CN104721876A - 一种胶原蛋白海绵的制造方法 - Google Patents

一种胶原蛋白海绵的制造方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种胶原蛋白海绵的制造方法，主要通过对牛跟腱进行预处理、切片、捣碎、胃酶消化、过滤离心、透析，配成胶原溶液，最后经紫外照射、冻干、成品内包装、辐照灭菌和成品外包装。

Description

一种胶原蛋白海绵的制造方法
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白海绵的制造方法。
背景技术
胶原蛋白是生物体内含量最丰富的一种结构蛋白质，它存在于结缔组织中，是皮肤、骨骼、肌腱的主要组成成份。各种组织中分离出来的胶原蛋白的分子量约为30KD，它由二个相同的含1056个α-氨基酸残基的α1亚基和一个含1029个α-氨基酸残基的α2亚基所组成，构成三螺旋的基本结构，它们在组织中以纤维状态存在，起着支架作用。在进化上，胶原蛋白是十分保守的，种属间差异很小，因而免疫源性极低。所以从动物组织中(如牛跟腱)提取出来的胶原蛋白可作为被人体接受的植入原料。利用胶原蛋白的理化特性，生物学特性、免疫学特性及机械物理方面的特性；利用它的易被修饰和可塑性；制造成胶原蛋白海绵，应用于临床医疗。
CN1915437 A中公开了一种胶原蛋白海绵的制备工艺，但其是制备过程中采用过滤方式提纯胶原容易堵塞滤膜，易造成过滤周期长，损失大；透析过程中用0.1％醋酸透析时间2天很难将盐分透析干净，胶原成品中盐分较大容易导致止血过程引起创伤部位肿胀；冻干前胶原没有经过交联，胶原纤维易被降解，容易断裂，结构不够稳定。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种胶原蛋白海绵的制造方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，包括以下步骤：
a、选用牛跟腱，用生理盐水于2～10℃环境浸泡，取出洗净后用酒精浸泡消毒，然后用水洗至无味，然后对牛跟腱切片；
b、将切片在水中浸泡1～3小时，然后用氯化钙溶液洗涤至切片无血色；
c、去除氯化钙溶液后将切片置于酒精中消毒10～20min；
d、倒去酒精，用0.1‰～0.5‰的醋酸洗涤切片至无味，然后用水洗去残留的酸液；
e、将牛跟腱切片放入绞碎机中，加入适量冷注射用水，使牛跟腱切片绞碎，挑出筋膜，用冷注射用水洗涤多次，将水用绢丝挤干；
f、将上述牛跟腱碎片置于合适大小的桶中，以每千克加入10-30L左右的1％-10％的醋酸，让其充分溶胀；
g、按胃蛋白酶和牛跟腱碎片重量百分百1:10～1:200的比例加入用1％～10％的醋酸溶解的胃蛋白酶溶液，边加入边搅拌均匀，开始消化，然后根据胶原消化液粘度增加醋酸溶液，整个消化过程为48～96小时；
h、将胶原消化液采用抽滤系统进行抽滤去除未消化的杂质；
i、抽滤结束后将滤液用高速冷冻离心机进行离心，去除杂质；
j、用5～15mol/L的NaOH溶液将胶原溶液pH调节到7～9，然后加入NaCl盐析使NaCl终浓度为2～5mol/L，搅拌均匀开始沉淀；
k、待下清液澄清后，静止盐析约2～10小时
l、取出沉淀，用1％醋酸溶液洗涤，当胶原开始溶胀时停止即可，然后用1％醋酸15～25L进行溶胀，溶胀时间1～3天；
m、将胶原溶液装入透析袋中，每次透析外液的体积是内液体积的4～6倍，每天更换至少1次透析外液直至胶原pH达到5.0以上。
n、透析结束后将胶原用紫外进行交联，交联时间2～8小时；
o、交联结束后采用低温冷冻干燥机对胶原进行干燥制备出胶原蛋白海绵；
p、将胶原蛋白海绵包装后进行辐照灭菌。
2、根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在所述的步骤a中选用浓度为75％的酒精进行浸泡消毒。
3、根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在所述的步骤c中切片在酒精中消毒15min。
4、根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在在所述的步骤g中，消化过程在2～10℃环境下运行。
5、根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在在所述的步骤m中，每天至少2次透析外液。
本发明的有益效果是：本专利中采用牛跟腱作为原料，跟腱中胶原蛋白含量非常高，脂肪含量低，这减轻后续胶原提纯压力，简化操作工序。
制备过程在2-10℃环境下，低温环境确保制备过程中胶原的三维螺旋结构和生物活性。
胶原采用抽滤方式进行提纯，因为在正压过滤过程中，未消化的牛跟腱团块易堵塞滤膜，正压过程中不方面开盖处理，在抽滤时则可适当搅拌以减少堵塞，加快抽滤速度，同时也能减少因堵塞而造成的损失。而且抽滤后进行离心去除颗粒杂质使胶原纯度提升。
盐析时控制好pH值，盐析过程只需2-10小时即可，缩短盐析时间，减短 制备周期。而盐析时间较长时胶原容易变黄，影响外观色泽。
透析过程中先用弱酸再用水透析，透析时胶原整体质地比较均匀，不会出现局部pH过高导致胶原析出现象。
本发明优点：采用胶原含量较高的牛跟腱作为原料可以减少提纯工序，简化操作，缩短生产周期；采用抽滤进行提纯加快提纯效率，增加胶原回收率；抽滤后再离心提升了胶原的纯度；盐析时间段且完全，加速胶原提纯，且保证胶原外观品质；透析方案改善止血过程不适，提高止血效果；本工艺制备出的胶原吸水量达到15倍以上，成品中胶原蛋白占总蛋白的85％以上。
具体实施方式
现在对本发明作进一步详细的说明。
1、一种胶原蛋白海绵的制造方法，包括以下步骤：
a、选用牛跟腱，用生理盐水于2～10℃环境浸泡，取出洗净后用酒精浸泡消毒，然后用水洗至无味，然后对牛跟腱切片；酒精浓度选用75％。
b、将切片在水中浸泡1～3小时，然后用氯化钙溶液洗涤至切片无血色；
c、去除氯化钙溶液后将切片置于酒精中消毒10～20min；优选15min。
d、倒去酒精，用0.1‰～0.5‰的醋酸洗涤切片至无味，然后用水洗去残留的酸液；
e、将牛跟腱切片放入绞碎机中，加入适量冷注射用水，使牛跟腱切片绞碎，挑出筋膜，用冷注射用水洗涤多次，将水用绢丝挤干；
f、将上述牛跟腱碎片置于合适大小的桶中，以每千克加入10-30L左右的 1％-10％的醋酸，让其充分溶胀；
g、按胃蛋白酶和牛跟腱碎片重量百分百1:10～1:200的比例加入用1％～10％的醋酸溶解的胃蛋白酶溶液，边加入边搅拌均匀，开始消化，然后根据胶原消化液粘度增加醋酸溶液，整个消化过程为48～96小时；
h、将胶原消化液采用抽滤系统进行抽滤去除未消化的杂质；
采用负压抽滤，因为上面开口较大，可以用搅拌棒搅拌以减少堵塞，如果网孔被堵塞可以很容易得将堵塞的地方清理开，抽滤时，操作者则可以很容易看出料液有没有铺满整个过滤网面，发现有的地方没铺满，可以及时用搅拌棒将其均匀铺满。操作更快捷简便。
i、抽滤结束后将滤液用高速冷冻离心机进行离心，去除杂质；
j、用5～15mol/L的NaOH溶液将胶原溶液pH调节到7～9，然后加入NaCl盐析使NaCl终浓度为2～5mol/L，搅拌均匀开始沉淀；
k、待下清液澄清后，静止盐析约2～10小时；
l、取出沉淀，用1％醋酸溶液洗涤，当胶原开始溶胀时停止即可，然后用1％醋酸15～25L进行溶胀，溶胀时间1～3天；
m、将胶原溶液装入透析袋中，每次透析外液的体积是内液体积的4～6倍，每天更换2次透析外液直至胶原pH达到5.0以上。
n、透析结束后将胶原用紫外进行交联，交联时间2～8小时；
o、交联结束后采用低温冷冻干燥机对胶原进行干燥制备出胶原蛋白海绵；
p、将胶原蛋白海绵包装后进行辐照灭菌。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。 本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

Claims (5)

1.一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，包括以下步骤：
a、选用牛跟腱，用生理盐水于2～10℃环境浸泡，取出洗净后用酒精浸泡消毒，然后用水洗至无味，然后对牛跟腱切片；
b、将切片在水中浸泡1～3小时，然后用氯化钙溶液洗涤至切片无血色；
c、去除氯化钙溶液后将切片置于酒精中消毒10～20min；
d、倒去酒精，用0.1‰～0.5‰的醋酸洗涤切片至无味，然后用水洗去残留的酸液；
e、将牛跟腱切片放入绞碎机中，加入适量冷注射用水，使牛跟腱切片绞碎，挑出筋膜，用冷注射用水洗涤多次，将水用绢丝挤干；
f、将上述牛跟腱碎片置于合适大小的桶中，以每千克加入10-30L左右的1％-10％的醋酸，让其充分溶胀；
g、按胃蛋白酶和牛跟腱碎片重量百分百1:10～1:200的比例加入用1％～10％的醋酸溶解的胃蛋白酶溶液，边加入边搅拌均匀，开始消化，然后根据胶原消化液粘度增加醋酸溶液，整个消化过程为48～96小时；
h、将胶原消化液采用抽滤系统进行抽滤去除未消化的杂质；
i、抽滤结束后将滤液用高速冷冻离心机进行离心，去除杂质；
j、用5～15mol/L的NaOH溶液将胶原溶液pH调节到7～9，然后加入NaCl盐析使NaCl终浓度为2～5mol/L，搅拌均匀开始沉淀；
k、待下清液澄清后，静止盐析约2～10小时；
l、取出沉淀，用1％醋酸溶液洗涤，当胶原开始溶胀时停止即可，然后用1％醋酸15～25L进行溶胀，溶胀时间1～3天；
m、将胶原溶液装入透析袋中，每次透析外液的体积是内液体积的4～6倍，每天更换至少1次透析外液直至胶原pH达到5.0以上。
n、透析结束后将胶原用紫外进行交联，交联时间2～8小时；
o、交联结束后采用低温冷冻干燥机对胶原进行干燥制备出胶原蛋白海绵；
p、将胶原蛋白海绵包装后进行辐照灭菌。
2.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在所述的步骤a中选用浓度为75％的酒精进行浸泡消毒。
3.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在所述的步骤c中切片在酒精中消毒15min。
4.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在在所述的步骤g中，消化过程在2～10℃环境下运行。
5.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制造方法，其特征是，在在所述的步骤m中，每天至少2次透析外液。
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Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106701879A (zh) * 2017-03-29 2017-05-24 武汉医佳宝生物材料有限公司 一种提取i型胶原蛋白的方法
CN106946988A (zh) * 2017-04-07 2017-07-14 李毅 一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法
CN107320765A (zh) * 2016-04-29 2017-11-07 深圳兰度生物材料有限公司 一种重组纤维结构胶原蛋白海绵的制备方法
CN107475337A (zh) * 2017-08-18 2017-12-15 合肥丰洁生物科技有限公司 一种从动物皮脂中提取胶原蛋白的方法
CN107913785A (zh) * 2016-10-11 2018-04-17 浙江崇山生物制品有限公司 一种高效动物肌腱粉碎方法
CN108014370A (zh) * 2017-12-12 2018-05-11 吕振木 一种促进脱套伤及撕脱伤皮肤成活的胶原蛋白材料
CN108752465A (zh) * 2018-06-15 2018-11-06 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种胶原溶液的制备方法
CN108853571A (zh) * 2018-07-23 2018-11-23 天津市长江医疗器械有限公司 一种胶原蛋白海绵及其制备工艺
CN108904861A (zh) * 2018-07-23 2018-11-30 天津市长江医疗器械有限公司 胶原蛋白海绵在制备促进伤口愈合药物中的应用及其理化性质检测方法
CN109602943A (zh) * 2018-12-20 2019-04-12 杭州易文赛生物技术有限公司 一种牛腱来源的高纯度胶原蛋白海绵的制备方法
CN112353997A (zh) * 2020-11-27 2021-02-12 杭州协合医疗用品有限公司 一种可吸收胶原蛋白海绵制备方法及应用
CN114748679A (zh) * 2022-03-27 2022-07-15 卢玉华 一种胶原蛋白海绵的制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1915437A (zh) * 2005-08-15 2007-02-21 上海其胜生物制剂有限公司 胶原蛋白海绵的制备工艺
CN102836462A (zh) * 2012-09-20 2012-12-26 绍兴好士德医用品有限公司 一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1915437A (zh) * 2005-08-15 2007-02-21 上海其胜生物制剂有限公司 胶原蛋白海绵的制备工艺
CN102836462A (zh) * 2012-09-20 2012-12-26 绍兴好士德医用品有限公司 一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107320765A (zh) * 2016-04-29 2017-11-07 深圳兰度生物材料有限公司 一种重组纤维结构胶原蛋白海绵的制备方法
CN107913785A (zh) * 2016-10-11 2018-04-17 浙江崇山生物制品有限公司 一种高效动物肌腱粉碎方法
CN106701879A (zh) * 2017-03-29 2017-05-24 武汉医佳宝生物材料有限公司 一种提取i型胶原蛋白的方法
CN106946988A (zh) * 2017-04-07 2017-07-14 李毅 一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法
CN107475337A (zh) * 2017-08-18 2017-12-15 合肥丰洁生物科技有限公司 一种从动物皮脂中提取胶原蛋白的方法
CN108014370A (zh) * 2017-12-12 2018-05-11 吕振木 一种促进脱套伤及撕脱伤皮肤成活的胶原蛋白材料
CN108752465A (zh) * 2018-06-15 2018-11-06 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种胶原溶液的制备方法
CN108853571A (zh) * 2018-07-23 2018-11-23 天津市长江医疗器械有限公司 一种胶原蛋白海绵及其制备工艺
CN108904861A (zh) * 2018-07-23 2018-11-30 天津市长江医疗器械有限公司 胶原蛋白海绵在制备促进伤口愈合药物中的应用及其理化性质检测方法
CN109602943A (zh) * 2018-12-20 2019-04-12 杭州易文赛生物技术有限公司 一种牛腱来源的高纯度胶原蛋白海绵的制备方法
CN112353997A (zh) * 2020-11-27 2021-02-12 杭州协合医疗用品有限公司 一种可吸收胶原蛋白海绵制备方法及应用
CN114748679A (zh) * 2022-03-27 2022-07-15 卢玉华 一种胶原蛋白海绵的制备方法

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