溶液Α)中 加入〇.51!11”〇1^〇2¥“14.2”，以4}^硫酸調至0115.〇,並使 之於55t：度應24小時。反應完成後，使反應混合物於90Ό 加熱3 0分鐘，使酵素不活化，接箸過濾，而得經酵素處理 之柑果甘溶液（後文稱為”溶液Ε _’）。 於實例1之條件下，以Η P L C分析溶液Ε ,證宵溶液Ε中 之ct -鍤糖基柑果苷大部份轉變成為ct -單葡糖基柑果甘， 本紙張尺度適用中國國家標準（〔奶）八4規格（210\ 297公瘦：） 3 8 9 8 2 18 434241 A7 B7 五、發明説明（17 ) 而溶液E中之完整柑果f未發生任何改變。 其後，如實例2般將溶液E加至1.5L之” XAD-7”管柱（經 濃縮之乙醇水溶液活化的具有適當掻性之多孔吸附性樹脂 ),之後管柱以樹脂體積之2倍大的水洗滌，接著，使用3L 之60(v/v)%乙酵水溶液使該經吸附之成份解吸。 溶離液自乙酵中分離，冷凍乾燥，獲得48.0克經酵素 處理^^果节（後文稱為”固體F ”）。 、' 班睡試.驗 將水分別加入作為經酵素處理之柑果甘溶液的溶液A 與B中，得到各別為30重量％之固形分，同時將固醱D及F 分別溶於純水，使其各別之固形分為15重置％,其後各溶 液經加熱滅菌，以每瓶20〇m丨分装於無_玻璃瓶，接著靜 置4星期，同時檢測靜置曰數與靜置期間之絮凝物生成董 的颶偽。 結果示於表1。 --------v^------il—*-----^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 本紙張尺度遑用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 9 11 389 8 2 434i4§ A 7 B7 五、發明説明（18 ) 表1 (絮凝觀察結果） 經過日數 試樣 1 3 7 14 21 28 經酵素處理之 柑果苷(A) - + + + + + + + + + + + + 經酵素處理之 柑果苷 (B) - - - 經酵素處理之 柑果苷（D) - - - - 两 經酵素處理之 柑果甘 (F) - + + + 4* + + + + + + + + + + + + + 評估標準如下：？ Ϊ號’， 指無 絮凝物 形成； "+，’，為 經濟部中央標华局員工消贽合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填苑本頁) 量絮凝物形成時；+ ”形成少貴絮凝物時；” + + + ”形成大 量絮凝物時；及” + + + + ”形成極大量之絮凝物時。 經酵素處理之柑果甘試樣中的成份重量比例示於表2。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 20 3 8 9 8 2 A7 B7 五、發明説明（1 9 ) g__2_ (經酵素處理之柑果苷的成份重量比例） 試 樣 α -葡糖 基柑果苷 柑果甘 /3 -單蒱糖基 柑果苛素 經酵素處理之 柑果ΐ (A) 1.0 0.21 0.0 經酵素處理之 柑果甘 (Β) 1.0 0.01 0.15 經酵素處理之 柑果甘(D) 1.0 0.01 0.24 經酵素處理之 柑果甘 (F) 1.0 0.21 0 . 0 窗例4 -------^-- (請先閱讀背面之注意事項再填湾本頁) 、-*· 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 將1.5克之呈檸檬酸單水合物形式之檸塚酸、0.13克 呈榉檬酸三鈉二水合物形式之檸樣酸納及200克之顆粒狀 Μ糖溶於水，使總置為1000s。將已溶於鹼水中之柑果甘（ 詳言之為溶於0.2N氫氣化鈉水溶液中至成2.0重量％之柑 果苷）添加至所得溶液中，並以1N塩酸調至pH3.0,如此而 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 2 1 3 8 9 8 2 4 3 42 4 § Α7 _ Β7 五、發明説明（20 ) 得柑果苷含量為0.05重量％之試驗溶液。 於試驗溶液之200克分裝液中加入已經溶解成10重量 % 2 的實例2中的固體D,得到含0.01重量％之經酵 素處理之M試驗進行組（T e s t r u η ) 1 ”。 如上述，分別製得具0.02重量％及0.04重量％之經酵 素處理的"試驗進行組2 "及"試驗進行組3 "。 再提供一未經酵素處理之柑果苛的進行組作為對照組 ，示於表3。 使試驗進行組1至3與對照組於室溫中靜置1週，同時 以肉眼檢測彼等之混濁度。 結果示於表3。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· -Τ •-'Β 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 本紙張尺度適用中國S家標準（CNS Μ4規格（2ΙΟΧ297公釐） 2 2 3 8 9 8 2 4341^1 A7 B7五、發明説明（21 ) 表3 (潖溫度之肉肺榆湘Μ 經過日數 組別 3 7 第1組（經酵素處理之柑果苷 0.0 1 w t . % ) - 土 第2組（經酵素處理之柑果苷 0 . 0 2 v t . % ) - - 第3組（經酵素處理之柑果ΐ 0 . 0 4 w t . % ) - - 對照組 + + ^ + 4* ^ 澱 沈 £ 大 生 産 -55- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局®:工消f合作社印製 ± 濁 混 生 CE 産 不 指 f 號 符 估 評 行 進 準 標 述 下 依

及 時 濁 混 置 少 生 産 指 + 'ο ; 時 時濁 濁混 混顯 量明 2 酸 例檬 實檸 以於 含 入 産 指 加 中 其 於 甘 果 柑 之 理 處 素 酵 經 為 作 D 體 固 為 量 含 得 而 黃 子 楗 之 中 \ί/ 3 3 Η ρ /IV 液 R 缓 所 4 表 如 後 其 果 柑 之 mo 理 處 素 酵 經 之 % 量 3 4 ο ο 或 2 ο ο 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 23 3 8 9 8 2 434¾¾¾ A7 B7 五、發明説明（22) 示，將” a - G R u t i η P S ”（一種經酵素處理之芸香节，含有 77.5重量％之《_單葡糖基芸香苷、14.5重量％異槲皮甘（ |3〇91161'(：丨1；1'丨11)、5.2重量％賭類及2.8重量％水，購自日 本東京之東洋製糖（Τ〇y 〇 S us a r R ef i n i ns )股份有限公司） 及L -抗壞血酸二者中的一者或將此二者同時加人其中，於 密閉容器中加熱滅菌，接箸在不同日子，使用光譜儀，同 時以螢光燈（7 ,000燭光）照射，於442η·之波長下測定楗子 黃之殘餘率U )。 試驗條件及結果分別示於表4及5。 另提供一未添加的另一組作為對照組，如表4及5中所 示者。 又提供分別具經酵素處理之芸香甘及L -抗壞血酸之” 試驗組10"及”試驗組η ”，如表4及表5所示者。 (請先閱請背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 38 9 8 2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格ΠίΟΧ；!9"?公釐）

43 4^4 Q A 7 B7 五、發明説明（23 ) 表4-1 (試驗修件/ M位：重鼉％ ) 試驗組號 添加物（於 溶液中之 重量？ί) 1 2 3 4 5 6 7 8 經酵素處理 之柑果甘 0.02 0.02 0.02 0.02 0.04 0.04 0.04 0.04 經酵素處理 之芸香节 0 0.02 0 0.02 0 0.04 0 0.04 L-抗隳血酸 0 0 0.02 0.02 0 0 0.04 0.04 丟4-2 f試賒修件/屋位：垂嗇％ Ί 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 試驗組號 添加物（於 溶液中之 重童％ ) 9 10 11 經酵素處理 0 0 0 之柑果苷 經酵素處理 0 0.02 0 之芸香苷 L -抗壞血酸 0 0 0.02 註：試驗組號9 :空白組（對照組} (請先閲讀背面之注意事項再填将本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210X2()7公瘦） 38982 434i4§ A7 B7 五、發明説明（2 4 ) 表5-1 (顯示据子黃箸色物質之殘餘率％之結果/價值） 經濟部中央標隼局員工消费合作社印製 試驗組號 經過曰數 1 2 3 4 5 6 7 8 0 100 100 100 100 100 100 100 100 2 62 67 73 75 69 82 86 86 4 36 48 53 56 48 69 71 73 表5-2 (顯示梶子黃著色物質之殘餘率％之結果/價值） 試驗組號 9 10 11 經過曰數 0 100 100 100 2 20 64 63 4 3 41 39 註：試驗組號9:空白組（對照組） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2I0X29?公釐） 26 38982 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 434249 A7 B7 五、發明説明（25 ) 對据子黃而言，相較於對照組，各試驗組普遍展現改 相 之 理 處 素 酵 經 之 量 同 不 用 使 中 其 較 比 ο \1/ % /IV 率 餘 殘 之 善 血 壊 抗 - L 或 f 香 芸 之 m"t 理 處 素 酵 經 加 添 不 但 甘 理 處 素 酵 經 的 加 添 中 液 溶 •^ S· 證 11 組 驗 試 與 5 ο 組由 驗 f 試果 之柑 酸之 黃 子 椹 的 得 測 B 4 在 時 ¾ 量 重 4 ο ο 至 增 ¾ 量 3 2 ο ο 加 增 率 餘 殘 之 / 及 甘 香 芸 之 理 〇 處果 素效 酵乘 經相 與有 甘具 果實 柑證 之經 BB 理 ， 處 素 酵 經 使 當 時 用 併 酸 血 壊 抗 或 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 將30 0克柑果汁（溫州蜜柑）、95克頼粒狀Μ糖、0.12 克呈檸檬酸單水合物之檸檬酸及0.1克風味劑混合於水中， 製得l,000g柑橘飲料（果汁為主之飲料）。於100ml之飲料 分裝液中加入以乾燥固饅計之含量為4iag(0.004重量％ )、 8mg(0.008重量％ )或12ng(0.012重量％ )之實例1製得的溶 液A,分別而得試驗組1至3。以類似上述方法製得試驗組 4至6,但使用含置為4ng(0.004重量％)、8ng(0.008重量 % )或12mg(0.012重*» )之實例1製得的溶液B取代溶液A 。又提供一組不含經酵素«理之柑果节作為對照組。使各 組於室溫下靜置，並以肉眼檢测彼等之混濁度。 結果示於表6。 本紙張尺度通用中國國家橾隼{ CNS ) A4洗格（210X297公釐） 27 3 89 8 2

43424 I A B . 五、發明説明（2 6 ) 肉眼檢視結果 經濟部令央標準局員工消費合作社印製 經過曰數 所添加的經酵素處 理之柑果苛的置 試驗組 起始曰 2曰 1週 2週 3週 6週 10週 1 0.004重置％ - - 士 + + + + + + + 2 0.008重量％ - - - 土 + + +十 3 0.012重里％ 4 0.004重量％ — - "· 土 + + + + 5 0.008重量％ - - - - - 士 + 6 0.012重量％ - 對 照組 + + + + + + + + + + + + + + 混濁度 -:清 澈 t ± :輕 微 混 濁 » + ：少 置 混 濁 > + + ：混 濁 量 少 但有增量，及 + + + :高 度 混 濁 (呈大量沈澱）。 本紙張尺度適用中國國家榇準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） 28 3 8 9 8 2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫取頁)

Claims (1)

1. 1. 一種經酵素處理之柑果f，包括ct-葡糖基柑果甘，柑 經濟部中央梯準局貝工消費合作社印取 計 準 為 点果 及柑 节基 果糖 而 葡 歷 α 之 份 量 重 11 以 中 其 素 果 柑 基 糖 0 單 少 更 或 份 量 If 1 S Ι ο 為 量 含 f 果 柑 至 以 中 。其 份 . 量苷 Ϊ 0K, 重 男 .5柑 >之 m: 理 0.處 為素 量酵 含經 素之 苷項 I 相 基 糖 葡 單 第 圍 範 利 專 請 串 如 2 素 f 31/ 柑 α 基 份糖 量葡 Μ 有 含 計 苷 果 柑 基 糖 « 之 份 量 Ihnil 3 4 ο 至 α 有 含 使 括 包"L . a 法與 製脫 之溶 Θ f 之為 果节化 柑果轉 之柑f 理整果 處完柑 素及之 酵 t 整 經果完 種柑使 一 基， 3 圍 範 α 利及 專节 請果 申柑 如有 第 糖 0 糖 葡 用 作0 〇 管素 糖苷 李果 鼠柑 L-基 、糖 0 單 含用 使作 由素 藉酵 係移 液轉 溶類 該醣 中與 其物 , 合 法化 製類 之醏 項基 3 甘 糖 李 鼠 L 1 α 該 中 其 法 製 之 項 3 第 圍 範 〇 利 者專 得請 製申 而如 5 柑 之 m: 理 處 素 酵 經 該 中 其 法 製 之 項 3 第 〇 .圍 酶範 苷利 果專 柑請 為申 酶如 6 α 之 份 量 S 11 以 有 含 苷 ml/ 男 至 1 ο 及 mK 柑 之 少 更 或 份柑 量基 重糖 1 til ♦ SH o BP-為 -計 卢 苄之 果份 柑量 基重 糖5 0 法 方 之 Hi? 揮 混 果 柑第 裝圍 罐範 。 止 利 素防專 f 種 請 果一申 如 之 量 效 有 加 添 括 包 SK- 樹 裝 罐 至 f 果 相 之 理 處 素 酵 經 之 項 法 方 之 浅 混 料 飲第 類圍 橘範 柑利 止專 防請 〇 種 申 中一如 8 之 量 效 有 加 添 括 包 類 橘 柑 至 果 咐 之 1 二 理 處 素 酵 經 之 項 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4说格（2〖0 X 297公釐） 29 3 8 9 8 2 --------H — (請先閲請背面之注意事項再填寫4頁) 訂 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 飲料中。 9. 一種防止天然箸色劑褪色之方法，包括使如申誚專利 範圍第1項之經酵素處理之柑果苷與天然箸色劑共存。 10·如申請專利範圍第9項之方法，其中該經酵素處理之柑 果苷偽與經酵素處理之芸香苷及/或L-抗壞血酸組合使 用者。 (請先閱讀背面之注意ί項再填寫本頁) -裝. -1T 經濟部中央橾準局貝Η消費合作社印製 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐） 3 0 3 3982 *