交叉引用
本申請案主張2016年5月2日申請的美國申請序列號62/330,673之權益，其內容特此以全文引用之方式併入。
以引用之方式併入
本說明書中所提及之所有公開案及專利申請案均以引用之方式併入本文中，其引用的程度如各單獨的公開案或專利申請經特定及單獨地指示以引用之方式併入一般。
定義
除非上下文另外明確規定，否則如本文中及所附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個指示物。因此，舉例而言，提及「一種藥劑」，其包括複數種該等藥劑，且提及「該細胞」，其包括提及一或多種細胞(或提及複數個細胞)及熟習此項技術者已知的其等效物等等。當本文所用之範圍用於諸如分子量之物理特性或諸如化學式之化學特性時，意欲包括本文中範圍及特定實施例的所有組合與子組合。當提及數目或數值範圍時，術語「約」意謂所提及數目或數值範圍為實驗變化內(或統計實驗誤差內)之近似值，且由此術語「約」係指所陳述數目或值之±10%。術語「包含(comprising)」(及相關術語，諸如「包含(comprise/comprises)」或「具有」或「包括」)並不意欲排除在其他某些實施例中，例如本文所述之任何主題組合物、組合物、方法或過程或其類似物之實施例「由所述特徵組成」或「基本上由所述特徵組成」。 如本文中所用，關於患有疾病或病症及其類似者之個人的術語「患者」涵蓋哺乳動物及非哺乳動物。在一些實施例中，哺乳動物為人類。 如本文所用，關於如本文所述之化合物或組合物所投與之個人的術語「個體」涵蓋哺乳動物及非哺乳動物。在一些實施例中，哺乳動物為人類。 如本文所用，術語「有效量」、「治療有效量」或「醫藥學上有效量」係指足夠用以治療或預防特定疾病或病狀所投與的至少一種藥劑或化合物的量。結果為減輕及/或緩解疾病之病徵、症狀或病因，或生物系統之任何其他所需改變。舉例而言，用於治療用途之「有效量」為使疾病在臨床上顯著減弱所需的包含如本文所揭示之化合物之組合物的量。使用諸如劑量遞增研究之技術來測定任何個別情況下之適當「有效」量。 藥劑或療法之「次治療量」為小於彼藥劑或療法之有效量的量，但當與另一藥劑或療法之有效量或次治療量組合時，可歸因於例如所得有效作用之協同作用而產生醫師所需之結果或降低之副作用。 藥劑或療法之「協同有效」治療量為當與另一藥劑或療法之有效量或次治療量組合時，產生比當單獨使用兩種藥劑中之任一者時要大的作用的量。在一些實施例中，當組合使用時，藥劑或療法之協同有效治療量產生比兩種藥劑或療法中之每一者單獨使用時之累加作用要大的作用。術語「較大作用」不僅涵蓋待治療之病症的症狀減少，且亦涵蓋經改良之副作用特徵、經改良之耐受性、經改良之患者順應性、改良功效或任何其他經改良之臨床結果。 如應用於組合使用(無論同時或依次)的兩種或多於兩種醫藥學上活性成分之作用，術語「協同的」及「協同地」係指比單獨使用兩種藥劑中之任一者時要大的作用。 本文中所述之化合物可展現其天然同位素豐度，或一或多個原子可以人工方式富集於原子數相同但原子質量或質量數與自然界中主要存在之原子質量或質量數不同的特定同位素中。本發明化合物之所有同位素變體無論是否具放射性均涵蓋於本發明之範疇內。舉例而言，氫具有三種天然存在之同位素，其表示為
1
H (氕)、
2
H (氘)及
3
H (氚)。氕為自然界中氫之最充足同位素。氘之富集可提供特定治療性優點，諸如增加活體內半衰期及/或暴露，或可提供適用於研究藥物消除及代謝之活體內途徑的化合物。可使用合適之同位素富集試劑及/或中間體藉由熟習此項技術者所熟知的習知技術或藉由與本文中之流程及實例中所述之方法相似的方法來製備同位素富集化合物。在一些實施例中，本文中所述之化合物包含一或多種同位素變體(例如氘、氚、
13
C及/或
14
C)。 「互變異構體」係指其中質子有可能自分子之一個原子移位至同一分子之另一原子的分子。在某些實施例中，本文中所展現之化合物以互變異構體形式存在。在其中可能有互變異構化之情況中，將存在互變異構體之化學平衡。互變異構體之精確比率視若干因素而定，包括物理狀態、溫度、溶劑及pH。 「醫藥學上可接受之鹽」包括酸加成鹽與鹼加成鹽。本文所述之經取代的類固醇衍生物中之任一者的醫藥學上可接受之鹽意欲涵蓋任何及全部醫藥學上適合之鹽形式。本文中所述之化合物的較佳醫藥學上可接受之鹽為醫藥學上可接受之酸加成鹽及醫藥學上可接受之鹼加成鹽。 「醫藥學上可接受之酸加成鹽」係指保留游離鹼之生物有效性及特性，在生物學或其他方面合乎需要之彼等鹽，且其由無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫碘酸、氫氟酸、亞磷酸及其類似者形成。由有機酸，諸如脂族單甲酸及二甲酸、經苯基取代之烷酸、羥基烷酸、烷二酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸等形成，且包括例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及其類似者之鹽亦包括在內。因此例示性鹽包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸單氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、扁桃酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽及其類似者。亦涵蓋胺基酸之鹽，諸如精胺酸鹽、葡糖酸鹽及半乳糖醛酸鹽(參見例如，Berge S.M.等人, 「Pharmaceutical Salts, 」
Journal of Pharmaceutical Science,
66:1-19 (1997))。在一些實施例中，根據熟練技術人員所熟悉之方法及技術藉由使游離鹼形式與足夠量之所需酸接觸以產生鹽來製備鹼性化合物之酸加成鹽。 「醫藥學上可接受之鹼加成鹽」係指保留游離酸之生物有效性及特性，在生物學或其他方面合乎需要之彼等鹽。此等鹽由無機鹼或有機鹼與游離酸加成而製備。在一些實施例中，醫藥學上可接受之鹼加成鹽由金屬或胺，諸如鹼金屬及鹼土金屬或有機胺形成。衍生自無機鹼之鹽包括(但不限於)鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽及其類似鹽。衍生自有機鹼之鹽包括(但不限於)以下各者之鹽：一級胺、二級胺及三級胺、經取代之胺(包括天然存在之經取代之胺)、環胺及鹼性離子交換樹脂，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲胺基乙醇、2-二乙胺基乙醇、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡鹼、普魯卡因(procaine)、
N , N -
二苯甲基乙二胺、氯普魯卡因、海卓胺(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、伸乙基二苯胺、
N -
甲基還原葡糖胺、葡糖胺、甲基還原葡糖胺、可可豆鹼、嘌呤、哌嗪、哌啶、
N
-乙基哌啶、多元胺樹脂及其類似者。參見Berge等人，同上。 如本文所用，「治療(treatment)」或「治療(treating)」或「緩解」或「改善」可互換使用。此等術語係指獲得有益或所需結果之方法，其包括(但不限於)治療效益及/或預防效益。「治療益處」意謂根除或改善所治療之潛在病症。此外，藉由根除或改善與潛在病症相關之一或多種生理症狀以使得在患者中觀測到好轉來達成治療效益，儘管該患者仍可罹患潛在病症。對於預防效益而言，在一些實施例中，向處於罹患特定疾病之風險下的患者或向報導有疾病之生理症狀中之一或多者但並未作出此疾病之診斷的患者投與組合物。 除非特定的相反指示，否則在本說明書之上下文中，術語「療法」亦包括「預防」。術語「治療(therapeutic)」及「治療(therapeutically)」應相應地來解釋。 「前藥」意謂指示一種化合物，在一些實施例中，其在生理學條件下或藉由溶劑分解作用轉化成本文所述之生物學活性化合物。因此，術語「前藥」係指醫藥學上可接受之生物學活性化合物之前驅體。當投與個體時，前藥通常無活性，但例如藉由水解會在活體內轉化為活性化合物。前藥化合物通常在哺乳動物生物體中提供可溶性、組織相容性或延時釋放之優點(
參見例如
Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985)，第7至9頁, 21-24 (Elsevier, Amsterdam))。 如本文所用，術語「實質上相同」係指當由一般熟習此項技術者加以研究時，粉末X射線繞射圖、DSC熱分析圖、TGA/SDTA圖或TGMS圖與本文中所描繪之彼等者一致或不一致，但處於實驗誤差之界限內。 如本文所用，術語「實質上相似」係指當由一般熟習此項技術者加以研究時，粉末X射線繞射圖、DSC熱分析圖、TGA/SDTA圖或TGMS圖與本文中所描繪之彼等者不一致，且共有大多數主峰，其處於實驗誤差之界限內。
多晶型物
本發明係關於3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型，已知其會調變組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)活性。 術語「多晶型1」或「型1」係指3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物之結晶形式，其呈現與圖16及/或圖34中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖，及/或與圖17中所示之DSC熱分析圖實質上相同之DSC熱分析圖，及/或與圖18A中所示之TGA/SDTA跡線實質上相同之TGA/SDTA跡線，及/或與圖18B中所示之TGMS跡線實質上相同之TGMS跡線。 術語「多晶型3」或「型3」係指3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之結晶形式，其呈現與圖1中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖，及/或與圖2中所示之DSC熱分析圖實質上相同之DSC熱分析圖，及/或與圖3A中所示之TGA/SDTA跡線實質上相同之TGA/SDTA跡線，及/或與圖3B中所示之TGMS跡線實質上相同之TGMS跡線。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之多晶型物之特徵在於圖1之主峰。在一些實施例中，主峰為圖1之XRPD圖中最大強度為至少20%、至少15%或至少10%之峰。 本發明亦係關於固體醫藥組合物，其包含有效量之呈結晶多晶型3形式的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物作為活性成分。 本發明亦係關於用於治療或預防疾病之方法，該等方法包含投與有效量之呈結晶多晶型3形式的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物。在另一態樣中，本發明提供呈如上文所定義之結晶多晶型3形式的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物用作供用於治療癌症之藥劑的用途。在另一態樣中，本發明提供呈如上文所定義之結晶多晶型3形式的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物在製造供用於療法中之藥劑中的用途。在又一態樣中，本發明提供呈如上文所定義之結晶多晶型3形式的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物在製造供用於治療人類疾病或病狀，其中有益調變組蛋白脫乙醯基酶之藥劑中的用途。在又一態樣中，本發明提供呈如上文所定義之結晶多晶型3形式的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物在製造供用於治療癌症之藥劑中的用途。 本文亦描述用於製備結晶多晶型1及結晶多晶型3之方法。
3 -[ 2 - 丁基 - 1 -( 2 - 二乙基胺基 - 乙基 ) - 1H - 苯并咪唑 - 5 - 基 ]- N - 羥基 - 丙烯醯胺
本文描述3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型，已知其會調變組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)活性。3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺及相關化合物描述於專利申請公開案US 2009/0048300、WO2008108741及US 2015/0258068中。 3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺及本文所揭示之實施例會抑制組蛋白去乙醯基酶。在某些實施例中，組蛋白脫乙醯基酶抑制劑與細胞中多於一種已知組蛋白脫乙醯基酶相互作用及/或降低細胞中多於一種已知組蛋白脫乙醯基酶之活性，其可來自同一類別之組蛋白脫乙醯基酶或不同類別之組蛋白脫乙醯基酶。在一些其他實施例中，組蛋白脫乙醯基酶抑制劑與主要一種組蛋白脫乙醯基酶相互作用且降低其活性，該組蛋白脫乙醯基酶為例如HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3或HDAC-8，其屬於I類HDAC酶。在一些實施例中，本文所揭示之化合物具有明顯抗增殖作用且促進分化、G1期或G2期中之細胞週期停滯且引起凋亡。
多晶型 1 ( 單水合物 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物多晶型1呈現藉由特徵在於表1A及表1B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物之多晶型1包含表1A或表1B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物之多晶型1包含表1A或表1B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表1A或表1B之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表1A之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表1A之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表1A之(±0.1°2θ)之至少8個峰或表1A之(±0.1°2θ)之至少9個峰。
表 1A 表 1B
在一個實施例中，多晶型1之特徵在於在7.94、18.71及25.02 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型1之特徵在於在7.94、18.71、20.06及25.02 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型1之特徵進一步在於在13.76、19.63、20.5或24.46 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型1之特徵進一步在於在13.76、19.63、20.5或24.46 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型1之特徵進一步在於在13.76、19.63、20.5或24.46 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型1呈現與圖16中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。 在一個實施例中，多晶型1係藉由50℃下2.5水合物在乙醇/水(98.4/1.6)中之漿液轉化而產生。在一個實施例中，多晶型1為吸濕性的且不穩定。 在一個實施例中，單水合物型1係藉由2.5水合物(型3)在乙醇/水(98.4/1.6)中之漿液轉化而產生。同時在50℃下攪拌12小時，發生沈澱且固體之HT-XRPD分析證實形成單水合物。
多晶型 2 ( 三水合物 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型2呈現特徵在於表2A及表2B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型2包含表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型2包含表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少8個峰、表2A或表2B之(±0.1°2θ)之至少9個峰、表2A之(±0.1°2θ)之至少10個峰、表2A之(±0.1°2θ)之至少15個峰、表2A之(±0.1°2θ)之至少20個峰、表2A之(±0.1°2θ)之至少25個峰或表2A之(±0.1°2θ)之至少30個峰。
表 2A 表 2B
在一個實施例中，多晶型2之特徵在於在11.12、24.83及24.91 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型2之特徵在於在11.12、20.86、24.83、24.91及25.66 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型2之特徵進一步在於在4.46、4.54、11.87、25.22、25.35或25.42 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型2之特徵進一步在於在4.46、4.54、11.87、25.22、25.35或25.42 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型2之特徵進一步在於在4.46、4.54、11.87、25.22、25.35或25.42 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型2呈現與圖41中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。
多晶型 3 ( 2 . 5 水合物 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物多晶型3呈現特徵在於表3A或表3B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之多晶型3包含表3A或表3B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。 在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之多晶型3包含表3A或表3B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表3A之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表3A之(±0.1°2θ)之至少6個峰或表3A之(±0.1°2θ)之至少7個峰。
表 3A 表 3B
在一個實施例中，多晶型3之特徵在於在6.46、20.26及26.68 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型3之特徵在於在6.46、20.26、22.27及26.68 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型3之特徵進一步在於在9.78、16.57或19.58 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型3之特徵進一步在於在9.78、16.57或19.58 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型3之特徵進一步在於在9.78、16.57或19.58 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型3呈現與圖1中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。 在一個實施例中，多晶型3為2.5水合物。在一個實施例中，多晶型3為非吸濕性的。在一個實施例中，多晶型3在潮濕條件(例如在10至95 RH範圍內)下為物理穩定的。在一個實施例中，型3具有順應藥物製造之良好作業規範(GMP)之所需物理特性，其包括結晶形式、熔點及吸濕性。 在某些情況下，發現與3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之其他固態形式相比，結晶多晶型3呈現增加之穩定性。在一些情況下，當與用3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之其他固態型式製備的醫藥劑型相比時，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽的經改良之穩定性提供製備顯示降低之給定劑型中所存在的劑量變化性，最終醫藥產品中雜質存在減少及經改良的調配劑型之存放期的醫藥劑型。在一些實施例中，型3在以下條件下至少(例如，小於0.01 wt%、小於0.1 wt%、小於0.5 wt%)不會展現降解：在加速條件(例如，40℃/70% RH)下持續至少2天、在加速條件(例如，40℃/70% RH)下持續至少1週、在加速條件(例如，40℃/70% RH)下持續至少1個月、在加速條件(例如，40℃/70% RH)下持續至少6個月、及/或在長期條件(例如，25℃/60 RH)下持續至少12個月、在長期條件(例如，25℃/60 RH)下持續至少18個月、在長期條件(例如，25℃/60 RH)下持續至少24個月。 在某些情況下，與其他固態形式相比，型3呈現降低之吸濕性。此降低之吸濕性之特性非常有助於製備固體醫藥劑型。 在一個實施例中，多晶型3係由3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽在含有超過3%水乙醇與水混合物中在環境條件下之再結晶而產生。在一個實施例中，型3係由型1在乙腈與水中之再結晶而產生。 在某些實施例中，型3視情況包含一定量型1(例如，小於25重量%之多晶型物組合、小於15重量%之多晶型物組合、小於10重量%之多晶型物組合、小於5重量%之多晶型物組合、小於3重量%之多晶型物組合、小於1重量%之多晶型物組合或小於0.5重量%之多晶型物組合)。在其他實施例中，型3視情況包含一定量非晶3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽(例如，小於25重量%之多晶型物組合、小於15重量%之多晶型物組合、小於10重量%之多晶型物組合、小於5重量%之多晶型物組合、小於3重量%之多晶型物組合、小於1重量%之多晶型物組合或小於0.5重量%之多晶型物組合)。
多晶型 4 ( 1 . 5 水合物 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型4呈現特徵在於表4A及表4B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型4包含表4A或表4B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型4包含表4A或表4B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表4A之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表4A之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表4A之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表4A之(±0.1°2θ)之至少8個峰、表4A之(±0.1°2θ)之至少9個峰或表4A之(±0.1°2θ)之至少10個峰。
表 4A 表 4B
在一個實施例中，多晶型4之特徵在於在6.97、10.66及24.76 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型4之特徵在於在6.97、10.66、24.76及25.84 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型4之特徵進一步在於在5.34、12.14、22.3、22.38、22.46、26.62、27.46或27.57 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型4之特徵進一步在於在5.34、12.14、22.3、22.38、22.46、26.62、27.46或27.57 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型4之特徵進一步在於在5.34、12.14、22.3、22.38、22.46、26.62、27.46或27.57 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型4呈現與圖44中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。
多晶型 5 ( 無水，衍生自 140 ℃下型 3 之脫水 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型5呈現特徵在於表5A及表5B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型5包含表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型5包含表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少8個峰、表5A或表5B之(±0.1°2θ)之至少9個峰、表5A之(±0.1°2θ)之至少10個峰、表5A之(±0.1°2θ)之至少15個峰、表5A之(±0.1°2θ)之至少20個峰、表5A之(±0.1°2θ)之至少25個峰或表5A之(±0.1°2θ)之至少30個峰。
表 5A 表 5B
在一個實施例中，多晶型5之特徵在於在6.87、6.94、11.34及25.59 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型5之特徵在於在66.87、6.94、11.34、19.94及25.59 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型5之特徵進一步在於在7.26、20.3、20.58、20.66、20.9、26.95或27.05 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型5之特徵進一步在於在7.26、20.3、20.58、20.66、20.9、26.95或27.05 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型5之特徵進一步在於在7.26、20.3、20.58、20.66、20.9、26.95或27.05 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型5呈現與圖5中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。
多晶型 7 ( 半 乙醇 溶劑合物 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型7呈現特徵在於表6A及表6B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型7包含表6A及6B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型7包含表6A或表6B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表6A之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表6A之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表6A之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表6A之(±0.1°2θ)之至少8個峰、表6A之(±0.1°2θ)之至少9個峰、表6A之(±0.1°2θ)之至少10個峰或表6A之(±0.1°2θ)之至少11個峰。
表 6A 表 6B
在一個實施例中，多晶型7之特徵在於在4.90、25.53及26.58 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型7之特徵在於在4.90、25.53、26.51及26.58 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型7之特徵進一步在於在8.34、9.90、14.10或27.14 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型7之特徵進一步在於在8.34、9.90、14.10或27.14 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型7之特徵進一步在於在8.34、9.90、14.10或27.14 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型7呈現特徵在於圖47之X射線粉末繞射圖。
多晶型 9 ( 無水 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型9呈現特徵在於表7A及表7B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型9包含表7A及表7B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型9包含表7A或表7B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表7A或表7B之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表7A或表7B之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表7A或表7B之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表7A之(±0.1°2θ)之至少8個峰、表7A之(±0.1°2θ)之至少9個峰、表7A之(±0.1°2θ)之至少10個峰、表7A之(±0.1°2θ)之至少15個峰或表7A之(±0.1°2θ)之至少20個峰。
表 7A 表 7B
在一個實施例中，多晶型9之特徵在於在14.18、25.71及26.58 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型9之特徵在於在14.18、25.65、25.71及26.58 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型9之特徵進一步在於在3.55、8.88、21.32或23.23 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型9之特徵進一步在於在3.55、8.88、21.32或23.23 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型9之特徵進一步在於在3.55、8.88、21.32或23.23 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型9呈現與圖37或圖38中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。
多晶型 10 ( 半水合物 )
在一個實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽多晶型10呈現特徵在於表8A及表8B中所概述之繞射圖的X射線粉末繞射圖。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型10包含表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少3個峰。在某些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之多晶型10包含表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少4個峰、表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少5個峰、表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少6個峰、表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少7個峰、表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少8個峰、表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少9個峰、表8A或表8B之(±0.1°2θ)之至少10個峰、表8A之(±0.1°2θ)之至少15個峰、表8A之(±0.1°2θ)之至少20個峰、表8A之(±0.1°2θ)之至少25個峰或表8A之(±0.1°2θ)之至少30個峰。
表 8A 表 8B
在一個實施例中，多晶型10之特徵在於在10.86、24.78或24.85 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型10之特徵在於在10.79、10.86、10.93、24.78或24.85 °2θ±0.1°2θ處具有X射線粉末繞射圖峰。在一個實施例中，多晶型10之特徵進一步在於在12.02、12.14、25.35、25.49或25.58 °2θ±0.1°2θ處具有至少一個峰。在一個實施例中，多晶型10之特徵進一步在於在12.02、12.14、25.35、25.49或25.58 °2θ±0.1°2θ處具有至少兩個峰。在一個實施例中，多晶型10之特徵進一步在於在12.02、12.14、25.35、25.49或25.58 °2θ±0.1°2θ處具有至少三個峰。在一個實施例中，多晶型10呈現與圖49中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同之X射線粉末繞射圖。
分析及結晶型之概述
下表9概述分析及所鑑別之結晶型。在加速老化條件(40℃/70% RH)下針對固體之物理穩定性對其加以分析持續48小時。暴露之後，再次藉由HT-XRPD分析測定物理型式。藉由TGMS分析進行型式之物理-化學表徵以測定型式之溶合狀態及熱事件，且藉由DSC分析確認在TGA之SDTA信號中所觀測到的熱事件。(詳情參見實例。)
表 9 方法
本發明提供治療與組蛋白脫乙醯基酶之調節異常相關聯之疾病或病症的方法，該等方法包含向有需要之個體投與有效量的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽的如本文所述之多晶型。 本文所提供之一些實施例描述由細胞增殖及/或血管生成之破壞所導致、與細胞增殖及/或血管生成之破壞相關聯或伴有細胞增殖及/或血管生成之破壞的病症之治療方法，該等方法包括投與治療有效量之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽的如本文所述之多晶型。 在一些實施例中，本文亦提供用於治療由細胞增殖及/或血管生成之破壞所導致、與細胞增殖及/或血管生成之破壞相關聯或伴有細胞增殖及/或血管生成之破壞的病症之藥劑。在一些實施例中，藥劑為3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽的如本文所述之多晶型。 本文所述之一些實施例係關於3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽的如本文所述之多晶型在製備供用於治療由細胞增殖及/或血管生成之破壞所導致、與細胞增殖及/或血管生成之破壞相關聯或伴有細胞增殖及/或血管生成之破壞的病症之藥劑中的用途。在一個實施例中，病症為增生性病症。在一具體實施例中，病症為癌症。 本文所述之其他實施例提供一種治療可藉由抑制組蛋白脫乙醯基酶來治療之病症、疾病或病狀的方法，該方法包括投與治療有效量之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺的如本文所述之多晶型。 本文亦描述用於治療可藉由抑制組蛋白脫乙醯基酶來治療之病症、疾病或病狀的藥劑。在一個實施例中，藥劑為抗癌劑。在一些實施例中，藥劑為3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺的如本文所述之多晶型。 本文所述之一些實施例提供一種用於抑制細胞增殖之方法，該方法包括投與有效量之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺的如本文所述之多晶型。 本文在某些實施例中提供一種治療化學抗性癌症之方法，該方法包含向有需要之個體投與有效量之DNA低甲基化藥劑及式(I)化合物。在一些實施例中，癌症為難治性、對化學療法無反應或對化學療法具有抗性的。在一些實施例中，癌症為難治性、對單倍體相合幹細胞移植(haploidentical stem cell transplantation)無反應或對單倍體相合幹細胞移植具有抗性的。在一些實施例中，癌症對阿紮胞苷、地西他濱、SGI-110、來那度胺、TXA-127或其組合具有抗性。在一些實施例中，癌症對阿紮胞苷、地西他濱、來那度胺、TXA-127或其組合具有抗性。 在一個實施例中，病症係選自(但不限於)由癌症(例如乳癌、結腸癌、前列腺癌、胰臟癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、神經母細胞瘤、黑色素瘤)組成之群。在另一實施例中，病症為增生性病症。在一個實施例中，增生性病症為癌症。癌症可包括實體腫瘤或血液科惡性疾病。 在一些實施例中，本文所述之方法適用於治療多種癌症，該等癌症包括(但不限於)骨癌，其包括尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、骨肉瘤、軟骨肉瘤及其類似者；腦瘤及CNS腫瘤，其包括聽神經瘤、神經母細胞瘤、神經膠質瘤及其他腦瘤；脊髓瘤；乳癌，其包括乳腺管腺癌、轉移性乳腺管乳癌；結腸直腸癌、晚期結腸直腸腺癌、結腸癌；內分泌癌症，其包括皮腺癌、胰臟癌、垂體癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、胸腺癌、多發性內分泌贅瘤；腸胃癌，其包括胃癌、食道癌、小腸癌、肝癌、肝外膽管癌、腸胃類癌、膽囊癌；泌尿生殖癌，其包括睪丸癌、陰莖癌、前列腺癌；婦科癌症，其包括子宮頸癌、卵巢癌、陰道癌、子宮/子宮內膜癌、外陰癌、妊娠期滋養細胞癌、輸卵管癌、子宮肉瘤；頭頸癌，其包括口腔癌、唇癌、唾液腺癌、喉癌、下咽癌、正咽癌、鼻癌、副鼻癌、鼻咽癌；白血病，其包括兒童白血病、急性淋巴球性白血病、急性骨髓白血病、慢性淋巴球性白血病、慢性骨髓白血病、毛細胞白血病、急性前髓細胞性白血病、漿細胞白血病、紅白血病、骨髓瘤；血液學病症，其包括骨髓發育不良症候群、骨髓增生病、再生不全性貧血、范康尼氏貧血(Fanconi anemia)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(Waldenstroms Macroglobulinemia)；肺癌，其包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、間皮瘤；淋巴瘤，其包括霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、皮膚T細胞淋巴瘤、周邊T細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)；眼癌，其包括視網膜母細胞瘤、眼內黑色素瘤；皮膚癌，其包括黑色素瘤、非黑色素瘤皮膚癌、鱗狀細胞癌、梅克爾細胞癌(merkel cell cancer)；軟組織肉瘤，諸如兒童軟組織肉瘤、成人軟組織肉瘤、卡堡氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)；泌尿系統癌，其包括腎癌、威爾姆氏瘤(Wilms tumour)、膀胱癌、尿道癌及移行細胞癌。 在一些實施例中，與組蛋白脫乙醯基酶之調節異常相關聯之疾病或病症為癌症。在一些實施例中，癌症為血液科惡性疾病。在一些實施例中，其中血液科惡性疾病為急性骨髓白血病(AML)、慢性骨髓白血病(CML)、慢性骨髓單核細胞性白血病、溶血栓白血病、骨髓發育不良症候群(MDS)、骨髓增生性病症、難治性貧血、白血病前驅症症候群、淋巴白血病、淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤或未分化的白血病。在一些具體實施例中，癌症為骨髓發育不良症候群(MDS)或急性骨髓白血病(AML)。非霍奇金氏淋巴瘤之非限制性實例包括彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套細胞淋巴瘤(MCL)及慢性淋巴球性白血病(CLL)。 可藉由本文所述之方法治療的其他例示性癌症包括(但不限於)白血病，諸如紅白血病、急性前髓細胞性白血病、急性骨髓白血病、急性淋巴球性白血病、急性T細胞白血病及淋巴瘤，諸如B細胞淋巴瘤(例如伯基特氏淋巴瘤)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)及周邊T細胞淋巴瘤。 可藉由本文所述之方法治療的某些例示性癌症包括實體腫瘤及血液科惡性疾病。在另一實施例中，可用本發明化合物治療之較佳癌症為結腸癌、前列腺癌、肝腫瘤及卵巢癌。
醫藥組合物
根據標準醫藥操作，本文所述之化合物、化合物形式及組合物單獨或與醫藥學上可接受之佐劑、載劑、賦形劑、或稀釋劑組合投與在醫藥組合物中。在某些實施例中，以純化學物質形式投與如本文所述的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型。在其他實施例中，使如本文所述的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型與醫藥學上適合或醫藥學上可接受之載劑(在本文中亦稱作醫藥學上適合(或可接受)之賦形劑、生理學上適合(或可接受)之賦形劑或生理學上適合(或可接受)之載劑)組合，該載劑係基於所選投藥途徑及如例如
Remington : The Science and Practice of Pharmacy
(Gennaro, 第21版 Mack Pub. Co., Easton, PA (2005))中所述之標準醫藥操作而選擇。 一些實施例提供醫藥組合物，其包含本文所提供的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之賦形劑。一些實施例提供醫藥組合物，其包含如本文所述之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物型3。 在一些實施例中，如本文所述的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型實質上為純的。在一些實施例中，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型含有小於約5%、小於約1%或小於約0.1%之其他有機小分子，諸如在例如合成方法之步驟中之一或多者中產生或由例如合成方法之步驟中之一或多者留下的未反應之中間體或合成副產物。 在其他或額外實施例中，如本文所述的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型為多晶型純的，其中型式實質上不含3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之其他多晶型。在一些實施例中，「多晶型純的」係指多晶型含有小於約10%、小於約5%、小於約2%、小於約0.5%、小於約0.2%、小於約0.1%或小於約0.05%之其他多晶型。在一些實施例中，「多晶型純的」係指多晶型含有在0.2重量%與10重量%之間、0.2重量%與5重量%之間、或0.2重量%與2重量%之間、0.2重量%與1重量%之間、0.1重量%與10重量%之間、0.1重量%與5重量%之間、0.1重量%與2重量%之間或0.1重量%與1重量%之其他多晶型。 在一些實施例中，醫藥組合物包含3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之多晶型3，其中型3為多晶型純的。在一些實施例中，如藉由粉末X射線繞射所測定，多晶型純的型3含有小於2重量%之型1。在一些實施例中，如藉由粉末X射線繞射所測定，多晶型純的型3含有小於10重量%、小於5重量%、小於2重量%、小於1重量%、小於0.5重量%、小於0.2重量%或小於0.1重量%之型1。 在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物調配為口服劑型。適合之口服劑型包括例如硬或軟明膠、甲基纖維素或容易溶解於消化道中的另一適合材料之錠劑、丸劑、藥囊或膠囊。在一些實施例中，使用適合之無毒性固體載劑，其包括例如醫藥級之甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂及其類似者。(
參見例如 Remington: The Science and Practice of Pharmacy
(Gennaro, 第21版 Mack Pub. Co., Easton, PA (2005))。 本文所述之醫藥組合物可向患者(例如人類)投與以治療如本文所述之一或多種疾病。包含至少一種如本文所述的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之多晶型的組合物之劑量會有所不同，其視患者(例如人類)病狀，亦即疾病階段、一般健康狀況、年齡及其他因素而定。 以適於待治療(或待預防)之疾病的方式投與醫藥組合物。合適劑量及適合持續時間及投藥頻率將藉由諸如以下因素來測定：患者病狀、患者疾病之類型及嚴重程度、活性成分之特定形式及投與方法。一般而言，合適劑量及治療方案會提供呈足夠提供治療效益及/或預防效益(例如經改良之臨床結果，諸如較頻繁的完全或部分緩解、或較長無病存活期及/或總存活期、或減輕症狀嚴重程度)之量的組合物。一般使用實驗模型及/或臨床試驗測定最佳劑量。最佳劑量視患者之身體質量、重量或血量而定。 用於治療本文所述之疾病的口服劑量可在約1.0 mg至約1000 mg範圍內，每日一至四次或多於四次。在一些實施例中，口服劑量係基於患者之表面積且在0.1 mg/m
2
至1000 mg/m
2
範圍內。在一些實施例中，口服劑量在每日1 mg/m
2
至250 mg/m
2
、1 mg/m
2
至150 mg/m
2
或1 mg/m
2
至100 mg/m
2
範圍內。在一些實施例中，口服劑量在每日0.1 mg至1000 mg範圍內，以單一劑量或以兩至四次分次劑量投與。在一些實施例中，口服劑量為每日1 mg至200 mg、每日1 mg至100 mg、每日10 mg至100 mg、每日10 mg至90 mg、每日10 mg至80 mg、每日20 mg至100 mg、每日20 mg至90 mg或每日20 mg至80 mg。在一些實施例中，口服劑量包含如本文所述之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(型3)及視情況選用之一或多種賦形劑，諸如一或多種載劑、一或多種稀釋劑、一或多種潤滑劑、一或多種分散劑或一或多種滑動劑。
組合療法
任何適合之低甲基化藥劑可與3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺的如本文所述之多晶型組合使用。供用於本文所提供之方法中的DNA低甲基化藥劑包括(但不限於)5-氮雜胞苷(阿紮胞苷)、5-氮雜脫氧胞苷(地西他濱)、SGI-110、澤布拉恩(zebularine)及普魯卡因。在某些特定實施例中，DNA低甲基化藥劑為5-氮雜胞苷(阿紮胞苷)。
投藥模式
根據標準醫藥操作，將本文所述之化合物、化合物形式及組合物單獨或與醫藥學上可接受之佐劑、載劑、賦形劑、或稀釋劑組合於醫藥組合物中投與。 本文所述之醫藥組合物例如呈適於經口投與之形式(如錠劑、膠囊、丸劑、散劑、持續釋放型調配物、溶液、懸浮液)；適於非經腸注射之形式(如無菌溶液、懸浮液或乳液)；適於局部投與之形式(如軟膏或乳膏)，或適於直腸投與之形式(如栓劑)。在一些實施例中，醫藥組合物呈適用於單次投與精確劑量的單位劑型。醫藥組合物包括如本文所述之化合物或化合物形式作為活性成分，及習知醫藥載劑或賦形劑。在一些實施例中，此等組合物包括其他或額外藥用或醫藥試劑、載劑、佐劑等。 醫藥組合物宜以單位劑型形式存在。在一些實施例中，用特定量之活性化合物藉由熟習醫藥技術者熟知或顯而易知的方法中之任一者來製備醫藥組合物。
實例
以下實例進一步說明本發明，但不應解釋為以任何方式限制其範疇。特定而言，加工條件僅為例示性的且可易於由一般熟習此項技術者改變。 除非本文另外指示或另外與上下文明顯矛盾，否則本文所述之所有方法均可以適合之順序進行。除非另外主張，否則本文所提供之任何及所有實例或例示性語言(例如，「諸如」)之使用僅意欲較佳闡明本發明且並不對本發明之範疇形成限制。除非另外定義，否則本文中所用之技術及科學術語具有與熟習本發明所屬技術者通常所理解相同之含義。
實例 1 ： 3 -[ 2 - 丁基 - 1 -( 2 - 二乙基胺基 - 乙基 )- 1H - 苯并咪唑 - 5 - 基 ]- N - 羥基 - 丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物型 1 之製備
嘗試若干試驗以製造用於多晶型物篩網中的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之單水合物。該等嘗試展示在表10。在室溫下將大約1 g起始物質2.5水合物型3懸浮於15 ml無水乙醇中。10分鐘之後，懸浮液形成『固體』。隨後，添加5 ml無水乙醇以再次製造懸浮液。在環境條件下攪拌實驗12小時。藉由離心自母液分離固體且在高真空下加以乾燥。獲得稱為型9 (無水)之新固體型式。 製造單水合物之其他嘗試由改變在無水乙醇中之漿化時間組成。對漿液進行兩次實驗維持2小時及12小時。第一次實驗引起鑑別出1.5水合物(型4)。12小時之後的漿液引起鑑別出新穎固體型式，其稱為型7乙醇半溶劑合物。 一種最近的嘗試包括藉由冷凍乾燥，且隨後在乙醇/水混合物中漿化非晶粉末來製備非晶物質。然而，冷凍乾燥實驗引起形成似乎為半水合物(型10)之物。 引起製造出單水合物型1之方案係關於2.5水合物(型3)在乙醇/水(98.4/1.6)中之漿液轉化。在50℃下將兩公克2.5水合物型3懸浮於40 ml乙醇/水(98.4/1.6)中。10分鐘之後懸浮液完全溶解。在50℃下攪拌實驗12小時。在此時間期間發生沈澱且固體之HT-XRPD分析證實形成單水合物。自初始2公克回收大約1.2 g(產率60%)。
表 10 實例 2 ： 3 -[ 2 - 丁基 - 1 -( 2 - 二乙基胺基 - 乙基 )- 1H - 苯并咪唑 - 5 - 基 ]- N - 羥基 - 丙烯醯胺二鹽酸鹽 2 . 5 水合物型 3 之製備
將5 g 3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺單水合物型1 (批次DBDERP8001)懸浮於乙腈(80 ml)中且加熱至平緩回流。添加水(約20 mL)直至混合物變成均質的為止。將溶液緩慢冷卻至環境溫度且保持在此溫度下大約18小時。過濾出所形成之晶體且加以收集而無需乾燥。藉由型3之HPLC與XRPD匹配XRPD圖測定晶體具有相同滯留時間。
實例 3 ： 2 . 5 水合物多晶型 3 之分析 型 3 之 X 射線粉末繞射
HR-XRPD分析顯示3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物由一種單晶相組成。HR-XRPD繞射圖展示於圖1中。 HR-XRPD圖之索引產生3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之晶胞參數。此型式在具有C2/c空間群之單斜晶系統中結晶。所計算之晶胞參數展示於表11中。每API分子2.5分子之水的含水量係根據所計算之晶體密度。
表 11 型 B 之熱分析
DSC熱分析圖顯示若干吸熱線，其最可能歸因於含水量。在121.5℃、131.8℃、137.7℃及157.8℃處觀測到四個吸熱線(參見圖2)。在DSC跡線中所觀測到的前三個吸熱線對應於水損失。 TGMS分析顯示兩個連續步階中質量損失為9.3%(參見圖3B)。9.3%之水質量損失對應於2.5分子之水。基於MS信號之評估，兩個質量損失均歸因於水與乙醇。第三個質量損失可能歸因於鹽酸鹽之歧化。 為了確認熱事件之性質，進行四次循環DSC實驗。將3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物之兩個樣本加熱至125℃與140℃，且隨後冷卻至25℃。藉由HT-XRPD分析所獲得之固體。以相同方式處理兩個其他樣本，不同之處在於冷卻後將樣本再次加熱至300℃(參見圖4A與圖4B)。 初始加熱循環之後，固體之XRPD分析指示已出現轉化成新固體型式。此新固體型式稱為型5。基於第二DSC循環中之熱特性，此型式為熔融溫度為156℃之無水型式。出現藉由脫水使2.5水合物轉化成無水型5。提供多晶型3與型5之XRPD圖之重疊圖(參見圖5)。 卡耳費雪分析證實含水量為8.7%的起始物質之水合性質，該含水量對應於每API分子2.3分子之水。TGMS分析與KF分析之間含水量的略微差值(分別為9.3%與8.7%)係歸因於起始物質中所存在之一些殘餘乙醇。
型 3 之不同溫度 XRPD 分析
為了研究根據溫度暴露之相相互轉化，對3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物進行不同溫度XRPD分析。在25℃至130℃之間運作實驗，且在結束時冷卻回至25℃。在60℃下，開始出現與新固體型式相對應之額外峰。在70℃下，完成轉化成此新穎型式。在100℃下，觀測到第二次轉化，其在110℃下完成。後一固體型式似乎為無水型5。達至130℃之溫度之後，將物質冷卻回至25℃。冷卻後，記錄下無固體型式轉化，其指示脫水/水合過程為不可逆的。資料展示於圖6中。在60℃下開始觀測到轉化成新固體型式，且在70℃下觀測到完全轉化。在100℃下鑑別出新轉變，其與先前在循環DSC分析中所鑑別之型5相對應。與不同溫度XRPD量測中所鑑別的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之新固體型式相對應的XRPD圖之重疊圖展示在圖7中。
HPLC 分析
多晶型3之HPLC跡線顯示於圖8A中。在5.7分鐘之滯留時間處觀測到主峰，化學純度為99.5 % (面積%)。跡線之峰值清單在下表中給出。
質譜分析
多晶型3之MS峰顯示於圖8B中。MS信號證實，358 g/mol之分子量與呈游離鹼形式之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之分子量相對應。
掃描電子顯微術分析
提交起始物質之樣本以用於藉由掃描電子顯微術成像。1000倍放大倍數會提供物質之良好影像。物質本身展示為柱狀顆粒(參見圖9)。
吸濕性研究
進行吸濕性研究以研究3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物在暴露於若干相對濕度曲線後之物理穩定性。對DVS分析之後所獲得的固體物質進行HT-XRPD分析。在此描述分析方法。 第一吸濕性實驗由0%-95%-0% RH之間的四次吸附-解吸附循環組成。此分析指示3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物在25%至95%之間的相對濕度值下並未發生變化。然而，小於15% RH，水逐漸損失。在0% RH下，觀測到約2%之質量損失(參見圖10A與圖10B)。隨著相對濕度增加，水損失出現逆轉且復原到初始型式。吸附-解吸附循環0%-95%-0% RH之後為其中每步階階段時間為60分鐘的95% RH至0% RH之解吸附。將此循環重複4次。在0% RH下觀測到約2%之水損失。在5% RH下水再次受到吸收。在四次吸附-解吸附循環期間觀測質量曲線之相似變化。 為了研究在0% RH下所觀測到的解吸附曲線，在恆定相對濕度水準下進行DVS分析(參見圖11)。將3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物暴露於0% RH 18小時。在前5個小時中，觀測到水逐漸損失(8%)。其後記錄下無質量變化。所復原之固體的HT-XRPD分析指示2.5水合物已轉化成稱為型6之新固體型式。型6具有有限穩定性且一旦相對濕度大於5%，便會發生轉化成2.5水合物。 此結果得到對2.5水合物(多晶型3)進行之DVS實驗證實。此分析由45%-95%-0%-95%-0%-45% RH之兩次吸附-解吸附循環組成(參見圖12A與圖12B)。45%至95% RH之吸附循環之後為95% RH至0%之解吸附、至95% RH之吸附、至0% RH之解吸附及至45% RH之吸附。在5%至0% RH之間觀測到約2%之水損失。隨著相對濕度增加，水再次受到吸收。 此相對濕度曲線之後，2.5水合物得到復原(參見圖13)。此等結果表明2.5水合物並非吸濕性的。
多晶型 3 之不同溫度及濕度 XRPD 分析
藉由不同濕度XRPD分析3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(多晶型3)以較詳細地研究型式轉化在暴露於不同相對濕度水準之後的動力學。在此描述分析方法。 不同濕度XRPD分析指示3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(多晶型3)在85%至10% RH之間為物理穩定的。根據在小於10%之相對濕度值下的解吸附，額外繞射峰變得可見。此等繞射峰對應於新結晶相。此新結晶相之主繞射峰位於6.8°2θ處且對應於型6。此型式在小於10%之相對濕度值下為物理穩定的。在大於10% RH之值下，型6轉化成2.5水合物(多晶型3)。所收集之XRPD圖顯示於圖14與圖15中。圖14：在85%至10% RH之間的相對濕度值下2.5水合物(型3)似乎為物理穩定的。得到小於10%之相對濕度的嘗試係藉由在45℃下乾燥樣本來進行。暴露於此等條件後，相污染為可見的(在6.8°2θ處之繞射峰)。圖15：在6.8°2θ處與相污染相對應之主峰為可見的。在10% RH下45分鐘之後，開始觀測到相污染。在45℃下乾燥樣本後，相污染增加。然而，在45℃及＜10% RH下3小時之後並未完成完全轉化成此新相。相對濕度增加至10% RH會引起觀測到純2.5水合物(型3)。 在不同濕度XRPD及DVS分析期間所獲得之結果指示，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(型3)在大於10%之相對濕度水準下為物理穩定的。小於10% RH，2.5水合物之一部分會轉化成型6。
實例 4 ： 單水合物多晶型 1 之分析 型 1 之 X 射線粉末繞射
記錄所獲得的3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物之HR-XRPD及HT-XRPD (參見圖16)。HR-XRPD證實一種單相。藉由索引HR-XRPD圖測定晶胞參數。基於所計算之晶胞密度，估計含水量為每API分子一分子水，其證實此型式之單水合性質。所測定之晶胞參數展示於表12中。
表 12 型 1 之熱分析
DSC跡線顯示在25℃至120℃之間觀測到一個寬吸熱線，之後在228.8℃下觀測到放熱事件，其最可能與鹽酸鹽之熱分解相對應(參見圖17)。TGMS分析證實物質之水合性質(參見圖18A與圖18B)。在25℃至200℃之溫度範圍內觀測到3.1%之質量損失。此質量損失對應於每API分子0.8分子水。卡耳費雪分析指示此物質含有3.3%水，其等於0.8分子水。 對呈批次DBDE8002之參考物質進行的TGMS分析顯示4.3%之質量損失，其與1.1分子水相對應。卡耳費雪分析亦證實4.4%之含水量(與1.1分子水相對應)。因此，3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽之單水合型似乎可具有不同含水量(3.3%至4.3%水)。參見針對型1參考物質之分析的圖34至圖37(X射線粉末繞射、DSC分析、TGA/SDTA分析及TGMS分析)。
型 1 之不同溫度 XRPD 分析
進行3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物之不同溫度XRPD實驗以研究加熱後所出現之固體型式轉化。在25℃至143℃之間運作實驗之後冷卻至25℃，再加熱至155℃，且隨後再次冷卻至25℃ (參見圖19)。 未觀測到固體型式轉化。加熱後注意到單水合物之繞射峰之小型移位，其在155℃下較為強烈(參見圖20)。豎線突出顯示在155℃下所觀測到的發生移位之繞射峰。在高溫下晶胞收縮似乎最可能歸因於部分水損失。一旦溫度下降，晶胞便復原到其初始大小。
HPLC 分析
多晶型1之HPLC跡線顯示於圖21A中。在5.6分鐘之滯留時間處觀測到主峰，化學純度為99.5 %(面積%)。跡線之峰值清單在下表中給出。
質譜分析
多晶型1之MS峰顯示於圖21B中。MS信號證實，358 g/mol之分子量與呈游離鹼形式之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺之分子量相對應。
掃描電子顯微術
藉由掃描電子顯微術分析單水合物型1之樣本。800倍放大倍數指示物質以不同尺寸與大小之方塊的形式結晶(參見圖22)。
吸濕性研究
藉由若干DVS實驗來研究多晶型1之吸濕性。針對兩次循環，相對濕度在45%-95%-0%-45%之間循環(參見圖23A與圖23B)。45%至95% RH之吸附循環之後為95% RH至0%之解吸附、至95% RH之吸附、至0% RH之解吸附及至45% RH之吸附。在85%至95% RH之間觀測到17%之水吸收量。在解吸附期間，在95%至75% RH之間記錄下7%之重量損失，且在15%至0% RH之間記錄下10%之重量損失。在第二循環中觀測到相似吸濕性。對於第一循環而言，在75% RH下記錄下18%之水吸收量，當濕度再次下降時，其為完全可逆的。然而，在兩個步階中—在95%至75% RH記錄到7%之重量損失且在15%至0% RH之間記錄到約10%之重量損失。在75%至15% RH之間，並未記錄明顯重量變化。對於第二循環而言，觀測到相似吸水量及解吸附曲線。DVS分析之後，藉由HT-XRPD分析固體，其證實大部分轉化為2.5水合物(型3)。然而，觀測到若干額外繞射峰。此相污染可歸因於半水合物型(型10)，其在製造單水合物(型1)之嘗試期間發現。 為了研究單水合物型1在大於75%之相對濕度水準下的固體型式轉化，將相對濕度自45%增加至95%且將樣本保持在95% RH下10小時來進行第二DVS分析(參見圖24A與圖24B)。在85%至95% RH之間記錄下18%之水吸收量。然而，在95% RH下老化2小時之後，觀測到約12%之重量損失。此事件係歸因於單水合物(型1)再結晶為2.5水合物(型3)。此DVS分析之後2.5水合物(型3)得到復原，其證實單水合物(型1)在大於85%之相對濕度水準下會轉化成2.5水合物(型3) (參見圖25)。 進行DVS分析以研究出現在解吸附之後的固體型式轉化。相對濕度在45%-95%-0% RH之間變化，同時在0% RH下老化5個小時。吸濕性曲線與先前所獲得之吸濕性曲線相似。藉由HT-XRPD分析之復原固體為含有半水合物(型10)之小污染物的2.5水合物(型3)。當達至0% RH時，呈現形成半水合物(型10)。然而，此型式為物理不穩定的且在環境條件下會轉化成2.5水合物(型3)。
多晶型 1 之不同溫度及濕度 XRPD 分析
藉由不同濕度XRPD分析普拉諾他(pracinostat)二鹽酸鹽單水合物(型1)以較詳細地研究型式轉化在暴露於不同相對濕度水準之後的動力學。在此描述分析方法。 在30℃下不同濕度XRPD在10%至85% RH之間並未顯示任何固體型式轉化(參見圖26)。XRPD之濕度控制器不能達至大於85% RH之相對濕度水準。因此，DVS中在大於85% RH下出現的單水合物(型1)轉化成2.5水合物(型3)在此實驗中將不可見。將溫度增加至45℃之後達至最乾燥條件(RH＜10%)。維持此條件1小時。除了繞射峰之小型移位以外，在此低相對濕度水準下並未看到明顯變化(參見圖27)。此移位指示晶胞已收縮，其最可能歸因於部分水損失。一旦相對濕度增加至10%，晶胞便恢復至其初始尺寸。 不同濕度XRPD實驗指示3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物(型1)在30℃下在10%至85% RH之間的相對濕度條件下為物理穩定的。
實例 5 ：多晶型物評估 熱循環研究
在12種方法相關之溶劑系統中製備3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物(型1)與2.5水合物(型3)之懸浮液。在5℃與50℃之間循環懸浮液，之後在25℃下老化72小時。混合物經歷如圖52中所顯示之溫度曲線。保溫時間結束之後，收集固體，在環境條件下加以乾燥且在藉由HT-XRPD分析之前在高真空下加以乾燥。將全部所量測固體暴露於加速老化條件(在40℃/70% RH下，2天)，之後藉由HT-XRPD加以再分析。 在大多數熱循環實驗中發現2.5水合物型3。在大多數所測試之甲醇/水混合物中，2.5水合物型3似乎為最穩定型式。然而，在純甲醇中會獲得單水合物(型1)。 在無水乙醇或額外乾燥之乙醇中，單水合物型1轉變成無水型9且2.5水合物型3轉化成單水合物型1。在幾乎全部乙醇/水混合物中，2.5水合物型3為最穩定型式。 在施加加速老化條件2天之後，全部單水合物型1與無水型9樣本均轉化成2.5水合物型3。不同水混合物中的此等熱循環實驗中所獲得之結果的圖示展示在圖28與圖29中。
長期漿液研究
藉由製備3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(型3)與單水合物(型1)在12種不同溶劑及溶劑混合物中之懸浮液來進行長期漿液轉化實驗。將大約30 mg特定型式投配於標準HPLC小瓶及100 μL溶劑之等分試樣中直至形成懸浮液為止。在室溫下攪拌懸浮液2週且在50℃下攪拌1週。自母液分離固體且在環境條件(環境)下輕微乾燥之後且在真空(真空)下充分乾燥之後藉由HT-XRPD對固體加以分析。將全部固體暴露於加速老化條件(在40℃/70% RH下，2天)且藉由HT-XRPD加以再分析。 在乙醇/水混合物中所進行的大多數實驗中獲得2.5水合物型3。然而，在不存在水之情況下，在兩種溫度下均發現無水型9。在50℃下，在含有50%水之水混合物中發現三水合型式(型2)。 單水合物型1在環境條件下在全部乙醇/水混合物及甲醇/水混合物中轉化成2.5水合物(型3)。當溶劑系統中不存在水時，觀測到轉化成無水型9。在50℃下在含有小於5%之水的乙醇/水混合物中且在環境條件下在純甲醇中分離單水合物型1。在含有50%水之甲醇/水混合物及乙醇/水混合物中再次發現三水合型2。 蒸發之後在50℃下溶解於幾乎全部甲醇/水混合物中之單水合物型1產生不同固體型式，亦即三水合物型2、1.5水合物型4或2.5水合物型3。 在真空下乾燥固體之後並未注意到明顯變化。三水合物型2似乎為物理不穩定的且在乾燥之後轉化成2.5水合物型3。暴露於應力條件2天之後，全部固體型式均轉化成2.5水合物(型3)。 不同溶劑系統中所獲得之固體型式的圖示展示在圖30與圖31中。
去溶劑化研究
使用水合物在高沸點溶劑中之溶劑平衡已報導為一種獲得去溶劑化型式之方法。在125℃下在四種高沸點溶劑中平衡3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(型3)與單水合物(型1)之懸浮液兩天。以大約50 mg物質及100 μL溶劑開始實驗。平衡之後，藉由離心自溶液分離固體。在進行HT-XRPD分析之前使固體在環境條件下乾燥。藉由HT-XRPD直接分析濕固體以避免在環境條件下或在真空下發生水合。 表13展示來自以型3開始之去溶劑化實驗的如藉由HT-XRPD評定之固體型式。
表 13 *
AAC：加速老化條件 表14展示來自以型1開始之去溶劑化實驗的如藉由HT-XRPD評定之固體型式。
表 14 *
AAC：加速老化條件 3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物(型3)之去溶劑化實驗在所有情況下均產生單水合型1。3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽單水合物型1隨平衡時間並未發生改變。暴露於加速老化條件之後，所獲得之單水合物型1轉化成2.5水合物型3。
競爭性漿液研究
以等莫耳量之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽2.5水合物型3及單水合物型1開始競爭性漿液轉化實驗。將大約50 mg各固體型式固態投配於標準HPLC小瓶中，之後添加溶劑。 在乙醇/水混合物及甲醇/水混合物中在0至0.2之水活度範圍內進行競爭性漿液實驗。將大約50 mg各普拉諾他二鹽酸鹽固體型式2.5水合物及單水合物固態投配於1.8 mL HPLC小瓶中。添加等分試樣之100 μL之不同水混合物直至約一半量之固體呈溶解狀態為止。隨後，在5℃、21℃及50℃下攪拌小瓶一週。在平衡時間結束之後，藉由離心使固體與液體分離。在環境條件(環境)下乾燥且在真空(真空)下乾燥固體，之後進行HT-XRPD分析。將全部固態樣本暴露於加速老化條件(40℃及70% RH) (AAC)兩天。由卡耳費雪分析測定液相中之含水量。 在圖32與圖33中，針對各溶劑系統展現不同漿液溫度下之固體型式名稱與所測定之含水量。 3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽固體型式在乙醇/水中之熱力學穩定性研究顯示，單水合型1在以下極其有限之水活度範圍內在熱力學上為最穩定型式：在5℃下當溶劑系統中之含水量小於2%時；在環境條件下，無水(型9)及單水合物(型1)似乎以相同含水量範圍(2.5%水)共存；在高溫下當含水量為2%至4%之間的水時。 無水型9在環境條件下在含有小於2.5%水之乙醇/水混合物中為最穩定型式。在50℃下，此型式在含有小於1.5%水之混合物中呈現為穩定的。 在環境條件下在含有大於3%水之乙醇/水混合物中獲得2.5水合物型3。在小於環境之溫度下，溶劑混合物中之含水量需大於2%。 在大多數情況下甲醇/水混合物會產生透明溶液，其在蒸發之後產生2.5水合物型3。在5℃下，單水合型1在含有小於6%水之全部甲醇/水混合物中似乎為最穩定型式。
實例 6 ： 無水多晶型 9 之分析 型 9 之 X 射線粉末繞射
記錄所獲得之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽無水型9 (漿液轉化實驗中在額外乾燥乙醇中獲得)之HR-XRPD (參見圖37與圖38)。所測定之晶胞參數展現於表15中。
表 15 型 9 之熱分析
根據本文所述之方法以10℃/min之加熱速率進行多晶型9之DSC分析。在191.8℃處觀測到一個單一吸熱線，之後在204.9℃處跟隨有放熱事件，其歸因於鹽酸鹽之熱分解(參見圖39)。無水型9之TGA/SDTA及TGMS分析指示在熱分解之前並不存在明顯質量損失(參見圖40A與圖40B)。此熱行為證實此型式之無水性質。
實例 7 ： 三 水合物多晶型 2 之分析 型 2 之 X 射線粉末繞射
記錄所獲得之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽三水合物型2 (在50℃下甲醇/水(75/25)中單水合物型1之漿液轉化實驗中獲得)之HT-XRPD。圖41描繪型2與型3之HT-XRPD圖之重疊圖。
型 2 之熱分析
根據本文所述之方法以10℃/min之加熱速率進行多晶型2之DSC分析。在80.3℃處觀測到第一寬吸熱線，之後在116.9℃與146.0℃處觀測到兩個小吸熱線。在200.7℃處跟隨有放熱事件，其係歸因於鹽酸鹽之熱分解(參見圖42)。進行無水型2之TGA/SDTA及TGMS分析。TGA信號指示10.5%之質量損失，其基於MS信號可歸因於水(10.5%之水對應於每API分子2.8分子水) (參見圖43A與圖43B)。此熱行為證實此型式之三水合物性質。
實例 8 ： 1 . 5 水合物多晶型 4 之分析 型 4 之 X 射線粉末繞射
記錄所獲得之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽1.5水合物型4 (在環境條件下持續2小時的乙醇中2.5水合物型3之漿液轉化實驗中獲得)之HT-XRPD。圖44描繪型4與型3之HT-XRPD圖之重疊圖。
型 4 之熱分析
根據本文所述之方法以10℃/min之加熱速率進行多晶型4之DSC分析。在136.3℃處觀測到第一吸熱線，之後在156.8℃處觀測到第二吸熱線。在200.0℃處跟隨有放熱事件，其係歸因於鹽酸鹽之熱分解(參見圖45)。進行無水型4之TGA/SDTA及TGMS分析。TGA信號指示6.1%之質量損失，其基於MS信號可歸因於水與乙醇(每API分子1.6分子水或0.6分子乙醇) (參見圖46A與圖46B)。
實例 9 ： 半 乙醇 溶劑合物 ( 0 . 5 乙醇 ) 多晶型 7 之分析 型 7 之 X 射線粉末繞射
記錄所獲得之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽半乙醇溶劑合物型7及濕固體型8 (在10毫巴下乾燥濕固體2小時之後在環境條件下型3在無水乙醇中之漿液20小時之後的濕固體中獲得)之HT-XRPD。圖47描繪型7、型8及型3之HT-XRPD圖之重疊圖。
型 7 之熱分析
進行半乙醇溶劑合物型7之TGA/SDTA及TGMS分析。在25℃至180℃之溫度範圍內觀測到5.1%之質量損失。此質量損失對應於每API分子0.5分子乙醇(參見圖48A與圖48B)。
實例 10 ： 半水合物 ( 0 . 5 水 ) 多晶型 10 之分析 型 10 之 X 射線粉末繞射
記錄所獲得之3-[2-丁基-1-(2-二乙基胺基-乙基)-1H-苯并咪唑-5-基]-N-羥基-丙烯醯胺二鹽酸鹽半水合物型10 (藉由冷凍乾燥水溶液獲得)之HT-XRPD。圖49描繪型10與型3之HT-XRPD圖之重疊圖。
型 10 之熱分析
根據本文所述之方法以10℃/min之加熱速率進行多晶型10之DSC分析。在146.0℃處觀測到第一吸熱線，之後在199.9℃處觀測到放熱事件，其係歸因於鹽酸鹽之熱分解(參見圖50)。進行半水合物型10之TGA/SDTA及TGMS分析。在25℃至160℃之溫度範圍內觀測到2.6%之質量損失。此質量損失對應於每API分子之0.5分子水(參見圖51A與圖51B)。
實例 11 ：分析技術 高通量 X 射線粉末繞射
將培養盤安裝於配備有校正強度與幾何變化之VÅNTEC-500氣體平面偵測器的布魯克一般區域偵測器繞射系統(Bruker General Area Detector Diffraction System；GADDS)上。使用NIST SRM1976標準物(Corundum)進行量測準確性(峰位置)之校準。 室溫下，使用單色CuKα輻射在1.5°與41.5°之間的2Å區域中進行資料收集，該區域為XRPD圖之最獨特部分。在兩個2θ範圍(針對第一框之1.5° ≤ 2θ ≤ 21.5°及針對第二框之19.5° ≤ 2θ ≤ 41.5°)內以各框90秒之暴露時間收集各孔之繞射圖。未將背景差分(background subtraction)或曲線平滑化(curve smoothing)應用於XRPD圖。 XRPD分析期間所用的載體材料對X射線為透明的，且僅略微提供背景。
高解析度 X 射線粉末繞射
室溫下，在具有鍺單色儀的使用Cu Kα1輻射(1.54016 Å)之D8 Advance繞射儀上收集粉末資料。使用0.016°之步寬，使用固態LynxEye偵測器每步階量測持續3426.5秒以4°至45° (2θ)的單獨2θ (偵測器掃描)模式收集資料。在具有0.5 mm外徑之8 mm長玻璃毛細管中量測樣本。使用Topas 4-2程式組進行雷特韋德計算(Rietveld calculation)。 簡言之，在具有研杵之砂漿中精細研磨固體。隨後，用化合物填充硼玻璃毛細管(0.3 mm直徑)且小心地置放於繞射儀中。各步階量測0.05秒。 使用LSI-Index (Coelho，2003；Coehlo及Kern，2005)索引程式獲得晶胞參數以及晶體系統。基於反射條件以及分子之對稱選擇空間群。在此情況下，由於化合物並非對掌性，且晶體無非線性光學特性，因此在每一情況下選擇中心對稱空間群。晶體密度之計算係基於文獻中所報導之分子量且來自HPLC量測。使用全粉圖分解方法(
W
hole
P
owder
P
attern
D
ecomposition method) (Pawley)優化晶胞參數、純度以及儀器參數。使用以下擬合標準： ·
Yo , m
及
Yc , m
為資料點
m
下對應地所觀測到的及所計算之資料， ·
M
：資料點之數目， ·
P
：參數之數目， ·
wm
：用於計算統計資料的針對資料點
m
給定之加權，其由
wm = 1 / σ ( Yo , m ) 2
得出，其中σ
( Yo , m )
為
Yo , m
中
之
誤差，
；
；
不同溫度及不同濕度 XRPD
將ANSYCO HT室用於不同濕度及溫度實驗，將其安裝在設計成具有Brag-Brentano幾何結構且配備有LynxEye固態偵測器之D8 Advance系統繞射儀(布魯克)內。用於收集資料之輻射為藉由鍺晶體單色化之CuKα1 (λ = 1.54056 Å)。將物質置放於安裝在室內之固定樣本固持器上。
VH-XRPD ：
局部施加濕度且在10%至85%(露點)之間變化。在4°2θ至41°2θ範圍內收集圖，其中步階為0.01571°2θ (針對VH-XRPD)且量測時間為每步階0.5秒(針對2.5水合物型3量測)或0.85秒(針對單水合物型1量測)。在各步階下在15分鐘濕度之穩定化之後開始資料收集。在30℃下獲取全部圖。 VT-XRPD：溫度變化速率為10℃/min且在各溫度下開始收集資料之前，平衡時間為8分鐘。在4°2θ至41°2θ範圍內收集圖，其中步階為0.01573 °2θ且量測時間為每步階1秒。每一溫度之資料收集時間為40分鐘。
熱分析 DSC 分析
：由DSC熱分析圖獲得熔融特性，其使用熱流通量DSC822e儀器(Mettler-Toledo公司，瑞士)記錄。DSC822e使用小銦片(熔點在156.6℃下；ΔHf = 28.45 J.g
- 1
)針對溫度及焓進行校準。將樣本密封在標準40 μl鋁罐中，銷孔且在DSC中以10℃ min
- 1
之加熱速率自25℃加熱至300℃。在量測期間使用N
2
氣體以50 ml min
- 1
之流速來吹掃DSC設備。
TGMS 分析
：藉由TGA/SDTA測定歸因於溶劑或水自晶體之損失的質量損失。在TGA/SDTA851e儀器(Mettler-Toledo公司，瑞士)中加熱期間監測樣本重量，其產生重量與溫度曲線。使用銦與鋁之樣本校準TGA/SDTA851e。將樣本稱取至100 μl鋁坩堝中且密封。銷孔密封件且在TGA中以10℃ min
- 1
之加熱速率將坩堝自25℃加熱至300℃。使用乾燥N
2
氣體來吹掃。藉由質譜儀Omnistar GSD 301 T2 (Pfeiffer Vacuum公司，德國)分析來自TGA樣本之氣體。後者為四極質譜儀，其在0至200 amu範圍內分析質量。
卡耳費 雪分析
藉助於直接庫侖卡耳費雪滴定測定含水量，其具有SI分析學TitroLine 7500 KF跡線，配備有具有之振動膜之TZ 1753產生器電極。使用含水量為1.0 mg/g (0.1%)之HYDRANAL-Water標準1.0液體標準物作為參考物來驗證系統之效能。
掃描電子光學顯微術
使用配備有場發射源之Zeiss Sigma-300顯微鏡獲取掃描電子顯微術圖像。使用哪種偵測器會陳述於圖像上(信號A之後)。亦在圖像本身上給定工作距離(WD)及所用加速電壓(EHT)。
DVS 分析
固體物質之各種形式在吸濕性(吸水性)方面之差異提供其在增加之相對濕度下的相對穩定性的量度。使用來自表面量測系統(英國倫敦)之DVS-1系統獲得小型樣本之吸水等溫線；此儀器適於與少至若干毫克之樣本一起使用，其中準確度為0.1 μg。如各獨立實驗中所述應用若干濕度曲線。梯級由10% RH組成。以1小時之最小保持時間設定每一步階之重量平衡(10%相對濕度步階)。在DVS實驗結束時，藉由HT-XRPD量測經復原之固體物質。
HPLC 分析方法 HPLC 系統
： Agilent 1200；偵測器1：DAD，設定在248 nm下；偵測器2：呈正掃描模式之HP1100 LC/MSD
HPLC 條件：
自動取樣器溫度：15℃；柱：Waters Sunfire C18 (100 × 4.6 mm；3.5 μm)；柱溫度：35℃；流動池：10 mm通路；梯度：流動相A：10 mM乙酸銨 流動相B：乙腈LC/MS級；流速：1.0 ml/min 梯度：時間[分鐘]： 溶離劑A： 溶離劑B： 0 90% 10% 1 90% 10% 6 10% 90% 9 10% 90% 10 90% 10%
樣本
：濃度：大約0.5 mg/ml；溶劑：10 mM乙酸銨：乙腈(50:50 v/v)；注射容積：5 μl 化合物完整性表示為峰面積百分比，其由色譜圖中各峰之面積來計算(除『注入峰』外)，總峰面積如下：
相關化合物之峰面積百分比用作組分在樣本中之純度的指示。