TW409058B - Method for preparation of a drug complex - Google Patents

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附件五 經濟部智葸財產局員工消費合作社印製 ,40^,058 五、發明説明（35) 1 月 Gel PW-4000)(L、溶劑：0_1M NaCl、流速 Uml/min)分析 之结果及此化合物之紫外線吸收光譜（0.1M三羥甲基胺基 甲烷鑀衝液，pH9.0,0.1mg/ial)分別如第6圖及第7圖所示 。此化合物之翳藥化合物殘基之含量以在0.1M三羥甲基胺 基甲烷緩衝液（PH9.0)中之根據於362hid之吸光度定量時為 5.8¾ (W/V) 〇 酋倫例1 fi3,-N-fGlY-GlY-Gly-Phft)-NH-AfA-KH9=DX-8flfi1)^ Μ 7. ^ 將由實施例 2得到之 3'-H-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)_ HH-A(A-HH2=DX-8951)(79ms)溶於三氟乙酸（3ml),放置 1 小時。除去溶劑，用甲醇（30ml),放置1小時。除去溶劑， 用甲醇（30ml)共沸2次後再用乙醇（30ml)共沸2次後，殘渣 用乙醚洗淨，得到標記化合物（8 〇BS)。 1H-NMR(DHS0-d6)5：8.62-8.66(mt2H), 8.23(d,lH,J=8.3 Hz), 8.18-8.20(111,1«), 7 . 9 8 - 8 . 1 0 ( b r , 2 Η ) , 7.79(d,lH, J = 10.7Hz), 7.32(s,lH), 7 . 09 ( d,2H , J = 7 . 3H2 ) , 6.93-7.03(m,4H), 6.5 0 - 6.6 0 ( br , 1 H) , 5.5 2 - 5 . 5 5 ( m , 1 H) » 5.44(s,2H), 5. 18 (d, 1H , J = 18 , 5Hz) , 4.80 ( d , 1 H , J = 1 8.5 Hz), 4. 57 - 4. 5 9 (m, 1H) , 3 . 57 - 3 . 7 1 ( m , 6H ) , 3 . 1 5 - 3 . 25 ( m ,2H), 3.0 0 -3. 0 2 (m, 1H) , 2 . 80 - 2 . 9 0 (i , 1 H) , 2.50(s,3H) ,2.0 5 - 2.25 (m, 1H) , 1 . 8 6 - 2 . 0 0 ( m , 2H ) , 0.88(t,3H,J = 7.35Hz) 啻搁例1 7 毯_甲-..基葡聚糖多兀酵-Glv-Glv-G 丨 v-Phf!-NH“A' (Α-ΝΗ2 = ί)Χ- 補龙 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX 297公釐） 37 (修正頁）38954 經濟部中央標準局貝工消资合作社印製 409058τ B7五、發明説明（1 ) 擗明^坊》翎城 本發明是鼷於一種將多糖衍生物與抗踵瘍劑等》蕖化 合物结合而成之蕖物複合》之製造方法。 葙明，坊坧赀# 在治療肺癌、消化器癌等固形癌或白血病等之血液癌 時所使用之抗腫瘍劑，經由靜赈内投予或經口投予等投予 途徑全身性投予後移行到特定之腫瘍部位，阻礙癌细胞之 增殖甚至抑制癌细胞之增殖而發揮治療效果。但是，全身 投予之抗鼯瘍劑從血中舍被肝臓•網内糸臓器迅速吸收， 或是迅速從尿中排泄，導致在血中之瀰度降低，不能充分 移行至腫瘍部位。又，一般之抗臞瘍劑本身對於向腫瘍部 位移行之堪擇性（腫*選擇性）低，専致抗腫瘍劑遍滿全身 之各種细胞或組孅，對於正常之细胞或姐纽亦當作毒细胞 作用，有嶇吐、發热或脫毛等副作用發生率極高之問鼸。 因此，期待開發具有效率且可以選擇性的向腫瘍部位移行 之抗腫瘍劑之方法。 作為此種方法之一種為有使用具有羧基之多糖衍生物 作為蕖物擔《，此多糖衍生物與抗鼸*劑结合，可以延« 抗腫瘍劑自血中消失，同時«可以提高向癌姐谶之指向性 之提案。例如：於國際公開W094/19376記載有將具有羧基 之多糖之羧基與肽鏈（«基酸數1〜8)结合，再埋由此肽鐽 與艾掘阿鼸索、柔紅撇索、躱裂《索C或腐草徽素等结合 而成之藥物複合β。又，於特公平7- 8 44 8 1號公報記載有 將羧甲基化之甘«葡聚糖衍生物經由與席夫«(Sohiff's (诗先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 3 8 9 5 4 409058 P—- 一咖 w—’ ί Η3 会告本 i 丨丨 _一，·ι—— ^ 811 ΐ * i 4 γρ. jJ-*l % ί 6 1 0承|_ 5¾專利申請案 L...____________—- 申請專利範圍修正本 (8 8年7月1 4日） 1. 一種藥物複合體之製造方法.該藥物複合體係由具有 羧基之多糖衍生物與凿藥化合物之殘基介由一個胺基 酸作為間隔基或介由與2〜8個胺基酸之胜肽作為間隔 基结合而成之藥物複合體，或是具有多糖衍生物與醫 藥化合物之殘基不經由這些間隔基結合而成之槩物複 合體，該製造方法包括下述步驟： (1)將具有羧基之多糖衍生物之鹼金屬鹽變換成有 櫬胺鹽類之步驟；及 化 藥 醫 與 已 與 或 物 合 化 藥 翳 與 頚 鹽 胺 機 有 該 將 驟 步 之 應 反 行 進 系 水 非 在 基 隔 間 之 合 结 物 合 之 基 接 。 有者 具醇 該 元 , 多 中糖 其聚 , 葡 法基 方烷 之 T 項C1 1 基 第羧 圍為 範係 利物 專生 請衍 申糖 如多 2 在 基地 羧質 成寅 構為 該係 , 醇 中 元 其 多 唐 , S 法聚 方葡 之之 項醇 2 元 第多 S3? 唐 範聚 利葡 專基 請烷 申 τ ί 如 C 3 經濟部中央標準局員工福利委Μ會印製 之 到 得 所 J: 理 處 唐 聚 葡 將 下 。 件者 條徵 之特 化其 醇為 元酵 多元 全多 完糖 以聚 可葡 第 圍 範 利 專 請 甲 如 為 係 醇 元 多 糖 聚 葡 基 基 。 羧者 該醇 , 元 中多 其糖 - 聚 法葡 方基 之甲 項羧 烷 物 合 化00 該 中 其 法 方 〇 之者 項劑 1 炎 第消 範劑 利瘍 專腫 請抗 申為 如係 5 物 _ 合 化 藥0 該 > ο 中者 其 物 _ ，合 法化 方藥 之醫 項之 1 得 第而 圍環 範酯 利內 專成 請形 申為 如係 6 本紙張/1度適用中S國家福準（C N S ) A 4規格（210 X 297公¢) 1 3 8 9 54 409058 經濟部中央樣準局貝工消f合作社印裝 A7 B7五、發明説明（2 ) base)或釀胺结合導入上述之抗腫*鑲而成之藥物複合β 。埴些稱物複合tt與未與蕖物送達之載嫌结合之抗腫瘍劑 本Μ相比較，其抗腫瘍效果較優越且毒性*刺作用較輕為 其特微。 其他，黼於將多元酵化多糖衍生物作為藥物送達載體 之蕖物複合«之技術有「Μ於多糖-肽-艾缠阿徽素禊合體 之研究*多轆衍生物在血中之安定性與抗腫瘍效果之W係 j (第10次日本DDS學會演_重點集，27 9, 1 994); 「Μ於 多糖-肽-艾摁阿徽索複合《之研究*體内動態與抗S瘍效 果j (第9次日本蕖物動雔學會年會演講簠點集，292,1994 );第19次研究開發動向时論舍¢8藥品檐構主辦）重貼集 ,D-9, 1995K及「闞於藥物經由多糖載）»向睡瘍送達之 研究」（第12次》龌*界面技術討論舍，日本化學會，澳 講里點集，51 , 1 995 )等之報告。 Μ往，埴些蕖物複合«採用將羧甲基支鐽載粉、羧甲 基甘»葡聚糖等之具有羧基之多糖衍生物調製成納Μ後， 該多糖衍生物之羧基與抗鼸«劑之胺*(或是已與抗睡瘍 劑结合之肽鏈之Ν端胺基）經由醢胺結合製造之。多糖衍生 物之納«在有櫬溶爾中幾乎不溶，所Μ在進行此一反應時 採用需將多糖衍生物之納鹽调製成水或含有水之水溶性有 機溶劑之溶液，在此溶液中將嫌合劑與圼鹽酸鹽形態之抗 腫瘍劑（或具有肽《之抗臞瘍劑）溶解之方法。 但是，此一反應之脫水嫌合反*在含有水之溶爾中進 行，不能得到高收率之目的物。作為反應原科之抗腫瘍劑 -1. m m m I I m ί· I In l j- i I i -- ml-' -1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4说格（210X297公釐） 4 389 5 4 409058 A7 B7五、發明説明（3 ) 等，一般價格昂贵，由製造成本之観酤，期待能開發出可 之 6 率平 收開 高特 到於 得 -Κ劑 瘍 腫 抗 為 作 又 ο 法 方 造 製 之 Η 合 複 物 0 中 子 分 其 物 合 化 之 載 記 所 報 公 號 6 4 7 7 , 抗 時和 應與 反耆 之基 述羧 上之 行成 進生 物所 合 ， 化環 之閭 合會 结環 讁酷 W 均 肽内之到 和下» 得 與在肽能 在存之不 環之合及 酯 水结低 内及劑降 有let瘍地 具在睡著 顧 率 收 之 物 的 目 有 舍 應 反 基 胺 通 待 期 此 因 ο 題 問 之0 合 複 物 蕖 遴M 可 1LZE 出® 發丄 開Ja能a_ 經濟部中央橾隼局員工消费合作杜art (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) -I装. 生 能於更抗 免 供對。與 法 方 應 反 之 物 合 化 之 環 開 環0 内 成 炎合 消複 或物 劑蕖 瘍之 腫行 抗移 含性 種擇 I 選 逭作 製能 地位 率部 效瘍 有腫 於 對 提而 Μ 分 明成 發效 本有 等 劑

的 S 為 法 方 之 XI 物 生 衍 糖 多 之 基 藥0 與 己 與 或 物 合 化 藥 » , 之 言 等 而劑 «瘍 具腫 羧 有 具 將 能 供 提Μ 明 發 本 價 之 且 究 大 研 ft入 逭 深 製 蹐 . 不 應 a 反 經 分 . 充 S 基。問 隔的述 間目上 之為決 等法解 肽方了 聚之為 低體等 之合人 合複明 结物發 物稱本 合之 化廉 有 具 與使 或所 物往 合M 化將 蕖若 0 與時 物應 生反 衍行 糖進 多 基 之隔 基間 羧之 合 结 將物 在合 , 化 現蕖 發翳 结已 物 ，隔 生解間 衍溶之 辘地合 多度结 則濃物 , 高 合 替以化 代可藥 麴中翳 之繭與 胺溶巳 櫬嫌與 有有或 用之物 鹽水合 納含化 之不藥 物在B 生地與 衍質物 糖實生 多類衍 之鹽糖 用之多 物B 成 與 生 物 副 生 低。衍 減明糖 Μ 發多 可 一 之 遢此基 且成後 而完有 , 而 具 率礎將 收基種 之為 一 佳解供 檯見提 到些明 得埴發 Μ 以本 可明 ， 應發即 反本亦 之 。 基等 本紙張·尺度逋用中國®家標準（CNS ) A4規格（2丨0'乂297公釐） 5 3 8 954 、νβ 經濟部中央棟準局員工消費合作社印裝 40905§7 _B7 _五'發明説明（4 ) _化合物之殘基«由一儸胺基酸作為間隔基或《由2〜8個 胺基酸之胜肽作為間隔基结合而成之藥物後合或是將 具有羧基之多糖衍生物與醫蕖化合物之殘基不«由埴些間 隔基结合而成之藥物複合«之製造方法，其特激為將具有 羧基之多辘衍生物之有檐胺等之》類與翳藥化合物或與已 與B藥化合物结合之間隔基在非水系下進行反應之方法。 於該藥物複合《之製造方法，本發明並提供包括下述a程 之方法：（1)將具有羧基之多糖衍生物之_金觸鹽變換成有 懺胺等鹽類之通程及（2)將該有櫬胺等鹽類與轚蕖化合物 或與己與》藥化合物结合之間隔基在非水系下進行反應之 通程。 根據本發明之較好形戆，提供上述方法中之具有斑基 之多糖衍生物為翔基Ci-4烷基«聚糖多元酵者：上述方法 中之特擞為由羧基Ci-4烷基葡聚糖多元酵栂成之葡聚糖多 元酵為實質上在能完全多元酵化之條件下將葡聚糖烴過處 理所得之葡聚糖多元酵者；上逑方法中之羧基Ci-4烷基葡 聚糖多元酵為羧甲基葡聚糖多元酵者：上述方法中羧基 CL4烷基葡聚糖多元酵為分子量在5,000〜500,000之範園 ,較好在50,000〜450,000之範騸，更好在2 0 0,000〜 400.000之範钃之羧甲基葡聚糖多元醇，其羧甲基化度為 每個構成糖殘基在0.01〜2.0之範画，較好在0.1〜1.0之 範園，更好在0.3〜0.5之範_者，且上述方法中之B蓁化 合物為抗腫瘍劑或消炎劑者。 又，根攞本發明之較好形慇可Μ提供上述方法中之醫 ^^1 ---1 1 - —^n I— -I n —^n I. \^A ml I- -1 ml - r (請先閲讀背面之泫意事項再填商本頁) 本紙伕尺度適用中國阐家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 6 389 5 4 409058 B7 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 五、 發明説明（5 ) i I 藥 化 合 物為形成 内醣 環而得之化合物者； 上述方 法中於有 1 ! m 胺 等 之»類輿 轚蕖 化合物或與巳與翳藥化合物 结合之間 1 隔 基 之 反應，使 用形 成内酷瓖之》藥化合物或輿 已形成内 請 先 閲 1 1 m m 之 Β藥化合 物结 合而成之間隔基者Μ及上述 方法中形 I 成 内 m 瑁所得到 之上 述醫蕖 :合物為US ,9S)-1- 胺基-9- 背 t 1 乙 基 -5 -Λ -2,3- 二 fi _ 9 -翔 基 -4 -甲基- 1H ,12H-笨 并[de]吡 之 注 意 1 喃 并 [3 ’，4 ' : 6 , 7 ]吨味畊并 [1 ,2b]〇t 啉 -10,13(9H ,15H)-二 事 項 1 I 再 1 m 者 0 填 寫 本 裝 I η. 式 篛霣输明 頁 I 1 第 1疆表示使用本發明 之 方法所 製 埴 之實腌例8之稱物 i I 禊 合 體 之GPC圈 3 1 I 第 2國表示使用本發明 之 方法所 製 埴 之*施例8之藥物 I 訂 I 複 合 Μ 之紫外埭 吸收 光譜 0 1 1 1 第 3鼸表示使用本發明 之 方法所 製 造 之*施例9之藥物 1 1 複 合 嫌 之GPC圈 0 1 1 第 4匾表示使用本發明 之 方法所 製 埴 之*施例9之藥物 Λ 1 複 合 賊 之紫外線 吸收 光譜 0 i 第 5晒表示使用本發明 之 方法所 製 造 之實施例10之藥物 i I 複 合 » 之紫外線 吸收 光謅 0 1 | 第 6騸表示使用本發明 之 方法所 製 造 之實施例15之藥物 1 i 複 合 Η 之GPC圈 〇 1 1 第 7圓表示使用本發明 之 方法所 m 造 之實細例15之蕖物 1 1 複 合 « 之紫外線 吸收 光譜 0 ! I 第 8_表示使用本發明 之 方法所 製 埴 之實施例28之蕖物 1 1 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS )A4規格（210XIW公釐） 7 389 5 4 409058 A7 B7 五、發明説明（6 之 « 合 複 H 9 第 物 藥 之 8 2 例 腌 實 之 造 製 所 法 方 之 明 發 本 用 〇 使 _ 示 PC表 紫 之 蕖 之 9 2 例 施 實 之 埴0 所 法 方 之 。 明 譜發 光本 收用 吸使 0 示 外表 圓 ο 11 j»第 合 複 圔 藥 之 9 2 例 施 實 之 造 製 所 法 方 之 ο 明繒 發光 本收 用吸 使媒 示外 GP表絮 之之 Η η « 合第合 複 複 物物 0 之 4 3 例 施 實 之 造 製 所 法 方 之 明 發 本 用 使 示 表 围 2 IX 第

0 C 藥 之 4 3 例0 實 之 造 製 所 法 方 之 明 發 本 用 使 示 GP表 之· 體13 合 第 複 物 藥 之 9 3 例 施 資 之 造 製 所 法 方 0 之 諶明 光發 收本 吸用 埭使 外示 紫表 之围 Κ14 合 第 複 物 圈 0 之 9 3 例 腌 實 之 造 製 所 法 方 之 明 發 本 用 使 示 GP表 之園 體15 合第 複 物 謅 光 收 吸 線 外 紫 之 體 合 禊 物 蕖 之 1 4 例 拖 實 之 造 製 所 法 方 之 明 發 本 用 使 示 表 _ 6 ii 第 <請先閱讀背面之注意事項再填穷本页) •裝.

*tT 經濟部中央標率局負工消費合作社印製 0 之 1* 4 例 施 實 之 埴 製 所 法 方 之 明 發 本 用 使 示 GP表 之H H17 合 第 禊 物 藥 之 4 4 例 施 實 之 埴 製 所 法 方 。 之 譜明 光發 收本 吸用 線使 外 示 紫表 之圈 5518 合 第 禊 物 圖 藥 之 4» 4 例0 寅 之 逭 製 所 法 方 之 明 發 本 用 使 示 GP表 之 _ 1919 合第 複 物 蕖 之 5 11 例 拖 實 之 埴 製 所 法 方 ο 之 譜明 光發 收本 吸 用 線使 外示 紫表 之國 H20 合 第 複 物 本紙伕尺度適用申國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 8 3 8954 409058 A7 B7 經濟部中央樣準扃舅工消費合作社印製 五、發明説明（ 7 ) ! 1 物 複 合 « 之 H 内 動 皤 0 1 | 鼸 中 之各點表示3次之平均值。 '•I I *_ 本 明 昜 佯 形 軀 請 先 W 請 1 依 照 本 發 明 之 製 造 方 法 所 製 埴 之藥物 複 體 » 其 特 徽 1 為 將 具 有 羧 基 之 多 糖 衍 生 物 與 轚 藥 化合物 之 殘 基 經 由 — 傾 背 之 1 1 胺 基 酸 所 成 之 間 隔 基 或 經 由 與 已 與 肽结合 之 2〜8個胺基酸 注 意 事 項 再 填 I 所 成 之 閣 限 基 结 合 而 成 者 $ 或 是 將 具有羧 基 之 多 耱 衍 生 物 1 與 B 藥 化 合 物 之 殘 基 不 經 由 埴 些 間 隔基结 合 而 成 者 0 藥 物 寫 本 頁 裝 | 複 合 體 所 含 有 之 藥 化 合 物 之 殘 基 為例如 抗 腫 瘍 劑 消 炎 1 1 劑 \ 抗 菌 劑 等 之 蕖 t 用 作 為 治 療 及/或預防包括人類在 1 1 I 内 之 哺 % 頬 之 疾 病 所 使 用 之 B 藥 化 合物主 要 之 構 造 〇 1 1 不 過 » 該 醫 第 化 合 物 之 用 途 並 不只限 於 上 述 者 0 作 為 訂 1 藥 化 合 物 » 只 要 具 有 能 參 與 與 多 糖衍生 物 或 間 隔 基 之 结 1 1 合 * 1個或2個Μ上 之 反 應 性 官 能 基 (例如： 胺 基 羧 基 、 羥 1 ! 基 \ 基 m 基 等 )均可以使用 ，醫藥化合物殘基亦可K 1 1 1 與 多 糖 衍 生 物 之 羧 基 間 隔 基 之 Η嬙胺基或C皤羧基 或 是 與 存 在 於 櫛 成 間 隔 基 之 胺 基 酸 之 反 應 性官掂 基 结 合 0 本 說 明 1 | 軎 中 所 謂 之 翳 藥 化 合 物 為 本 身 具 有 轚藥作 用 之 化 合 物 之 主 1 t 要 構 埴 作 為 其 部 分 構 造 ， 包 含 在 生 «内可 Μ 再 生 該 化 合 物 1 1 之 原 惰 性 化 合 物 〇 1 I 在 本 說 明 畜 中 翳 m 化 合 物 之 殘 基，多 糖 衍 生 物 或 間 隔 1 1 基 與 酹 藥 化 合 物 殘 基 之 结 合 若 是 由 8第化 合 物 中 之 反 應 性 1 I 官 能 基 與 多 糖 衍 生 物 成 間 隔 基 中 之 反應性 官 能 基 之 反 應 ( 1 [ 例 如 脫 水 嫌 合 等 )而形成時， 結合後化合物中所存在之» 1 1 本紙張尺度適用中國國家梯準（CN'S ) Λ4規格（210Χ2Μ公釐） 9 38954 經濟部中央檫準局員工消胥合作社印装 409058 A7 _B7五、發明説明（8 ) 藥化合物來自其部分溝埴。例如：醫槃化合物用D-NH2, Β-ί： 0 0 Η ， D - C 0 0 R ， D - 0 H , D - S H , D - C 0 Η Η 2 ， D - Η Η - C 0 0 R ( R 為低 级烷基等）表示時，酹蕖化合物之殘基則分別用D-NH-(D-NH-CO-Q等），D-CO-(D-CO-HH-Q, D-CO-O-Q, D-CO-S-Q等） ,D-0-(D-0-C0-Q, D-0-Q等）· D-S-(D-S-CO-Q, D-S-Q等） ,D-CONH-(D-CO-NH-CO-Q等），D-HH-CO-(D-HH-CO-Q, D-HH-CO-HH-Q等）表示。（括96内表示間隔基或多糖衍生物與 »藥化合物殘基之结合，Q表示由間隔基及多糖衍生物除 去各反應性官能基及羧基後所殘留之部分構造）。但是， 藺隔基或多耱衍生物與B蕖化合物殘基结合之種類並不只 限於上述者。 作為B蕖化合物之殘基可使用例如：艾提眄徽素、柔 紅撇素、躲裂徽素C、腐箄黴索、環胞啶、氧化長春花M[ 、長春花鐮、甲基蝶啶胺、鉑系抗睡瘍劑（顒氮氨鉑或其 衍生物）、紅豆杉酵（texol)或其衍生物、軎樹鴯或其衍生 物等（特闋平6-87746 »公報所記載之抗腫ft劑，較好為 申請專利範圃第2項所記載之（1S,9S)-卜胺基-9-乙基- 5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-111,1211-苯并[(^]吡喃并[3’ ,4· :6,7]·3丨睬畊并[l,2-b]〇t 啉-10,13(9H,15H)-二酮等） 之抗《瘍劑之殘基。亦可使用例如氳化可«松琥珀酸、脫 氫可«松班珀酸等類固酵糸消炎朗成甲滅酸、氟滅酸、待 可茆諾酸、依普芬、蒂諾利定等非類固酵系消炎藥之殘基 0 _B藥化合物之殘基可以直接與多耱衍生物结合，亦可 本紙張尺度適用十國國家標隼（CNS ) A4規格（210X 297公釐) 10 38954 n' n I n n- I n - , τ I!—I----I— n _ 泰 HI Μ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 40905 以7 _B7_五、發明説明（9 ) Μ級由間隔基輿之结合。作為此種間隔基，可以使用經由 1個胺基酸所成之間《基或經由巳與肽结合之2〜8個胺基 酸所成之間隔基。更具«而言，β藥化合物之殘基與多糖 衍生物經由間隔基结合時，該間鎘基為有1個胺基酸之殘 基（即分別從胺基酸之胺基及羧基除去1個氫原子及1個羥 基之殘基）或從與肽结合之2至8個胺基酸所成之低聚肽之 殘基（即分別從Κ蟠胺基及C皤羧基除去1锾氫原子及1個羥 基之殘基）之形態。 較好之間隔*為由2〜6個胺基酸所成之低聚肽之殘基 。構成間隔基之胺基酸之種類並無特別限定，可以使用例 如L -或D -胺基酸，較好使用L -胺基酸，除了《 -胺基酸之外 亦可使用—丙«酸，ε-ί按基己酸、τ-胺基賂酸等。此種除 了 α-胺基酸Μ外之胺基酸，在間膈基中較好眭配置在接近 多糖衍生物之位置。 例如在使用低聚肽間隔基時對於结合方向睢然沒有特 別之限定，但是，一般羧基C!-4烷基葡聚糖多元酵之羧基 與間隔基之Η嫱經由醢胺结合而结合，使篇蕖化合物之胺 基可Μ與間隔基之C襯结合。又，例如作為肽間隔基之構 成單位，包含有轘氛酸殘基，《氨酸殘基之胺基及e-胺 基分別與其他胺基酸之羧基進行醢胺结合，則狀間隔基之 兩端變成Η蟠，使成為可Μ與》藥化合物之羧基结合。又， 間隔基中包含有1個或2緬以上之二胺基化合物或二羧酸化 合物之殘基作為_成翬位（例如伸乙二胺等之二胺之殘基 或琥珀酸等二羧酸之殘基等），各兩纗可W利用Νί»之間隔 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210Χ2Μ公釐） ' 11 38954 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 409058A7 B7 經濟部中央樣準局員工消资合作社印聚 五、發明説明（ 10 ) 1. I 基 亦 可 以 利 用 C嫌之間隔基。 I 使 用 由 低 聚 肽所成之 間 隔 m 時 « 對 於 胺 基 酸 配 列 雎 然 | I 沒 有 特 別 之 限 定 ,但是可 以 使 用 例 如 間 m 基 為 用 -X •Z ••表 請 1 示 之 二 肽 之 殘 基 (X表示疏水性胺基酸之殘基 Z表示親水 先 閏 讀 1 1 性 胺 基 酸 之 殘 基 、-Χ-Ζ-表示疏水性胺基酸（X)與親水性胺 背 Sr 之 注 意 事 項 再 填 1 1 基 m (Z)分別成為N皤脚及C斓飼， 從與肽结合之二肽之Ν纗 f I 之 胺基及C繡之羧基分別除去1俚 氬 原 子 及 1涸羥基之殘基） ! 〇 又 1 較 好 使 用 含有該二 肽 之 殘 基 作 為 部 分 肽 配 列 之 間 隔 寫 太 頁 裝 1 基 0 疎 水 性 胺 基 酸，可Κ 使 用 例 如 苯 基 丙 氨 酸 賂 氰 酸 '•W1' 1 1 白 氰 酸 等 » 親 水 性胺基酸 » 可 Μ 使 用 例 如 甘 氨 酸 \ 丙 氨 酸 1 I 等 〇 閬 隔 基 亦 可 Μ具有此 種 二 肽 之 殘 基 之 反 覆 配 列 (例如- 1 1 X- Z- X-Z- 1 -X -Ζ -Χ-Ζ-Χ-Ζ -等） 0 訂 i 使 用 含 有 此 種二肽構 造 之 間 隔 基 > 則 間 隔 基 含 有 I 富 1 1 之 肽 m ， 在 腫 嫌 部位或發 炎 部 位 加 水 分 解 * 由 於 轚 藥 化 合 1 1 物 在 該 部 位 >λ 高 濡度游離 著 * 所 含 有 上 述 二 肽 之 間 隔 基 1 .乂 與 酹 藥 化 合 物 结 合形成之 構 造 為 本 發 明 之 方 法 所 製 造 之 m 1 I 物 複 合 體 之 較 好 部分構逭 0 作 為 醫 藥 化 合 物 之 殘 基 ， 使 用 1 | 依 賴 m 度 顯 現 抗 腫瘍作用 之 抗 腫 瘍 m (濃度越高顯現越強 1 1 之 抗 腫 瘍 作 用 之 抗腫瘍 :濃度依《型之抗腫瘍劑例如艾 1 1 掘 阿 霞 素 等 )之殘基時更好使用由含有Κ- X- 表 示 之 上 述 1 1 二 肽 殘 m 所 成 之 間隔基或 含 有 該 二 肽 殘 基 作 為 部 分 肽 配 1 1 列 之 間 隔 基 0 1 | 作 為 翳 藥 化 合物之殘 基 t 使 用 需 要 在 一 定 m 度 上 持 1 t 鱭 作 用 時 間 之 時 間依頼型 抗 臞 瘍 劑 時 » 若 使 用 上 述 之 間 隔 1 1 本紙張尺度過用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX297公釐） 12 38954 _B7 _五 '發明説明（11) 基，可達到極高之抗腫瘍效果，例如於特開平6-87 746號 公報所紀載之抗腫瘍劑列舉有較好使用申請専利範画第2 限毒之 別規好 特發較 無或揮 並態選 基動來 隔之點 間内觀 之«等 述在性 上、鏞 , 制游 般櫬之 一 用费 。 作瘍 等之 匾 劑 m 抗 瘍瘍內 |1鼸«| 抗抗在 之由、 載是猷 記但特 所· 之 項定性 在游 好度 較濃 , 高 癌 Μ 之可 快物 度 合 速化 殖蕖 增醫 於内 對間 般時 1 短 ，在 又揮。S 的中 要基 必 ffi 是間 基之 隔述 間上 者 難 嫌能擇基 合要選殘 複只地 之 物 •宜物 藥者 《合 之示 Μ 化 明所可 獬 發表即 β 本下者與 但於業側 ，限 ，播 示只度ϋ 表不速», 表並雛 Ν 下 基游為 从隔 之稱 例 間當左 m 之 _ 列 具用物配 之使合之 基所化肽 隔法蕖 , 間方醫中 造予表 製給。 酸 基 胺 之 他 其 t 基 殘 酸 禳 丙 基 苯 I D 示 表 e ο ph示 D-表 。 酸 合基 结胺 合 結 索 撇 阿 搌 艾 與 據 根 小 大 之 度 速 離 游 又 或度 度濃 程之 之離 效游 蕖索 現徽 顯阿 R捶 老艾 癌位 罹部 56瘍 2腫 era lk老 vali 於罹 對56 Ϊ 2 Η 合 β 嫌lk 物va 藥於 之對 纗 N yil· 索 繳 阿 搌 艾 於 對 用 使Μ 中 基 隔 間 些 埴 ο 定 判 來 (锖先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} '•裝. 訂 經濟部中央橾準局員Η消f合作杜印裂 好 較 基 隔 間 之 物 合 化00 度 瀠 高 出 離 游 可 間 時 短 在 等 本紙悵尺度適用f國國家橾準（CNS ) A4洗格（Ξ10Χ2Μ公釐） 3 1 3895 4 409058 A7 Β7 經濟部中央標华局員工消費合作让印裝

五、發明説明（1 2 ) 1 I 表 1 1 L | (a ) 游 雕 速 度 大 之 間 隔 基 .I 1 -L e u _ G 1 y - 請 先 1 -T y r -G 1 y - Μ 1 讀 i 1 -P h y -G 1 y - 背 面 1 I 之 1 -G 1 y -P he -G 1 y - 注 j 意 | -G 1 y -G 1 y -P he -G 1 y - 事 項 I I -G 1 y -P h y -G 1 y -G 1 y - 再 填 1 i -P h e -G 1 y -G 1 y -G 1 y 華 寫 本 裝 頁 1 -P he -P he -G I y -G 1 y - 1 -G 1 y -G 1 y -G 1 y -P he -G 1 y 編 1 I (b ) 游 m 速 度 比 較 大 之 間 隔 基 ί -G 1 y -G 1 y -P he -P he - 1 訂 -G 1 y -G 1 y -G 1 y -G 1 y -G 1 y -G 1 y - I I (c ) 游 離 m 度 比 較 小 之 間 隔 基 1 1 -P he -P he - 1 -A la -G 1 y 1 1 -P Γ 0 -G 1 y - | -G I y -C I y -G 1 y -P he - 1 1 (d) 游 離 速 度 小 之 間 隔 基 1 -G 1 y - 1 1 -D -P he -G I y - 1 | -G 1 y -P he - 1 I -S e r -G 1 y - 1 1 -G 1 y -G I y - 1 1 -G 1 y -G 1 y -G I y 1 ] -G 1 y -G 1 y -G 1 y -G 1 y - 1 ! | I 本紙张尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（2丨0x297公羞） 3 8 9 5 4 409058 B7 經濟部中央樣準局員Μ消资合作杜印策 五、發明説明 ( 13 ) t 1 作 為 構 成 蕖 物 複 合 Η 之 多 糖 衍 生 物 部 分 之 具 有 羧 基 之 1 多 耱 衍 生 物 t 只 要 是 多 糖 類 或 逭 些 多 精 類 埋 由 化 學 或 生 物 1 J 學 修 飾 之 衍 生 物 其 分 子 中 具 有 羧 基 者 即 可 以 使 用 0 例 如 1 1 :透明質酸、 果膠酸、 裼藻酸、 砍骨素、 肝素等之多糖類 請 先 聞 1 I 之 外 t m 可 K 使 用 在 支 鐽 澱 粉 Λ 葡 聚 糖 甘 靄 聚 耱 > 甲 肢 背 面 1 1 η % 菊 粉 左 聚 糖 木 聚 糖 阿 拉 伯 聚 糖 N 甘 霣 葡 聚 耱 之 注 l 1 意 1 般 聚 糖 等 多 糖 之 一 部 分 或 全 部 之 羥 基 導 入 具 有 羧 基 之 官 能 事 項 I I 再 1 基 者 0 較 好 使 用 例 如 將 羥 基 羧 基 Ci 4 烷 基 化 者 或 將 羥 基 與 填 本 裝 I 多 元 酸 之 — 之 羧 基 结 合 成 醮 者 0 亦 可 Μ 使 用 將 上 述 之 多 糖 頁 'W I 1 類 多 元 酵 化 後 導 入 具 有 羧 基 之 官 能 基 者 0 1 i 逭 些 多 糖 衍 生 物 中 較 好 使 用 羧 基 Ci -4 焼 基 V 聚 糖 多 元 1 ) 酵 0 羧 基 Ci -4 烷 基 葡 聚 糖 多 元 酵 之 多 元 » 化 度 並 無 特 別 之 J 訂 I 限 定 » 但 是 較 好 使 用 將 由 羧 基 Ci -4 烷 基 葡 聚 耱 多 元 酵 構 成 I 1 1 之 葡 聚 糖 多 元 m 實 霣 地 在 能 完 全 地 多 元 酵 化 之 條 件 下 將 葡 1 1 聚 耱 處 理 所 得 到 之 葡 聚 糖 多 元 酵 0 1 f 為 了 製 造 羧 基 Ci -4 烷 基 葡 聚 糖 多 元 酵 所 使 用 之 葡 聚 糖 .，·* 1 之 種 類 並 無 特 別 之 限 定 % α， D-1 , 6 - 结 合 以 任 何 比 例 含 有 亦 1 I 可 〇 例 如 :可以使用β -〇 ~ ] • 6 -结合之比例為85¾以上 90 I I % 以 上 或 95 % Μ 上 之 匍 聚 糖 等 0 葡 聚 糖 之 分 子 ft 並 無 特 別 1 1 之 限 定 t 可 >λ 使 用 分 子 量 在 約 1 0 , 0 0 0 到 約 2 , 0 0 0 , 0 0 0 者， 1 1 較 好 使 用 分 子 量 在 約 50 ,0 0 0 到 8 0 0 , 000者 =作為構成羧基 1 1 C 1 -A 烷 基 葡 聚 m 多 元 酵 之 规 基 Ci -4 烷 基 之 C 1 -4 烷 基 會 可 以 1 1 使 用 直 m 或 支 m 之 C 1 4 烷 基 » 具 Η 而 言 » 可 以 使 用 甲 基 N 1 i 乙 基 、 正 丙 基 、 異 丙 基 Λ 正 丁 基 、 第 二 丁 基 等 • 較 好 使 用 1 1 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210 x 297公釐） 1 5 3 8954 40905妨 __B7 五、發明説明（14) 基 甲 將本 為物 徼合 特化 其蕖 時鹽 败與 合類 複Η 物之 藥等 述胺 上懺 造有 製之 於物 , 生 法衍 方糖 之多 明之 發基 本羧 有 具 » 與中 巳劑 與溶 類櫬 鹽有 之之 等水 胺有 機含 有不 之在 物地 生質 衍實 糖基 多ffi 之間 基之 狻合 有结 具物 將合 或化 «藥 應 反 行 進 下 系 水 非 在 即 亦 基 羧 用 使 於 對 戆0 之 好衍 較糖 法多 方為 之作 明酵 發元 本多 為耱 作聚 • 葡 下基 Μ 烷 。 大元 態與多 樣次全 些依完 埴糖上 於聚質 限葡資 只將造 不由製 並 Κ , 圃可用 範 ，作 之時納 明物化 發始氫 本起α 。 為及 明作纳 說糖酸 之聚碘 «葡過 具用之 作使ft 物 通 生 為 於 。 限用 只採 不 以 並可 法均 方法 之方 化何 酵任 元者 多用 糖利 聚可 葡者 〇 業 酵是 元要 多 只 耱 聚法 葡方 之之 化述 酵上 乙 、 氯酸 與丙 基氯 理/>-之 、 酵酸 元丙 多氮 I _ 糖 α ^ * : 甲 如α~ 例、 將酸 以丙 可氯 化_Β 基' 烷酸 Τ 乙 C1澳 基、 羧酸 酸 丙 氯 I ΛΡ- 基 甲 I α 酸 酸 之 等 酸 氯 部Μ 可 基 羥 應 反 行 進 酸 乙 0 氢化 與基 好烷 較 Τ 1 * C 酸基 羧羧 基行 烷進 Τ全 C1完 化或 鹵分 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本页) 裝. 訂 經濟部中央橾準局負工消費合作杜印製 劑 溶 性 惰 之 應 反 與 參 不 用 酵 元 多 糖 聚 葡 將Μ 可 如 例 胺等 醣鉀 甲化 基氧 甲氩 二 或 Ν-納 Ν,ib 、 氧 水 « 如如 例例 0 在 解 溶 \)/ 等0 亞 基 甲二 化 鹵 加 添 下 在 存 羧 基 烷 類 鹽 其 或 基 梭 ο Β 數 至 鐘 分 數 如 例 擇 理 當 磨 由 度 程 之 入 導 ο S 1 約烷 至 Τ 下 C 冷 冰 在

應 反 行 進 下 園 範 度 溫 之 V 烷窠 Τ 為 C1法 化方 鹵 些 之埴 用 使節 0 調I 試地 為易 作容 及很 度Μ ffl 可 應 反ft 之之 化類 基鹽 烷其 T 及 C1酸 基羧 羧基 本紙張尺度適用中國國家梯牟（CNS ) A4^格（210x297公釐） 16 3 8 9 5 4 經濟部中央標準局負工消費合作社印^ 409058a7 B7五、發明説明（15) 者悉知者。對於葡聚糖多元酵之羧基，羧基Ci-4烷基化之 程度並無特別限定，但是每镧構成糖殘基可以在0.01〜 2.0之範園、較好在0,1〜1.0、更好在0.3〜0.5之範_。 羧基Ct-4烷基葡聚糖多元酵之分子量用凝®邊滄法測定時 為約5,000〜500,000、較好為約50,000〜450,000、更好 為約 200,000〜40 0,000。 將由此所製埴之羧基Ci-4烷基葡聚轆多元_調製成納 鹽或鉀鹽等之螓金属鹽形想之水溶液。在本發明之方法， 其特徽為當此種多糖衍生物之羧基輿已輿B藥化合物或K 蕖化合物之殘基结合之間隔基结合時將上述iMl金屬鹽形態 之多糖衍生物以有«胺及其》類形態之多耱衍生物代替使 用。此種有機胺及其Μ類形慇之多耱衍生物實«地可以在 不含水之有拥溶劑中Μ高灞度溶解，反應可Μ在非水系下 進行，所以反應效率可以顯著地提高。 作為有櫬胺及其«類，除了例如三乙胺、三甲胺、三 乙酵胺等脂肪族肢類之鹽類之外，«可以使用Η -甲基吡路 烷、Ν -甲基哌啶、Ν -甲基喁啉、二甲胺基吡啶等脂瑁式或 芳香族胺類之《類，«化四甲技、氯化四乙妓等四级銨明 等。進行將多糖衍生物之纳匾變換成有慵胺及其Μ時可Μ 使用離子交換樹脂。例如，可Μ將梭甲基葡聚糖多元酵之 納Μ溶解於水中，吸附在用Bio-Rad AG50W-X2(200-400綱 目、型）樹脂充填之管柱上，用水溶出後添加三乙胺等 有懺胺，進行凍结乾燥。亦可將»甲基葡聚糖多元酵之纳 鹽用水溶解，經由通逢三乙箝型樹脂之遇程進行變換。 未紙張尺度適用中國國家橾準（CNS > A4规格（210X 297公釐） 17 38954 (請先閲讀背面之注意ί項再填寫本頁) .裝·

、1T 409058 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印聚 五、發明説明（ 16 ) 1 U m 化 合 物 本 «1 與 羧 甲 基 葡 聚 糖 多 二 Μ 兀W 之 羧 基结 合， 1 或 是 與 巳 與 翳 藥 化 合 物 结 合 之 間 m 基 之 结合 * — 般將 醫藥 .] I 化 合 物 具 有 之 反 應 性 胺 基 或 間 隔 基 之N纗胺基與羧甲基葡 請 1 聚 糖 多 元 酵 之 羧 基 迆 行 醢 胺 结 合 即 可 〇 8第 物 化 合物 或間 先 閲 讀 1 隔 基 與 羧 甲 基 葡 聚 檐 多 元 酵 之 羧 基 之 结 合並 不 只 限於 上述 背 面 之 1 者 * 可 Μ 使 用 其 他 之 化 學 结 合 或 是 利 用 1或2個 間 隔基 结合 注 意 事 項 再 填 1 I 0 例 如 :可由間隔基之C纗羧基或 8 藥 化 合物 之 羧 基與 羧甲 1 基 葡 聚 糖 多 元 m 之 羧 基 形 成 酸 酐 ， 亦 可 將伸 乙 二 胺等 之二 寫 本 頁 i 1 胺 化 合 物 作 為 間 隔 基 使 用 f 將 每 個 羧 基 與二 胺 之 各胺 基進 1 1 行 睡 胺 结 合 〇 1 1 Μ 藥 化 合 物 若 是 m 由 將 具 有 反 應 性 胺基 或 間 隔基 之N 1 1 嫌 胺 基 與 羧 基 C i 4 烷 基 m 聚 糖 多 元 酵 之 羧基 經 由 醯胺 结合 訂 1 而 结 合 時 1 合 成 肽 鍵 時 所 使 用 之 一 般 之 脫水 縮 合 m , 可以 1 1 使 用 例 如 Ν , Ν ' -二環己基碳化二亞胺（DCC)之 Ν , Ν · -二環烷 1 1 基 m 化 二 亞 胺 類 > 1- 乙 基 -3 -(3 - 二 甲 胺基丙基）碳化二 二亞 1 胺 (EDAPC)等之碳化二亞胺衍生物， 例如卜羥基笨并三唑（ 1 1 Η0ΒΤ)之苯并三唑衍生物之外， 亦可Μ使用1 -乙氧基羰基- 1 I 2- 乙 氡 基 -1 ,2 -二羥時啉（EEDQ)等 3又， 亦可以用活性酯 I I 1 法 或 鹵 化 醚 基 法 進 行 反 應 0 1 1 反 應 中 實 質 地 不 含 水 之 有 櫬 溶 劑 > 只要 能 將 反應 物種 1 1 (羧甲基《聚糖多元酵之有拥胺及其《類、Η蕖化合物或 1 1 是 與 已 與 稱 化 合 物 结 合 之 間 隔 基 )溶解者均可以使用。 1 1 使 用 例 如 Ν , Ν， 二 甲 基 甲 醣 胺 二 甲 基 亞 碾、 乙 醣 胺、 H-甲 I I 基 吡 咯 烷 酮 、 環 丁 碣 等 〇 經 由 8 m 化 合 物或 已 與 B m 化合 1 1 本紙浪尺度適用中國國家插準（CNS ) A4規格（：!丨0X29*7公釐） 18 38954 409058 ab] 五、發明説明（17) 物結合之間隔基進行反應，在羧甲基葡聚糖多元酵所導入 之»蕖化合物殘基之量雖然沒有特別之限定，但是，儘可 能地從B蕖化合物殘基之物理化學性質及藥物禊合«之» 内動態、藥效及毒性等之觀點作瑭宜之薄擇。一般可MS 擇0.1〜30S量X ,較好選擇的1〜15重量》之铕11。在羧 甲基葡聚耱多元酵専入B蕖化合物殘基之比例，由吸光度 分析等可Μ很容易作決定。 本發明之製造方法較好之揉戆，將與於特開平 6 - 87746號公報申請專利範匾第2項所記載作為抗腫瘍繭之 Β藥化合物结合之低聚肽導入羧甲基葡聚糖多元酵之方法 >乂下述之流程匾表示，本發明之方法並不只限定於此流程 圖所示者。於下述之流程圈，Β藥化合物殘基導入之量為 例如1〜15簠量％,較好為4〜8簠量*。下述之流程圈中 所記載的只是Κ多元酵類之構成單位中専人1涸或2個羧甲 基之構成單位為例子，但是藥物複合體之多糖衍生物部分 並不是將上述之構成單位重覆而構成。 -......-.......-II ^^1 —II — i J ......— I...... - - - ---I . (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS } A4規格（2!OX：；97公漦） 3 8 9 5 4 409058 A7 B7 五、發明説明（18

葡聚糖 2) NaBH4

CICH2C00H/Na0H 羥甲基葡聚耱多元酵納锂 «聚糖多元酵

Ri: -H 或-CH2COONa R2: -Hag -CHzCOONa BI〇-AadAG50W-X2(H*)管柱 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印奴

羥甲基葡聚糖多元酵 R,: -Η 或-CHjjCOOH R2: -Η 或-CH2COOH 羥甲基葡聚糖多元酵三乙胺鹽 Ri： -Η aK-CHjCOOH'NEta Rz: -H 3¾ -CH2COOH«NEt3

1) Gty-Gly-Phe-Gly-NH-A EEDQ 2) NaOH 藥物複合雅

CHj f

=NH-A 衣紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4現格（210X 297公釐） 20 38954 五、發明説明（19) 藥物複合體

A7 B7

Η3 G, ό

Η3 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 知 已 為 約 值 Η Ρ 如 例 中 質), 介« 性環 水閉 yl\ 性 酸 在 物 合 化 0 0 之 中 _ 程 流 述 上 物 合 化 之 瑁 酯 内 成 形 於 0

*1T 介(ΪΙΙ 性物合 水合複 性化物 鹹之蕖 在環之 為 约 值 Η Ρ 如 例 tt 瓖 開 開基葡 環殘基 S 入甲 内導羧 成H 形環是 於開但 «及。 會H果 0)瓖效 ί閉思 種ΙΒ 此抗 於之 對等 , 同 丨有 中 Μ 具 經濟部中央橾準局負工消f合作杜印¾ 基 隔 間 之 合 结 物 合 化 藥 0 述 上 與 巳 與 酵基 元隔 多間 糖肽 聚聚 時 應 反 行 進 低 3 : 物 如懕 例反 S__\ 型 環 開 有 若 中 系 應 反 在 之不 基且 胺 ， 之率 來收 而之 基應 隔反 間低 由降 與地 基著 羧顯 之會 來 只 而不 m @應 内反 由合 則嫌 , 行 在進 存會 種間 達免物 1R避藥 不MZ 在可物 — 則 合 應種化 反物蕖 副應 B 種反述 此為上 。 作有 HH含 合環造 複閉躲 物用法 蕖使方 之 ，之 1 中 明 均系發 之水本 f NT *TTT^ ， 所之此 到衡因 得平。 能到之 合 癱 rtu S 特 時 « 合 0 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 21 389 5 4 經濟部中央標準局貞工消f合作杜印策 409058 A7 B7 五、發明説明（2〇) 依照本發明之方法所製造之上述蕖物複合Η，具有可 Μ隨著》蕖化合物殘基之種類（例如：抗腫瘍劑或消炎劑 等之Β藥化合物之殘基），在腫瘍部位或發炎部位等局部 地方特異性地顯現所期待之醫藥活性*而且可Μ減低翳藥 化合物本體所具有之毒性之特微。例如：將多耱衍生物部 分所具有之羧甲基葡聚糖多元酵作為藥物送逹之載髑*有 非常優越之血中滯留性及向腫瘍•發炎部位之集積性*所 以上述之蕖物複合«具有腫瘍理擇性及發炎部位理擇性。 又•在臞瘍部位或發炎部位發現有蛋白费（肽»)·所Μ * 具有由低聚肽所成間隔基之第物複合》•在間隔基部分容 易加水分解·游雛出來之醫蕖化合物發揮藥效。 含有依照本發明之方法所製造之藥物複合«之Β藥· 一般可以Μ凍结乾煉品之形態充填在管瓶等，作成使用時 溶解型之注射甩或黏滴用製劑等之非經口投與用製劑提供 在臨床上，但是此種醫藥製蘭之形態並不只限於上述者。 上述製劑之製造可以使用在業界可Κ利用之溶解輔助劑、 pH調節劑、安定化劑等製劑用添加物所製造之Β藥姐成物 。上述B藥之投與量並無特別之限定，通常，由B藥化合 物殘基構成之醫藥化合物之投與量可以由斟的在藥物複合 «中導入之Β»化合物殘基之量、*者之狀況及疾ft之種 類決定之。例如：將特開平6-87746»公報申請專利範· 第2項所記載之抗腫瘍爾之殘基Μ約6重量％之比例専入之 鏑物複合Μ非0 口投與時•一般每日一次以每«表面《 I·2在約1〜500ig，較好在約10〜lOOig之範園投與，較好 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS > Λ4*見格（210X2W公釐} ' 22 38954 —--„-------'裝------訂------X. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

4090M B7 五、發明説明（21 ) 每3〜4S反覆一次。 Μ下，Μ實施例對本發明作更詳细之說明，但是本發 明之範圏並不只限定於下述之實腌例。實施例中「Α-ΝΗ-」代表於特開平6-87746»公報申講專利範第2項所記載 之Β藥化合物（實施例中亦稱為「DX-8951J )等具有內酯 環之翳藥化合物，内醣瓖閉環之醫藥化合物Κ Α-ΝΗ2表示 時之Β藥化合物殘基，其中之一例為上述之流程鼷中ΜΑ-ΚΗ-表示之基者（形成内酯瓖者又，A’-HH-代表以Α-ΝΗ-表示之》藥化合物殘基中之内酯環為閉環型或是開環型之 任何一種或其混合形態者。 經濟部中央橾隼局負工消費合作社印製 (请先聞讀背面之注意事項再填苒本頁)

又，實施例中若無特別敘述，則羧甲基葡聚糖多元酵 之羧甲基化度（每®構成耱殘基之羧甲基之置換度）由將羧 甲基葡聚糖多元酵之納鹽變換成游離酸型後溶解於0.1H氫 氧化納水溶液，用〇.1Ν_酸滴定求得。將羧甲基葡聚糖多 元酵納鹽之水溶液吸附在B i 〇 - R a d A G 5 0 W - X 2 ( Η +型）管柱， 通通後液凍结乾煉•作為試樣。將此試樣溶解於規定遢剩 量之0.1Ν氫氧化納水溶液中，以酚酞作指示劑用0.1ΝΜ酸 滴定。試樣之採取量MsUg)、0.1Ν氬氧化納水溶液之規 定通剰1以8(11)、0.〇鹽酸之滴定量以1)(11)表示，羧甲 基化度由13.4(a-b)/[s-5.8(a-b)]公式求得。藥物之専入 量（里量《)由利用藥物之特性吸收，分析吸光度（362nm附 近）求得。又，《隳遢濾法依照下述之條件進行（管柱：TSK 凝應G4000Pxl溶離液：0.1H NaCl、流速：0.8a丨/·ΐη、管柱 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 23 38954 409058 A7 _B7_ 五、發明説明（22) 溫度：40Τ )。 奮嫌俐1 3'-H-fB〇(；-Giv-Gly-Phe-Glv)-NH-AfA-HH2 = ny-8951) Η

經濟部中央棟隼局貞工消t合作社印製 n^i— . 1 —r (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將 Boc-Gly-Gly-Phe-GU(600ig)及 Ν-理基 ίΛ 拍 Β 亞胺 (160ig)溶解於Ν,Ν-二甲基甲黼胺（20β1),於41C冷卻後加 入N,tT-二環己基碳化二亞胺（280mg)。在此溶液中加入溶 有特開平6-87746W公報申鼸專利範第2項所記«之Β» 化合物之甲磺酸蘧（600ns:上述公報實施例50所記戰之化 合物）及三乙胺（0.16·1)之Ν,Η-二甲基甲醢胺（30·1)溶液， 遮光下在室溫邊攪拌邊進行反應16小時。反應液減壓乾嫌 ，殘渣用矽《管柱曆析法（溶出液：含有0.5«乙酸之二氛 甲烷：甲酵=10:1溶液）精製，得到擁記化合物（l.〇g)。 lH-NMR(DHS0-d6)i：8.40(d,lH,J = 8.3Hz) , 8.1〇-8.17(·, 2Η), 7.91-8.01 (·, 1Η) , 7 . 78 ( dt 1 Η , J = 1 0.75 Ηz) , 7.32( s.lH), 6.9 4 - 6 . 9 6 (a , 1H) , 6.50(s,lH), 5.57(t,lH,J = 4.5Hz), 5.43(s,2H), 5.23(s,2H), 3 . 77 ( dd . 2H , J = 5 . 85 Hz , J = 8 . 80Hz) . 3 . 70 (d , 2H , J = 4 . 40Hz) , 3.65(d.2H.J = 5.35Hz), 3 . 56 ( d , 2H , J = 5 . 85 ) , 3. 1 5 - 3 . 25 ( ,2H) , 2.40( s,3H). 2,05-2.25(·,1Η), 1 . 86 ( , 2H) , 1 . 35 (s , 9H), 本紙張尺度適用t國國家標準（CNS > A4規格（2丨OX297公釐）~ 24 38954 409058 A7 B7 五、發明説明（23) 0.88(t，3H,J = 7.35)

Hass (FAB) ；i/e854 (H + l) w m m 2 ^'-N-fRo^~Glv-r11v-GlY-PhP^-HH~AfA-NHa = ny-S951)±^· l 將 Boc-Gly-GIy-Gly-Phe(600ng)及 H-理基號泊 SI 亞胺 (160·8)溶解於H,H-二甲基甲釀胺（20al),於4¾冷卻後入 加Η,Ν-二環己基碳化二亞胺（280·«)。在此溶液中加入溶 有DX-8951之甲磺酸M (600ns)及三乙胺（0.16nl)之Ν,Ν-二 甲基甲醚胺（30·1)溶液，遮光下在室溫邊攪拌》進行反應 16小時。反應液減颳乾烽，殘渣用矽膠管柱層析法（溶出 液：含有0.5«乙酸之二氣甲烷：甲酵=10:1溶液）精製•得 到锞記化合物（700 »s)。 1H-NMR(DHS0-d6)i：8.57(d,lH,J=7.8Hz), 8.19(d,lH), 8.05 -8.07 (b , 2H) , 7.79(d,1 Η ,J = 11.2 Ηz ) , 7.32(s,lH), 7.10 (d,2H,J = 7 . 8Hz) . 6.93 - 7.0 3 ( b , 4H ) , 6.51(s,lH), 5.5 2 - 5.55 ( , 1H) , 5.44(s,2H), 5. 18 ( d,1H , J = 1 8 . 5Hz), 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製 (請先閲請背面之注意事項再填寫本頁) 4 . 84 (d . 1 H , J = 1 8 . 5Hz) , 4 . 57 - 4 . 59 (i. 1 H ) , 3.57-3.71(a, 6H)f 3. 15-3 , 25 (·,2H) , 3 . 0 0 - 3 . 0 2 ( d , 1 H ) , 2.80 -2.9 0 ( 2.40(s,3H), 2 . 0 5 - 2 . 2 5 ( , 1H ) , 1.86(a,2H), 1 . 35 (s , 9H) , 0.88 (t.3H,J=7.35Hz)

Mass(FAB);丨/e854 (M + l) 3'~K~(Bnr；~G1v~GlY~Glv~Glv)~HH~A(A~NH2 = nX~8951)^!· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X 297公釐） 25 38954 經濟部中夬橾準局負工消費合作社印策 40^058 B7_ 五、發明説明（24)

I 將 Boc-Gly-Gly-Gly-Gly(120*g)及 N-淫基班拍鼸亞胺 (39ig)溶解於Ν,Ν-二甲基甲醯胺（20·1),於4¾冷卻後加 入Ν,Ν’-二環己基碳化二亞胺（70bs)。在此溶液中加人溶 有DX-8951之甲磺酸鼸（150麗s)及三乙胺（0.039«1)之Ν,Ν-二甲基甲醣胺（ΙΟβΙ)溶液，遮光下在室溫邊携拌邊進行反 應ΐΜ、時。反應液減s乾烽，殘渣用矽膠管柱nr析法（溶 出液：二氛甲烷：甲酵=10:1溶液）精製，得到擷記化合物（ 10 0 eg ) 0 lH-NHR(DMS0-d6)5：8.40(d,lH,J = 8.3Hz) , 8.10-8.17(m, 2H), 7.91-8.01 (mt1H) , 7.78(d,1H,J = 1 0 . 75H2) , 7.32( s,lH), 6.94-6.96(,1H), 6.50(s,lH), 5.57(t,lH,J= 4.5Hz), 5.43(s,2H), 5.23(s(2H), 3.77 ( ddf2H , J = 5.85

Hz,J=8.80Hz), 3.70(d,2H,J=4.40Hz), 3.65(d,2H,J= 5.35Hz), 3.56 (d,2H,J=5 . 85Hz) , 3.15 - 3 . 25 ( n , 2H), 2.40(s,3H), 2.0 5 - 2.2 5 ( , 1 H) , 1.86(»,2H), 1.35(s, 9H), 0.88(t,3H,J=7.35Hz)

Hass (FAB) ；a/e7 6 4 (H + l) 奩啪例4 V-H-mv-Glv-Glv-GW)-NH-A(A-NH2 = DmfmH 氬 Z » 明夕合成 ^^^1- ^^^^1 ^^^^1 n^i HI —^ϋ ^^^^1 tut ΐ V (請先閲讀背面之注意i項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 26 3 8954 經濟部中夹標準局貝工消費合作社印製 058 __B7 五、發明説明（25)

將 S'-H-Uoc-Gly-Gly-Gly-GlyJ-NH-AU-HHzsDX-sgSDUgns) 溶 解於三 氟乙酸 （3·1), 故置 1小時。 除去溶 劑，用甲酵（30·1)共沸2次，再用乙酵（30nl)共沸2次後殘 渣用乙醚洗淨，得到禰記化合物（80·8)。 ^-HMRiDMSO-deJaiS.SQ-e.eUB.lH), 8.50(d,lH,J = 8.3 Hz), 8 . 21-8 . 27 ( , 2H), 7.91 - 8.01 (br . 3 Η ) , 7.81(d,lH, J = 11.2Hz), 7.32(s,lH), 6.50 - 6 . 52 ( br, 1 H), 5.57-5.59 (t.lH), 5.43(s,2H), 5.23(s,2H), 3 . 80 - 3 . 82 ( , 3H), 3.7 0 - 3.75 (i,3H), 3.15 - 3.25 (i,2H) , 2.41(s.3H), 2.05 -2.25 (a, 1H) , 1 . 8 6 - 1.88 (,2H) , 0.88(t,3H,J = 7.35Hz) 冒胞例5 络田其翩》煽冬元醵之三7i路_ ^合成 將葡聚糖T2000(10g*法瑪西亞公司製造，平均分子 量 2,000,000)溶解於 0.1M 乙酸《衡液（pH 值 5.5, 1,000*1) 後加人高碘醸納（33.Os)之水溶液（〗〇〇丨）°邊想光邊於4 *0攪拌10天後加入乙二酵（7.〇Bl)|攪伴一晚。反應液在 冰冷下用8MSS氧化納水溶液將pH值調整至7.5*加人班值 化納（14g)溶解後在室灌下攪拌一晩。反應液冰冷之，用 乙酸調整pH值至5.5，在4 t撟拌1小時後在冰冷下用8Mg 本紙張尺度適用中國困家楳準（CNS ) A4规格（2丨0X297公董） Ί-----.---------1T------^ (請先閱讀背面之注f項再填寫本頁) 389 5 4 27 409058 A7 B7 五、發明説明（2β) 氧化納水溶液將pH值調整至7.5。所得到之水溶液用Bio-BaX-30膜（迷你波爾公司製造）經由超濾法除去低分子部分 ，將高分子部分凍结乾嫌，得到葡聚耱多元酵。此葡聚耱 多元酵在PH3.0下處理1小時後用Bioiax-50膜除去低分子 部分，接著用Bio-iax-100_除去高分子部分，凍结乾煉 後得到稍製之葡聚糖多元B (2.Os) ◊此物質之分子量（凝 膠）ft濾法、葡聚糖禰準）為220 K。 此精製之《聚糖多元酵（1.8g)加入將氲氧化納（10.5g )用水（45·1)溶解所得到之水溶液中，在室溫下溶解。此 溶液在冰冷下加入單氯乙酸（15g)溶解後在室溫下反應20 小時。將此反應液用乙酸調整pH值為8後用Bio-aax-lOW 經由超濉法除去低分子部分。將高分子部分凍结乾嫌，得 到羧甲基葡聚糖多元酵之納M (1.8s)。此物質之分子量（ 凝膠《滅法、葡聚糖檷準）為330K、羧甲基化度為0.8。 經濟部中央樣隼局負工消费合作社印製 m· r«l Hi·— HI— 1^1^1 nn -' (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 將上述之羧甲基葡聚糖多元酵之納》(300»g)用水溶 解，吸附在 Bio-Rad AG50W-X2(200-400網目、H +型）管柱（ 1.5X8.6c·)上，用水溶出。此水溶液中加入三乙胺（0.5 ml)後凍結乾燁，得到羧甲基«聚糖多元酵之三乙较》( 380bs)〇將後甲基葡聚轆多元酵之纳_ (各300ns>經通與 上述相同之管柱處理，得到狻甲基葡聚糖多元醉之三乙銨 H (380ng.400ag) 0 奮袖ί例fi 撖田某葡聚《多元鹂之訥Μ之合成 _將由上述實施例5得到之葡聚糖多元酵之納鹽（〇.15g) 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X29?公釐） 28 38954 409058 A7 B7 五、發明説明（27) 加入將氫氧化納（l.〇5g)用水（4.5·1)溶解所得到之水溶液 中，在室溫下溶解。此溶液在冰冷下加入單氛乙酸（1.5s) 溶解後在室溫下反應18小時。將此反應液用乙酸調整pH值 為8.滴入90b1之甲酵中後加入3M之氱化納水溶液（0.15b1 ),析出之沈》用遠心分ll(3500rp*,8分鐘）收集。沈教物 用甲醇洗淨後用水（5«1)溶解，加入3M氱化納水溶液（0.15 1)。此水溶液用微孔濉厲（0.45μ*)^»，濉液滴入35·1 之乙酵中，析出之沈澱用遠心分離（3500rp*,8分鐮）收集 。沈澱物用Z酵洗淨後用水溶解，用*析膜（光饈孔1、切 斷分子量6,000〜8,000)對純水透析。邊析内液用激孔濾 臢（0.22μ·)!Α濾後凍结乾煉，得到羧甲基葡聚糖多元醻之 納鹽（0.18g)。此物霣每個糖殘基之羧甲基化度（《(滴定法 > 為 1 . 2。 實施例7 撖田某名元醵夕納»^合成 經濟部中央橾準局員工消費合作社印^ i. _ "訂 (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 將由實腌例5得到之精製«聚糖多元酵（0.2s)加入將 氫氣化納（0.84g)用水（6·1)溶解所得到之水溶液中，在室 溫下溶解。此溶液在冰冷下加入單氛乙酸（1.2s)溶解後在 室溫下反® 18小時。將此反應液用乙酸網整pH值為8,滴 入120·1之甲酵中後加入3M之氯化納水溶液（0.2ml),析出 之沈澱用逮心分雕（3500「pi,8分鐘）收集。沈教物用甲醉 洗淨後用水（5·丨）溶解，加入3M氮化納水溶液（0.2·1>。此 水溶液用《孔» _(0.45μ·) «濾，濾液滴入35β1之乙酵中 ，析出之沈艰用逭心分離（3500「ρ·,8分鐘）收集。沈激物 本紙乐尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 29 38954 40^058 B7 五、發明説明（28) 用乙酵洗淨後用水溶解，用透析鎮（光譜孔1、切斷分子量 6,000〜8,000)對婢水《析。透析内液用微孔濾膜（0.22μ· )嬝濾後涑结乾嫌，得到羧甲基葡聚糖多元酵之納鹽（〇.2g )。此物質每個糖殘基之羧甲基化度（鐮滴定法）為0.4。 奮掄例8 播 某葡 St 鑛名元 _ -Glv-filV-fi1v-PhA-MH-A, fA-MHa = nX- a 9 ;m ^合成 將由實施例5得到之珐甲基葡聚糖多元酵之三乙銨鹽（ 380is,羧甲基化度為0.8)用Ν,Ν-二甲基甲醢胺（30·1)溶 解。此溶液依次如入 3'-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)之三氟乙酸鼸（49ηιε)之H,N-二甲基甲醮胺（ 5·1)溶液、三乙胺（0.017·1)及1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2 -二羥基時啉（3 8 0 ^ ),在室溫下邊《拌邊反應一晚。反應 液用1M氲氧化納水溶液調整pH值為10後在25il之乙酵中每 次滴下5·1。此混合物中加人3M氣化納水溶液（1*1)、乙醚 (5·1),析出之沈澱用塞心分鐮（3500「ρ·,δ分離）收集。 經濟部中央樣隼局員工消资合作社印裝 ^^^1 n I tn n^i . = - - - - i·: -i 一^ <請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 將此沈《物用水溶解，用透析膜（光謂孔1、切斷分子 量6,000〜8,000)對纯水透析。透析内液用微孔濾Ρ (0.22 μι)«»後*结乾埭。將得到之粗生成物用水（30·1)溶解， 用0.1Μ氫氣化納水溶液調整pH值為9後在371〇下處理1小時 。Λ理液以與上述相同之方法透析後.透析内液用微孔》 膜（0.22μ·)壜濾後减结乾嫌，得到_記化合物289ig。此 化合物溶解於0.1M之氛化納水溶液後，用GPC(管柱«:東 塱股份有限公司製埴TSK Gel PW-4000XL、溶Βί:0.1Μ 本紙乐尺度適用中國國家揉^ ( CNS ) A4規格（210X297公羞) 30 38954 409058 A7 B7 五、發明説明（29)

NaCl、流速：0.8il/iain)分析之结果及此化合物之紫外線 吸收光譜（0.1M三羥甲基胺基甲烷級衝硖，pH9.0,0.25»g /Bl)分別如第1圈及第2圖所示。此化合物之B蕖化合物殘 基之含量以在0.1M三羥甲基胺基甲烷緩衝液（pH9.0)中之 根據於362nm之吸光度定量時為5.3x U/W)。 竇_俐9 掛甲某葡联 _^^_-Glv-Glv-Phe-G1v-HH-A'fA-HH2 = n)C-8 9 51夕会成 將由 3’-H-U〇c-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)(50as)依照寊施例4相囘之方法脫Boc化所得到之3·-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A之三氟乙酸Μ依照實腌例8同 樣之方法専入實施例5所得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三 乙铵鹽（380i«g),合成檷記化合物（300ng>。此化合物溶解 於0.1M之氯化納水溶液後，用GPC(管柱：東塑股份有限公 司製造 TSK Gel PW-4000XL、溶劑：0,1M NaCl、流速：0.8 nl/nin)分析之结果及此化合物之紫外镍吸收光譜（0.1M三 羥甲基胺基甲烷级衝液，PH9.0, 0.19ig/«l)分別如第3圃 M濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閲讀背面之注意事項再填离本頁) 及第4圈所示。此化合物之》藥化合物殘基之含量K在0.1 Μ三羥甲基胺基甲烷鍰衡液（PH9.0)中之根據於362nn之吸 光度定曇時為5 · 3 « (W/V)。 έ m m \ 〇 播申某《 费 _ 多元醵- GU-Giv-Glv-Glv-HH-A1 (A-HH2 = DX-8 9 5 1)之合成 將由 3'-N-(Boc-Gly-Gly-Giy-Gly)-NH-A(A-NH2=DX- 本紙伕尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐} 31 38954 經濟部中央橾準局負工消费合作社印装 409058 A7 — B7 五、發明説明（3〇) 8951>(41ag)依照實施例4相间之方法脫B〇c化得到之3’-N-(Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A之三氟乙酸鹽依照實施例8同樣 之方法導入實施例5所得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三乙 銨a(380«g),合成檷記化合物（190*g)。此化合物之紫外 線吸收光譜（0.1M三羥甲基胺基甲烷嫒街液，pH9.0, 0.34 ag/al)如第5圈所示。此化合物之B藥化合物殘基之含量 以在0.1M三羥甲基胺基甲烷媛銜液（PH9.0)中之根據於 362nm之吸光度定量時為5·3» (W/W)。 W J5- ,gL.l 1 太琎明物»合11夕杭_瘍作闲 將老留孅維肉腫Meth A细胞1X106個移植到BALB/c系 之雄老鼠（7理龄）之右鼠蹊部皮下，作成罹ft Meth A癌之 老鼠（1組7隻）。第7天起每4天在罹iftMeth A痛之老鼠之尾 靜陬内投與用注射用蒸钃水溶解之實施例9之藥物複合》 共投與4次。移殖後第21天取出臛瘍，制定其重量，腫瘍 增殖抑制率由下述之公式計算：腫瘍》殖抑制率（％ > = [1-( 檢體投與組之平均腫瘍重最/對照組之平均腫瘍簠量）]X 100。其结果由實施例9所得到之本發明之稱物複合β並未 發現毒性（«簠減少），與上述Β藥化合物本體（無間隔基 及多糖衍生物）相比較，其抗圃瘍效果大幅度埔強。多糖 衍生物本«(寊施例5)及只導入間隔基之Β解化合物殘基（ 由實施例1之化合物依照實睢例4之方法，脫B0C化所得到 之 H2N-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A(A-NH2 = DX-8951)之三氟乙 酸體）則無效。 ^^1 *m -1 - 1 -- - - I— ^~> . *-e (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙悵尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4規格{ 210X：：97公釐） 32 3 89 5 4 409058 B7五、發明説明（31) 表2 被檢化合物 投與董（ig/kg) 抑制率（¾) 醫蕖化合物本體 7.5 X 4 76 1.875X4 46 0.9375X4 36 實施例9之化合物 1.4"X4 94 0.715 X 4 59 0 . 3515 X 4 41 (請先閱請背面之注意Ϋ項再填寫本頁) 裝- 經濟部中央標牟局員工消費合作社印取 1)»藥化合物換算量 奩啪俐1 2 太發明夕箱物薄合»之抗牖瘍作用 依照與»施例11相同之方法作成罹患MethA癌之老鼠（ 1組6隻）。於第7天軍次投與實施例8及實狍例9之藥物禊合 體，比較其抗臛瘍作用。其结果，抗鼸瘍作用之程度：（多 糖衍生物）-Gly-G丨y-Phe-Gly-NH-A’>(多糖衍生物）-Gly-Gly-G丨y-Phe-NH-A'>醫槩化合物本*8。不經由間隔基之B 藥化合物殘基與實腌例5之羧甲基葡聚糖多元酵之羧基直 接结合之化合物（K蕖化合物殘基之導入量：6.2重量* )則 無效。 本紙張尺度適用中國國家標芈（CNS ) A4说格（210X 297公釐） 33 3 8954 組濟部中央標準局負工消費合作社印製 409058 A7 B7 、發明説明（32) 表3 被檢化合物 投與 ft (ig/kg) 抑制率（％ ) B藥化合物本體 60 77 20 59 實施例8之化合物 10 1 5 85 5 " 76 實腌例9之化合物 5 " 98 2 . 5 1 > 87 1)»藥化合物換算最 奮_俐1 3 雄甲某MS?鑲名箝合成 將葡聚糖T5 00(10g,法瑪西亞公司製造，分子最500K )溶解於0.1M乙酸鍰衢液（pH值5.5, ΙΟΟΟπΙ)後加人高碘酸 納（33s)之水溶液（lOOOnl)。邊遮光邊於攪拌10天後加 入乙二»(7.Οβί),攪拌一晩。反應液用8M氳氣化納水溶 液將Η值調整至7 . 5 ,加入®氫化納（1 4 g )溶解後在室溫下 攪伴一晩。反應硖冰冷之，用乙酸調整pH值至5_5,在 攪拌1小時後用8 Η氫《化納水溶液將ο Η值調整至7 . 5 ,得到 溶液1。另外.將葡聚糖T500(10g,法瑱西亞公司製造， 分子量500K)依照上述之方法搡作，得到溶液2。更將葡聚 _T250(各10g,法W西亞公司製造，分子量250K)依照上 i ^^^1 s———· t m n^i ^1.^1 K-1 -5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙悵尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X21)7公釐） 34 389 5 4 409058 A7 B7 五、發明説明（33) 述之方法操作，得到溶液3及溶液4。將溶液1〜溶液4併在 一起，用Bio-aax-50鼷，經由超濾法除去低分子部分。將 高分子部分凍结乾煉，得到葡聚糖多元酵（25s>。此物霣 之分子最（凝謬遇»、支鐽濺粉檷準）為163K。 此葡聚糖多元酵（1U)加入將氫氧化納（46.2g)用水（ 330·1)溶解所得到之水溶液，在室溫下溶解。此溶解在冰 冷下加入單氣乙酸（66g)溶解後在室溫下反應一晩。將此 反應液用乙酸親整pH值為9後用Bio-iajt-30膜經由超滹法 脫鹽。將未通通膜之殘留溶液凍结乾譟，得到羧甲基葡聚 糖多元酵之納M(13g)。此物霣之分子Μ (凝膝璏濾、支鏈 澱粉欏準）為228Κ、羧甲基化度為0.4。 將此羧甲基葡聚糖多元酵之納鹽（600mg)溶解於水中， 吸附在Bio-Rad AG50W-X2(200-400網目、『型）管柱（直徑 4 4)«1、長2 1 0 )上，用水溶出。此溶出液加入三乙胺（ 0.93ml)後凍结乾嫌，得到標記化合物（69〇Bg)。 奮旃俐1 4 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 m tl^i — , —^ϋ nfllv ^^^^1 i^n^i 1J , «3. ,vs (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ?'-N-iG1v-fily-Ph«>-Glv)-HH-A(A-NHg = DX-895nH Λ 7, Si Μ ^合成 將由實腌例1得到之3’-H-(Boc-Gly-G丨y-G〖y-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)(79w)溶於三戴乙酸（3βΠ， 放置1小時。除去溶劑，用甲酵（30·1)共沸2次後再用乙酵 (30β1)共沸2次後殘渣用乙醚洗淨，得到禰記化合（80ng) Ό 1H-NMR(DHS0-d6)a：8.53(d,lH,J = 8.3Hz) . 8,4Q-8.48(a, 本紙張尺度適用中國國家標孳（CNS ) Λ4規格（210 X2W公t ) 35 38954 409058 A7 B7 五、發明説明（34) 2H), 8 . 28 (d , 1R,J = 8.3Hz) , 7 . 95 - 8.07 (br,3 Η ) , 7.81(d, 1H , J = 10 . 2Hz) , 7 . 30 -7.37 ( , 2H) , 7 . 1 5 - 7.30(i,5H), 6.50 -6.5 5 (br,1H) , 5.50 - 5.57 ( , 1 H) , 5.41(d,2H,J = 7.82Hz), 5.25(s,2H), 4.55 - 4.6 2 (i, 1 H) , 3.55 -3.92 (b, 6H), 3.15-3.25(br,2H) , 2.98 - 3 . 03 ( , 1 H) , 2.73 -2.8 2 ( a.lH), 2.40(s,3H), 2.0 5 - 2 . 25 ( , 1 H) , 1.84 - 1 . 92 ( , 2H ),0.88(t,3H,J=7.35Hz) 竇淪俐1 ϋ 撖田某葡聚 S Q 5 1 )夕会成 將由實施例13得到之羧甲基葡聚糖多元酵之納Μ (400 mg)變換為三乙銨鹽（470ng),溶解於Η,Ν-二甲基甲醯胺（ 30al)。此溶液依次加入實施例14所得到之3’-N-(Gly-Gly -Phe-Gly)-NH-A(A-HH2=DX-8951)之三 » 乙酸播（62ms)之 經濟部t央橾隼局貝工消費合作杜印敦 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) N, H-二甲基甲醢胺（5·1)溶液、三乙胺（0·02β1)及卜乙氧 羰基-2-乙氧基-1,2 -二羥基啉（470ag),遮光下在室溫 邊攪拌邊反應一晩。在各1〇»1之乙酵中滴下此反應液各 5nl,此混合物中加人3M氯化纳水溶液（2.5al)、乙醚（ 20·1),析出之沈《用适心分*收集。將此沈澱物溶解於 O. 5Μ«化納水溶液，在冰冷下用0.1Η«氧化納水溶液調整 pH值為9後用透析膜（光譜孔1、切斷分子量6,000〜8,000) 對純水透析。透析内液用微孔* _(〇.22μ«)ϋ濾後凍结乾 煉，得到_記化合物（600·κ>。此化合物溶解於0.1Μ之«

化纳水溶液後，用GPC(管柱：東塑股份有限公司製埴TSK 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS )人4见格（210Χ 297公釐) 36 38954 附件五 經濟部智葸財產局員工消費合作社印製 ,40^,058 五、發明説明（35) 1 月 Gel PW-4000)(L、溶劑：0_1M NaCl、流速 Uml/min)分析 之结果及此化合物之紫外線吸收光譜（0.1M三羥甲基胺基 甲烷鑀衝液，pH9.0,0.1mg/ial)分別如第6圖及第7圖所示 。此化合物之翳藥化合物殘基之含量以在0.1M三羥甲基胺 基甲烷緩衝液（PH9.0)中之根據於362hid之吸光度定量時為 5.8¾ (W/V) 〇 酋倫例1 fi3,-N-fGlY-GlY-Gly-Phft)-NH-AfA-KH9=DX-8flfi1)^ Μ 7. ^ 將由實施例 2得到之 3'-H-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)_ HH-A(A-HH2=DX-8951)(79ms)溶於三氟乙酸（3ml),放置 1 小時。除去溶劑，用甲醇（30ml),放置1小時。除去溶劑， 用甲醇（30ml)共沸2次後再用乙醇（30ml)共沸2次後，殘渣 用乙醚洗淨，得到標記化合物（8 〇BS)。 1H-NMR(DHS0-d6)5：8.62-8.66(mt2H), 8.23(d,lH,J=8.3 Hz), 8.18-8.20(111,1«), 7 . 9 8 - 8 . 1 0 ( b r , 2 Η ) , 7.79(d,lH, J = 10.7Hz), 7.32(s,lH), 7 . 09 ( d,2H , J = 7 . 3H2 ) , 6.93-7.03(m,4H), 6.5 0 - 6.6 0 ( br , 1 H) , 5.5 2 - 5 . 5 5 ( m , 1 H) » 5.44(s,2H), 5. 18 (d, 1H , J = 18 , 5Hz) , 4.80 ( d , 1 H , J = 1 8.5 Hz), 4. 57 - 4. 5 9 (m, 1H) , 3 . 57 - 3 . 7 1 ( m , 6H ) , 3 . 1 5 - 3 . 25 ( m ,2H), 3.0 0 -3. 0 2 (m, 1H) , 2 . 80 - 2 . 9 0 (i , 1 H) , 2.50(s,3H) ,2.0 5 - 2.25 (m, 1H) , 1 . 8 6 - 2 . 0 0 ( m , 2H ) , 0.88(t,3H,J = 7.35Hz) 啻搁例1 7 毯_甲-..基葡聚糖多兀酵-Glv-Glv-G 丨 v-Phf!-NH“A' (Α-ΝΗ2 = ί)Χ- 補龙 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2IOX 297公釐） 37 (修正頁）38954 409058 A7 B7 五、發明説明（3δ) 8 9 51夕合成 將由實施例13得之羧甲基葡聚糖多元酵之納鹽（1. Os)變換為三乙铵鹽（1.2g),用Ν,Ν-二甲基甲随胺（90·1) 溶解。此溶液依次次加入實施例16所得之3’-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-HH2=DX-8951)之三集乙酸 « (158祖g)之 H,N-二甲基甲醞胺（15·1)溶液、三乙胺（0.05ml)及1-乙氣 祭基-2 -乙氣基-1 , 2 -二羥基睹啉（1 2 g ),遮光下在室溫邊 拌邊反應一晩。在各10·1之乙酵中滴下此反應液各5ml, 此混合物中加人3M氯化納水溶液（2.5·1)、乙醚（20·1), 析出之沈澱用®心分離收集。將此沈澱物溶解於0.5 Η氯化 納水溶液，在冰冷下用0.1Μ氫氣化納水溶液調整pH值為9 後用透析膜（光_孔1、切斷分子鼉6,000〜8,000)對純水 透析。逋析内液用微孔濾膜（〇.22μ·)通濾後凍结乾煉，得 到檷記化合物（1.4g)。此化合物之》藥化合物殘基之含量 以在0.1M三羥甲基胺基甲烷媛衡液（PH9.0)中根據於362na 之吸光度定躉時為5.2¾ (W/W)。 奮胨例18 Μ濟部中央梯準局員工消費合作社印製 ^^1. _ - 1 - -I ^^^1 n I , ^^^1 1^11 (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁)

Rnfr-Gly-Phft-I.eu-QH^ 5S 將 H-Gly-Phe-Leu-0H(3.0g)加人 50» 二嘈烷水溶液（ 48 al)中，冰冷之。此溶液中加入含有1N氫氧化納水溶液（ 9.45nl)及（Boc)2〇(2.27g)之二丨？烷（24*1)溶液，携拌一 晩。反應液中加入1HM酸（9.45al),,除去溶劑。所得到 之殘渣用矽膠管柱曆析法（溶出液：二氱甲烷：甲酵=5:1溶 液）精製，得到禰記化合物（2 · 5 s ) 〇 本紙張尺度適/fl中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐) ~ 38 38954 409058 A7 B7 五、發明説明（37)

奮麻俐1 Q

Ron~Glv~Phe~Leu-GlY-Qft7. lj*1 合 Bft 將由實胞例U得到之B〇c-Gly-Phe-Leu-0H(2.4s)及N-羥基琥珀醯亞胺（656ng)溶解於Ν,Κ-二甲基甲醢肢（50«1), 在4t!冷卻後入加Ν,ΪΓ-二環己基碳化二亞胺（1.17g>,攪 拌2小時。此溶液中加人將Η-Gly-OBzl之對甲苯磺酸》( 1.9g)及三乙胺（0.79·1)溶解之Ν,Ν-二甲基甲醢胺（40iU 溶液，在室溫下邊攪拌邊進行反應16小時。此反應液減® 乾嫌後，殘渣用矽膠管柱層析法（溶出液：二氯甲烷：甲酵= 50:1溶液）精製，得到棟記化合物（2.〇g)。 lH-NMR(DMS0-d6)H20-8.30(a,lH) , 8.12(d,lH，J = 8.3 Hz). 7.83(d,1H , J=8.3Hz) , 7.3 2 - 7.3 7 ( a ,5H) , 6.89-6.95(b,1H), 5.12(s,1H), 4.52 - 4.59 ( br , 1 H ) . 4.34(dd, lH,J=7.3Hz,J=15.1Hz), 3.93(dd,lH,J=5.5Hz,J=17.2Hz) ,3.84(dd,1H,J = 17.2Hz) , 3.54(dd,1H,J = 5.9Hz , J = 1 6 . 7 Hz), 3.42(dd,J = 5.9Hz,J = 16 . 7Hz) , 3.00 ( dd, 1 H , J = 4 . 4Hz ,13.7Hz), 2.78(dd,1H,J=8.8Hz,J = 13.2Hz) , 1.50- 1.6 5 ( 經濟部中央橾隼局員工消費合作社印聚 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) a,lH), 1.45(t,2H,J=7.3Ηε), 1.36(s,9H), 0.86(d,3H, J = 6.4Hz) , 0.82(d,3H,J =6 . 4Hz) 奮撫例20

Bofi-Gly-Plie-Leu-GlY-OH之合成 將由資胞例19得到之Boc-Gly-Phe-Leu-OBz丨（1,7s)溶 解於乙酸乙81 (30*1)及甲酵（30«1)之琨合溶液後加入5«

Pd-C(1.5g),進行催化埵原反應。將反應液遇濾，《液減 表紙張尺度通用中國國家標準（CNS > A4规格< 2IOX297公釐) 39 38954 經濟部中央橾準局負工消費合作社印製 a7409058 B7 五、發明説明（38) 懕乾埭，得到禰記化合物（1 . 1 5 g )。 奮MB例21 V-N-flW-r山- Phe-Leu-GW)-HH-AfA-HH2 = nX-89 5 1)之合 ^L_ 將由實施例 20得到之 Boc-Gly-Phe-Uu-Gly-0H(20(Ug )及N-羥基琥珀醯亞胺（58ag)溶解於Ν,Ν-二甲基甲睡胺（5 通1),在冷卻後加入Ν,Ν’-二環己基碳化二亞胺（104Bg> 溶解。此溶液中加人將DX-8951之甲磺酸篇（224bs)及三乙 胺（0.059*1)溶解之Ν,Κ-二甲基甲醢胺（5ml),遮光下在室 溫邊攪拌邊進行反應16小時。反應液減懕乾煉，殘渣用矽 膠管柱層析法（溶出液：含有0.5«乙酸之二氮甲烷：甲酵= 10:1溶液）精製，得到標記化合物（200bs)。 1H-NHR(DMS0-d6)5：8.35(d,lH,J=7.8Hz), 8.08-8.18(b, 2H), 7 . 75-7 85 (a , 2H ) , 7.32(s,lH), 7 . 1 0 ( d , 2H , J = 6.8

Hz), 7 . 08-7 . 1 3 (n , 3H) , 6 . 85 - 6.9 5 ( br , 1 H) , 6.40-6.65 (br.lH), 5 . 52 - 5.5 5 (m.1H) , 5.46(d,1H,J = 18.5Hz), 5 . 37 (d , 1H , J = 18 . 5Hz) , 5.24(s,2H), 4 . 44 - 4 . 5 2 ( a , 1 H), 4. 15-4. 25 (a, 1H) , 3 . 68 - 3.7 2 (m,2H) , 3.40 - 3.52 (i,2H),

3 . 15-3 . 25 (br,2H) , 2 . 8 5 - 2 . 95 ( , 1 H) , 2 . 6 5 - 2 . 75 ( a ,1H )t 2.40(s,3H), 2 . 05 -2 . 2 5 (a , 1H) , 1 . 8 0 - 1 . 9 1 ( id , 2 H ), 1 . 50 - 1 . 6 5 ( , 1H) , 1 . 45 (t , 2H,J = 7.3Hz) , 1.35(s,9H), 0 . 88 (t , 3H,J = 7.4) , 0.86 (d , 3H , J = 6 . 4Hz) , 0.82(d,3H,J = 6.4Hz) 奮胞例22_ 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) A4規格（210_X297公釐） tfO 3 8 9 5 4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装 經濟部中央標隼局負工消費合作社印11 4i)⑽ 58 377 五、發明説明（39) ν-Ν-(01ν-Ρ“-Ι,<?υ-^ν)-ΝΗ-ΑίΑ-ΚΗ? = ηΧ-}^5η三·乙酸 Μ夕合成 將由實施例 21得到之 3_-N-(Boc-Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(97*g)溶解於三氟乙酸（3»1),放置 1小時。除去溶劑，用甲酵（30nl)共沸2次，再用乙酵（ 30b1)共沸2次後殘渣用乙醚洗淨，得到檷記化合物（95ig) IH-NHR(DHS0-d6)3：8.57(d,lH,J=8.3Hz), 8.47(d,lH,J= 8.3Hz), 8 . 32 (d , 1Η , J = 7.8Hz) , 8 . 17 (t , 1 Η , J = 5.5 Ηζ), 7 . 81-7 . 91 (br , 3Η) , 7.79 ( d,1 Η,J = 1 Ο.7 Ηζ) , 7.32(s,lH), 7.21-7.23 (*,5Η) , 7 . 1 2 - 7 . 1 7 ( , 1 Η ) , 6 . 4 5 - 6 . 5 5 (br , 1 Η ) ,5 . 57 (<ϊ , 1Η , J = 4 . 4Ηζ) , 5 . 4 3 ( d , 1 Η . J = 1 6 . 1 Η ζ ) , 5.34(d, 1Η,16.1Ηζ), 5.23(s,2H), 4 . 67 ( dt , 1 Η , J = 4 . Ο Ηζ,J = 9.Ο Ηζ ),4 . 31 (dd . 1 Η , J = 8.5Ηζ, J = 15.0Hz), 4 . Ο~4 . 4 ( br,1 Η). 3_74-3,76U,2H), 3.56(dd，lH,J = 6.0Hz,J = 16.0Hz), 3.41(dd,lH,J=6.0Hz,J=16.0H2), 3.17-3.19(br,2H), 3.02(dd,lH,J=4.0Hz,J=14.0Hz), 2.70(dd,lH,J=10.0Hz, J = 1 4 ‘ Ο Η ζ ) , 2 . 4 Ο ( s · 3 Η ) , 2 ‘ Ο 5 - 2 . 1 5 (暹，1 Η ) , 1 . 8 5 ( d t . 2 Η ,J = 7. ΟΗζ, J = 14. ΟΗζ) , 1 . 50 - 1 .5 5 (π , 1 Η ) , 1.45(t,2H,J = 6.0Hz), 1.35(s,9H), Ο . 88 (t,3 Η , J = 7.4) , 0.85(d,3H,J = 6 . 4Ηζ) , Ο . 80 (d,3Η,J = 6.4Ηζ)

奮倫俐H 播甲某葡 St 耱务元 SI - Glv-Phft-l.<Mι-Glv-NH-A,(A-NH? = f)X- 8 9 51 ) 夕合成 將由寅胞例13得到之羧甲基葡聚糖多元_之三乙按Μ 本紙張尺度適用中國S家梯準（cns )八4規格U!〇x297公釐） Π 3 8 9 5 4 ^ϋ· - -- - - -i— i m i · - - - - - - ^^^1 mi nn -a (請先w讀背面之注意事項再填寫本I ) 經濟部中央標华局員工消費合作社印製 409058 _B7 _ 五、發明説明（4<)) (690eg)溶解於H,H-二甲基甲醢胺（50ml)。此溶液依次加 入由實施例 22得到之 3、MGb-Phe-Leu-Gly)-HH-A(A-NH2 = DX-8951)之三氟乙酸鹽（95β8：)之Ν,Ν-二甲基甲醢胺（10b1 )溶液、三乙胺（0.03ml)及1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二 羥基哼咐（69〇Bg),在室溫邊攪拌邊進行反應一晩。在各 10*1之乙醉中滴下此反應液各此混合物中加入3M氢 化納水溶液（2.5*1)、乙醚（20«1),析出之沈濺用适心分 離收集。將此沈澱物溶解於0.5»(食_水溶液，在冰冷下用 0.1M氬氧化納水溶液諝整pH值為9後用透析膜（光譜孔1、 切斷分子量6,000〜8,000)對純水透析。透析内液用微孔 濾膜（0.22μΐϋ)過漶後將濾液凍结乾煉，得到檷記化合物（ 600ns)。此化合物之Β藥化合物殘基之含最>乂在0.1卩三羥 甲基胺基甲烷级衝液（PH9.0)中根據於362nn之吸光度定* 時為 4 ‘ 8 % (W/W)。 g _ 例 24 撖g某葡聚纗名元曲夕三7,1$薷夕合成 將«聚糖T 5 0 0 ( 5 0 s,法瑪西亞公司製造，分子量500 K )溶解於0.1M乙酸級衡液（pH值5.5, 5000m丨）後加人高碘酸 納（165.0s)之水溶液（5000nl)。逢遮光邊於4亡授拌10天 後加人乙二酵（35.0·1),攪拌一晩。反應液用8»1氫氧化納 水溶液將pH值調整至7.5,加入硼氫化納（70s)溶解後攪伴 —晩。反應液冰冷之，用乙酸調整pH值至5.5,在4C攪拌 1小時後用8H氫氧化钠水溶液將pH值調整至7.5。所得到之 水溶液用BU-Bax-50»娌由超濾法除去低分子部分，將高 ~I ] 訂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） 42 3 8 9 5 4 經濟部中央標隼局負工消費合作社印策 409058 A7 __B7 _ 五、發明説明（41 ) 分子部分凍结乾缲，得到蔔聚糖多元醉（27.lg)。此物質 之分子量（聚01»濾、支鍵澱粉擁準）為140K。 此精製之葡聚糖多元醇（5 s)加入將氫《化納（2U)用 水（150·1)溶解所得到之水溶液中，在室湛下溶解。此溶 液在冰冷下加入軍氣乙酸（30s>溶解後在室ffi下反應一晚 。將此反應液用乙醸_整pH值為8後用Bio-iax-50膜經由 超濾法脫》。將未通遢錤之殘留溶液凍結乾燁，得到羧甲 基葡聚糖多元酵之納鹽（5.6g)。此物質之分子量（凝膠過 «、支鐽教粉檷準）為263K、羧甲基化度為0.4。 將此羧甲基葡聚轆聚乙酵之納鹽（2.0g)用水溶解，吸 附在 Bio-Rad AG 50W-X2(200-400網目、H +型）管柱（直徑 44··、長210··),用水溶出。此溶出液中加人三乙胺（ 4il)後凍结乾燥，得到檷記化合物（2,2g)。 撖申某««鑣多元麵^三甲》鼸^会成 將由實施例24得到之羧甲基葡聚耱多元醇之納！Μ (1.0 8>用水溶解，將此水溶液吸附在Bio-Rad AG 50V-X2 ( 2 00 -400網目、Me 3KH +型）柱賵，用水溶出。將此溶出液》结乾 嫌，得到禰記化合物< 950*g)。 奮Mi例26 合成 依照實胞例14相間之方法，將由3、H-(B〇c-G丨y-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-HH2 = DX-895U(400_g)得到之 3'-H-(Gly ml »^1— 1 - - I ^^^1 I ^^^1 I In ^^^1 \ , 洚 i (請先閱讀背面之注意事項再填疼本頁) 本紙浪尺度通用中國國家標準（CNS > A4現格（210X2<)?公釐） 43 3 8 9 5 4 409058 A7 ^_______B7 五、發明説明（42 ) ''Gly-Phe-Gly)HA 三鎮乙酸鼸用水-ΜβΟΗ(1:4)» 解，將 此水溶液吸附在AG hXSUOOMOO網目、C1型）管 (請先閲讀背面之注項再填寫本i ) 柱（1.5e_x8.6c·),用上述漕繭格出。膊此糂出液濃鑲後 凍结乾燥，得到標£化合嫌（31〇»g)。 1H-HMR(DMS0-d6)558.53(d,lH,J = 8.5Hz) , 8.46-8.48(a, 1H), 8.37 - 8.39 (,1H), 7.95Cd, 1H,J = 8 . 0Hz) , 7.80(s, 3H), 7. 78 (d, 1H, J*ll . 1Hz) , 7.34(s,lH), 7.14-7.24(·, SH), 6.50(s,1H), 5 . 56-5.60 (, 1 fl) , 5 . 35 - 5.40 (,2H), ®*24(s*2H)« 4.51~4.56(·,1Η), 3.86(dd*J=4.8»13.5Hzt 1H). 3.68-3.79 (·,3Η) , 3.54(s,2H), 3 . 1 5 - 3.22 ( , 2H), 3.01(dd,J=5.8，13.5Hz,lH)· 2.78(dd,J=9.6,3.5Hz,lH)· 2.41(a,3H), 2.12-2.23(·,2H) , 1.81 - 1 . 89 ( , 2H) , 0.88 (t.3H,J=7.2Hz) M a s s (f A B ; / e 7 5 3 ( M + 1) 富 _ ffl 27 路田蠤 《 » 鑣 j&^M-GlY-G1v-Ph〇-Glv-HH-A'fA-HH2=DX-88S1 ) ^会成 經濟部中央棣準局貝工消f合作杜印製 將由實豳例25得到之羧甲基葡聚辘多元酵之三甲妓Μ (O.lg)用Η,Ν-二甲基甲釀胺（β·1)溶解。ft溶液依次加人 由實施例 26得到之 3，-H-(Gly-Gly-Phe-Gly)**HH-A(A-NH2 = DX-8951)之醱酸_ (2“g)之H，N-二甲基甲釀胺（1〇·1)溶液 、三乙胺（5μ1)及卜乙氣嫌基-2-乙氣基-1,2-二雉基時啉（ 0 . U),在室ifl邊攪拌邊進行反應一晩。在各1 〇 丨之乙酵 中_下此反應液各5·丨，此捆合物中加人3M氛化納水灌液（ 本紙張尺度適用令國國家標準（CNS) A4规格（2】0x297公釐） 44 3895 4 經濟部中央樣隼局貝工消費合作社印製 a? 409058 B7 五、發明説明（43厂V .， 2.5·1)、乙ϋ(20·1>·析出之沈澱用躔心分）i(35〇arp·, 8分鐘）收集》將此沈澱W溶解於0.5H食鹽水漕液，在冰冷 下用0.1 Η氮氣化纳水溶液調整pH值為9。所得到之水溶液 用BU-Max-30_經由超濾法瞬fit 〇未通«麟之殘留瘠液用 微孔籌_(0.22μ·)壜癉後凛踣乾嫌，得到禰記化合術（90 β>。此化合物之β»化合物殘基之含量Μ在0.1Η三羥甲 基胺基甲堍緩衡液（ΡΗ9.0)中根鐮於362η·之吸光度定ft時 為 1 1 (V/ϊ) 〇 - 奮 _ W 2« 3» m at « U m Λ ΐτ a -filv-filv-Phe-Glv-NH-A'U-HHa^DX-Rfl R 1 ) 会成 將由實豳例25得鲷之羧甲基葡聚耱多元酵之三甲妓鼸 (0.1s)用Η,Ν-二甲基甲醢胺（6·1)溶解。此溶液依次加入 由實施例 26 得到之 S'-H-Uly-Gly-Phe-GlyJ-HH-AU-Nh。 DX-895U之Η酸SI (36ig)之Η,Ν-二甲基甲釀胺（10屋1)溶液 、三乙胺（8μ1)及卜乙氣蒙基-2-乙氧基-1,2-二羥基時啉（ O.lg),在室溫邊攢拌邊進行反應一晩。在各10*1之乙酵 中滴下此反應液各5·1,此琨合物中加入3HH化納水溶液（ 2.5·1)、乙醚（20·1),析出之沈IS用β心分_(3500γρ·, 8分鑪）收集。眯此沈濛嫌瘠解於0.5Μ食鹽水痗液，在冰冷 下用0.1Μ*[氧化納水溶液Μ整pH值為12。所得到之水溶液 用Bio-iaX-30_fi由超濾法脫Η。来通過It之殘留溶液用 微孔澹Κ(0.22μ·>通濾後涞结乾埭，得到禰記化合物（ 80«g)。此化合物》解於0.1H之氣化《水溶液後，用GPC( *ί·,ί ^^^1 nn 1^1 ^^^1 . —^ϋ 1 —^ϋ ^—^1 {t^τ^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 45 389 5 4 經濟部中央樣準局貝工渭费合作社印製 40905¾7 --- —~~~~ 五、發明説明（44) w 管柱：柬塱股份有pi公司製進TSK，Gel p卜4000XL、祺劑： 0.1M HaCl、液*«0.8·1/·1η)分析之路果及此化合％之紫 外嬢败收光譜（0.1Μ三瘅甲基胺基甲煉®衡液· ρη9.0，38 μβ/·1)分別如第8_及第9·所示。此化合坩之醫藥化合_ 殘基之含量以在0.1 Μ三理甲基睽基甲搞**街液（ΡΗ9.0)中 之根據於362η·之吸光度定量時為15* (W/W)。 W Μκ 镧 29 箝田蠤 Μ8Ι 瘺名？^_-ίϋϊ·(Π 2L:.G ly-Phe-HH-A’（A-HH? R g Fm夕合成 將葡聚_T250 (20e, EXTRASYiiTHESE公司製造•平均 分子量2501〇溶解於0.1**乙酸缓衝液（口11值5.5，2,000纖1) 後加入离碘酸》(βδ·0β)之水溶液（2〇〇〇*丨）。邊邃光邊於 4 Ό攪拌1 〇天後加入乙二酵（1 4 . 0 β丨），攢拌—晚。反應液 在冰冷下用8Μ氫氧化«水瀋液將pH值謓整至7.5·加入钃 氬化》(28g)溶解後在室灌下攪拌—晩。反應液冰冷之， 用乙酸讕KpH值至5.5·在41C «拌1小時後在冰冷下用 氫氧化納水溶液將pH值調整至7.5»所得到之水溶液用 Bio-ias-30Rtl由超濾法除去低分子部分，得到未蠊4M 之殘留溶液1〇另外，將葡聚糖T250 (50g, EXTRASYHTHESE 公司製迪，平均分子量250K)溶解於0.1M之乙酸«銜液（ PH值5.5, 5000*1)後加人高碘酸納（165s)之水溶液（ 5000·1)。邊邃光邊於41C檯拌10天後加人乙二B (35.0_1) ，攪拌一晩β反應液在冰冷下用8Μ氬氣化納水»液将4值 調整至7.5,加入钃氩化納（70g)漕解後在室灌下攪伴一晩 I tel ^^^1 m I 1^1 ^^^1 ^^—4 n^i f請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 46 38954 經濟部中央標準局買工消费合作社印焚 4090^ __B7_ _ 五、發明説明（45 ) 〜 。反應液冰冷之，用乙酸_整1> Η值至5 . 5 ,在4 1C攪袢1小 時後在冰冷下用8 Μ氬氧化納水溶液將pH值讕螫至7.5。所 得到之水溶液用BUiax-30膜，經由超濾法除去低分子部 分，得到未通邊膜之殘留溶液2。將殘留溶液1及殘留溶液 2加在一起，埋由皤濂法將通過Bio-iax膜-50K之部分用

Bio-iax-30膜除去低分子部分，凍结乾嫌後得到葡聚糖多 元醇（25.7β)。此物I{之分子曇（凝膠逢濾、支鏈爨粉禰準 )為 47Κ 〇 此葡聚糖多元酵（5g)加入將氫«化納（35g)用水（150 屬1>溶解所得到之水溶液中，在室溫下溶解。此溶液在冰 冷下加入翬氯乙酸（5 溶解後在室溫下反應18小時。將 此反應液用乙駿調整P Η值為8後用B i 〇 - a X - 5 0 _ , IS由超 濾法脫《。將未通遢_之殘留溶液凍结乾燥，得到羧甲基 葡聚糖多元酵之納»(7.2g)。灶物質之分子量（霣謬過濾 、支鐽》粉攤準）為127K、羧甲基化度為0,8。將此羧甲基 葡聚耱多元酵之納Η (2.2g)用水箱解，吸附在Bio-Red AG 50^X2(200-400« 目、H +型）管柱（1»44*β,長 210··)上 ，用水溶出。此溶出液中加入三乙胺（4·1)後*结乾燥， 得到羧甲基葡聚*多元酵之三乙銨鹽（2.69g)。 將此羧甲基«聚耱多元酵之三乙按鹽（2.67s)溶解於 Ν,Ν-二甲基甲麵胺（200·1)中。此溶液依次加入將依照實 施例2同樣之方法所合成之3’-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-AU-HH2 = DX-8951)(350ig)ft由與實豳例16間樣之方法 脫Boc化所得到之3'-N-(Gly-Gly-G丨y-Phe)-NH-A之三類乙 n^i 1- ^^^1 I - - - - ml U3, i (請先M讀背面之注意事項再填将本頁) 本紙浪尺度通用中國國家標準·（ CNS > A4規格（210Χ297公釐} 47 3 8 9 5 4 經濟部中央棟嗥局員工消費合作社印货 409058 A7 _B7 五、發明説明（46) , 酸«及三乙胺（0.116·1)溶於Ν,Ν-二甲基甲醯胺（10·1)所 得到之溶液、卜乙氧嫌基-2-乙氧*-1,2-二羥基咔啉（ 2.67g)溶於Ν,Ν -甲基甲醮胺（10·1)所得到之溶液t在室溫 邊攢拌邊進行反應一晩。此反應液中加入3H«化納水溶液 (1001丨），在各30·1之乙酵中滴下此反應液各8·1。分別各 加入3Η氯化納水溶液（1·1>、乙醚（5·1),析出之沈教用遠 心分離（3 5 00γρ·, &分鐘）收集。勝此沈教物用丙明洙淨後 用水溶解，加入3Η氣化Μ水溶液（10·1)後用0.1Η氫飆化納 水溶液調整pH值為9,在37t處理1小時。此«理液用Bio- ax-10膜，經由超濾法脫驪。未通過麟之殘留溶液用微孔 濾膜（0.22μι)逢濉後减结乾燥，得到_記化合物（2.30g) 。此化合物溶解於0.1 Μ氯化納水溶液後，用GPC(管柱：東 塱股份有限公司製造TSK Gel PW-4000XL、箝劑：0.1Ν

HaCl、流速：0.8·1/·ίη)分析之结果及此化合物之紫外媒 吸收光繒（0.1Η三羥甲基胺基甲烷缓瘡液，pH9.0, 0.20ig /υ分別如第1〇_及第111(所示。此化合物之BSI化合物 殘基之含最以在0.1M三翔甲基胺基甲烷鑀衢液（PH9.0)中 之根據於362η*之吸光度定量時為5.8« (V/V)。 實施置 3»田甚名元8>夕三^19薷，合成

在«聚糖T10(20g,法瑪西亞公司斛埴，平均分子量 101O之0.1M乙酸«衝液（pH值5.5)溶液（2000«1)加人离捵 酸納（66.0g)之水溶液（2000·1>。邊遮光邊於攪拌10天 後加入乙二_ (14.0·1),攪拌一晩。反應液在冰冷下用8M ^ϋ. ·1 -- I I ml . Ha HI -- 1 «. 0¾ .¾ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X297公釐） 48 38954 409058 A7 B7 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 五、發明説明 ( 47 ) | 氩 諷 化 納 水 溶 液 將 pH值調 整 至7. 5 〇 加入鼷氳化納（28(0溶 1 解 後 在 莖 潘 下 攪 拌 一 晚。 反 應液 冰 冷 之 ，用 乙酸調整pH值 1 至 5 . 5 , 在4 t: 攪 拌 1小時後在冰冷下用8M氳氧化《水溶液 1 請 1 將 pH 值 調 整 至 7 · 5 〇 所得到之水溶液用B i〇-aax-5_ (迷你 先 閱 1 I 波 爾 公 司 製 造 >烴由超*法除去低分子部分， 將未通治_ 讀 背 面 1 1 I 之 殘 留 溶 液 通 Β 1 0 - ί a X - 30 膜。 所 得 到 之通 通液凍结乾燥 之 注 意 1 1 Γ » 得 到 葡 聚 耱 多 元 m (8.0 g ) 。此 物 質 之 分子 量（期膠逢濾 事 項 I I 再 1 > 支 鍵 典 粉 禰 準 )為13卜 填 寫 本 装 I 此 葡 聚 糖 多 元 酵 (3.7 8) 加入 將 氬 氧 化納 (25.9g)用水（ 頁 1 1 11 1 a 1 ) 溶 解 所 得 到 之 水溶 液 中， 在 室 溢 下溶 解。此溶液在 1 | 冰 冷 下 加 入 單 氱 乙 酸 (37g )溶解後在室溢下反» 20小時。 1 1 將 此 反 應 液 用 乙 酸 調 pH 值 為8後用B i 〇 -ax -5膜，經由超 1 訂 I m 法 脱 釀 0 將 未 通 邊 贓之 殘 留溶 液 凍 结 乾嫌 ,得到羧甲基 1 1 1 m 聚 糖 多 元 酵 之 納 馥 (6 . 2 g ) 。此 物 η 之 分子 量（凝鏐治濾 1 1 、 支 m η 粉 檷 準 )為 37Κ ' 羧 甲基 化 度 為 0 . 9 < 1 1 m 此 羧 甲 基 葡 糖 多元 酵 之納 (6 .0 g )用 水溶解，吸附 1’ 在 B ί 0 Ra d AG 50W -X2 (20 0 - 400網目、 Η 管柱，用水溶 1 I 出 0 此 溶 出 液 中 加 人 三乙 胺 (9.3·1)後廉结乾埭，得到檷 1 I 記 化 合 物 (7·2β) 〇 1 1 I V 辋 例 31 1 1 SL 甲 華 葡 聚 多 7TL m 之= A 耗Μ 合 成 t I 在 實 m 例 30所 得 到之 葡 聚糖 多 元 酵 (3.9 g)加入將《 1 1 1 氧 化 Μ (16 . 3g )用水（ 117· 1) 溶解 所 得 到 之水 溶液，在室通 1 1 下 溶 解 0 此 溶 液 在 冰 冷下 加 入單 氣 乙 酸 (23 . 4g)溶解後在 i t 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格Π〖0Χ 297公釐} 4 9 3 8 9 5 4 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印策 409058a7 __B7 _ 五、發明説明（48 ) 室灌下反應18小畤。將此反靡液用乙酸謂S pH8後用Bio- ax-5膜，經由超瀘法脫》。膊未竈嬝ϋ之殘留溶液凍蛣 乾嫌，得到羧甲基葡聚耱多元酵之Μ鱷（5.〇g)。此物質之 分子量（凝鏐逢濾、支鐽》粉欏準）為28K、羧甲基化度為 0.5»此羧甲基葡聚糖多元酵之納鹽（4.8g)依照實施例30 相闻之方法變換為三乙»鼸，得到檷記化合物（5.8g)。 »牖供3?. 撖田某葡8t鱅名元酿^三7,»薷：?>会成 在葡聚糖4(20g,福那可斯公司製造，平均分子最4K-610之0.1M乙酸緩銜液（pH值5.5)溶液（2000al)中加入高碘 酸納（66.0g>之水溶液（2000·〗）。邊遮光邊於4t攪伴10天 後加入乙二酵（14.0 ·1),攪拌一晩。反應液在冰冷下用8H 氫氧化納水溶液將pH值調整至7.5。加入钃氫化納（28g)溶 解後在室溫下攪拌一晚。反應液冰冷之，用乙酸調®ρΗ值 至5.5,在攪拌1小時後在冰冷下用8Μ氫氧化》水溶液 將？11值調整至7.5。所得到之水溶液用&丨〇-«183(-3_(迷你 波爾公司製造）經由超濾法除去低分子部分。將所得到之 通«液凍结乾煉，得到葡聚糖多元酵（6.0g)。此物»之分 子量（葙謬壜濾、支鐽箱粉機準）為9Κ。此葡聚糖多元酵（ 2.7g)加人將氬氧化納U8.9g)用水（81·1)溶解所得到之水 溶液中，在室溫下溶解。此溶液在冰冷下加入單氯乙酸（ 27s)溶解後在室灌下反應20小時。將此反應液用乙酸綢整 pH值為8後用Bio-iax-5鎮，ft由超濾法脫_。將未通過K 之殘留溶液》结乾燥，得到羧甲基葡聚糖多元酵之納》( ^ϋ- *ul - II —^ϋ 1^1^1 .^1^1 t —^^1· tut— I - J— 一aj (請先閲讀背面之注意事項再填寫本K ) 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4現格（210X297公釐） 50 3895 4 409058 A7 _B7_ 五、發明説明（49) 4.2g)。此物質之分子量（凝霣壜灞、支鐽3R粉檷準）為20K 、羧甲基化度為0.9。 將此羧甲基葡聚糖多元酵之纳鑒（4.0g)依照實腌例30 相同之方法變換為三乙銨蘧，得到擁K化合物（4. 8g)。 奮嫌俐33 維申某会成 在實施例32所得到之葡聚轆多元酵（2.7g)加入將«氧 化納（U.3g)用水（81_1)溶解所得到之水溶液、在室a下 溶解。此溶液在冰冷下加入單«乙釀（16.2g)溶解後在室溫 下反應18小時。將此反應液用乙酸調整pH值為8後用Bio- ax-5膜，經由超濾法脫鹽。將未通過_之殘留溶液凍结 乾堍，得到羧甲基葡聚糖多元醉之納《(2. 7g)。此物霣之 分子1 (凝隳過濾、支鐽教粉標準）為16K、羧甲基化度為 0.5。此羧甲基葡聚耱多元酵之納 (2.7g)依照實腌例30 相同之方法變換為三乙銨M,得到禰記化合物（3.lg)。 奮_俐 經濟部中央橾隼局員工消費合作社印製 ^^^1 rn 1^1^1 ^^^1 ί I ml -_- «3. JJ. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 捸田某 « 轚籲务元 M -GIv-GIv-Phft-Glv-KH-A’fA-HH^nX- aaim 夕 合 成 將由實«8例30得到之羧甲基葡聚耱多元酵之三乙 (1.5s)用Ν,Η-二甲基甲醢肢（90·1)溶解。此溶液依次加入 三乙胺（0·07·1)及 3’-N-(Gly-Gly-Phe-GU)-NH-A(A-NH2 = DX-8951)之三氟乙酸鹽（210*8)之Η,Κ-二甲基甲釀胺（40·1 )溶液、1-乙氧鑛基-2-乙氣基-1,2-二羥基〇1啉（1.5g>, 在室溫邊攪伴邊進行反應一晚。在各10·丨之乙酵中滴下此 本紙張尺度通用中國國家榡準{ CNS ) A4規格（2丨0X 297公釐) 51 38954 經濟部中央榡準局貝工消费合作社印裝 409058 A7 __B7 _ 五、發明説明（5<>) " 反應液各5·1。分別各加入3MK化Μ水格液（2.5·1)、乙it (20·1),析出之沈濺用想心分難（3500γρ·, 8分鐘）‘收集。 將此沈》物溶解於0.5Μ食鹽水薄液，在冰冷下用0.1Μ氳氧 化納水瘠液調整pH值為9。所得到之水溶癘用Bio-·βχ-3賴 ，經由超濾法脫鹽。未通邊膜之殘留溶液用微孔濾1( 0.22μ·)»濾後凍结乾燥，得到禰記化合物（1.3g)。此化 合物溶解於0.1H之氱化Μ水溶液後，用GPC(管柱：東醴股 份有》公司製造 TSK Gel PV-4000XL、溶 Βί:0.1Μ HaC 卜 流β:0.8·1/·ίΓ〇分析之结果及此化合»之紫外線吸收光 譖（0.1Μ三羥甲基胺基甲烷嫒衝液，ΡΗ9.0, 65μ8/·1)分別 如第12·及第13匾所示。此化合物之Β蕖化合物殘基之含 量以在0.1Μ三羥甲基胺基甲烷鍰衡液<ρΗ9.0)中之根據於 3 6 2 η 之吸光度定最時為6 · 4 * ( V / V )。 奮掄俐3 5 投田某葡孩 _ 名 B -GW-GIv-Phe-Glv-NH-A1 8951ΐ夕会成 將由實豳例31得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三乙妓H (1.2s)用H,Η-二甲基甲醯胺（90«1)溶解。此溶液依次加人 三乙胺（0.056丨1>及 3’-N-(GIy-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-HH2 = DX-8951)之三氟乙酸M (168_g)之Η,Κ-二甲基甲釀胺（30·1 )溶液、1-乙氧羰基~2-乙氣基-1,2-二羥基咔啭（1.2g), 在室湛邊攪拌邊進行反應一晚。在各10·丨之乙醇中滴下此 反應液各5·1,分別各加入3M氣化納水溶液（2·5·1)、乙_ (20·丨），析出之沈»用38心分離（3500γ·ρ·, 8分鐘）收集。 ---^^^1 - _ - m ^^^1 I : ^^^1 (請先閣讀背面之注意事項再填离本s ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS>A4規格（ 210X 297公t) 52 3 8 9 5 4 ®濟部中央標準局貝工消費合作社印製 409058 A7 B7 五、發明説明（51) 「 Ί 將此沈《物溶解於〇_ 5 Μ食鹽水溶液，在冰冷下用0.1M氬氧 化納水溶液调整pH值為9。所得到之水溶液用Bio-iax-3膜 ，經由超濾法脫》。未通過膜之殘溶液用微孔濾臢（0.22 濾後凍结乾嫌，得到標紀化合物（l.Og)»此化合物 之醫蕖化合物殘基之含量K在0.1H三羥甲基胺基甲烷級衝 液（PH9.0);中根據於362η·之吸光度定董時為4.8« (V/V) Ο 奮嫌俐3fi m m at m a m % ^ m -Giv-Giv-Phft-Giy-wH-A'fA-KHg^ny- a g ;m夕会成 將由實施例32得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三乙銨鹽 (1.2g)用Ν,Η-二甲基甲醣胺（90·1)溶解。此溶液依次加入 三乙胺（0.056_1)及 3_-N-(Gly-Gly-i>he-Gly)-KH-A(A-NH2 = DX-8951)之三氟乙酸鹽（168·β)之Ν,Ν-二甲基甲釅胺（30 al)溶液、：！-乙氣羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基時啉（1.2g), 在室温邊攪拌邊進行反應一晩。在各10·1之乙酵中滴下此 反»液各5·1,分別各加入3Η氯化ift水溶液（2.5·1)、乙醚 (20il),析出之沈«用缠心分）β( 3 50〇Γρ·, 8分鏟）收集。 將此沈《物溶解於0.5Η食鹽水溶液.在冰冷下用0.1Μ氫氧 化W水溶液調整pH值為9。所得到之水溶液用Bio-nax-3« ,纆由超濾法脫II。未通«Μ之残留溶液用微孔濾縝（ 0.22μϋ)ϋ濉後凍结乾嫌，得到禰Κ化合物（1.0s)。此化 合物之B «化合相殘基之含在0.1H三羥甲基胺基甲烷 級街液UH9.0〉中根據於362η·之吸光度定量時為(V/ ^^^1- il nn n^i (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210ΧΙΪ97公釐） 53 3 8 9 5 4 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 409058 A7 B7 五、發明説明（52) W) 〇 實豳例37 雄甲某葡供績冬元醵-rJlv-(l)v-Phe-G1v-NH-A, (A-HHa = nX- 89 5 1 )之合成 將由實狍例33得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三乙銨II (1.5g)用Ν,Ν-二甲基甲釀胺（90·1)溶解。此溶液依次加入 三乙胺（0.07·1)及 3’-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-HH2= DX-8951)之三氟乙酸》(210ig)之Ν,Κ-二甲基甲釀胺（40麗1 )溶液、1-乙氧期基-2-乙氣基-1,2-二羥基睹啉（1.5β>， 在室溫邊攪拌邊進行反應一晚。在各10·1之乙酵中滴下此 反應液各5·丨，分別各加入3Μ氯化納水溶液（2.5nl)、乙醚 (20·1),析出之沈教用遣心分鐮（35 00γρ·, 8分鏡）收集。 將此沈澱物洛解於0.5Μ食鹽水溶液，在冰冷下用0.1Μ氬氧 化納水溶液調整pH值為9。所得到之水溶液用Bio-iax-3« ，經由超濾法脫籩。未谶嬝K之殘留溶液用》孔濾_( 0·22μ·)通濾後凍结乾得到檷記化合物（1.38)。此化 合物之Β藥化合物殘基之含量Μ在0.1Μ三羥甲基胺基甲烷 級衝液（ΡΗ9.0)中根據於362η«之吸光度定量時為4.6* U/ V) ° 窨胞俐38

Rnp-GlY-Glv-Phfi-GlY-NH-AfA-HHa=nX-«2a6)^ 会成 將 B〇c-Gly-Gly-Phe-Gly(42Bg)及 N-羥基 «珀醣亞胺（ 12^)溶解於N.N-二甲基甲醢胺（2·1>於冷卻後加入K, Ν’-二環己基碳化二亞胺（22ig)。在此溶液中加入將下述 nf - tut mf 1^1 t >^ilj J -1 - - 一9J (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙张尺度適用十國國家揉準（CNS ) A4規格（2丨0 X 297公釐） 54 389 5 4 經濟部中央樣準局貝工消費合作社印裝 4〇θ〇58Α7 Β7 五、發明説明（53) 構造式所示之化合物[(Is,9s)M-胺基-5-氯-9-乙基-2,3-二氫-9-羥基-1H,12H-苯并[de]哦喃并[3',4’：6,7]吲睬畊 并[l,2-b]〇l 琳-10,13(9Η,Γ5Η) -二酮：DV-8286]之鼸酸鹽（ 50*g)及三乙胺（0.01·1>溶解所成之Η,Ν-二甲基甲鼸胺（ 6ι 1 ):

«光，在室通下邊攪拌邊進行反應16小畤。此反β液減壓 乾煉，殘渣用矽膠管柱曆析法（溶出液：含有0.5¾乙酸之 二氢甲烷：甲醇=10:1溶液）精製，得到欏記化合物（27 w) 〇 iH-NHR (CDCU)3:8. 10-8.20(br , 1H)，7.95-8.05(br,lH), 7.70-7.80(br,2H), 7.50-7.60(br,lH), 7.40-7.50(br, 1H), 7.10-7.25<··5Η), 7.05-7.15(br,lH), 5.8 5- 5.95( br,lH), 5.50-5.60(br,lH), 5.40-5.50(·,1Η), 5.25-5.35(«,1H), 5.05-5. 15 (·,1H) , 4.90 - 5.00 ( , 1 H) , 4.70 -4. 80 (br , 1H) , 4. 1 0 - 4.25 ( br,2H) , 3.60 - 3.9 0 ( ,4H),

3.10-3 . 40 ( , 3H) , 2 . 9 5 -3 . 0 5 (br , 1H) , 2 . 1 5 - 2 . 30 ( br,1H ),1 . 7 5 - 1 .90 (br , 2H) , 1.39(s,9H), 0 . 80 - 1 .00 ( ,3H) 富施M 3 9_ ^1^1- I— In 1^1 ^^^1 I ΆΤ tf — nn In— "i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家橾率（CNS ) A4規格（210X297公釐> 55 3 89 5 4 Α7 Β7 五、發明説明（5 4) 路 g 某 Μ » m % π: 9t -ri1v-G]v-Phfl-Glv-HH-A'(A-HHa^nX~

« 2Sfi ) ^ BR 將由賁施例24得到之羧甲基葡聚糖多元醇之三乙銨《 (175 ig)用Η,Η-二甲基甲醜胺（20·1)溶解。此溶液依次加 人將由實嫌例 38得到之 3'-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-MI|2 = DX-8286(27i8)依照簧施例4相同之方法進行脫 Boc化所得之 3、H-(Gly-Gly-Phe-Gly)-HH-A之三撅乙酸》 (29·β)及三乙胺（9μ1)之Η·Ν-二甲基甲釀胺（5·1)溶液、卜 乙氣羰基-2-乙氣基-1,2-二羥啉（175ag),在室灌邊 攪拌邊進行反應一晩。在各10β丨之乙酵中滴下此反應液各 5·1,此混合物中加人3Μ氯化納水溶液（2.5·1)、乙醚（20 1),析出之沈澱用逭心分離<3500「ρ·, 8分鐘）收集。將 經濟部中央橾隼局貝工消費合作杜印策 (請先w讀背面之注意事項再填寫本頁) 此沈《物溶解於0.5Μ食鹽水溶液，在冰冷下用0.1Μ氳氧化 納水溶液調整pH值為9。所得到之水溶液用Bio-«ax-30膜 經由超濾法脫》。未通遘鼸之殘留溶液用微孔癉IM0.22 μ·)3β濾後凍结乾燥，得到檷記化合物（135ig)。此化合物 箝解於0.1 Μ»化《水溶液後用GPC(管柱：東塑股份有限公 司製造 TSK Gel PV-4000XL、溶劑：0.1H NaCl、流速：0.8 ·1/·ίη)分析之结果及此化合物之紫外鑲吸收光譜（0.1M三 羥甲基胺基甲烷鍰衡液，ΡΗ9.0, 99ms/i1)分別第14_及 第15_所示。此化合物之》藥化合物殘基之含量以在0.1Η 三羥甲基胺基甲烷嫒銜液（ΡΗ9.0)中之根據於362η·之吸光 度定量時為6 . 1 ( V / W )。 奮嫌例40 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 56 389 5 4 經濟部中央樣隼局員工消費合作社印装 409058 g 五、發明説明（55) V-H_iRfir-niv-Glv-Ph<>-r. lY)-MH-AfA-MH2aDW-ft〇ff9)2.^·

I 將 Boc-Gly-Gly-Phe-Gly(163ig> 及 Η-理基 W 拍鼸亞肢 (45ig)溶解於Η,Ν-二甲基甲醻胺（10·1)於冷卻後加入 Ν,Ν_-二瓖己基磧化二亞胺（79·<ϊ)。在此溶液中加人將下 述構造式所示之化合物[(13,93)-1-較基-9-乙基-2,3-二 氢-9 -羥基-1Η,12Η -苯并[de]«嘴并[3’，4*:6,7]蚓睬畊并 [l,2b]nf 啉- l〇-13(9H,15H)-二釅：DV-8089]之對甲苯磺酸 M (170ag)及三乙按（〇·〇54·1)?ίΡ解所成之H，H-二甲基甲 胺UOil)溶液；

«光，在室《下邊攪拌邊道行反應一晩。此反應液滅B乾 嫌，殘灌用矽膠管柱雇析法（溶出液：含有〇·5χ乙酸之二 氛甲烷：甲酵=94:6»液）精製•得到_紀化合物（1〇〇· s)。 lH-HHR(DMS0-de)5：8.51(d,lH,J=8.5Hz), 8-41(t,lH,J= 5.ΘΗζ), 8.29(s,lH), 8.17(d,1 Η,J=8. Ο Ηζ) , 7.90(dd, 1 Η , J = 4 . δ · 5 · 6 Η ζ ) · 7 · 7 9 (t , 1 Η · J = 5 · 6 Η ζ ) , 7 . 5 3 (d · 1 Η , J = 7.2 H ζ )，7 . 3 6 (s , 11Π , 7 . 1 3 - 7 . 2 5 ( , 5 Η ) . 6 . 9 4 - 6 . 9 5 ( , « 1Η), 5.60-5 . 63 , 1Η). 5 . 36 - 5.47 ί·,2 Η) , 5.21-5.30(· 本紙張尺&用中國圃家橾準（0阳）八4说格<21〇><297公釐） --: - - ^^^1 In— —ί n ^^^1 ^^^1 ^^1— I I «^1— 一 J (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 40ϋ058 Β7_ 五、發明説明（56) ,2H), 4.42 -4.47 (,1 Η ) , 3.63 - 3.96 ( , 3 Η ) . 3.51-3.59( ·,3Η), 3.31-3.40(·,1Η) , 3.09 - 3.2 1 ( , 1 Η ) , 3.02(dd, 1H,J:4.8,13.5Ηζ),2.76-2.81(麵，ΙΗ) , 2.13-2.17(·,2Η) ,1.85 - 1.90 (·,2Η) , 1.37(s,9H), 0.δ 9 (t,3 Η , J=8 . 0 Ηζ) Mass (FAB) ； i/e822 (H + l) 瞀撫例41 m g at « «t % -G1v-Glv-Php-Glv-HH~A' fA-NH^> = nW~

« 0 8 91 夕合 SR 將由資胞例24得到之羧甲基葡聚糖多元B之三乙銨醱 (1.6g)用Ν,Η-二甲基甲釀胺（60·1>溶解。此溶液依次加入 將由資胞例 40得到之 3'-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A( A-HH2 = DW-8089)(200»g>依照實tei例4相同之方法進行脫 Boc化所得到之3'-K-(Gly-GIy-Phe-Gly)-NH-A之三氟乙酸 Μ及三乙肢（0.07b1>溶解於Ν,Ν-二甲基甲醢胺（20·1)所得 到之溶液、卜乙氧期基-2-乙氧基-1,2 -二羥基时啉（1.6g) ，在室溫邊携拌邊進行反應一晩。在各10·1之乙酵中滴下 此反應液各5·1,此混合物中加入3Μ氯化納水溶液（2.5·1) 、乙醚（25·1),析出之沈教用缠心分離（3500rp·, 8分鏞） 收集。將此沈》物用乙醇洗淨後溶解於水，加入3H^化納 水溶液（20·1),用0.1M氫氣化納水溶液調整pH值為9。所 得到之水溶液用Βίο-·3χ-10_»由超濾法脫醱。未通通膜 之殘留溶液用微孔濾_(0.22μ·)過濾後凍結乾煉，得到攤 記化合物（1.20g)。此化合物溶解於0.1Η«化納水溶液後 用GPC(管柱：東塑股份有限公司»造TSK Gel PV-4000XL、 ^^^1 ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 B^i·— ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 ^^^^1 1J ^i (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 本紙张尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） 58 3 8 9 5 4 409 0 5 B a7 _B7_ 五、發明説明（57) 溶劑：0.1M NcC丨、流速：0.8·1/ηίη)分析之結果及此化合 物之紫外線吸收光譜（〇. 1 Μ三羥甲基胺基甲烷緩衝液，pH 9.0, 0.26ig/il)分別如第16圖及第17_所示。此化合物 之B藥化合物殘基之含量以在0.1 Μ三羥甲基胺基甲烷缓衝 液（ΡΗ9.0)中之根據於362ηι之吸光度定量時為5.0« (W/V) Ο 奮啪俐42 雄田某«聚纗劣元a^三^箝鹽之合成 將葡聚糖Tl5〇(2〇s,法瑪西亞公司製造，平均分子量 150K)溶解於0.1M乙酸媛衢液（pH值5.5, 2000b1)後加加入 高碘酸納（66.0g)之水溶液（2000ml)。邊遮光邊於攪拌 10天後加入乙二酵（14.0»1),攪拌一晩。反應液在冰冷下 用8M氫氧化納水溶液將pH值調整至7.5,加入硼氫化納（ 經濟部中央楳準局員工消费合作社印製 (請先閱讀背面之注意"項再填寫本頁) 28 s)溶解後在室溫下攪拌一晚。反應液冰冷之，用乙酸調 整pH值至5.5,在41C攪拌1小時後在冰冷下用8M氫氧化納 水溶液將。11值調整至7.5。所得到之水溶液用^〇-丨3){-5膜 (迷你波爾公司製造）經由超濾法濃縮至SOObI,得到濃縮 溶液1。另外，將葡聚耱T110(20s)依照上述之方法搡作， 得溶液2。將溶液1及溶液2混合，混合溶液之pH值為3.0 ，在40 t靜置4小時後將pH值調整為7,得到含有低分子 化之葡聚耱多元酵之溶液。將此溶液通過Biomx-30祺， 再用Bio-nax-5脫鹽後凍结乾煉，得到葡聚耱多元W(4.6g )。此物質之分子量（凝膠過《、支《澱粉欏準）為17K。 _此葡聚糖多元》(2. _^)_加入將氫《化納（17.58)用水（ 本紙張尺度ϋϋ國家榡率（CNS ) A4規格（21〇ίϋ公釐) 59 38954 409058 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（58 ) 75a丨）溶解所得到之水溶液，在室漘下溶解。此溶液在冰 冷下加人單氱乙酸（25g)溶解後在室溫下反應20小時。將 此反應液用乙酸調整pH值為9後用Bio-iax-5_經由超灞 法脫鹽。將未通遇麟之殘留溶液凍结乾煉，得到羧甲基葡 聚糖多元酵之納鹽（4.08)。此物質之分子量（《Βίβ濾、 支鐽激粉擁準）為45Κ、羧甲基化度為0.9。 將此羧甲基葡聚糖多元酵之納鹽（3.7g)溶解於水中， 吸附在 Bio-Rad AG 50W-X2(200-400期目、H +型）管柱，用 水溶出。此溶出液加入三乙胺（5.8·1)後凍结乾嫌，得到 欄記化合物（4.4g)。 y m 例 43 m ^ at m « « ^ tc m -niv-Giv-Giv-PhA-HH-A,(A-HH9=nx-8 q s 1 i夕会成 將由實腌例42得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三乙技鹽 (4.4s)用Η,Μ-二甲基甲醯胺（300«1)溶解。此溶液依次加 入含有三乙胺（0.19*丨）及 n-Uly-Gly-Gly-Phei-HH-At A-NH2=DX-8951)三氟乙酸鹽（580·β)之Κ,Ν-二甲基甲B胺（ 45·1)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基時啉（4.4g ),遮光，在室溫邊授拌邊進行反« —晩。此反應液用1M 氫氧化納水溶液調整pH值為10後在各25nl之乙酵中滴下此 反應液各5·1,此混合物中加3MH化納水溶液（1·1)、乙« (5·]),析出之沈«用逭心分離（3500 「ρ·, 8分鐘）收集 。將此沈《物溶解於水，用《析縝（光繕孔1、切斷分子量 6,000〜8,000)對純水透析。进析内液用微孔濾11(0.224· <請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CN'S ) A4規格（210x 297公釐） 60 38954 經濟部中央標準局負工消资合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（5g) >遇》後凍结乾嫌，得到標記化合物（3. 4g)。此化合物之 Η蕖化合物殘基之含置以在0.1H三羥甲基胺基甲烷嫒銜 液（pH 9.0)中之根據於362η·之吸光度定量時為4.6¾ (W/ W)。 奮嫌例44 « -田某撖 g X « « M Μ - Giv-Glv-GIv-PhG-HH-A'fA- HHa = DX-89 5 n^ 將由寅施例42得到之葡聚糖多元酵（2g)加入將氫氧化 納（14g)用水（60·1)溶解所得到之水溶液，在室溫下溶解 。此溶液在冰冷下加入α -溴丙酸（19»1)溶解後在室溫下 反應18小時。將此反應液用乙酸調整pH值為8後用Bio- ax-50蟥娌由超濾法脫鹽。將未通邊賴之殘留溶液凍结乾 埭，得到ct -甲基羧甲基葡聚糖多元酵之納SI (2.95g)。此 物質之分子量（凝》«濾、支《澱粉欄準）為45K。每個糖 殘基之α-甲基羧甲基化度Μ羧甲基葡聚糖多元酵為基準， 依照下述之方法求得：將α-甲基羧甲基葡聚糖多元酵納 Μ之水溶液吸附至Bio-Rad AG 50V-X2(H +型）管柱上，將 通過液凍结乾嫌作為試樣。將此試樣溶解於規定過剩量之 0.1N氫氧化納水溶液中，用酚酞作指示劑用0.1N明酸滴定 。轼樣之採取最以s(bs)表示、0.1N氫氧化納水溶液之規 定過剰MMaUl)、0.1NM酸之滴定最ΜΜ·1)表示，α-甲基羧甲基化度由13.4(a-b)/[S-7.2(a-b)]公式求得，其 结果，α -甲基嫌甲基化度為0,8。 _將此α -甲基羧甲基葡聚糖多元酵之納醣（2. 2d溶解 本紙浪尺度適用中國國家標隼{ CNS ) Α4規格{ 210X297公釐) " 61 38954 m ........ I- 1^1 ^^1 I (^1 4 II -- - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局—工消费合作社印裝 409058 3 五、發明説明（6G) 於水中，吸附在 Bio-Rad AG 50V-X2(200-400網目、H+型） 管柱（直徑44··、長210··)上，用水溶出。此溶出液加入 三乙胺（4il)後凍结乾燥，得到α -申基羧甲基葡聚耱多元 醉之三乙銨鹽（2.69s)。 將此α -甲基羧甲基匍聚糖多元酵之三乙銨》(2.68g) 溶解於Η,Η-二甲基甲»胺（60·1)中。此溶液依次加入將依 照實施例2同樣之方法所合成之3’-N-(B〇C-Gly-Gly-Gly-Phe)-HH-A (A-HH2=DX-8951)(350_g)i5 由與實雎例 16同搛 之方法脫Boc化所得到之3’-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A之 三氟乙酸Μ及三乙胺（〇·116·1>溶於N,H-二甲基甲«胺（ 10·1)所得到之溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基 of啉（2.68g>溶於Κ,Ν-甲基甲醢胺（10·1)所得到之溶液， 在室灌邊攪拌邊進行反應一晩。此反應液中加入3 Μ氛化納 水溶液（40·1),在各30·1之乙酵中滴下此反應液各6·1。 分別各加人3M«l化納水溶液（1 丨）、乙醚（5·1),析出之 沈澱用遠心分《1 (3500 rp·, 8分鐘）收集。將此沈U物用 丙醑洗淨後用水溶解，加入3M氯化納水溶液（10·1)後用 0.1Η氫氧化納水溶液調整pH值為9,在37¾處理1小時。 此處理液用Bio-Bax-10it,經由超濾法脫鹽。未通3AM之 殘留溶液用微孔濾ϋ(〇.22μ·)ϊ|濾後凍结乾燥，得到檷記 化合物（2.158)。ft:化合物溶解於0.1Μ之氯化納水溶液後， 用GPC(管柱：東塑股份有限公司ΙΪ埴TSK Gel PW-4000XL 、溶θί: 0.1H NaCl、流速：0.8·1/·ίη)分析之結果及此 化合物之紫外線吸收光譜（0.1Μ三羥甲基銨基甲烷逋銜液 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 訂 表紙張尺度適用中國園家樣隼（CNS > Α4規格（210Χ 297公釐） 62 3 8 9 5 4 409058 A7 B7 五、發明説明（61 ) ,pH 9.0, 0.21*g/*l)分別如第18匾及第19·所示。此化 合物之B藥化合物殘基之含量以在0.1M三羥甲基胺基甲 烷級銜液（pH 9.0)中之根據於362η*之吸光度定1時為5.9 * (W/W)。

Iv-Php-Glv)-HH-A (Α-ΝΗ^ = ηΧ-8ΑΚη-, Λ 7, i> W 夕合成 將 Phe-Gly-OBzl 之對-甲笨磺酸 M (3.06G)、Boc-Gly-OH(l.lOs)、N-羥基5*珀醻亞胺（941*g)、N-甲基噃啉（ 0.725al)、H,N -二甲基甲僅胺（40·1)之混合物在冷却 後加入N,fT-二環己基碳化二亞胺（1.56g)。在室溫邊攪拌 邊進行反應一晚後將此反應液減壓乾嫌，殘渣用矽謬管柱 曆析法（溶出液：二《甲烷：甲酵 =98:2溶液）稍製，得 到 Boc-Gly-Plie-Gly-0Bzl(1.93g) 〇 1H-NHR(DMSO-de) δ ： 8 . 52 ( dd, 1 Η ,J = 5.6 , 6.4 Ηζ), 7 . 97 (d , 1Η,J = 8.8Ηζ) . 7 . 30 - 7 . 3 9 ( ,5 Η) , 7.15-7.26(·, 經濟部中央標準局員工消費合作社印策 (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 5Η> . 6.83(t,1 Η,J = 5.6 Ηζ ) , 5·14 ( s, 1 Η ) , 4.5 2 - 4.57 ( , 1Η), 3.87-3.90 (,2Η ) , 3 . 5 7 ( d d , 1 Η , J=5.6,16.7 Ηζ), 3.43(dd,lH,J=5.6,16.7Hz), 3.01(dd,lH,J=4.8,14.3Hz) ,2.77(dd,1 Η,J = 5.6,14.3Ηζ) , 1.37(s,9H) 將所得到之Boc-Gly-Phe-Gly-OBzl (l,78g)用乙酸乙 酯（60·丨）溶解，在5¾ Pd-C(1.8g)存在下進行催化«原24 小時。過濾除去催化劑，濾液減懕«路，得到Boc-Gly-Phe-Gly-OH(1.41g) ° _ 本紙張尺度適用中國國家標芈（CNS } A4規格（210 X 297公釐) 63 38954 經濟部中央標準局男工消费合作社印製 409058 五、發明説明（62) ^-HMR (DHSO-de) δ ： 8 . 3 5 (t, 1 Η , J = 5 . δ Η ζ ) , 7.94(d,lH, J = 8.8Hz), 7.15-7.26(*,5Η), 6.85(dd,1 Η,J = 5.6 , 6.4 Ηζ) ,4.5 2 -4.58 (, 1 Η) , 3 . 76(d,2 Η,J=5.6 Ηζ) , 3.56(dd,lH, J=8.4,16.7Ηζ) , 3.43(dd,1Η,J = 5.6, 16 . 7Hz) . 3.03(dd, 1Η,J = 5.0,13.5Ηζ) , 2.79(dd,1Η.J=9.5, 1 3.5Ηζ) , 1.37( s , 9Η) 將上述得到之B〇c-Gly-Phe-Gly-0H(500ag)及Ν-羥基 琥珀鐮亞胺（1δ1·8>溶解於Η·Κ-二甲基甲鷗胺（10·1)。在 此溶液中加人將DX-8951之甲磺酸》(530»g)及三乙胺（ 0.146·1)溶解之Η,Η-二甲基甲醣胺（5〇·1)溶液，於冷 却後加人Ν,Ν'-二環己基碳化二亞胺（268·β),遮光下在室 溫邊攪拌邊進行反應一晩。反懕液減壓乾燁，殘渣用矽0 管柱層析法（溶出液：二氱甲烷：甲酵=96:4梅液）精製， 得到 3.-H-(Boc-Gly-Phe-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951)( 1 0 0 g ) 0 1 H-HHR (OHSO-de) δ ： 8 . 3 9 (d , 1 Η , J =* 8.0 Η ζ ) . 8.34(t,lH, J = 5.6Hz), 7.98(d,lH,J=7.2Hz) , 7.78(d.1 Η ,J = 1 0.3 Ηζ), 7.33(s,lH). 7.13-7.24(·,5Η), 6.80(dd,lH,J=5.6.6. 4Ηζ), 5.55-5.61 (·, 1Η) , 5.44 ( d,1 Η,J = 1 6 . 0 Ηζ ),

5.41(d,lH,J=16.0Hz), 5.25(s,2H), 4.43-4.46(·,1Η), 3.69 -3.79 (·,2Η) , 3 . 5 0 ( d d , 1 Η , J = 5 . 6 , 1 6 . 7 Η ζ ) , 3.4K dd, 1Η, J = 5.6, 16.7Ηζ) , 3. 1 6 - 3 . 1 9 ( , 2 Η ) , 2.98(dd,lH, J=4.8,14.3Hz), 2.79(dd,lH,J=9.5,14.3Hz). 2.41(s,3H), 2 . 1 9-2.25 ( , ΐΗ ) . 2>10 - 2 . 1 5 ( , 1 Η ), 本紙張尺度逍用中國囷家標準{ CNS ) Λ4规格（2丨〇乂297公董） I vfn It--I n^l ^^^1 n nn · ^^^1 ^—t - -- ii (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) 38954 64 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 409058 五、發明説明（63) 1 . 82 - 1 . 90 ( , 2H), 1.35(8,9H). 0.88 (t , 3H,J = 8 . 0 Η 2) Hass (FAB) ; ·Ζ3 797 (H + l) 將所得到 3，-N-(Boc-Gly-Phe-Gly)-NH-A (A-NG2=DX-8951)(100·ιϊ)用三氣乙醵（3·1)溶解，放置1小時。除去 溶劑，在甲酵（30·1)共沸2次、在乙酵（30*1)共沸2次後 ，殘渣用乙_洙淨，得到摞記化合物（80eg)° ^-HHRiDMSO-deia ： 8.52-8.62(·,1Η), 7.94(s,3H), 7.79(t, 1H, J = ll. 1Hz), 7.34(s,lfl), 7. 1 5 - 7.27 ( , 5H), 6.52(s.lH), 5 . 57-5.61 (. 1H), 5.36 - 5.46 ( . 2H), 5.24(s,2H), 4.66-4.70(·,1Η), 3.69-3.81(·,2Η), 3 . 61-3.68(η ,1H) , 3.40 - 3 . 47 (. 1 H) . 3.15 - 3.23 (.1H), 3.01(dd,lH,J=4.0,13.5Hz), 2.77(dd,lH,J=9.5,13.5Hz) ,2.12-2.23 (i , 2H) , 1.81 -1.9 1 ( b . 2H) , 0.89(t,3H.J = 7 . 2Hz )

Mass (FAB) ； i/e 697 (H + 1) m m m ar H'-H-fPhp-fnd-HH-A (A-NHa = D?(-8951)三 it Z at M 之会 將 Boc-Phe-Gly(771«g)及 N-羥基 W 泊 B 亞胺（30〇eg) 溶解於H,M-二甲基甲醢胺（10·1)。在此溶液中加入將DX-8951之甲磺酸_ (1058eg)及三乙胺（0.293·1)溶解之Ν,Ν-二甲基甲《胺（5 0 a 1 )溶液，於4 t冷却後加入Η , IT -二環己 基碳化二亞胺（494·Η,遮光下在室溫邊攪伴邊進行反應 一晩。反應液減壓乾煉，殘渣用矽謬管柱贋析法（溶出液: 本紙張尺度適用中固國家標準（CNS > Α4規格（210Χ297公釐)~~ 65 38954 ^^^1 ^1» m^1 H «^^^1 ^^^1 ^^1 I ^in —^^1 一，t (請先Htt背面之注f項再填寫本頁) 409058 A7 B7 五、發明説明（64 ) 二氣甲烷：甲酵=98:2溶液）精製，得到3'1-(&〇(：艸“-Gly)-NH-A U-NH2 = DX-8951) (1.2〇8)。 ^—1 nn· —^i^i ^^^^1 m«l ^^^^1 ml mu "i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1H-NHR (DHSO-de) δ ： 8.29 (d,1 Η .J = 8.0Ηζ), 8.21(t,lH, J = 4.8Hz), 7 . 76 (d . 1 Η , J = 10.3Hz) , 7.32(s,lH), 7.13-7.25 ( . 5Η) , 6 . 92 (d.1 Η,J = 7 . 2 Ηζ) , 6.49(s,lH), 5 . 56-5 . 6 1 (a , 1Η) , 5 . 44 ( d,1 Η,J = 1 5 . 9 Ηζ ) , 5.38(d,lH, J = 15.9Hz), 5.25(s,2H), 4.08 - 4 . 1 2 ( . 1 Η ) , 3.78(d,lH, J = 4.8Hz), 3. 16-3.25{·,2Η) , 2.99 ( dd , 1 Η , J = 4 . 0 , 1 3.5 Ηζ ),2 . 7 2 ( dd,1 Η,J = 10.3，13.5 Ηζ ) , 2.40 ( s , 3H), 2 . 0 9 - 2.35 (β,2Η) , 1.80 - 1 . 9 1 ( ,2 Η ) , 1.16(s,9H), 0 · 88(t,3Η,J = 8·ΟΗζ)

Mass(FAB) ; «/3 74 1 (N + l) 將所得到 3'-N-(Boc-Phe-Gly)-NH-A(170iig)用三氟乙 酸（4·1)溶解，放置1小時。除去溶劑，在甲醉（10_1)共 沸2次、在乙醇（10*1)共沸2次後，殘渣用乙β洗淨得 到檷記化合物（1 0 0 g )。 經濟部中央橾準局員工消費合作社印裝 1H-NMR (DHSO-de) δ ： 8.88Ct , 1 Η , J=48 Ηζ ) , 8.68(d,lH,J = 8.7Ηε), 8 . 05-8 . 15 (,3Η) , 7 . 79 ( d , 1 Η , J = 1 1 .1 Ηζ), 7 . 26 -7 . 3 6 (β , 5Η) , 6 . 52 (d,1 Η,J = 7.2 Ηζ) , 5.57 - 5.62 (·, 1Η), 5.43(d,1Η,J = 15.9Ηζ) , 5.38(d,1 Η,J = 15.9 Ηζ), 5.19-5.28(a,1Η) , 4.10 - 4.18 ( »,1 Η) , 3.93 ( dd,1 Η , J = 4 . 8 ,16.7Ηζ), 3.82(dd，lH,J = 4.8,16.7Ηζ). 3. 17-3.24(β, 2H), 3.14(dd,1 Η ,J = 4.8.13.5Hζ) , 2.95 ( dd, 1 Η , J = 8 . 0 , 1 3 · 5 Η ζ ) , 2 4 2 ( s , 3 Η ) , 2 . 1 4 - 2 · 2 5 ( β , 2 Η ) , 1 · 8 3 - 1 · 9 1 ( , 66 3 8 9 5 4 409058 A7 經濟部中央標隼局貝工消费合作社印裝 B7五、發明説明（65 ) 2H), 0.89(t,3H,J=8.0Hz) Hass (FAB) ； «/e 640 (H + l) » life 俐 47 ΐ'-Η-Γ,Ιν-ΗΗ-Α = M 7, Β» W ^ 会成 將DX-8951之甲磺酸鼸（530id及三乙胺（0.28*1)溶解 於N , H -二甲基甲醜胺（1 0 1丨），於4 1C冷却後加入B 〇 c-Gly之N-羥基琥珀醢亞胺（327ng)。遮光下在室溫邊攪拌邊 進行反《 —晩。反應液減壓乾埭，殘渣用矽膠管柱暦析法 (溶出液：二《甲烷：甲酵=98:2溶液）精製，得到3夂 卜（Boc-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951)(500»g)。 1H-NHR(DHSO-de) δ ： 8.38(d,1 Η ,J = δ .3 Ηζ) , 7.77(d,lH, J = 10.7Hz), 7.31(s,lH), 6.89 - 6.9 1 ( , 1 Η ) , 6.49(s, 1Η), 5.55 - 5.59 (a,1Η) , 5.45(d,1 Η,J = 1 6 . 1 Ηζ ) , 5.38(d, 1Η,=16.1Ηζ), 5.27(d.1Η,J = 19.ΟΗζ) , 5. 1 8 ( d , 1 Η , J = 1 9 . 0 Ηζ). 3.50 - 3.62 (·,2Η), 3.15 - 3.19(.2 Η), 2.41(s,3H), 2 . 18-2 . 24 ( , 1Η) , 2 . 08 - 2. 1 2 ( , 1 Η) , 1 . 8 1 - 1 . 9 1 (ι ,2 Η), 1 . 31 (s,9Η) . 0 . 87 (t,3Η.J = 8.ΟΗζ) Mass (FAB) ; a/e 593 (Μ + 1) 將所得到3’-M-(Boc-Gly)-HH-A(100mg)用三氟乙酸（ 2·丨）溶解，放置1小時。除去溶劑，在甲酵（10·丨）共沸2 次、在乙共沸2次後.殘渣用乙醚洗淨，得到禰 記化合物（70*g)。 ^-NMRtDMSO-de)^ ： 8.88(d,lH,J=8.8Hz). 8.08(s,3H), 7.81 (d, 1 Η ,J = 1 1 . 2Hz) , 7.34(s,lH), 6.52(s,lH), 尺度遄用中國國家標率（CNS ) A4現格（210X297公釐） 67 38954 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 409C58 at B7 五、發明説明（66 ) 5.6 3 - 5.67 ( , 1H) , 5.45 ( d,1H,J = 16.7Hz ) , 5.40(d,lH,J = 16.7Hz), 5 . 36 (d , 1H , J = 19 . 1Hz) , 5.25 ( d, 1 H,J = 1 9 . 1Hz), 3.56(s,2H), 3. 11-3. 19 (·,2Η) , 2.43(s,3H), 2.23-2.28 (ι,ΙΗ), 2 . 1 1-2 . 19 ( , 1H) , 1.8 1 - 1 .9 1 ( a , 2H) , 0.88(t, 3H , J = 8.OHz)

Hass (FAB) ; _/e 493 (M + l) v m m 铕申某《聃纗名元»夕三7, 会成 將《聚糖T500 (50g,法IS西亞公司製造，分子董500K )溶解於0.1H乙酸嫒衡液（pH值5.5, 5000il)後加人高磺酸 納（165.0g)之水溶液（5000·1)。邊遮光邊於4T携拌10天後 加入乙二酵（35.0»1),攢拌一晩。反«液用8Μ氫氧化納水 溶液將pH值調整至7,加入》氫化納（70s)溶解後在室溫下 攪伴一晩。反應液冰冷之，用乙酸調整pH值至5.5,在4t： 攪拌1小時後用8M氳氧化納水溶液將pH值調整至7. 5。所 得到之水溶液用BU-*ax-50_ ,經由超濾法脫》。將未通 過供之殘留溶液凍结乾埭，得到葡聚糖多元酵（20.2g)。 經濟部中央橾準局爲工消費合作杜印装 ^^1 ^^^1 In I - -1 I ^^^1 I - - - — l^i 11 - - H _一^ {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 此物質之分子量（凝膠通濾、支《澱粉禰準）為159K。 此葡聚糖多元酵（7.58>加入將氫氧化納（31.5s)用水（ 225·1)溶解所得到之水溶液，在室ffl下溶解。此溶液在冰 冷下加入‘單《乙酸（45g)溶解後在室灌下反應一晩。將此 反應液用乙酸綢整pH值為8後用BU-iax-50旗經由超濾法 脫鹽。將未通遘賴之殘留溶液凍蛣乾燥，得到羧甲基葡聚 耱多元酵之納M(8.5g)。此物霣之分子量（凝謬過濾、支 本紙掁尺度適用中國圉家橾準（CNS ) A*!洗格（2!〇X 297公釐) 68 38954 A7 409058 B7 五、發明説明（67 ) ««粉禰準）為274K、羧甲基化度為0.4。將此羧甲基葡聚 糖多元酵之»Μ(2.0β)溶解於水中，吸附在Bio-Rad AG 50W-X2(200-400網目、H +型）管柱（直徑 44··、長 210η), 用水溶出。此溶出液加入三乙胺（4β1)後》结乾埭，得到 標記化合物（2 . 2 g )。 g MS ^ 4 9 播 g 某葡聚績冬元 _ -Glv-Phe-GIv-HH-A^ (Α-ΝΗ? = ί)Χ-Riifil )合成 將由實施例48得到之羧甲基葡聚糖多元酵之三乙按鼸 (200·^)用Ν,Ν-二甲基甲醯胺（7·1)溶解。此溶液依次加入 由實施例 45得到之 3'-N-(Gly -Phe-Gly)-NH-A (A-NH2= DX-8951)三氟乙酸鹽（41·Η之Η,Ν-二甲基甲皤胺（5·1)溶 液、三乙胺（0.014·丨）及1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥 基時啉（lOOeg)。在室溫邊攪拌邊進行反應一晩。在各10 1之乙酵中滴下此反應液各5al。此混合物中加入3H氯化 納水溶液（2·0·1>、乙醚（25·1),析出之沈澱用适心分離（ 3500 rpi, 8分》)收集。此沈澱溶解於0.5Μ食_水中， 在冰冷下用0.1M氫氧化納水溶液纜整pH值為9。所得到之 溶液用8U-ias-50膜，經由超濾法脫體。未通過_之殘留 溶液用微孔濾膜（0.22μ·)過濾後凍结乾煉，得到禰記化合 物（190bs)。此化合物之Β藥化合物殘基之含量以在0.1Μ 三羥甲基胺基甲烷«衝液（pH 9.0)中之根撺於362n·之吸 光度定置時為4.5* (V/V)。 1 ^^^1 ^^^1 —^1» ^^^1 I—V 穿 ί (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟郎中央樣準局貝工消費合作社印^ 本紙浪足度適用中國國家橾準（CNS ) ΑΊ规格（210 X 297公釐） 69 3 8 9 5 4 409C58 A7 經濟部中央樣準局貝工消资合作杜印製 B7五、發明説明（δ8 ) 雄甲某葡聚績冬元醃-Phfi-[；1Y-HH-A' (Α-ΗΗ:? = ΠΧ-Μ51) 夕合成 將由實施例24得到之羧甲基葡聚糖多元酵之納M(2.5 g)溶解於水中，吸附在Bio-Rad AG 50V-X2 (20 0 -400網目 、Et3NH +型）管柱，用水溶出。此溶出液凍结乾嫌，得到 羧甲基葡聚糖多元酵之三乙按M (2.5s)。 將此羧甲基葡聚糖多元酵之三乙銨Μ(200·β)用Η,Ν-二甲基甲醯胺（12·1)溶解。此溶液依次加入由實腌例46得 到之 3，-H-(Phe-Gly)-NH-A (A-NH2=DX-8951>三氣乙酸鼸（ 42niS)與三乙胺（0.016屋1)之Ν,Ν-二甲基甲醢胺（5»1)溶液 、1-乙氣羰基-2-乙僉基-1,2-二羥基時啉（200ig),遮光， 在室溫邊授拌邊進行反應一晩。反《液加入水（300·1), 用超過濾_1〇Κ(福爾靝公司製造）進行超通濉。未通邊祺 之殘留溶液用0.1Ν氫氧化納水溶液調整pH為10,使通遘過 濾膜（0.16μα、福面81公司製造）。通遇之溶液用BU-iax-50膜，經由超過濾法脫鹽，接著再用微孔濾_(0.22μ»)過 «後凍结乾堍，得到禰記化合物（1 8 0 u )。此化合物之Β 藥化合物殘基之含量以在0.1Μ三羥甲基胺基甲烷嫌衢液（ pH 9.0>中之根據於362η祖之吸光度定最時為6.1» (V/W)。 竇_例！Π 撖申某《 聚 Ml 名元 « -G 丨 v-HH-A· (Α-ΚΗ2 = ΠΧ-89!Πΐ^ 会成 將由實施例48得到之羧甲基葡聚糖多元醇之三乙按Μ (370·8)用Ν,Ν -二甲基甲醯胺（10»丨> 溶解。此溶液依次加 入由寘胞例 47得到之 S'-N-Gly-HH-A (A-HH2=DX-8951>三 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210 X 297公釐) 70 38954 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 409058 at B7 五、發明説明（69 ) 氟乙酸》(57·8)之Κ,Ν-二甲基甲B胺（3·1)溶液、三乙胺（ 0.027·1)及卜乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基睹啉（185iag ),在室灌邊攪拌邊進行反應一晩。在各10il之乙酵中滴 下此反應液各5·1。此混合物中加入3M氯化納水溶液（2.0 1)、乙醚（25il),析出之沈教用遑心分11 (3500 rpa, 8 分_)收集。此沈教溶解於0.5M食鼸水中，在冰冷下用0.1 Μ氢氧化納水溶液調蝥pH值為9。所得到之水溶液用Βίοι a X - 5 0 臢 ， 經由超 濾法脫 鼸 。 未通過 鎮之殘 留溶液 用微孔 濾觸（0.22μ〇)遇濾後凍结乾埭，得到揉記化合物（290ng) 。此化合物之醫藥化合物殘基之含量Μ在0.1M三羥甲基 胺基甲烷缓衡液（pH 9.0)中之根據於362 ηΒ之吸光度定量 時為 0.5 % (W/V)。 富施例52 太筇明夕雄物嫌会《夕杭》«作用 依照與實施例11相同之方法作成罹患Meth A癌之老鼠 (1組6雙）。對於實施例15之藥物複合«,依照與實施例12 相同之方法單次投與，研究其抗腯瘍作用。其结果，實施 例15之藥物複合«比實施例12之醫藥化合物本《具有顯著 博強抗«瘍之效果及擴大之有效用量領域。 (請先閲讀背面之注意事項再填耗本頁) 丁 _ 濟 部 中 央 揉 準 局 員 工 消 費 合 作 枉 印 製 被檢化合物 投與 ft (og/ks) 1 抑制率 霣腌例1 5之化合物 10 100 5 99 2.5 95 1.25 83 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS) A4说格（210X297公釐） 7 1 3 8 9 54 409058 A7 B7 明説明S 發Β '1五 ft 算 換 物 合 化 0 Μ Η 合 嫌 物0 之 明0 太 3 Μ 癌 0 類 人 將 软 老0 裸 到 植 迮移 塊 瘍 腫 之 nu組 / 1 患 ΕΒ 褶 成 作 下 皮 部 蹊 鼠 右 之 )/ 雄 联 老 體 裸 之 0 水 0 蒸 用 射 注 用 與 投 次 單 内 脈 靜 天 4 2 第 後 植 移 〇 \—/ 隻 5 藥 之 5 1 例 施 實 之 解 溶 瘍» 之 匾本瘍 抗物Η 較合抗 比化高 «槩揮 本翳發 物與且 合 Η , 化合形 蕖複情 醫物之 與藥亡 , 之死 «15性 合例毒 複施有 物實現 , 發 果無 结並 其 · 。 較 用比 作栢 果 效 物 合 化 檢 被 ft 與 投 率 制 抑 數 鼠 老 亡 死 數 鼠 老 用 使 m^p al^i =:1 1 1. - - «^^1 i II -- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 藥 《 B本 物 合 化 ο 5 Λο 11 S 1 9 6 經濟部中央標準局負Η消费合作社印袈 之 5 11 例物 胞合 實化 11 7 1算 換 物 合 化藥 Μ0 1

0V Μ 合 嫌 物0 之 明 本 作0 0 杭 之 例 0V 與 照 依 0 肺 類 人 患 0E II 成 里 作 法 方 之 同 相 本紙張尺度適用中國囷家標丰（CNS ) A4規格（2ί〇Χ297公釐） 72 389 54 A7 被檢化合物 投與 1 抑制率 死亡老鼠數/ (g/kg) ( * ) 使用老鼠數 409G58 B7 五、發明説明（71 ) 癌之裸體老a (1姐5隻）。移植後第16天靜赈内單次投與用 注射用蒸_水溶解之實腌例1 5之蕖物複合體，與»藥化合 物本體比較抗朦瘍作用。其结果，實施例15之藥物褸合體 比B蕖化合物本《具有顧著增強抗腫瘍之效果及擴大之有 效用量領域。 ----------裝------訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) B第化合物 50 60 0/5 本Η 12.5 51 0/5 實施例15之 7 1 > 98 0/5 化合物 1.75" 97 0/5 1)B第化合物捵算最 奮晡例55 經濟部中央棣隼局员工消費合作社印製 太琎职夕《物禱合«夕杭_瘍作闲 依照與霣雎例11相同之方法作成罹患Meth A癌老»(1 組6隻），與實施洌12相同之方法將實施例41之藥物禊合β 單次投與，與Β藥化合物本體比較抗腫瘍作用。其结果， 實施例41之蜗物禊合«與Β蕖化合物本《相比較，額示具 有顧蕃增強抗腫瘍之效果及掮大之有效用量領域。 本紙張尺度逋用中國國家標準（〔^)六4礼格（210/297公釐> 73 3 8 9 5 4 409058 A7 B7 五、發明説明（72) 物 合 化 檢 被 量 與 投 ^—v 率 制 抑 H 本 物 合 化 藥 醫 ο 5 5 2 物 合 化 之 11 4 例 施 實 4 6 4 9 5 1 6 5 3 9 9 8 3. 125 1 5 61

_^--------裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁J

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老 之 癌 A 例 腌 實 與 投 th次 Hem 患較 罹比 成法 作方 法之 方同 之相 1 2 同 1 相例η 0 例實 施與 實。 與丨 照 依驵 /V 鼠 隻 用 作 瘍 腫 抗 之 時 體 合 複 物0 各 之 4 4 例 雎 霣 及 3 4 例 施 實 訂 經濟部t央橾準局負工消費合作社印袈 » 抗 高 有 具 示 顯 均 體 合 複 物。 藥域 種領 一ft 何用 任效 論有 不之 , 大 果擴 结及 其用 作 瘍 本紙張尺度適用中國國家梯率（CNS ) A4規格（210X297公釐} 4 7 3 8 9 5 4 409058 a7 B7 五、發明説明（73) 被檢化合物 投與量（ s / k g ) 1 ) 抑制率（％ ) 實腌例29之化合物 30 gd 20 99 10 8 9. 5 79 實施例43之化合物 100 94 80 92 40 82 20 75 實施例4 4之化合物 100 96 80 94 40 97 20 75 (請先閲讀背面之注意ί項再填寫本頁) 装. 經濟部中央梯準局貝工消费合作社印策 1)B藥化合物換算最 奮晡例R7 太琎聃夕»物謭合Μ夕Μ肉ft赭 依照與實胞例11相同之方法作成罹* Heth A癌之老 »。對於實拖例15之藥物複合體，依照與寅豳例12相囘之 方法單次投與U〇ig/kg: B蕖化合物換算量 >,研究稱物 複合«在各組嫌中瀰度之推移。其結果，*拖例15之欒物 禊合體具有顯著高之血中滯留性，向朦《姐孅之移行性高 本紙張尺度通用中國國家橾準（CN’S ) Α4現( 2丨0X 297公釐） 75 3 8 9 5 4 409C58 A7 B7 五、發明説明（74) 以及對肝臟及小腸顯示高腫瘍埋擇性。結果如第20面所示 0 畜塞卜夕利用可眭件 具有羧基之多糖衍生物與»藥化合物或與已輿醫藥化 合物蛣合之間隔基等之反應.可得到良好之收率，而且與 具有内_環之B蕖化合物等進行反應時可Μ抑制副反應， 所Μ,作為藥物複合黼之製造方法非常有用。 ^n- It ttn In ml ^^^1'm ^^^1 TJ 耷 i (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央棟準局貝工消費合作社印製 本紙張尺度通用中國圏家橾準{ CNS ) Λ4規格（210X297公釐） 76 38 9 5 4 409058 P—- 一咖 w—’ ί Η3 会告本 i 丨丨 _一，·ι—— ^ 811 ΐ * i 4 γρ. jJ-*l % ί 6 1 0承|_ 5¾專利申請案 L...____________—- 申請專利範圍修正本 (8 8年7月1 4日） 1. 一種藥物複合體之製造方法.該藥物複合體係由具有 羧基之多糖衍生物與凿藥化合物之殘基介由一個胺基 酸作為間隔基或介由與2〜8個胺基酸之胜肽作為間隔 基结合而成之藥物複合體，或是具有多糖衍生物與醫 藥化合物之殘基不經由這些間隔基結合而成之槩物複 合體，該製造方法包括下述步驟： (1)將具有羧基之多糖衍生物之鹼金屬鹽變換成有 櫬胺鹽類之步驟；及 化 藥 醫 與 已 與 或 物 合 化 藥 翳 與 頚 鹽 胺 機 有 該 將 驟 步 之 應 反 行 進 系 水 非 在 基 隔 間 之 合 结 物 合 之 基 接 。 有者 具醇 該 元 , 多 中糖 其聚 , 葡 法基 方烷 之 T 項C1 1 基 第羧 圍為 範係 利物 專生 請衍 申糖 如多 2 在 基地 羧質 成寅 構為 該係 , 醇 中 元 其 多 唐 , S 法聚 方葡 之之 項醇 2 元 第多 S3? 唐 範聚 利葡 專基 請烷 申 τ ί 如 C 3 經濟部中央標準局員工福利委Μ會印製 之 到 得 所 J: 理 處 唐 聚 葡 將 下 。 件者 條徵 之特 化其 醇為 元酵 多元 全多 完糖 以聚 可葡 第 圍 範 利 專 請 甲 如 為 係 醇 元 多 糖 聚 葡 基 基 。 羧者 該醇 , 元 中多 其糖 - 聚 法葡 方基 之甲 項羧 烷 物 合 化00 該 中 其 法 方 〇 之者 項劑 1 炎 第消 範劑 利瘍 專腫 請抗 申為 如係 5 物 _ 合 化 藥0 該 > ο 中者 其 物 _ ，合 法化 方藥 之醫 項之 1 得 第而 圍環 範酯 利內 專成 請形 申為 如係 6 本紙張/1度適用中S國家福準（C N S ) A 4規格（210 X 297公¢) 1 3 8 9 54 409058 經濟部中央標準局員工福利委員會印製 H3 7.如申請專利範圍第1項之方法，其中，於該有機胺鹽 類與翳藥化合物、或與已與酹槩化合物结合之間隔基 的反懕中，馀使用形成内酯環之路藥化合物、或已與 形成内酯環之醫藥化合物结合之間隔基者。 8·如申請專利範圍第7項之方法，其中，該如申請專利 範圍第6項所逑之由形成内酯環而得之醫藥化合物係（ 15,95)-1-胺基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-經基-4-甲 基-1[{，121^-笨并[(^]吡喃并[3',4，：6,7]吲睬肼并[1, 2 - b ] 〇f 啉-1 0 , 1 3 ( 9 Η , 1 5 Η )-二嗣者。 9. 一種具有羧基之多糖衍生物之有櫬胺鹽類，係用以製 造藥物複合體者，該藥物複合體係由具有羧基之多糖 衍生物與S藥化合物之殘基介由一個胺基酸作為間隔 基或介由2〜8傾胺基酸之胜肽作為間隔基结合而成之 藥物複合體，或由具有羧基之多糖衍生物與Β藥化合 物之殘基不介由這些間隔基结合而成之槩物複合體。 3 8 954 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )Α4規格（210X 297公董)