TW201509425A - 以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法 - Google Patents
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Abstract
本發明所揭之以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其係不須再額外添加市售合成凝血酶或非人類凝血酶，而可直接將血液製備成為可用以修復傷口之醫藥組合物。據此，本發明所揭方法係具有避免患者產生排斥反應，並且用以大量製備醫藥組合物以及降低製造成本等功效，進而使醫療成本減少，更可減輕患者負擔。
Description
本發明係有關於一種醫藥組合物之製備方法，特別係指一種以以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法。
按，血小板於人體中提供凝血與止血之功能，並且於活化之狀態下，能釋放生長因子，因此，血小板對於止血、組織修復及再生之過程中扮演十分重要之角色。目前臨床上係多使用富含血小板血漿(Platelet Rich Plasma，PRP)治療傷口，達到促進組織細胞再生修復之功效，例如將富含血小板血漿用於因糖尿病而導致之傷口、潰爛性傷口或是手術後之患者等。
過去文獻中係指出將患者血液加入檸檬酸鈉抗凝血劑後，進行離心，取得中間層之血漿，其係為富含血小板血漿。而後將該富含血小板血漿加入適當濃度之生理食鹽水以及牛凝血酶，用以促進其釋放出生長因子，而得有效地用以促進組織生長。惟，由於上述製造方法中所製備之富含血小板血漿係含有血漿或血液等物，使得患者被投予該富含血小板血漿導致免疫反應，造成二度發炎之情形。而為了改善上述缺失，則有研究係將取得之血液先經離心後，取得上層液，再將該上層液進行離心而蒐集其中層液；將該中層液與如凝血酶之活化劑加以混合，形成一混合液；將該混合液進行離心，過濾獲得上清液，其中係具有富含血小板血漿之生長
因子。
上述研究中所揭方法係能增加富含血小板血漿之純度，然而仍存在著以下缺失，其一、製造成本高昂，相對地對於患者來說係為一筆沈重之醫療支出，因而造成臨床上無法全面性地應用於有需求之患者；其二、需要較長之時間始能完成製備富含血小板血漿；其三、過早加入凝血酶，造成含血小板血漿於使用前已凝結；其四、須添加非自體取得之酵素，可能會使患者產生不適反應；其五、所獲得富含血小板血漿產量過小，對於大面積傷口應用不易。
緣是，本發明之主要目的係在於提供一種以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其係不須再額外添加市售合成凝血酶或非人類凝血酶，而可直接將自體血液製備成為用以修復傷口之醫藥組合物，是以，藉由本發明所揭方法製備之醫藥組合物，係可有效地避免患者產生排斥反應之情形。
本發明之另一目的係在於提供一種以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其係用以降低製造成本，並且可大量製備製備修復傷口用醫藥組合物。
本發明所揭之第一較佳實施例中，係包含有下列步驟：
步驟a：取至少兩管血液，其中一管血液中含有抗凝劑。
步驟b：離心未含有抗凝劑之該管血液，收集除該管血液離心後至少一部紅血球層之上層。
步驟c：離心含有抗凝劑之另該管血液而形成至少三分層，
其中，第一層至少含有紅血球，第二層至少含有富含血小板血漿(Platelet rich plasma，PRP)，第三層至少含有缺乏血小板血漿(Platelet poor plasma，PPP)。
步驟d：收集步驟c之三分層中至少第二層，並且將之進行離心而得到一分層物。
步驟e：收集步驟d分層物之一部而至少含有富含血小板血漿。
步驟f：自由步驟c之第三層及步驟d之分層物所組成之群中收集缺乏血小板血漿。
步驟g：將步驟b之該上層之一部、步驟d收集之該分層物之一部、步驟f收集之缺乏血小板血漿與鈣離子以一預定比例混合，而以獲得一修復傷口用組合物。
其中：步驟b係更將該上層分離為一由富含血小板之纖維蛋白(Platelet-Rich Fibrin，PRF)組成之膜套及一由凝血酶組成之液狀物。
該步驟d係收集步驟c中第一層之一部、第二層及第三層之一部而進行離心。
步驟g係將該液狀物、步驟d收集之該分層物之一部、步驟f收集之缺乏血小板血漿與鈣離子以一預定比例混合，其中，步驟f收集之缺乏血小板血漿用以進行混合之體積為最大，而該液狀物、步驟d收集之該分層物之一部與鈣離子係以相同體積進行混合，又以步驟f收集之缺乏血小板血漿、該液狀物、步驟d收集之該分層物之一部與鈣離子為5：1：1：1或6：
1：1：1之組成體積比予以混合最佳。
更進一步來說，步驟g中係先將步驟d收集之該分層物之一部、步驟f收集之缺乏血小板血漿與鈣離子予以混合後，再加入該液狀物進行混合。
此外，本發明所揭方法更包含將該膜套加入步驟f所得之該修復傷口用醫藥組合物。
據此，藉由上述方法所製備而得之修復傷口用醫藥組合物，係得用於投予至病患患部，而促進患者患部之組織生長，以有效地縮短復原時間。
(10)‧‧‧以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法
(20)(30)‧‧‧血液
(21)‧‧‧紅血球層
(22)‧‧‧上層
(221)‧‧‧膜套
(222)‧‧‧液狀物
(31)‧‧‧第一層
(32)‧‧‧第二層
(33)‧‧‧第三層
(40)‧‧‧分層物
(41)‧‧‧分層物之一部
(331)‧‧‧缺乏血小板血漿
(50)‧‧‧修復傷口用醫藥組合物
第一圖係為本發明較佳實施例之流程示意圖。
第二圖係為本發明較佳實施例之使用示意圖。
第三圖係為含抗凝劑之血液經一次離心後所得之結果。
第四圖係為含抗凝劑之血液經二次離心後所得之結果。
以下，茲舉本發明之一較佳實施例，並配合圖式說明如后。
請參閱第一圖，本發明所揭以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法(10)，包含下列步驟：步驟a：取至少兩管血液(20)(30)，其中一管血液(30)中含有抗凝劑。
步驟b：離心未含有抗凝劑之該管血液(20)，收集除該管血液離心後至少一部紅血球層(21)之上層(22)。將該上層(22)置於一
如培養皿之容器上，以加壓方式將該上層(22)分離為一由富含血小板之纖維蛋白組成之膜套(221)及一由凝血酶組成之液狀物(222)。
步驟c：離心含有抗凝劑之另該管血液(30)而形成三分層(31)(32)(33)，其中，第一層(31)至少含有紅血球，第二層(32)至少含有富含血小板血漿，第三層(33)至少含有缺乏血小板血漿。
步驟d：收集步驟c之第一層(31)之一部、第二層(32)及第三層(33)之一部，並且將之進行離心而得到一分層物(40)。
步驟e：收集步驟d分層物之一部(41)而至少含有富含血小板血漿。
步驟f：自步驟c之第三層(33)中收集缺乏血小板血漿(331)。
步驟g：將步驟b之該液狀物(222)、步驟d收集之該分層物之一部(41)、步驟f收集之缺乏血小板血漿(331)與鈣離子以一預定比例混合，而以獲得一修復傷口用醫藥組合物(50)。
據此，藉由本發明所揭方法製備而得之修復傷口用組合物(50)，其係得被用以與傷口接觸，俾能達到促進患者傷口生長及加速傷口復原之效果。更進一步而言，製備完成之該修復傷口用組合物(50)於凝固後置於一紗布上，予以加壓形成一膜狀物，再該膜狀物置於患部上；或將製備完成之該修復傷口用組合物(50)與該膜套(221)混合，待其凝固後，將含有該膜套(221)之該修復傷口用組合物(50)置於一紗布(50)上，予以加壓而形成一膜狀物，該膜狀物亦得直接置於患部，達到上述功效。
以下將更進一步茲舉若干實例並配合圖示，用以說明本發明如后。
實例一：以血液製備修復傷口用醫藥組合物
首先，取10管8 C.C.之血液，將其中2管血液內係分別未加入抗凝劑，對稱地平放入離心機中，以3400rpm離心約15分鐘。將離心後之下層紅血球以剪刀去除，僅保留呈淡黃色而為凝膠狀之上層。將呈凝膠狀之該上層放入小圓盤中，均勻按壓，使該上層分離成為由凝血酶所組成之液狀物以及由富含血小板之纖維蛋白所組成之膜套。
再者，將其餘未加入抗凝劑之8管血液以2400rpm進行第一次離心約5分鐘，分別將各該管血液中含有紅血球之下層予以去除後，先自各該血管中收集總體積約5ml之缺乏血小板血漿，再將剩餘部份以3400rpm進行第二次離心約15分鐘而形成三層分離層。自該三層分離層收集包含有富含血小板血漿之中間層。其中，第一次離心之結果係如第三圖所示，第二次離心之結果係如第四圖所示。
將缺乏血小板血漿5ml、含有富含血小板血漿之中間層1ml與鈣離子1ml先予以混合，再加入1ml由凝血酶所組成之液狀物，均勻混合後獲得本發明所揭修復傷口用醫藥組合物。並且將由富含血小板之纖維蛋白所組成之膜套加入該修復傷口用醫藥組合物，待其凝固後倒於紗布上，再以加壓方式將含有富含血小板之纖維蛋白之該修復傷口用醫藥組合物壓製成為膜狀，以供後續實例之用。
實例二：修復傷口試驗
於本實例中係將實例一中所完成之修復傷口用醫藥組合物
與市售血小板凝膠套組(星沛有限公司)分別置於具開放傷口患者之患部上，經由一預定時間後，再觀察各該患者之復原狀況，其中，投予本發明所揭修復傷口用醫藥組合物所之患者共39人，而投予市售血小板凝膠套組之患者共77人。投予後之復原結果係如下表一所示。
由表一之結果可知實例一所製備之修復傷口用醫藥組合物確實能夠促進傷口復原，且其對於患者之復原比例係高於市售血小板凝膠套組所能達成者。據此，藉由本發明所揭方法所製備之修復傷口用醫藥組合物乃具有促進組織生長，加速傷口復原之功效。
必須加以說明，上述實施例及實例乃僅為本發明之例示性說明，非用以侷限本發明說明書以及申請專利範圍。詳言之，本發明所揭修復傷口用醫藥組合物係得應用於各類傷口或須促進組織生長之患部，如骨折等，而投予方式除得直接將該投予患部外，亦得藉由載體呈載該修復傷口用醫藥組合物而與患部接觸，或透過無菌器具將該復傷口用醫藥組合物導入患部或其他能夠將該復傷口用醫藥組合物接觸患部之方式。而為搭配不同投予方式，本發明所揭修復傷口用醫藥組合物係得被製備為不同投予形式，例如：液狀、膏狀、凝膠狀、粉狀等。
綜上所述，本發明所揭以血液製備修復傷口用醫藥組合物之
方法，係於製備過程中僅須完全利用自體血液，不須另行添加非人體或合成添加物即可完成，因此，確實具有降低製備成本之功效，並且所用以製備該醫藥組合物之原料可完全來自於患者本身，因而具有避免患者對於該醫藥組合物所產生排斥反應之功效。
以上僅是藉由各該實施例詳細說明本發明，熟知該技術領域者於不脫離本發明精神下，而對於說明書中之實施例所做的任何簡單修改或是變化，均應為本案申請專利範圍所得涵攝者。
(10)‧‧‧以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法
(20)(30)‧‧‧血液
(21)‧‧‧紅血球層
(22)‧‧‧上層
(221)‧‧‧膜套
(222)‧‧‧液狀物
(31)‧‧‧第一層
(32)‧‧‧第二層
(33)‧‧‧第三層
(40)‧‧‧分層物
(41)‧‧‧分層物之一部
(331)‧‧‧缺乏血小板血漿
(50)‧‧‧修復傷口用醫藥組合物
Claims (8)
- 一種以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，係包含有下列步驟：步驟a：取至少兩管血液，其中一管血液中含有抗凝劑；步驟b：離心未含有抗凝劑之該管血液，收集除該管血液離心後至少一部紅血球層之上層；步驟c：離心含有抗凝劑之另該管血液而形成至少三分層，其中，第一層至少含有紅血球，第二層至少含有富含血小板血漿，第三層至少含有缺乏血小板血漿；步驟d：收集步驟c之三分層中至少第二層，並且將之進行離心而得到一分層物；步驟e：收集步驟d分層物之一部而至少含有富含血小板血漿；步驟f：自由步驟c之第三層及步驟d之分層物所組成之群中收集缺乏血小板血漿；步驟g：將步驟b之該上層之一部、步驟d收集之該分層物之一部、步驟f收集之缺乏血小板血漿與鈣離子以一預定比例混合，而以獲得一修復傷口用醫藥組合物。
- 依據申請專利範圍第1項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其中，步驟b係更將該上層分離為一由富含血小板之纖維蛋白組成之膜套及一由凝血酶組成之液狀物。
- 依據申請專利範圍第2項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其中，步驟g係將該液狀物、步驟d收集之該分層物之一部、步驟f收集之缺乏血小板血漿與鈣離子以一預定比例混合。
- 依據申請專利範圍第3項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其中，步驟f收集之缺乏血小板血漿用以進行混合之體積為最大，而該液狀物、步驟d收集之該分層物之一部與鈣離子係以相同體積進行混合。
- 依據申請專利範圍第4項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其中，步驟f收集之缺乏血小板血漿、該液狀物、步驟d收集之該分層物之一部與鈣離子係以選自由5：1：1：1及6：1：1：1所組成之體積比予以混合。
- 依據申請專利範圍第3項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其中，步驟g中係先將步驟d收集之該分層物之一部、步驟f收集之缺乏血小板血漿與鈣離子予以混合後，再加入該液狀物進行混合。
- 依據申請專利範圍第3項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其更包含將該膜套加入該修復傷口用醫藥組合物中。
- 依據申請專利範圍第1項所述以血液製備修復傷口用醫藥組合物之方法，其中，該步驟d係收集步驟c中第一層之一部、第二層及第三層之一部而進行離心。
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