TW202302134A

TW202302134A - 諾麗果發酵物於製備改善體態及肌膚狀況之組合物之用途

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Publication number: TW202302134A
Application number: TW110149501A
Authority: TW
Inventors: 林詠翔; 吳佩宜
Original assignee: 大江生醫股份有限公司
Priority date: 2021-07-13
Filing date: 2021-12-29
Publication date: 2023-01-16
Also published as: TWI802194B; CN115607595B; US20230029084A1; CN115607595A; TW202302837A; US11938157B2; CN115895932A

Abstract

一種諾麗果發酵物之用途，其是用於製備具有下列至少一作用之組合物：改善體態及改善肌膚狀況。其中，諾麗果發酵物是由（a）將葡萄糖、諾麗果實與水混合並進行萃取以得到諾麗果培養液，以及（b）將此諾麗果培養液及多個菌種進行發酵而製得。在步驟（b）中，此些菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌，並且在發酵過程中，對此諾麗果培養液及此些菌種照射波長介於620-750 nm的紅色光源。此外，諾麗果發酵物進一步還能具有去除自由基、改善排便及腸胃蠕動情況其中至少一種作用。

Description

諾麗果發酵物於製備改善體態及肌膚狀況之組合物之用途

本案係關於一種諾麗果發酵物的用途，特別是關於一用於製備改善體態及改善肌膚狀況之組合物的用途。

檄樹（ Morinda citrifolia），又名海濱木巴戟、海巴戟，是茜草科巴戟天屬的一種植物，灌木至小喬木，高1-5公尺，屬於咖啡經濟作物。檄樹的果實即為諾麗果（noni fruit）。諾麗果盛產於南太平洋群島，其為複合果，卵形，約4-7公分大，表面分佈眾多不均勻的麻狀點。諾麗果實初為綠色，後轉變為黃色，成熟時幾乎變為白色，果實內有很多種子。諾麗果實的果肉汁水較為充足，但其氣味重、苦澀感強。

有鑑於此，研究或開發一種天然植物成分─諾麗果，並將其製備為對人體有所助益的天然植物產品，有其必要。

緣此，在一些實施例中，提供一種諾麗果發酵物用於製備改善體態之組合物之用途。上述諾麗果發酵物係藉由（a）將葡萄糖、諾麗果實與水混合並進行萃取以得到培養液，以及（b）將此培養液及多個菌種進行發酵而製得。上述菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。在進行上述發酵的過程中，對培養液及此些菌種照射波長介於620-750 nm的紅色光源。

在一些實施例中，上述改善體態為增加全身肌肉重、減少全身體脂率、減少腹部脂肪重及/或腿部脂肪重、減少皮下脂肪重及/或內臟脂肪重，及減少腰圍其中至少一者。

在一些實施例中，上述諾麗果發酵物係透過促進瘦體素生成及/或促進脂肪代謝，以達到改善體態。

在一些實施例中，上述諾麗果發酵物係透過促進減脂基因的表現量，以達到促進脂肪代謝。

在一些實施例中，上述減脂基因為三酸甘油酯脂解酶（adipose triglyceride lipase, ATGL）基因、脂肪酶E（lipase E, LIPE）基因及體解偶聯蛋白1（uncoupling protein 1, UCP1）基因其中至少一者。

此外，在一些實施例中，還提供一種諾麗果發酵物用於製備改善肌膚狀況之組合物之用途。上述諾麗果發酵物係藉由（a）將葡萄糖、諾麗果實與水混合並進行萃取以得到培養液，以及（b）將此培養液及多個菌種進行發酵而製得。上述菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌。在進行上述發酵的過程中，對培養液及此些菌種照射波長介於620-750 nm的紅色光源。上述改善肌膚狀況為改善肌膚泛紅、改善肌膚彈力及改善肌膚UV斑其中至少一者。

在一些實施例中，上述諾麗果發酵物係透過促進彈力蛋白增生，以達到改善肌膚彈力。

在一些實施例中，上述諾麗果發酵物還具有去除表面自由基、改善排便情況及改善腸胃蠕動情況其中至少一者之作用。

在一些實施例中，上述葡萄糖的添加量為諾麗果實與水之總重量的2-8 wt%。

在一些實施例中，上述水之重量為諾麗果實總重的3-5倍。

在一些實施例中，上述酵母菌的添加量為相對於培養液的0.01-0.5 wt%，乳酸菌的添加量為相對於培養液的0.01-0.25 wt%，醋酸菌的添加量為相對於培養液為1-20 wt%。

在一些實施例中，上述酵母菌的發酵時間為24-72小時，乳酸菌的發酵時間為24-72小時，醋酸菌的發酵時間為72-240小時。

在一些實施例中，上述諾麗果發酵物的pH值為2.7-3.7，且其白利糖度（Brix degree）為23-27。

綜上所述，在任一實施例中，諾麗果發酵物至少可提供下列至少一種作用：改善體態及改善肌膚狀況，進而藉以用於製備具有對應作用之組合物。在一些實施例中，上述改善體態可為增加全身肌肉重、減少全身體脂率、減少腹部脂肪重及/或腿部脂肪重、減少皮下脂肪重及/或內臟脂肪重，及減少腰圍其中至少一者。此外，在一些實施例中，上述改善體態可透過促進瘦體素生成及/或促進脂肪代謝而達成。在一些實施例中，上述促進脂肪代謝可透過促進減脂基因的表現量而達成。在一些實施例中，上述促進脂肪代謝亦可透過促進三酸甘油酯脂解酶（ATGL）基因、脂肪酶E（LIPE）基因及體解偶聯蛋白1（UCP1）基因其中至少一者的表現量而達成。在一些實施例中，上述改善肌膚狀況可為改善肌膚泛紅、改善肌膚彈力及改善肌膚UV斑其中至少一者。此外，在一些實施例中，上述改善肌膚彈力可透過促進彈力蛋白增生而達成。此外，在一些實施例中，諾麗果發酵物至少還具有下列至少一種作用：去除自由基、改善排便情況及改善腸胃蠕動情況，進而藉以用於製備具有對應作用之組合物。

本文中所使用的數值為近似值，所有實驗數據皆表示在正負10%的範圍內，最佳為在正負5%的範圍內。

本文中所使用的用語「wt%」是指重量百分比，而用語「vol%」是指體積百分比。

本文中所使用的用語「糖度」所指為白利糖度（Brix degrees，符號°Bx），是測量糖度的單位，其代表在20°C情況下，每100公克水溶液中溶解的蔗糖公克數。

本文中所使用的用語「培養液」係指藉由萃取作用所製備之產物。培養液可以溶於溶劑中之溶液形式呈現，或培養液可為不含或大體上不含溶劑之濃縮物呈現。

本文中所使用的用語「發酵物」是指將藉由溶劑對原料進行浸提所得到的培養液經過特定的發酵照光程序所形成之效性成份。於此，發酵物可以溶於溶劑中之溶液形式呈現，或發酵物可為不含或大體上不含溶劑之濃縮物呈現。需說明的是，若未特別強調或標註為「未照光」或「未照射紅光」，本文中所使用的用語「發酵物」均是指發酵程序提供紅光照射所得的發酵物。例如，「發酵物」及「發酵物（照射紅光）」是指經過發酵且發酵過程中全程提供紅光照射所得之發酵物；而「發酵物（未照射紅光）」則是指經過發酵但發酵過程中不提供紅光照射所得的發酵物。

本文中所使用的用語「諾麗果」或「諾麗果實」通常是指植物果實，其中果實可為含皮或不含皮之果實、經乾燥或以其他物理方式加工以利於處理之果實。其中，以其他物理方式加工可例如為完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨、或以其他改變原物料之大小及實體完整性的加工方式，或其任意組合。

本文中所使用的用語「酵母菌」、「乳酸菌」及「醋酸菌」分別是指能以任何商業手段獲得（例如可購自於國內或國外寄存機構者）的酵母菌菌株、乳酸菌菌株及醋酸菌菌株，或者利用所屬技術領域中所慣用的微生物分離方法而從天然來源中所分離純化出的酵母菌菌株、乳酸菌菌株及醋酸菌菌株。

在一些實施例中，諾麗果發酵物是藉由（a）將葡萄糖、諾麗果實與水混合並進行萃取以得到一培養液；以及（b）利用多個菌種將得到的培養液進行發酵而製得。

在步驟（b）中，所使用的菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌，且在發酵過程中，對殖入菌種的培養液照射一紅色光源。在一些實施例中，紅色光源的波長介於620-750 nm。

在一些實施例中，將諾麗果實依序經過包含加熱程序及降溫程序的步驟（a）及包含發酵照光程序的步驟（b）後得到諾麗果發酵物（照射紅光）。

在一些實施例中，將諾麗果實依序經過包含粉碎程序、加熱程序及降溫程序的步驟（a）及包含發酵照光程序的步驟（b）後得到諾麗果發酵物（照射紅光）。

在一些實施例中，將諾麗果實依序經過包含加熱程序及降溫程序的步驟（a）及包含發酵照光程序及過濾程序的步驟（b）後得到諾麗果發酵物（照射紅光）。

在一些實施例中，將諾麗果實依序經過包含加熱程序及降溫程序的步驟（a）及包含發酵照光程序、過濾程序及濃縮程序的步驟（b）後得到諾麗果發酵物（照射紅光）。

在一些實施例中，將諾麗果實依序經過包含粉碎程序、加熱程序及降溫程序的步驟（a）及包含發酵照光程序及過濾程序的步驟（b）後得到諾麗果發酵物（照射紅光）。

在一些實施例中，將諾麗果實依序經過包含粉碎程序、加熱程序及降溫程序的步驟（a）及包含發酵照光程序、過濾程序及濃縮程序的步驟（b）後得到諾麗果發酵物（照射紅光）。

在一些實施例中，諾麗果實可以是含皮或不含皮的諾麗果實。在一些實施例中，諾麗果實可以是新鮮或乾燥的諾麗果實。

在一些實施例中，上述粉碎程序是指將諾麗果實攪打至分裂為碎狀的諾麗果實。舉例而言，碎狀的諾麗果實可以採用果汁機、調理機或均質機攪打而成。

在一些實施例中，上述加熱程序是先將諾麗果實與水混合而得到初培養液。接著，再將初培養液於95±5 ℃下浸泡1±0.5小時以進行萃取（浸提）而得到諾麗果水萃液。接著，再將葡萄糖加至諾麗果水萃液中而得到諾麗果培養液。需說明的是，於加熱程序中，若所使用的溶劑（例如水）過少或萃取（浸提）的時間過短，則萃取（浸提）效率將會明顯下降；而若萃取（浸提）時間過長，則諾麗果培養液中的效性成份可能會產生因此降解。

在一些實施例中，上述加熱程序是先將葡萄糖、諾麗果實與水一起混合而形成初培養液；再將初培養液於95±5 ℃下萃取（浸提）1±0.5小時而得到諾麗果培養液。由於將葡萄糖與諾麗果實同時混合來進行萃取（浸提）程序，而可不需再開啟萃取（浸提）設備來添加葡萄糖加入的葡萄糖可再經過高溫環境處理，而有助於葡萄糖的溶解且可降低原料受污染風險。

在一些實施例中，上述加熱程序中所使用的水：諾麗果實的重量比例（液固比）為3：1至5：1（即水的重量為諾麗果實總重的3-5倍）。

在一些實施例中，上述加熱程序中所使用的葡萄糖之添加量為水與諾麗果實之總重的5±3 wt%。藉由添加葡萄糖，可使諾麗果培養液中具有足夠的糖度，以確保發酵時所使用的菌種可以有足夠的養份，讓後續的發酵照光程序可順利進行。

在一些實施例中，上述降溫程序是指將加熱後的初培養液降至特定溫度範圍。舉例而言，特定溫度範圍為低於38±3 ℃。

在一些實施例中，在進行上述發酵照光程序之前，不另濾除諾麗果培養液中的固形物（例如萃取/浸提後的諾麗果實），藉以利用發酵照光程序中所使用的菌種來進一步提取固形物中的效性成份。在一些實施例中，在進行上述發酵照光程序之前，先濾除諾麗果培養液中的固形物，藉此可避免後續發酵照光程序中產生其他較為複雜且非所欲的成份，而可較佳地控制諾麗果發酵物的品質。

在一些實施例中，上述發酵照光程序是指將諾麗果培養液同時或分多個階段殖入多個菌種（包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌）以進行發酵。在發酵的過程中，全程對殖入菌種的諾麗果培養液照射紅色光源，以發酵得到諾麗果發酵物（照射紅光）。在一些實施例中，上述紅色光源的波長介於620-720 nm。舉例而言，紅色光源是使用波長約為635 nm的紅色LED光源。藉由對殖入菌種的諾麗果培養液照射紅色光源，可提升菌種的生長速度，進而增加諾麗果發酵物中效性成份的含量。

在一些實施例中，上述發酵照光程序所使用的酵母菌為市售的啤酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）。舉例而言，酵母菌可為向財團法人食品工作發展研究所採購之寄存編號BCRC20271（國際寄存ATCC26602）菌株的啤酒酵母。

在一些實施例中，上述發酵照光程序所使用的乳酸菌為市售的瑞士乳酸菌（ Lactobacillus helveticus）、胚芽乳酸桿菌（ Lactobacillus plantarum）、嗜熱鏈球菌（ Streptococcus thermophiles）或植物乳桿菌。舉例而言，乳酸菌可採用寄存編號BCRT910760（國際寄存DSM32451）菌株的胚芽乳酸桿菌TCI378。

在一些實施例中，上述發酵照光程序所使用的醋酸菌可為向美國菌種中心（American Type Culture Collection）所採購、寄存編號BCRC11688（國際寄存ATCC15973）菌株的醋酸菌。

在一些實施例中，上述發酵照光程序所使用的菌種包括相對於諾麗果培養液為0.01-0.5 wt%的酵母菌、相對於諾麗果培養液為0.01-0.25 wt%的乳酸菌以及相對於諾麗果培養液為1-20 wt%的醋酸菌。

在一些實施例中，上述發酵照光程序是同時或多階段地殖入多個菌種（包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌）以發酵約3-16日（即72-384小時）。在一些實施例中，酵母菌進行發酵的時間可為1-3日（即24-72小時），乳酸菌進行發酵的時間可為1-3日（即24-72小時），醋酸菌進行發酵的時間可為3-10日（即72-240小時）。

在一些實施例中，上述發酵照光程序是三階段地殖入多個菌種（包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌）以進行發酵。舉例而言，上述發酵照光程序是藉由先於諾麗果培養液中添加酵母菌，以先將諾麗果培養液中的糖份（例如葡萄糖）經發酵而轉化為乙醇。乙醇有助於萃出諾麗果培養液中的效性成份，並形成第一初發酵物。而後，於第一初發酵物中加入乳酸菌，以形成第二初發酵物。透過於第一初發酵物中加入乳酸菌，可使第一初發酵物內尚未反應的糖份經發酵而轉化為乳酸，以進一步消耗其中的糖份，進而降低第二初發酵物所含的糖度。由於在第二初發酵物中產生了乳酸，其將會進一步改變整體反應環境（例如使第二初發酵物的pH值下降），對於萃取諾麗果培養液內的效性成份亦有影響與助益（使溶於酸性溶液的效性成份更易萃取出）。接著，再於第二初發酵物中加入醋酸菌，以形成諾麗果發酵物。藉此，可使第二初發酵物內的乙醇轉化為乙酸。而由於乙醇被進一步消耗，酵母菌可進一步地繼續將糖份轉化為乙醇，使酵母菌進行的反應更為完全，糖度進一步降低。在一些實施例中，諾麗果發酵物的白利糖度為2.7-3.7 °Bx，以確保發酵反應完全。在一些實施例中，諾麗果發酵物的pH值約為2.3-4.3。

在一些實施例中，上述發酵照光程序是三階段地殖入多個菌種（包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌）以進行發酵。舉例而言，上述發酵照光程序所使用的酵母菌與乳酸菌二者的添加順序不限，以形成第一初發酵物；最後再加入醋酸菌到第一初發酵物中，以發酵形成第二初發酵物。藉此，可確保第一初發酵物中已經產生乙醇，而可使醋酸菌更佳地生長及進行乙醇的轉化反應，進而降低第二初發酵物中的乙醇含量。在一些實施例中，醋酸菌進行發酵的時間長於酵母菌的發酵時間，亦長於乳酸菌的發酵時間，藉此可使醋酸菌更完全地消耗第二初發酵物中的乙醇。

在一些實施例中，上述發酵照光程序是二階段地殖入多個菌種（包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌）以進行發酵。舉例而言，可先於諾麗果培養液中同時添加酵母菌與乳酸菌進行發酵，以形成第一初發酵物。接著，再加入醋酸菌到第一初發酵物中，以發酵形成諾麗果發酵物。因酵母菌與乳酸菌兩者的發酵反應皆較為快速，且二者所需的發酵時間相近，而藉由於酵母菌及乳酸菌之後再加入醋酸菌，可讓諾麗果培養液在酵母菌及乳酸菌的發酵階段先以較短時間（例如共同發酵1日）同時完成第一初發酵物的發酵反應，而能減少整體諾麗果發酵物的發酵所需時間。

在一些實施例中，上述發酵照光程序所使用的酵母菌、乳酸菌及醋酸菌可於25-40 ℃下進行發酵反應，較佳為28-32 ℃。若溫度超過40 ℃，將會使菌種失去活性；而若溫度低於25 ℃，則發酵反應的速率將過低、甚至無法進行發酵反應，不利於第一初發酵物、第二初發酵物及/或諾麗果發酵物的取得。

在一些實施例中，上述過濾程序是指將經過上述發酵照光程序的諾麗果發酵物通過篩網，以將諾麗果發酵物內的固形物濾除，並形成諾麗果發酵物（過濾液）。舉例而言，上述篩網可以是200網目（mesh）的篩網。

在一些實施例中，上述濃縮程序是指將經過上述發酵照光程序的諾麗果發酵物進行減壓濃縮（廠牌/型號：BUCHI-Rotavapor R-100），或將經過上述過濾程序的諾麗果發酵物（過濾液）進行減壓濃縮（廠牌/型號：BUCHI-Rotavapor R-100），藉以調整諾麗果發酵物的成份濃度，進而得到諾麗果發酵物（濃縮物）。

在一些實施例中，可於諾麗果發酵物（過濾液）/諾麗果發酵物（濃縮物）/諾麗果發酵物中添加寡醣，以使最後得到的諾麗果發酵物具有所欲的糖度。在一些實施例中，寡糖係指由3-10個單醣分子聚合而成的低聚糖。在一些實施例中，寡糖例如可為果寡糖、半乳寡糖、木寡糖或異麥芽寡糖。舉例而言，可於諾麗果發酵物（過濾液）/諾麗果發酵物（濃縮物）/諾麗果發酵物中添加相對諾麗果發酵物（過濾液）/諾麗果發酵物（濃縮物）/諾麗果發酵物之重量為40-70 wt%（較佳為60 wt%）的異麥芽寡糖，使最後得到的諾麗果發酵物的白利糖度為23-27 °Bx，而pH值為2.7-3.7。

在一些實施例中，諾麗果發酵物可用於製備改善體態之組合物的用途，其中諾麗果發酵物是透過促進瘦體素生成及/或促進脂肪代謝以達到上述改善體態（例如為增加全身肌肉重、減少全身體脂率、減少腹部脂肪重及/或腿部脂肪重、減少皮下脂肪重及/或內臟脂肪重，及減少腰圍其中至少一者）。

在一些實施例中，諾麗果發酵物係透過促進減脂基因的表現量而達成促進脂肪代謝。在一些實施例中，上述減脂基因可為三酸甘油酯脂解酶（adipose triglyceride lipase，簡稱為ATGL）基因、脂肪酶E（lipase E，簡稱為LIPE）基因及體解偶聯蛋白1（uncoupling protein 1，簡稱為UCP1）基因其中至少一者。

在一些實施例中，諾麗果發酵物可用於製備改善肌膚狀況之組合物的用途。上述改善肌膚狀況例如可為改善肌膚泛紅、改善肌膚彈力及改善肌膚UV斑其中至少一者。

在一些實施例中，諾麗果發酵物係透過促進彈力蛋白增生而達成改善肌膚彈力。

在一些實施例中，諾麗果發酵物還具有抗氧化及去除表面自由基其中至少一者的作用。

在一些實施例中，諾麗果發酵物還具有改善排便狀況及改善腸胃蠕動狀況其中至少一者的作用。

在以下範例中，使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差（SD）表示，各組之間的差異以學生 t檢驗（student’s t-test）進行分析。並且，在對應圖式中，「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上的差異越顯著。

例 1 ：諾麗果發酵物之製備方法

製備步驟依序如下： 1. 首先，將諾麗果實進行粗碎（Osterizer品牌的10 speed blender）並以孔徑為12 mm的篩網將其過篩，去除過大顆粒後取得諾麗果實。 2. 接著，先將液固重量比為3：1的水與諾麗果實一起混合，並根據水與諾麗果實之總重而添加5 wt%的葡萄糖，以形成混合液。再將混合液於95 ℃下萃取（浸提）1小時以得到諾麗果培養液。 3. 接著，冷卻諾麗果培養液至低於38 ℃。 4. 接著，於步驟4中，全程對諾麗果培養液照射波長635 nm的紅色LED光源。將諾麗果培養液依序殖入0.1%的啤酒酵母菌（ Saccharomyces cerevisiae，寄存編號BCRC20271）發酵1日、0.05%的胚芽乳酸菌（ Lactobacillus plantarum）TCI378（國際寄存編號DSM32451，寄存編號BCRT910760）發酵1日；接著，再殖入5%醋酸菌（ Acetobacter aceti，寄存編號BCRC11688）發酵5日，以得到諾麗果發酵物。 5. 接著，使用200網目的網篩過濾諾麗果發酵物，以得到諾麗果發酵物（過濾液）。 6. 接著，將諾麗果發酵物（過濾液）於55-65 ℃下進行減壓濃縮，並添加60 wt%的異麥芽寡糖，以使所得到的諾麗果發酵物（濃縮物）的白利糖度為25±2 °Bx、pH值為3.2±0.5時，停止濃縮。 7. 接著，將諾麗果發酵物（濃縮物）於100 ℃下滅菌2小時，進而得到最終的諾麗果發酵物。

需說明的是，以下實驗檢測中所使用的諾麗果發酵物（未照射紅光）可使用例1的製備方法而得。不同的是，在例1的製備方法之步驟4中，諾麗果發酵物（未照射紅光）是以自然光取代紅色LED光源，其餘的照射時間及條件則均與諾麗果發酵物（照射紅光）相同。

此外，以下實驗檢測中所使用的諾麗果培養液可使用例1的製備方法而得。不同的是，諾麗果培養液並未經過例1的製備方法之步驟4，其餘的條件則均與諾麗果發酵物（照射紅光）相同。

例 2 ：諾麗果發酵物之多酚定量

標準曲線繪製：

首先，將10 mg的沒食子酸（gallic acid，簡稱為GA）（購自Sigma，料號：G7384）溶於水中，並添加10 mL的體積至量瓶中，得到1000 μg/mL的沒食子酸溶液（即1,000 ppm GA）後，將溶液儲存於-20 ℃作為儲備溶液。之後，將儲備溶液稀釋10倍至100 μg/mL的濃度，而未使用完之液體則儲存於-20 ℃之環境。接著，於玻璃試管中分別配製0、20、40、60、80及100 μg/mL的沒食子酸標準溶液，配製方式顯示如下表1：

表1：沒食子酸標準溶液配置方法

濃度（μg/mL）	0	20	40	60	80	100
GA 1,000 ppm	0 μL	20 μL	40 μL	60 μL	80 μL	100 μL
ddH ₂O	100 μL	80 μL	60 μL	40 μL	20 μL	0 μL

之後，添加500 μL的佛蕭酚試劑（Folin-Ciocalteu’s phenol reagent）（購自Merck，料號：1.09001.0100）、混合均勻並靜置3分鐘，接著添加400 μL的7.5%碳酸鈉（sodium carbonate）（Sigma 31432，溶於水中）、混合均勻並反應30分鐘。接著，經由渦旋（vortex）確保無氣泡後取200 μL的標準溶液於750 nm下測量吸光值，並繪製標準曲線。

樣品總多酚定量實驗：

將使用例1的製備方法所得的對照一組（諾麗果培養液）、對照二組（諾麗果發酵物（未照射紅光））及實驗組（即諾麗果發酵物（照射紅光））作為樣本。將各組分別以水稀釋20倍至1200 μL並取100 μL的體積至玻璃試管中，每組樣品需三重複。之後，添加500 μL的佛蕭酚試劑、混合均勻並靜置3分鐘。

接而添加400 μL的7.5%碳酸鈉、混合均勻並反應30分鐘至1小時。再經由渦旋確保無氣泡後取200 μL的各組反應溶液於750 nm下測量吸光值，並以內差法算出濃度後，再回乘稀釋倍數以取得原濃度。

請參照圖1，相較於對照一組及對照二組，實驗組的總多酚含量有顯著提升。相較於對照一組，實驗組的總多酚含量提升約2.49倍；而相較於對照二組，實驗組的總多酚含量則提升約1.26倍。因此，由圖1之實驗結果顯示，經照射紅光的諾麗果發酵物會大量釋出多酚，而可有效改變諾麗果發酵物中的所含成分，有效提升活性成份。而由於多酚具有清除自由基、抗氧化之能力，因此諾麗果發酵物（照射紅光）亦因此被證實具有清除自由基及抗氧化的能力，甚至諾麗果發酵物（照射紅光）可具有較諾麗果發酵物（未照射紅光）更優異的清除自由基及抗氧化的能力。

例 3 ：細胞試驗 - 提升瘦體素

於此，所使用的細胞分化培養基為添加有10 vol% FBS（品牌：Gibco，編號10437-028）、1 vol%抗生素-抗黴菌素（Antibiotic-Antimycotic）（Gibco公司，產品編號：15240-062）（以下稱為AA）、1.0 μM/mL地塞米松（dexamethasone，簡稱為DEXA；品牌：Sigma，編號50-02-2）、0.5 mM/mL IBMX（Methylisobutylxanthine；品牌：Sigma，編號28822-58-4）及1.0 μg/mL胰島素（Insulin，品牌：Sigma，編號I9278）的DMEM培養基。所使用的脂肪維持培養基為添加10 vol% FBS、1 vol% AA及1.0 μg/mL胰島素的DMEM培養基（品牌：Gibco）。

檢測流程：

首先，以每孔1×10 ⁴個細胞密度，將3T3-L1細胞（購自BCRC，編號60159）接種含有100 μL細胞分化培養基的96孔培養盤的各孔中，並置於37 ℃下培養6天。於6天的培養期間，每2天更換一次新鮮的細胞分化培養基。接著，於培養6天後，更換細胞分化培養基為脂肪維持培養基，並置於37 ℃下培養7天。於7天的培養期間，每2天更換一次新鮮的脂肪維持培養基。於培養7天後，使用顯微鏡（廠牌：ZEISS）觀察各孔中的細胞內的油滴（lipid droplet）是否形成以確認細胞完全分化成脂肪細胞，供後續實驗使用。

將脂肪細胞分成4個組別：實驗組、對照一組、對照二組及空白組。移除各組別的分化培養基，並更換成每孔100 μL實驗培養基，然後置於37 ℃下接續培養12天。於12天的培養期間，每2天更換一次新鮮的100 μL實驗培養基。其中，於第一組實驗（對應的實驗結果示於圖2）中，實驗組的實驗培養基中含有0.125 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光）；對照一組的實驗培養基中含有0.125 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果培養液；而對照二組的實驗培養基中含有0.125 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（未照射紅光）；而空白組的實驗培養基則不含上述諾麗果培養液、諾麗果發酵物（未照射紅光）及諾麗果發酵物（照射紅光）。而於第二組實驗（對應的實驗結果示於圖3）中，實驗組的實驗培養基中含有0.25 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光）；對照一組的實驗培養基中含有0.25 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果培養液；而對照二組的實驗培養基中含有0.25 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（未照射紅光）；而空白組的實驗培養基則不含上述諾麗果培養液、諾麗果發酵物（未照射紅光）及諾麗果發酵物（照射紅光）。

接著，以Mouse LEP（Leptin） ELISA套組（品牌：Elabscience，編號E-EL-M3008）收集各組3T3-L1細胞的培養基並檢測各組瘦體素含量。

於此，將空白組檢測到的瘦體素相對產率視為100%來計算對照一組、對照二組及實驗組的瘦體素相對產率。並且，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生 t-試驗來統計分析，分別如圖2及圖3所示。

在圖2中，除了空白組之外，各組的實驗培養基中分別含有如前所述0.125 vol%的待測樣品。如圖2所示，實驗組的瘦體素相對生成量為122.1%，而對照一組的瘦體素相對生成量為77.5%、對照二組的瘦體素相對生成量則為87.9%。換言之，實驗組的瘦體素相對生成量明顯高於對照一組及對照二組。由此可知，諾麗果發酵物（照射紅光）能有效地促進受體的瘦體素生成，進而具有能抑制受體食慾及增加受體能量消耗的能力。

另外，在圖3中，除了空白組之外，各組的實驗培養基中分別含有如前所述0.25 vol%的待測樣品。如圖3所示，實驗組的瘦體素相對生成量為123.8%，而對照一組的瘦體素相對生成量為83.6%、對照二組的瘦體素相對生成量則為107.5%。換言之，實驗組的瘦體素相對生成量明顯高於對照一組及對照二組。由此可知，諾麗果發酵物（照射紅光）能有效地促進受體的瘦體素生成，進而具有能抑制受體食慾及增加受體能量消耗的能力。

綜合圖2及圖3之實驗結果可知，諾麗果發酵物（照射紅光）能有效地促進受體的瘦體素生成，進而具有能抑制受體食慾、增加受體能量消耗及改善體態的能力。

例 4 ：細胞試驗 - 促進脂肪代謝及促進脂肪代謝基因之表現量

材料與儀器： 1. 細胞株：小鼠骨髓基質細胞OP9（購自BCRC，編號6566）。 2. 培養基：含有20%胎牛血清（fetal bovine serum，簡稱為FBS）（GIBCO公司，編號10438-026，美國）、1%抗生素-抗黴菌素（Antibiotic-Antimycotic）（Gibco公司，編號15240-062）的α-最低限度必需培養基（α-Minimum essential medium，簡稱為α-MEM）（Gibco公司，編號12000-022）。 3. RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）。 4. 反轉錄酶（SuperScript ^®III Reverse Transcriptase）（Invitrogen公司，美國，編號18080-051）。 5. 測量標的基因引子，其中包含ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因，另包括內部控制組（m-ACTB基因）。 6. KAPA SYBR ^®FAST qPCR試劑組（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）。 7. ABI StepOnePlus ^TM即時PCR系統（ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））。 8. 試驗樣品：分別使用例1之製備方法所得的諾麗果培養液、諾麗果發酵物（未照射紅光）及諾麗果發酵物（照射紅光）。

實驗步驟：

首先，取1.5×10 ⁵個小鼠骨髓基質細胞至每孔含有2 mL上述培養基的細胞培養盤中，於37 ℃下培養24小時，並且將培養後的小鼠骨髓基質細胞依據下列表2所示分為4組：空白組、對照一組（諾麗果培養液）、對照二組（諾麗果發酵物（未照射紅光））及實驗組（諾麗果發酵物（照射紅光））。各組更換2 mL實驗培養基後接續培養24小時。每組進行三重複。

表2：測試條件

組別	實驗培養基
添加成份	添加濃度
A組（空白組）	無	無
B組（對照一組）	諾麗果培養液	0.025 mg/mL
C組（對照二組）	諾麗果發酵物（未照射紅光）	0.025 mg/mL
D組（實驗組）	諾麗果發酵物（照射紅光）	0.025 mg/mL

將處理後的小鼠骨髓基質細胞（B組至D組）及空白組（A組）以細胞裂解液分別破細胞膜，以形成四組的細胞溶液。接著，以RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）分別萃取四組細胞溶液內的RNA。接著，每組取1000奈克（ng）的萃取出的RNA作為模板，透過SuperScript ^®III反轉錄酶（購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051）將萃取出的RNA反轉錄為相應之cDNA。再藉由ABI StepOnePlus ^TM即時PCR系統（ABI StepOnePlus ^TMReal-Time PCR system（Thermo Fisher Scientific公司，美國））、KAPA SYBR FAST（購自Sigma公司，美國，編號38220000000）及表3的引子（SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:8）對四組的cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction）以觀察四組的小鼠骨髓基質細胞內的ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95 °C反應20秒，接著95 °C反應3秒，60 °C反應30秒，並重複40個迴圈，並使用2 ^-ΔCt方法進行基因定量。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因的mRNA表現量，進而推斷ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因編碼的蛋白質的表現量。

表3

基因	引子名稱	序列編號	引子序列
ATGL	ATGL-F	SEQ ID NO:1	GGATGGCGGCATTTCAGACA
ATGL-R	SEQ ID NO:2	CAAAGGGTTGGGTTGGTTCAG
LIPE	LIPE-F	SEQ ID NO:3	TGGCACACCATTTTGACCTG
LIPE-R	SEQ ID NO:4	TTGCGGTTAGAAGCCACATAG
UCP1	UCP1-F	SEQ ID NO:5	AGGCTTCCAGTACCATTAGGT
UCP1-R	SEQ ID NO:6	CTGAGTGAGGCAAAGCTGATTT
β-actin	ACTB-F	SEQ ID NO:7	GGCTGTATTCCCCTCCATCG
ACTB-R	SEQ ID NO:8	CCAGTTGGTAACAATGCCATGT

* R為REVERSE反向，F為FORWARD順向。

需要特別說明的是，在圖4中所顯示的ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因的相對基因表現係以相對倍率呈現，其中使用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，並在Excel軟體中以單尾學生 t檢驗（Student’s t-test）分析是否具有統計上的顯著差異。

如圖4所示，將空白組（A組）的ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因的表現量視為1（即100%），實驗組（D組）相對於A組的ATGL基因的表現量約為135.8%、相對於A組的LIPE（HSL）基因的表現量約為122.0%，且相對於A組的UCP1基因的表現量約為107.7%，代表實驗組（D組）的ATGL基因的表現量上升為A組的1.358倍、LIPE（HSL）基因的表現量上升為A組的1.22倍，且UCP1基因的表現量上升為A組的1.077倍。由此可知，當小鼠骨髓基質細胞以含有0.025 mg/mL的諾麗果發酵物（照射紅光）處理後，小鼠骨髓基質細胞的ATGL基因、LIPE（HSL）基因和UCP1基因的表現量皆有上升的現象。

接著，再分別將實驗組（D組）與對照一組（B組）及對照二組（C組）進行比較。就ATGL基因的表現量而言，實驗組之ATGL基因的表現量均高於B組及C組，且分別為B組及C組的2.10倍及3.01倍。就LIPE（HSL）基因的表現量而言，實驗組之LIPE（HSL）基因的表現量均高於B組及C組，且分別為B組及C組的1.60倍及1.18倍。而就UCP1基因的表現量而言，實驗組之UCP1基因的表現量均高於B組及C組，且分別為B組及C組的2.18倍及2.65倍。

ATGL（adipose triglyceride lipase）基因所編碼的蛋白質為三酸甘油脂水解酶（ATGL）。三酸甘油酯為脂肪細胞之脂滴或脂肪體中的主要構造成分，亦為脂肪細胞中儲存能量的主要來源，而三酸甘油脂水解酶主要作用即為分解三酸甘油酯，三酸甘油酯水解酶存在於脂滴表面，被激活後三酸甘油脂水解酶會分解甘油三酯，為個體提供能量。因此，ATGL基因表現量上升，會促進脂肪細胞中脂肪的分解，並使其中脂肪累積量降低。因此，如圖4之實驗結果所示，諾麗果發酵物（照射紅光）能顯著提升ATGL基因（即與脂肪代謝（減脂）相關基因）的表現量，而使諾麗果發酵物（照射紅光）具有促進代謝脂肪的活性的能力，而對脂肪分解具有促進的效果，更能有效地預防及改善肥胖症狀。

LIPE（lipase E）基因所編碼的蛋白質為脂肪酶，其具有長形（long form）與短形（short form）。長形主要表達在類固醇生成組織（例如睪丸中），其主要功能為將膽固醇酯（cholesteryl esters）轉化為游離的膽固醇，以利後續產生類固醇類激素。短形則主要表達在脂肪組織中，其主要功能為將存儲的三酸甘油酯水解成游離的脂肪酸。因此，LIPE基因表達量上升，會促進脂肪細胞中脂肪的分解，並使其中脂肪累積量降低。此外，ATGL基因與LIPE基因分別轉錄脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）與荷爾蒙敏感性脂解酶（hormone-sensitive lipase，簡稱為HSL）。具體而言，ATGL可將細胞儲存的三酸甘油脂水解成游離之脂肪酸及雙酸甘油脂，而HSL則將雙酸甘油脂進一步水解成單酸甘油脂，二者均於脂肪上扮演舉足輕重的角色。因此，如圖4之實驗結果所示，諾麗果發酵物（照射紅光）能顯著提升LIPE（HSL）基因（即與脂肪代謝（減脂）相關基因）的表現量，而使諾麗果發酵物（照射紅光）具有促進代謝脂肪的活性的能力，而對脂肪分解具有促進的效果，更能有效地預防及改善肥胖症狀。

UCP1（uncoupling protein 1）基因所編碼的蛋白質為體解偶聯蛋白（UCP），其為線粒體陰離子載體蛋白（mitochondrial anion carrier proteins，簡稱為MACP）家族的成員之一，主要功能為將三磷酸腺核苷（Adenosine triphosphate，簡稱為ATP）還原，並促進陰離子從線粒體的內膜向外轉移，及促進質子從外部到線粒體內膜的返迴轉移，並將過程中產生的能量以熱能釋放出來；其中，UCP1基因僅在棕色脂肪細胞中表達，該棕色脂肪細胞含有大量的粒線體，能夠燃燒脂肪油滴以產生熱能。因此，UCP1基因的表現量上升，被認為能夠促進脂肪的分解，並使脂肪的累積量降低。基此，如圖4之實驗結果所示，諾麗果發酵物（照射紅光）能顯著提升UCP1基因（即與脂肪代謝（減脂）相關基因）的表現量，而使諾麗果發酵物（照射紅光）具有促進代謝脂肪的活性的能力，以對脂肪分解具有促進之效果，更能有效地預防及改善肥胖症狀。

由上可知，如圖4之實驗結果所示，諾麗果發酵物（照射紅光）能藉由顯著提升ATGL基因、LIPE（HSL）基因及UCP1基因三種與脂肪代謝（亦即減脂）相關基因中至少一種的表現量，而使諾麗果發酵物（照射紅光）具有促進代謝脂肪的活性的能力，以對脂肪分解具有促進之效果，更有效於預防及改善肥胖症狀。此外，如圖4之實驗結果所示，諾麗果發酵物（照射紅光）對於促進代謝脂肪的活性、促進脂肪分解與預防及改善肥胖症狀，均具有較諾麗果培養液及諾麗果發酵物（未照射紅光）更為優異的表現。

例 5 ：細胞試驗 - 促進彈力蛋白增生

於此，所使用的培養基為含有90 vol%最低限度基本培養基（minimum essential medium；品牌Gibco）、10 vol%胎牛血清蛋白（fetal bovine serum，FBS；品牌：Gibco）及1 mM丙酮酸鈉（sodium pyruvate，品牌：Gibco）的細胞培養基（以下稱為MEM培養基）。所使用的細胞株為人類肌膚成纖維細胞（CCD-966Sk cell，品牌：ATCC ^®，CRL-1881），以下稱CCD-966Sk細胞。

將CCD-966Sk細胞以每孔1×10 ⁵個的數量接種於每孔含2毫升MEM培養基之培養盤中，並於37 ℃下培養24小時，並分為4組：實驗組、對照一組、對照二組及空白組。接著，更換MEM培養基為實驗培養基，並將實驗組、對照一組、對照二組及空白組均於37 ℃下培養24小時。其中，實驗組的實驗培養基中含有0.25 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光）；對照一組的實驗培養基中含有0.25 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果培養液。對照二組的實驗培養基之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（未照射紅光）。空白組的實驗培養基中則不含上述諾麗果培養液、諾麗果發酵物（未照射紅光）及諾麗果發酵物（未照射紅光）。

接著，以彈性蛋白檢測套組（Fastin™ Elastin Assay kit，品牌：Biocolor）處理各組CCD-966Sk細胞後，以全光譜光學分析儀（品牌：BioTek，Epoch）檢測四組CCD-966Sk細胞的彈力蛋白生成量。其中，將未以實驗培養基培養24小時的空白組量測到的彈力蛋白含量視為1（即彈力蛋白生成量為100%）。需要特別說明的是，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生 t-試驗（Student’s t-test）來統計分析，如圖5所示。

在圖5中，相較於空白組，實驗組的彈力蛋白生成量為588.6%，而對照一組的彈力蛋白生成量為82.8%、對照二組的彈力蛋白生成量則為84.4%。換言之，空白組、對照一組及對照二組的彈力蛋白生成量之間並無明顯差異，且相較於對照一組及對照二組，實驗組的彈力蛋白生成量顯著地提高（分別為對照一組及對照二組的7.10倍及6.97倍），代表以含有諾麗果發酵物（照射紅光）培養的CCD-966Sk細胞可生成更多的彈力蛋白。由此可知，諾麗果發酵物（照射紅光）具有促進細胞合成彈力蛋白的能力。基此，當受體服用諾麗果發酵物（照射紅光）後，定殖於受體體內的諾麗果發酵物（照射紅光）具有可促進受體的肌膚細胞生成彈力蛋白，進而提高受體肌膚彈性的能力。

例 6 ：人體試驗 - 改善體態

令8位肥胖受試者（即其體脂率大於25%或BMI值大於24）每日飲用一瓶6 mL諾麗果發酵飲（其含有12 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光）），連續飲用2週。並且，於服用前（即第0週）及服用後（即第2週），以體重機測量此些受試者體重，以體脂計（廠牌：TANITA BC-601FS）測量此些受試者腹部及腿部之體內脂肪質量、全身體脂率、肌肉質量、皮下及內臟脂肪質量，以及以布尺量測此些受試者的腰圍。並且，第0週的量測結果與第2週的量測結果之間的統計學顯著差異是藉由學生 t-試驗來統計分析，如圖6至圖12所示。

由圖6之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使體內脂肪質量（腹部）減少約316.25公克。

由圖7之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使體內脂肪質量（腿部）減少約120.62公克。

由圖8之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使腰圍減少約1.2公分。

由圖9之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使肌肉質量增加約712.5公克。

由圖10之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使體脂率減少約1.0%。

由圖11之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使皮下脂肪質量減少約475.0公克。

由圖12之實驗結果可知，與服用前（第0週）相比，持續服用諾麗果發酵飲2週可使內臟脂肪質量減少約137.5公克。

由此可知，長期服用含有諾麗果發酵物（照射紅光）的諾麗果發酵飲可改善肥胖者的體內脂肪（腹部及腿部）累積、腰圍、肌肉質量、體脂率、皮下及內臟脂肪累積，亦即諾麗果發酵物（照射紅光）具有瘦身減脂及改善體態的能力。

例 7 ：人體試驗 - 改善排便狀況及改善腸胃蠕動情況

令8位肥胖受試者（即其體脂率大於25%或BMI值大於24）每日飲用一瓶6 mL諾麗果發酵飲（其含有12 vol%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光）），連續服用2週。並且，於服用前（即第0週）及服用後（即第2週），以問卷方式分析受試者腸胃及排便情況。

首先，對上述受試者於第0週（服用上述諾麗果發酵飲前）、第2週（服用上述諾麗果發酵飲後）進行腸胃狀態的問卷調查。詳細來說，在每週測試時填寫問卷，其調查的症狀項目及計分方式如下表4。各分數代表各種症狀項目的嚴重程度，並區分為：1分為無異狀（正常）；2分為輕微；3分為普通；4分為有些嚴重；5分為非常嚴重。

表4

項目/分數	1	2	3	4	5
1.有便秘之困擾
2.平時容易脹氣、消化不良

將問卷的分數數據換算為百分制的問卷結果，並將其平均而列於下表5與圖13及圖14所示。

表5

	第0週（受試者平均分數）	第2週（受試者平均分數）
1.有便秘之困擾	100.0	83.3
2.平時容易脹氣、消化不良	100.0	76.9

針對項目1（有便秘之困擾）及項目2（平時容易脹氣、消化不良），由上表5及對應的圖13之問卷結果可知，8位受試者在服用前（即第0週）均有便秘之困擾且平時容易脹氣、消化不良的情況。而在服用諾麗果發酵飲（即第2週）後，對於便秘之困擾的平均分數下降至83.3分（較輕微），代表持續服用諾麗果發酵飲2週後即可改善便秘的情況。此外，在服用諾麗果發酵飲（即第2週）後，對於平時容易脹氣、消化不良的平均分數下降至76.9分（較輕微），代表持續服用諾麗果發酵飲2週後即可改善容易脹氣、消化不良的情況。再由圖14的問卷結果可看出，在服用諾麗果發酵飲（即第2週）後，約有88%的受試者對於排便順暢及胃腸蠕動頻率明顯有感，更代表含有諾麗果發酵物（照射紅光）的諾麗果發酵飲確實具有可改善排便情況及改善胃腸蠕動情況的能力。

例 8 ：人體試驗 - 改善肌膚狀況

令8位25-40歲之受試者每日飲用一瓶50 g諾麗果發酵飲（其含有12 wt%之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光）），連續服用4週（即28日）。

受試者於開始服用前（臉部已清潔，第0週）及服用28日後，依據不同檢測項目，使用對應的儀器及測量方式，紀錄臉部肌膚之數值、並拍攝服用前及服用後的照片。（於服用前及服用後進行檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素會對肌膚所造成的影響）。

將分別對肌膚進行以下檢測項目的檢測：

1. 肌膚彈性（elasticity）及緊實度（firmness）

使用購自德國Courage+Khazaka electronic公司之肌膚彈力檢測探頭Cutometer ^®MPA580（C+K Multi Probe Adapter System；Germany）對同一受試者在服用前與服用前的面部肌膚進行檢測。測試原理是基於吸力和拉伸原理，在被測試的肌膚表面產生一個負壓將肌膚吸進一個測試探頭內，透過光學測試系統檢測肌膚被吸進探頭內的深度，並以軟體分析計算肌膚彈性與緊實度。其中，由儀器根據肌膚彈性與緊實度初始所測得之數值作為100%，並記錄受試者持續攝取諾麗果發酵物（照射紅光）4週後的根據肌膚彈性與緊實度所測得之數值，並將其與初始所測得之數值進行換算及比較。

2. 肌膚紅色斑點數量以及面積

使用全臉膚質檢測儀（7th Generation VISIA Complexion Analysis System；Canfield，USA）測定該些受試者的紅色斑點數量及面積。由儀器根據紅色斑點數量及面積初始所測得之數值作為100%，並記錄受試者持續攝取諾麗果發酵物（照射紅光）4週後的根據紅色斑點數量及面積所測得之數值，並將其與初始所測得之數值進行換算及比較。

3. 肌膚斑點

使用美國Canfield所販售之VISIA高階數位膚質檢測儀對同一受試者在飲用前與飲用後的面部肌膚進行檢測。該儀器係以UV光進行臉部肌膚拍攝及RBX偏振光技術進行臉部肌膚拍攝。紫外線可被黑色素吸收，提高色素斑的顯現度，偵測肉眼不可見的表皮層黑色素斑。測量數值越高，說明紫外線色斑（UV斑）越多。而RBX偏振光可偵測肉眼不可見的真皮層黑色素斑。測量數值越高，說明棕色斑越多。其中，由儀器根據肌膚UV斑初始所測得之數值作為100%，並記錄受試者持續攝取諾麗果發酵物（照射紅光）4週後的根據肌膚UV斑所測得之數值，並將其與初始所測得之數值進行換算及比較。

關於受試者之「肌膚彈性及緊實度」的檢測結果，其顯示於圖15。如圖15之實驗結果所示，相較於使用前的100%，在使用含有諾麗果發酵物（照射紅光）之諾麗果發酵飲4週後，受試者的肌膚彈性緊實度為104.2%而改善約4.2%。由此可見，諾麗果發酵物（照射紅光）確實具有可促進並改善肌膚彈性及緊實度的能力，進而具有能透過改善肌膚彈性而達到改善肌膚外觀及狀況的能力。

關於受試者之「肌膚紅色斑點數量及面積」的檢測結果及實際的外觀變化，分別顯示於圖16及圖17。如圖16之實驗結果所示，相較於使用前的100%，在使用含有諾麗果發酵物（照射紅光）之諾麗果發酵飲4週後，受試者的臉部肌膚泛紅程度為91.8%而下降約8.2%。圖17之實拍圖像為其中一位受試者臉部肌膚在第0週及使用第4週後，以檢測儀所拍攝的圖像。由圖17之圖像可知，在使用含有諾麗果發酵物（照射紅光）之諾麗果發酵飲4週後，受試者的肌膚紅色斑點數量/面積明顯減少或淡化。換言之，諾麗果發酵物（照射紅光）具有可透過改善或淡化肌膚泛紅而達到改善肌膚外觀及狀況的能力。

關於受試者之「肌膚斑點」的檢測結果及實際的外觀變化，分別顯示於圖18及圖19。在圖18中，相較於使用前的100%，在使用含有諾麗果發酵物（照射紅光）之諾麗果發酵飲4週後，受試者的肌膚UV斑為93.9%而下降約6.1%。圖19之實拍圖像為其中一位受試者臉部肌膚在第0週及使用第4週後，以檢測儀所拍攝的圖像。由圖19之圖像可知，在使用含有諾麗果發酵物（照射紅光）之諾麗果發酵飲4週後，受試者的肌膚UV斑點數量/面積明顯減少或淡化。換言之，諾麗果發酵物（照射紅光）具有可透過改善或淡化肌膚UV斑點而達到改善肌膚外觀及狀況的能力。

例 9 ：人體試驗 - 提升體內抗氧化能力

令8位25-40歲之受試者每日服用6 mL之使用例1的製備方法所得到的諾麗果發酵物（照射紅光），並分別於服用前（即第0週）及服用28日（即第4週）後，分別將受試者血液中的紅血球細胞以紅血球分離液進行分離，並將經分離的受試者血液以PBS調整至10 ⁶cells/mL後，使用生化比色法測定人體血球細胞中谷胱甘肽S轉移酶（glutathione s-transferase，簡稱為GST）的活性，以測量各受試者血液中GST的活性。其中，以使用前之GST的活性為100%，並將實驗結果顯示於圖20。

谷胱甘肽S轉移酶（GST）廣泛存在於哺乳動物各組織中，用以催化谷胱甘肽（glutathione，簡稱為GSH）與化學物質的親電子基團進行結合，最終形成硫醚氨酸排出體外，在體內解毒的功能上起重要作用。GSH-ST具有消除體內過氧化物及解毒的雙重功能。其中，谷胱甘肽S轉移酶在谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxide，簡稱為GSH-PX）活力低下的條件下，只有清除體內脂質過氧化物（lipid peroxide，簡稱為LPO）的功能。如圖20之實驗結果所示，相較於使用前的100%，在使用諾麗果發酵物（照射紅光）4週後，受試者的血液中GST的活性為107.2%而提升約7.2%，且改善率高達75%（亦即在此8位受測者中，有6位受測者達到改善效果；結果未顯示）。由此可見，諾麗果發酵物（照射紅光）能有效提升抗氧化的指標酵素（即GST），而確實具有能提升人體中整體抗氧化的能力。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

無

圖1是例1的製備方法所得的諾麗果發酵物的總多酚含量的檢測結果圖。圖2及圖3是例1的製備方法所得的諾麗果發酵物及其他對照組的瘦體素生成的檢測結果圖。圖4是例1的製備方法所得的諾麗果發酵物及其他對照組的減脂基因之表現量的檢測結果圖。圖5是例1的製備方法所得的諾麗果發酵物及其他對照組的彈力蛋白分泌量的檢測結果圖。圖6是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的體內脂肪質量（腹部）的檢測結果圖。圖7是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的體內脂肪質量（腿部）的檢測結果圖。圖8是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的腰圍的檢測結果圖。圖9是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的肌肉質量的檢測結果圖。圖10是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的體脂率的檢測結果圖。圖11是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的皮下脂肪質量的檢測結果圖。圖12是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的內臟脂肪質量的檢測結果圖。圖13及圖14是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第2週）的排便狀況的問卷結果圖。圖15是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第4週）的肌膚彈性的檢測結果圖。圖16是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第4週）的肌膚泛紅程度的檢測結果圖。圖17是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第4週）的肌膚泛紅程度的實際檢測照片。圖18是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第4週）的肌膚UV斑的檢測結果圖。圖19是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第4週）的肌膚UV斑的實際檢測照片。圖20是使用例1的製備方法所得的諾麗果發酵物於服用前（第0週）及服用後（第4週）的體內抗氧化能力的檢測結果圖。

Claims

一種諾麗果發酵物用於製備改善體態之組合物之用途，其中該諾麗果發酵物係藉由（a）將葡萄糖、諾麗果實與水混合並進行萃取以得到一諾麗果培養液以及（b）將該諾麗果培養液及複數個菌種進行發酵而製得，該些菌種包括酵母菌、乳酸菌及醋酸菌，以及在進行該發酵的過程中，對該諾麗果培養液及該些菌種照射一波長介於620-750 nm的紅色光源。
如請求項1所述之用途，其中該改善體態為增加全身肌肉重、減少全身體脂率、減少腹部脂肪重及/或腿部脂肪重、減少皮下脂肪重及/或內臟脂肪重，及減少腰圍其中至少一者。
如請求項1所述之用途，其中該諾麗果發酵物係透過促進瘦體素生成及/或促進脂肪代謝以達到該改善體態。
如請求項3所述之用途，其中該諾麗果發酵物係透過促進減脂基因的表現量以達到該促進脂肪代謝。
如請求項4所述之用途，其中該減脂基因為三酸甘油酯脂解酶（adipose triglyceride lipase, ATGL）基因、脂肪酶E（lipase E, LIPE）基因及體解偶聯蛋白1（uncoupling protein 1, UCP1）基因其中至少一者。
一種諾麗果發酵物用於製備改善肌膚狀況之組合物之用途，其中該諾麗果發酵物係藉由（a）將葡萄糖、諾麗果實與水混合並進行萃取以得到一諾麗果培養液以及（b）將該諾麗果培養液及複數個菌種進行發酵而製得，且該些菌種係由酵母菌、乳酸菌及醋酸菌組成，該發酵包含對該諾麗果培養液及該些菌種照射一波長介於620-750 nm的紅色光源，該改善肌膚狀況為改善肌膚泛紅、改善肌膚彈力及改善肌膚UV斑其中至少一者。
如請求項6所述之用途，其中該諾麗果發酵物係透過促進彈力蛋白增生以達到該改善肌膚彈力。
如請求項1或6所述之用途，該諾麗果發酵物還具有去除自由基、改善排便情況及改善腸胃蠕動情況其中至少一者之作用。
如請求項1或6所述之用途，其中該葡萄糖的添加量為該諾麗果實與該水之總重量的2-8 wt%。
如請求項1或6所述之用途，其中該水之重量為該諾麗果實總重的3-5倍。
如請求項1或6所述之用途，其中該酵母菌的添加量為相對於該諾麗果培養液的0.01-0.5 wt%，該乳酸菌的添加量為相對於該諾麗果培養液的0.01-0.25 wt%，及該醋酸菌的添加量為相對於該諾麗果培養液為1-20 wt%。
如請求項1或6所述之用途，其中該酵母菌的發酵時間為24-72小時，該乳酸菌的發酵時間為24-72小時，及該醋酸菌的發酵時間為72-240小時。
如請求項1或6所述之用途，其中該諾麗果發酵物的pH值為2.7-3.7，且其白利糖度（Brix degree）為23-27。