TW201827064A - 中草藥萃取物用於製備治療乳癌藥物的用途 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種中草藥萃取物用於製備治療或抑制一個體之乳癌病症之藥物的用途，其中該中草藥包含甘遂、大黃、芍藥、姜半夏、及炙甘草。該乳癌病症包括乳癌細胞增殖及侵襲。

Description

中草藥萃取物用於製備治療乳癌藥物的用途
本發明係關於利用中草藥萃取物用於製備治療乳癌藥物的領域。
根據國健署最新發布的2011年癌症登記統計資料顯示，高居台灣女性癌症之首的乳癌，罹患人數首次突破1萬人，共新增10056人，平均每天約有28名婦女罹患乳癌、每天有5名婦女死於乳癌。分析顯示，國內乳癌患者平均發病年齡約為52歲，其中尤以45至49歲婦女的發生率最高，35歲至45歲的女性乳癌發生率為每10萬人中有60至90人，和美國相當，顯見乳癌防治已經刻不容緩。
甘遂(Kansui Radix)為大戟科植物甘遂(Euphorbia kansui TN Liou ex TP Wang)的乾燥塊根，具有通裡攻下、瀉水逐飲的作用。臨床研究上，甘遂不僅能促進胃腸道積聚的宿便、毒素的排出，且還可吸收腹腔內液體和毒素自腸道排出，增強胃腸蠕動，促進急性胰臟炎患者腹膜炎的消退及腹水消失，緩解全身中毒症狀的作用，避免發炎介質和細胞因子(TNF-α)進入血液循環，刺激發炎介質之『瀑布效應』，避免造成組織器官損傷而導致多重器官衰竭。
甘遂主要化學成分為二萜類化合物及三萜類化合物。二萜類化合物，有較強的刺激作用，具有抑制細胞分裂活性、抗驅線蟲活性、抗 病毒活性、抗腫瘤活性...等等藥理作用。三萜類化合物，則具有阻止細胞分裂的功能，研究指出從甘遂分離出13種三萜類化合物，具有抗腫瘤的活性，其中以大戟二烯醇的活性最強，且對血壓具調節作用。
大黃為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的乾燥跟及根莖。在心血管系統方面，大黃目前已知的功效有以下：能夠顯著抑制血管生成；可通過改善血腦屏障損傷減輕腦水腫，大黃改善血腦屏障破壞的作用可能是通過抑制AQP-4基因轉錄和翻譯實現的；大黃素及大黃酸通過清除氧自由基抑制LIGHT的單核細胞的轉移而起到抗動脈粥樣硬化作用；大黃通過消炎及降血脂的作用起到抗動脈粥樣硬化及穩定血小板作用。大黃具保護心血管作用，與清除自由基、降血脂及抑制血管生成等作用有關。
故本發明利用中草藥萃取物來製備治療癌症的藥物。
本發明提供一種中草藥萃取物用於製備治療或抑制乳癌病症之藥物的用途。該藥物係投與一個體，以治療或抑制乳癌之病症，且該藥物之有效劑量為8-75毫克/公斤體重，較佳為12-60毫克/公斤體重；較佳為16-50毫克/公斤體重。
本發明之藥物可抑制乳癌細胞的侵襲及增殖。
本發明之藥物可抑制乳癌的移轉(metastasis)。
本發明之藥物可誘發乳癌細胞的自噬作用。
該中草藥包含甘遂、大黃、芍藥、姜半夏、及炙甘草。
該藥物之甘遂、大黃、芍藥、姜半夏、及炙甘草之成分比例為1-2.5：1.5-3：9-15：6-12：9-15。
該中草藥萃取物來自水萃或有機溶劑萃取。較佳的是來自水萃取物。
該個體為哺乳類動物，較佳地為人類。
本發明之用途是藉由萃取包含甘遂的活性成分，特別是三萜類化合物，來抑制乳癌細胞之生長、侵襲，且誘發乳癌細胞自噬現象。
本發明之藥物另可包含大黃、芍藥、姜半夏、及炙甘草之活性成分，用以同時抑制乳癌細胞之生長、侵襲，且誘發乳癌細胞自噬現象。
三陰性乳癌是乳癌種類中最有侵犯性的乳癌，罹患三陰性乳癌的病患通常比其他型乳癌患者有高復發率及高死亡率。因為賀爾蒙接受器陽性及人類表皮第二生長因子陽性患者，可以使用抗賀爾蒙藥物及標靶藥物治療，但三陰性乳癌缺乏對抗的標靶目標。化學藥物治療是三陰性乳癌患者重要的治療方式，但抗藥性卻是化學藥物治療失敗的主要原因。因此探討三陰性乳癌抗藥性機轉，是非常重要課題。
本發明之中草藥萃取物在三陰性乳癌細胞株中亦有抑制乳癌細胞之生長、侵襲，且誘發乳癌細胞自噬現象之效果。故本發明之中草藥萃取物具有抑制及預防乳癌轉移的效果，特別是三陰性乳癌中也有效果。
中草藥經萃取獲得之萃取物可用於製備預防或治療乳癌之藥物或保健食品，其中該藥物另可包含醫藥學上可接受之賦形劑或載劑；其中，該中草藥萃取物可以任何可被投予之個體吸收的方式給予，例如口服、注射、吸入等等，特別是口服方式，其中口服劑型可為例如錠劑、膠囊、粉劑、粒劑或液劑等，或者將該中草藥萃取物與其他食品或飲料組合。
本發明之中草藥萃取物可與一般治療乳癌會使用的治療方 式共同使用，包括放療、化療、手術、標靶、以及口服藥物。
本說明書中以「T33」作為本發明之中草藥萃取物代稱。
圖1為不同劑量T33抑制MDA-MB231細胞生長；A：MDA-MB231細胞以0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理24及48小時後的生長狀況；B：MDA-MB231細胞以0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理24及48小時後的細胞存活率(cell viability)，每個實驗進行三重複，*及#：p<0.05。
圖2為不同劑量T33抑制MCF-7細胞生長；A：MCF-7細胞以0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理24及48小時後的生長狀況；B：MCF-7細胞以0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理24及48小時後的細胞存活率(cell viability)，每個實驗進行三重複，*及#：p<0.05。
圖3為不同劑量T33抑制MDA-MB231細胞侵襲能力；以濃度0.1mg/ml、.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理MDA-MB231細胞48小時，並以transwell migration assay測試其侵襲能力；A：以400倍放大倍率觀察細胞情況；B：細胞侵襲數量量化圖，平均值±標準差，每實驗三重複，*：p<0.05。
圖4為不同劑量T33抑制MCF-7細胞侵襲能力；以濃度0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理MCF-7細胞48小時，並以transwell migration assay測試其侵襲能力；A：以400倍放大倍率觀察細胞情況；B：細胞侵襲數量量化圖，平均值±標準差，每實驗三重 複，*：p<0.05。
圖5為不同劑量T33誘發MDA-MB231細胞自噬能力；以濃度0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及l0mg/ml的T33處理MDA-MB231細胞24小時；A：LC3-I及LC3-II蛋白表現量；B：LC3-I及LC3-II蛋白表現量量化圖，平均值±標準差，每實驗三重複，*：p<0.05。
圖6為不同劑量T33抑制MCF-7細胞自噬能力；以濃度0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理MCF-7細胞24小時；A：LC3-I及LC3-II蛋白表現量；B：LC3-I及LC3-II蛋白表現量量化圖，平均值±標準差，每實驗三重複，*：p<0.05。
圖7為不同劑量(0mg/Kg(PBS)、200mg/Kg、600mg/Kg)T33抑制MDA-MB231細胞在異體移植裸鼠生長；A：每周測量腫瘤之大小(mm3)；B：小鼠犧牲前之腫瘤外觀代表圖；C：自以PBS、200mg/kg、或600mg/kg之T33處理的BALB/c裸鼠中重新取回的異體移植腫瘤之圖像，*：p<0.05。
圖8為不同劑量(0mg/Kg(PBS)、200mg/Kg、600mg/Kg)T33抑制MCF-7細胞在異體移植裸鼠生長；A：每周測量腫瘤之大小(mm3)；B：小鼠犧牲前之腫瘤外觀代表圖；C：自以PBS、200mg/kg、或600mg/kg之T33處理的BALB/c裸鼠中重新取回的異體移植腫瘤之圖像，*：p<0.05。
為讓本發明之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本發明之較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：
於本實施例中所使用的細胞株MDA-MB231是一種高轉移 的人類乳癌細胞株。MCF-7細胞株則對於雌激素的反應很靈敏，是一種普遍的乳癌細胞株。
T33之組成為甘遂、大黃、芍藥、姜半夏、及炙甘草。萃取物是萃取自水萃，該成分比例為大黃：甘遂：芍藥：姜半夏：炙甘草分別為1.5克-3克：1克-2.5克：9克-15克：6克-12克：9克-15克。
5種中藥依照比例前述比例重量，以1000mL逆滲透水文火熬煮至體積為250mL，冷凍乾燥為2g後，以水回溶至所需濃度。
In vitro
T33體外抑制MDA-MB231和MCF-7細胞的增殖及侵襲能力
為了評估T33對人類乳腺癌的影響，分別採用不同劑量的T33處理MDA-MB231與MCF-7細胞，並利用MTT和細胞遷移試驗(transwell migration assays)進行分析。相較於控制組(control)的細胞株，在給予0.1mg/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T3324小時後的MDA MB231和MCF細胞株的存活率顯著下降(圖1和圖2)。在不同濃度T33處理48小時後的MDA-MB231和MCF-7細胞株亦發現了類似的結果(圖1和圖2)。透過transwell invasion chamber assay顯示，以0.1ul/ml、0.5mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33分別處理48小時後的MDA-MB231及MCF-7細胞株，其侵襲百分比相較於控制組有顯著的降低(圖3和圖4)。
T33體外誘導MDA-MB231及MCF-7的自噬作用
為了進一步研究MDA-MB231及MCF-7細胞株死亡的可能 機制，本實施例利用免疫染色法(immunoblotting)來偵測LC3-I及LC3-II蛋白質的表現量。在以2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理的MDA-MB231細胞株中觀測到LC3-II蛋白質的顯著上升(如圖5)。圖5B為在MDA-MB231細胞株中LC3-II/β-Actin的比例。同樣的，在以2.5mg/ml、5mg/ml、及10mg/ml的T33處理的MCF-7細胞株中觀測到LC3-II蛋白質的顯著上升(如圖5)。圖5B為在MCF-7細胞株中LC3-II/β-Actin的比例。
In vivo
T33活體內抑制MDA MB231和MCF-7細胞株生長
為了確定在體外實驗中的結果(如上述實施例)於活體內的應用可行性，透過皮下注射5x106 MDA-MB231或MCF-7細胞株於BALB/c裸鼠來建立腫瘤異體移植。當腫瘤大小達到近50mm3時，每天口服施予該小鼠PBS、200mg/Kg、或600mg/Kg的T33。在施予200mg/Kg或600mg/Kg之T33的小鼠中觀察到平均腫瘤體積有顯著下降(圖7A和圖8A)。圖7B和8B為BALB/c裸鼠在犧牲前施予PBS、200mg/kg、或600mg/kg之T33的代表性圖像。圖7C和8C分別顯示了在試驗終點時，自以PBS、200mg/kg、或600mg/kg之T33處理的BALB/c裸鼠中重新取回的異體移植腫瘤之圖像。
由以上實施例可得知，T33具有抑制乳癌細胞侵襲及生長的能力。
雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內，相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (10)

  1. 一種中草藥萃取物，包含大黃、甘遂、芍藥、姜半夏、及炙甘草萃取物，其中該等成分比例為大黃：甘遂：芍藥：姜半夏：炙甘草分別為1.5-3：1-2.5：9-15：6-12：9-15。
  2. 如申請專利範圍第1項之萃取物，其中該萃取物係來自水萃。
  3. 如申請專利範圍第1項之萃取物，其中該萃取物之萃取方法為：將大黃、甘遂、芍藥、姜半夏、及炙甘草以申請專利範圍第1項之比例用1000mL逆滲透水文火熬煮至250mL萃取液；將該萃取液冷凍乾燥為2g；將水加入該萃取液回溶至所需濃度。
  4. 一種利用申請專利範圍第1項之方法製備之中草藥萃取物用於製備治療或抑制一個體之乳癌病症之藥物的用途，其中該中草藥包含甘遂、大黃、芍藥、姜半夏、及炙甘草。
  5. 如申請專利範圍第1項之用途，其中該藥物之有效劑量為8-75毫克/公斤體重。
  6. 如申請專利範圍第4項之用途，其中該藥物之有效劑量為12-60毫克/公斤體重。
  7. 如申請專利範圍第4項之用途，其中該藥物之有效劑量為16-50毫克/公斤體重。
  8. 如申請專利範圍第4項之用途，其中該乳癌病症包含乳癌細胞侵襲及增殖。
  9. 如申請專利範圍第4項之用途，其中該個體為哺乳類動物，特別是人類。
  10. 如申請專利範圍第4項之用途，另可與一般治療乳癌會使用的治療方式共 同使用，包括放療、化療、手術、標靶、以及口服藥物。
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