CN106806934A - 一种抗菌修复功能敷料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种新型抗菌修复功能敷料及其制备方法，所述新型抗菌修复功能敷料由壳聚糖和胶原蛋白通过交联剂交联复合到细菌纤维素膜上形成。所述壳聚糖与细菌纤维素膜的质量比为0.001～5:100；所述胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为0.5～20:100；所述壳聚糖与胶原蛋白的质量比为0.001～5：20～0.5，所述胶原蛋白为小分子量胶原蛋白和大分子量胶原蛋白按质量1:1的混合物。本发明所述抗菌修复功能敷料具有很好的生物相容性，细胞亲和性及力学性能，并且有着优异的透水、透气或引流、吸湿效果，具有抗菌消炎，减少创面感染，快速减轻伤口疼痛，在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。同时本敷料可随表皮再生而自然脱落，减少治疗时间与成本和创面感染几率等特性。

Description

一种抗菌修复功能敷料及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物医用材料技术领域，具体涉及一种抗菌修复功能敷料及其制备方法。

背景技术

随着现代科学技术的高速发展，医用敷料的研究取得了飞速发展。各种新型医用敷料不断出现，性能也越来越优良。但医用敷料是暂时覆盖烧伤、溃疡、创伤等伤口的一类临床医疗用品，其基本作用是控制伤口的渗出液及保护伤口免受细菌及尘粒等外源污染，新型高端医用敷料还兼具了促进伤口皮肤机能恢复的功能。我国医用敷料行业主要以中低档产品为主，大部分企业规模小，研发投入少，产品科技能力弱，以致在高档产品缺乏竞争力，而中低档产品市场竞争又过于激烈。目前，国内医用敷料行业市场竞争更加严峻，一方面低档医用敷料是劳动密集型产品，科技含量低决定它不可能有高的附加价值；人民币的持续坚挺，出口利润也随之减少；另一方面在国内低端产品领域竞争激烈，单凭传统医用敷料中的单一产品已经不能让企业立于不败之地，这些使得新型医用敷料的研发以及高端产品的开发显得更加迫切。

细菌纤维素是一种通过微生物发酵合成的天然生物高聚物，由β-D-葡萄糖通过β-1,4-糖苷键连接而成的一种无分支的大分子直链聚合物。具有生物活性、生物可降解性、生物适应性，以及高结晶度、高持水性、超细纳米纤维网络、高抗张强度和弹性模量等许多独特的物理、化学和机械性能，并且细菌纤维素采用微生物发酵合成，其性能和形状的可调控，生产过程绿色环保，成本低，产率高。因此在伤口敷料、人工皮肤、药物缓释载体、组织工程支架材料等医用领域有广阔的应用前景。

现有技术公开了多种以细菌纤维素膜作为医用敷料的技术方案：

如中国专利ZL201410226726.7公开了一种复合医用敷料，其包括：细菌纤维素膜、胶原蛋白和交联剂，所述胶原蛋白通过所述交联剂交联到所述细菌纤维素膜上；所述制备方法包括：将纯化后的细菌纤维素膜加入含有交联剂的胶原蛋白溶液中，使细菌纤维素膜与胶原蛋白进行交联反应，制备得到复合医用敷料，该申请通过使用交联剂提高了胶原蛋白在细菌纤维素膜上的负载量及负载的稳定性，使所制备的复合医用敷料的性能更加持久稳定。

然而，上述方案主要存在以下几点问题，如：

一、所得敷料产品功能单一，未能形成复合型多功能医用敷料，应用效果欠佳，在医疗使用过程中难以满足不同类型伤口的需要。

二、在细菌纤维素膜处理过程中，内毒素含量偏高，批次之间重现性较差，稳定性不足。

三、在功能性材料胶原蛋白的种类、功能和分子量细化的选择上存在缺陷。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型抗菌修复功能敷料，用以解决现有敷料所存在的敷料产品功能单一，未能形成复合型多功能医用敷料的问题；功能性材料胶原蛋白的种类、功能和分子量细化的选择上的缺陷；细菌纤维素膜纯化步骤中内毒素偏高的问题；解决现有技术未能获得理想的复合型多功能医用敷料的技术问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种新型抗菌修复功能敷料，由壳聚糖和胶原蛋白通过交联法复合到细菌纤维素膜上形成。

本发明所述的新型抗菌修复功能敷料，将壳聚糖和胶原蛋白通过交联法复合到细菌纤维素膜上，使得所述新型抗菌修复功能敷料能够抑制和杀死伤口修复期间的微生物感染，促进止血，吸收伤口渗出物，并能补充伤口愈合期间缺失的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白，促进表皮细胞的增值和分化，促进受伤部位皮肤的再生，从而更好地促进伤口的愈合，尽早恢复皮肤机能。

本发明所述的敷料中，所述壳聚糖的分子量为1000～40万之间；壳聚糖分子具有良好的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性。壳聚糖是甲壳素脱N-乙酰基的产物，其分子结构中含有活泼的羟基和氨基，能够在特定的条件下，壳聚糖能发生水解、烷基化、酰基化、羧甲基化、磺化、硝化、卤化、氧化、还原、缩合和络合等化学反应，可生成各种具有不同性能的壳聚糖衍生物，研究表明，壳聚糖及其衍生物具有良好的止血、抗炎、杀菌功能，且其杀菌消炎明显高效，0.01％浓度的壳聚糖溶液的抑菌率能达到99％以上，尤其是对金黄色葡萄球菌。其杀菌机理目前认为有三种：一是由于壳聚糖的多聚阳离子，易于真菌细胞表面带负电荷的基团作用，从而改变病原菌细胞膜的流动性和通透性；二是干扰DNA的复制与转录；三是阻断病原菌代谢。

本发明所采用的胶原蛋白为从哺乳动物中提取的大分子胶原蛋白和鱼类中提取的小分子胶原蛋白，其中哺乳动物中提取的大分子胶原蛋白的分子结构和人类的大体一致，其包含17中氨基酸，而尤以人体所不能自主合成的羟脯氨酸含量最高，其中牛皮类胶原蛋白中的脯氨酸和羟脯氨酸的含量高达11.3-12.6％；而且吸收好,分子量为1万～30万道尔顿长度之间。

而从鱼类中提取的小分子胶原蛋白富含19种氨基酸，分子量在1000～5000道尔顿长度之间，其中Ⅰ型胶原的含量颇高。具有很高的消化吸收性，在水溶液中的热稳定性极好，与人体皮肤有极好的亲和性，能够很好的发挥其渗透、保湿、修复等功能，另外深海鱼类提取的胶原蛋白含有独特的抗冻蛋白，深受女性的青睐。其在生产过程中，运用多种生物酵素联合定向酶剪切控制分子量，并采用生物酶定向酶技术进行水解制得的，保持了胶原蛋白的分子结构和生物活性。

本发明采用1:1的小分子量胶原蛋白和大分子量胶原蛋白作为胶原蛋白原料，比例合理，可有效的解决单一胶原蛋白在使用时功能缺失，互补互惠，起到促进伤口愈合，补充伤口修复过程中所需要的各种蛋白，适用于轻中度炎症较轻痤疮、痤疮愈后早期色素沉着、表浅性疤痕的治疗；烧烫伤愈合期的辅助治疗；皮肤干涩、暗沉、疤痕的修复；在创面愈合期有减轻色素沉着和促进创面愈合的作用。

本发明所述的大、小分子胶原蛋白具体可购自有相关资质的厂家，如湖北瑞邦生物科技有限公司、厦门赛庚生物科技有限公司等

优选地，所述壳聚糖与细菌纤维素膜的质量比为0.001～5:100；所述胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为0.5～20:100；更优选所述壳聚糖与细菌纤维素的质量比为0.01～3：100，所述胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为5～15:100；,在上述用量范围内，既可完全确保产品的功能性，又能使生产过程相对容易，成本降低。

本发明所述交联剂选自乙酸酐，京尼平或N,N-亚甲基双丙烯酰酯胺，采用上述交联剂有助于壳聚糖和胶原蛋白与细菌纤维素膜牢固结合，所述交联剂的用量以能够将壳聚糖及胶原蛋白复合交联至细菌纤维素膜上为准；为不造成交联剂的浪费和不能使壳聚糖和胶原蛋白充分结合，合适的交联剂与细菌纤维素膜的质量比为0.1～2.0:100。

本发明所述的细菌纤维素膜是由无色杆菌属、根瘤菌属、假单胞菌属、气杆菌属、固氮菌属、八叠球菌属、醋杆菌属、产碱菌属、土壤杆菌属中的某一种或几种经发酵产生的具有三维多孔网络结构的细菌纤维素制备得到的，可根据需要制得不用规格的几何产品。更具体而言，所述的细菌纤维素膜的参数信息为：尺寸为：长35±2cm，宽25±2cm，厚0.5mm～5mm；从结构上看，组成BC的单元—原微纤维(直径为1.5nm)是由若干个β-1，4-葡聚糖结合而成，此原微纤维是一种三重螺旋结构，这些原微纤维聚集形成微纤维(3～6nm)，微纤维进一步聚集成带状结构的束状组装纤维(40～60nm，与胶原纤维束尺寸相当)，其纤维素链的装配过程是一个显著的动力学过程，所得到的孔隙率和孔径等能在一定范围内调控，具体结构图参照图2(对比植物纤维的电镜照片见图1)。本发明所使用的细菌纤维素为市售的已知产品，可购自海南文昌辉博食品有限公司、海南文昌椰林食品有限公司、海南亿德食品有限公司等。此类细菌纤维素膜有利于科研实验和生产制造过程。

本发明同时提供了一种新型抗菌修复功能敷料的制备方法，所述制备方法包括：

步骤一：将细菌纤维素膜进行预处理和纯化处理；

步骤二：配制含有0.001％～5.0％(m/v)壳聚糖和0.5％～20％(m/v)胶原蛋白的混合溶液，优选配制含有0.01％～3％(m/v)壳聚糖和5％～15％(m/v)胶原蛋白的混合溶液；

步骤三：在温度20℃～60℃下，将步骤一中纯化后的细菌纤维素膜加入到步骤二所述混合溶液中，并加入交联剂进行复合，所述混合溶液中壳聚糖与细菌纤维素膜的质量比为0.001～5.0:100；所述混合溶液中胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为0.5～20:100，复合时间为0.5～4小时；

步骤四：完成交联复合后的细菌纤维素膜经简单沥水、覆膜、切割后包装封口，进行高能射线辐照灭菌，即得。

优选地，所述的预处理为：用蒸馏水或纯化水对新鲜的细菌纤维素膜清洗2～4次，每次挤水40～60％，以充分除去细菌纤维素膜表面杂质；

所述纯化处理为：将预处理后的细菌纤维素膜称重并估算体积(按挤水前体积计算，膜密度≈1g/ml)，投入到2～3倍于细菌纤维素膜体积的0.05mol/L～5mol/L的碱液中，加热升温并不断搅拌，控制温度50℃～100℃，进行纯化处理1～36小时；完成后，将细菌纤维素膜用蒸馏水或纯化水反复挤水冲洗，直至将其pH值洗涤至5～7之间，并通臭氧0.5～8小时，臭氧浓度为0.3～2mg/L，通臭氧结束后，搅拌使臭氧充分分解，备用。

本发明在细菌纤维素纯化步骤中，将洗涤PH合格的细菌纤维素膜通一定浓度和时间的臭氧，能分解残留下来的细胞壁和脂质体，彻底降低产品的内毒素。本发明中优选通臭氧时间为1～4小时，臭氧浓度1mg/L。

本发明通过对预处理后的细菌纤维素膜进行纯化，能够稳定得控制细菌纤维素膜内的细菌内毒素的含量低于0.0625EU/ml。

优选地，所述碱液为浓度为0.05mol/L～5mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，优选浓度为1mol/L～2mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，在此浓度下，去除细菌内毒素所需时间较短，一般为2h～3h，且碱液的浓度中等，操作时相对比较安全，特别适用于规模化生产。

优选地，步骤一中：碱处理时温度为90～95℃，碱处理时间为2小时～3小时。

优选地，步骤二中，在配制壳聚糖和胶原蛋白混合溶液时，先配置胶原蛋白溶液，待胶原蛋白完全溶解后用超滤设备过滤，再加壳聚糖至完全溶清。

具体可采用如下技术方案：称取配方量的小分子胶原蛋白和大分子量胶原蛋白于容器中，加入已量取好的的蒸馏水，搅拌溶解完全后，连接超滤装置过滤，将滤液收集于另一干燥洁净的容器内。然后将称量好的壳聚糖边搅拌边缓慢加入溶液中，并加入适量的冰醋酸，控制PH为5.0～5.5，充分溶解直至完全溶清，密封备用。

其中，优选控制所述混合溶液中含有0.01％～3％(m/v)壳聚糖和5％～15％(m/v)胶原蛋白，以实现更理想的复合效果。

优选地，所述步骤三中交联复合可采用物理交联复合法或化学交联复合法(复合效果更理想)；

优选采用如下化学交联复合法：将纯化后细菌纤维素膜置于盛有2～4倍细菌纤维素膜体积的所述复合溶液以及添加浓度为0.2～1％交联剂的反应罐内,控制温度为20℃～60℃，设置时间0.5h～4h,每隔15分钟搅拌一次,使其细菌纤维素在交联剂的作用下与混合溶液快速复合；所述交联剂选自乙酸酐，京尼平或N,N-亚甲基双丙烯酰酯胺，优选三者的添加浓度依次为0.5％，1％和0.2％。

采用上述化学交联复合法能够将壳聚糖和胶原蛋白理想地复合至细菌纤维素膜上(使其壳聚糖和胶原蛋白溶液渗透到了细菌纤维素发达的网络结构上)，经检测，本发明所述的新型抗菌修复功能敷料中，壳聚糖含量为总重的0.0008％～4.85％，胶原蛋白的含量为总重的0.45％-19.5％。

本发明所述的物理交联法为本领域常规方法，本发明对此不作特别限定。

优选地，步骤四所述高能射线辐照灭菌采用γ-射线、电子束、X光或紫外线中的一种，优选γ-射线或电子束；更优选辐照剂量为10KGy～40Kgy。

本发明同时保护上述制备方法所制备得到的特定新型抗菌修复功能敷料。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：

1.加入壳聚糖能使产品具有抗菌杀菌、消炎等功能，降低伤口愈合过程中感染几率，快速止血功能，壳聚糖是自然界中唯一的阳离子碱性多糖，与红细胞表面的阴离子作用，产生红细胞聚集，通过壳聚糖上氨基与细胞膜上脂质的吸附达到止血目的。加入壳聚糖能抑制成纤细胞的合成，提高细胞自身胶原蛋白的生成，减少疤痕的生成，另外壳聚糖还有吸湿保湿性，镇痛等功能；加入混合胶原蛋白能够补充伤口愈合期间缺失的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白。从而更好地促进伤口的愈合，尽早恢复皮肤机能。

2.本发明利用细菌纤维素具有独特的结构与性质，制备出具有优异的生物相容性和皮肤修复功能的新型抗菌修复功敷料，且其含有的壳聚糖含量和胶原蛋白含量是可控制的。

3.本发明采用独特的化学交联复合方法所制备的新型抗菌修复功能敷料，克服了现有传统敷料产品存在的透水、透气、引流、吸湿效果差、产品强度不足的问题，为壳聚糖和胶原蛋白在烧烫伤创面护理、医疗整形美容提供了新方法，并且细胞亲和性好，愈合时间短，效果好。

4.本发明的制备过程简单易操作，工业化生产成本低，工艺环保、成熟稳定，适合于各类功能敷料的工业生产，可用于组织引导生长膜、软组织补片、促皮肤愈合伤口敷料、组织工程皮肤及保健面膜等领域。

附图说明

图1为植物纤维结构电镜照片；

图2为本发明所述细菌纤维素结构电镜照片。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

本实施例提供了一种抗菌修复功能敷料，制备要求：规格：5cm×5cm；数量：100片

制备步骤：

步骤一：细菌纤维素膜的纯化：选取新鲜的细菌纤维素膜10大片，放于烧杯中用蒸馏水清洗三次，每次挤水约70％，除去细菌纤维素膜表面杂质，备用。配制6L 1mol/L的NaOH溶液，将上述溶液倒入装有细菌纤维素膜的烧杯中，开始加热升温并不断搅拌。控制温度95℃，计时2小时。

完成后，将细菌纤维素膜用蒸馏水反复挤水冲洗，直至将PH洗涤至5～7之间，并通臭氧1小时，臭氧浓度为1.5mg/L；通臭氧结束后，搅拌计时2小时，合格后将膜挤水40％～60％封口待用。

步骤二：壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的制备:按照2倍于细菌纤维素膜体积的壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的比例计算配制上述溶液，胶原蛋白浓度为5％和壳聚糖的浓度为0.1％，配制过程如下：称取100g小分子胶原蛋白和100g大分子量胶原蛋白于大烧杯中，加入已量取好的的蒸馏水4000ml，搅拌溶解完全后，连接超滤装置过滤，将滤液收集于另一干燥洁净的容器内。然后将称量好的4g壳聚糖加入溶液中，加入适量的冰醋酸，充分搅拌直至完全溶清，密封备用。

步骤三：细菌纤维素膜与壳聚糖胶原蛋白混合溶液的复合：将步骤一中纯化的细菌纤维素膜，加入到步骤二已配制好的混合溶液中，加入交联剂京尼平，使得其浓度为1％，室温下复合4小时，并每隔15分钟搅拌一次。

步骤四：复合产品的包装及灭菌：复合完成的膜放入自动化生产设备上进行简单挤水、两面覆盖CPP膜、调整切刀为5cm×5cm，开始切割。切割后的产品转入铝箔袋内，包装封口。完成包装后进行钴60辐照灭菌，辐照灭菌剂量为15KGy(1Gy＝1J/kg)。

注：表中含量为胶原蛋白或壳聚糖与产品质量比，即胶原蛋白或壳聚糖与细菌纤维素膜的质量比。单位：％。

负载率＝(实测含量/理论含量)×100％

以下实例相同，不再表述。

实施例2

本实施例提供了一种抗菌修复功能敷料，制备要求：规格：10cm×15cm；数量：100片

制备步骤：

步骤一：细菌纤维素膜的纯化：选取新鲜的细菌纤维素膜25大片，放于不锈钢桶中用纯化水清洗三次，每次挤水约70％，除去细菌纤维素膜表面杂质，备用。配制12L 2mol/L的KOH溶液，将上述溶液倒入装有细菌纤维素膜的不锈钢桶中，开始加热升温并不断搅拌。控制温度70℃，计时24小时。

完成后，将细菌纤维素膜用纯化水反复挤水冲洗，直至将PH洗涤至5～7之间，并通臭氧2小时，臭氧浓度为0.5mg/L；通臭氧结束后，搅拌计时2小时，合格后将膜挤水40％～60％封口待用。

步骤二：壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的制备:按照2倍于细菌纤维素膜体积的壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的比例计算配制上述溶液，胶原蛋白浓度为10％和壳聚糖的浓度为0.05％，配制过程如下：称取500g小分子胶原蛋白和500g大分子量胶原蛋白于大烧杯中，加入已量取好的的蒸馏水10L，搅拌溶解完全后，连接超滤装置过滤，将滤液收集于另一干燥洁净的容器内。然后将称量好的5g壳聚糖加入溶液中，加入适量的冰醋酸，充分搅拌直至完全溶清，密封备用。

步骤三：细菌纤维素膜与壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的复合：将步骤一中纯化的细菌纤维素膜，加入到步骤二已配制好的混合溶液中，加入交联剂乙酸酐，使得其浓度为0.5％，40℃下复合2小时，并每隔15分钟搅拌一次。

步骤四：复合产品的包装及灭菌：复合完成的膜放入自动化生产设备上进行简单挤水、两面覆盖CPP膜、调整切刀为10cm×15cm，开始切割。切割后的产品转入铝箔袋内，包装封口。完成包装后进行电子束辐照灭菌，辐照灭菌剂量为25KGy(1Gy＝1J/kg)。

实施例3

本实施例提供了一种抗菌修复功能敷料，制备要求：规格：10cm×20cm；数量：60片

制备步骤：

步骤一：细菌纤维素膜的纯化：选取新鲜的细菌纤维素膜20大片，放于烧杯中用蒸馏水清洗三次，每次挤水约70％，除去细菌纤维素膜表面杂质，备用。配制10L 2mol/L的NaOH溶液，将上述溶液倒入装有细菌纤维素膜的烧杯中，开始加热升温并不断搅拌。控制温度50℃，计时36小时。

完成后，将细菌纤维素膜用蒸馏水反复挤水冲洗，直至将PH洗涤至5～7之间，并通臭氧2.5小时，臭氧浓度为1.0mg/L；通臭氧结束后，搅拌计时2小时，合格后将膜挤水40％～60％封口待用。

步骤二：壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的制备:按照2倍于细菌纤维素膜体积的壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的比例计算配制上述溶液，胶原蛋白浓度为7.5％和壳聚糖的浓度为0.2％，配制过程如下：称取300g小分子胶原蛋白和300g大分子量胶原蛋白于大烧杯中，加入已量取好的的蒸馏水8000ml，搅拌溶解完全后，连接超滤装置过滤，将滤液收集于另一干燥洁净的容器内。然后将称量好的16g壳聚糖加入溶液中，加入适量的冰醋酸，充分搅拌直至完全溶清，密封备用。

步骤三：细菌纤维素膜与壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的复合：将步骤一中纯化的细菌纤维素膜，加入到步骤二已配制好的混合溶液中，加入交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰酯胺，使得其浓度为0.2％，50℃下复合1小时，并每隔15分钟搅拌一次。

步骤四：复合产品的包装及灭菌：复合完成的膜放入自动化生产设备上进行简单挤水、两面覆盖CPP膜、调整切刀为10cm×20cm，开始切割。切割后的产品转入铝箔袋内，包装封口。完成包装后进行钴60辐照灭菌，辐照灭菌剂量为30KGy(1Gy＝1J/kg)。

实施例4

本实施例提供了一种抗菌修复功能敷料，制备要求：规格：10cm×10cm；数量：120片。

制备步骤：

步骤一：细菌纤维素膜的纯化：选取新鲜的细菌纤维素膜20大片，放于烧杯中用纯化水清洗三次，每次挤水约70％，除去细菌纤维素膜表面杂质，备用。配制10L 1mol/L的KOH溶液，将上述溶液倒入装有细菌纤维素膜的烧杯中，开始加热升温并不断搅拌。控制温度90℃，计时3小时。

完成后，将细菌纤维素膜用蒸馏水反复挤水冲洗，直至将PH洗涤至5～7之间，并通臭氧4小时，臭氧浓度为0.3mg/L；通臭氧结束后，搅拌计时2小时，合格后将膜挤水40％～60％封口待用。

步骤二：壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的制备:按照2倍于细菌纤维素膜体积的壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的比例计算配制上述溶液，胶原蛋白浓度为15％和壳聚糖的浓度为1％，配制过程如下：称取600g小分子胶原蛋白和600g大分子量胶原蛋白于大烧杯中，加入已量取好的的蒸馏水8000ml，搅拌溶解完全后，连接超滤装置过滤，将滤液收集于另一干燥洁净的容器内。然后将称量好的80g壳聚糖加入溶液中，加入适量的冰醋酸，充分搅拌直至完全溶清，密封备用。

步骤三：细菌纤维素膜与壳聚糖和胶原蛋白混合溶液的复合：将步骤一中纯化的细菌纤维素膜，加入到步骤二已配制好的混合溶液中，加入交联剂京尼平，使得其浓度为1.0％，30℃下复合3小时，并每隔15分钟搅拌一次。

步骤四：复合产品的包装及灭菌：复合完成的膜放入自动化生产设备上进行简单挤水、两面覆盖CPP膜、调整切刀为10cm×10cm，开始切割。切割后的产品转入铝箔袋内，包装封口。完成包装后进行电子辐照灭菌，辐照灭菌剂量为20KGy(1Gy＝1J/kg)。

对照组1

与实施例1相比，区别点仅在于：所述混合溶液中不加入壳聚糖，不通臭氧，采用相同条件制备医用敷料。

对照组2

与实施例2相比，区别点仅在于：所述混合溶液中不加入壳聚糖，不通臭氧，采用相同条件制备医用敷料。

对照组3

与实施例3相比，区别点仅在于：所述混合溶液中不加入壳聚糖，不通臭氧，采用相同条件制备医用敷料。

对照组4

与实施例4相比，区别点仅在于：所述混合溶液中不加入壳聚糖，不通臭氧，采用相同条件制备医用敷料

实验例1

本发明对以上几种实例产品的内毒素含量进行检测，具体如下：

实验过程：将上述各实例中产品，切割成5cm×5cm大小，置于洁净锥形瓶中，加入50检查用水，37℃浸提2小时，检测内毒素结果如表1：

表1单位：EU/mL

编号	实施例	对照组
			1	＜0.0625	＞0.125
2	＜0.0625	＞0.25
			3	＜0.0625	＞0.125
4	＜0.0625	＞0.125

结论：通过上表可以看出，实施例组比对照组内毒素更低，更稳定，在临床应用和实际应用中更安全，更有效。

实验例2

本发明对以上几种实例产品的抗菌性进行检测，如下：

实验过程：将实施例中产品，切割成统一规格Φ2.5cm大小的圆片，每一实施例选取10个样品，分成两组，分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌作为实验菌株，进行抑菌实验，检测抑菌环的大小作为抑菌功能的强弱。

实验结果见表2-3：

表2金黄色葡萄球菌单位：mm

表3大肠埃希菌单位：mm

实验结果：

通过上述实施例和对照组例抗菌实验结果可以得出以下结论：

1、金黄色葡萄球菌组，4个实施例组的都有明显的抑菌作用，且随着壳聚糖浓度的增大抑菌环的直径增大，而对照组则没有抑菌环，说明加入壳聚糖能有效杀灭金黄色葡萄球菌。

2、大肠埃希菌组，4个实施例组的都有明显的抑菌作用，且随着壳聚糖浓度的增大抑菌环的直径增大，而对照组则没有抑菌环，说明加入壳聚糖能有效杀灭大肠埃希菌。

通过上述两组实施例可以看出与现有技术相比，本发明加入壳聚糖可使产品具有明显的抑菌杀菌消炎等功能，降低伤口愈合过程中染菌和滋生菌的几率，有效保护创口，减轻患者痛苦等。在细菌纤维素纯化过程中增加通臭氧过程能最大程度降低产品的内毒素水平，在医疗使用过程中更加安全放心。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (10)

1.一种抗菌修复功能敷料，其特征在于，由壳聚糖和胶原蛋白通过交联剂交联复合到细菌纤维素膜上形成。

2.根据权利要求1所述的抗菌修复功能敷料，其特征在于：所述壳聚糖的分子量为1000～40万之间；所述胶原蛋白为小分子量胶原蛋白和大分子量胶原蛋白按质量1:1的混合物，所述小分子量胶原蛋白分子量为1000～5000，大分子量胶原蛋白分子量为1万～30万之间。

3.根据权利要求1或2所述的抗菌修复功能敷料，其特征在于，所述壳聚糖与细菌纤维素膜的质量比为0.001～5:100；所述胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为0.5～20:100；优选所述壳聚糖与细菌纤维素的质量比为0.01～3：100；所述胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为5～15:100。

4.根据权利要求1～3任一项所述的抗菌修复功能敷料的制备方法，其特征在于：所述交联剂选自乙酸酐，京尼平或N,N-亚甲基双丙烯酰酯胺，优选所述交联剂与细菌纤维素膜的质量比为0.1～2.0:100。

5.根据权利要求4所述的抗菌修复功能敷料，其特征在于：所述的细菌纤维素膜是由无色杆菌属、根瘤菌属、假单胞菌属、气杆菌属、固氮菌属、八叠球菌属、醋杆菌属、产碱菌属、土壤杆菌属中的某一种或几种经发酵产生的具有三维多孔网络结构的细菌纤维素制备得到的，优选所述纤维素膜长35±2cm，宽25±2cm，厚0.5mm～5mm。

6.一种抗菌修复功能敷料的制备方法，其特征在于，包括：

步骤一：将细菌纤维素膜进行预处理和纯化处理；

步骤二：配制含有0.001％～5.0％(m/v)壳聚糖和0.5％～20％(m/v)胶原蛋白的混合溶液，优选配制含有0.01％～3％(m/v)壳聚糖和5％～15％(m/v)胶原蛋白的混合溶液；

步骤三：在温度20℃～60℃下，将步骤一中纯化后的细菌纤维素膜加入到步骤二所述混合溶液中，并加入交联剂进行复合，所述混合溶液中壳聚糖与细菌纤维素膜的质量比为0.001～5.0:100；混合溶液中胶原蛋白与细菌纤维素膜的质量比为0.5～20:100，复合时间为0.5～4小时；

步骤四：完成交联复合后的细菌纤维素膜经简单挤水、覆膜、切割后包装封口，进行高能射线辐照灭菌，即得。

7.根据权利要求6所述抗菌修复功能敷料的制备方法，其特征在于，所述的预处理为：用蒸馏水或纯化水对新鲜的细菌纤维素膜清洗2～4次，每次挤水40～70％；所述纯化处理为：将预处理后的细菌纤维素膜称重并估算体积，投入2～3倍于细菌纤维素膜体积的0.05mol/L～5mol/L的碱液中，加热升温并不断搅拌，控制温度50℃～100℃，进行纯化处理1～36小时；完成后，将细菌纤维素膜用蒸馏水或纯化水反复挤水冲洗，直至将其pH值洗涤至5～7之间，并通臭氧0.5～8小时，臭氧浓度为0.3～2mg/L；通臭氧结束后，搅拌使臭氧完全分解，备用。

8.根据权利要求7所述的抗菌修复功能敷料的制备方法，其特征在于：所述碱液为浓度为0.05mol/L～5mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液，优选浓度为1mol/L～2mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液；碱处理时温度为90～95℃，时间为2～3小时；所述通臭氧时间为1～4小时，臭氧浓度1mg/L，搅拌时间为2～4小时。

9.根据权利要求6-8中任一项抗菌修复功能敷料的制备方法，其特征在于：所述步骤三中交联复合可采用物理交联复合法或化学交联复合法；

优选采用如下化学交联复合法：将纯化后细菌纤维素膜置于盛有2～4倍细菌纤维素膜体积的所述复合溶液以及添加浓度为0.2～1％交联剂的反应罐内,控制温度为20℃～60℃，设置时间0.5h～4h,每隔15分钟搅拌一次,使其细菌纤维素在交联剂的作用下与混合溶液快速复合；所述交联剂选自乙酸酐，京尼平或N,N-亚甲基双丙烯酰酯胺，优选三者的添加浓度依次为0.5％，1％和0.2％。

10.根据权利要求6-8任一项抗菌修复功能敷料的制备方法，其特征在于：所述高能射线辐照灭菌采用γ-射线、电子束、X光或紫外线中的一种，优选γ-射线或电子束；更优选辐照剂量为10KGy～40KGy。