TW202045191A - 自含有血小板的血液組成物所獲致的組織調配物或黏著劑及製備該調配物的方法 - Google Patents

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Abstract

一種由富含血小板的血液組成物及/或生長因子獲得之調配物或組織黏著劑，以及用於製備該黏著劑的方法。該黏著劑的製備方法包括升高該初始血液組成物的溫度，以及接著活化該組成物之步驟。除了其他優點以外，該組織黏著劑係為具生物相容性且可生物降解的、具備存在血小板或生長因子所能提供之所欲的生物學或醫學特性，並且還具有高黏合性與更快的凝固過程。

Description

自含有血小板的血液組成物所獲致的組織調配物或黏著劑及製備該調配物的方法
本發明係關於一種具有所欲生物學或醫學特性之調配物，其獲自含有血小板的初始血液組成物。本發明亦係關於製備該調配物之方法。該調配物用來作為組織黏著劑。
在現有技術中已知如何自人類或動物的血液製備組成物，其中血液係被進行處理從而獲得富含血小板的血漿(PRP)及/或富含生長因子的血漿，該等血漿係具備有益的生物學與醫學特性。此種PRP或富含有生長因子的血漿，已被成功地應用於生物體外(例如用來作為細胞培養基)，以及在生物體內(例如用於在患者體內進行骨再生過程，或是藉著使用滲透作用來治療患有關節疾病的患者)的應用中。在用於體內應用中之組成物的情況下，用於製備PRP與富含生長因子的血漿調配物的技術，已經朝向製備自體組成物，也就是從患者自身的血液中取得之技術來發展。此等組成物與製備方法的實施例，可見於專利US6569204和ES2221770中。
此外，由血液獲得之富含血小板的血纖維蛋白(PRF)所組成的組成物，也是屬於已知的。就像上述血漿一樣，血纖維蛋白可以是自體的或異源的。與為液體的血漿不同的是，血纖維蛋白係具有固體或半固體的稠度。
被稱為血纖維蛋白凝膠或血纖維蛋白網的血纖維蛋白係為其之一具體實例，其係為一種其之半固體稠度一致性，對於某些應用非常有用的調配物。該血纖維蛋白凝膠或纖維網的製備過程通常係從第一階段開始，在該第一階段中，PRP或富含生長因子的血漿係通過可運用之方法而獲得，例如藉著將自患者身上抽取的血液離心直到血液分離成幾個部分然後萃取上層部分，也就是富含血小板之血漿(PRP)或是富含生長因子之血漿的部分。接著，在PRP中或富含生長因子之血漿中的血小板，係藉著例如添加氯化鈣而活化(在本文中之活化係被理解為使得血小板釋放其中所含有之某些生長因子的作用)。在等待了足夠長的時間後，該活化作用的結果使得血漿中所含有的血纖維蛋白原，最終產生了血纖維蛋白的聚合反應，而得到血纖維蛋白凝塊之最終化合物(由於其之半固態一致性就像一種生物海綿，其也稱為血纖維蛋白凝膠或血纖維蛋白網)。一般會執行此一步驟，以從已經用抗凝血劑(例如檸檬酸鈉)進行修飾之血液中，取得血纖維蛋白凝膠。然而，其也可以在未事先將血液與抗凝血劑混合的情況下進行處理。在這種情況下，藉由將血液離心既可以從紅血球細胞中分離血漿，又可以在無需添加氯化鈣或任何其他血小板活化劑的情況下，取得血纖維蛋白凝膠。血纖維蛋白凝膠或血纖維蛋白網的一些應用之實施例包括有：形成生物支架以填充骨缺損；應用於傷口或傷處以逐漸釋放生長因子；用來作為培養幹細胞的基質；用來作為密封缺損或潰瘍的膜；用於製造組織，又被稱為組織工程，其中除了細胞與生長因子外，具有細胞可在其中生長之基質或支架更是特別重要。
但是，富含血小板的調配物(PRP；富含生長因子的血漿，PRF)作為組織黏著劑的能力有限。具有良好黏合效能的重要性非常高，因為外科手術傷口與慢性傷口對於患者和醫療系統，都會構成世界層級的社會經濟負擔，而這一點往往會被低估。在此一層級上，我們發現的主要問題之一，在於手術期間或慢性傷口可能發生大量出血、持續性出血、以及手術縫合線所引起之不適感和併發症，例如縫合膿腫、形成肉芽腫或組織壞死。多年來，為了減少這種併發症，在外科領域中出現了多種治療模式，其中包括血纖維蛋白膠/密封劑的運用。
市售同種異體血纖維蛋白密封劑代表一種良好的非侵入性替代方案。但是，儘管其等可以有效地作用，但是他們的成本很高，並且可能並非是在所有國家或地區都可以取得。此外，由於市售同種異體血纖維蛋白密封劑係自人類血漿中取得的，因此存在傳播某些疾病的風險，並且可能會發生過敏反應。
製備血纖維蛋白密封劑的最安全方法，是從患者自己的血液中取取。然而，其之製備時間很長(通常要使用冷凍或凍乾技術)，至少需要24小時來進行處理，因此無法於手術期間完成，或者患者需要在手術前一天進行抽血。這些冷凍或凍乾技術係以增加血纖維蛋白原的濃度為基礎，因而其等會受到諸如血纖維蛋白原或凝血蛋白濃度過低的限制，因此密封時間過長且由於每個患者的生物學差異而變化非常大。其他用來加快自體血纖維蛋白密封劑之製備的方法，還可以使用化學物質來促進血纖維蛋白原沉澱，但是此類產品會刺激並使施予該產品的組織發炎。
本發明之目的是要取得一種具有理想生物學或醫學特性之調配物，該調配物是從富含血小板及/或生長因子之初始血液組成物中取得的，該調配物可以在手術時進行製備並且係具有更佳的組織黏附性。在其他應用中，該調配物係被寄望可以作為商業血纖維蛋白密封劑的替代方案。
本發明之目的係為具有所欲之生物學或醫學特性的調配物，其包含或者衍生自富含有血小板及/或生長因子並且包含來自初始血液組成物本身之蛋白質的初始血液組成物(人類或動物來源；自體的、同源的或異源源)，而該調配物係具備更佳的黏附性之特徵。此一調配物可以是自體的(自同一供體製備並應用於同一供體)、同源的(供體與受體係屬於是同一物種)或是異源的(供體和受體不屬於同一物種)，並且因為它具有增佳的黏合性與更快的凝固作用，而可以被定性為「血纖維蛋白密封劑(fibrin sealant)」(採用類似的術語以代表用於進行密封的血纖維蛋白製劑的應用)。相較於在現有技術中已知的其他血纖維蛋白密封劑、富含血小板的血液組成物及/或生長因子、以及類似產品，該組成物係具備新穎形態和生物力學結構。
本發明的調配物係可生物相容、可生物降解，並且具備由其所存在之血小板或生長因子所提供的所欲生物學或醫學特性。此外，該調配物具有增進的組織黏合性並且可以快速生產。因此，依據本發明的調配物基於以下事實，係為傳統血纖維蛋白密封劑之有利替代方案：該調配物是自體的、具黏附性並且可以在未添加化學物質的情況下快速取得。此外，該調配物具有良好的壓縮黏合性，與傳統的同種異體血纖維蛋白密封劑Tisseel®和PRP(通常被用來作為密封劑)類似或更好，並且可以充分支撐組織可以施加於其上之任何抵抗力。因此，該調配物非常適合用來作為血纖維蛋白密封劑。此外，其係為是可注射的。
本發明之目的還在於描述一種製備該調配物的方法，其中該方法包括以下步驟：取得富含血小板及/或生長因子之初始血液組成物，其之基礎調配物可以具有變化；將該血液組成物加熱至40至55℃的溫度；將該初始血液組成物離心至少1分鐘；並且減少該初始組成物的體積。依據本發明的該方法還包括添加血小板活化物質，以及形成血纖維蛋白以獲得富含血小板及/或生長因子之凝膠形式的血液組成物。
為了克服在現有技術中仍然存在的與PRP的黏附性相關的問題，一種具有所欲生物學或醫學特性，並且具有較佳黏附性之替代調配物係被提出。該調配物係包含有或係衍生自含有血小板之初始血液組成物。經過熱處理與形成血纖維蛋白凝塊，使得該組成物成為黏著劑。目前已經發現，依據本發明所製備之密封劑，具有與Tisseel®血纖維蛋白密封劑類似的組織黏合性，並且係比富含血小板的血漿或傳統富含血小板的血纖維蛋白之黏合性更好。
該初始血液組成物可以例如係為富含血小板的血漿，也就是具有高濃度血小板之血漿。此種血漿通常係藉著血液離心技術(將其分離為紅血球細胞部分、白血球細胞部分、以及富含血小板之血漿(PRP)部分)，並將該部分全部地或部分地分離為富含血小板之血漿(PRP)而取得。
該初始血液組成物可以包含或不包含白血球。
為了活化該初始血液組成物，可以使用以下之一或多種物質：氯化鈣、凝血酶、葡萄糖酸鈉、膠原蛋白、上清液(一種在富含血小板的血漿(PRP)凝固並於其後導致收縮時，出現在該凝固血液上方之液體物質)、富含生長因子的血漿之上清液、或是藉著活化血小板並誘導血纖維蛋白形成，而使得血小板從其內部釋放某些生長因子之任何其他藥劑。
本發明還提出一種用於製備具有所欲生物學或醫學特性之調配物的方法，其中該方法包含以下步驟： a)  取得具有或不具有抗凝血劑之富含血小板及/或生長因子的初始血液組成物，其係較佳地為具有或不具有白血球細胞之富含血小板的血漿，或是具有或不具有白血球細胞之富含生長因子的血漿， b) 將該初始組成物的溫度升高至40至55°C， c)  將該初始血液組成物離心至少1分鐘， d) 移除至少一部分由離心所得到之血漿部分， e)  在如步驟d)所示的移除至少一部分血漿部分後，活化剩餘之血液組成物。該活化作用可以通過例如添加氯化鈣、凝血酶、氯化鈣與凝血酶之組合、葡萄糖酸鈉、膠原蛋白、上清液(一種在富含血小板的血漿(PRP)凝固並於其後導致收縮時，出現在該凝固血液上方之液體物質)、富含生長因子的血漿之上清液、及/或任何其他血小板活化劑。結果，血小板活化作用將會發生並誘發血纖維蛋白形成，從而使得血小板從其內部釋放某些生長因子。
此一方法可以產生血纖維蛋白原並未變性之蛋白質物質的沉澱，其在活化之後係以血纖維蛋白凝塊出現。藉著移除一部分體積之該初始組成物，這些蛋白質物質的濃度便會增加。此外，該方法在該血液組成物之凝固及其黏合強度方面會產生顯著加快現象。總而言之，由於該加熱程序的結果，可以取得新穎之可生物相容與可生物降解的調配物，其具有兩項主要優點：較短的凝固時間以及更大的黏附性，而使得該調配物更適合作為血纖維蛋白黏著劑或密封劑。
較佳地，該初始血液組成物的溫度係被升高至範圍落在40至53℃內之溫度。
富含血小板及/或生長因子之該初始血液組成物，可以是人類或動物來源的。另外，它可以是自體的(屬於隨後將要以該最終調配物來治療的患者)、同源的(與將要以該最終調配物來治療或處理之患者、患者們、細胞或其他生物個體，屬於同一物種之成員)、或異源(與將要以該最終調配物來治療或處理之患者、患者們、細胞或其他生物個體，屬於不同物種之成員)。
本發明預想該初始血液組成物，可以選擇性地併入一或多種其他物質，在所稱之熱處理之前添加。這些其他物質可以是： -   一或多種選自於蛋白質、胜肽、核酸、多醣、脂質、非蛋白質有機物質、和無機物質的生物活化劑； -   一或多種可生物降解的聚合物，其係選自於：透明質酸、透明質酸鹽、軟骨素4硫酸鹽、軟骨素6硫酸鹽、聚葡萄醣、矽膠、藻酸鹽、羥丙基甲基纖維素、幾丁質衍生物，較佳地為幾丁聚醣、黃原膠、瓊脂糖、聚乙二醇(PEG)、聚羥基亞乙基甲基丙烯酸酯(HEMA)、合成或天然蛋白質、以及膠原蛋白； -   一或多種有機聚合物，其係選自於聚己內酯、聚乙醇酸、聚乳酸、以及其等之共聚物； -   以下之一或多種藥物：抗生素、抗菌劑、抗癌藥、止痛藥、生長因子、激素； -   一或多種無機成分，其係選自於鈣鹽、鎂鹽及/或鍶鹽之群組。
本發明還設想了可以在熱處理之後，將任何上述物質添加至該調配物中的可能性。
依據本發明的調配物設想了各種具體實施例，其中除了所請求保護之技術態樣以外，該調配物還可以包含其他化合物、成分、分子等等，其等對於該調配物所欲之特定應用來說是便利的。
此外，在依據本發明所描述的方法生產的調配物時還可以對進行額外的步驟，其包括除溼(desiccation)以增加其變通性；也就是，在其之活化作用(血小板活化與血纖維蛋白形成)之前，可以將本發明的調配物加以乾燥(藉由乾熱處理)或凍乾。該調配物隨後可以通過不同的方法重新再水合，例如添加生理食鹽水溶液、富含血小板的血漿、來自富含血小板的血漿之上清液、富含生長因子的血漿、來自富含生長因子的血漿的上清液、或是任何其他液態物質。
實施例
實施例1
此一實施例係從包含從一患者取得的血液之9個氣密試管(9ml)的樣本開始。將該等試管在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。進行離心作用的結果，容納在每個試管中的血液會被區分成幾個部分。該上層部分或是富含血小板血漿(PRP)部分，係被萃取至一白色試管，而可獲得總共36毫升血漿。將該血漿區分至6個試管內，每個試管中均含有6 ml的血漿。然後，將每個該等6個試管中之溫度，分別升高至37.55、45.95、51.05、52.4、53.9與55.35℃。隨後，將該等6個試管在室溫下以580g 的速度離心8分鐘，以使得血小板與新穎蛋白質物質沉澱。為了在該經加熱的血漿離心之後將這些蛋白質物質濃縮，該血漿的上半部分係被移除。最後，將該沉澱物重新懸浮於該試管剩餘的血漿中。
接下來，在該等6個試管中之調配物，係藉著在每1ml調配物中添加PRP上清液(333µl)與20µl鈣來加以活化，從而開始在調配物中形成血纖維蛋白。
測量由於血纖維蛋白形成導致之凝固時間(該血液組成物從液態改變其之狀態至凝膠狀所需之時間)。圖1顯示了本發明之方法得以加速凝固時間的能力。應當要注意的是，藉著與上述依據本發明之調配物相同的方式來活化的傳統PRP之凝固時間(也就是，每1ml添加PRP上清液(333μl)與20μl鈣)，係為4.5分鐘。在圖中可以看出，相較於傳統PRP，依據本發明的調配物係具有較短或更快的凝固時間。此一凝固作用的加速在51.05℃的溫度下最快，然後是在52.4與53.9℃的溫度下。在55.3℃的溫度下無法獲得穩定的凝塊。
實施例2
此一實施例係從包含從一患者取得的血液之9個氣密試管(9ml)的樣本開始。將該等試管在室溫下以580g的速度離心8分鐘。進行離心作用的結果，容納在每個試管中的血液會被區分成幾個部分。該上層部分或是富含血小板血漿(PRP)部分，係被萃取至一白色試管，而可獲得總共36毫升血漿。將該血漿區分至6個試管內，每個試管中均含有6 ml的血漿。然後，將每個該等6個試管中之溫度，分別升高至37.55、45.95、51.05、52.4、53.9與55.35℃。隨後，將該等6個試管在室溫下以580g 的速度離心8分鐘，以使得血小板與新穎蛋白質物質沉澱。為了在該經加熱的血漿離心之後將這些蛋白質物質濃縮，該血漿的上半部分係被移除。最後，將該沉澱物重新懸浮於該試管剩餘的血漿中。
接下來，在該等6個試管中之調配物，係藉著在每1ml調配物中添加PRP上清液(333µl)與20µl鈣來加以活化，從而開始在調配物中形成血纖維蛋白。
兩塊載玻片係以經活化後之調配物來進行膠合。在凝固之後，該等經膠合的載玻片係在蒸餾水中溫育3分鐘，然後使用以克計量的重量來測量該調配物的黏合強度。圖2顯示了該調配物的黏合強度。最高的黏合強度係對應於溫度51.05°C，其次是溫度37.55與45.95°C。最低的黏合強度則是在55.3°C的溫度下，然後是53.9°C的溫度。
實施例3
此一實施例係從包含從一患者取得的血液之9個氣密試管(9ml)的樣本開始。將該等試管在室溫下以580g的速度離心8分鐘。進行離心作用的結果，容納在每個試管中的血液會被區分成幾個部分。該上層部分或是富含血小板血漿(PRP)部分，係被萃取至一白色試管，而可獲得總共36毫升血漿。將該血漿區分至6個試管內，每個試管中均含有6ml的血漿。將該等樣本依據以下步驟來處理： -   控制組樣本：該PRP係在每1毫升的PRP中，以20μl的10%氯化鈣之比例的鈣離子來加以活化。 -   活化劑控制組樣本：該PRP係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   方法控制組樣本：將該PRP在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本1：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。該調配物係將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本2：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。移除初始體積的1/2，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/2初始體積中。該調配物係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本3：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在總初始體積中。該調配物係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本4：該PRP的血小板係使用具有20μl之孔徑的過濾器，而藉著過濾的手段來移除。然後將該PRP的溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。
圖3中之凝固時間的結果顯示：比起僅使用鈣離子(控制組樣本)，使用凝血酶活化劑(PRP上清液)+鈣(用於活化劑控制組、方法控制組與調配物1-4中)，可以加快PRP的凝固。此外，在活化作用之前進行PRP的第二次離心(方法控制組與調配物1-4)，可以進一步加快凝固作用，這可能是源自於藉著移除部分的初始體積所增加之血小板濃度。然而，如調配物3(並未增加血小板濃度)與調配物4(沒有血小板)的結果所示，依據本發明之方法係與血小板濃度不相關地加速凝固作用。最短之凝固時間係為那些對應於調配物1和2者。因此，該凝固時間可以代表本發明的方法在加快凝血程序上之新穎性與有效性。
實施例4
此一實施例係從包含從一患者取得的血液之9個氣密試管(9ml)的樣本開始。將該等試管在室溫下以580g的速度離心8分鐘。進行離心作用的結果，容納在每個試管中的血液會被區分成幾個部分。該上層部分或是富含血小板血漿(PRP)部分，係被萃取至一白色試管，而可獲得總共36毫升血漿。將該血漿區分至6個試管內，每個試管中均含有6ml的血漿。將該等樣本依據以下步驟來處理： -   控制組樣本：該PRP係在每1毫升的PRP中，以20μl的10%氯化鈣之比例的鈣離子來加以活化。 -   活化劑控制組樣本：該PRP係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   方法控制組樣本：將該PRP在室溫下以580g的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本1：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。該調配物係將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本2：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。移除初始體積的1/2，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/2初始體積中。該調配物係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本3：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在總初始體積中。該調配物係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本4：該PRP的血小板係使用具有20μl之孔徑的過濾器，而藉著過濾的手段來移除。然後將該PRP的溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。
兩塊載玻片係以經活化後之上述樣本來進行膠合。該等樣本係在蒸餾水中溫育，然後使用以克計量的重量來測量該調配物的黏合性的強度。圖4顯示了該等調配物之黏合強度。結果清楚地顯示，黏附性的改善僅出現在依據本發明(調配物1與2)中，因為使用凝血酶+鈣(活化劑控制組)或是增加血小板濃度(方法控制組)，並未改善具有鈣離子的PRP的黏附性。最佳之黏附性可由本發明的調配物1與2中獲得。
實施例5
此一實施例係從包含從一患者取得的血液之8個氣密試管(9ml)的樣本開始。將該等試管在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。進行離心作用的結果，容納在每個試管中的血液會被區分成幾個部分。該上層部分或是富含血小板血漿(PRP)部分，係被萃取至一白色試管，而可獲得總共30毫升血漿。將該血漿區分至5個試管內，每個試管中均含有6 ml的血漿。將該等樣本依據以下步驟來處理： -   活化劑控制組樣本：該PRP係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本1：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。該調配物係將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本2：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g的速度離心8分鐘。移除初始體積的1/2，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/2初始體積中。該調配物係藉著以下之活化劑/調配物體積比例來加以活化： 1.每1毫升的PRP(調配物2)中，具有PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣。 2.每1毫升的PRP(調配物2A)中，具有PRP的上清液(235.8μl)與14.2μl的10%氯化鈣。 3.每1毫升的PRP(調配物2B)中，具有PRP的上清液(166.7μl)與10μl的10%氯化鈣。 -   Tisseel®樣本：依據製造商的說明進行購買與使用Tisseel®商業黏著劑與密封劑(Baxter S. L., Valencia, Spain)。
兩塊載玻片係以經活化後之前述樣本來進行膠合。該等樣本係在蒸餾水中溫育，然後使用以克計量的重量來測量該調配物的黏合性。圖5顯示依據本發明的該等調配物之黏合強度，也可以藉著將所添加之活化劑體積最佳化(調配物2B)而改善。該結果還顯示依據本發明的該等調配物之黏合強度，係相當於該商業密封劑Tisseel®。
實施例6
此一實施例係從包含從一患者取得的血液之7個氣密試管(9ml)的樣本開始。將該等試管在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。進行離心作用的結果，容納在每個試管中的血液會被區分成幾個部分。該上層部分或是富含血小板血漿(PRP)部分，係被萃取至一白色試管，而可獲得總共24毫升血漿。將該血漿區分至4個試管內，每個試管中均含有6 ml的血漿。將該等樣本依據以下步驟來處理： -   活化劑控制組樣本：該PRP係在每1毫升的PRP中，以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本1：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。移除初始體積的2/3，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/3初始體積中。該調配物係將每1毫升的PRP以PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣來加以活化。 -   調配物樣本2：將該PRP之溫度升高至51℃。接著，將其在室溫下以580g 的速度離心8分鐘。移除初始體積的1/2，並將該血小板與蛋白質沉澱物重新懸浮在剩餘之1/2初始體積中。該調配物係藉著以下之活化劑/調配物體積比例來加以活化： 1.每1毫升的PRP(調配物2)中，具有PRP的上清液(333μl)與20μl的10%氯化鈣。 2.每1毫升的PRP(調配物2B)中，具有PRP的上清液(166.7μl)與10μl的10%氯化鈣。 -   Tisseel®樣本：依據製造商的說明進行購買與使用Tisseel®商業黏著劑與密封劑(Baxter S. L., Valencia, Spain)。
製備豬皮之生物樣本。該皮膚樣本係用通用黏著劑而黏接至一支架上。然後將兩個皮膚樣本黏接至先前描述之樣本上。使用以克計量的重量來測量該調配物的黏合強度。圖6顯示本發明在改善黏合強度上之新穎性與有效性，同時該黏合效能還可以藉著將所添加之活化劑的體積最佳化(調配物2B)，而進一步增加。該結果還顯示依據本發明的該調配物(調配物2B)之黏合強度，係相當於該商業密封劑Tisseel®的黏合強度。
無。
本發明的細節可見於隨附圖式中，這些圖式並非用於限制本發明之範圍： -圖1顯示了依據本發明的調配物之不同實施例的凝固時間。 -圖2顯示了依據本發明的調配物之不同實施例的黏合性。 -圖3顯示了活化劑與血小板對於依據本發明的調配物之凝固時間的影響。 -圖4顯示了活化劑與血小板對於依據本發明的調配物之不同實施例的黏合性之影響。 -圖5顯示了活化劑的影響以及依據本發明的調配物之不同實施例的有效性，以及其等與市售密封劑在黏合性上的比較。 -圖6顯示了依據本發明的調配物之不同實施例，相較於市售密封劑Tisseel®作為組織黏著劑之的有效性。
無。

Claims (12)

  1. 一種自初始血液組成物製備黏著劑配調配物之方法，其特徵在於其包含以下步驟： a)  取得含有血小板之初始血液組成物，其係為人類或動物來源； b) 將該初始血液組成物的溫度升高至40至55℃的溫度；及 c)  活化血小板並形成含血纖維蛋白之調配物。
  2. 如請求項1之方法，其中該初始血液組成物係為富含血小板的血漿。
  3. 如請求項1之方法，其中該初始血液組成物係為富含經釋放之生長因子的血漿。
  4. 如請求項1之方法，其中在步驟b)中之初始血液組成物的溫度係被升高至40至53℃的溫度。
  5. 如請求項1之方法，其進一步包含：在步驟b)之後，離心該血液組成物的額外步驟。
  6. 如請求項5之方法，其進一步包含：在步驟b)之後，移除該初始組成物之部分體積的額外步驟。
  7. 如請求項1之方法，其中該活化血小板的步驟包括：加入至少一種以下午物質：氯化鈣、凝血酶、葡萄糖酸鈉、膠原蛋白、血漿上清液、以及富含生長因子的血漿上清液。
  8. 如請求項1之方法，其中該調配物包含一或多種生物活化劑，其係選自於蛋白質、胜肽、核酸、多醣、脂質、非蛋白質有機物質、以及無機物質。
  9. 如請求項1之方法，其中該調配物包含一或多種可生物降解的聚合物，其係選自於透明質酸、透明質酸鹽、軟骨素4硫酸鹽、軟骨素6硫酸鹽、聚葡萄醣、矽膠、藻酸鹽、羥丙基甲基纖維素、幾丁質衍生物，較佳地為幾丁聚醣、黃原膠、瓊脂糖、聚乙二醇(PEG)、聚羥基伸乙基甲基丙烯酸酯(HEMA)、合成或天然蛋白質、膠原蛋白。
  10. 如請求項1之方法，其中該調配物包含一或多種有機聚合物，其係選自於聚己內酯、聚乙醇酸、聚乳酸、以及其等之共聚物。
  11. 如請求項1之方法，其中該調配物包含一或多種以下藥劑：抗生素、抗菌劑、抗癌藥、止痛藥、生長因子、激素。
  12. 如請求項1之方法，其中該調配物包含一或多種無機成分，其係選自於鈣鹽、鎂鹽及/或鍶鹽。
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