CN104017230A - 一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，包括：将聚氨酯溶于溶剂中，搅拌溶解，得到聚氨酯溶液；将角蛋白溶于溶剂中，搅拌溶解，得到角蛋白溶液；将聚氨酯溶液与角蛋白溶液按质量比为95:5-5:95混合，搅拌混匀，得到聚氨酯/角蛋白混合溶液，脱气处理后，浇铸到平板上，干燥，即得。本发明得到的膜材料具有力学强度高、生物相容性好、吸水性高、透气性好等优点，可用于创伤敷料、薄膜、衬垫、胶带等应用。
Description
技术领域
本发明属于复合膜的制备领域，特别涉及一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法。
背景技术
角蛋白是一种不溶性的纤维状动物蛋白质，是外胚层细胞的结构蛋白，广泛存在于动物皮肤及皮肤附属物中，如毛发、蹄、壳、爪、角、鳞片等。近几年的大量研究表明，角蛋白是一种生物相容性好且不被机体免疫排斥的优质生物医用材料，具有广阔的应用前景。最为突出的是，经过对羊毛等来源的角蛋白进行氨基酸序列测定发现，其含有同Arg-Gly-Asp(RGD)三肽序列。此三肽序列被公认为是细胞外基质中实现细胞结合的有效结合位点，有促进细胞吸附的功能。因此，国内外已开展大量关于角蛋白基生物材料的基础研究及动物实验研究，并在创伤敷料[Wound Repair and Regeneration,2012,20:236-242]、人造骨[Journal of Bioactive and Compatible Polymers,2013,28:141-153]以及神经修复[Biomaterials34(2013)5907-5914]等方面都取得了良好效果，已有部分产品应用于临床。但现有研究证明，由于角蛋白的分子量较低，单一的角蛋白材料制成的膜材料通常较脆，且力学强度不高，使其应用性受到限制。因此，目前，大多数的角蛋白基生物材料往往采用角蛋白与天然高分子或人工高分子复合，这样既可以保持以改善单一角蛋白力学性能较差的不足，如丝素蛋白[Biomacromolecules,2008,9,1299–1305]、PVA[Advances in MaterialsScience and Engineering,2014,Article ID163678]、PLGA[Journal of Bioactive and CompatiblePolymers,2013,28:141-153]、PLLA[Biomed.Mater.2013,8:1-9]等。医用级聚氨酯是一种商业化的合成高分子材料，具有柔韧性好、力学强度高、透气防水等优点，目前已被广泛应用于伤口护理、心脏科、整形外科、血管科等领域。然而，聚氨酯材料本身无生物活性，缺少细胞识别信号位点，不利于组织细胞的粘附和生长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，本发明采用溶剂蒸发法制备一种基于聚氨酯和角蛋白两种材料的复合膜材料，该复合材料兼具聚氨酯及角蛋白两者的性能优势，具备力学强度高、生物相容性好等优点，改善了单一角蛋白和聚氨酯材料的应用性。
本发明的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，包括：
(1)将聚氨酯溶于溶剂中，搅拌溶解，得到聚氨酯溶液；
(2)将角蛋白溶于溶剂中，搅拌溶解，得到角蛋白溶液；
(3)将聚氨酯溶液与角蛋白溶液按质量比为95:5-5:95混合，搅拌混匀，得到聚氨酯/角蛋白混合溶液，脱气处理后，浇铸到平板上，干燥，得到聚氨酯-角蛋白复合膜。
所述步骤(1)中聚氨酯为Tecothane TM、carbomers、Techphilic TM、Corthane TM、Chronoflex AR、Chronoflex CL、Elast Eon、Cardiomat、Avcothane中的一种或几种。
所述步骤(1)、(2)中溶剂为六氟异丙醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氢呋喃中的一种或几种。
所述溶剂优选为六氟异丙醇。
所述步骤(1)中聚氨酯溶液的浓度为5-20mg/ml。
所述步骤(2)中角蛋白的分子量为3-300kDa；角蛋白溶液的浓度为10-20mg/ml。
所述的角蛋白可以是采用目前已公开报道的各种方法提取制备的角蛋白，包括还原法，氧化法以及水解法等，也可以是上述角蛋白的衍生物，如羧甲基角蛋白。
所述的角蛋白可以从人发、羊毛、家禽羽毛、牛毛等人或动物毛发提取而得，也可以是来源于其他已报道的动物体。
所述步骤(3)中聚氨酯/角蛋白混合溶液可以加入可以溶解于该混合溶液体系的其它试剂，包括药物、无机或有机抗菌剂等。
所述步骤(3)中平板为疏水性或亲水性平板。
所述步骤(3)中平板为Teflon、聚乙烯、聚苯乙烯、硅胶、玻璃平板中的一种。
所述步骤(3)中干燥温度为20-50℃，干燥时间为12-48h。
有益效果
本发明采用溶剂蒸发法制备一种基于聚氨酯和角蛋白两种材料的复合膜材料，该复合材料兼具聚氨酯及角蛋白两者的性能优势，具备聚氨酯材料的高力学强度与角蛋白材料的良好生物相容性等优点，拓宽了单一材料的应用性，可更好地用于创伤敷料、薄膜、衬垫、胶带等领域。同时，溶剂蒸发法制备过程简单，便于实现规模化生产，是一种极具潜力的工业化生产方法。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
以羊毛为原料采用还原法提取角蛋白，具体方法为：称取5g羊毛，以石油醚为溶剂采用索氏抽提法去除羊毛表面油脂，然后用乙醇清洗羊毛，风干。将上述羊毛加入100ml、1mol/l的巯基乙醇中，用NaOH调节pH约10.0，然后在40℃条件反应12h。反应结束后，将反应液收集(记为滤液1)，同时将反应剩余的羊毛固体过滤收集，继续用100ml、0.1mol/l的Tris碱液在40℃条件下处理2h，然后过滤除去固体，收集滤液(记为滤液2)。.将滤液1和2合并，于6000rpm离心5分钟，然后用截留分子量40，000的透析袋透析36h，最后将透析液加入液氮进行速冻处理，然后置入冷冻干燥机干燥得到干态的角蛋白粉末。
聚氨酯/角蛋白复合膜的制备：将质量为0.15g的聚氨酯溶于10ml六氟异丙醇，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为15mg/ml的聚氨酯溶液。将0.2g角蛋白固体溶于10ml六氟异丙醇，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为20mg/ml的角蛋白溶液。将上述聚氨酯与角蛋白溶液按照质量比50：50的比例进行混合，磁力搅拌至混合均匀，然后对该溶液进行减压脱气处理。将上述所得聚氨酯/角蛋白溶液浇铸到聚苯乙烯平板上，于50℃条件下干燥24h，得到膜状聚氨酯-角蛋白复合膜。
实施例2
以人发为原料采用还原法提取角蛋白，具体方法为：称取5g人发，以石油醚为溶剂采用索氏抽提法去除人发表面油脂，然后用乙醇清洗人发，风干。将上述人发加入200ml水与5g焦亚硫酸钠混合的溶液中，用NaOH调节pH约10.0，然后在60℃条件反应5h。反应结束后，将反应液收集(记为滤液1)，同时将反应剩余的人发固体过滤收集，继续用100ml、0.1mol/l的Tris碱液在40℃条件下处理2h，然后过滤除去固体，收集滤液(记为滤液2)。.将滤液1和2合并，于6000rpm离心5分钟，然后用截留分子量8，000的透析袋透析36h，最后将透析液加入液氮进行速冻处理，然后置入冷冻干燥机干燥得到干态的角蛋白粉末。
聚氨酯/角蛋白复合膜的制备：将质量为0.2g的聚氨酯溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为20mg/ml的聚氨酯溶液。将0.15g角蛋白固体溶于六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为15mg/ml的角蛋白溶液。将上述聚氨酯与角蛋白溶液按照质量比20：80的比例进行混合，磁力搅拌至混合均匀。将上述所得聚氨酯/角蛋白溶液浇铸到聚乙烯平板上，于50℃条件下干燥36h，得到膜状聚氨酯-角蛋白复合膜。
实施例3
以羊毛为原料采用氧化法提取角蛋白，具体方法为：称取5g羊毛，以石油醚为溶剂采用索氏抽提法去除羊毛表面油脂，然后用乙醇清洗羊毛，风干。向上述羊毛中加入100ml去离子水和5ml、30％的双氧水，然后在100℃条件反应2h。反应结束后，将反应液收集(记为滤液1)，同时将反应剩余的羊毛固体过滤收集，继续用100ml、0.1mol/l的Tris碱液在40℃条件下处理2h，然后过滤除去固体，收集滤液(记为滤液2)。.将滤液1和2合并，于6000rpm离心5分钟，然后用截留分子量8，000的透析袋透析36h，最后将透析液加入液氮进行速冻处理，然后置入冷冻干燥机干燥得到干态的角蛋白粉末。
聚氨酯/角蛋白复合膜的制备：将质量为0.05g的聚氨酯溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为5mg/ml的聚氨酯溶液。将0.1g角蛋白固体溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为10mg/ml的角蛋白溶液。将上述聚氨酯与角蛋白溶液按照质量比95：5的比例进行混合，磁力搅拌至混合均匀。将上述所得聚氨酯/角蛋白溶液浇铸到玻璃平板上，于50℃条件下干燥12h，得到膜状聚氨酯-角蛋白复合膜。
实施例4
以羊毛为原料采用氧化法提取角蛋白，具体方法为：称取5g羊毛，以石油醚为溶剂采用索氏抽提法去除羊毛表面油脂，然后用乙醇清洗羊毛，风干。向上述羊毛中加入100ml、4％的过氧乙酸，然后在60℃条件反应5h。反应结束后，将反应液收集(记为滤液1)，同时将反应剩余的羊毛固体过滤收集，继续用100ml、0.1mol/l的Tris碱液在40℃条件下处理2h，然后过滤除去固体，收集滤液(记为滤液2)。.将滤液1和2合并，于6000rpm离心5分钟，然后用截留分子量8，000的透析袋透析36h，最后将透析液加入液氮进行速冻处理，然后置入冷冻干燥机干燥得到干态的角蛋白粉末。
聚氨酯/角蛋白复合膜的制备：将质量为0.15g的聚氨酯溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为15mg/ml的聚氨酯溶液。将0.2g角蛋白固体溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为20mg/ml的角蛋白溶液。将上述聚氨酯与角蛋白溶液按照质量比5：95的比例进行混合，磁力搅拌至混合均匀。将上述所得聚氨酯/角蛋白溶液浇铸到聚苯乙烯平板上，于50℃条件下干燥12h，得到膜状聚氨酯-角蛋白复合膜。
实施例5
以羊毛为原料采用还原法提取角蛋白，并对角蛋白进行衍生化改性。具体方法为：称取5g羊毛，以石油醚为溶剂采用索氏抽提法去除羊毛表面油脂，然后用乙醇清洗羊毛，风干。将上述羊毛加入100ml、1mol/l的巯基乙醇中，用NaOH调节pH约10.0，然后在40℃条件反应12h。然后，用醋酸将上述反应液pH调整到7.5，向其中加入100ml、0.33mol/l的NaBrO3溶液，在室温条件下继续搅拌24h。反应结束后，过滤除去固体物，将滤液收集并用截留分子量8，000的透析袋透析36h，最后将透析液加入液氮进行速冻处理，然后置入冷冻干燥机干燥得到干态的羧甲基角蛋白粉末。
聚氨酯/角蛋白复合膜的制备：将质量为0.15g的聚氨酯溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为15mg/ml的聚氨酯溶液。将0.1g羧甲基角蛋白固体溶于10ml六氟异丙醇中，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为10mg/ml的羧甲基角蛋白溶液。将上述聚氨酯与角蛋白溶液按照质量比5：95的比例进行混合，磁力搅拌至混合均匀。将上述所得聚氨酯/角蛋白溶液浇铸到聚苯乙烯平板上，于50℃条件下干燥24h，得到膜状聚氨酯-角蛋白复合膜。
实施例6
以人发为原料采用还原法提取角蛋白，并对角蛋白进行衍生化改性。具体方法为：称取5g人发，以石油醚为溶剂采用索氏抽提法去除人发表面油脂，然后用乙醇清洗人发，风干。将上述人发加入200ml水与5g焦亚硫酸钠混合的溶液中，用NaOH调节pH约10.0，然后在60℃条件反应5h。然后，用醋酸将上述反应液pH调整到8.5，向其中加入8.0g碘乙酸，在室温条件下继续搅拌6h。反应结束后，过滤除去固体物，将滤液收集并用截留分子量8，000的透析袋透析36h，最后将透析液加入液氮进行速冻处理，然后置入冷冻干燥机干燥得到干态的羧甲基角蛋白粉末。
聚氨酯/角蛋白复合膜的制备：将质量为0.15g的聚氨酯溶于10ml六氟异丙醇，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为15mg/ml的聚氨酯溶液。将0.2g羧甲基角蛋白固体溶于10ml六氟异丙醇，室温下进行磁力搅拌至完全溶解，得到浓度为20mg/ml的羧甲基角蛋白溶液。将上述聚氨酯与角蛋白溶液按照质量比50：50的比例进行混合，磁力搅拌至混合均匀，然后对该溶液进行减压脱气处理。将上述所得聚氨酯/角蛋白溶液浇铸到聚苯乙烯平板上，于50℃条件下干燥24h，得到膜状聚氨酯-角蛋白复合膜。
实施例7
按照实施例1中所述的制备方法，以TechphilicTM聚氨酯材料与羊毛角蛋白混合制备的聚氨酯/角蛋白复合膜材料，经分析测定，复合膜材料在干燥状态下的断裂强度为4.8MPa，断裂伸长率为80％，吸水率为850％。以大鼠成纤维细胞L929及血管内皮细胞为细胞模型，采用扫描电子显微镜观察细胞在材料上的黏附形态，并通过MTT法对细胞的增殖行为进行评价，结果表明，成纤维细胞及内皮细胞在聚氨酯/角蛋白复合膜材料上均表现出良好的黏附形态和增殖行为，与单一的TechphilicTM聚氨酯制备的膜材料相比具有显著性差异。按照实施例1中所述的制备方法，以单一的角蛋白制备的膜材料在干燥状态下脆性强、易破碎。
Claims (10)
1.一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，包括：
(1)将聚氨酯溶于溶剂中，搅拌溶解，得到聚氨酯溶液；
(2)将角蛋白溶于溶剂中，搅拌溶解，得到角蛋白溶液；
(3)将聚氨酯溶液与角蛋白溶液按质量比为95:5-5:95混合，搅拌混匀，得到聚氨酯/角蛋白混合溶液，脱气处理后，浇铸到平板上，干燥，得到聚氨酯-角蛋白复合膜。
2.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中聚氨酯为Tecothane TM、carbomers、Techphilic TM、Corthane TM、Chronoflex AR、Chronoflex CL、Elast Eon、Cardiomat、Avcothane中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)、(2)中溶剂为六氟异丙醇、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氢呋喃中的一种或几种。
4.根据权利要求3所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述溶剂为六氟异丙醇。
5.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中聚氨酯溶液的浓度为5-20mg/ml。
6.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中角蛋白的分子量为3-300kDa；角蛋白溶液的浓度为10-20mg/ml。
7.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中聚氨酯/角蛋白混合溶液加入药物、抗菌剂中的一种或几种。
8.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中平板为疏水性或亲水性平板。
9.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中平板为Teflon、聚乙烯、聚苯乙烯、硅胶、玻璃平板中的一种。
10.根据权利要求1所述的一种聚氨酯-角蛋白复合膜的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中干燥温度为20-50℃，干燥时间为12-48h。
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