ITAL990010U1 - Nuova metodica di laboratorio per preparare gel e membrane piastriniche ottenute dal concentrato piastrinico. - Google Patents

Description

Descrizione del modello di utilità dal titolo: NUOVA METODICA DI LABORATORIO PER PREPARARE GEL E MEMBRANE PIASTRINICHE OTTENUTE DAL CONCENTRATO PIASTRINICO,

Marx e collaboratori hanno dimostrato che l’uso di plasma ricco di piastrine rappresenta una delle possibili strategie disponibili per poter modulare ed accelerare il processo di guarigione delle ferite, nonché incrementare i processi di rigenerazione ossea. Pertanto, hanno recentemente elaborato una tecnica che permette di isolare e sedimentare le piastrine così da ottenere un plasma ricco di piastrine autologo non tossico e non immunoreattivo, che ha come obiettivo quello di amplificare e potenziare gli effetti dei fattori di crescita contenuti nei granuli delle piastrine che come è noto, sono gli elementi cellulari iniziatori delle vie metaboliche coinvolte nelle fasi di guarigione delle ferite e delle rigenerazioni. In base al protocollo di Marx, che necessita dell’impiego di un separatore cellulare, il plasma ricco di piastrine viene preparato effettuando un prelievo di sangue venoso di 500 ml mediante l’inserimento di un catetere venoso. Il plasma ricco di piastrine viene successivamente attivato con calcio cloruro e trombina bovina per produrre un gel piastrinico che può essere combinato sia con osso autogeno spugnoso e corticale che con matrice ossea costituta da biovetri.

In Italia il protocollo di Marx per l’attivazione del gel piastrinico non sarebbe realizzabile dal momento che è stata ritirata dal commercio la trombina bovina. Inoltre, tale metodica non è assolutamente attuabile in un ambulatorio, così da permettere un impiego routidinario del gel piastrinico, in considerazione sia della quantità di sangue che deve essere prelevata al paziente che della strumentazione e del personale specializzato necessario per la preparazione del plasma ricco di piastrine.

Riflettendo allora sull’ importanza di un utilizzo del gel piastrinico nella pratica chirurgica e, considerando, l’impossibilità di realizzare la metodica proposta da Marx per i motivi sopra citati, viene qui descritta una metodica di laboratorio riproducibile e standardizzata, il cui obiettivo è quello di ottenere rapidamente in ambulatorio un gel piastrinico con caratteristiche del tutto sovrapponibili a quelle del gel presentato da Marx e collaboratori. L’impiego di batroxabina (farmaco antiemorragico), al posto della trombina bovina, non solo permette di ottenere l’attivazione del concentrato piastrinico, ma offre una maggiore sicurezza biologica. Pertanto, considerata la facilità di esecuzione, del costo altamente contenuto e della bassa morbilità di questo protocollo (prelievo di solo 40 - 50 mi di sangue venoso, che non richiede l’impiego di un separatore cellulare e di conseguenza del posizionamento di un catetere venoso centrale), è ora possibile ottenere un gel piastrinico da poter impiegare routidinarìamente nella pratica chirurgica orale, impiantare, parodontale e maxillofacciale. Inoltre, viene qui sotto descritta anche la procedura di preparazione di membrane piastriniche da poter impiegare sulla ferita così da determinare un incremento in situ della concentrazione dei fattori di crescita tessutali in grado di accelerare i processi di guarigione dei tessuti molli circostanti.

Si vuole sottolineare l’enorme vantaggio, in tecnici pratici, che si può trarre dall’impiego di questa metodica di laboratorio: la possibilità di prelevare una piccola quantità di sangue comporta un enorme beneficio per il paziente dal momento che, almeno psicologicamente, provoca un minor disagio.

In conclusione, vengono qui di seguito descritte le fasi di preparazione e di attivazione del gel e delle membrane piastriniche mediante le quali è possibile realizzare e migliorare Γ applicazione di una procedura di laboratorio.

Procedura per la preparazione del concentrato piastrinico

Il concentrato piastrinico viene preparato a partire da sangue intero (prelievo di 40-50 mi di sangue venoso raccolto in siringhe da 20 ml contenenti 4 mi di sodio citrato, usato come anticoagulante) mediante due fasi di centrifugazione con la formazione di un prodotto intermedio che è plasma ricco di piastrine. Questo metodo permette di recuperare almeno l’80% delle piastrine presenti nel sangue intero. Il sangue venoso viene raccolto in quattro provette (Figura 1) e centrifugato a 180 giri per venti minuti (Figura 2). Al termine della centrifugazione si ottengono due fasi: una scura, rappresentata da globuli rossi che precipitano al fondo della provetta, ed una chiara visibile nella parte superiore della provetta, costituita da plasma ricco di piastrine (Figura 3). Questo plasma viene prelevato e trasferito mediante una pipetta Pasteur in un’altra provetta e centrifugato a 580 giri per venti minuti (Figura 4). Grazie a questa centrifugazione più veloce (580 giri rispetto a 180 giri), è possibile ottenere la precipitazione delle piastrine al fondo della provetta come un piccolo fondello denso detto pellet ed una parte liquida detta sunatante che è plasma povero di piastrine (Figura 5). Le provette vengono svuotate lasciando però in ognuna un’aliquota di 1,5 ml di plasma povero di piastrine necessario per risospendere il pellet così da ottenere una sospensione omogenea di piastrine (Figura 6). Procedendo in questo modo, è possibile ottenere un concentrato piastrinico di volume finale di circa 6 mi (derivante dallunione delle sospensioni di piastrine presenti in ognuna delle quattro provette) che è pronto, dopo quindici minuti di riposo a temperatura ambiente, per essere attivato a formare il gel e le membrane (Figura 7).

Procedura per l’attivazione del concentrato piastrinico

Questa procedura implica lutilizzo di concentrato piastrinico autologo per formare il gel piastrinico. Il protocollo per la formazione del gel piastrinico richiede:

1 - Concentrato piastrinico;

2 - Calcio cloruro 80uM

3 - Botropase (Batroxobina equivalente alFattìvità di 1 o più o meno unità trombiniche intemazionali).

La quantità di ogni componente necessaria per la formazione del gel dipendono dal volume di coagulo piastrinico che si vuole usare nella pratica clinica.

Dopo numerosi esperimenti è stato standardizzato di preparare il gel con 2 mi di concentrato piastrinico, 0.5 ml di Calcio cloruro 80 micromolare e 0.5 ml di Batroxobina. Questo particolare gel si sviluppa quando il concentrato piastrinico prelevato con una pipetta sterile, il Calcio cloruro e la Batroxobina prelevati mediante una siringa da insulina vengono simultaneamente uniti insieme in un dappen di vetro (Figura 7). Dopo un tempo variabile di 1 - 2 minuti inizia il processo di attivazione ed è cosi possibile ottenere il gel. Procedura di preparazione delle membrane piastriniche

Se l’attivazione del concentrato piastrinico viene fatta utilizzando delle capsule di petri in plastica (tipo quelle usate per colture cellulari) o di vetro, è possibile ottenere una membrana sottile dal momento che il gel durante il suo processo di attivazione prende la forma del recipiente in cui viene attivato.

Pertanto, eliminando mediante una pipetta Pasteur di vetro il liquido in eccesso rilasciato dal gel formatosi nella capsula, è possibile formare una membrana, dal contorno ben definito facilmente manipolabile (Figura 7).

Questo liquido in eccesso costituito da Batroxobina - CaCl 80 uM e, verosimilmente, da fattori della coagulazione rilasciati dalle piastrine attivate quando viene aggiunto al plasma ottenuto dalla seconda centrifugazione determina dopo circa venti - trenta minuti la formazione di un ulteriore gel denso di piastrine (Figura 7).

Claims (1)

1. RIVENDICAZIONI 1 - procedura sicura: la sostituzione della trombina bovina (protocollo Marx) con il Botropase (farmaco antiemorragico) determina una maggiore sicurezza biologica; 2 - rapida: non richiede il ricovero del paziente presso un Centro Trasfusionale dal momento che il prelievo è molto contenuto, pari a quello che viene fatto per un check-up di controllo (solo 40-50 ml di sangue) e tutta la procedura può essere eseguita in ambulatorio e completata in meno di un’ora, compresa la preparazione del gel e delle membrane; 3 - di facile esecuzione: non necessita di più personale specialistico (medico trasfusionista, infermiera professionale, tecnico di laboratorio) perché non prevede fuso di uno strumento altamente complesso e dedicato come un separatore cellulare che richiede per tutto il periodo del suo funzionamento la presenza di una persona istruita che deve costantemente controllare il perfetto funzionamento della macchina; al contrario, è sufficiente l’impiego di una piccola centrifuga da banco che necessita semplicemente la presenza di un tecnico di laboratorio o di un biologo; 4 - poco costosa, il costo è molto contenuto dal momento che prevede solo quello della centrifuga da banco (2 milioni di lire); il costo di un separatore cellulare è di centinaia di milioni, oltre a tutte le spese che devono essere sostenute per il ricovero del paziente presso un Centro Trasfusionale; 5 - bassa morbilità: legata alla piccola quantità di sangue venoso che viene prelevata al paziente (40-50 ml contro i 500 ml necessari per effettuare la procedura del prof. Marx) e al fatto che non si espone il paziente al rischio di una circolazione extracorporea; il tutto ovviamente comporta un minor disagio, anche psicologico, del paziente; 6 - applicazione routidinaria questa tecnica di laboratorio grazie al costo contenuto, alla rapidità ed alla facilità di esecuzione permette un’applicazione routidinaria e conseguentemente più ampia del gel piastrinico. 7 - applicazione innovativa: è stata messa a punto una procedura che offre la possibilità di formare delle membrane piastriniche da applicare in situ sulla ferita, così da facilitare e migliorare il processo di guarigione e di rigenerazione dei tessuti.