CN105287712A - 用以抗子宫肌瘤的中草药组合物、及其萃取物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明为用以抗子宫肌瘤的中草药组合物、及其萃取物的用途，公开了一种中草药组合物，包含：以重量百分比计为25～75%的牛樟芝、20.8～62.5%的黄耆，及4.2～12.5%的益母草，该中草药组合物用以预防及改善子宫肌瘤的症状，本发明另揭示该中草药组合物的萃取物用以制备抗子宫肌瘤症状药物的用途。

Description

用以抗子宫肌瘤的中草药组合物、及其萃取物的用途

技术领域

本发明是关于一种中草药组合物，特别是一种用以抗子宫肌瘤的中草药组合物，本发明另关于该中草药组合物的萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途。

背景技术

子宫肌瘤(uterinefibroid)为源自于子宫肌层(myometrium)的良性肿瘤(leiomyoma)，好发于30～50岁的妇女，大多数的子宫肌瘤无明显症状，但是随着子宫肌瘤的增长，除了可能造成严重痛经(heavy,painfulperiods)、不正常出血(abnormalgynecologichemorrhage)，甚至可能会导致不孕现象(infertility)，此时可以通过子宫肌瘤切除术(uterinemyomectomy)加以清除。

现有药物多用以改善子宫肌瘤的病症，例如利用非类固醇抗炎药物(non-steroidalanti-inflammatorydrug，简称NSAID)来治疗子宫肌瘤导致的疼痛，或使用口服避孕药(oralcontraceptivepill，简称OCP)来减少出血现象；此外，另可以通过促性腺激素释放激素类似物(gonadotropin-releasinghormoneanalog，简称GnRH类似物)，降低体内动情素(estrogen)含量，以抑制子宫肌瘤的生长，长期服用该GnRH类似物却可能导致骨质疏松症(osteoporosis)或停经(postmenopausalsymptom)等症状，而且于停止投药后，子宫肌瘤仍可能会继续生长，因此仅建议使用于特定患者。

据此，仍有必要提供一种中草药组合物，以对抗子宫肌瘤的病症。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种用以抗子宫肌瘤的中草药组合物，以抑制子宫肌瘤生长。

本发明的又一目的是提供一种中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，是通过萃取自该中草药组合物的活性成分，改善子宫肌瘤的病状，以提升患者的生活品质。

为达到前述发明目的，本发明所运用的技术手段及借助该技术手段所能达到的功效包含有：

一种用以抗子宫肌瘤的中草药组合物，包含：以重量百分比计为25～75％的牛樟芝、20.8～62.5％的黄耆，及4.2～12.5％的益母草。

本发明的中草药组合物，其中，该中草药组合物包含以重量百分比计为75％的牛樟芝。

本发明的中草药组合物，其中，该中草药组合物包含以重量百分比计为20.8％的黄耆。

本发明的中草药组合物，其中，该中草药组合物包含以重量百分比计为4.2％的益母草。

本发明的中草药组合物，其中，该中草药组合物包含以重量百分比计为75％的牛樟芝、20.8％的黄耆，及4.2％的益母草。

一种中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，其中，该中草药萃取物是通过一包含下列步骤的方法所制得：提供上述中草药组合物；及于50～80℃下，以95％酒精萃取该中草药组合物8～12小时，以获得该中草药萃取物；及浓缩该中草药萃取物；其中，该中草药组合物及该95％酒精的重量体积比为1：2，该牛樟芝为子实体，该黄耆为根部，该益母草为地上部位。

需要说明的是，上述“重量体积比”是指国际标准单位千克和升的数值比。

本发明的中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，其中，该中草药萃取物是投予一所需个体，以预防或改善该所需个体的子宫肌瘤病症，其中，该中草药萃取物投予该所需个体的剂量为每天每公斤的该所需个体体重投予300毫克的该中草药萃取物，且连续投予28天。

本发明的用以抗子宫肌瘤的中草药组合物，是由牛樟芝、黄耆及益母草的组成配比，降低所需个体体内的动情素及黄体素含量，可以达到抑制子宫肌瘤生长的功效。

本发明的中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，是通过萃取自牛樟芝、黄耆及益母的活性成分，有效抑制子宫肌瘤的生长，使患者得以免除子宫肌瘤增长导致的痛经、不正常出血等病症，进而达到提升患者生活品质的功效。

附图说明

图1为第C0组大鼠的子宫切片H&E染色结果。

图2为第C0组大鼠的子宫角切片H&E染色结果。

图3为第C1组大鼠的子宫切片H&E染色结果。

图4为第C1组大鼠的子宫角切片H&E染色结果。

具体实施方式

为让本发明的上述及其他目的、特征及优点能更明显易懂，下文特举本发明的较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下：

本发明的中草药组合物是包含牛樟芝(Antrodiacinnamomea)、黄耆(Astragalusonobrychis)及益母草(Leonurusjaponicus)，通过牛樟芝、黄耆及益母草的组成配比，该中草药组合物具有抑制子宫肌瘤成长的活性。

详而言之，该中草药组合物包含以重量百分比计为25～75％的牛樟芝、20.8～62.5％的黄耆，及4.2～12.5％的益母草，该中草药组合物较佳更可以包含以重量百分比计为75％的牛樟芝、20.8％的黄耆，及4.2％的益母草，据此，该中草药组合物即可以借助多种活性成分的共同作用，抑制子宫肌瘤的生长，进而可以免除子宫肌瘤患者的痛经、不正常出血等病症。

其中，牛樟芝是选用皿培式牛樟芝子实体，其富含三萜类；黄耆是可以选择豆科植物蒙古黄芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜荚黄芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，其含有丰富的苷类、多醣体、黄酮类化合物、氨基酸及微量元素；益母草可以选择植物的干燥地上部份，其含有益母草碱、益母草定、水苏碱等多种生物碱。并含苯甲酸、氯化钾、月桂酸、亚麻酸、油酸、维生素A以及兰香苷等黄酮类物质。

本发明的中草药组合物可以有效抑制子宫肌瘤的生长，因而能够作为一种辅助抑制子宫肌瘤的活性成分，较佳可以将该中草药组合物经萃取获得的中草药萃取物应用于制备预防或治疗子宫肌瘤的药物或保健食品，该中草药萃取物与医药学上可以接受的载剂或赋形剂组合形成一医药组合物，其中，该中草药萃取物可以制备成任何方便食用的型式，如锭剂、胶囊、粉剂、粒剂或液剂等，或者将该中草药萃取物与其他食品或饮料组合，以一适于食用的样态供生物体以口服方式服用。

其中，该中草药萃取物较佳可以通过一包含以下步骤的方法所制得：提供如上述的中草药组合物；于50～80℃下，以95％酒精萃取该中草药组合物8～12小时；及将萃取产物进行浓缩，以获得该中草药萃取物。

详而言之，该中草药组合物能够以重量体积比为1：2的比例与95％酒精混合，使该中草药组合物所富含的多种活性成分可以溶出于该95％酒精。

于本实施例中，是取500克的中草药组合物，以1升的95％酒精进行萃取，于60℃定温回流10小时，重复萃取3次，最后通过真空过滤、减压浓缩及冷冻干燥，以获得该中草药萃取物。

又，该中草药萃取物可以供投予一所需个体，例如以每天每公斤的该所需个体体重投予300毫克的该中草药萃取物，且连续投予该所需个体28天，使各种活性成分得以于该所需个体体内作用，而可以抑制子宫肌瘤的生长。

为证实本发明中草药组合物确实具有抗子宫肌瘤活性，遂进行以下试验：

(A)中草药萃取物的制备及活性成分含量检测

本试验中，各组中草药组合物的组成比例是如第1表所示，该中草药萃取物的制备方法是如上所述，各取500克的各组中草药组合物，以1升的95％酒精进行萃取后，通过过滤、浓缩及冷冻干燥后，即可以获得各组的中草药萃取物。

第1表、本试验各组中草药组合物的组成比例。

分别秤取0.2克的各组中草药萃取物至一螺旋试管中，加入5mL甲醇，以超音波震荡15分钟，再以3000rpm离心10分钟后，取5mL上清液，置入一干净试管，再以100℃水浴加热至干燥。

续选用PurospherSTAR(Merck)RP-18e(5μm)250mm×4mm管柱进行分析，以47：53的体积比混合乙腈(Acetonitrile，简称ACN)及0.085％的磷酸溶液作为流动相，流速为1mL/min，检测波长为254nm的吸光值，并分析各组总三萜占总面积的百分比，纪录于第2表。

第2表、各组中草药萃取物的总三萜及多醣体含量。

组别	总三萜含量(％)	多醣体含量(ppm)
			第A1组	22.34±2.46	30.42±3.72
第A2组	16.63±3.12	20.18±2.96
			第A3组	26.74±2.82	41.23±3.87

又，另以半乳糖作为标准品，利用其浓度及吸光值制成标准曲线。续配置各组中草药萃取溶液，取1mL的各组中草药萃取物加入1mL的5％酚类溶液，再加入5mL浓硫酸，于静置10分钟后，震荡使其均匀混合，并利用分光光度计量测各组于490nm的吸光值，借助标准曲线计算其浓度，其结果纪录于第2表。

根据上述试验结果，各组中草药萃取物均富含总三萜及多醣体，其中又以第A3组的含量最高。

(B)对子宫肉瘤细胞的存活影响

本试验是选用人类子宫肉瘤细胞(MES-SAcells)，购自食品工业发展研究所(BCRC60333)，该子宫肉瘤细胞是培养于含有1.5mML-麸氨酸(L-Glutamine)及10％胎牛血清(FBS)的90％McCoy's5a培养液中，并置于温度为37℃、二氧化碳浓度为5％及湿度为95％的培养箱中，每隔两天更换一次新鲜培养液。

该子宫肉瘤细胞于继代培养时，是先将培养液及细胞以1000rpm离心5分钟，去除上清液后，再加入新的培养液，并且使10公分培养皿中维持细胞数为约1×10⁵至1×10⁶cells/mL。

本试验进行时，是可以取出已经长8～9分满的上述子宫肉瘤细胞的10公分培养皿，去除已变色的培养液，以8mL的PBS缓冲溶液冲洗细胞一次，加入胰蛋白酶/乙二胺乙酸(Trypsin/EDTA)反应1～3分钟后，轻摇培养皿使细胞自壁上脱落，加入已回温的培养液，轻轻将细胞冲散，再将含细胞的培养液分别置入离心管内，以1500rpm离心10分钟，除去上清液后，再加入含血清的培养液，使细胞分散均匀，并取出20μL的细胞，加入20μL0.04％的锥虫蓝(TrypanBlue)进行染色，放入细胞计数器，并于显微镜下计数活细胞数，细胞存活率必须不小于85％才可以进行后续试验。

以含血清的培养液将上述子宫肉瘤细胞的浓度调整为1x105cell/mL，并且各取100μL的该子宫肉瘤细胞接种于96孔盘，使每个槽孔含有1x104细胞，并于温度为37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱进行隔夜培养。

经过24小时培养后，分别加入100μL如第3表所示的中草药萃取物(浓度为2mg/mL，溶于DMSO中)，混合均匀后，于温度为37℃，二氧化碳浓度为5％的培养箱续隔夜培养24小时。

第3表、本试验各组的细胞处理条件及存活率。

组别	处理条件	存活率(％)*
			第B0组	DMSO	83.5±0.4
第B1组	第A1组中草药萃取物	28.1±0.3
			第B2组	第A2组中草药萃取物	35.9±0.2
第B3组	第A3组中草药萃取物	15.2±0.2

*存活率的换算公式：「各组之吸光值」/「未经任何药物处理的控制组吸光值」×100％。

24小时后，移除培养液，以磷酸缓冲液冲洗后，再加入100μL含有CCK-8的新鲜培养液，置于温度为37℃，二氧化碳浓度为5％的培养箱反应2小时后，震摇5分钟后，检测每个槽孔于450nm波长下的吸光值，并依未经任何药物处理的控制组的吸光值结果计算存活率，纪录于第3表。

请参照第3表所示，依据上述试验结果，该中草药萃取物确实具有抑制子宫肉瘤细胞生长的能力，且是以第A3组中草药萃取物具有最佳效力，是以续利用该第A3组中草药萃取物进行后续试验。

(C)对子宫肉瘤大鼠的影响

本试验是选用购自财团法人国家实验研究院国家实验动物中心的Wistar雌性大鼠，该些大鼠皆在8周周龄以上，体重介于180～190克之间。该些大鼠是饲养于大仁科技大学动物中心，维持室温为20～22℃的动物室，光照时间与黑暗时间各为12小时，该些大鼠可以自由进食及饮水。

分别经胃管将RO水(第C0组)或第A3组中草药萃取物(第C1组)投予大鼠(投予剂量为每天每公斤大鼠投予300毫克的中草药萃取物)，同时通过腹腔注射投予动情素(剂量为200微克/次)，每日纪录各组大鼠的体重、摄食量及饮水量，于4周后，自腹腔动脉采血，量测血液中的动情素及黄体素(progesterone)含量，并取出子宫，进行组织切片及H&E染色(hematoxylin-eosin)，其结果分别如第4表及图1～4所示。

第4表、本试验各组大鼠于28天后的平均体重、摄食量、饮水量，以及血液中的动情素、黄体素含量。

请参照第4表，本试验各组的大鼠于28天后的体重、摄食量、饮水量并无显著差异，而投予该中草药萃取物的第C1组大鼠血液中的动情素及黄体素含量则有明显下降(对动情素之抑制率达47.5±4.8％，而对黄体素的抑制率为33.1±5.1％)，显示该中草药萃取物确实具有降低体内动情素及黄体素含量的能力。

续参照图1及2，分别为第C0组大鼠的子宫、子宫角的组织切片染色结果，子宫平滑肌细胞呈现肥大状态(hypertrophy)，具有嗜伊红性细胞质，细胞边界较不清楚、排列交错、紊乱，且无法观察到细胞有丝分裂现象，显示已成功诱导使第C0组大鼠形成子宫肌瘤；又，请参照图3及图4，第C1组大鼠的组织染色切片结果显示，口服该中草药萃取物可以成功抑制子宫平滑肌增生及肥大情形，显示该中草药萃取物确实具有改善子宫平滑肌增生、肥大现象的活性。

综合上述，本发明的用以抗子宫肌瘤的中草药组合物，是通过牛樟芝、黄耆及益母草的组成配比，降低所需各体体内的动情素及黄体素含量，可以达到抑制子宫肌瘤生长的功效。

再者，本发明的中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，是借助萃取自牛樟芝、黄耆及益母的活性成分，有效抑制子宫肌瘤的生长，使患者得以免除子宫肌瘤增长导致的痛经、不正常出血等病症，进而达到提升患者生活品质的功效。

Claims (7)

1.一种用以抗子宫肌瘤的中草药组合物，包含：以重量百分比计为25～75%的牛樟芝、20.8～62.5%的黄耆，及4.2～12.5%的益母草。

2.根据权利要求1所述的中草药组合物，其特征是，该中草药组合物包含以重量百分比计为75%的牛樟芝。

3.根据权利要求1所述的中草药组合物，其特征是，该中草药组合物包含以重量百分比计为20.8%的黄耆。

4.根据权利要求1所述的中草药组合物，其特征是，该中草药组合物包含以重量百分比计为4.2%的益母草。

5.根据权利要求1所述的中草药组合物，其特征是，该中草药组合物包含以重量百分比计为75%的牛樟芝、20.8%的黄耆，及4.2%的益母草。

6.一种中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，其特征是，该中草药萃取物是通过一包含下列步骤的方法所制得：

提供根据权利要求1～5项任一项所述的中草药组合物；

于50～80℃下，以95%酒精萃取该中草药组合物8～12小时；及

将萃取产物进行浓缩，以获得该中草药萃取物；

其中，该中草药组合物及该95%酒精的重量体积比为1：2，该牛樟芝为子实体，该黄耆为根部，该益母草为地上部位。

7.根据权利要求6所述的中草药萃取物用以制备抗子宫肌瘤药物的用途，该中草药萃取物投予一个所需个体，以预防或改善该所需个体的子宫肌瘤病症，其特征是，该中草药萃取物投予该所需个体的剂量为每天每公斤的该所需个体体重投予300毫克的该中草药萃取物，且连续投予28天。