TW296387B - - Google Patents

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A 6 B6 80. ί〇· - 4 五、發明説明（工） 本發明一般係關於金靨：肽複合物及其用途’且更特定 言之，係關於金靨：呔複合物而此具有抗氧&及抗發炎作 用0 發明背暑 高活性氧物種如超氧化物陰離子（〇2_),過氧化氫 (Η2〇2)、羥基（0Η)及脂質過氧化物（L00H)等與多種人類疾 病有關。例如，氧基已被証實與下列有闞：自體免疫疾病 、闞節炎，由環境污染、抽香煙及藥劑所造成姐織受損， 手術及移植所致之组織受損，以及各類其它情況（見哈利 威（Halliwell), B . , Fed. Auer . Soe. Exp. Biol. 1 : 358 至 364, 1 987 )。 在傷害反應過程中，呑噬细胞也產生活性氧。在傷口癒 合反應中，早期發生的事實之一係藉中性球及巨噬球清潔 及滅菌傷口。用於此種減菌之機轉係產生高活性的超氧化 物陰離子及過氧化氫。超氧化物陰離子及過氧化氫會在_ 或其它與氧化遒原過程有翮的金靥複合物之存在下產生羥 Μ :羥基係強力氧化劑可引發脂肪酸之游離基氧化並使其 它生物分子發生氧化性變質。 設Μ重的情形之一便是大腦及f髄手術後活性氧物質所 造成的组織傷害，手術及移植（例如心臟）後對缺血姐缬： 再灌注時也有此情形發生。快速地注入充氧血及活化的吞 噬细胞専致超氧化物陰離子及過氧化氫的形成。如上述， MS -3- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本百) .装· •打· A 6 B6

FsiV US. - i 五、發明說明（2) 這些物質真會直接傷及姐嫌並與箱起反懕而產生極活潑的 羥基。 事實也顯示鐵在引發脂質過氧化作用中扮演直接角色。 Fe ( I )/Fe ( B )複合物可充當脂質氧化引發劑。此外，許 多餓複合物可催化脂質過氧化氫分解成為相應的脂質烷氧 基，此脂質烷氧基及又會使遇氧化作用繼績下去。鐵在血 清及姐嫌中之主要儲存位置係鐵蛋白。此種普遍存在蛋白 質（分子量約450,000)每分子可貯存至高達4500個鐵原子 。今已知示超氧化物陰離子可促進鐵從鐵蛋白中移出。此 游離鐵然後又催化脂質過氧化作用並將超氧化物陰離子轉 化成為更具損'害性之羥基。 用Μ產生羥基之機轉說明如下： 中性球*再灌注受傷 超氧化物陰離子 -^ 银蛋白（结合的F e ( ® )) (O Fe ( il ) i-游離 F e ( Π ) v 羥基 _ 脂質過氧化作用及姐織損害 有許多種治療劑己用K預防或限制氧化性傷害。例如， 超氧化物去突變酶（51^6「0>(丨〇16<^丨81111^386>(具32,000道 MS - 4- Ϊ4 210Χ 297 (請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) •装· •訂· ·" A6 B6 80.10. - 4 五、發明說明（3) 爾頓分子量酶），抗氧化劑（如維生素E及C)，及過渡金靨 蝥合劑已顯示可消除這些離子並預防此等離子參與游離基 反應。其他具抗氧化性質之化合物包括甘氨醢基-L-姐氨 醯基-L-離氨酸：綢（I)及其某些特定衍生物，美國專利 第 4,760,051, 4,665,054 及 4,877,770號，其中每一種併 於本文供參考。 如上述，由於病情之嚴重性及發病率的普遍，而活性氧 物質又扮演重要角色，此技藝上確需要有效的抗氧化劑。 理想的試劑應可消除具活性氧的物質，並抑制參與產生此 活性氧物質生的金牖離子（如鐵）之移動|並且能及時出 琨可受傷部位·或產生活性氧物質的情況。 龙發明概沭 簡言之，本發明揭示具有抗氧化及抗炎作用的金靨：肽 複合物。這些複合物可用作有效治療物質，在製成槩時， 可用Μ抑制對姐鎌有害的氧化及發炎過程；製成豁療物品 時可用以加強或恢復溫血動物對氧化或發炎過程所造成的 傷害的抵抗力。 本發明金屬：肽複合物包括命名為Α至I之下列通式化合 物： A :[甘氨醯基-L -姐氨醯基-L -離氨辨-R ]:金屬

其中 I

Ril；含有從1至1δ個碳原子之胺烷基部份*或L -色氨酸， (甘氨_S)V-L-色氨酸，其中y = l至4，L -脯氨醯基 MS -5- f 4 210X 297 {請先閲讀背面之注意事項再瑱寫本頁) -¾. .訂- ·" MU!). . j ^^〇3βγ A6 B6 五、诠明説明（4 ) -Xi-L-苯丙氨醯基-XzSXi-L-苯丙氨醢基-Χ2 ，其中父：及 Χ2係選自L-纈氨酸、L-丙氨酸及甘氨酸所姐成群姐，且其 中XxRXz非皆為L-纈氨酸，（X3)„-L-色氨酸，其中Χ3係 -CH2-或-CH(OH)-部份而 η = 4 至 20，或-（Χ4)„，其中）U 係 天然之碳水化合物如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖胺 或半乳糖胺且n = l至5;而 金羼係鋦（H)或錳（I); B :[甘氨醯基-R i - R 2 - R 3 ]:金靨 其中 涤選自含有L -姐氨醯基，L-(3-W) -姐氨醯基及 L-(5-W) -姐氛'醸基的根，其中W係含有從1至12個碳原子之 烷基部份或含有從6至12個碳原子之芳基部份； 1?2係- NHCH(CH2)NH3 + )C〇 -其中 n = 5 至 10; 尺3係->^2，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份， 或為L -色氧酸，（甘氨_基）：^-1> -色氧酸，其中y = l至4， L-脯氨醯基- Xi-L-苯丙氨贐基- X2，或：^-L-笨丙氨醯基 -X2，其中！^及）<2係選自L -纈氨酸* L -丙氨酸及甘氨酸所 组成群組，且其中Χ，&Χ2非皆為L -纈氨酸> (X3)„-L-色氨 酸，其中X 3係-C H 2 -或-C H ( 0 Η ) —部份且π = 4至2 0，或 -()U)n，其中Χ4係天然之碳水化洽物如葡萄糖、甘Μ糖 、半乳糖、葡萄糖胺或半乳糖胺且η = 1至5 ;而 金_係飼（H )或錳（I ); C :[甘氨醯基-Rt-RzU :金屬 MS -6 - 甲·4.210Χ {請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .装· *訂· ^. 80.10.-4 A 6 B6 五、發明説明（5 ) 其中

Ri係選自含有L-(3-W)-姐氨醣基及L-(5-W)-姐氨醯基， 其中W係含有從1至12俚碳原子之烷基部份或含有從6至12 個碳原子之芳基部份； 1?2係L-離安醯基； R3係- 胺烷基部份而含有從1至18個碳原子，或為 L-色氨酸，（甘氨醯基）y-L-色氨酸，其中y = l至4，L-脯氨 醯基- X2-L-笨丙氨醯基-X2或Xi-L-笨丙氨醸-Χ2，其中X! 及X2涤選自L-纈氨酸，L-丙氨酸及L-甘氨酸所姐成群姐， 且其中乂，及χ2非皆為L-纈氨酸，（X3) n-L-色氨酸，其中 X3 係-CH2 -或'-CH(OH)-部份且 n = 4 至 20 ，或- (X4)n，其中 Χ4係天然之碳水化合物*如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡 萄糖胺或半乳糖胺且η = 1至5;而 金屬係铜（E )或錳（I ); D :[甘氨醯-Ra -R2-R 3]:金屬 其中 R τ係選自含有L -組氨醯，L - ( 3 - W )-姐氨醯及L - ( 5 - W )-姐 氨醯基，其中W偽含有從1至12個碳原子之烷基部份，或含 有從6至1 2個碳原子之芳基部份； R 2除鹼糸胺基酸如精氨酸，鹼糸氨基部份如屍胺、精胺 或亞精胺，或改良的鹼糸胺基酸如己内酯。 R 3係氫原子，-N Η 2 ,含有從1至1 8個碳原子之烷基部份 '含有從6至12個碳原子之芳基部份、含有從1至18個碳原 MS - 7 - . (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾.. •訂· 祕，U). - Ί A 6 B6 五、發明説明（6 ) 子之烷氧基部份*含有從1至18個碳原子之胺烷基部份， 或為L-色氨酸，（甘氨醯）y-L-色氨酸，其中y = l至4 ， L-脯氨醯- X:-L-笨丙氨醢-X2或XfL-苯丙氨^-X2* 其中 乂1及）<2係選自L-纈氨酸、L-丙氨酸及甘氨酸所姐成群姐* (X3)„-L-色氨酸，其中X3係-CH2-或-CH(OH)-部份且n = 4 至20， 或-(X〇n，其中X4係天然之碳水化合物如葡萄糖 、甘露糖、半乳糖、葡萄糖胺或半乳糖胺且η係1至5;而 金屬係銅（I)或錳（I); E: [R1-R2"·甘氨藤-R3]:金屬 其中 1係離氨酷'或- NHCH((CH2UNH3*)C〇 -其中 n = 5 至 10; R2係選自含有L -组氨醯，L-(3-W)-姐氨醯及L-(5-W> -姐 氨醯基所姐成群姐，其中W係含有從1至12個碳原子之烷基 部份或含有從6至12個碳原子之芳基部份； R3係氫原子，-NH2，含有從1至18個碳原子之烷基部份 ，含有從6至12個碳原子之芳基部份，含有從1至18 個碳原子之烷氧基部份，含有從6至12個碳原子之芳氧基 部份，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份，或為L -色氨 ，（甘氨醯基）y - L _色氨酸，其中，y = 1至4，L -脯氨醯 -h-L -笨丙氨醯-X2或Xi-L -苯丙®-， 其中係選 自L -纈氨酸，L -丙氨酸及甘氨酸所姐成群姐，（X 3 ) n - L -色 氨酸，其中X 3係-C Η 2 -或-C Η ( 0 Η )-部份且η = 4至2 0，或 -(Χ4) η - 其中）U係天然之碳水化合物，如葡萄糖、甘茲 MS -8- "Λ· 210X 297 {請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾. •訂. ,^. ?r, : a 6 B6 五、發明説明（7 ) 糖、半乳糖、葡萄糖胺或半乳糖胺且n = l至5;而 金屬係嗣（Π)或錳（E); F : [ R i - R 2 - R 3 - R 4 ]:金羼 其中 R!係L-離氨醢基或-NHCH((CH2)„NH3 + )C〇-其中n = 5至 10 ； R2係選自含有L-姐氨醯基，L-(3-y)-姐氨醢基及 L-(5-W)_姐氨藤基之群姐，其中W係含有從1至12個碳原子 之烷基部份或含有從6至12涸碳原子之芳基部份； R3係鹼系胺基酸如精氨酸，胺基部份如屍胺、精胺或亞 精胺，或改良'的鹼系胺基酸如屍胺； “係氬原子，-ΝΗ2ι含有從1至18個碳原子之烷基部份 ，含有從6至12個碳原子之芳基部份，含有從1至18倨碳 原子的烷氧基部份，含有從6至12個碳原子的芳氧基部份 ，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份|或為L-色胺酸， (甘氨醯）y-L-色氨酸•其中y = l至4，L -腩氨醯一XrL-苯 丙胺笨丙氨醯-X2， 其中Χ:&Χ2係選自L-纈 氨酸、L -丙氨酸及甘氨酸所组成群姐，（X 3 ) n - L -色氨酸， 其中 X 3 係-C Η 2 -或-C Η ( 0 H )-部份且 η = 4 至 2 0，或-(X 4 ) „， 其中U係天然之碳水化合物如葡萄糖、甘茲糖、半轧糖、 韶15糖胺或半乳糖胺且η = 1至5;而 金嵐係銅（H )或錳（II ); 甘氨_基- R2-R3]:金屬 MS -9 - f4 21〇x' (請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) .装· ，訂· 80.10. - 4 A 6 B6 五、發明說明（8) 其中 I係選自含有L -姐氨醢基，L-(3-W) -组氨醯基且 L-(5-W) -姐氨醯基所姐成群姐，其中W係含有從1至12個碳 原子之烷基部份或含有從6至12個碳原子之芳基部份； 1?2係 L-離氨醯基或-NHCH((CH2)„NH3*)C〇-其中 n = 5 至 20 ， 或驗系胺基酸如精氨酸*胺基部份如屍胺，精胺或亞 精胺，或改良的鹼糸胺基酸如己内酯。 R3係氫原子，-NH2，含有從1至18個碳原子之烷基部份 ，含有從6至12個碳原子之芳基部份，含有從1至18涠 碳原子之烷氧基部份，含有從δ至12個碳原子之芳氧基部 份，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份，或為L-色氨酸 ，L-苯丙胺酸，L -白胺酸，L-異白胺酸，（甘氨醯）y-L-色氨酸，其中y = l至4，L -脯氨豳基一X!-L -苯丙氨醯基 -X2或h-L -笨丙氨醯-X2， 其中）^及！<2係選自L -纈氨酸、 L -丙氨酸及甘氨酸，（X3)n-L-色氨酸，其中Χ3係-CH2 -或 -CH(OH)-部份且n = 4至20，或- (X4)n，其中5U係天然之碳 水化合物如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖胺或半乳糖 胺且η = 1至5 ;而 金屬係洞（I )或錳（II ): Η : [ L -丙氨醯基-R ] - R 2 - R 3 ]:金 _ _ 其中 R!係選自含有L-组氨醯* LH3-W卜组氨_基且 L - ( 5 - W )-姐氨醯基之群姐其中W係含有從1至1 2個碳原子之 MS -10- 'f 4;210X 297 (請先w讀背面之注意事項再填寫本頁) .装. •訂· 抓仇-4 A6 - B6 五、發明説明（9) 烷基部份或含有從6至12個碳原子之.芳基部份； 1?2係匕-離氨醯基或-^^〇(((：}12)„“3*)[：0-其中11 = 5至10 » R3係- NH2，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份或L-色 氨酸，（甘氨醯基）y-L-色氨酸，其中y = l至4，L-脯氨醯基 -X : - L -苯丙氨醯基-X 2或X! - L -笨丙氨醯基-X 2，其中X i及 X2係選自L-纈氨酸，L-丙氨酸及甘氨酸·且其中乂：及^非 皆為L -纈氨酸，（X3)n-L -色氨酸，其中Χ3偽_CH2 -或 -CH(OH)-部份且n = 4至20 ·或_(Χ4)η，其中）U係天然之碳 水化合物如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖胺或半乳糖 胺且η = 1至5;'而 金屬係飼U)或錳（I); I :[甘氨醯-Ri-RzU :金靨 其中 RJ% L -離氨醯基或- NHCH((CH2)nNH3+>CCl -其中 n = 5 至 10 R 2係選自含有L -姐氨醯基，L - ( 3 - W )-姐氨醢基及 L - ( 5 - W)-姐氨醯基所姐成群組，其中W係含有從1至1 2個碳 原子之烷基部份或含有從6至1 2個碳原子之芳基部份； R 3係氫原子，-N Η 2，含有從1至J 8 ffS碳原子之烷基部份 含有從6至1 2個碳原子之芳基部份，含有從1至1 8個碳原 子之烷氧基部份*含有從6至12個碳原子之芳氧基部份， 含有從1至1 8個碳原子之胺烷基部份或為L -色氨酸，（甘 MS -11- 'f 4： 210--^97 a ^|) (請先聞讀背面之注意事項再瑱寫本頁) •装. *訂· ·" * .- 一 . 一 A6 B6 五、發明説明（10 ) 氨醢基）y-L-色氨酸，其中x = l至4，L-脯氨醢基-Xi-L -苯丙氨醯基-X2或Xi-L-苯丙氨醢基-X2-，其中及乂2係 選自L -纈氨酸，L -丙氨酸及L -甘氨酸所姐成群姐，且其中 乂1及\2非皆為L-纈氨酸，（X3)„-L-色氨酸，其中X3係 -CH2 -或- CH(OH)-部份且 η = 4 至 20 ，或-（5U)„，其中 <4係 天然之碳水化合物如葡萄耱、甘霹糖、半乳糖、葡萄糖胺 或半乳糖胺且n = l至5;而 金鼷係飼（I)或錳（H);輿 J : [IK-R2-R3]:金屬 其中 1^係選自含'有L -姐氨醯基，L-(3-W) -姐氨醯基及 L-(5-W) -姐氨醯基之群姐，其中W係含有從1至12個碳原子 之烷基部份或含有從6至12個碳原子之芳基部份； R2f^L-離氨醯基，-NHCH((CH2>nHH3 + )C〇-其中 n = 5 至 10 ， 鹼糸氨基酸如L -精氨酸，或厭水糸胺基酸如L -苯胺酸 、L-白氨酸或L-異白氨酸；且 R3 係 L-離氨醯基，-NHCHUCHzhNHs + KO -其中 n = 5 至 10 - 鹼糸胺基酸如L -精氨酸，胺基部份如屍胺、精胺亞精 胺，改良的胺基酸如己内酯，或厭水糸胺基酸如L -笨丙氨 酸、L -白氨酸、L -異丙氨酸；或L_-色氨酸；而 金屬係飼（E >或錳（Π )。 1 在本發明之其它具體實例中•可將螫合劑加至金屬：肽 複合物Μ形成三元的金屬：肽：螫合劑複合物。合宜蝥合 MS -12- (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) •装· •訂. ·" 五 、發明說明（11) 80.10. _ A6 B6 劑包括咪唑及含咪唑化合物，如姐氨酸，及含硫氨基酸類 ’如半胱氨酸及甲碲氨基酸。 本發明亦揭示用Μ強化或恢復溫血動物抵&由某些特定 免疫细胞及其它生理過程釋出的具活性氧物種造成的氧化 或發炎性攢害之方法。此等方法包括Μ本發明所製之治療 有效量之金靨：肽複合物投藥至動物身上。除了上述方法 Μ外，本發明複合物亦可用以強化動物之傷口癒合過程。 本發明其它方面可藉參考下列詳畑說明得知。 用(當行太發明之昜诖椹式 本發明揭示'金鵰：肽複合物，此等複合物具有抗氧化作 用及抗發炎作用。這些複合物在強化及/或恢復溫血動物 抵抗由髙度活性氧物種所造成氧化及發炎之損害上有效， 且可用於製成藥物Μ抑制會損害姐織之氧化性及發炎過程 本發明之金靥：呔複合物具有一種或更多種下列特點以 預防對姐織之氧化性損害，包括： 1)超氧化物去突變酶模擬性活性以移除具反應性的超氧 化物陰離子； 2 )抑制戡從组嫌貯存位置釋出Μ防止形成具反懕性的羥 41 ： 3 )構造部份Μ強化化合物之脂質溶解度並增加此化合物 汴脂質過氧化反應位置之方便性；與

MS -13- (請先聞讀背面之注意事項再填艿本頁) .¾. •訂. 4· 21'：'' 297 a ^ ) A6 B6 五、發明説明（12) 4)構造部份Μ強化對血清蛋白質之结合力且增加化合物 在受傷位置之駐留時間。 本發明金靥：肽化合物包括Μ上Α至I所設計之通式的化 合物類。例如，在式F中，若1^係[-離氨醯基，1?2係[-姐 氨醢基，R3係精氨酸，係正一辛基烷氧基部份，且金屬 係飼（1>，則金靨：肽化合物之構造如下： o + Hc2 2* 2 2 3 :HHHH Η H Nc/CIc丨cl c —N H3' Η Η ο - CIN/ c 2 I- /H Η H 一一 \c 伽HN l· f NHCHCO—l ch2 . I · ch2 ch2I NH C=NH2h ». ,nh2 0(CH2)7CH3 同樣，若係式- nh(ch2)ch3之含三個碳原子之胺烷基 Ρ份，則金屬 :肽複合物 具有下列構造： +h3nchco ― NHCHCO—— 1 ―· NHCHCO --ΝΗ(ΟΗ2)2〇Η3 CHp 1 ch2 ch2 . 1 . - CH? j C=CH I | ch2 . ch2 ί +HN NH W / 1 ch2 1 ch2 I CH NH NH3 + 一- 1 1 - * rt 1 i U >2 M3 —14— 甲 4:210Χ 兮) (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· .訂· " B6 五、發明説明（u) 本發明之對掌胺基酸已設計為L式。然而，精於此項技 藝者可很容了解可利用胺基酸之D式作為用於L式之取代 物0 . 本發明之肽類可藉溶液化學技術或藉固相技術合成之。 一般方法包括逐步將經保護胺基酸加入以姐成所需要之呔 序列。此種方法對精於此項技藝者而言係廣為熟知。本發 明複合物之說明性合成方法陳述於下列實例中。 在本發明中'•可合成者用肽對金靥之莫耳比率為，例如 ，1: 1，2: 1或更大（例如3: 1)。較佳的肽對金屬之莫耳 比率為2 : 1 。太多的肽對金靨之莫耳比率，則造成未結合 (即非蝥合）肽。此種未结合肽並不能恢復或強化抗氧化 或抗炎過程。更甚者*若金屬莫耳數比肽類過剌，則圼鬆 結合且可抑制而非強化或恢復抗氧化或抗炎過程。 在本發明之其它具體實例中，可將蝥合劑加至金屬：肽 複合物中以形成三元的金屬：肽：g合劑複合物。合宜的 發合劑包括眯唑或含咪唑化合物類•如姐氨酸，且含硫氨 鞋的如半胱氨酸或甲硫氨酸。因此，杇金阑：肽複合物係 甘氨榼基-L -姐氨醚基-L -離氨酸：銅（B )，可加入姐氨能 K製桴三元複合物甘氨醯基-L -姐氛齡铥-L -離氨II :銅（ H ):組氨酸。然而•為了形成此種三元複合物 > 必須考 MS -15- {請先閲讀背面之注意事項再瑱寫本頁) •装. •打· 80.10. - 4 A6 B6 五、發明説明(14 ) (請先聞讀背面之注意事項再瑱寫本頁) 慮金靨對肽對蝥合劑之莫耳比率。例如，若肽對金靨之比 率為2: 1，雖然將蝥合劑加至金靥：肽複合物係可能的， 卻是困難的，此係由於呔把位子站掉之故。然而，藉維持 肽對金屬之比率接近於1: 1，可很容易加入螯合基團以形 成三元複合物。肽對金靨對蝥合劑之比率K1: 1: 1較佳 〇 本發明之路藥製劑可含有金屬：呔複合物而與惰性成份 结合，作局部施用（即S藥上可容許的稀釋劑），或含有合 宜的惰性成份用於口服或非經腸施用（即醫藥上可接受的 載體）。稀釋劑或載體不應與金屬：肽複合物交互作用， 此交互作用可'顯著降低其療效。本發明製劑的有效劑量可 每公斤體重給予大約0.01至10毫克金靨：肽複合物。 •訂· 將各成分製成膠束（如裝于硬膠束）K供口服的方法 ， (如塗層硬凝膠）在技藝上已廣為熟知（貝克理査之控制釋 出亘牛物活件試割，約翰惠利父子公司出版I 1 9δ 6年版 ，於此併於本文供參考）。用於非經腸施用之合宜的藥 上可接受的載體，如靜脈内、皮下、或肌肉内注射之方式 包括滅菌水、生理食鹽水、抑菌食鹽水（含0.9毫克/毫克 苄酵之食鹽水）及含有磷酸鹽媛衝液之食鹽水。 本發明豁藥製劑亦可Κ液體形式作局部使用，包括了醫 藥上可接受的稀釋劑如食鹽水及滅菌水，或作洗劑、油資 或凝膠類使用，此類製劑中含有添加成份Μ睽涊所裔織纹 、漶度、拈度及外觀。此種添加成份為精於此項技鉍者所 HS -16- 甲 4ί210Χ 29了乂兮） RO iO. - 4 A6 B6 五、發明説明（15 ) 熟知，其中包含乳化劑如非離子糸乙氧化及非乙氧化表面 活性劑、脂肪醇、脂肪酸、有機或無機鹼、防腐劑、石蟠 g旨、固酵類、三甘油酯類、膦脂類如卵燐脂及鯨蠘脂、多 元醇酯類、脂肪醇酯類、親水性羊毛脂衍生物、親水性蜂 蠟衍生物、烴油類如棕櫊油、可可油、礦物油、可可奶油 蠘類、油類、PH平衡類及嫌維素衍生物類。 局部使用S藥製劑可直接使用一適量的製劑至所需部位 ，如傷口或發炎的部位。所需劑量是可變的，可根據欲治 療之特定病況，病況的嚴重性、及治療期限而定。 若豁藥製劑係Μ洗劑、油齎或凝膠之形式局部使用，則 製萷可含有約' 1 as至約2 0 S；滲透強化劑。滲透強化劑之實例 包括二甲基亞颯（DMS0)、腺及桉樹腦。在欲局部使用之液 態翳藥製劑之情況中|滲透強化劑如DMS0之濃度可佔有豁 藥製劑之約30%至約8096。 赏—1 為了概述下列實例，簧例1至1 6說明了本發明具代表性 的金屬··肽複合物之合成，實例1 7至2 1說明了本發明具代 表性的金屬：肽複合物之抗氧化物活性；實例2 2至2 3說明 了抑制羝從鐵蛋白釋出並抑制脂質過氧化作用，此等作用 偽始木發明之具代表性的金屬：肽複合物達成。 K 言之，宵例1說明了锫將氯化金®加至肽K製蔺本 發叫之金觴：肽複合物。茛例2說明了甘氛酿-L-姐織氨 _ - L -離氨酸正辛酯之合成。賁例3說明（a )睦-L -组氨醯 MS -17- (請先閲讀背面之注意事項再琪寫本頁) 叙· .打. ' · A 6 Β6 五、發明説明（16) 基-L-離氨酸正-硬脂基酯之合成，與》b>甘氨醢-L-姐氨醢 -L -離氨酸正一棕櫊基酯之合成。實例4說明了甘氨醯 -L -姐氨S-L -離氨酸正一辛基醢胺之合成。實例5說明 了甘氨醯基-L-姐氨醯基-L-離氨醯基-L-纈氨醯基-L-苯 丙氨醢基-L-纈氨酸之合成。實例6說明了 L -丙氨釀-L -组 氨醯-L-離氨酸之合成。實例7說明了 L -離氨醯 -L -姐氨 醯-甘氨酸之合成。賁例8說明了 L -離氨醯-L-姐氨醯-甘 氨酸醯胺之合成。簧例9說明了 L-離氨醯-L-組氨醯-甘氨 酸正辛酯之合成。實例10說明了 L -離氨醯-L-姐氨醯-甘 氨醯-L -纈氨醯-L-苯丙氨醯-L-纈氨酸之合成。實例11說 明了甘氨醯基'-L-姐氨醯-己内醯胺之合成。實例12說明了 L -姐氨酵一甘氨隨一L -離氨酸之合成。實例13說明了 L -姐 氨醯一甘氨醯一 L-離氨醯-L-苯丙胺酸之合成。實例14說 明了 L -姐氨醯一甘氨醯一L -離氨醯-L-色氨酸之合成。實 例1 5說明了 L -姐氨_ — L -離氨醯-L -笨丙胺酸之合成。實 例16說明了 L -姐氨醯基-L-笨丙氨藤基-L-離氨酸之合成。 宵例17說明了本發明具代表性的金屬：肽複合物之超氧 ib物去突變酶模擬性之作用此類複合物含厭水性肽類。實 例1 8說明了本發明具代表性的金，暖：肽掏合物而有之超氧 fc物去突變酶模擬活性與改良氨基辛列的關（系。宵例 U說明了本發明具代表性的金屬：呔複合物之超氧化物去 突窣8S之模擬活性，其中金閹是洞（1ί )及M ( II )。宵例 MS -18- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -¾. *訂· ·" A 6 80. - 4 B6 五、發明説明) 20說明了本發明含有添加蝥合基團類之具代表性的金屬： 呔複合物之超氧化物去突變酶模擬活性。實例21說明了本 發明含白蛋白結合部份之具代表性的金屬：呔複合物之超 氧化物去突變酶之模擬活性。 實例22說明了利用本發明具代表性的金靨：肽複合物抑 制鐵從鐵蛋白中釋出。實例23說明了利用本發明具代表性 的金靨：肽複合物抑制脂質過氧化作用。 雖然此處係Μ單一涸字母'' L"代表離氨酸，為了清楚 起見，精於此項技藝者將可知道用Μ代表離氨酸之單一字 母縮寫係"Κ 〃 。因此，Κ在下列簧例中可用以取代L。 化璺品夾源 ' 在下列實例中所使用之化學品及呔中間體係購自若干供 懕商，例如：米蘇里州聖路易城之西格瑪（S i g » a )化學公 司；加州仙卡羅（Sara Calos)城之賓尼蘇拉 (Pennirsula)賁驗室；威斯康辛州米瓦基（Milwavkee)城 之阿迪虛（A 1 d「i c h )化學公司；阿里桑那州杜克生 (T u c s ο η )城維加（V i g a )生化公司；伊州洛克福特 (Rokford)之皮爾斯（Pierce)化學公司；俄亥俄；Η丨克里关 μ之研究生化公司；加州南舊金山城之a瓦持及羅傑 (V a η y a t e「s a η R 〇 g e「s )公司；_ ft 加州托 β 斯 (T o r r a n c e )之貝技（B a c h e m )化學公 0 質.M —丄. 製盤 MS -19- τ; 4 210 '-, ^97 V ； (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .装· .訂. '60.⑴· A 6 B6 五、發明説明（18) 本發明之金饜：肽複合物可Μ下列方式合成：溶解肽在 蒸豳水中，接著加入纯化的氯化金屬，且然後調整溶液之 pH值。例如，具肽對金靨之莫耳比率為1: 1，2: 1或更高 (例如3: 1)的甘氨釀-L -組氨醣-L-離氨酸（、、GHL")之銅 (H)複合物，可藉溶解給予重量GHL於蒸餾水（例如50毫克 /毫升），再加入所需要莫耳數量之純化的氛化铜（Π )而製 得。然後藉加入氫氧化納溶液調整所得肽溶液之pH至約 7.0。類似金靨：肽複合物可K錳（E)製得，此係K如前述 方法Μ氛化錳（Π )取代氯化銅（I〉。代替方式係利用非氯 化金靨之金靨鹽，如乙酸飼（Π)或硫酸銅（Π)° 實例2 ' 甘氛磕-1.-¾日氨醢-丨.-雔氬砝辛酷：锢之合成 將Ν(ε)—苄氧羧基-L-離氨基酸，對一甲苯磺酸單水 化合物及正一辛醇共同與苯Μ共沸去水器在回流液加熱一 整夜。在將溶液溫度降至室溫後|加入乙醚，再將此溶冷 卻。將所得正一辛基NU )— CBZ-L-離氨基酸之對一甲笨 磺酸鹽之粗沈澱物Μ 2Μ碳酸氫鉀處理。再以二氯甲烷萃取 ，經揮發並以閃光柱色素分析純fb (洗劑：9 / 1二氯甲烷 /甲醇）後，得95%的清油狀的正一辛基一Ν(ε )-CBS-L -離 氨基酸酯的自由基。於紅外線光譜上此物質所在的光帶是 3 3 5 0 ( N Η 伸縮），1 7 1 5 (酯 C 0 伸縮），1 5 1 2 (醯氨 I [ ) c m — 1。於 ’ Η抟磁共振儀諶上，在δ 0 . 8 8 ( - C H 3 ) p p m處有一 3 Η三重峰 ，在1.21-1.78(/3,7及5(^2及-((：1)0-)卩口[11處有一 MS -20 - '.y 4:21〇Y」9了公兮) (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾. •訂· .： A6 ~ B6 五、發明説明（19) 1 8 Η多重峰，在3 . 2 Ο ( ε C Η 2 ) p p m處有一 2 Η四重峰，在 3.41(α CH)ppbi 處有一 α 1Η 三重峰，在 4.10(-0CH2_)pp« 處有一211三重峰，在4.84(醏氨！^)口口1«處有一£11^{廣單峰 ，在5 . 0 9 (苯C H 2 ) p p m處有一 2 Η單峰，在7 . 2 8 - 7 . 3 7 (芳香 H)ppm處有一 5Η有一 5Η多重峰。於質譜儀上’在 m / e 3 9 2 ( Μ + ) , 2 3 5 ( Μ * — C 0 2 C H 2 ( C H 2 ) e C Η 3 )及 9 1 ( C 7 Η 7 ♦)處 部有主峰。Μ此測定可測出此化合物的可接受範圍内的正 確的質量及分子量。 將N(ct)—第三丁羰基- N(in) -苯羰基一L -姐氨基酸藉混 合酐法輿上述中間體耦合。總反應時間兩小時後，將此反 應混合物揮發，再加人乙酸乙酯。經清洗、濾過、揮發後 ，得一白色固體。在將此固體以閃光柱色素分析法（洗劑 :7/3乙酸乙_ /二氯甲烷）純化，並以2 -丙醇/水结晶， 即得93%的辛基Ν-(ε ) —第三一 丁羰基- fUim)—苯羰基一 -L -姐氨醯-N ( ε )-笨羥-羰-L -離氨基酸酯。此物質的 1核磁共振儀譜顯示，在50.88(CH3〉ppra處有一 3Η三重峰 ，在1.12-1.79(離氨基酸/3，7及5(:[{2，-((^2)3-， C(C!U)3) ppib 處有一 27H 多重峰，在 4.06(C02CH2-)ppra 處 翁· 2 Η三重峰，在4 . 4 0 - 4 . 5 3 (姐氨基酸a C Η，離氨基酸 a C Η ) ρ ρ ra處有一 2 Η多重峰，在4 . 8_6 , 6 . 0 0及7 . 1 2 (醯氨 Ν Η ) ρ ρ ra處有三1 Η廣單峰，在5 · 0 9及5 . 3 7 (苄甲基C Η 2 ) ρ ρ m 還苻二2 Η單峰，在7 . 2 0 (嘧唑環C ( 4 ) H ) p p m處有一 1 Η單峰 ，在7 . 2 3 - 7 . 4 4 (芳香Η ) ρ p m菡有一 1 0 Η多重峰，在8 . 0 5 ( MS -21 - (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾.. •訂· 80. l〇. - 4 A6 B6 五、發明説明（20 ) 嘧唑環C(2)H)ppib處有一 1H單.峰。 將前面已說明的姐氨基酸α氮，K1/1三氟醋酸/二氯 甲烷在室溫下處理30分鐘的辦法，作選擇性的去保護。纆 Κ飽合碳酸氫納水溶疲中和及以乙酸乙酯萃取後，再揮發 即得η -辛基N(U)苄羧羰-L-姐氨醯一NU) -苄羧羰一L -離氨基酸酯的油狀物。將此自由氨以混合酌法與苄羧羰 甘氨基酸耦合。45分鐘後，作用即完成，然後將此混合液 揮發。將二氯甲烷加入殘渣中。經清洗、過濾、揮發後得 白色固體。再K驟色層分析法（洗劑：1/1二氯甲烷/丙嗣 )純化，即得76!«的油吠η -辛基苄羧羰氨基乙烯基一

苄睽羰基-L-姐氨基- Ν(ε)-苄羧羰基-L -離氨 基酸酯。此物質的1Η核磁共振儀譜顯示•在δ 0.87(-CH3)ppm處有一 3Η三重峰，在1.18-1.91(離氨基酸 /3 ，7 及 5CH2 ，_(CH2)e-，C(CH3)3) ρρπι 處有一 18H 多重峰，在2 . 5 8 - 3 . 1 8 (姐氨基酸/3 C Η 2， 離氨基酸ε CH2)ppm處有一4Η多重峰，在3.84(甘氨基酸〇<(^)09111處有 一2〖丨單峰，在4.〇1-4.16((：〇2(^2-，離氨基酸（1(^)09111處 有一 3 Η多重峰，在4 . 4 4 (氨醯N H ) p p m處有一 1 Η廣單峰，在 4 . 6 β - 4 . 7 4 (姐氨埜酸a C Η ) ρ ρ m處有一 1 Η多峰，在 5 . 0 5 - 5 . 1 5 (笨基ΠΙ 2，氨_ Ν Η ) ρ ρ 琪ίί -·丨1丨廣：單峰，在 7 . 2 0 - 7 . 4 2 (芳香Η ,嘧唑環C ( 4 )丨丨> ρ ρ π處有一 1 6 Η多重峰 ，在7 . 7 8 (氨醯Ν Η ) ρ ρ m處有一]Η廣Si蜂，在7 . 9 7 (嘧唑環 C ( 2 HI ) p p m 處有一 1 Η 單峰。經對 “ 丨丨 5 s N 0 f) X 〇 ; C，6 4 . 6 2 ; MS -22 - f 4 210X 297 ^： Μ ) (請先聞碛背面之注意事項再填寫本頁) •装. *訂- _4i.

H，6.84; N, 9.83 作分析計算後，得：C, 64.37; H， 6.99 ; N, 9.77 ° 將此中間體在室溫下M冰K酸行催化加氫作用一夜，在 以洗過的Celite過漶，揮發並凍晶後得一粗泡沫狀物，再 Μ微结晶嫌維素柱狀正一辛基甘氨基姐氨基- L-.離氨基酸 鹽的三醋酸鹽。此物質，在兩棰不同的溶劑糸統中呈單寧 海特林及Pauly正反應，其正確的氨基酸也一 3Η三重峰， 在1.2〇-1.83(離氨基酸/3,7及5(^2-((：112)0-)??1>處有 一 18H多重峰，在2.97-3. 16(驵氨基酸a CH2)ppb處有一 2H 單峰，在 4.17(C〇2CH2->pp«i 處有一 2H 三重峰•在 4.40( 離氨基酸aCH)pp·處有一 1H四重峰*在7.00 (唯唑唑環 C(4)H)PPm處有一 1H單峰•在7.75(嘧唑環C(2)H)ppm處有 一 1H單峰。氨基酸分析比為：甘氨基酸，1.04;姐氨基酸 ，1.00 ;離氨基酸，0.96。 最後所得產物甘氨醣-L-胺氨醣一離氨基酸的正辛基酯 * Μ水溶解，並與等莫耳的《酸鋦（Π)混合後，即轉化成 鋦（II)複合物。Μ氫氧化納將其pH中和成中性，再將此溶 在3t：下K20,OOOCg離心一小時，除去溶解不良的物霣。 將上層浮液凍晶，即得甘氨醣-L-姐氨醯-L-蘼氨基酸正 辛酯：鋦（11)。 啻拥3 廿氢醣-丨.-姐氣繭-丨-艫親路正-餺酯基酯：鋦（I )之合成 將H·-节氧羰基-L-離氨酸，正一硬脂酵•苯、及對一甲 MS -23- 甲4(210X 297公沒) ......................................................St..............................................ir..............................^ (請先閲讀背面之注意事項再瑱寫本頁) 1 * A6 _B6 五、發明説明（22彳 笨磺酸單水合物之混合物回流過夜•此期間使用迪恩史塔 克捕集器Μ移除水。於冷卻後，加入乾烽丙基醚使缌體積 增加到六倍。容許產物在0Ό 沉澱過夜且過逋。將一部份 沉澱固體加至50毫升碳酸鉀溶液及50毫升二氯甲烷。於萃 取後，分離此層，並將有機相Μ水及食鹽水清洗，然後Μ 無水硫酸鎂乾燥。經過溏、揮發且Κ灌注柱層層析法純化 後，可得Ν•-节氧羰基-L-離氨酸，正一硬脂基酯。 將產物溶於四氫呋喃中，並與Na -第三丁氧羰基-W-苄 氧羰基-L -姐氨酸、氯甲酸異丁酯且N -甲基嗎啡啉相混合 。於揮發後，加入水及乙酸丙酯。將產物萃取成有機相， Μ無水硫酸镁乾燥。經過滤、揮發且以灌注柱層層析法純 化後，可得-第三丁氧羰基- Nim -苄氧羰基-L-姐氨醯基 -Ν β苄氧羰基-L -離氨酸正-硬脂基酯。將此溶於四氫映喃 中，且加入氯甲酸異丁酯、Ν -甲基嗎啡啉及节氧羰基甘氨 酸Κ形成苄氧羰基甘氨醯基-Ν 1 --苄氧羰基-L -姐氨醯 -Ν β -苄氧羰基-L -離氨酸正一硬脂酯。將產物溶於冰醋酸 中並在1 0 %鈀一炭催化劑之存在下氫化一夜。 將所得甘氨醯-L -姐氨鹺-L -離氨酸正一硬脂酷溶於水並 與等莫耳乙酸飼（II )混合，即可轉化成為飼（Π )複合物。 其ρ Η值Μ氫氧化納升高至呈中性^將溶液在3 Γ Μ 2 0，0 0 0 X g離心1小時> W移除難溶物溶：將上層清液凍晶 ，可得甘氨醯_ L -姐氨_ - L -離氨酸正一砰脂酯：銅（II )。 MS -24- ^ I 210 >. 297 ； (請先閱讀背面之注意事項再蜞寫本頁) .訂. ·" A 6 B6 五、發明説明（25 ) (請先閲讀背面之注意事項再蜞寫本頁) 以正一棕櫊酵（或任何其它烷基醇）取代正一硬脂醇，可 合成甘氨醯-L-姐氨醯-L-離氨酸正一棕楢酯（或相當烷酯 )。 啻例4 会成甘氛醣-1.-¾日氨醣-1,-钂氬餘-幸某醣防 將Νβ -第三丁氧羰基- Νβ -苄氧羰基-L-離氨酸在四氫呋喃 中之溶液ΚΗ -甲基嗎啡喃、氯甲酸異可_及辛胺在-15Ό 處理。然後將所得經保護的辛基醯胺在室溫下以50¾三氟 乙酸（在二氛甲烷中）處理，Μ飽和碳酸氫鉀水溶液中和， 並在乙酸乙酯中萃取。揮發後，可得去阻斷的離氨酸醯胺 ，並將之在加至由Νβ-第三丁氧羰基-Κ1"-苄氧羰基-L -姐 氨酸， •訂* Ν -甲基嗎啡_，及氯甲酸異丁酯在乾燥四氫呋喃-15Τ：所 製得之溶液内。 以上法所形成之完全保護之二肽再以下列方式去姐斷基 :Μ 50%三氟乙酸（在二氯甲烷中）於室溫下處理後，接著 Κ胞和的水性碳酸氫鉀中和。在乙酸乙酯中萃取並經揮發 可得部份去阻斷的二肽，將此加至苄氧羰基甘氨酸，Ν -甲 «嗎啡啉，及氯甲酸異丁酯在乾堞四氫呋喃中而在-1 5 °C 之下所製得之溶液內。將所得經保誤之三呔在有1 0 %鈀一 碳存在情形下在冰乙酸中以氫處理。經過獠及凍乾可得甘 氛餡-L -姐氨醯基-L -離氨酸正一辛醯胺之三乙酸鹽。此 物® 具 ’HNMR(300MHz，DMS0-d«i)d8.8(lH，br d , J = MS -25- 80.10. -4 A 6 B6 五、發明説明（24)7) .8.52 (1 Η ,. 8 . 42 (1H , br d, J=7), 8.30(lH,m), 7.22(1H,S) , 4.72(lH,a) , 4.20 (1 H , m) , 3.65 ( 2H，S), 3 . 2 - 3 . 0 ( 4 H，m )，2 . 8 0 ( 2 Η , n ) , 1 · 7 - 1 . 2 (1 8 H，m ). 0 . 8 8 ( 3 H , t，J = 5 ; 〔 a〕D = - 1 0 · 7。（ C 3 , H 2 0 )。 g例5 甘氬瞌-1.-姐氬醣-丨.-錘醵-1,-钃氬縮-l.-笼丙氨醣-1,-钃氛醏 數克量之甘氨醢-L-姐氨醯-L-離氨醯-L-纈氨醯-L-苯丙 氨醯-L -纈氨酸係藉標準溶液相方法合成，此法中係使用 第三丁氧羰基保護基團用於α —氮原子，苄氧羰基團用於 側鍵保護作用'，並混合的酸酐方法行偶合作用。簡言之， L -纈氨酸苄酯對一甲苯磺酸鹽係使用氯甲酸異丁酯及Ν-甲 基嗎啡啉作為偶合劑（在-20 °C歷2小時，然後在環溫歷1 小時）而與第三丁氧羰基-L -笨丙氨酸偶合。然後花 30分 鐘用30¾三氟乙酸（在二氯甲烷中）於室溫下移除二肽之第 三丁氧羰基保護基團。將經阻斷胺基酸（第三丁氧羰基 -L-纈氨酸，-第三丁氧羰基-笮氧羰基-L-離氨酸， Ν β -第三丁氧羰基-Ν 1 --苄氧羰基-L -姐氨酸，苄氧羰基甘 氨酸）依順序加人，並移除第三丁氧羰基保護基團•即可 得所要肽。最後所得Μ的肽使用氫氣在乙酸中而在1 0 % P d - C (鈀一碳）催化劑之存在下花5天時間完全去除保護 、將最终肽從水中凍晶可得三乙骹謅。 Hi MS -26 - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .装* _味. 80.10· A 6 Β6 五、發明説明（25) 合成L -丙氛醣-L -詛親醣-L -艫氬酴 將^-苄氧羰基-L-離氨酸苄酯氫氛酸鹽懸浮於四氫呋喃 (THF)中且使用氯甲酸異丁醏及N -甲基嗎啡啉（2當量）在 THP中而與Νβ-第三丁氧羰基- 苄氧羰基-L-姐氨酸偶合 。於-20 TC下歷2小時且在環溫中又歷1小時後，Μ 2Ν水 性碳酸氫鉀浸濾使反應停止。將產物萃取入乙酸乙酯中， ΚΙ Μ水性檸檬酸清洗，且Μ飽和碳酸氫納清洗。有機相在 無水硫酸納之上乾燥。經過濾及揮發後可得Ν·-第三丁氧 羰基- Ν1”-苄氧羰基-L-姐氨醯基-Νβ-苄氧羰基-L-離氨酸 苄酯。 將產物溶於30¾三氟乙酸（在二氛甲烷中}歷30分鐘，然 後揮發|形成—苄氧羰基-L-组氨稳-苄氧羰基- L-離氨酸苄酯。將此溶於四氫呋喃中|且加入氯甲酸異丁酯 ，Ν -甲基嗎啡啉及苄氧羰基丙氨酸Μ形成笨苄氧羰基丙氨 醯基- -苄氧羰基-L-姐氨醯-Νβ-苄氧羰基-L-離氨酸苄 酯。然後將此種產物溶於乙酸中，並在有1 0 %鈀一炭催化 劑之存在下氫化一夜。將所得丙氨醯-L -姐氨酷-L -離氨 酸冷水中凍晶出來，凍晶幾次後，可得所需三肽之二乙酸 U 此產物具1 Η NHR(500 HHz.D2〇)5 8.49(1II,S), 7.31(1 H,S), 4 . 6 2 ί 1 Η , m ) , 4 . 2 1 - 4 . 0 4 ( 2 Η , m ) , 3 . 2 7 ( 2 li , , J = (3.3), 3 . 0 2 ( 2 Η , t . J = 7 . 1 ) , 1 . 9 4 ( G Η , S ). 1 . 7 y - 1 . Γ) 2 ( G Η , m ) , 1 . 4 0 ( 3 Η , S ) ； ία] D=-4.4； (C 3 , Η 2 0 卜 MS -27- {請先Μ讀背面之注意事項再琪寫本頁) .装· •訂_ .^ 五、發明説明（ A 6 B6 g例7 L-雜氬醮-1.- !日氬醃-甘氛辟之合成 將Νβ-第三丁氧毅基- N1"-苄氧羰基-L-姐氨酸溶於四氫 呋喃（THF)中，並Μ —當量Ν -甲基嗎啡啉中和。然後用氯 甲酸異丁酯及Ν -甲基嗎啡啉使其與甘氨酸苄酯對一甲苯磺 酸鹽偶合。於2 0 υ歷2小時及在環溫歷又1小時後，以 2Ν水性碳酸氫鉀浸濾使反應停止。將產物萃取入乙酸乙酯 中，Κ1Μ水性'檸檬酸清洗•且Μ飽和碳酸氫納清洗。有機 相在無水硫酸納之上乾燥。過濾及揮發後，可得—第三 丁氧羰基- Ntm-苄氧羰基-L-驵氨醯甘氨酸苄酯。 將產 物溶於無水甲酵化氯化氫（在0 C 飽和）中歷5分鐘，接著 減壓移除溶劑，形成V -苄氧羰基-L-姐氨醯一甘氨酸苄 酯。將此溶於四氫呋喃中*並加入氯甲酸異丁 _、Ν -甲基 嗎啡啉、及Ν β，Ν β -二苄氧羰基-L -離氨_基，使形成 Ν'Ν*5 -二苄氧羰基-L-離氨醢基- Mini —苄氧羰基一 L -姐氨 醯一甘氨酸苄酯（在-2 0°C歷3小時，在環溫歷1小時）。 將此產物溶於甲醇/乙酸，1 : 1 UI積/體積），並在1 〇 X 鈀一炭摧化劑之存在下氫化一夜。將所得 MS -28- (請先聞讀背面之注意事項再琪寫本页) .¾. .訂· ^^〇3β7 A6 _B6 五、發明説明（27 ) L -離氨醯基-L-姐氨醯-甘氨酸從水中凍晶幾次，然後在 C-18反相柱上以液態色素分析純化可得所需泡狀白色固體 三呔三乙酸鹽。 官例8 I-躲親雔- I.-铂親藤-甘氛醻赭肱之合成 將Νβ-第三丁氧羰基- N1» -苄氧羰基-L-姐氨酸溶於四氫 呋喃（THF)中，並Κ —當量Η-甲基嗎啡啉中和。然後用氯 甲酸異丁酯及Ν -甲基嗎啡啉使其與甘氨酸醯胺氫氣化物偶 合。於-20t：歷2小時及在環溫歷又1小時後· 2Ν水性碳酸 氫鉀使反懕中斷。將產物萃取人乙酸乙酯中，M1M水性檸 樣酸清洗，且以胞和碳酸氫納清洗。有機相在無水硫酸納 之上乾燥。過濾並揮發後，可得Νβ-第三丁氧羰基- N11»-苄氧羰基-L-姐氨豳基-甘氨酸醯胺。 將產物溶於無水甲酵化氯化氫（在〇υ飽和）歷30分鐘， 接著減壓移除溶劑，形成Nlm -节氧羰基-L-姐氦醯-甘氨酸 _胺。將此溶於四氫呋喃中，並加入氯甲酸異丁酯、N -甲 基嗎啡啉及Ν'Νβ-二苄氧羰基-L-離氨酸Μ形成«-二 苄氧羰基-L-離氨醯-苄氧羰基-L-姐氨醯-甘氨酸醯胺 (在-2 0 °C歷3小時，在環溫歷1小時〉。然後將此種產物溶 於冰醋酸中且在1 (Π鈀-炭催化劑_ 之在下氫化過夜。將所得L -離氨醯-L -组氨醯-甘氨酸醯 胺從水中凍晶幾次，然後在C - 1 8反相柱上以液相色索分析 法纯化可得所要三肽醯胺的三乙酸鹽。 質—19— KS -29- (請先閱讀背面之注意事項再瑱寫本页) .¾. •訂. • . A 6 B6 五、發明説明（28) (請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) L -雔氨醸-1,-细氬醃-甘氧路T 一辛酷之合成 將甘氨酸、辛醇、對一甲苯磺酸單水合物，及苯一起回 流加起超遇24小時，並使用迪恩一史塔克捕集器分溜出其 中的水。於冷卻至室溫後，再加入乾燥乙醚，以抽氣過濾 方式收集甘氨酸辛酯對甲苯磺酸鹽。將此種鹽Μ飽和碳酸 氫納溶液處理且萃取入二氯甲烷中。經揮發後，得到游離 胺，再溶於乾燥的四氫呋喃（THF)中且於-20 t：下加入攪 拌中之P -第三丁氧羰基- W1-苄氧羰基-L-姐氨酸，N-甲 基嗎啡啉，及氯甲酸異丁酯之溶液中，再在環溫下攪拌歷 1小時，然後Μ 2N水性碳酸氫鉀使反應停止。將產物萃取 人乙酸乙酯中，Μ 1Μ檸檬酸清洗且Μ飽和碳酸氫納清洗。 有機相在無水硫酸納之上乾燥，過濾及揮發。 .訂* ·" 將所得經完全保護的二呔酯在環溫下以3 0 S!三氟乙酸（ 在二氯甲烷中）處理歷40分鐘，Μ飽和碳酸氫納水溶液中 和，且萃取入乙酸乙酯中。揮發後，可得到部份去保護的 二呔，再溶於乾燥的T H F中且於-2 0 °C下加人于由Ν β , Ν β -二 苄氧羰基-L -離氨酸· Ν -甲基嗎啡啉及氯甲'異丁酯在乾 燥T丨丨F内之报拌的溶液中。將所形成完全保護的三肽脂在 1 0 X鈀-炭催化劑之存在下及環溫下Μ氫氣（在水醋酸中）去 除保護。經由寶力持（C e 1 i t e )矽涵土層過滤，凍乾除水 ，且在C - 1 8反相柱上以液態色素分祈法純化可得所需呈三 乙敌詡形式的三狀酯，。

Hil L -雛氨嵇-I.-組氨磕-甘氛鹺-L -细氬齡-1.-¾丙氨醯-L-缁 MS -30- T ： 210X 2y7^ Af ) 80.10.-4 A 6 B6 五、發明説明（29) 親醚之合成 數克量之L -離氨醯-L-姐氨醯-甘氨醱-L-纈氨醢-L -苯丙 氨醯-L-纈氨酸係藉標準溶液相方法合成，此係使用第三 丁氧羰基保護基團作α —氮原子，苄氧羰基團作側鐽保護 作用，及混合的酸酐方法作偶合。簡言之，L-纈氨酸苄酯 對一甲笨磺酸鹽係使用氯甲酸異丁酯及Ν -甲基嗎啡啉作為 偶合劑而與第三丁氧羰基-L-苯丙氨酸偶合（在- 20°C 歷2小時，然後在環溫歷1小時）。然後Μ 3 0分鐘時間使二 肽之第三丁氧羰基保護基圑在室溫下Μ30% 三氟乙酸（在 二氯甲烷中）移除。依順序加入經阻斷的胺基酸（第三丁氧 羰基-L-纈氨酸，第三丁氧羰基甘氨酸，-第三丁氧羰基 -Nim -苄氧羰基-L-组氨酸，Νβ, Νβ—二苄氧羰基-L-離氨 酸）並移除第三丁氧羰基保護基團，即可得所需肽。然後 Μ 5天時間使最终肽係在1 0 %鈀一炭催化劑之存在下使用 氫氣（在冰醋酸中）完全去除保護，。將最终狀凍晶除去 水巨在C-Ιδ反相柱上Μ液相色素分析法纯化，可產製若干 克所需六肽。 上述系统性合成法証明在Μ最低纯化方法而能提供幾克 所需高纯度的呔之數量以最低方面焓於某些固相方法。 菩例1 1 . 过氨餡-Κ-姐観賴-丨肉磕胺之合成 特！，（ - ) - 3 -胺S - e -己内醯胺溶於四氫呋喃ΓΓ H F )中，然 後使用氛甲酸異丁酯及Ν -甲基嗎啡啉Γ£ T H F中（作為偶合劑 )與Ν ** -第三丁氧羰基-Ν 1 "-苄氧羰基-L -組氨酸偶合。於 MS -51- -4 210 · 2'J7 "4 ) (請先Μ讀背面之注意事項再填寫本頁) .汶· •訂. A 6 B6 Ώ,ί\ 10 五、發明説明（3Ci> -20t：歷2小時及在環溫下歷另1小時後，M2N水性碳酸氫 鉀使反應停止。將產物萃取入乙酸乙酯中’ M1M水性檸檬 酸及飽和碳酸氫納清洗。有機相在無水硫酸納之上乾燥。 經過濾及揮發後，可得到第三丁氧羰基-N1" -苄氧羰 基-L-姐氨醯基-L-己内醯胺。 將上述經保護二肽溶於30%三氟乙酸（在二氯甲烷中）歷 30分鐘，然後揮發，形成N1" -苄氧羰基-L-姐氨醯-L-己内 醯胺。將此溶於四氬呋喃中*且加入氯甲酸異丁酯、N -甲 基嗎啡啉及苄氧羰基甘氨酸K形成苄氧羰基甘氨醯- NiM-苄氧羰基-L-姐氨醯-L-己内醯胺。此產物從乙酸乙酯中再 結晶一次，然' 後溶於乙酸中，並在1 〇 %鈀一炭催化劑之存 在下氫化過夜。將所得甘氨醯-L-姐氨醯-L-己内醯胺冷水 中凍晶幾次，然後在C - 1 8反相柱上Μ液相色素分析法纯化 ，可得所需三肽之二乙酸鹽。 g例1 2 丨，-娟氛臨-甘氨餻-L-雜氬骼之合成 將N a -苄氧羰基-L -離氨醯苄酯氫氛K鹽懋浮於四氫呋喃 (T H F丨中，使用氯甲酸異丁酯及N -甲基喁啡啉在T〖1 F中而 與Ν β -第三丁氧羰基甘氨酸偶合。於-2 0°C歴2小時及環溫 下又1小時後· Μ 2 N水性碳酸氫钾使反應中斷。將產物萃 取入乙酸乙酯中，Μ 1 Μ水性檸矇酸及胞和碳酸氫納清洗：， 有槠相在無水硫酸納之上乾燥。過i«及揮發後，可得Ν β -第三丁氣羰基一甘氨醯基-Ν «-笮氧羰基-L -饀氨酸节龉。 M3 -32- (請先聞讀背面之注意事項再蜞寫本頁) •襄. •訂. * » -· A 6 B6 五、發明説明（51) (請先W讀背面之注意事項再邋寫本頁) 將產物溶於30%三氟乙酸（在二氯甲烷中）歷30分鐘，然 後揮發，形成甘氨醢-Νβ-苄氧羰基-L -離氨酸苄酯。將此 溶於四氫呋喃中，再加入氯甲酸異丁酯、Ν -甲基嗎啡啉及 -苄氧羰基- Ν1--苄氧羰基-L-姐氨酸以形成Νβ -苄氧羰 基、Nlm-苄氧羰基-L-姐氨醢-甘氨醯-Νβ-苄氧羰基- L-離氨酸苄酯。然後將產物溶於乙酸中且在10¾鈀-炭催化劑 之存在下，氫化過夜。將所得L -姐氨醢一甘氨醢-L -離 酸經 水中凍晶幾次可產得所要之三肽之二乙酸鹽。此物 質具MNR(500HZ，D20)§8.29(1H,S), 7.30(1H，S), 4.29(1H, t, J=6.5HZ), 4.20(1H, dd, J=5.3, 7.8), 4.04(2H, AB； J=17), 3.32(2H, t, J=5.8), 3.01(2H，t, J=7.6)，1.98(GH ，S), 1.89-1.81(2H,

in), 1.77-1.65(2H, m), 1.48-1.41(2H, m)； 13C •訂‘ HHR(125MHz, Dz0)§ 183.4, 181.9, 173.0, 172.5, 137.9， 130.2; 121.0， 58.0， 55.3， 45.1， 42.1， 33.8, 29.9, 29.2, 25.8, 25.7. 25.0； 〔a〕 D-l .20 (C2 , Hz0) ° '结例13 L二组親鲩-甘氛瞌-丨，-雜氨醯-L -茉丙氬辟之合成 將铽甲酸異丁酯（6 . 8毫升· 7 . 2_克，5 2 . 5毫莫耳）加至 - ί 5 Γ 的由 N - a - B 0 C - N - G - C B Z -離氨酸（1 9 . 0 克，5 0 . 0 毫莫 U) A N -甲基嗎啡啉（1 1 . 5毫升* 1 0 . 6克，1 0 5 . 0毫莫耳）在 四冠炚喃Π 0 0毫升）中之經榭拌溶液内。於2分鐘後，加入 笨丙氨酸苄酯甲笨磺酸鹽（2 1 . 3克，5 0 . 0毫莫耳）。反應混 -33- -」： · ^ '4 ^ A6 B6 五、發明說明（52 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 合物在-15υ 下攪拌歷1.5小.時後容許溫熱至0=。在此時 ，Μ加入2Μ水性碳酸氫鉀中止反應。產物以乙酸乙酯萃取 (3x150毫升）。结合的萃取物先後Μ 1Μ檸檬酸（3x100毫升 )、水、2MKHC03(3xl00毫升）、水及食鹽水清洗。所得溶 液在硫酸納之上乾燥、過漶、揮發後可得28.25克（91SO 經阻斷（具保護基團）之二肽。此二肽呈白色固體 (Rr = 0 . 94 * 10¾甲醇/二氯甲烷），不必進一步純化即可使 用於下列轉換中。 •訂- 將上述第三丁氧羰基經保護二呔（25.8克，41.7毫莫耳 )在35¾三氟乙酸/二氯甲烷（300毫升）中之溶液在室溫下 播動歷1/2小'時。將所得溶液在真空中濃縮並以2M水性碳 酸氫鉀中和。將產物萃取入乙酸乙酯（3x100毫升）中。結 合的萃取物在硫酸納之上乾燥，經過濾及揮發後可得 3 1 . 0克（約1 0 0 I沒入的溶劑）游離胺基化合物| 此化合物 為白色半固體（R f = 0 . 4 5 , 1 0 %甲醇/二氯甲烷）。 •線· 將氨甲酸異丁酯（6.8毫升，7.2克，52.5毫莫耳）加入在 -15C下由Ν-α-BOC -甘氨酸（8.76克> 50.0毫莫耳）及N -甲 基嗎啡啉（6 . 0毫升，5 . 6克，5 5 . 0毫Μ耳）在四氫呋喃 (1 0 0毫升）中的經攪拌溶液中。於2分鐘後，加人經保護 二肽（2 1 . 6克，4 1 . 7毫莫耳〉在四氮呋喃（1 0 0毫升）之溶液 中。反應混合物在-1 5 t：报動1 . 5小時，S後容許溫熱至 0 Γ。於此時，加人2 Μ水性碳酸铤狎中止反麽。產物以乙 酸乙酯萃取（3 X 1 5 0毫升）。结合的萃取物Κ 1 Μ擰樣酸 (3χ丨00毫升）、水、2Μ KHC03(3x100^升）、水及食鹽水清 f 4' 210.·： ) eo. - 4 A 6 B6 五、發明説明（53 ) (請先閱讀背面之注意事項再瑱寫本頁) 洗。將所得溶液在硫酸納之上乾烽、過滤及揮發後，可得 31.40克（約100¾)經阻斷三肽，此三肽為白色固體 (Rf = 0.66，10¾甲醇/二氯甲烷），不必進一步純化即可使 用於下列轉換中。 將經第三丁氧羰基保_的三肽（28.1克，41,7毫莫耳）在 35¾三氟乙酸/二氯甲烷（300毫升）之溶液在室溫下攪動 1/2小時。將所得溶液在真空中濃縮且以2M水性碳酸氫鉀 中和。將產物萃取人乙酸乙酯（3x100毫升）中。结合的萃 取物在（無水）硫酸納之上乾燥、過濾及揮發後，可得 43.1克（約100¾^沒入的溶劑）游離胺基化合物，圼白色固 體（Rf = 0.26z; 10¾甲醇/二氛甲烷）。 •訂· 將氯甲酸異丁酯（6.8毫升，7.2克，52.5毫莫耳）加入在 -15它由1-(二-082)姐氨酸（21.2克，50.0毫莫耳）及1甲 基嗎啡啉（6.0毫升，5.6克，55,0毫莫耳）在四厘呋喃 (100毫升）中之經揹動溶液中。2分鐘後，加人經保護三 肽（23.9克，41.7毫莫耳）在1:1四氫呋喃/二甲基甲睦胺 (5 0奄升）之溶液。將反應混合物在-1 5 f m動丨.5小時，然 後容許溫熱至0 °C。於此時，加入2 Μ水性碳酸氫鉀中止反 應。產物以乙酸乙酯（3 Χ 1 0 0毫升）萃取结合的萃取物先 後W 1 Μ槔段酸 （3 X 1 0 0毫升）、水、_ 2 Μ K H C 0 3 ( 3 X 1 0 0毫升 )、水及食鹽水清洗。所得溶液在（無水）硫酸钠之i:乾 焊.過濾、及揮發後，可得3 6 . 4 7克（3 9 X )姅胆斷四狀， S Π色固體（R f = 0 . 7 8 , 1 0 %甲酵/二氛甲烷）。此四肽在矽 膠上行驟色層分析（3 甲醇/二氛甲烷）後，可使用於下列 M3 -35- 'r 4 210'v 2y7 *4 必m a 6 _____^_ B6 _ 五、發叼說明（54) 轉換中。 將水加入由經阻斷四肽（10.1克，10, 3毫莫耳）在乙醇 (250奄升）之懸劑中，直到混合物變成極混濁為止（約125 毫升）。所得混合物在氫大氣壓（5大氣壓力）與氯化鈀 (1·83克，10.3毫莫耳）振搖。反應混合物於約1/2小時内 變成澄清。催化劑用過薄法移除，再揮發濾後可得4.12克 白色半固體。將此材料溶於水中、過滤（經由0.2微米尼龍 濾器}，再凍晶可得3 . 87克（67Χ)所要二氫氛化四肽。 實例Μ L-纟.日氨狺-甘氬醯-I.-譃親縮-L-色氡酸之合成 將氯甲酸異'丁酯（2.5毫升· 2.7克，19.4毫莫耳）加入在 -15t 由 Ν-α -BOC-H-ε -CBZ離氨酸（7.0克，18.5毫莫耳） 及N -甲基嗎啡啉（4.3毫升，3. 9.克，38.9毫莫耳）在四氫呋 喃（50毫升）中之經揹動溶液内。2分鐘後’加人色氨酸苄 酯氫氯化物（6 . 1克，18 . 5毫莫耳）。將反應混合物在-1 5 °C 攢動1 . 5小時且然後溫熱至〇 t。於此時’加入2 Μ水性碳酸 氫鉀中止反應。產物Μ乙酸乙S旨（3xl〇〇毫升）萃取。结合 的萃取物先後Μ 1 Μ檸樣酸（3 X 1 0 0毫升）、水、2 Μ K H C 0( 3 X 1 0 0毫升）、水及食镧水清洗。將所得溶液在無 水硫酸钠之上乾燥、過滤及揮發後，可得12.25克 (1 0 0 )經阻斷（保護）二肽。此二呔為白色固ts (R f = 0 . 8 0 , 1 0 X甲醇/二氯甲烷），不必進一步纯化即可使 用於下列轉換中。 將此經保護第三丁氧羰基二呔（25.8克’ 41.7毫莫耳）在 MS -36-

r 4'21〇V (請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) *装· •訂· A6 B6 五、發明説明（55) 35¾三氟乙酸/二氯甲烷（150毫升）中之溶液在室溫攒動 1/2小時。將所得溶液在真空中濃縮，再以2M水性碳酸氫 鉀中和。將產物萃取入乙酸乙酯（3x150毫升）中。结合的 萃取物在無水疏酸納之上乾燥、過濾、並揮發後，可得 11.75克（約100P沒入的溶劑）游離氨基化合物|係白色半 固體。 將氯甲酸異丁酯（2.5毫升，2.7克* 19.4毫莫耳）加入在 -15°C由Ν-α-BOC -甘氨酸（3.24克，18.5毫莫耳）及1甲基 嗎啡啉（2.2毫升，2.1克，20.4毫莫耳）在四氫呋喃U00毫 升）中之經攪動溶液。2分鐘後，加入經攪動之二肽 (10.3克，18: 5毫莫耳）在四氬呋喃（100毫升）中之溶液。 將反應混合物在-1 5 Ό攪動1 . 5小時，然後容許溫熱至 0V 。於此時，加入2M水性碳酸氫鉀中止反應。將產物萃 取入乙酸乙酯（3x150毫升）中。结合的萃取物先後以1M檸 麼(3x100毫升）、水、2M KHC03(3xl00毫升）、水及食 鹽水清洗。所得溶液在無水疏酸納之上乾焯、過濾、並揮 發後，可得1 4 . 1 1克（約1 0 0 S )經阻斷三肽，係白色固體 60， 10¾甲醇/二氯甲烷），此砠斷之肽不必進一步 纯化即可使用於下列轉換中。 將浮保護第三丁氧羰基三肽U 3_. 1克，1 8 . 5毫棼耳）在 3 5 H铽乙酸/二氯甲垸（1 5 0毫升）之溶液在室溫下m動 1 / 2小時。將所得暗紫色溶液在真空中漶縮，再以2M水性 碳_键押中和，可完全去色。將產物萃取入乙酸乙酯 (3 X 1 0 0毫升）中。结合的萃取物在無水硫酸納之上乾燥、 M3 -57- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 叙· *訂· " • 297 ^ ^ A6 B6 五、發明說明（36) (請先閲讀背面之注意事項再蜞寫本頁) 過滤、並揮發後，可得14.7克（約100SS +沒入之溶劑）游離 胺基化合物，係泡狀半固體（Rr〇. 20, 10¾甲酵/二氛甲烷 )° 將氯甲酸異丁酯（2.5毫升，2.7克，19.4毫莫耳）加人在 -151由1-( = -08乙）姐氨酸（7.8克，18.5毫莫耳）及1<-甲基 嗎啡啉（2.2毫升，2.1克，20.4毫莫耳）在四氫呋喃（ 訂. 50毫升）中之經攪動溶液中。2分鐘後，加入經保護三呔 (11.3克，18.5毫莫耳）在1'[^(50毫升）中之溶液。將反應 混合物在-1 5 10攪動1 . 5小時，然後容許溫熱至0 1C 。再加 入2 Μ水性碳酸氫鉀中止反應。產物Μ乙酸乙酯（3x150毫升 )萃取。结合的萃取物先後以1Μ檸樺酸（3x100毫升）、水、 2Μ KHC03(3xl00毫升）、水及食鹽水清洗。所得溶液在硫 酸納之上乾燥、過濾且揮發可得15.8克（84%)經阻斷四呔 ，係黃色半固體（Rf = o.85,i(n甲醇/二氯甲烷），在矽膠 上行色素分析（4¾甲醇7二氛甲烷洗出）後可使用於下列轉 換中。 ·" 將水加至羥阻斷四肽（7.6克，7.5毫莫耳）在乙醇（120毫 升）之懸劑中，直到琨合物呈極混濁為止 將所得混合物 在氫氣壓（5大氣壓）力下與氛化耙（1 . 33克· 7 . 5毫莫耳）振 搖歷1 8小時。催化劑Μ過濾方式移除後，使濾液揮發可得 白色半固Μ。將此物質溶於水中、經由0 . 2微米尼龍濾器 過逋，且凍晶可得2.85克（64¾)所需二Μ氛化四肽，係白 色粉末：「a ] D - 2 1 . 9 ° ( C 2，水）_ ta丄 5„ MS -38- 甲 4 210:\ 297公兮） A 6 B6 五、發明説明（57) 驵氛醸-丨.-雜氬醣-丨，-¾丙氬醏之合成 將氯甲酸異丁酯（3.4毫升· 3.6克，26.3毫莫耳）加入於 -15^由^-〇(-80(：-«-£-08乙-離氨酸（9.5克，25.0毫莫耳 )及N-甲基嗎啡啉（3.0毫升，2.8克，27. 5毫莫耳）在四氫 呋喃（100毫升）中之經攢動液內。2分鐘後，加入苯丙氨 酸苄酯甲苯磺酸鹽（10.7克，25.0毫莫耳）及.N -甲基嗎啡啉 (2.9毫升，2.6克，26.0毫莫耳）在二甲基甲醯胺（50毫升 )中之溶液。將反應混合物在-1 5 Ό攪動1 . 5小時後容許溫 熱至0T：。 此時，加入2M水性碳酸氫鉀使中止反應。產物 以乙酸乙酯（3x150毫升）萃取。結合的萃取物先後K1M檸 檬酸（3x100毫'升）、水、2M KHC03(3xl00毫升）、水及食 鹽水清洗。所得溶液在無水硫酸納之上乾烽、過濾、並 揮發後，可得15.5克（100¾)經阻斷二肽|呈白色固體 (Rf = 0.72, 10¾甲醇/二氯甲烷洗出），此不必進一步纯 化即可使用於下列轉換中。 將此種經第三丁氧羰基保護的二呔（15.4克| 25.0毫莫 耳）在35.0¾三氟乙酸/二氯甲烷（150毫升）中之溶液在室 溫下报動。將所得溶液在真空中濃縮，再K 2 Μ水性碳酸氫 鉀中和。將此種產物萃取人乙酸乙酯（3 >: 1 5 0毫升）中。结 合的萃取物在無水硫酸納之上乾燥、過滤、並揮發後|可 得1 5 . 2克（約1 0 0 X +沒人其中的溶劑）游離胺基fb合物•呈 白色f·固蹈（R f = 0 · 4 5， 1 0%甲醇/二氛甲烷）。 將Μ甲酸異丁酯（3 . 5毫升，3 . 7克，2 7 . 3毫莫耳）在 -1 5 C加人由L - ( = - C Β Ζ )經氨酸（1 1 . 0克，2 6 . 0毫莫耳）及 MS -39- ^4 210-:297^¾) (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) •笟· .訂. A 6 B6 BO. l〇. - 4 五、發明說明（38) N -甲基嗎啡啉（3.1毫升，2.9克，28.6毫莫耳）在四氫呋喃 (100毫升）中之經攪動溶液內。2分鐘後，加入經保護三肽 (12.9克，25.0毫莫耳）在四氫呋喃（50毫升）之溶液中。將 反應混合物在-151C下攪動1.5小時，然後容許溫熱至 0°C。於此時，加入2M水性碳酸氫鉀使中止反應。產物以 乙酸乙酯（100毫升）萃取。結合的萃取物先後Μ 1M檸檬酸 (3x100毫升）。水、2Μ KHC03(3xl00毫升）、水及食鹽水清 洗。所得溶液在無水碕酸納之乾烽、過濾並揮發後，可得 22.4克（97%)經阻斷四肽，呈白色固體（Rr = 0.78, 10¾ 甲醇/二氯甲烷）。 將水加至經'阻斷四肽（22.3克，24.1毫莫耳）在乙醇（ 200毫升）之懸劑内，直到混合物呈極混濁為止（約200毫升 )。 所得混合物在氫氣壓（5大氣壓力）下與氯化鈀（4 . 4 3克 ,2 5 . 0毫莫耳）振搖歷1 8小時。催化劑經由賽利特（C e 1 i t e ® ) 5夕藻土過濾移除後，再揮發濾液可得白色半固體。將 此物質溶於水中、過濾（經由0 . 2微米尼龍濾器），且凍晶 可得1 2 . 3克（1 0 0 )所需二氫氯化四肽，呈娀毛狀白色粉末 :[α ] D 3 . 2 6 ° ( c 2，水）。

丄L 丨，-胡爵.舔-丨，-呆丙親_ -丨.-離氛秘之合成 將氯甲酸異丁酯（3 . 8毫升，4 . 0克，2 8 . 9奄铒马）加入於 -1 5 Γ 由 N - α - B 0 C - L -笨丙胺（7 . 3 克，2 5 . 7 毫 Μ 耳） 及Ν -甲苺嗎啡啉（3 . 3奄升，3 克，3 0 . 2毫莫耳）在四Μ呋 哺（5 0毫升）中之經报動液内。2分鐘後，加入L - ( - Ν - ε -40- τΜ：210Χ 297^： ^t ； (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •装· ρη, 1ΰ· - 4 Α6 Β6 五、發明説明（59) -CBZ)離氨酸苄酯氫氛化物U〇.2克，25.0毫莫耳）及甲 基嗎啡啉（2.9毫升，2.6克，26.0毫莫耳）在二甲基甲醯胺 (50毫升）中之溶液。將反應混合物在-15T：播動1.5小 時，然後容許溫熱至〇υ。 此時，加入2Μ水性碳酸氫鉀使 中止反應。產物Κ乙酸乙酯（3x150毫升）萃取。结合的萃 取物先後Μ1Μ檸檬酸（3x100毫升）、水、2Μ KHC〇3(3xlOO毫升）、水及食鹽水清洗。所得溶液在無水硫 酸訥之上乾燥、過漶、及揮發可得15.5克（100¾)經阻斷二 肽，此阻斷二呔為白色固體 （= 92，10%甲醇/二氯 甲燒）。 將此種經第'三丁氧羰基保護二呔（15.4克，25.0毫莫耳 )在35¾三氟乙酸/二氯甲烷（150毫升）中之溶液在室溫下 攪動1/2小時。將所得溶液在真空中濃縮|再以2M水性碳 酸氫鉀中和。將產物萃収入乙酸乙酯（3x150毫升）中。结 合的萃取物在無水疏酸納之上乾燥、過滹、並揮發後，可 得9 . 5克（7 3 % )游離胺基化合物，係白色半固體（R f = 0 . 5 5 , 1 0 %甲醇/二氛甲综）。 將氛甲酸異丁 g旨（2 . 7毫升，2 . 9克，2 1 . 0毫莫耳）加入在 -1 Γ) Γ由L - ( = - C B Z )經氨酸（8 . 4 7克，2 0 . 0毫莫耳）及N -甲基 嗎啡啉（2 . 4毫升，2 . 2克，2 2 . 0毫舅耳）在四氫呋喃（5 0奄 /丨_ )之姅报動溶液、於2分鐘後，加入經保護三肽（9 . 5克， i 8 . 3至转耳）在四氤呋喃（5 0毫升中之溶液：·將反應混合 拘t1: __ 1 5 褓動1 . 5小時，然後容許溫熱至 0 Τ:。於此時， 反應以加入2 Μ水性碳酸氫鉀使中止反應。產物以乙酸乙酯 MS -41- {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .装· .訂*

攀此Λ"3/號隼到申請案

γ文说明畜# 玉裒（ι舄I 五、發明說明（识） (3x150毫升）萃取。结合的萃取物先後>>UM檸攆酸 (3x100毫升）。水、2M KHC03(3x100毫升）水及食鹽水清洗 。所得溶液在無水硫酸納之乾燥、過濾並揮發後，可得 15.7克（86%>經阻斷三肽，涤白色固雅（[^ = 〇.71,10：«甲 酵/二氯甲烷）。 將水加至經阻斷三肽（15.0克，16.3毫莫耳）在異丙酵 Π 7 5 )毫升中之懋兩内，直到混合物變成極混濁（約i 7 5毫 升）為止。所得混合物在氫氣壓（5大氣壓力）下與氯化鈀 (2 . 9 3克，1 6 . 3毫莫耳）振搖1 8小時。催化劑以經由賽利特 矽藻土遇濾移除，濾液揮發後，可得7.54克白色固體。 將此物質溶於水中、過濾（經由0.2微米尼龍濾器），且凍 晶可得7.84克（96¾)所需二篋氛化三肽呈白色粉末：[α ]D 10.4。 （C2,水）。 g例1 7 賍氷件金廳：吮薄合物夕轺氬彳h物去穿理_椹擗诖袢 本發明金羼：肽複合物含有長鐽脂肪酯或其它而可改變 肽之厭水性«的功能基團，本發明金靨：肽複合物若與甘 氨醢-L-姐氨醢-L-離氨酸：銅（I ) (”GHL * Cu”）相比較， 則具有意外高的S0D活性。具有S0D活性之肽類稱為 ”S0D棋擬物”。在此實例中*超氧化物去突爱酶棋擬活性 係籍黃喋呤氧化_ /NBT方法董澜（見由歐百利及史必玆 [Oberley and Spifz]主編而由 R.格林.瓦[Greenwald]出販 夕用於氮某研究之方法手冊》217至220頁，1985;由奥克 雷及維辛[Auclair and Voisinl之用於氧基研究方法丰 服_，由R .格林瓦出版· 123至132頁，1 985 )。 反應包括：100微莫耳濃度（UM)黄 中 4(210X2971'簷) ......................................................5t..............................ir:............................#». f請先聞ί*背面之注意事項再蜞窵本页)

五*發明说明（ϋ-/) 瞟呤，56/iM NBT(硝基Μ四氮銼>，1單位催化梅· 仗 50mM瞵酸钾緩衝劑，pH 7.8。反愿開始于加入足虽的黃嗎 呤氧化IS使能到在1.7毫升總樣品體積中增加皈收度 < 在 560nm>為大約0.025/分鐘。黃嘌呤氧化梅以每日重新製 備且在冰中貯存直到使用時為止。除了黃嘌呤氧化歯以# ，加入全部反應成份並調整光譜儀至零（在560nm)e 反應 Μ加人黃嘌呤氧化έ引發。全部試劑涤得自西格瑪 (Sigma)化學公司。 在560η»吸收度之量測係於加入黃嘌呤氧化梅化後 16分鏟内每隔1至2分鐘量測乙次，。對照物係由不含有& 靨：肽複合物之反應所姐成。 —單位的S0D活性即是能抑制對照姐與NBT作用的 微莫耳樣品量。用Μ抑制50¾的對照反愿所需的金靨：& 董的微莫耳數*即為相對活性。數值愈低，表示化合物 為S0D模擬物之活性愈高。全部買驗中皆有GHL-Cu作正對 照（即已知此種複合物具有S0D棋擬活性）。因含有 GHC-Cu，此Μ可使所有被試驗的複合物藉了 GHL-Cu此表現 的活性比較出其相對活性。全部複合物係K肽對金靨之莫 耳比率為2:1之下試驗之。實驗结果摘述於表1中。18指 明的是，在作S0D棋擬物活性測驗中所得的海檢定的絕對 值因测定此用的酶姐而不同。因此· Μ相對於GHL-Cu之正 常化活性為基準，所含有之GHL-Cu容許各項S驗互作做比 較。 ....................................................................................ir...............................痒 (請先閱讀背*之注意事項Λ琪寫本«) 甲 4(210X297 公廣） "43- 2 2 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝

JU 81 3. 年 月 補 359307D633235510061013 Ό ο·°β ο οσο ο ο α°·ο0·0·0·0·0·0·0· 100 810 100 229 100 561 231 100 6Θ 46 100 182 0.031 0.017 第80101131號專利申請荼 中文說明書修正頁（8 4年3月）A7 B7 五、發明説明（^) 表 1 親水抻祚电S0D椹《茌株；》妫赛 化合物 用於5 0X抑制 相對方 之漘度（微莫耳/«升）GHL-Cu Α: GHL:Cu GHL辛酯：Cu Β: GHL-Cu ,GHLVFV:Cu · C: GHL-Cu GHLAFA:Cu GHL 棕 IH 酶：Cu D: GHL;Cu LHG-辛 ϋ : Cu LHGVFV:Cu Ε: GHL:Cu (?HL辛基趋胺：· Cu 表1註： GHLCn =甘氨醯-L-組氨醯-L-離氨醯：铜（I) GHL-辛酯：Cu =甘氨藤-L-組氨醯-L-離氨酸正-辛酯：鋦（E) GHLVFV:Cu =甘氨醯-L-姐氨醯-L-離氨醯-L-纈氨醢-L-苯丙氨 醯-L -纈氨酸：銅（II ) GHLAFA:Cu =甘氨醯-L-姐氨醢-L-離氨鼸-L-丙氨醯-L-苯丙氨 _ - L -丙氨酸：銅（H ) GHL -棕櫊酯：Cu=甘氨皤-L-組氨醯-L-離声酸正一棕櫊酯： 、 r· 飼（I ) 一 L H G -辛酯：C u =離氨醯-L -姐氨醯-L - 氨酸正-辛酯：鋼（I ) LH(]VFV:Cu=離氨瞌-L-姐氨醯氨醯-L-纈氨皤-L-苯丙氛 醯-L -纈辑稱：綱< ϊ >

GfR-辛荖醯胺：Cu: =甘氨醯-L-姐氨醯-L-離氨酸正-辛基醯 :飼（Π ) ---Φ4- 本纸張尺度適用中國國家標？?CNS ) ,\4現烙（210 X 297公釐） 83. 3. 10.000 --------! —------ΐτ------ - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 五、發明説明（45) A6 B6 當制1 8 余鼷：呔祷合物之轺氬仆物去琪寒龌搭搿物活件 本發明金屬：肽複合物含有改良之胺基酸^列或改良之 個別胺基酸，當與GHL- Cu相比較時•顯示有意外高的 SOD活性。 此實例中，超氧化物去突變酶之測定係以如在實例17中 所說明的黃嘌呤氧化酶/ NBT方法。每一複合物的試驗都與 同時所作的GHL-Cu檢定作相對比較。全部複合物係Μ肽對 金屬之莫耳比率為2:1之下試驗之。此項實驗之结果摘述 於表2中。 Μ8 -45- T4'210：^ 297^： it (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾. .訂· •裏. 4.· 15 83. 年 月 % 80

_^利申請案 f文説明書修正貝（83年8月 A7 B7 五、發明説明（） 檐擬活忡夕_序和氰某电今卿p 化合物 用於50X抑制 相對5$ 之湄度（微莫耳/奄升） GHL-Cu A: GHL:Cu 0.047 G(3-.苄荃）HL:Cu 0.033 G(3-申基）HL:Cu 0.008 056 0 4 1 116 B: GHL:Oa 0.020 100 GH (屍胺）Cu 0.017 118 GHLrCu '0.059 100 G(3-甲基）HLVFV:Cu '0.017 231 D: GHL:Cu GUH:Cu LHG-、韹胺：Cu °·ο·°· E: GHL:Cu AHL:Cu °·°· 1 6 0 2 7 3 0 ο ο ο ο β ο 0 3 0 5 1 0 6 17 2 15 經濟部中央梯準局貝工消費合作社印製 F: GHLtCa ^ λ ^ 0.033 100 GH (己内醯胺）* Cu 0.0008 4500 G: GHL:Qi 0.067 100 HGL:Cu 0.0003 22300 H: GHL:Cu 0.035 100 HGUF:Cu 0.0001 35000 I: GHL:Cu 0.090 100 HFL:Cu 0.00015 60000 HLF:Cu 0.00015 60000 I -裝 訂 1 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 46- 本紙張尺度逋用中國國家搮準（CNS) A4规格（210X：297公釐） 83. 3. 10,000 第80101131號專利申請茱 中文說明書修正頁（84年3月） A7 B7 修jZ]-Γ , 1 y-h "yr: 五、發明説明（ 表2註 ： GHL:Cu =甘氨醯-L-組氨醯-L-離氨醯：銅（I ) G(3-苄基）HL:Cu =甘氨醯- L-(3-苄基）-姐氨醯-L-離氨醯： m(i) G(3-甲基）HL:Cu =甘氨醯- L-(3-甲基）-姐氨醯-L-離氨醯： 銅（H ) GH屍胺：Cu =甘氨醯-L-組氨醯-屍胺：銅（Π) G(3-甲基）HLVFV:Cu =甘氨醯- L-(3-甲基）-組氨醯-L-離氨 藤 -L-苯丙氨醯-L-纈氨酸：銅（ϋ > GLH:Cu =甘氨醯-L-離氨醯-L-姐氨醮：銅（I ) LHG-醢胺：Cn =離氨醢-L-組氨醢-L-甘氨酸醢胺：銅（E) AHL:Cu =丙氨醯-L-組氨瞌-L-離氨醯：銅（I) GH (己内醢胺）：Cu =離氨醯-L-姐氨醯-L-己内醯胺：铜（Ϊ ) HGL:Cu = L·-組氨醢-甘氨醯-L-離氨醯：銅（E)

HGLF:Cu = L-組氨醯-甘氨醸-L-離氨醯-L-苯丙氨酸：銅（H HFL:Cu = L-姐氨醢-L-苯丙氨醢-L-離氨酸：銅（I ) HLF:Cu = L-姐氨醢-L-離氨醯-L-苯丙氨酸：飼（H ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 本紙張尺度適用中SS家梂主（CNS ) A4規格（：ΊΟΧ29·7公釐） 83. 3. 10.000 A 6 B6 五、發明說明（46) g Μ 1 9 余龎：肽梅合物之紹氬化物去穿寒瞄椹擬物活忡 Μ其它金臑離子取代在金羼：肽複合物中的铜（2)，若 與GHL-Cu相比較，可得具有高SOD活性之複合物。 在此實例中|超氧化物去突變酶係以如在實例17中所說 明之黃嘌呤氧化酶/ NBT方法测定。每一複合物的試驗都與 同時所作的GHL-Cu檢定作相對比較。全部化合物係Μ肽對 金屬之莫耳比率為2:1之下試驗之。此項實驗之结果摘述 於表3中。 i'13 -48- 甲 4 210>: 29Τ 公爷） (請先閲祅背面之注意事項再填寫本頁) •襄· .φ. 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印策 第80101131號專利申請案 中文說明書修正頁（84年3月）A7 B7 五、發明説明（1) 表3 含匾雔平對Sill)椹礙话抻之效腱 化合物 比率 用於50S抑制 之濃度（徴其耳/至升丫 相對於 GHL-Cu A: GHLiCu 2:1 0.013 100 GHL;Mn 2:1 0施. 275 GHL·辛基:Cu 2:1 0-011〆 100 GHL-辛基:Mn 2:1 0.002 611 B: GHLCu 2:1 0.040 100 GHL-Mn 2:1 0.001 4000 HGL:Mn 2:1 0.002 2000 GLH:Mn 2:1 0.006 2000 AHL;Mn 2:1 0.006 667 表3註 GHL:Cu =甘氨醯-L-姐氨皤-L-離氨酸：_(H ) GHL:Mn =甘氨醯-L-姐氨醢-L-離氨酸正-辛酯：錳（I) GHL:辛酯：Cu =甘氨醯-L-姐氨醢-L-離氨酸正-辛酯：飼（β ) GHL-辛酯：Μη =甘氨醯-L-組氨醯-L-離氨酸正-辛酯：錳（Ε) Η(]ί:Μη = ί-姐氨醯氨醢-L-離氨酸：錳（I ) GLH:Mn =甘氨醯-L-離氨醢-L-姐氨酸：錳（JI ) 、 ' AHL:Mn =丙氨醯-L-離氨醯-L-姐氨酸：錳飞E ) -49 - . 裝 訂 头 I - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙汝尺度速用中國國家標嗥（CNS ) Λ4規格（Z10X 297公慶） 83. 3 10.000 五、發明説明（48) A6 B6 n m 2〇 佥謳：狀搏合物之轺g化物去穿寒醣權擗物活袢 本發明金靨··肽複合物可藉加入蝥合劑至金屬：肽複合 物之方法，改良成三元的金羼：肽：蝥合劑複合物，若與 GHL- Cu相比較，此三元的金靥：肽：蝥合劑複合物具有 意外高的SOD模擬物活性。如前所述，為了形成此種三元 的複合物，應考慮到金靨對肽對蝥合劑之莫耳比率。例如 ，若呔對金靨之比率為2:1 ，則將螯合劑加至金靨：呔複 合物中是困難的，此係由於位置被肽佔據之故。然而，若 維持金羼對肽之比率接近1 : 1，則可加入螯合劑。 在此實例中\超氧化物去突變酶係以如在蓠例1 7中所說 明之黃嘌呤氧化酶/ NBT方法測量之。試驗每種化合物時， 也在同時對GHL-Cu或甘氨醢- L--姐氨醯-L-離氨醯-L-纈氨 醯-L-苯丙氨醯纈氨酸：鋦（I ) (”GHL VFV-Cu”）做檢定。 在此宵例中，用於述成50¾抑制的複合物用量，Μ飼（I) 的微克表之；此銅（I )之微克數量述到對照反懕5 0 3：抑制 所需加入的量。係以鋼達成50%抑制。宵例结果摘述於表 4中。 MS -50- f 4ί210Χ 297 /：^t ) (請先閱讀背面之注意事項再嗔艿本頁) •訂. _綠· 五 患汶1號專利申請案 中文說明書修正頁（84年3月 A7 B7 、發明説明（立/) 表4 添加怒合某顚對Sill)椹擬活件乏放鏖 化合物 比率 用於50X抑制之濃度 (微莫耳/«升） 相對於 GHL-Cu A: GHL:Cu-GHL:Cu:H GHL:Cu:Im'B: GHLVFV:Ca•GHLVFV:Cu:H GHLVFV:Cu:Im 1Χ 1Α ··· · ♦· 2 11 • ··_ 1 · ···· 1 1 ·2·23·8·23 100 1600 246100 1400 930 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 表4 I主： G H L : C u =甘氨醢-L -組氨醯-L -離氨酸：銅（I ) GHL:Cu.:H =甘氨醯-L-姐氨醯-L-離氨酸：飼（H):姐氨酸 GHL:Cu:Im=a·氨醢-L-姐氨醯-L -離氨酸：_ (I ):咪唑 GHLVFV:Cu =甘氨醯-L-姐氨酵-L-離氨醯-L-纈氨醢-L-苯丙氨 醯-L-纈氨酸：銅（E ) GHLVFV:Cu:H =甘氨醯-L-姐氨醯-L-離氨醯-L-纈氨醯-L-苯丙 氨醯-L -纈氨酸：銅（II ):姐氨酸 GHLVFV:Cu:Im =甘氨醯-L-姐氨醯-L-離氨醯-L-纈氨醢-L-苯 苯丙氨醯-L-纈氨酸：飼（E,):咪唑 -51 - 本紙張尺度適用中國國家.樣嗥丨CNS ,) A.i規烙：丨0:<297公釐） 83. 3. 10,000 ---------' .装------訂-----~J線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) A 6 B6

80.10. _ 4 五、發明説明（5 〇) 白结合部份之余匾：狀褥合物之轺氬仆物去李寒_ 本發明含色氨酸之金鼷：肽複合物相對於GHL- Cu而言 ，顯示出了強化的S0D橫擬物活性。 此實例中，超氧化物去突變酶係Μ如在實例17中所說明 的黃嘌呤氧化酶/ΝΒΤ方法量測。試驗每一種化合物時，在 同時檢定相對的GHL-Cu。實驗之结果摘述於表5中。 (請先W讀背面之注意事項再琪寫本頁) •装· .訂. •φ M3 52- 第80101131號專利申請案 中文說明書修正頁（84年5月）

ro .-4 8___ 6 6 A B "Λ κ;ί; ' c*‘i-;" .f' 2

五、發明説明（51 ) 化合物 比率 用於50X抑制 相對於 之濃度（微莫耳/毫升） GHL-Cu A: GHL;Cu 2:1 0.059 100 甲基） HLGW:Cu 2:1 0.011 521 B: GHL:Cu 2:1 0.047 100 GHLW:Cu 2:1 0.001 4700

表5註： GHL:CU=甘氨醯-L-姐氨鼸- L-_氨酸：_U) G(3-甲基）HLGW:Cu=甘氨醢-L-(3-甲基）-姐氨醣-L-離氰酸 -甘氨醣-L-色®酸：鋦（I ) GHLV ： Cu=甘氛醣-L-姐氨醣-L-離氨酸-L_色氨酸：鋦（I MS -53- 甲 4(210Χ 297公发） {請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •装· •打· 線· 五、發明説明（52) A 6 B6 管例22 藉余匾：狀搏合物柚制销蛋白中镅之煜出 鐵代謝介入於脂質過氧化作用。其中機轉之一係從锇蛋 白中釋出Fe(!l)/Fe(II)， 撖蛋白係鐵在身體中之主要貯 存位置，此釋出之游離Fe(liI)/Fe(II)接著文參與脂質過 氧化反應。鐵蛋白之釋出锇依在反懕中超氧化物陰離子之 產生而定。在動物中，超氧化物陰離子係在傷口或慢性發 炎位置由宿主防禦機轉如嗜中性球所產生。本發明金靥： 呔複合物抑制Fe(III)/Fe(II)從鐵蛋白釋出。 _蛋白釋出之鐵量係以下列方式量測：M10微莫耳濃度 (win)之本發明金屬：肽複合物培養鐵蛋白再測定鐵釋出 量。如在實例17中所述，反應混合物中含有0.33πιΜ黃嘌呤 * 2 5 m U / m 1黃嘌呤氧化酶，及9 0 .u / ra 1催化酶。此外*加入 200wM鐵蛋白作為鐵來源，且以150；uM巴唑诽啉二磺酸鹽 (bathophenanthroline disulfonate) Μ 蟹合並釋出 I钱。 羝的釋出以在5 3 5 n m吸收度方面之增加而測定，此係由於 形成鐵一巴唑设啉複合物之故。此數撺見表6 ，以作為吸 收速率及不具添加物之反應之抑制百分比表示之。全部金 屬：肽複合物的肽對金屬之莫耳比率為]:1。 HS -54- (請先閱讀背面之注意事項再填艿本頁) •装. •訂. ·" 第80101131號專利申請案 中文說明書修正頁（84年5月） 五、發明説明（55 ) -------一 :丄 5· 22 7 Α6丨 " Β6 f 、 i 表6 全S :肤辑合物彻制馈從讯甭白中之釋出 化合物~~_~~速声增加 /U35n«分鐘 百分比 <SiL:Cu GHL .辛 il :Cu GHLVFV:Cu G(3-：9 基）HL:Cu HGL:Cu 0.0060 0.0016 0.0012 0.0011 0.0010 0.0008 %%%%% )30237 0 7 8 888 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 表 6 註： ../ f . . : . . .. GHL:Cu= 甘氨醢-L-姐«醣-L-*氨酸：鋦U) GHL辛酯：Cu= 甘氨醣-L-姐«醣-L-離氨酸辛酯：鋦U ) GHLVFV:Cu =甘氨醣-L-姐氨醢-L-離氨醯-L-纈氨醢-L-苯丙氛 . 醣-L-纈氨酸：銅（H ) G(3-甲基）HL:Cu =甘氨醣- L-(3-甲基）-姐氨醢-L-離氨酸辛酷 :鋦（H ) HGL:Cu=L-姐氨醯-甘«醮-L-薷氨酸：鋦U ) MS -55- 甲 4(210X297 公龙） A6 B6 五、發明説明（54)

置H Μ全麵：狀祷合物拙制超脂詈渦氬化作用有邸之耩蛋白及 轺彳h物陰囍孑 從鐵蛋白釋出之锇可參與脂質過氧化反應。本發明金靨 :呔複合物抑制藉由鐵蛋白釋出的Fed )/Fe(II)， 作媒 質的脂質遇氧化反應。 脂質過氧化作用之量測係藉測定脂質在脂質體（從鼠肝 脂質製得）中之氧化決定之。培養方法如在實例2 2中所說 明，此唯一不同营冷增加了鼠肝脂質微粒體。氧化後，再 測定在反應時所形成丙二醛r’MDA”）之量。列於表7中的 數據作為吸收'速率及不用添加劑之反應的抑制百分比。全 部金屬：肽複合物所具呔對金靨之莫耳比率為1:1。 (請先W讀背面之注意事項再填寫本頁) k. •訂· ^. -56- 第80101131號專利申請案 中文說明書修正頁（84年5月） :84H Α6 ： Β6 ’— 五、發明説明（55 ) 表7 错金屬~：~狀複合-物抑制與指質碑氣#;作用有關之結氯仆；物艿 1茳虽白 * 化合物 速率 十值分之一莫耳（ηι MDΑ/分鐘/¾并· 、抑制 ι) 百分比 Α: 無 0^20 0 GHL;Cu 0.084 62% GHL 辛 S! f :Cu 0.060 73% GHLVFV:Q ί 0.140 36% Β: NONE 0.150 0 G(3'甲基）HL:Cu 0.104 31% HGL:Cu 0.020 87% 表7註： GHL：Cu= 甘氨醯-L-姐氨醱-L-雕氨酸：鋦（I ) GHL辛_:CU= 甘氨醢-L-姐«醢- L-鏃氨酸正辛酯：銅（H ) GHLVFV ：Cu= 甘氨醯-L-姐氨醣-L-離氨醣-L-纈«醯-L-苯丙 氨醢-L-纈氨酸：鋦（I ) G (3-甲基）HL:Cu= 甘氨醣-L-(3-甲基）-姐氛醢-L-«氨酸：imu) HGL:Cu = L-姐氛醢-甘氨K-L-離氨酸：鋦U) -57- _Μ.ς _ 甲 4(210Χ 297 公沒） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) •装. .訂. •線. 80. ια. .. Α6 Β6 五、發明説明（54 ) 由前所述，可知雖然對本發明之特殊具體實例已加以說 明但此只為了說明用，其他可Κ作的改良，仍未脫離本發 明之精越及範圍。因此，本發明除受到如附i申請專利範 圍之限制不受其他限制。 (請先閑讀背面之注意事項再填寫本頁) .¾. •訂· " ί'·ί J —58 — 甲 V210X 兮

Claims (1)

1. S8()icn 131號專利由請案 由文甶辑專利範圍修正太（85年11月1

   XV. jz!：：. A r】 s 六、申請專利範圍 2 . 一種具有抗氧化及抗炎活性之金屬：呔複合物，其具下 列通式： [甘氨餛基-L -組氨醯基-L -離氨酸-R ]:金鼷 其中 I?是含有從1至丨8個碳原子之胺烷基部份，或是L -色氨酸 ，（甘氨醢基）y - L -色氨酸，其中y = 1至4，（ X ^ - L -苯丙 氡酷基-X 2 > .其中X i及X2燥選自L -纈氨酸、L -丙氨酸及 甘氨酸所組成之群姐，巨其中X，及X 2非皆為L - Ρ氨酸， 戎< X 3 | - L -色氨酸，其中X 3丨矣-C Η 2 -或-C Η ( Ο Η )-部份旦 η = 4 至 2 0 : 而金屬保銅（H )。 t 一《具有抗氧化及抗炎活性之金屬 列通式： 呔複合物*其具下 n^l> ^^^^1 nn n^i n nn l^m I 1· I^、T (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 l甘氛_基- Rt-Rs-Rs」：金_ 其中 R τ偽選自L -組氨齬基及L - ( 3 - W )-組氨藤基，其中W係含 有從1至12個碳原子之烷基部份或含有從6至12個碳原子 之芳基部份； h 像-N H C H ( ( C H 2 U N H 2 ) C 0 -其中 η = 5 至 1 0 ; R ^ «-Μ% ，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份，或為 L-色氨酸，（甘氨藤基）y-L -色氨酸，其中y = l至4, Χτ-L-笼丙氨Μ基- X2，其中乂：及/“矣選自L -纈氨酸， L -丙氨酸及甘氨酸所姐成群組，且其中X τ及X 2非皆為 L -堞氨聆戎U 3 ) ” - ί -色氨酸，其中X 3该-C Η 2 -或 本紙張尺度逋用中國國家標隼（〇泌〉六4洗格（210又2由公董） ABCD 經濟部中央梯準局負工消費合作社印製 六、申請專利範圍 -C Η ( Ο Η )-部份且 η = 4 至 2 0 ; 而金屬係銅（I )。 3. 一種具有抗氧化及抗炎活性之金靨：肽複合物，其具下 列通式： 、甘氣藤基_Rl-R2-R3」：金靨 其中 R ^後L - ( 3 - W )-組氨醯基，其中W係含有從1至1 2個碳原子 之烷基部份或含有從6至12個碳原子之芳基部份； L-難安藤基； R 3係-N Η 2，一胺烷基部份，含有從1至1 s個碳原子，或 \ 為L -色氨酸* (甘氨醯基）y-L -色氧酸，其中y = l至4, X 1 - L -笼丙氨藤-X 2，其中X 1及X 2 (¾選自L -纈氨酸，L-丙氨酸及L -甘氨酸所组成群組，且其中）^及乂2非皆為 L -缲氨酸，或（)(3 ) n - L -色氨酸，其中X 3係-C Η 2 -或 部份且η = 4至20;而 金屬像飼（H )。 4. 一種具有抗氧化及抗炎活性之金屬：呔複合物，其具下 列通式： 「_甘氨齬-R , - R 2 - R 3 ]:金屬 其中 fU法選自L -組氨醯及L - (: 3 -j.)-組氨瞌，其中W係含有從 1至〗2個碳原子之烷基部份，或含有從6至12個碳原子之 芳基部份； R 2读_系胺基酸，鹼糸胺基部份，或改良的鹼係胺基酸 本紙張尺度逋用中國國家梂準（CNS ) A4現格（210&2☆公It ) •n . ml --1 I ί '^< 0 - . - - I _ I ---1 1 I— 方 、V5 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A8 B8 C8 D8六、申請專利範圍 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ;R 3傜羥基，-N Η 2 ,含有從1至1 8個碳原子之烷基部份 ，含有從6至12個碳原子之芳基部份、含有從1至18個碳 原子之烷氧基部份，含有從1至18個碳原子之肢烷基部 份，或為L -色氨酸，（甘氨醯）y-L -色氨酸，其中y = l至 4 •X1-L-S丙氨醢-X2，其中\1及乂2係選自L-纈氨酸 、L -丙氨酸及甘氨酸所組成群組，或（X3)„-L -色氨酸， 其中X 3燥-C H a -或-C Η ( Ο Η )-部份且η = 4至2 0 ; 而金躅係飼（II )。 5 . —種具有抗氧化及抗炎活性之金靨：肽複合物，其具下 列通式： 〔R，- R ?-甘氨 _ - R 3 ]:金屬 k 其中 1?1偽雜氨瘛或-_(^(((^；!)^[12)(：0-其中〇 = 5至10; R 2偽選自L -组氨醯及L - ( 3 - W )-組氨醢，其中W係含有從 1至12個碳原子之烷基部份或含有從6至12個碳原子之芳 基部份； v R3^羥基> -KH2，含有從1至18個碳原子之烷基部份、 含有從6至12個碳原子之芳基部份，含有從1至18個碳 原子之烷氧基部份，含有從6至1 2個碳原子之芳氧基部 份，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份，或為L -色氨 酸，（甘氣藤基）y-L -色氨酸，.其中，y = l至4， 丙氨藹-X?，其中堪自L-纈氨酸，L-丙氨酸 及甘氨酸所組成群組，或（X 3 - L -色氨酸，其中X 3係、 -「Η 2 -或-C Η ((1 H)-部份且 η = 4 至 2 0 ; -In n^i mf n^i— n —m nn --.， f"、T (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家揉準（CNS )八衫見格（210Χ29>公灰） A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 而金屬係飼（ϊ )。 6 · —種具有抗氯化及抗炎活性之金屬：呔複合物*其具下 列通式： LRi-Ri?-R3-R4j :金屬 其中 R τ像L -雜氨醯基或-N H C H ( ( C Η 2 ) „ N H 2 ) C ϋ -其中η = 5至 10; R 2溪選自L -組氨藤基及L - ί 3 - W )-組氨藤基，其中W係含 有從1至12個碳原子之烷基部份或含有從6至12個碳原子 之芳基部份； 、R 3 1¾鹼条胺基酸，鹼系胺基部份、或改良的鹼系胺基酸 經濟部中央標準局負工消費合作社印裂 m* m In nn I f^l« — - m 一 J 方 i (請先K讀背面之注意事項再填寫本I ) R λ後羥基，-Ν Η 2，含有從1至1 8涸碳原子之烷基部份， 含有從6至1 2個碳原子之芳基部份，烷氧基部份含有從 1至18個碳原子，芳氧基部份含有從6至12個碳原子， 含有從1至〗8涸碳原子之胺烷基部份，或為L-色氨酸， (甘氨藏）y-L -色氨酸，其中y = l至4* Χα-L-苯丙氨瞌 -X2，其中！<^及>(2係選自L -纈氨酸、L -丙氨酸及甘氨酸 所姐成群组，或（5U ) ” - L -色氨酸，其中X 3係-C Η 2 -戎 -CH(OH) -部份 & η = 4 至 20;而 金囑偁铜ί II )。 7 · —《具有杭氧化及抗炎活性之金:肽複合物，其具下 列通式： [R ^ -甘氨病基-R 2 - R 3 ]:金躍 本紙伕尺度適用中國國家標準（CNS )六衫見格（210又2#7公龙） 2〇β387六、申請專利範圍 經濟部中央標準局黃工消资合作社印製 其中 R 1後選自L -組氨醯基及L - ( 3 - W )-組氨醯基•與中y係含 有從1至12個碳原子之烷基部份或含有從6至12個碳原子 之芳基部份； R 2 係 L -離氨醯基-.N H C H(( C Η 2 ) „ N H 2 ) C 0 -其中 n = 5 至 1 0，或 齡系胺基酸，鹼系胺基部份，或改良的鹼系胺基酸； 83法羥基，-HH2， 含有從1至18個碳原子之烷基部份， 含有從6至12個碳原子之芳基部份，含有從〗至丨8個 礆原子之烷氧基部份，含有從6至12個碳原子之芳氧基 部份，含有從丨至1 8個碳原子之胺烷基部份，或為L -色氨酸，L-茏丙胺酸，L -白胺酸、L-異白肢酸，（甘氨 醒）y-L -色氨酸，其中y = l至4，Χτ-L -苯丙氨醯- X2,其 中X 1及X 2偽選自L -纈氨酸、L -丙氨酸及甘氨酸，戎 <X3U-L -色氨酸，其中係-CH2 -或- CH(OH) -部份且 η = 4至2 0 ;而 金鼷燥铜ί H 1。 8 ·—種具有抗氧ib及抗炎活性之金屬：狀複合物，其具下 列通式： i L -丙氨蔴基-R ^ - R ^ - R 3 ::金屬 其中 R 1怿選自L -組氨藤基及L - ( 3 -.W )-組氨醯基，其中W係含 有從1至〗2個礆原子之烷基部份或含有從β至12個碳原子 之芳基部份； L -離氨鵪基或- HHCH((CH2)„NH2)CO-其中 n = 5 至 10 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度速用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X2b公_着） ABCD 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 羥基、-NH2，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份 或L -色氨酸，（甘氨醯基）y-L -色氨酸，其中y = l至4， Xi-L-S丙氨藏基-X2，其中）U g_X2係選自L -纈氨酸， L -丙氨酸及L -甘氨酸，且其中X t及X 2非皆為L -纈氨酸， 或（X 3 ) n - L -色氨酸，其中X 3係-(:Η 2 -或-C Η ( Ο Η )-部份且 η =4 至 20 ； 而金靨係飼（IT )。 9. 一種具有抗氧化及抗炎活性之金屬：呔複合物，其具下 列通式： [甘氨醯-IN - R 2 - R 3 i :金屬 、 其中 L -離氨醯基或- NHCH((CH2)„NH2)CO-其中n = 5至10 » R 2溪選自L -祖氨醯基及L - 3 - W )-組氨醯基，其中y係含 有從1至121词碳原子之烷基部份或含有從6至1‘2個碳原子 之芳基部份； R3^羥基，-NH2，含有從1至18個碳原子之烷基部份， 含有從6至12個碳原子之芳基部份，含有從1至18個碳 原子之烷氧基部份，含有從6至]2個碳原子之芳氧基部 份，含有從1至18個碳原子之胺烷基部份或為L -色氨酸 — 二 ，（甘氧酵基）y-L-色氨酸，其中y = l至4，Xt-L-笨丙氨 蒴-Xp，其中X,及χ2^選自L-纈氨酸，L-丙氨酸及甘 氨酶*或（X .3 U - L -色氨酸，其中X 3係-C Η 2 -戎 本纸張又度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210¾2^公It ) —I— nn i n^i ml n^i f > ml m In m \ J. f ^ ·\έ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 206387 ?8s D8 々、申請專利範圍 -CH(OH) -部份且 n = 4 至 20; 而金屬係飼（II )。 10. —種具有抗氢化及抗炎活性之金屬：肽複合物，其具下 列通式： ί_ί?1_ί?2_Ι?3」：金屬 其中 i?，燥選自L -組氨隨基或L - ( 3 - W )-組氨醯基，其中W係含 有從1至1 2個碳原子之烷基部份或含有從6至1 2個碳原子 之芳基部份； R2^L -雜氨藤，鹼系胺基酸，屘水系胺基酸及 -N H C H ( ( C H 2 „ H H 2 ) C 0 -所組成群組 /其中 n = 5 至 1 0 , R 3後選自下列所組成群組之L -離氨醯，鹼系胺基酸，厭 水异胺基酸，-NHCH((f：H2)„NH2>C0-，其中 n = 5 至 10， 系一種胺基部份，及改良的胺基酸；而 金匾傜銅（H )。 11 _根撺申請專利範園第1項至1 0項中任一項之金屬··肽複 合物，其中呔對金屬之比係2 : 1。 經濟部中央標準局男工消費合作社印策 ---------i -I衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 2 ·根撺申諳專利範圍第1項至1 〇項中任一項之金屬：肽複 合物，並進一步包栝醫藥上可接受之載體或稀釋劑。 1 3 .根揀申請專利範圍第1項至1 〇項中任一項之金福：肽複 •气 合物，並進一步包括蝥合劑，·及與此形成的三元的金屬 :呔：II合劑複合物，蝥合劑為咪唑或含眯唑之化合物 〇 14.枏撺甶請專利範阖第U項之金屬：吠複合物，其中含眯 本紙伕尺度適用中國國家梂準（CNS ) A4現格（210¾2¾^^¾ ) 7ησ 3 6 ct;ο} ABCD 經濟部中央標準局員工消費合作社印装 六、申請專利範圍 啤之化合物係姐氨酸。 1 5 .根撺申請專利範圍第1項至1 〇項中任一項之金臛：呔 複合物，並進一步包栝蝥合劑，及與此形成的三元的金 蘭：狀：Μ合劑複合物，蝥合劑為半胱胺酸或甲硫胺酸 〇 1 β . —種用於強1'b或恢復溫血動物對由於具活性氧物質釋出 所造成具氧化性戎發炎之損害之抗性之藥學組合物，包 栝如由請專利範阐第1項至1 〇項中任一項之金屬：呔複 合物及豁举上可接受之載餚或稀釋劑。 17. —種金圈：肽複合物，其具下列通式： i. i._丙氨酵基-R1-R2-R3」：金屬 ， 其中 R t係選自L -組氨酴基及L - ( 3 - W )-組氨醯基，其中W係含 有從1至1 2俩碳原子之烷基部份或含有從6至1 2 ®碳原子 之芳基部汾； I慎L-離氨蔴基或- NHCHUCHaUNDCO-其中n = 5至10 ♦ .R 3 羥基或-N Η 2 ; 而金鼷係飼（Π )。 本纸伕尺度適用中國國家梂準（0奶）六4規格（210又2办公'赛） i I - - 1^1. ϊί- -- - * 二— t^々--- n - !- - ...... \~~ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

   第80101131號專利申請案 中寸補充銳明喜（82玍1 第1姐 分析數據報告 描述：甘氨醢-L -組氨醢-L -離氨 -L -顯氣趣- L -笨丙氨_-L -纈 氨酸：跼（2 : 1 )乙酸鹽粉末 赛數 snpffl m. 方法 結果 外観 QC-550 視覺 紫色粉末 HPLC純度 QC-043 HPLC 99.6 % 最大量之單- QC-043 HPLC 0.183 % 不純度 同一性 QC-043 HPLC GHKVFV RT 符合 Ref 效能 QC-043 HPLC 70.1 % w/w 銅⑴ (GHKVFV 效能之 ％) 21-1A-000 ICPa> 4.75 % QC-015 GHKVFV+Cu 73.4 % 水含量 AN-450 KF 2.42 % 乙酸鹽含董 QC-507 HPIC 15.5 S!- TLC同一性 QC-506 TLC GHKVFV Rf符合飽和Rf IR QC-503 IR 符合 GHKVFV Ref 旋光度 QC-501 偏’光計 -67.0。 1.0 %溶液之pH QC-008A pH計 6.82 ch\212.g 2C6387 第2組 描述：甘氨醢-L-組氨醢-L-離氨酸飼乙酸鹽粉末 &JL SOP煸號 方法 說明 结果 外觀 QC-550 視覺 藍至紫色粉末 通過 HPLC純度 QC-500 HPLC GHK>98.0¾ 100.0% 且沒有不鈍物>0. 5¾ 同一性 QC-500 HPLC GHK RT 符合 Ref RT符合Rmf 效能 QC-500 HPLC 59.GHK^ 76.4% 6 5.9¾ m Galbraith ICP GHK效能的 9.21¾ E2903 8.40¾至10.4¾ GHK+Cu HA 64.7¾^ PC1020 72.0¾ ^ 84.3¾ 水含量 Galbraith KF ^11.5¾ 4.6¾ OSP (921) TLC同一性 QC-502 TLC GHK Rf-飽和 Rf Rf符合Ref 旋光度 QC-501 偏光計 -13。至-16。 -15.0。 元素分析 Galbraith C MK-6 元素分析 理論值土 3.0¾ -1.7¾ Η MK-6 元素分析 理論值土 3.0¾ - + 1.4¾ Ν MK-6 元素分析 理論值土 3.0¾ -1.9% 動物成長 V-400A 21CFR. 通過 通遇 安全性 610.11 内毒素 USP<85> LAL <0.625 Eu/m1 <0.625Eu/m1 ch\212.g 第3姐 AHI,分柝齡埔 [alD ^43°(c 3, Hi〇)： lH NMR (500MHz, DMSCW«i 5 8.73 (1H, d. I =* 7Λ\ 8.43 (ΙΗ» d.I * 7J). 109 (IE, i), 7M OH, s), (1H. dd,I- 5Λ 7S]r 412 (1Η» · ..... I 3.88 (1H, q, I3.Q3 (1H. dd. I * 15A 4.3), I9d (m, d<U =i LJA 7.7X 2.74 (2H* t, J « 7J), L76-L6S (1¾ m), L56-1J1 (3H. a), 1.<1I-L21 (2H. m). 1J2 (3H, d, J * 7.0); 13c NMR (123MHL DMSO^j) S Γ74Α 169戈 Ι69Λ 134工 130J, llTi 52*5; 5Ζ·5, 48A μΛ, 3d3T 2SX 26J. 22.4» 17^. HGL分析齡埔

   [all>-u« (ς VX water); lH NMR (SQQMS^ D^O) δ 8^9 (1H, s). 7.30 (1H. s). .3-06 (1H, 3), 4.29 (IH, t, J =» 6J), 4^0 (1H, 7.8), 4.04 (2H AJB, J-17.Q). br'i; I - 6), 3,01 (2H, t, J » 7.S), 4), 1.91-1.80 (1¾ m); 1.70- U67 C3H, m). 1.49-1*38 (?a m); l3C NMB δ 180.1. 178Λ 17α〇, 134.9, 127.¾ H8A 55A 32.3, 42.1, 39A 30,8, 26.9» 262, 22.7. ch\212.g <

   月厶日 修正 補充 8 1年3月1 4日呈局之參考 附圖中譯本（84年3月） 忤 GH-辛基:Cu (1:1) 可見鉦收光譜

   83年7月15曰參考圖式中譯本（84年3月） 财 貝克門 ： 光譜光度計 吸 收 0.3000 0:<!000 0.3000 0.2000 0.1000 0.0〇〇〇

   最大吸收：〇.384〇 λ max ：572.00 複合物濃度：3-5毫克/毫升 溶劑：水 AI4L2 ^ ^ ^^〇3β7 貝克門 光譜光度計 吸收

   掃描速度：500毫微米/分鐘 最大吸收：0.5730 λ max : 597.00 複合物濂度：3毫克/毫升 ^ 溶劑:水 LH G-' Cul 〇: 1) 貝克π 光譜光度計 吸 收

   1.0 掃描速度：500毫微米/分鐘 最大吸收：0.8350 入 max · 400.00 HGL: Cul (2 複合物濃度：1.0毫克/毫升 溶刑：水 貝克門 光譜光度計 吸 收

   最大吸收：0.3070 入 max · 600.00 複合物濃度：3-5毫克/毫升 溶劑：水 GHLVR/Tu αΐ:1) 光譜光度計 吸收

   掃描速度：500毫微米/分鐘 最大吸收：0.2370 又 max · 601.00 複合物濃度：5毫克/毫升 溶劑：水 GHL :辛基酯：Cu ( 2 : 1 ) 附件1中譯本（84年3月） 附 件 合物之對照砉 I 複合物 ±·^_ίι利範ffi 對應於説明書内容 狀合成 LHG-辛基酯：Cu 5 表1 ，〇項，第44頁 實例9， 第29-30頁 LHGVFV:Cu 5 表1 ，0項，第44頁 實例1 0 ，第30_31頁 CH屍胺:Cu 4 表2 ，B項，第4 6頁 - GLH:Cu ,· 9 表2， • D項，第46頁 - LHG-醯胺：Cu 5 表2 > D項，第46頁 實例8， 第29頁 AHL:Cu 8 表2， E項，第46頁 實例6， 第26-27頁 GH己内醯胺:Cu 4 表2， E項，第46頁 實例1 1 ，第3 1-32頁 HGL.Cu 7 表2， G項，第46頁 實例1 2 ，第3 2-3 3頁 表6， 第55頁 表7， 第57頁 HGLF:Cu 7 表2， Η項，第46頁 實例1 3 ，第33-34頁 HFL:Cu 10 表2， I項，第46頁 實例1 6 ，第40-41頁 HLF.Cu 10 表2， I項，第46頁 實例1 5 ，第3 8-40頁 GHL:Cu：H 14 表4， Α項，第5 1頁 - GHL:Cu;Im 13 表4， A項，第5 1頁 - GHLVFV:Cu:H 14 表4， B項，第5 1頁 - GHLVFV:Cu:Im 13 表4， B項，第5 1買 - GHLW:Cu 1 表5， B項，第53頁 -