CN102836462A - 一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法，它包括以下步骤：a、胶原蛋白的提取，b、胶原蛋白与壳聚糖的复配，c、胶原蛋白与PLGA得复合，将PLGA立体支架放入模具中，注入胶原溶液使其没过支架，于-20℃冻结，该PLGA立体支架由PLGA溶液经静电纺根据模具的规格制成，将经冻结的模具进行真空冷冻干燥，得到由胶原-壳聚糖和PLGA组成的复合支架。它制备出来的人工皮肤，可以用于各种创面修复，生物相容性好，可替代自体植皮，用途广泛，前景广阔。

Description

一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法

技术领域：

本发明涉及医用材料技术领域，更具体地说涉及一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法。

背景技术：

胶原蛋白是动物体内含量最丰富的蛋白质，它属于不溶性纤维型蛋白质，也是细胞外基质中的一类，胶原蛋白可以从动物中提取不同组织中不同类型的胶原蛋白，其功能和作用也不同。提取胶原蛋白能够溶解的一般是前胶原。胶原蛋白是人体皮肤中的主要成分，皮肤中胶原蛋白占了72％，真皮中80％是胶原蛋白，胶原蛋白在皮肤中构成了一张细密的弹力网，锁住水分，如支架般支撑着皮肤，承托着乳房，它使细胞胞浆丰满、水分充盈，皮肤充满弹性、润泽、细腻、光滑”。胶原 蛋白可使血液凝固，具有凝血功能，用作伤口止血敷料，主要是基于胶原蛋白能够与伤口紧 密结合，渗入新生组织当中，并作为细胞生长时之支架。Ⅰ型胶原蛋白属于序列保守性的蛋白质，在哺乳动物不同种属之间氨基酸种类，数目和排列顺序上基本相同，因此抗原性很低；再通过生化方法切去两端非螺旋性的多肽，进一步降低其抗原性，使通过生化提取胶原蛋白并应用成为可能。

聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证，被正式作为药用辅料收录进美国药典。PLGA可以通过静电纺丝的方法制成一定强度的纱线，经编织成网做成支架纤维，具有生物可降解性、可被人体吸收。

发明内容：

本发明的目的就是针对现有技术之不足，而提供带传感器的轮毂轴承，它制备出来的人工皮肤，可以用于各种创面修复，生物相容性好，可替代自体植皮，用途广泛，前景广阔。

本发明的技术解决措施如下：

一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法，它包括以下步骤：

a、胶原蛋白的提取，取新鲜牛跟腱，去除筋膜，切成1cm～2cm长的小段，倒入氢氧化钠溶液中充分搅拌进行病毒灭活，反应结束用4℃的纯化水充分洗涤至中性；将经预处理的牛跟腱放入组织捣碎机中充分捣碎，经捣碎的牛跟腱放入反应釜中，加入4℃、pH=2的醋酸溶液，按重量计经捣碎的牛跟腱∶醋酸溶液=1:60～80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量为按重量计醋酸溶液的3%～10%，反应24h～48h；

反应结束将胶原溶液稀释至料液比1:150，稀释后的胶原溶液真空抽滤，收集滤液，不滤物进行2次提取，滤液中加入过氧化氢溶液灭酶，将经过灭酶处理的胶原溶液经4000r/min离心，取上清液，将澄清的胶原溶液至于盐析操作台上，用饱和氯化钠溶液盐析，直至氯化钠的终浓度约为5%，经盐析的胶原溶液经高速离心甩干去除多余水分；将经甩干的胶原放入截留分子量为8000-14000Da的透析袋中，于4℃条件下进行透析脱盐直至透析液中无氯离子检出，将透析得到的胶原配制成5mg/ml的溶液；

b、胶原蛋白与壳聚糖的复配，按0.5%的比例将壳聚糖倒入蒸馏水中充分混匀，再按0.5%的浓度加入醋酸充分搅拌摇匀，使壳聚糖溶解，按胶原蛋白：壳聚糖=9:1的比例配制胶原-壳聚糖溶液，按0.1%的比例加入戊二醛溶液进行交联，配制好的溶液于负压条件下除气泡；

c、胶原蛋白与PLGA得复合，将PLGA立体支架放入模具中，注入胶原溶液使其没过支架，于-20℃冻结，该PLGA立体支架由PLGA溶液经静电纺根据模具的规格制成，将经冻结的模具进行真空冷冻干燥，得到由胶原-壳聚糖和PLGA组成的复合支架。

本发明的有益效果在于：

采用PLGA静电纺丝然后制备出纤维支架，再复合胶原蛋白，制备人工皮肤，可以用于各种创面修复，生物相容性好，可替代自体植皮，用途广泛，前景广阔。

具体实施方式：

实施例：一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法，它包括以下步骤：

a、胶原蛋白的提取，取新鲜牛跟腱，去除筋膜，切成1cm～2cm长的小段，倒入氢氧化钠溶液中充分搅拌进行病毒灭活，反应结束用4℃的纯化水充分洗涤至中性；将经预处理的牛跟腱放入组织捣碎机中充分捣碎，经捣碎的牛跟腱放入反应釜中，加入4℃、pH=2的醋酸溶液，按重量计经捣碎的牛跟腱∶醋酸溶液=1:60～80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量为按重量计醋酸溶液的3%～10%，反应24h～48h；

反应结束将胶原溶液稀释至料液比1:150，稀释后的胶原溶液真空抽滤，收集滤液，不滤物进行2次提取，滤液中加入过氧化氢溶液灭酶，将经过灭酶处理的胶原溶液经4000r/min离心，取上清液，将澄清的胶原溶液至于盐析操作台上，用饱和氯化钠溶液盐析，直至氯化钠的终浓度约为5%，经盐析的胶原溶液经高速离心甩干去除多余水分；将经甩干的胶原放入截留分子量为8000-14000Da的透析袋中，于4℃条件下进行透析脱盐直至透析液中无氯离子检出，将透析得到的胶原配制成5mg/ml的溶液；

b、胶原蛋白与壳聚糖的复配，按0.5%的比例将壳聚糖倒入蒸馏水中充分混匀，再按0.5%的浓度加入醋酸充分搅拌摇匀，使壳聚糖溶解，按胶原蛋白：壳聚糖=9:1的比例配制胶原-壳聚糖溶液，按0.1%的比例加入戊二醛溶液进行交联，配制好的溶液于负压条件下除气泡；

c、胶原蛋白与PLGA得复合，将PLGA立体支架放入模具中，注入胶原溶液使其没过支架，于-20℃冻结，该PLGA立体支架由PLGA溶液经静电纺根据模具的规格制成，将经冻结的模具进行真空冷冻干燥，得到由胶原-壳聚糖和PLGA组成的复合支架。

Claims (1)

1.一种胶原蛋白组织工程皮肤的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

a、胶原蛋白的提取，取新鲜牛跟腱，去除筋膜，切成1cm～2cm长的小段，倒入氢氧化钠溶液中充分搅拌进行病毒灭活，反应结束用4℃的纯化水充分洗涤至中性；将经预处理的牛跟腱放入组织捣碎机中充分捣碎，经捣碎的牛跟腱放入反应釜中，加入4℃、pH=2的醋酸溶液，按重量计经捣碎的牛跟腱∶醋酸溶液=1:60～80，再添加胃蛋白酶，胃蛋白酶的添加量为按重量计醋酸溶液的3%～10%，反应24h～48h；

反应结束将胶原溶液稀释至料液比1:150，稀释后的胶原溶液真空抽滤，收集滤液，不滤物进行2次提取，滤液中加入过氧化氢溶液灭酶，将经过灭酶处理的胶原溶液经4000r/min离心，取上清液，将澄清的胶原溶液至于盐析操作台上，用饱和氯化钠溶液盐析，直至氯化钠的终浓度约为5%，经盐析的胶原溶液经高速离心甩干去除多余水分；将经甩干的胶原放入截留分子量为8000-14000Da的透析袋中，于4℃条件下进行透析脱盐直至透析液中无氯离子检出，将透析得到的胶原配制成5mg/ml的溶液；

b、胶原蛋白与壳聚糖的复配，按0.5%的比例将壳聚糖倒入蒸馏水中充分混匀，再按0.5%的浓度加入醋酸充分搅拌摇匀，使壳聚糖溶解，按胶原蛋白：壳聚糖=9:1的比例配制胶原-壳聚糖溶液，按0.1%的比例加入戊二醛溶液进行交联，配制好的溶液于负压条件下除气泡；

c、胶原蛋白与PLGA得复合，将PLGA立体支架放入模具中，注入胶原溶液使其没过支架，于-20℃冻结，该PLGA立体支架由PLGA溶液经静电纺根据模具的规格制成，将经冻结的模具进行真空冷冻干燥，得到由胶原-壳聚糖和PLGA组成的复合支架。