A7 _B7_ 五、發明説明（） 琎昍赀鲁 發昍頜城 M i t ο X a n t r ο n e (M i t ο X)，一種抗腫瘤劑 1，4 -雙（胺基 垸基胺基）憩-9,10-二酮，為目前在白血症和淋巴瘤之臨 床處理以及乳癌和卵巢癌組合治療之中取得重要地位者。 雖然Mitox比doxorubicin (Dx)和其他的憩環素（anthra-cyclines)具有改良的耐受性範圍，此種藥物沒有明顧的 毒性副效應，尤其是與脊髓抑制和心臓毒性相闞者。特別 者，於先前使用愨環素治療過的患者中，充血性心臟衰竭 為一種嚴重的臨床顧it (有關micoxantrone的治療和毒性 學資料之最近評論，可參看Faulds，D. ; Balfour, J.A.; Chrisp, P.; Langtry, H.D.之〃 Mitoxantrone，其藥效 學和藥物動力學性質的回顧*及其在癌症化學治療中的治 療潛能 ’’ （Mitoxantrone，a Review of its Pharmacodynamic and Pharmacokinetic Properties, and Therapeutic Potential in the Chemotherapy of Cancer)， Drugs 1991, 41, 400-449)° 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
Mi tox的细胞破壞機制在其等性質上可能為多模式者 :有許多研究推測嵌到DNA為主要的细胞结果。核酸束緊 及對DNA-拓撲異構酶E活性的干擾導至蛋白質结合- DMA股 斷裂亦被提出作為導致Mi tox誘使细胞死亡之翮鍵结果。 藉由抗腫瘤劑憩-9,10-二酮，包括Mitox，的细胞破壊作 用也被歸因於氧化性新陳代謝，其専致足使DNA烷基化及 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉ΑΊ規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 i、發明说明（） /或DN A切斷的自由基形成·促成無蛋白質结合的DN A股斷 裂。不過，一般相信喹啉部份的氧化還原性環化（red ox-cycling) 與 Mi tox所具 心臟毒 性副效 應的關 聯性可 能比與 其抗腫瘤活性的機制之關聯性更有關。Mi tox和DX的心臓 毒性也已証實與其相鄰羥基與喹啉基的金羼绀合能力有關 。蘖物一金屬複合物的形成可能經由金臑催化型反應增進 氧化遷原性環化（Shipp， N . G . ; DORR , R.T. ; Alberts, D.S. ; Dawson, B.V. ; Hendrix, M.之”實驗性 Mitoxan-trone 心臓毒性的鑑定及其在培養新生老鼠心臟细胞被 ICRF-187 的部份抑制” （Characterization of experimental mitoxantrone cardiotoxicity and its partial inhibition by ICRF-187 in cultured rieonatal rat heart calls), Canner Res. 1 9 9 3, 5 3, 550-556)
Mi tox的顯著臨床活性使得第二代憩二嗣同源物的開 發成為引起興趣的研究領域。至今為止，有許多研究已投 入側鏈性質變異之探討及羥基取代基及/或側鏈的再定位 ο 於恝輥發色基內導入雜原子為一種相當未被探究過的 作法，而這種改變可能明顯地影響分子與生物標的物之交 互作用。特別者，憩輥的雜環類似物a)必須基本上保留 與母藥物相同的空間和平面持性以供宿主分子辨識，例如 DNA嵌入，及b)可能導入額外的氫鐽或鹼性部位•任一 者都可能增加藥物對DNA的親和性及/或影響與拓樸異檐 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂· 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __B7____ 五、發明説明（） 酶的I的交互作用。此外，該雜原子類似物可能具有變更 的氧化遢原性質。 有幾種氮雜類似物已被製備成且篩選過（Krapcho，A.P. ，"6,9-雙（經取代胺基）苯並[g]異喹啉-5,10-二酮" PCT國際申請案 WO 92/15300，九月17日，1992(其併於本 文以為參考）；灰.？.1^&?(；11〇等人：6,9-雙[(2-胺基烷基） 胺基苯並[g]異喹啉-5 ,10-二酮。一種新穎類別的經發色 基改質抗腫瘤劑憩-9 ,10-二酮：合成與抗腫瘤劑之評估J. Med. Che m.(1994)，付印中（其併於本文作為參考））。 於這些化合物中，M6, 9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並 [g]異喹啉-5, 1Q-二酮二馬來酸鹽在抗腫瘤實驗模式中為 最具活性者。 另外，雙[(2-胺基乙基）胺基j苯并[g]異喹啉-5, 10-二酮二馬來酸鹽分別於老鼠和小鼠體内均施K單次和多次 處理，其都對心臓組镟沒有任何明顯的毒性效應。在對老 鼠K约等於LD ,。和LD s 〇的劑量單次處理之後，化合物 6,9-雙[(2-胺基乙基）基]苯并[g]異喹啉-5,10-二酮二馬 來酸鹽比Mitox誘導出較低的紅血球減少症（erythropenia) 和血小板減少症（thrombocytopenia)。這種有利的能力傾 向也在小鼠體内多次處理後，與使用MitoxantroneM等活 性劑量對老鼠白血病模形進行比較中獲得肯定。 可惜地|該化合物的化學開發因該化合物的低純度水 平（低到9 6%的純度）而面臨預料外之困擾。此外*該化 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· 訂. i線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐） A7 B7__ 五、發明説明（） 合物的分析發展顯示出含有未知的雜質，其係在製備程序 的最後步驟中形成者且其在使用任何現行可用之純化方法 也無法脫除掉。由於該未知雜質佔有2%K上的量，且這 些未知雜質中之一棰就佔有1.3% ·因為若未知雜質係Κ 這種明顯含量存在時，管理當局都要求對這些未知雑質作 充分的檢測，因此該化合物的開受到嚴重地妨礙。 搿明槪怵 本案申請人已發現新穎的改良方法Κ合成6, 9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5，10-二酮及其二馬來酸 鹽。經由本發明新穎改良之合成方法，該化合物可得到大 於9 9%的純度。 搶圖夕簡聪說昍 圖1 : HPLC分析顯示本發明化合物，第6尖峰，和經 鑑定過雜質之混合物。 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 圖2 :用先前技藝J. Med Chem·或W0 9 2 / 1 5 3 00用於 製備二馬來酸鹽之方法製得本發明化合物實際樣品之HPLC 分析。在長滯留時間的尖峯，尖峯7，8，和9 ，為未知 雜質。 圖3 :用本發明方法A製得本發明化合物之HPLC分析 〇 圖4 :用本發明方法B製得本發明化合物之HP LC分析 0 本發明化合物^仝成 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）
A7 B7 五、發明説明（） 本發明化合物，6，9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g] 異喹啉-5 ,10-二嗣或其二馬來酸鹽係使用兩種改良方法而 製得，其中所製得之化合物具極高純度。 6, 9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異唼啉-5,10-二 _於自由鹼形式時是不安定者，因為其在溶液中會非常迅 速地環化而產生化合物la和lb，其在HPLC中任一化合物形 成兩個不同尖峯（參看圖1)。
再者，其自由鹸非常易溶於水中；所Μ，其很難K有 機溶劑萃取且非常難Μ處理和纯化。 此外· 6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5, 10-二酮的其他鹽，例如二鹽酸盥等I會因為實質地過於 酸性而在靜置時分解。事實上，6, 9-雙[(2-胺基乙基）胺 基]苯並[g]異喹啉-5, 10-二酮化合物在酸性PH (低於2.5 以下）會分解而形成失去一側鐽的2a和2b化合物。2a和2b 化合物在HPLC中為不可區分者，因而形成單一尖峯（參看 圖1)。所有上述分解產物都Μ雜質形式存在於6,9-雙 [(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5,10-二酮中（參看 圖2，尖峯3，4和5)。而其二馬來酸鹽則相反地具有 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝- 訂 丨線 經濟部中央榡準局負工消費合作社印装 A7 B7__ 五、發明説明（） 優異的内在安定性。 揭示合成6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉 -5,10-二嗣及其二馬來酸鹽的先前技藝方法為下面所列者 1) W0 92/15300 和2) A.P.Krapcho 等人之 〃 6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5 ,10-二嗣。一種 新穎類別的經發色基改質抗腫瘤劑憩-9, 1Q-二酮；合成及 抗腫瘤劑之評估w ，J. Med. Chen (1994)，付印中。 所報導過的合成程序係使用6, 9-二氟苯並[g]異喹啉 -5 ,10-二酮作作為主要中間體。該化合物與乙二胺反應而 產生所要的6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5, 1 0 -二酮。 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 另一種方法為涉及6 ,9-二氟苯並[g]異喹啉-5,10-二 酮與單第三丁氧羰基-乙二胺（B0C-乙二胺）反應•然後 Μ無水H C 1脫除掉保護性B 0 C基而得到6 , 9 -雙[(2 -胺基乙 基）胺基]苯並[g]異喹啉-5 ,10-二酮二鹽酸鹽。因為HC1不 會與較低酸性的馬來酸交換，所M HC1鹽轉換成安定的二 馬來酸鹽係不可行者。再者•該HC1鹽一溶解在水中即分 解掉。 另外，先前技藝之合成方法1 )未能導致製備具有纯 度髙於96.1%的6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹 啉-5, 10-二酮或其二馬來酸鹽，且2)不能遊免存有在程 序最後步驟所形成之未鑑定雜質。圖2所示為根據先前技 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（） 藝之程序，製備典型批料6,9-二[(2-胺基乙基）胺基]苯 並[g]異喹啉-5 ,10 -二酮二馬來酸鹽的HPLC分析结果：其 中含有三種未知雜質（參看尖峯7，8和9> ,其量為2 上且其中之一（即尖峰8)的含量為約1.3 %。經由 下列程序後該化合物的純度無法再增高且該等未知雑質的 存在也不能避免： --在不同的溶劑或溶劑混合物中重複懸浮或再结晶後， 該等未知雜質的量保持固定， 一一管柱層析術· 一-或，在不同溶劑内和不同溫度下實施合成程序的最後 步驟。 此外’根據先前技藝之方法•於最後步驟的處理期間 ，於粗製二氫氟酸鹽懸浮液的存在中得到為二馬來酸盥的 該化合物沈澱。從未能達到完全的溶液。於該方法的擴大 規格中，該懸浮液可能導致非均質產物，其可能捕捉住其 他鹽及/或含有非所欲物質（如，不溶物，雜質）。最後 產物的完全溶解，至少在最後步驟中溶解一次，係為得到 意圖用於哺乳動物治療的轚藥化合物之重要先決條件。 先前技藝合成程序的這些典型缺點構成本發明化合物 製備和發展的嚴重障礙。管理當局通常不會允許使用含有 其纯度低到9 6%的活性主成份之藥物為人類治療所用，特 別為若未知雜質含量高於2%K上者。 本發明頃令人訝異i提出新頴方法，其可用來得到純 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 11".----f-If— (請先閲该背面之注意事項再填寫本頁) 訂 • '···(' 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（） 度高於97%，且較佳大於99%的6,9-雙[(2-胺基乙基）胺 基]苯並[g]異喹啉-5,10-二酮及其二馬來酸鹽，其所含各 雜質的量皆低於0.5 %，且其所含各種未知雑質的量皆低 於0.2%，亦即•在分析方法的偵测搔限Μ下。 6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5 ,10-二 _和其二馬來酸鹽之形成可用下述方法中的任一種： 方法A :包括下述新穎特性： —— 6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g】異喹啉-5 ,10-二 _與乙二胺的反應係藉由逆添加（inverse addition) ，亦即，將固體6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g] 異喹啉-5, 10-二酮鑀慢地添加到大量於THF溶液之二 胺。 —-得自於反應混合物之6 ,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並 [g]異喹啉-5,10-二酮粗二氫氟酸鹽完全溶解在PH=5 之水與乙酸中；然後過濾該溶液並添加馬來酸水溶液 使二馬來酸鹽從上述溶液中结晶出來。 該逆添加和添加速率本身對於產物的高純度具闞鍵性 且可用來得到非常高的產率（92%)。此外也非常重要者 為溶劑的選擇：使用THF取代吡啶可改良產率。粗製二氫 氟酸鹽的溶解對於最後產物的高純度和均質性也具重要性 。此外，進行溶解所用的pH值也具避免形成其他非所欲雜 質之關鍵性。完整的程序述於下文實施例1之中。 遣k B包括下列新穎特性： -10- 本紙張Λ度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝. 訂·· 線 A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 i'發明説明（） 〜一中間體6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5, 10-二嗣與單BOC-乙二胺反應並將所得中間體6,9-雙 [2[N-第三丁氧羰基}胺基】乙基]胺基]苯並[g]異喹啉 -5, 10-二酮用三氟乙酸處理以得到粗製6,9-雙[(2-胺 基乙基）胺基]苯並[g ]異喹啉-5，1 0 -二醑三氟乙酸a ，然後將其完全溶解於水中，用NaOH調整PH值到4.2 ，並過滅之； ~ —用馬來酸水溶液處理上述粗製三氣乙酸鹽溶液而结晶 出純的6,9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5, 1 0 -二嗣二馬來酸鹽。 其完整程序述於下文實施例4之中。 吾人訝異地發琨Μ三氟乙酸取代經脫除B0C-保護基所 得之相對應粗製三氟乙酸鹽後可得所欲6,9-雙[(2-胺 基乙基）胺基]笨並[g]異喹啉-5,10-二萌二馬來酸鹽 0 闞鍵中間體6,9-二氟苯並[g]異喹啉-5,10-二酮的製 備可用多步驟之改良程序予K完成。彼等改良可達到增加 產率並且使該方法得以擴大規模，此為6,9 -雙[(2 -胺基乙 基）胺基]苯並[g】異喹啉-5 ,10-二酮的路藥發展所必需者 Ο . 1，4 -二氟苯與吡啶-3, 4-二羧酸酐，在氮化鋁存在中 反應產生4-(2’，5’-二氟笨甲醢基）菸鐮酸和3-(2，，5，-二 氟苯甲醢基）異菸鹸酸混合物之程序係依下述修改進行： -11- 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐)~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 線 經濟部中央標準局貝工消费合作社印策 ΑΊ _Β7___ 五、發明説明（） 在回收過量的1,4-二氟苯後，用硝基苯稀釋反應混合物· .然後慢慢地倒至水中。先前技藝程序則需於回收過量的1, 4-二氟苯後，在全部半固體反應混合物中加入水：此步驟 極具危險性且不適合於大規模製造*因為氯化鋁與水反應 極具放熱性之故。新的處理步驟係將殘留的鋁錯合物和過 量的氯化物之溶液慢慢地加至極高過量的水中。 所得之4-(2’，5’-二氟笨甲醢基）菸鹼酸和3-(2’，5’-二氟苯甲醢基）異菸鹼酸的混合物然後置於20 %發煙硫酸 中進行環化反應，其改良處在於進一步逐部份加入更多的 2 0%發煙硫酸以使產率增加到高達81%。 靱備例1 : 3.4 -Μ啶二羧醚醉夕靱備 於氮氣圍下，97%纯度的3,4-吡啶二羧酸（152克， 0.88莫耳）於乙酸酐（450毫升）之懸浮液被加熱到回流 並使之完全溶解。在達到回流溫度之時*於大氣壓下在超 過約1小時期間藉由蒸餾移除溶劑（收集到約4 0 0毫升） 。經觀察，蒸氣溫度從約1 3 2 〇增高到1 4 Q t：並在内部溫度 達到1 5 0 - 1 5 5 Ό時，停止蒸餾。將反應混合物冷却到7 0 t； 並於搅拌下逐滴加入t-BuOMe ( 4 5 0毫升）。於約40亡時沈 澱出深黑色固體，同時諶溫度自然地降到20-25 t。將懸 浮液繼缠冷却到〇 - 5亡並攪拌兩小時。於氮氣圍下，過逋 收集深灰色沈澱物，用t-BuOMe ( 100毫升）清洗並真空乾 燥（20托；3〇·Ό ; 2小時）得到3，4-¾啶二羧酸酐（1〇〇 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（2丨0><297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂.- 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 i、發明説明（） 克；產率7 6%)，其將直接用於下一步驟中。 3 ,4 -吡啶二羧酐對大氣溼氣具高度敏感性，所K必須 在氮氣下處理並在Pz 上貯存。 熔點：72-74 Ό 製傕例: 4-(2’，5*-二氟苯甲醢基）菸鐮酸和3-(2’，5’-二氟苯甲藤 基）異菸鹼酸 將3,4-吡啶二羧酸酐（95.7克，0.67冥耳）和九1(：13 (367. 3克，2.67萁耳）同時但分開成五郜份（每隔15分 鐘一份）加至沸賸的1，4-二氟苯（650牽升，900之中 。最後添加後之約一小時*在常壓下藉由蒸餾脫除大部份 的1，4-二氟苯直到獲得稠物團為止。將溫度降到80L並加 入硝基苯（150毫升）K溶解該殘餘物團。於仍熱之時， 所得溶液小心地倒入冰冷且攪拌之水中驟冷（1 〇 〇 〇克的冰 和5 3 0克的去離子水）（即將該溶液慢慢地滴到冰水内） 。然後在0-5 t下，於該傾注後所得混合物中加入濃HC1 (3 7 % · 1 6 0毫升）並繼續攪拌約3小時。過漶收集脂資 狀米色沈澱物（約150克溼重）•水層由硝基苯層分開後 ，用AcOEt萃取（6 X 500毫升）。用石油醚（400奄升） 稀釋硝基苯曆並過滤收集少量的沈澱物（約2克）。將合 併萃取液真空濃縮，所得殘餘粗製固體（約45克）與先前 收集到的沈澱物一起懸浮於A c 0 E t /硝油醚（1 / 1)混合物 (6 0 0奄升）。置於室溫下約2小時後，過濾懸浮液並真 -1 3- 本紙张尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注項再填寫本頁) .裝 訂· A7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印装 五、發明説明（） 空乾燥得到4-(2’，5’-二氟苯甲醢基）菸驗酸和3-(2’，5’-二氟苯甲醢基）異菸鹼酸混合物（147克，84%產率）為 淡米色固體。 熔點：214-216T 戰借例3 : 6.^)-二氬笼邰「《1異喹啉-5.10-二_ 4-(2’，5’-二氟笨甲醢基）菸鹼酸和3-(2’，5’-二氟苯 甲睡基）異菸鹼酸混合物（120克，0.45 6莫耳）在20%發 煙硫酸（180毫升）的溶液被加熱到140 C。於约30分鐘 後，更多2 0%發煙硫酸（120奄升）以每次3 0毫升共四部 份·於每隔20分鐘加入該熱反應混合物。於最後一次添加 後2 0分鐘，反應混合物冷却至約80Ό，然後倒至冰的去離 子水之上（3000克冰和3000奄升水）。用40%NaOH(850 毫升）將驟冷後的反應混合物之pH值調整到1 ，觀察到黃 棕色沈澱物形成。於0-5它下約一小時後，滤出粗製沈澱 物且真空乾燥而得粗製6,9-二氟苯並[g]異喹啉-5, 10-二 酮（98.5克）。將該反應粗製物溶解在兼沸的THF( 1000 毫升）之中，用活性炭（9克）將熱溶液脫色，過漶並濃 縮到約3 0 0毫升之體積。在0 - 5 10下冷却約2小時後，過 滤收集黃色固體而得具分析純度的6,9-二氟苯並[g]異喹 啉-5，1 0 -二酮（9 0 . 6 克，8 1 % 產率）。 熔點：197-199¾ 奮細例1 : -1 4 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· -η 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS } Α4規格（210X297公釐）
經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 Λ'發明説明（） 6，9-雙[(2-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5, 10-二酮二 馬來酸鹽 於溫熱（55¾)的乙二胺（154.4奄升，2.29莫耳） 之1'1^(14()()毫升）溶液中，在超過2.5小時期間分數部份 加入6, 9-二氟苯並[g]異喹啉-5,10-二嗣（70.1克，0.29 其耳）（每部份約4.6克/10分鐘）。將該混合物置於相 同溫度下攪拌3小時，逐漸形成藍色沈澱物。於251C下攪 样一晚之後，於氮氣圍下過滹該懸浮液，用THF (200奄升） 清洗並真空乾燥（1 5托，6 0 υ，3小時）得到粗製6，9 -雙 [(2-胺基乙基）胺基】苯並[g]異喹啉-5, 10-二酮為二氫氟 酸鹽（117克）。 將粗製產物直接溶解於水（ 2 3 4 0毫升）及Ac0H(40毫 升）混合物內而得到深藍色溶液，其pH值約為5，將其K 玻璃纖維濾紙過漶。該pH值對於防止反應產物的任何降解 非常地重要。過滹後溶液於室溫下逐漸以3 Μ馬來酸的經過 濾水溶液（5 8 5毫升）處理而達到ρ Η 3 · 5。在4 0 1C約3 0分 鐘之後，在室溫下攪拌該懸浮液隔夜。過滤出藍色沈澱物 並用另外的水（3 X 80毫升）和EtOH (3 X 100毫升）清 洗後，真空乾燥（15托，6 01C，4小時）而得到粗製的 6，9-雙【U-胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹啉-5 ,10-二酮二 馬來酸鹽（1 6 8克）。 將該粗製二馬來酸鹽懸浮在水（3 180毫升）中並加熱 到50¾達3Q鐘。於25Ό下攪拌一夜後，再過濾該懋浮液， -15- 本紙張尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4規格（210X297公釐） (诗先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7 __ 五、發明説明（） 用額外的水（3 X 100奄升）濟洗並將該溼物質再懸浮於 水（ 2 4 0 Q奄升）且於室溫下保持攪拌約40小時。 濾出該二馬來酸鹽，用另外的水（3 X 10 0奄升）和 EtOH ( 3 X 100毫升）清洗後•真空乾煉（15托，6〇υ達 4小時•然後40¾達一夜）而得到6, 9-雙[(2-胺基乙基） 胺基]苯並[g]異喹咐-5,10-二萌二馬來酸鹽（146.7克， 92%產率）。 HPLC分析（水，CV/Vis偵測器486，泵510): 管柱 ：Lichrospher C18 (5微米）t.a. 洗提劑：H2 O/CH3 CN/ 二氧陸園 7 5 /2 0/5 庚烷磺酸納（20奄莫耳） pH.= 3 · 0 (用 H3 P04 調整） 流速 ：1毫升/分 偵测器：UV ( 2 4 5 ΠΒ) r . t. : 1 2 分 HPLC純度（面積％) = 9 9 . 586% ;參看圖 3 ·第4尖 峯之1 H-NMR分析[Brucker 200 MHz分光儀，化學偏移 (5)係由内標準Me4 Si的下游場之每百萬之份數（parts per million)表示] (δ ; D2 0) :3.30 (m, 4H) ; 3.70 (m, 4H)； 6.05 (s, 4H) ; 7.05 (s, 2H)； 7.70 (d, 1H) ; 8.70 (d, 1H)； 8.95 (s, 1H). -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） " (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝- -1--訂： 線 經濟部中央標準局貝工消費合作社印策 A7 __B7___ 五、發明説明（） 在氮氣圍下，於超過3小時期間*將二碳酸二第三丁 酯（2 9 0 . 8克，1 . 32其耳）於無水THF ( 1 2 0 0毫升）之溶液 慢慢加到冷却（0 C )且攪拌中的1，2-乙二胺（268毫升 ，4其耳）於THF (3600毫升）之溶液。在IOC達3小時 ，然後於室溫下約16小時之後•真空脫除掉溶劑。將殘餘 黃色油吠物（約230克）溶解於異丙醚（460毫升）中並用 鹽水（50奄升）清洗。將有機溶液Μ硫酸納（50克）乾烽 後，濃縮到小體積並減壓蒸餾（8托，119-121 t!)而得 N-第三丁氧羰基-1,2-乙二胺（161克，76%產率*相對於 二碳酸二第三丁酯）。 NMR ( CDC13 ， δ ) 1.3 (s, 2Η,與 D2 〇交換），1.4 (s， 9Η), 2.7(bt， 2Η), 3·1 (dd, 2H), 5.4 (bs , 1H) 窖_例3 於氮氣圍下，6 , 9-二氟苯並[g】異喹啉-5 , 10-二嗣 (15克，0.061萁耳）和N-第三丁氧羰基-1,2-乙二胺（49 克，0.305莫耳）在無水N-甲基毗咯烷嗣（300奄升）中的 溶液加熱到6 Q t；。於約4 . 5小時之後，將反應混合物稍微 冷却（5GC)，再傾倒在授拌去離子水（150 0毫升）。在 室溫下繼缅授拌2小時•遇瀘收集深Μ色沈澱固體並用水 清洗。粗製的經過濾沈溅物再懸浮於水中（150 0奄升）， 過濾並真空乾煉。將該反應粗產物溶解於热的二氯甲烷及 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ' ~~ I丨丨：----「裝！ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -JL·. 訂.- •Γ 線 Α7 Β7 經濟部中央標準局貞工消費合作社印製 i、發明説明（） 甲酵（1/1* 50 0¾升）混合物中•在玻璃雄維濾紙上過濾 該溫热溶液並冷却到1 0 - 1 5 Ό達兩小時。於室溫下再靜置 16小時後，遇逋收集深藍色结晶產物並乾煉而得27克的 6, 9-雙[(2-N-第三丁氧羰基胺基乙基）胺基]苯並[g]異喹 啉-5，10-二酮（84% 產率）。 NMR (CDC13 , δ ) : 1.4 (s, 18H) , 3.4-3.7 (m, 8H), 5.4 (a, 2H) , 7.3 (s, 2H), 8 (d, J=6 Hz, 1H), 8.85 (d, J = 6 Hz, 1H), 9.5 (s, 1H) , 11 (m, 2fl) 將三氟乙酸（32毫升· 0·42莫耳）加到6,9-雙[(2-M-第三丁氧羰胺基乙基）乙基]苯並[g]異喹啉-5 ,10-二酮（22 克，0.04 2莫耳）於二氯甲烷（330毫升）之懸浮液中。於 室溫下攪拌16小時之後•用EtOH ( 100毫升）稀釋反應混 合物並真空澹铕。將剩餘油狀物用乙醇（3D0毫升）稀釋 並再濃縮到小體積。於油狀殘餘物中加入去離子水（220 毫升）並用20%K0H水溶液（45毫升）將pH值調整到4.2單 位。在玻璃纖維濾紙上過逋所深到藍色溶液後，與3M馬來 酸水溶液（45奄升，0.135莫耳）混合。K2〇%KOH (24奄 升）將PH值調整到3 . 4單位並將所得混合物於室溫下攪拌 約4 0小時。過漶收集粗製馬來酸鹽並再懸浮於去碥質水 (2 0 0奄升）·溫熱到5 D C逹一小時並在室溫下繼纊攪拌 -1 8 - 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (諳先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· i--訂· 線 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝 A7 _ _B7____ 五、發明説明（） 16小時。過«深藍色固體，用水（2x50奄升）和乙酵 (2 X 50毫升）清洗並真空乾煉得到18· 6克的6,9-雙[(2-肢基乙基）胺基]苯並【g]異喹啉-5 ,10-二酮二馬來酸鹽（80 %產率）。 HPLC分析（水，CV/Vis偵測器486，泵510): 管柱 ：Lichrospher C18 (5微米）t. a . 洗提劑：H2 0/CH3 CN/ 二氧陸園 7 5 / 2 0 /5 庚烷磺酸納（20毫莫耳） PH = 3 . 0 (用 H3 P〇4 調整） 流速 ：1毫升/分 偵测器：UV ( 2 4 5 nm) r.t. : 12分 HPLC純度（面積％) =99.285% ;參看圖4，第3尖 峯之1 H-NMR分析 [Brucker 200 MHz分光儀*化學偏移 (S )係由内標準Me4 Si的下游場之每百萬之份數 （parts per million)表示] (δ ； ΰζ 〇) :3.30 (m, 4Η) ; 3.70 (m, 4H); 6.05 (s, 4H) ; 7.05 (s, 2H); 7.70 (d, 1H) ; 8.70 (d, 1H); 8.95 (s, 1H). 治瘠用途 本發明化合物於M約1奄克至約0.4克/公斤體重範 圃内的量給用時，可作為治療組成物的活性成份，用Μ誘 -1 9- (請先閱讀背面之注意Ϋ項再填寫本頁) -裝 -1Γ . 訂. 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)Α4規格（210x297公釐） A7 B7 五、發明説明（） 導哺乳動物癌症的颸抑及/或舒減。較逋當的劑悬範蘭為 約1奄克至約50亳克/公斤體重/天。可以採用單位劑量 使約70公斤體重在24小時期間給用約70亳克到約3.5克的 活性化合物。該劑量可經調整而相容於其他治療之道*如 輻射治療。 發藥組成物的形式可為錠劑，膠囊，凝膠膠囊，栓第 ，冷凍乾燥粉劑，及靜脈給藥溶液。 --------I 裂-- C請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂·- ^1 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）