CN114099543A - 运动损伤修复用prp血清制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了运动损伤修复用prp血清制备方法,涉及血清制备技术领域。该运动损伤修复用prp血清制备方法,通过将全血与抗凝剂混合后形成的抗凝血液进行输送,抗凝血液二次纳滤、离心后得到不同浓度的血浆血清,预先制备的富血小板血浆血清与不同浓度的血浆血清混合后得到不同浓度的prp血清并进行冷藏,并且与透明质酸钠凝胶混合注入运动损伤处,借助含水量高的凝胶充分模拟天然软骨的环境,易降解且无毒,便于进行运动损伤修复用prp血清的疗效研究,以得到最佳的治疗浓度方案,促进运动损伤处的迅速修复。
Description
技术领域
本发明涉及血清制备技术领域,尤其涉及运动损伤修复用prp血清制备方法。
背景技术
富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)是将动物或人的全血经过离心后得到的含有高浓度血小板的血浆。PRP中含有大量的生长因子,包括血小板衍生生长因子、转化生长因子-β、类胰岛素生长因子、上皮生长因子和血管上皮生长因子等,可有效地促进创面愈合。目前,PRP在临床上已应用于慢性溃疡创面的治疗、糖尿病足溃疡的处理、烧伤创面的治疗以及皮肤美容等方面,并且取得了明显的治疗和修复效果。另外,还有临床研究将PRP应用于治疗骨折不愈合、骨不连、骨坏死、骨关节炎、关节软骨损伤等疾病,同样取得了治疗效果。
目前市面上的富血小板血浆制备装置种类不少,但是基本都是采用离心管式离心将血浆中的血小板进行分离,进而制得富血小板血浆。但是在实际操作过程中却较为繁琐,可重复性差,无法进行运动损伤修复用prp血清的疗效研究,以得到最佳的治疗浓度方案,并进一步提高运动损伤处的修复效率。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提供了运动损伤修复用prp血清制备方法。
本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的:
运动损伤修复用prp血清制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将全血与抗凝剂混合后得到抗凝血液,开启单向调节阀和蠕动泵,抗凝血液从全血输送管进入,蠕动泵蠕动促进抗凝血液由全血输送管进入纳滤离心箱内;
步骤二、抗凝血液依次经过第一纳滤膜的纳滤除去全血中的白细胞与红细胞,第一离心机构离心分离得到血浆和血清,血浆和血清经过第二纳滤膜的纳滤后除去纤维蛋白原及凝血因子,第二离心机构离心分离得到高浓度的血浆血清;
步骤三、离心分离后不同液面处不同浓度的血清通过血清管进入混合腔内,富血小板血浆血清储存箱内的富血小板血浆血清经主输送管、副输送管进入混合腔内,混合均匀后得到不同浓度的prp血清,于混合冷藏箱内进行冷藏;
步骤四、将不同浓度的prp血清与透明质酸钠凝胶按照质量比1:0.01~0.03混合后,得到运动损伤修复用prp血清,注入运动损伤处生成修复系统。
作为本发明进一步改进的方案,步骤一中抗凝剂选自2.5wt%的枸橼酸钠溶液,每100mL全血中加入2.5wt%的枸椽酸钠溶液10mL。
作为本发明进一步改进的方案,所述第一离心机构和第二离心机构的具体工作过程为:伺服电机驱动联轴器后带动离心轴转动,离心轴带动粉碎叶片转动对血浆血清进行高速粉碎、离心。
作为本发明进一步改进的方案,所述离心轴的转速为2600~3500rpm。
作为本发明进一步改进的方案,所述透明质酸钠凝胶的制备方法如下:取适量透明质酸钠溶解于蒸馏水中,10~20℃下搅拌10~12小时,加入透明质酸钠质量2%~5%的甲基丙烯酸酐,在pH 8~9、温度6~10℃的条件下搅拌反应18~22小时,乙醇清洗后溶解于蒸馏水中,紫外光照得到透明质酸钠凝胶。
作为本发明进一步改进的方案,所述紫外光的强度为15~20μW/cm2,照射时间为30~50s。
作为本发明进一步改进的方案,所述第一纳滤膜的孔径为3~5μm,第二纳滤膜的孔径为0.5~2μm。
作为本发明进一步改进的方案,所述混合冷藏箱的冷藏温度为10~20℃。
本发明的有益效果:
本发明运动损伤修复用prp血清制备方法,通过将全血与抗凝剂混合后形成的抗凝血液进行输送,抗凝血液二次纳滤、离心后得到不同浓度的血浆血清,预先制备的富血小板血浆血清与不同浓度的血浆血清混合后得到不同浓度的prp血清并进行冷藏,并且与透明质酸钠凝胶混合注入运动损伤处,借助含水量高的凝胶充分模拟天然软骨的环境,易降解且无毒,便于进行运动损伤修复用prp血清的疗效研究,以得到最佳的治疗浓度方案,促进运动损伤处的迅速修复。
附图说明
图1为本发明用于制备运动损伤修复用prp血清的装置结构示意图;
图2为本发明第一纳滤机构的结构示意图。
图中:100、全血输送机构;110、全血输送管;120、蠕动泵;130、单向调节阀;200、纳滤离心机构;210、纳滤离心箱;220、第一纳滤机构;221、固定框;222、缓冲安装层;223、第一纳滤膜;224、第二纳滤膜;230、第二纳滤机构;240、第一离心机构;241、伺服电机;242、联轴器;243、离心轴;244、粉碎叶片;250、第二离心机构;300、prp血清混合冷藏机构;310、混合冷藏箱;311、混合腔;320、富血小板血浆血清储存箱;321、主输送管;322、副输送管;323、止液夹;330、血清管。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
需要说明的是,当元件被称为“固定于”另一个元件,它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件,它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。
实施例1
如图1-2所示,本实施例所述运动损伤修复用prp血清制备方法,包括以下步骤:
步骤一、将全血与抗凝剂混合后得到抗凝血液,开启单向调节阀130和蠕动泵120,抗凝血液从全血输送管110进入,蠕动泵120蠕动促进抗凝血液由全血输送管110进入纳滤离心箱210内;其中,抗凝剂选自2.5wt%的枸橼酸钠溶液,每100mL全血中加入2.5wt%的枸椽酸钠溶液10mL;
步骤二、抗凝血液依次经过第一纳滤膜223的纳滤除去全血中的白细胞与红细胞,第一离心机构240离心分离得到血浆和血清,血浆和血清经过第二纳滤膜224的纳滤后除去纤维蛋白原及凝血因子,第二离心机构250离心分离得到高浓度的血浆血清;其中,第一离心机构240和第二离心机构250的具体工作过程为:伺服电机241驱动联轴器242后带动离心轴243转动,离心轴243带动粉碎叶片244转动对血浆血清进行高速粉碎、离心;离心轴243的转速为2600~3500rpm;
步骤三、离心分离后不同液面处不同浓度的血清通过血清管330进入混合腔311内,富血小板血浆血清储存箱320内的富血小板血浆血清经主输送管321、副输送管322进入混合腔311内,混合均匀后得到不同浓度的prp血清,于混合冷藏箱310内进行冷藏;其中,混合冷藏箱310的冷藏温度为10~20℃;
步骤四、将不同浓度的prp血清与透明质酸钠凝胶按照质量比1:0.01~0.03混合后,得到运动损伤修复用prp血清,注入运动损伤处生成修复系统。
其中,透明质酸钠凝胶的制备方法如下:取适量透明质酸钠溶解于蒸馏水中,10~20℃下搅拌10~12小时,加入透明质酸钠质量2%~5%的甲基丙烯酸酐,在pH 8~9、温度6~10℃的条件下搅拌反应18~22小时,乙醇清洗后溶解于蒸馏水中,紫外光照得到透明质酸钠凝胶。紫外光的强度为15~20μW/cm2,照射时间为30~50s。
本实施例的运动损伤修复用prp血清制备方法,通过将全血与抗凝剂混合后形成的抗凝血液进行输送,抗凝血液二次纳滤、离心后得到不同浓度的血浆血清,预先制备的富血小板血浆血清与不同浓度的血浆血清混合后得到不同浓度的prp血清并进行冷藏,并且与透明质酸钠凝胶混合注入运动损伤处,借助含水量高的凝胶充分模拟天然软骨的环境,易降解且无毒,便于进行运动损伤修复用prp血清的疗效研究,以得到最佳的治疗浓度方案,促进运动损伤处的迅速修复。
实施例2
如图1-2所示,本实施例提供一种用于制备运动损伤修复用prp血清的装置,包括全血输送机构100,用于输送全血与抗凝剂混合后形成的抗凝血液;纳滤离心机构200,用于将抗凝血液进行二次纳滤、离心后得到不同浓度的血浆血清;prp血清混合冷藏机构300,用于将预先制备的富血小板血浆血清与不同浓度的血浆血清混合后得到不同浓度的prp血清并进行冷藏。
本实施例的用于制备运动损伤修复用prp血清的装置,通过全血输送机构100对全血与抗凝剂混合后形成的抗凝血液进行输送,通过纳滤离心机构200将抗凝血液二次纳滤、离心后得到不同浓度的血浆血清,通过prp血清混合冷藏机构300将预先制备的富血小板血浆血清与不同浓度的血浆血清混合后得到不同浓度的prp血清并进行冷藏,使得该装置实现了全血的输送,抗凝血液的二次纳滤离心,以及配制不同浓度的prp血清进行冷藏的功能,便于进行运动损伤修复用prp血清的疗效研究,以得到最佳的治疗浓度方案。
具体地,全血输送机构100包括多个全血输送管110,全血输送管110的输送方向依次设有蠕动泵120、单向调节阀130;纳滤离心机构200包括纳滤离心箱210、第一纳滤机构220、第二纳滤机构230,全血输送管110的末端与纳滤离心箱210的一侧连通,第一纳滤机构220和第二纳滤机构230从靠近全血输送管110侧至远离全血输送管110侧依次设于纳滤离心箱210内,第一纳滤机构220与第二纳滤机构230之间设有第一离心机构240,第二纳滤机构230与纳滤离心箱210的侧壁之间设有第二离心机构250。
第一纳滤机构220、第二纳滤机构230均包括外侧的固定框221,固定框221与纳滤离心箱210的内壁过盈配合,固定框221内设有缓冲安装层222,缓冲安装层222内分别安装有第一纳滤膜223和第二纳滤膜224。其中,第一纳滤膜223的孔径为3~5μm,第二纳滤膜224的孔径为0.5~2μm。
人体全血中血小板的直径为2~3μm,红细胞的平均直径为9μm左右,白细胞的直径为7~20μm。全血输送机构100的使用过程中,当全血与抗凝剂混合后,抗凝血液从全血输送管110进入,开启单向调节阀130和蠕动泵120,蠕动泵120的蠕动作用下促进抗凝血液由全血输送管110进入纳滤离心箱210内;依次经过第一纳滤膜223的纳滤除去全血中的白细胞与红细胞,第一离心机构240离心分离得到血浆和血清,血浆和血清经过第二纳滤膜224的纳滤后除去纤维蛋白原及凝血因子,第二离心机构250离心分离得到高浓度的血浆血清。
第一离心机构240和第二离心机构250的结构相同,均包括伺服电机241、联轴器242、离心轴243,伺服电机241置于纳滤离心箱210的顶部,伺服电机241的电机轴通过联轴器242与位于纳滤离心箱210内的离心轴243转动连接,离心轴243伸入纳滤离心箱210内且轴向对称设有多个粉碎叶片244。第一离心机构240和第二离心机构250工作时,伺服电机241驱动联轴器242后带动离心轴243转动,离心轴243带动粉碎叶片244转动对血浆血清进行高速粉碎、离心,提高了血浆与血清的分离效率。
prp血清混合冷藏机构300包括混合冷藏箱310、富血小板血浆血清储存箱320,混合冷藏箱310内从上至下设有多个混合腔311,纳滤离心箱210位于第二离心机构250侧的壁部通过血清管330伸入混合腔311内;富血小板血浆血清储存箱320的侧壁向下延伸设有主输送管321,主输送管321上通过多个副输送管322与每个混合腔311的侧壁连通,副输送管322的外围设有止液夹323。prp血清混合冷藏机构300的设计,使得离心分离后不同液面处不同浓度的血清通过血清管330进入混合腔311内,富血小板血浆血清储存箱320内的富血小板血浆血清经主输送管321、副输送管322进入混合腔311内,混合均匀后在10~20℃的混合冷藏箱310内进行冷藏,便于配制和冷藏不同浓度的prp血清。
需要说明的是,在本文中,如若存在第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (8)
1.运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、将全血与抗凝剂混合后得到抗凝血液,开启单向调节阀(130)和蠕动泵(120),抗凝血液从全血输送管(110)进入,蠕动泵(120)蠕动促进抗凝血液由全血输送管(110)进入纳滤离心箱(210)内;
步骤二、抗凝血液依次经过第一纳滤膜(223)的纳滤除去全血中的白细胞与红细胞,第一离心机构(240)离心分离得到血浆和血清,血浆和血清经过第二纳滤膜(224)的纳滤后除去纤维蛋白原及凝血因子,第二离心机构(250)离心分离得到高浓度的血浆血清;
步骤三、离心分离后不同液面处不同浓度的血清通过血清管(330)进入混合腔(311)内,富血小板血浆血清储存箱(320)内的富血小板血浆血清经主输送管(321)、副输送管(322)进入混合腔(311)内,混合均匀后得到不同浓度的prp血清,于混合冷藏箱(310)内进行冷藏;
步骤四、将不同浓度的prp血清与透明质酸钠凝胶按照质量比1:0.01~0.03混合后,得到运动损伤修复用prp血清,注入运动损伤处生成修复系统。
2.根据权利要求1所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,步骤一中抗凝剂选自2.5wt%的枸橼酸钠溶液,每100mL全血中加入2.5wt%的枸椽酸钠溶液10mL。
3.根据权利要求1所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,所述第一离心机构(240)和第二离心机构(250)的具体工作过程为:伺服电机(241)驱动联轴器(242)后带动离心轴(243)转动,离心轴(243)带动粉碎叶片(244)转动对血浆血清进行高速粉碎、离心。
4.根据权利要求3所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,所述离心轴(243)的转速为2600~3500rpm。
5.根据权利要求1所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,所述透明质酸钠凝胶的制备方法如下:取适量透明质酸钠溶解于蒸馏水中,10~20℃下搅拌10~12小时,加入透明质酸钠质量2%~5%的甲基丙烯酸酐,在pH 8~9、温度6~10℃的条件下搅拌反应18~22小时,乙醇清洗后溶解于蒸馏水中,紫外光照得到透明质酸钠凝胶。
6.根据权利要求5所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,所述紫外光的强度为15~20μW/cm2,照射时间为30~50s。
7.根据权利要求1所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,所述第一纳滤膜(223)的孔径为3~5μm,第二纳滤膜(224)的孔径为0.5~2μm。
8.根据权利要求1所述的运动损伤修复用prp血清制备方法,其特征在于,所述混合冷藏箱(310)的冷藏温度为10~20℃。
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