TW201625574A

TW201625574A - 含有甲氧基黃酮之ＮＯＸ抑制劑及ＮＦκＢ抑制劑

Info

Publication number: TW201625574A
Application number: TW104114409A
Authority: TW
Inventors: Daisuke Takemoto; Yoshiko Ono; Sumio Asami; Satomi Shimoyoshi
Original assignee: Suntory Holdings Ltd
Priority date: 2014-05-09
Filing date: 2015-05-06
Publication date: 2016-07-16
Also published as: AU2015256997A1; TWI700278B; JP7015822B2; SG10201808940WA; KR20170002565A; AU2015256997B2; US20170071902A1; JP2015227329A; JP6666837B2; JPWO2015170683A1; SG11201609248WA; CA2948127A1; JP2020063283A; WO2015170683A1; CN106456597A

Abstract

本發明之課題為提供具有優良作用之NOX抑制劑及NFκB抑制劑、及利用其之起因於NOX或NFκB之疾病的預防或治療劑。因此，係使用特定之甲氧基黃酮。

Description

含有甲氧基黃酮之NOX抑制劑及NFκB抑制劑

本發明係關於含有特定的甲氧基黃酮之NOX抑制劑及NFκB抑制劑、及其利用。

NADPH氧化酶(NOX)係存在於嗜中性球等，已知為生成O^2-之酵素。因此，NOX之抑制，可認為係有用於生體內氧化所相關的各種疾病之預防或治療。

NFκB，係調節編碼發炎促進性細胞激素(例如TNFα、IL-1β、IL-6)、趨化激素(例如IL-8、MIP1α)、誘導性反應物酵素(effector enzyme)(iNOS及COX-2)等分子之基因轉錄的轉錄因子，其於發炎反應中擔當重要的角色。NFκB路徑的活化，顯示可造成各種之發炎性疾病。

植物之萃取物中所含之甲氧基黃酮，被報導其數種係具有抗氧化作用。如此之甲氧基黃酮多數具有羥基(非專利文獻1~3)。

黑薑(Kaempferia parviflora)係屬於薑科之植物的一種，日本亦稱為黑薑黃。黑薑於泰國係亦被稱作Kra chai dahm之傳統藥草之一種。已知黑薑中不僅含有具有羥基之甲氧基黃酮，亦含有不具有羥基之甲氧基黃酮(非專利文獻4)。

[先前技術文獻] [非專利文獻]

[非專利文獻1] Biochem Pharamacol., 2012, 84(2), 182-191

[非專利文獻2] Free Radic Biol Med., 1999, 27(1-2), 95-99

[非專利文獻3] Biochem Pharmacol., 1987, 36(5), 717-720

[非專利文獻4] 大阪市立大學生活科學研究科東銳明氏博士論文「薑科植物Kaempferia parviflora中所含的成分之構造與α-葡萄糖苷酶抑制活性及抗突變性」

本發明之課題係提供具有優良作用之NOX抑制劑及NFκB抑制劑、及起因於NOX或NFκB之疾病的預防或治療劑。

本發明者針對該課題努力探討的結果，發現由黑薑所得到之特定之甲氧基黃酮，具有優良的NOX抑制作用及/或NFκB抑制作用。

亦即，本發明係關於以下者，但不限定於此等。

[1]一種NOX抑制劑，其係含有具有以下之式(I)

(式中，R₁、R₄、及R₅，各自獨立地為氫或甲氧基，R₂及R₃為甲氧基)表示之構造的至少1種甲氧基黃酮。

[2]如[1]之NOX抑制劑，其中前述至少1種甲氧基黃酮，係選自由5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮、5,7-二甲氧基黃酮、及5,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群A中。

[3]如[2]之NOX抑制劑，其中相對於群A之甲氧基黃酮；與由3,5,7-三甲氧基黃酮、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-7-甲氧基黃酮、 5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮、及5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群B之甲氧基黃酮的總含量而言，群A之甲氧基黃酮之總含量的比例(A/(A+B))，以莫耳基準計係超過0.65。

[4]一種起因於NOX之疾病的預防或治療劑，其係含有如前述[1]或[2]記載之至少1種甲氧基黃酮。

[5]如[4]之預防或治療劑，其中前述疾病係選自由過敏疾病、巴金森症、腦梗塞、白內障、癲癇、脊髓損傷、動脈硬化、早產兒視網膜病變、腎病變、消化性潰瘍、胰臟炎、潰瘍性大腸炎、心肌梗塞、成人呼吸窘迫症候群、肺氣腫、慢性類風濕性關節炎等之膠原病、血管炎、浮腫、糖尿病併發症、紫外線損害、高山症、卟啉血症、燒燙傷、凍傷、接觸性皮膚炎、休克、多重器官衰竭、DIC、癌、老化、疲勞、肌肉減少症(sarcopenia)(肌力低下)、粒線體功能失調、失智症、及阿茲海默症所成之群中。

[6]如[4]或[5]之預防或治療劑，其中相對於如前述[2]記載之群A之甲氧基黃酮、與如[3]記載之群B之甲氧基黃酮的總含量而言，群A之甲氧基黃酮之總含量的比例(A/(A+B))，以莫耳基準計係超過0.65。

[7]一種NFκB抑制劑，其係含有具有以下之式(I)

[8]如[7]之NFκB抑制劑，其中前述至少1種甲氧基黃酮，係選自由5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5,7-二甲氧基黃酮、及5,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群A’中。

[9]如[8]之NFκB抑制劑，其中相對於群A’之甲氧基黃酮；與由3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮、3,5,7-三甲氧基黃酮、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-7-甲氧基黃酮、5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮、及5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群B’之甲氧基黃酮的總含量而言，群A’之甲氧基黃酮之總含量的比例(A’/(A’+B’))，以莫耳基準計係超過0.48。

[10]一種起因於NFκB之疾病的預防或治療劑，其係含有如前述[7]或[8]記載之至少1種甲氧基黃酮。

[11]如[10]之預防或治療劑，其中前述疾病係選自由類風濕性關節炎、發炎性大腸炎、變形性關節症、骨溶解症、腱炎、坐骨神經痛、椎間盤突出、狹窄症、脊髓症、腰痛、椎間關節痛、腕隧道症候群、跗骨隧道症候群、腰椎術後疼痛症候群、愛滋病、動脈硬化、氣喘、關節炎、糖尿病、發炎性大腸炎、肝炎、腦中風、失智症、肌肉消耗、病毒感染、含光老化之皮膚老化、癌、及老化所成之群中。

[12]如[10]或[11]之預防或治療劑，其中相對於如前述[8]記載之群A’之甲氧基黃酮、與如[9]記載之群B’之甲氧基黃酮的總含量而言，群A’之甲氧基黃酮之總含量的比例(A’/(A’+B’))，以莫耳基準計係超過0.48。

[13]一種NOX抑制劑，其係含有3’,4’-二甲氧基黃酮。

[14]一種起因於NOX之疾病的預防或治療劑，其係含有3’,4’-二甲氧基黃酮。

[15]如[14]之預防或治療劑，其中前述疾病係選自由過敏疾病、巴金森症、腦梗塞、白內障、癲癇、脊髓損傷、動脈硬化、早產兒視網膜病變、腎病變、消化性潰瘍、胰臟炎、潰瘍性大腸炎、心肌梗塞、成人呼吸窘迫症候群、肺氣腫、慢性類風濕性關節炎等之膠原病、血管炎、浮腫、糖尿病併發症、紫外線損害、高山症、卟啉血症、燒燙傷、凍傷、接觸性皮膚炎、休克、多重器官衰竭、DIC、癌、老化、疲勞、肌肉減少症(肌力低下)、粒線體功能失調、失智症、及阿茲海默症所成之群中。

本發明可提供具有優良作用之NOX抑制劑及NFκB抑制劑。又，利用其亦可提供起因於NOX或NFκB之疾病的預防或治療劑。

本發明中使用之甲氧基黃酮，與以往被發現具有抗氧化作用等之甲氧基黃酮不同，即使不具有羥基，亦顯示優良的NOX抑制等之作用。

(甲氧基黃酮)

本發明中，係使用具有以下之式(I)

(式中，R₁、R₄、及R₅，各自獨立地為氫或甲氧基，R₂及R₃為甲氧基)表示之構造的至少1種、較佳為至少2種、更佳為至少3種、更佳為至少4種、更佳為至少5種、更佳為至少6種、更佳為至少7種、更佳為至少8種之甲氧基黃酮。

本發明之NOX抑制、或起因於NOX之疾病的治療或預防中，較佳為，前述至少1種甲氧基黃酮，係選自由5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮、5,7-二甲氧基黃酮、及5,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群A中。NOX抑制劑、或起因於NOX之疾病的治療或預防劑，不僅群A之甲氧基黃酮，亦可含有其他化合物，例如來自黑薑之選自由3,5,7-三甲氧基黃酮、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-7-甲氧基黃酮、5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮、及5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群B的至少1種甲氧基黃酮。但是，群A之甲氧基黃酮，會顯示較群B之甲氧基黃酮更高的NOX抑制作用。因此，群A之甲氧基黃酮之含有率較高者為佳。例如，相對於群A及群B之甲氧基黃酮之總含量而言，群A之甲氧基黃酮之總含量的比例(A/(A+B))，以莫耳基準(或重量基準)計，較佳為超過0.65、更佳為0.66以上、更佳為0.67以上、更佳為0.68以上、更佳為0.69以上、更佳為0.70以上、更佳為0.71以上。該比例並無上限值，該比例亦可為1.00以下。

本發明之NFκB抑制、或起因於NFκB之疾病的治療或預防中，較佳為，前述至少1種甲氧基黃酮，係選自由5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5,7-二甲氧基黃酮、及5,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群A’中。NFκB抑制劑、或起因於NFκB之治療或預防劑，不僅群A’之甲氧基黃酮，亦可含有其他化合物，例如來自黑薑之選自由3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮、3,5,7-三甲氧基黃酮、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-7-甲氧基黃酮、5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮、及5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群B’的至少1種甲氧基黃酮。但是，群A’之甲氧基黃酮，會顯示較群B’之甲氧基黃酮更高的NFκB抑制作用。因此，群A’之甲氧基黃酮之含有率較高者為佳。例如，相對於群A’及群B’之甲氧基黃酮之總含量而言，群A’之甲氧基黃酮之總含量的比例(A’/(A’+B’))，以莫耳基準(或重量基準)計，較佳為超過0.48、更佳為0.49以上、更佳為0.50以上、更佳為0.51以上、更佳為0.52以上、更佳為0.53以上、更佳為0.54以上、更佳為0.55以上、更佳為0.60以上。該比例並無上限值，該比例亦可為1.00以下。

或者，甲氧基黃酮，係3’,4’-二甲氧基黃酮。

此等甲氧基黃酮之大部分，例如可遵照非專利文獻4記載之方法，由黑薑(Kaempferia parviflora)得到。或者，例如亦可遵照本說明書之實施例1所詳述之方法而得到。黑薑係屬於薑科之植物的一種，以東南亞為中心而自然生長，因此可容易獲得。3’,4’-二甲氧基黃酮，已知例如可使用溶劑由Lawsonia alba(散沫花)萃取。例如請參照Phytochemistry Letters,2011,4,454-458。

前述抑制劑及治療或預防劑中所含之甲氧基黃酮的種類及量，可依需要基於公知之方法來調整。例如，可使用公知之精製方法將特定之甲氧基黃酮去除，亦可將特定之經精製的甲氧基黃酮添加於前述抑制劑、或治療或預防劑中。

又，本發明中，亦可由黑薑中得到含式(I)之甲氧基黃酮的油脂萃取物來利用。該油脂萃取物係由黑薑經油脂萃取而得之萃取物。該萃取物係含有甲氧基黃酮，而黑薑萃取物所特有之黑紫色的強度被減低。該萃取物亦可進一步含有油脂、特別是用於萃取之油脂。

該油脂萃取物，可認為與未由黑薑所得者、或即使以黑薑為原料但未經油脂萃取而得者，在所含有之成分的種類及比率等之方面不同。例如，由黑薑以外之植物所得之萃取物亦可含有甲氧基黃酮，但其種類或比率可認為與該油脂萃取物不同。又，即使黑薑為原料，藉由油脂萃取以外之方法，例如含水醇萃取由其中所得之萃取物中的甲氧基黃酮之種類或比率，係與該油脂萃取物不同。另一方面，油脂萃取可對黑薑直接進行，亦可間接地，例如對使用油脂以外之溶劑，例如水、親水性溶劑、或該等之混合物由黑薑所得之萃取液來進行。

該油脂萃取物，係含有至少1種之式(I)之甲氧基黃酮。該甲氧基黃酮，較佳為由群A中選擇。該萃取物亦可進一步含有由群B中選擇之甲氧基黃酮。該油脂萃取物，較佳為含有由群A及B之11種甲氧基黃酮中選擇的至少1種、更佳為至少2種、更佳為至少3種、更佳為至少4種、更佳為至少5種、更佳為至少6種、更佳為至少7種、更佳為至少8種、更佳為至少9種、更佳為至少10種、更佳為11種。

可使用於該油脂萃取物之製造，且可包含於該萃取物中的油脂，只要可溶解甲氧基黃酮則無特殊限定。典型而言，該油脂係由中鏈脂肪酸三酸甘油酯、二酸甘油酯、芝麻沙拉油、橄欖油、大豆油、菜籽油、玉米油、米胚芽油、葵花籽油、紫蘇油、蘇子油中選出之至少1種。關於中鏈脂肪酸三酸甘油酯所使用的「中鏈脂肪酸」，意指碳數8~12之脂肪酸。構成該三酸甘油酯之脂肪酸部分當中的至少一個、較佳為二個、更佳為三個為中鏈脂肪酸。

該油脂萃取物中，黑紫色之強度減低。為了確認此事，測定該萃取物之吸光度係有效的。

具體而言，係由該萃取物，配製群A及B之 11種甲氧基黃酮的總含量為5.0mg/ml的溶液，測定該溶液於波長660nm之吸光度。如此方式所測定之吸光度，於該油脂萃取物中係0.10以下。該吸光度較佳為0.07以下、更佳為0.05以下。若無特別指明，本說明書中之吸光度，意指比色槽長度(光徑長)為10mm時的吸光度。測定所用之裝置的比色槽長度不是10mm時，係將所得之吸光度值換算為比色槽長度為10mm時的值。又，為了測定吸光度，係使用適切的空白試樣。

以下說明該油脂萃取物之製造方法。

例如，該製造方法包含使油脂與黑薑之植物體接觸，而萃取1種以上之甲氧基黃酮。該方法之典型例子如以下記載。

首先，準備黑薑之植物體。將該植物體或其部位依需要予以乾燥、粉碎。接著使該植物體或其部位與油脂接觸，進行萃取。萃取條件，只要係可萃取甲氧基黃酮，則無特殊限定。典型的萃取溫度，係50~180℃、70~170℃、70~150℃、100~150℃、或120~150℃。萃取時間，典型而言為1分~1日、10分~10小時、或15分~5小時。又，所使用之油脂的用量，典型而言係黑薑重量之0.1~30倍、或0.5~15倍。所用之油脂的例子，係如上述。

該萃取中，甲氧基黃酮移動至油脂，但黑薑之產生黑紫色的成分，可認為係保留在黑薑之植物體中，然不為理論所限。又，產生黑薑特有之香味的成分，亦可認為不移動至油脂，而保留在該植物體中。

接著，進行萃取後，依需要由以該萃取所得之含油脂萃取物中，藉由過濾或離心分離而去除不溶性固體物。

或者，油脂萃取物之製造，係包含使水、親水性溶劑、或該等之混合物與黑薑之植物體接觸，萃取1 種以上之甲氧基黃酮，而後使油脂與由該萃取所得之中間萃取物接觸，來萃取該甲氧基黃酮。此方法之典型例子如以下記載。

首先，與上述相同地準備黑薑之植物體。接著使水、親水性溶劑、或該等之混合物與該植物體或其部位接觸，進行萃取。萃取條件，只要係可萃取甲氧基黃酮，則無特殊限定。典型的萃取溫度，係室溫~回流溫度、40℃~回流溫度、50℃~回流溫度、回流溫度，較佳為50℃~回流溫度、或回流溫度。萃取時間，典型而言係1分~1日、10分~10小時、或15分~5小時。又，所使用之水、親水性溶劑或該等之混合物的用量，典型而言為黑薑之重量的0.1~30倍、或0.5~15倍。所使用之親水性溶劑，較佳為C_1-3醇及/或丙酮、更佳為乙醇。例如，使用50~100v/v%乙醇進行萃取。將該萃取步驟中所得之中間萃取物，進行油脂萃取步驟。

油脂萃取步驟中，係使該中間萃取物與油脂接觸，來進行萃取。萃取條件，只要係可萃取甲氧基黃酮，則無特殊限定。萃取溫度並無特殊限定，例如係於5℃以上、10℃以上、20℃以上、30℃以上、40℃、或50℃以上進行。萃取溫度之上限值並無特殊限制，只要係水、親水性溶劑或該等之混合物的回流溫度以下即可。萃取時間，典型而言為1分~1日、10分~10小時、或15分~5小時。又，所使用之油脂的用量，典型而言係黑薑重量之0.01~30倍、或0.1~15倍。所用之油脂的例子，係如上述。

進一步地，依情況不同，於使油脂與該中間萃取物接觸之前，及/或於該等接觸的當中，使水、親水性溶劑、或該等之混合物由該中間萃取物中蒸發。蒸發可在常壓下進行、亦可在減壓下進行。如此地進行積極蒸發的情況時，萃取時間不甚重要。只要蒸發進行，水、親水性溶劑或該等之混合物之量降低，則可認為甲氧基黃酮會移動至油脂中，又，依情況亦會與該親水性溶劑等一起移動至油脂中。

油脂萃取中，甲氧基黃酮會移動至油脂，但黑薑之產生黑紫色的成分，可認為不移動至油脂，然不為理論所限。

接著，進行萃取後，依需要由以該萃取所得之含油脂萃取物中，藉由過濾或離心分離去除不溶性固體物。此點中間萃取物亦相同。

依照前述2個方法，可得到含油脂萃取物。此可不經進一步精製而使用，亦可依需要進行精製。例如，亦可將該含油脂萃取物進行進一步的萃取步驟，來去除油脂。具體而言，係使水、親水性溶劑、或該等之混合物與該含油脂萃取物接觸，來萃取1種以上之甲氧基黃酮。此時，若依需要，亦可於該含油脂萃取物中添加低極性溶劑，例如如n-己烷之C_1-8烴。

所使用之親水性溶劑或親水性溶劑與水的混合物之例子，係如上所述。萃取溫度並無特殊限定，例如係於5℃以上、10℃以上、20℃以上、30℃以上、40℃、或50℃以上進行。萃取溫度之上限值並無特殊限制，只要係水、親水性溶劑或該等之混合物之回流溫度以下即可。萃取時間，典型而言為1分~1日、10分~10小時、或15分~5小時。又，所使用之水、親水性溶劑或該等之混合物之用量，典型而言，係油脂萃取物重量之0.01~30倍、或0.1~15倍。

進一步地，於甲氧基黃酮之萃取中，係得到來自該含油脂萃取物之油脂相，與來自該水、親水性溶劑、或該等之混合物之相的2相混合物，將該混合物進行液-液分離。結果，可將該水、親水性溶劑、或該等之混合物之相(此係含有甲氧基黃酮與溶劑之萃取物)，自油脂相中分離。為了進行液-液分離，例如，可單純將該2相混合物靜置、亦可進行離心分離。之後，得到經分離之萃取物。

經分離之萃取物，係含有甲氧基黃酮，且含有溶劑之液體形態。可直接利用該液體，亦可去除溶劑(水、親水性溶劑、或其混合物)，得到含有甲氧基黃酮之粉末形態的萃取物。去除溶劑之方法並無特殊限定，可列舉於常壓或減壓下之蒸餾、冷凍乾燥等。

如此方式經去除油脂的萃取物，係含有較高濃度的黑薑特有之甲氧基黃酮。該萃取物亦可依需要進一步精製。

油脂萃取物中，與使用乙醇等之親水性溶劑所得之萃取物比較，上述A/(A+B)及A’/(A’+B’)之比例較高。油脂萃取物中之該比例的較佳範圍，係如上述。

(NOX抑制劑)

本發明者，發現式(I)之甲氧基黃酮，有效於作為NADPH氧化酶(NOX)抑制劑。因此，本發明之一個形態，係NOX抑制劑、或用以抑制NOX之組成物，其係含有至少一種式(I)之甲氧基黃酮(本說明書中，「NOX抑制劑」與「用以抑制NOX之組成物」，係相互交換地使用，若無特別指明，則使用其一方時，亦意指另一方)。本發明於其他態樣中，亦為用以抑制NOX之方法，其係包含將式(I)之甲氧基黃酮的至少一種投與至對象。或者，取代式(I)之甲氧基黃酮，或對其追加地，亦可使用3’,4’-二甲氧基黃酮。

NOX之抑制，係導致預防或治療起因於NOX 之疾病。因此，本發明於其他形態中，係為起因於NOX之疾病的預防或治療劑、或用於該預防或治療之組成物，其係含有式(I)之甲氧基黃酮的至少1種(本說明書中，「起因於NOX之疾病的預防或治療劑」與「用以預防或治療起因於NOX之疾病的組成物」，係相互交換地使用，若無特別指明，則使用其一方時，亦意指另一方)。本發明於其他態樣中，係為用以預防或治療該疾病之方法，其係包含將該甲氧基黃酮之至少1種投與至對象。如此之疾病，係包含異位性皮膚炎、過敏性鼻炎(花粉症)、過敏性結膜炎、過敏性胃腸炎、支氣管氣喘、小兒氣喘、食物過敏、藥物過敏、蕁麻疹等之過敏疾病、巴金森症、腦梗塞、白內障、癲癇、脊髓損傷、動脈硬化、早產兒視網膜病變、腎病變、消化性潰瘍、胰臟炎、潰瘍性大腸炎、心肌梗塞、成人呼吸窘迫症候群、肺氣腫、慢性類風濕性關節炎等之膠原病、血管炎、浮腫、糖尿病併發症、紫外線損害、高山症、卟啉血症、燒燙傷、凍傷、接觸性皮膚炎、休克、多重器官衰竭、DIC、癌、老化、疲勞、肌肉減少症(肌力低下)、粒線體功能失調、失智症、及阿茲海默症。或者，取代式(I)之甲氧基黃酮，或對其追加地，亦可使用3’,4’-二甲氧基黃酮。

本發明於其他形態中，係含有至少一種式(I) 之甲氧基黃酮的抗氧化劑(更具體而言，係生體內抗氧化、抑制或減低劑)、或用以防止、抑制或減低生體內氧化之組成物(本說明書中，「抗氧化劑」、「生體內抗氧化、抑制或減低劑」、「用以防止、抑制或減低生體內氧化之組成物」，係相互交換地使用，若無特別指明，則記載此等三者之一時，亦意指其餘之二者)。本發明於其他態樣中，係為用以防止、抑制或減低生體內氧化之方法，其包含將式(I)之甲氧基黃酮的至少一種投與至對象。本說明書中，生體內氧化，意指於生體內因活性氧而產生之各種氧化反應。或者，取代式(I)之甲氧基黃酮，或對其追加地，亦可使用3’,4’-二甲氧基黃酮。

本發明之NOX抑制劑、起因於NOX之疾病的預防或治療劑、抗氧化劑中之式(I)之甲氧基黃酮的總含量，只要可得到所期望之效果，則無特殊限定，較佳為0.01~50w/w%、更佳為0.1~40w/w%、更佳為0.5~30w/w%。

為了發揮NOX抑制作用、起因於NOX之疾病的預防或治療、抗氧化等之前述所期望之效果，成人每1日之式(I)的甲氧基黃酮之總攝取量，較佳為1~500mg、更佳為3~200mg、又更佳為5~100mg。

上述量亦可適用於3’,4’-二甲氧基黃酮。

(NFκB抑制劑)

本發明者，發現了式(I)之甲氧基黃酮係有效於作為NFκB抑制劑。因此，本發明於其他形態中，係NFκB抑制劑、或用以抑制NFκB之組成物，其係含有至少一種之式(I)之甲氧基黃酮(本說明書中，「NFκB抑制劑」與「用以抑制NFκB之組成物」係相互交換地使用，若無特別指明，則則使用其一方時，亦意指另一方)。本發明於其他態樣中，係為用以抑制NFκB之方法，其係包含將式(I)之甲氧基黃酮的至少一種投與至對象。或者，取代式(I)之甲氧基黃酮，或對其追加地，亦可使用3’,4’-二甲氧基黃酮。

NFκB之抑制，係導致預防或治療起因於 NFκB之疾病。因此，本發明於其他形態中，係為起因於NFκB之疾病的預防或治療劑、或用於該預防或治療之組成物，其係含有式(I)之甲氧基黃酮的至少1種(本說明書中，「起因於NFκB之疾病的預防或治療劑」與「用於起因於NFκB之疾病的預防或治療劑之組成物」係相互交換地使用，若無特別指明，則則使用其一方時，亦意指另一方)。本發明於其他態樣中，係關於用以預防或治療該疾病之方法，其係包含將該甲氧基黃酮之至少1種投與至對象。如此之疾病，係包含類風濕性關節炎、發炎性大腸炎、變形性關節症、骨溶解症、腱炎、坐骨神經痛、椎間盤突出、狹窄症、脊髓症、腰痛、椎間關節痛、腕隧道症候群、跗骨隧道症候群、腰椎術後疼痛症候群、愛滋病、動脈硬化、氣喘、關節炎、糖尿病、發炎性大腸炎、肝炎、腦中風、失智症、肌肉消耗、病毒感染、含光老化之皮膚老化、癌、及老化。或者，取代式(I)之甲氧基黃酮，或對其追加地，亦可使用3’,4’-二甲氧基黃酮。

本發明之NFκB抑制劑、起因於NFκB之疾病的預防或治療劑中之式(I)的甲氧基黃酮之總含量，只要可得到所期望之效果，則無特殊限定，較佳為0.01~50w/w%、更佳為0.1~40w/w%、更佳為0.5~30w/w%。

為了發揮NFκB抑制作用、起因於NFκB之疾病的預防或治療等之前述所期望的效果，成人每1日之式(I)甲氧基黃酮的總攝取量，較佳為1~500mg、更佳為3~200mg、又更佳為5~100mg。

上述之量亦可適用於3’,4’-二甲氧基黃酮。

(其他成分)

本發明之NOX或NFκB抑制劑、起因於NOX或NFκB之疾病的預防或治療劑、抗氧化劑，只要不損及其效果，於式(I)之甲氧基黃酮以外，亦可摻合任意成分。例如，可適當摻合維生素E、維生素C等之維生素類；礦物質類、荷爾蒙、營養成分、香料等之生理活性成分，此外可適當摻合製劑化中摻合的乳化劑、張力化劑(等張化劑)、緩衝劑、溶解輔助劑、防腐劑、安定化劑等。

(適用)

本發明之NOX或NFκB抑制劑、起因於NOX或NFκB之疾病的預防或治療劑、抗氧化劑，可使用作為飲食品(機能性食品、健康輔助食品、營養機能食品、特別用途食品、特定保健用食品、營養輔助食品、飲食療法用食品、健康食品、補充劑等)、醫藥品、或化妝香料品；或其原料。飲食品及醫藥品，亦可為加工為寵物飼料的寵物食品或動物飼料等、以及動物用醫藥品。

該飲食品之形態並無特殊限定，可為例如清涼飲料水(例如運動飲料、碳酸飲料、果汁飲料)、甜點類(例如蛋糕、餅乾、麵包、糖果)、麵類(例如烏龍麵、蕎麥麵、日本拉麵、義大利麵)、味噌、醬油、醋、沙拉油、芝麻油、豆乳、牛乳。或者錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑(亦包含軟膠囊)等之形態。

該醫藥品之形態並無特殊限定，例如為外用劑(例如洗劑、乳液劑、貼附劑、軟膏劑)、經口劑(錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑(亦包含軟膠囊)、溶液劑、懸浮液劑)、注射劑、注入劑。

該化妝香料品之形態，並無特殊限定，例如為化粧水、凝膠、洗劑、乳霜、面膜劑、乳液、粉底、口紅、粉末、洗面劑、髮油。

(數值範圍)

為了明確化而記載時，本說明書中以下限值與上限值所表示之數值範圍，亦即「下限值~上限值」，係包含該等之下限值及上限值。例如，以「1~2」所表示之範圍，係包含1及2。

[實施例] 實施例1 (甲氧基黃酮之單離精製)

對黑薑150g添加50%乙醇水溶液1500ml，進行2小時加熱回流萃取。冷卻後過濾所得之萃取液，於減壓下濃縮，進行冷凍乾燥，得到黑薑萃取物25.7g。將所得萃取物當中之9g，進行使用了Dia ion HP20(三菱化學股份有限公司製)之管柱層析，分為4個區分(30%乙醇溶出部、50%乙醇溶出部、70%乙醇溶出部、100%乙醇溶出部)。將其中之50%乙醇溶出部進行高速液體層析，單離出 5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮(64mg)、3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮(464mg)、5,7-二甲氧基黃酮(145mg)、5,7,4’-三甲氧基黃酮(188mg)、3,5,7-三甲氧基黃酮(35mg)、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮(96mg)。接著對100%乙醇溶出部亦同樣地以液體層析進行分離精製，單離出5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮(15mg)、5-羥基-7-甲氧基黃酮(84mg)、5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮(56mg)、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮(100mg)、5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮(110mg)。單離之化合物，係將其頻譜數據與文獻(大阪市立大學生活科學研究科東銳明氏博士論文「薑科植物Kaempferia parviflora中所含的成分之構造與α-葡萄糖苷酶抑制活性及抗突變性」)所記載之各種頻譜數據比較，並進行鑑定。

實施例2 (油脂萃取物之製造)

對3g及15g之黑薑分別添加橄欖油30mL，於120℃進行30分鐘萃取後，冷卻後過濾，得到2種淡黃色之黑薑油脂萃取物。由以下之分析條件，將所得2種油脂萃取物中之實施例1記載之甲氧基黃酮11種的總含量予以定量後，其值為6.2mg/mL(由3g之黑薑)、22.4mg/mL(由15g之黑薑)。再者，此等萃取物均含有實施例1記載之甲氧基黃酮全部11種。

(甲氧基黃酮之分析定量)

對黑薑油脂萃取物1.0mL添加n-己烷1.0mL予以稀釋後，以2.0mL之80%甲醇水溶液進行甲氧基黃酮之萃取3次。將所得之80%甲醇萃取液通過Mega Bond Elute C18(Agilent Technologies公司製)後，以洗出吸附於Mega Bond Elute C18之甲氧基黃酮為目的，通過80%甲醇2.0mL。合併所得之液體後，最終定量為10mL，作為HPLC用之分析試樣。

(HPLC分析條件)

管柱：Develosil C30 UG5(4.6×150mm、5μm、野村化學股份有限公司製)

檢測：280nm(PDA為200~600nm)

管柱溫度：40℃

移動相A：0.05%三氟乙酸水溶液

移動相B：90%乙腈水溶液中之三氟乙酸0.05%溶液

梯度：移動相B 50%-50%-70%-70%(0min-7.5min-20min-25min)

流速：1.0mL/min

試樣注入量：10μL

實施例3 (NOX抑制活性測定方法) 分化之HL-60細胞之配製：

人類骨髓性白血病細胞HL-60細胞於未分化狀態會重複增殖，但已知藉由添加DMSO(dimethyl sulfoxide)或視黃酸等，會分化為成熟顆粒球，喪失增殖能力，而且亦為分化指標之NOX(NADPH oxidase)會於細胞內表現，該NOX可利用作為用以評估NOX抑制活性之酵素源。

為了分化為表現NOX之顆粒球，將以含有 10% FBS之RPMI1640培養基培養之未分化HL-60細胞，懸浮於含1% DMSO之含有10% FBS之RPMI1640培養基中，使成為5×10⁵cells/ml，將該懸浮液於內徑10cm之培養皿中各分注15ml，於CO₂培養箱(37℃)中培養3日後，於各培養皿中追加10ml之含1%DMSO之含有10%FBS之RPMI1640培養基，進一步培養3日，藉此可得到表現了NOX之經分化的HL-60細胞。如以下記載般，使用經分化之HL-60細胞之細胞破碎液或直接使用活細胞，來測定NOX活性。

使用細胞破碎液以cell-free系進行之NOX活性測定：藉由離心處理來收集經DMSO處理而分化之HL-60細胞，以PBS(磷酸緩衝生理食鹽水)洗淨一次後，使用細胞破碎用之緩衝液(含有131mM NaCl及340mM sucrose之8mM磷酸緩衝液pH7.0)，懸浮成為1×10⁸cells/ml。使其冰冷後，使用超音波破碎機(Bioruptor UCD-250HSA、Cosmo Bio製)，於4℃以下之條件，重複「最大輸出之破碎20秒/休止期冷卻30秒」的程序3次，藉以得到細胞破碎液。將破碎液1000g、4分鐘之離心處理，以去除debris，於所得之上清液中添加9倍容積之反應用緩衝液(含有1mM EGTA、10μM FAD及170mM sucrose之65mM磷酸緩衝液pH7.0)，配製NOX測定用之細胞破碎上清液(相當於1×10⁷cells/ml)。

NOX之反應，係於96well之微孔盤中，每 well注入50μl之上述細胞破碎液，進一步添加NOX活性化劑之0.5mM SDS溶液25μl、基質之0.4mM NADPH溶液25μl，於25℃進行30~90分鐘。NOX活性係藉由以螢光測定(Ex：355nm/Em：460nm)NADPH之消耗速度來求得。

被測樣品之NOX抑制活性，係配製樣品之 DMSO溶液(試藥的情況時通常為10mM)，藉由DMSO配製3倍系列稀釋之溶液，將其於上述反應液中各添加1μl/well，進行酵素反應，所得之抑制活性係以IC₅₀值(μM、萃取物的情況時為μg/ml)表示。

使用經分化之HL-60活細胞的NOX活性測定：藉由離心處理來收集經DMSO處理而分化之HL-60細胞，懸浮於不含FBS及酚紅之D-MEM培養基中，成為5×10⁶cells/ml。NOX之反應，係於96well之微孔盤中每well注入25μl之上述細胞懸浮液，進一步地各自添加25μl之使用上述D-MEM所配製之0.8mg/ml WST-1溶液、配製為特定濃度之被測樣品溶解液(配製樣品之DMSO溶液(試藥的情況時通常為10mM)，自此開始使用 DMSO配製3倍系列稀釋之溶液，將其溶解於上述D-MEM，成為1v/v%以下，來配製該被測樣品溶解液)並攪拌後，添加25μl之4μM PMA(Phorbol 12-Myristate 13-acetate、終濃度為1μM)D-MEM溶液，進行NOX之活性化，於37℃進行反應45分鐘，以450nm吸光度來測定NOX酵素生成物的超氧化物與反應液中之WST-1進行反應所生成之黃色甲(formazan)。再者，該NOX活性測定系統中，確認了只要未添加PMA，則NOX不會活性化。

所得之抑制活性係以IC₅₀值(μM、萃取物的情況時為μg/ml)表示。

實施例4 (甲氧基類黃酮之NOX抑制活性的比較)

遵照實施例3，藉由以使用了細胞破碎液之cell-free系統來進行NOX活性測定，比較數個甲氧基類黃酮之NOX抑制活性。結果示於表1。

如表1所示，於葉黃酮(luteolin)之甲氧基體的5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮，或槲黃素之甲氧基體的3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮等，觀察到強的NOX抑制活性。此等之5,7-二甲氧基類黃酮類係含有於黑薑等中。另一方面，於已知存在於柑橘類之陳黃皮酮等之六甲氧基黃酮，未觀察到強的NOX抑制活性。再者，NOX抑制劑的VAS2870之使用該細胞破碎液以cell-free系統所得之IC₅₀值，係3.3μM。

實施例5 (來自黑薑之化合物之NOX抑制活性)

遵照實施例3，藉由以使用了cell-free系統之NOX活性測定來比較由黑薑萃取/分離之甲氧基類黃酮之NOX抑制活性。由黑薑所得到之類黃酮均具有具備甲氧基之特徵。其中，於A環之5號位置與7號位置具有甲氧基之黃酮，觀察到強的NOX抑制活性，但於5號位置具有羥基之類黃酮，未觀察到NOX抑制活性。3號位置之甲氧基雖非致命性的，但可見活性減弱的傾向。因此，式(I)表示之甲氧基黃酮，可認為具有優良的NOX抑制活性。又，該系統中之VAS2870(NOX抑制劑)之IC₅₀為6.3μM。

實施例6

為了確認黑薑之批次所致之油脂萃取物之組成的相異，準備2種之黑薑200g，分別添加乙醇1000mL，進行1小時加熱回流萃取。將所得液體冷卻後，吸引過濾，分為殘渣與萃取液。再度於殘渣中添加乙醇1000mL，進行1小時加熱回流萃取並過濾，與先前所得之萃取液合併。接著於萃取液中添加中鏈脂肪酸三酸甘油酯100mL，以減壓濃縮餾去乙醇後，藉由吸引過濾去除所析出之不溶物，得到2種黑薑油脂萃取物。根據實施例2，分析該等萃取物中之甲氧基黃酮含量後，甲氧基黃酮總量係90.4mg/mL(以下將此萃取物稱為「萃取物A」)、54.9mg/mL(以下將此萃取物稱為「萃取物B」)。又，將此等2種萃取物中之甲氧基黃酮總量以橄欖油調節為5mg/ml，得到2種溶液，測定該溶液於660nm之吸光度後，分別為0.036(萃取物A)、0.030(萃取物B)(使用甲醇作為空白試樣)。再者，此等萃取物均含有實施例1記載之全部11種之甲氧基黃酮。

實施例7 (配製用以進行NOX抑制活性測定之樣品：黑薑乙醇萃取物之製造)

對黑薑乾燥物200g添加50%乙醇水溶液1000mL，進行1小時加熱回流萃取。將所得之液體冷卻後，吸引過濾，分為殘渣與萃取液。再度於殘渣中添加50%乙醇水溶液1000mL，進行1小時加熱回流萃取並過濾，與先前所得之萃取液合併。冷卻至室溫後，減壓濃縮之後，進行冷凍乾燥，得到49g黑薑乙醇萃取物-1(產率24.5%)。以確認黑薑之批次間所致的差異為目的，以與上述相同之方法進行操作後，得到23g黑薑乙醇萃取物-2(產率15.2%)。接著，根據實施例2之方法，測定本萃取物中之11種甲氧基黃酮總含量後，分別為264mg/g、267mg/g。將黑薑乙醇萃取物-1中之甲氧基黃酮總量以甲醇調節為5mg/ml，得到溶液，測定該溶液於660nm之吸光度後，其係0.95(空白試樣為甲醇)。再者，此等萃取物均含有實施例1記載之全部11種之甲氧基黃酮。

實施例8 (配製用以進行NOX抑制活性測定之樣品：黑薑油脂萃取物之製造)

對黑薑10g、20g、30g、40g，分別添加10倍量之乙醇，進行1小時加熱回流萃取。將所得之液體冷卻後，吸引過濾，於該萃取液中添加中鏈脂肪酸三酸甘油酯15mL，藉由減壓濃縮餾去乙醇後，以去除不溶物為目的再度進行吸引過濾，得到各自之黑薑油脂萃取物。對所得之4種黑薑油脂萃取物，根據實施例2，分析11種甲氧基黃酮之總含量後，其值分別為23.9mg/mL、46.3mg/mL、69.4mg/mL、78.1mg/mL。又，將總甲氧基黃酮量含有46.3mg/mL以上之油脂萃取物，於室溫下放置時，確認到甲氧基黃酮類之析出。再者，此等萃取物均含有實施例1記載之全部11種之甲氧基黃酮。

實施例9 (以NOX抑制活性為指標來比較黑薑萃取法)

遵照實施例3，測定總甲氧基黃酮量22.4mg/ml之黑薑油脂萃取物-1(實施例2中所得到者)、總甲氧基黃酮量69.4mg/ml之黑薑油脂萃取物-2(實施例8中所得到者)、乙醇萃取物(實施例7中所得到之黑薑乙醇萃取物-1及2)的NOX抑制活性(使用經分化之HL-60活細胞的NOX抑制活性測定)。為了觀察黑薑之批次間的活性強度的不同，探討2種黑薑。又，油脂萃取物無法直接測定活性，因此進行脫脂處理。具體而言，對油脂萃取物0.5mL添加同量之n-己烷0.5mL進行稀釋後，以0.5mL之80%甲醇水溶液進行3次甲氧基黃酮之萃取。將所得之萃取液吸附於Sep-Pak PLUS C8 125Å Catrtriges(Waters公司製)，進一步通過80%甲醇3.0mL去除油分。之後，以溶劑洗淨Sep-Pak PLUS C8 125Å Catrtriges，將所得液體減壓濃縮、冷凍乾燥，配製評価試樣。所測定之IC₅₀值示於以下之表3。

以下所示之IC₅₀值，係表示基於總甲氧基黃酮量之NOX抑制活性。比較該等之值後，油脂萃取物均較乙醇萃取物顯示較高之作用(低的IC₅₀)。由此，顯示藉由如本發明般以油脂萃取，會有效率地萃取出對NOX抑制作用更高的甲氧基黃酮。

實施例10 (NFκB抑制作用)

已知將類巨噬細胞之RAW264.7細胞以LPS(脂多醣)刺激時，NFκB被活性化，藉此iNOS(誘導型NO合成酵素)之表現亢進，起因於iNOS酵素活性之亞硝酸會於培養液中累積，藉由測定培養液中之亞硝酸量，可評估NFκB活性化。

RAW264.7細胞係使用於含有10%FBS之RPMI1640培養液中培養者。將所得之細胞懸浮於上述培養液，使成為4×10⁵cells/ml，於96well微孔盤中，每well各分注100μl，預先(於CO₂培養箱中)培養24hr。於其中，每well各自添加25μl之含有6μg/ml LPS之培養液(LPS係來自大腸菌，終濃度為1μg/ml)及25μl之特定濃度之被測標準品溶液，進一步培養24hr後，各自分取75μl之細胞培養液，藉由添加等量之Griess試藥(Fluka製)，進行呈色反應，基於540nm之吸光度測定亞硝酸之生成。被測樣品之NFκB抑制活性的測定，係使用將樣品之DMSO溶液溶解於上述培養液中使DMSO濃度為1%以下的3倍系列稀釋之溶液來進行，測定刺激劑之LPS無添加/添加條件下的吸光度。表4表示起因於LPS刺激之亞硝酸生成被抑制50%之濃度、亦即IC₅₀值(μM)。如表4所示，式(I)之甲氧基黃酮，顯示優良的NFκB抑制作用。

實施例11 (萃取方法與組成之關係)

有鑑於實施例9之結果，比較來自黑薑之油脂萃取物與親水性溶劑萃取物的組成。具體而言，係根據實施例2、6及8，進行油脂萃取(僅以油脂萃取、或乙醇萃取與隨後的油脂萃取)，根據實施例7進行乙醇萃取。油脂萃取中，係使用橄欖油、或橄欖油與中鏈脂肪酸甘油酯(本實施例中，係使用中鏈脂肪酸三酸甘油酯，其亦表示為「MCT」)的混合物，作為油脂。將所得之萃取物基於實施例2記載之方法以HPLC分析，將所得之HPLC面積值如以下表示。以下之表中，為了方便，亦有單將油脂表示為「Oil」者。

如表5A及5B所示，油脂萃取物中，NOX抑制活性或NFκB抑制活性高的甲氧基黃酮之比例，亦即A/(A+B)及A’/(A’+B’)，係較乙醇萃取物更高。如此之組成的不同，可影響NOX抑制活性或NFκB抑制活性。

Claims

一種NOX抑制劑，其係含有具有以下之式(I) (式中，R₁、R₄、及R₅，各自獨立地為氫或甲氧基，R₂及R₃為甲氧基)表示之構造的至少1種甲氧基黃酮。
如請求項1之NOX抑制劑，其中前述至少1種甲氧基黃酮，係選自由5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮、5,7-二甲氧基黃酮、及5,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群A中。
如請求項2之NOX抑制劑，其中相對於群A之甲氧基黃酮；與由3,5,7-三甲氧基黃酮、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-7-甲氧基黃酮、5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮、及5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群B之甲氧基黃酮的總含量而言，群A之甲氧基黃酮之總含量的比例(A/(A+B))，以莫耳基準計係超過0.65。
一種起因於NOX之疾病的預防或治療劑，其係含有如請求項1或2記載之至少1種甲氧基黃酮。
如請求項4之預防或治療劑，其中前述疾病係選自由過敏疾病、巴金森症、腦梗塞、白內障、癲癇、脊髓損傷、動脈硬化、早產兒視網膜病變、腎病變、消化性潰瘍、胰臟炎、潰瘍性大腸炎、心肌梗塞、成人呼吸窘迫症候群、肺氣腫、慢性類風濕性關節炎等之膠原病、血管炎、浮腫、糖尿病併發症、紫外線損害、高山症、卟啉血症、燒燙傷、凍傷、接觸性皮膚炎、休克、多重器官衰竭、DIC、癌、老化、疲勞、肌肉減少症(肌力低下)、粒線體功能失調、失智症、及阿茲海默症所成之群中。
如請求項4或5之預防或治療劑，其中相對於如請求項2記載之群A之甲氧基黃酮、與如請求項3記載之群B之甲氧基黃酮的總含量而言，群A之甲氧基黃酮之總含量的比例(A/(A+B))，以莫耳基準計係超過0.65。
一種NFκB抑制劑，其係含有具有以下之式(I) (式中，R₁、R₄、及R₅，各自獨立地為氫或甲氧基， R₂及R₃為甲氧基)表示之構造的至少1種甲氧基黃酮。
如請求項7之NFκB抑制劑，其中前述至少1種甲氧基黃酮，係選自由5,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5,7-二甲氧基黃酮、及5,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群A’中。
如請求項8之NFκB抑制劑，其中相對於群A’之甲氧基黃酮；與由3,5,7,3’,4’-五甲氧基黃酮、3,5,7-三甲氧基黃酮、3,5,7,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-3,7,3’,4’-四甲氧基黃酮、5-羥基-7-甲氧基黃酮、5-羥基-7,4’-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,7-二甲氧基黃酮、及5-羥基-3,7,4’-三甲氧基黃酮所成之群B’之甲氧基黃酮的總含量而言，群A’之甲氧基黃酮之總含量的比例(A’/(A’+B’))，以莫耳基準計係超過0.48。
一種起因於NFκB之疾病的預防或治療劑，其係含有如請求項7或8記載之至少1種甲氧基黃酮。
如請求項10之預防或治療劑，其中前述疾病係選自由類風濕性關節炎、發炎性大腸炎、變形性關節症、骨溶解症、腱炎、坐骨神經痛、椎間盤突出、狹窄症、脊髓症、腰痛、椎間關節痛、腕隧道症候群、跗骨隧道症候群、腰椎術後疼痛症候群、愛滋病、動脈硬化、氣喘、關節炎、糖尿病、發炎性大腸炎、肝炎、腦中風、失智症、肌肉消耗、病毒感染、含光老化之皮膚老化、癌、及老化所成之群中。
如請求項10或11之預防或治療劑，其中相對於如請求項8記載之群A’之甲氧基黃酮、與如請求項9記載之群B’之甲氧基黃酮的總含量而言，群A’之甲氧基黃酮之總含量的比例(A’/(A’+B’))，以莫耳基準計係超過0.48。
一種NOX抑制劑，其係含有3’,4’-二甲氧基黃酮。
一種起因於NOX之疾病的預防或治療劑，其係含有3’,4’-二甲氧基黃酮。
如請求項14之預防或治療劑，其中前述疾病係選自由過敏疾病、巴金森症、腦梗塞、白內障、癲癇、脊髓損傷、動脈硬化、早產兒視網膜病變、腎病變、消化性潰瘍、胰臟炎、潰瘍性大腸炎、心肌梗塞、成人呼吸窘迫症候群、肺氣腫、慢性類風濕性關節炎等之膠原病、血管炎、浮腫、糖尿病併發症、紫外線損害、高山症、卟啉血症、燒燙傷、凍傷、接觸性皮膚炎、休克、多重器官衰竭、DIC、癌、老化、疲勞、肌肉減少症(肌力低下)、粒線體功能失調、失智症、及阿茲海默症所成之群中。