CN110357846B - 一种黄酮并单萜类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种黄酮并单萜类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种黄酮并单萜类化合物及其制备方法和应用，其结构式如下所示：
Figure DDA0002126781370000011
该化合物从突托腊梅(Chimonanthus gramatus M.C.Liu)中分离得到。体外生物活性实验表明，该化合物具有较强的1,1‑二苯‑2‑苦基肼自由基(DPPH)清除能力，是天然抗氧化剂和自由基清除剂的候选化合物。

Description

一种黄酮并单萜类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，涉及一种黄酮并单萜类化合物，尤其是涉及一种从植物突托腊梅中分离得到一个新的黄酮并单萜类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
自由基(free radicals)指的是那些游离存在的，含有1个或1个以上不配对电子的分子、离子、原子或原子团，它们是机体正常代谢的产物，在体内有很强的氧化反应能力，容易对蛋白质、脂质和核酸等产生伤害，从而引起机体的损伤。自由基也是机体不可缺少的活性物质，它可以作为第二信使参与细胞信号转导。正常情况下，机体的氧化与抗氧化处于一种动态平衡，但是在患病或衰老等状态下，会出现由于自由基水平升高而导致的病理现象。天然抗氧化剂及自由基清除剂一直是医药、食品、化妆品行业研究热点之一。
突托蜡梅C.grammatus M.C.Liu隶属蜡梅科蜡梅属植物，为赣南地区特有民间药用植物，仅分布于江西省安远县蔡坊乡和会昌县清溪乡交界处狭长地带，民间用于防治感冒和流行性感冒，在赣南客家人群中发挥着重要的药用价值。在野外调查中发现，在安远县有当地药农开始实施该药用植物的人工种植，并且取得了很好的效果，当地养鱼户常将突托蜡梅叶撒在鱼塘中用以防治鱼病发生，亦取得了很好的效果，这都预示着突托蜡梅叶有抗菌活性并且蕴含具有抑菌活性的化合物。现代研究主要聚焦于其挥发油的研究，迄今为止，仅有国内一篇中文文献报道了关于突托蜡梅活性活性成分。文献中仅记载作者从该植物叶中分离鉴定了几个简单的化合物(如蜡梅碱、槲皮素和胡萝卜苷等)，对这些化合物仅仅进行大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种细菌的活性测试，并且抗菌机制亦没有进行研究。综上，突托蜡梅的化学成分有待于深入全面的研究。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种黄酮并单萜类化合物及其制备方法和应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明提供一种黄酮并单萜类化合物，命名为grammatin A，其结构式如下所示：
Figure GDA0002942722940000021
本发明还提供一种黄酮并单萜类化合物的制备方法，从突托腊梅(Chimonanthusgramatus M.C.Liu)中分离得到，包括以下步骤：
(1)将突托腊梅(Chimonanthus gramatus M.C.Liu)的干燥全草粗粉，经过乙醇溶液提取后用水分散，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取分别得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相；
(2)将石油醚相浸膏经硅胶柱层析，然后通过石油醚-丙酮梯度系统洗脱，薄层色谱检视，根据洗脱的先后顺序，合并为5个组份，将第二个组分经过反相C8硅胶柱层析，然后通过甲醇-水梯度系统洗脱，薄层色谱检视后，根据洗脱的先后顺序，合并为5个次组分，将第4个次组分经过Sephadex LH-20层析，氯仿-甲醇体系洗脱后，再经过半制备高效液相色谱反相C18柱层析，乙腈-水体系洗脱，得到所述的黄酮并单萜类化合物。
优选地，步骤(1)中，采用80％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤合并，减压回收乙醇，来进行乙醇溶液提取。
优选地，步骤(1)中，采用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。
优选地，硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度系统洗脱的过程中，石油醚和丙酮的体积比由100:1变化到0:1。
优选地，反相C8硅胶柱层析，甲醇-水梯度系统洗脱过程中，甲醇和水的体积比由30:70变化到100:0。
优选地，Sephadex LH-20层析，氯仿-甲醇体系洗脱过程中，氯仿-甲醇的体积比为1:1。
优选地，半制备高效液相色谱反相C18柱层析，乙腈-水体系洗脱过程中，乙腈-水的体积比为60:40。
本发明还提供黄酮并单萜类化合物在抗氧化剂和自由基清除剂方面的应用。
优选地，将其用于体外1,1-二苯-2-苦基肼自由基(DPPH)清除。
体外生物学活性实验表明，本发明的黄酮并单萜类化合物具有较强的DPPH自由基清除能力，其IC50＝127.32±8.23μg/mL，可以作为天然抗氧化剂或自由基清除剂的候选药物。
附图说明
图1为grammatin A的高分辨质谱；
图2为grammatin A的氢谱；
图3为grammatin A的碳谱；
图4为grammatin A的氢氢相关谱；
图5为grammatin A的碳氢同核相关谱；
图6为grammatin A的碳氢异核相关谱；
图7为grammatin A的NOE相关谱；
图8为grammatin A的紫外光谱；
图9为grammatin A的红外光谱。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1 grammatin A的制备
1.将突托腊梅(C.gramatus)的干燥全草粗粉采用80％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，过滤合并提取液，减压回收乙醇，然后加水分散后依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取分别得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相.
2.将1.中得到的石油醚相浸膏(35.5g)经硅胶柱层析，然后通过石油醚-丙酮梯度洗脱，体积比由100:1变化到0:1，薄层色谱检视，根据洗脱的先后顺序，合并为5个组份，将第2个组份经过反相C8硅胶柱层析，然后通过甲醇-水梯度系统洗脱，体积比30:70变化到100:0，薄层色谱检视后，根据洗脱的先后顺序，合并为5个次组分。将第4个次组分经过Sephadex LH-20层析，氯仿-甲醇(1:1)洗脱后，最后经过半制备高效液相色谱反相C18柱层析，乙腈-水(60:40)洗脱，得到化合物grammatin A(3.0mg)，其结构式如下所示：
Figure GDA0002942722940000041
上述化合物的技术指标如下：
白色粉末；
比旋光度
Figure GDA0002942722940000043
–43.5(c 0.3,MeOH)；
紫外光谱(MeOH)：λmax(logε),200(4.59),235(3.95),295(3.55)；
红外光谱,νmax3445,2361,1631,1456,698cm-1；
1H(600MHz)and 13C(150MHz)NMR data(CDCl3)，见表1,
HRESIMS m/z 393.2060[M+Na]+(计算值C25H28O4)。
表1 grammatin A的氢谱和碳谱数据
Figure GDA0002942722940000042
本实施例制得的图1为grammatin A的高分辨质谱、氢谱、碳谱、氢氢相关谱、碳氢同核相关谱、碳氢异核相关谱、NOE相关谱、紫外光谱及红外光谱分别参见图1～9。
实施例2 DPPH自由基清除能力的测定
准确称量4mg DPPH用甲醇溶解定容至100mL容量瓶中，即为DPPH溶液。
取化合物(grammatin A，2mg/mL)0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL(不足体积用甲醇补齐至0.5mL)与2mL DPPH溶液于同一试管中，摇匀。黑暗处放置30min，以相应的空白溶液作为对照，在517nm处测定其吸光度。其DPPH自由基抑制率计算公式如下：
抑制率％＝[A0-(Ab-A*)]/A0*100％
其中：A0为未加样品抑制剂反应后的吸光度；
Ab为加样品抑制剂反应后的吸光度；
A*为未加抑制剂和DPPH的吸光度。
经过上述实验发现，该化合物具有较强的体外DPPH自由基清除能力，其IC50＝127.32±8.23μg/mL。
上述对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种黄酮并单萜类化合物，其特征在于，其结构式如下所示：
Figure FDA0002942722930000011
2.如权利要求1所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，从突托腊梅(Chimonanthus gramatus M.C.Liu)中分离得到，包括以下步骤：
(1)将突托腊梅(Chimonanthus gramatus M.C.Liu)的干燥全草粗粉，经过乙醇溶液提取后用水分散，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取分别得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相；
(2)将石油醚相浸膏经硅胶柱层析，然后通过石油醚-丙酮梯度系统洗脱，薄层色谱检视，根据洗脱的先后顺序，合并为5个组份，将第二个组分经过反相C8硅胶柱层析，然后通过甲醇-水梯度系统洗脱，薄层色谱检视后，根据洗脱的先后顺序，根据洗脱的先后顺序，合并为5个次组分，将第4个次组分经过Sephadex LH-20层析，氯仿-甲醇体系洗脱后，再经过半制备高效液相色谱反相C18柱层析，乙腈-水体系洗脱，得到所述的黄酮并单萜类化合物。
3.根据权利要求2所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，采用80％乙醇溶液加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤合并，减压回收乙醇，来进行乙醇溶液提取。
4.根据权利要求2所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，采用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。
5.根据权利要求2所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，硅胶柱层析，石油醚-丙酮梯度系统洗脱的过程中，石油醚和丙酮的体积比由100:1变化到0:1。
6.根据权利要求2所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，反相C8硅胶柱层析，甲醇-水梯度系统洗脱过程中，甲醇和水的体积比由30:70变化到100:0。
7.根据权利要求2所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，Sephadex LH-20层析，氯仿-甲醇体系洗脱过程中，氯仿-甲醇的体积比为1:1。
8.根据权利要求2所述的黄酮并单萜类化合物的制备方法，其特征在于，半制备高效液相色谱反相C18柱层析，乙腈-水体系洗脱过程中，乙腈-水的体积比为60:40。
9.如权利要求1所述的黄酮并单萜类化合物在制备抗氧化剂和自由基清除剂方面的应用。
10.根据权利要求9所述的黄酮并单萜类化合物的应用，其特征在于，将其用于体外1,1-二苯-2-苦基肼自由基清除。
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