TW201436805A - 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑 - Google Patents

對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑 Download PDF

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Abstract

本發明係揭示決定GPC3標的治療劑療法對接受GPC3標的治療劑療法之前的患者或患者中之癌之有效性、或決定對患者繼續進行GPC3標的治療劑療法之方法，其係包含監測接受GPC3標的治療劑療法之前的患者及/或自接受過GPC3標的治療劑療法之患者中所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為特定值時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效、或決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法之方法。又，亦揭示用以對已決定GPC3標的治療劑療法為有效、或已決定繼續進行GPC3標的治療劑療法之患者進一步投與之GPC3標的治療劑或製劑。

Description

對GPC3標的治療劑療法為有效之患者投與的GPC3標的治療劑
本發明係提供決定GPC3標的治療劑療法對患者中之癌之有效性、或決定對患者繼續進行GPC3標的治療劑療法之方法；用以對已決定GPC3標的治療劑療法為有效、或已決定繼續進行GPC3標的治療劑療法之患者進一步投與之GPC3標的治療劑或製劑。
因肝細胞癌所造成的死亡，全年相當於60萬，世界之癌所致之死亡當中為第5高(非專利文獻1)。肝細胞癌之大半，在診斷為該疾病後1年以內會死亡。不幸地，肝細胞癌，診斷為可治癒之療法不太奏效的後期階段的例子係頻繁地發生。對如此患者之包含化學療法、化學塞栓術(chemical embolus)、燒灼或質子束療法之醫療處置的效果依然不充分。多數患者會有疾病復發，此伴隨著血管浸潤及多部位肝內轉移，而急速地往進行期進行，其5年存活率僅為7%(非專利文獻2)。可進行局部癌切除術之肝細胞癌患者雖預後較佳，但其5年存活率僅止於15% 至39%(非專利文獻3)。該技術領域中，係尋求對如此惡性疾病的肝細胞癌的新穎療法。
肝細胞癌被認為佔了日本之原發性肝癌90% 以上的原因。作為對如此之肝細胞癌的內科治療方法，例如使用化學療法劑，對於營養對腫瘤之供給路徑之肝動脈注入油性造影劑(碘化油)與抗癌劑、塞栓物質(Gelfoam)之混合物，使營養動脈閉塞，藉以選擇性的誘導肝細胞癌壞死的治療法即TAE(肝動脈塞栓療法)，此外有使用經皮乙醇注入法、經皮微波凝固療法、無線電波燒灼療法等伴隨有侵入的手法。又，作為化學療法劑，係進行了作為單獨使用5-FU(氟尿嘧啶)、UFT(尿嘧啶與替加氟)、MMC(絲裂黴素C)、DHAD(mitoxantrone、雙羥蒽醌)、ADR(阿黴素)、EPI(表阿黴素)、CDDP(順鉑)等、或與IFN(干擾素)之併用療法、全身化學療法之臨床試驗(非專利文獻4)。
其中，藉由將Raf/MEK/ERK訊息傳導在Raf 激酶的階段予以阻礙，阻斷癌細胞增殖，且藉由以VEGFR-2、VEGFR-3及PDGFR-β酪胺酸激酶為標的，發揮抗血管形成效果，相較於上述化學療法劑，顯示有利效果的經口活性型索拉非尼(Sorafenib)(Nexavar、BAY43-9006)已被認可。關於索拉非尼之有效性，係進行以進行性肝細胞癌為對象之2個第III期多設施共同安慰劑對照比較試驗(SHARP試驗及亞洲‧太平洋地域所實施的試驗)的探討。此等所有試驗中均觀察到生存期間延長，HR均為0.68。SHARP試驗中生存期間由7.9個月延長至10.7 個月。另一方面，於亞洲的試驗中，生存期間由4.2個月延長至6.5個月。但是，客觀上的治療反應率低，影像上至腫瘤進行為止的期間雖有延長(歐美之試驗由2.8個月延長至5.5個月、亞洲之試驗由1.4個月延長至2.8個月)，但至症狀惡化為止的期間未觀察到延長。亞洲人群組(cohort)中雖生存延長期間短，但此可認為是因亞洲地域相較於歐美，在疾病過程的稍晚時期開始治療之故(非專利文獻5、6)。
一般而言，伴隨肝癌之進行，會觀察到伴隨 有肝功能障礙的食欲不振、體重減少、全身倦怠感、右季肋部腫瘤觸知、右季肋部痛、腹部膨脹感、發熱、黃疸等肝癌特有的症狀。但是索拉非尼等化學療法劑，係有亦併發下痢或便秘、貧血、(致死之嚴重度的)引起感染或敗血症之程度的免疫系統抑制、出血、心毒性、肝毒性、腎毒性、食欲不振、體重減少等化學療法劑固有之副作用之應克服的課題。
一般而言，肝癌在初期雖觀察不到特別的初 期症狀，但隨著肝癌進行，會觀察到伴隨著肝功能障害之食欲不振、體重減少、全身倦怠感、右季肋部腫瘤觸知、右季肋部痛、腹部膨脹感、發熱、黃疸等肝癌特有的症狀。臨床上觀察到如此症狀會因為使用上述化學療法劑而放大。例如，驗出肝癌細胞之患者的食欲不振、及伴隨於此或與其獨立產生之體重減少等症狀，藉由對該患者投與化學療法劑，相較於非投與，有時會有更放大的情況。出 現如此症狀時，有時會不得不放棄使用該化學療法劑，上述症狀之放大，係妨礙化學療法劑之治療的要因。因此，就提高治療效果或接受治療的患者之QOL的改善等觀點而言，要求更優良之治療法的確立。
磷脂醯肌醇蛋白聚糖3(Glypican 3、GPC3)在 肝癌會頻繁地有高表現，因此GPC3可認為在有用於作為GPC3在肝癌中之功能鑑定、肝癌之治療標的或肝癌之診斷標的。
在前述情況下，正進行以GPC3作為肝癌治 療標的之治療劑的開發。含有對表現GPC3之細胞發揮抗體依賴性細胞傷害(Antibody-dependent cellular cytotoxicity、以下表述為「ADCC」)活性及/或補體依賴性細胞傷害(Complement-dependent cytotoxicity、以下表述為「CDC」)活性之抗GPC3抗體作為有效成分之肝癌治療劑已被開發(專利文獻1)。又，含有具有ADCC活性及CDC活性之人類化抗GPC3抗體作為有效成分之GPC3標的治療劑已被開發(專利文獻2)。進一步地，除了經增強ADCC活性之人類化抗GPC3抗體(專利文獻3、4)以外，含有具有ADCC活性及CDC活性，且經改善血漿中動態的GPC3抗體(專利文獻5)的GPC3標的治療劑已被開發。 又，亦發現藉由合併使用該等抗GPC3抗體與索拉非尼等化學療法劑的療法，會減弱索拉非尼等化學療法劑之單獨療法所帶來的副作用等，而且兩藥劑會顯示相乘效果(專利文獻6)，由提高治療效果或接受治療之患者之QOL的 改善等觀點而言，正在確立以GPC3標的治療劑為核心的更優良之肝癌的治療法。
另一方面，以GPC3為肝癌診斷標的之診斷 方法的開發亦正在進行。已知GPC3係對細胞表面之表現途中或表現後，於其特定的部位會藉由轉換酶(convertase)、磷脂酶D、Notum或未鑑定之機制而受到處理(非專利文獻7、8)。藉由利用如此現象，已開發含有結合於患者血漿中所存在之受到處理而分泌於血漿中之可溶型GPC3的抗原決定基之抗體的肝癌之診斷藥或診斷方法(專利文獻7)。又，含有結合於由患者單離之組織標本等所存在之受到處理後仍存在於細胞表面之停留型GPC3的抗原決定基之抗體的肝癌診斷藥或診斷方法已被開發(專利文獻8)。但是，以上診斷藥或診斷方法，係檢驗被檢驗患者中之肝癌的存在之方法，關於接受過GPC3標的治療劑療法之患者中，決定該療法之有效性的方法、或決定繼續對該患者進行GPC3標的治療劑療法之方法，則尚為未知。
本說明書中所引用的參考文獻係如下所示。此等文獻所記載的內容均作為參考而援用於本說明書中。再者，此等文獻之任一者均非相對於本說明書之先前技術。
〔先前技術文獻〕 〔專利文獻〕
[專利文獻1]WO2003/000883
[專利文獻2]WO2006/006693
[專利文獻3]WO2006/046751
[專利文獻4]WO2007/047291
[專利文獻5]WO2009/041062
[專利文獻6]WO2009/122667
[專利文獻7]WO2004/038420
[專利文獻8]WO2009/116659
〔非專利文獻〕
[非專利文獻1] Llovet JM, Burroughs A, Bruix J; Lancet (2003), 362, 1907-17
[非專利文獻2] Bosch FX, Ribes J, Cleries R; Gastroenterology (2004), 127, S5-16
[非專利文獻3] Takenaka K, Kawahara N, Yamamoto K, Kajiyama K, Maeda T, Itasaka H, Shirabe K, Nishizaki T, Yanaga K, Sugimachi K; Arch Surg (1996), 131, 71-6
[非專利文獻4] Yeo W, Mok TS, Zee B, Leung TW, Lai PB, Lau WY, Koh J, Mo FK, Yu SC, Chan AT, Hui P, Ma B, Lam KC, Ho WM, Wong HT, Tang A, Johnson PJ; J Natl Cancer Inst (2005), 97, 1532-8
[非專利文獻5] Llovet J, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, et al. Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma. New Eng. J. Med. (2008) 359, 378-90
[非專利文獻6] Cheng AL, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, et al. Efficacy and safety of sorefanib in patients in the Asia-Pacific region with advanced hepatocellular carcinoma: a phase III randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Lancet Oncol. (2009) 10, 25-34
[非專利文獻7] De Cat B, Muyldermans S-Y, Coomans C, Degeest G, Vanderschueren B, et al. Processing by proprotein convertases is required for glypican-3 modulation of cell survival, Wnt signaling, and gastrulation movements. J. Cell. Biol. (2003) 163, 625-635
[非專利文獻8] Traister A, Shi W and Filmus J. Mammalian Notum induces the release of glypicans and other GPI-anchored proteins from the cell surface. Biochem. J. (2008) 410, 503-511
本發明係鑑於如此情況而為者，其目的為提供接受過GPC3標的治療劑療法之患者中，決定該療法之有效性的方法、或決定對該患者繼續進行GPC3標的治療劑療法之方法。又，一併提供用以對已決定GPC3標的治療劑療法為有效、或已決定繼續進行GPC3標的治療劑療法之患者進一步投與之GPC3標的治療劑或製劑。
本發明者等人在如前述情況下進行努力研究 後，創作了當監測由接受過GPC3標的治療劑療法之患者單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為特定值時、或接受GPC3標的治療劑療法後該游離GPC3濃度增大時，決定該GPC3標的治療劑療法為有效、或決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法之方法。 又，創作了用以對已決定GPC3標的治療劑療法為有效、或已決定繼續進行GPC3標的治療劑療法之患者進一步投與之GPC3標的治療劑或製劑。若根據以往的見解，GPC3標的治療劑療法假定為有效時，亦推測血漿中檢測出之游離GPC3濃度會隨著治療的持續而經時地減少。但令人驚訝地，發現了自對GPC3標的治療劑療法具有顯示出反應之可能性的穩定疾病(Stable disease)患者中所單離之血漿中的游離GPC3濃度，與其說減少，毋寧說係穩定或有所增加。
更具體而言係提供以下發明。
本發明提供：
〔1〕一種決定GPC3標的治療劑療法對患者中之癌之有效性、或決定對患者繼續進行GPC3標的治療劑療法之方法，其係包含監測接受GPC3標的治療劑療法之前的患者及/或自接受過GPC3標的治療劑療法之患者中所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為 特定值時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效、或決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法之方法；〔2〕如〔1〕之方法，其中前述游離GPC3濃度，係自患者中所單離之全血試樣、血漿試樣、或血清試樣中的濃度、〔3〕如〔2〕之方法，其中前述自患者中所單離之生物學試樣中的前述游離GPC3濃度，係血漿試樣或血清試樣中的濃度；〔4〕如〔1〕至〔3〕中任一項之方法，其中前述游離GPC3之特定值係0.1ng/mL至100ng/mL之範圍；〔5〕如〔1〕至〔4〕中任一項之方法，其中前述游離GPC3濃度，係使用免疫學方法測定；〔6〕如〔1〕至〔5〕中任一項之方法，其中前述游離GPC3濃度，相較於在開始GPC3標的治療劑療法之前自該患者中所單離之生物學試樣中游離GPC3濃度而言，係有所增大；〔7〕如〔1〕至〔6〕中任一項之方法，其中前述患者係GPC3之組織免疫染色評分顯示高表現的患者；〔8〕如〔1〕至〔7〕中任一項之方法，其中前述癌為肝癌；〔9〕如〔1〕至〔8〕中任一項之方法，其中前述GPC3標的治療劑，係以癌患者之血中谷底濃度值成為200μg/ml以上的方式投與；〔10〕如〔1〕至〔9〕中任一項之方法，其中前述 GPC3標的治療劑係含有抗GPC3抗體作為有效成分之治療劑；〔11〕如〔10〕之方法，其中前述抗GPC3抗體，係具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞傷害(CDC)活性之抗體；〔12〕如〔10〕或〔11〕之方法，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下(1)至(5)中任一者；(1)分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(2)分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(3)分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(4)分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或(5)分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編 號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；之抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體；〔13〕如〔10〕至〔12〕中任一項之方法，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下任一者；(1)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域；(2)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域；(3)以序列編號：67表示之重鏈可變區域、及以序列編號：68表示之輕鏈可變區域；(4)以序列編號：69表示之重鏈可變區域、及以序列編號：70表示之輕鏈可變區域；(5)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列 編號：72表示之輕鏈可變區域；或(6)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：73表示之輕鏈可變區域；之抗體；〔14〕如〔10〕之方法，其中前述GPC3標的治療劑係含有細胞傷害性物質與抗GPC3抗體連結而得之抗體；〔15〕一種GPC3標的治療劑，其係用以投與至自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者；〔16〕一種GPC3標的治療劑，其係用以進一步投與至自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者；〔17〕如〔15〕或〔16〕之治療劑，其中前述游離GPC3濃度，係自癌患者所單離之全血試樣、血漿試樣、或血清試樣中之濃度；〔18〕如〔17〕之治療劑，其中自前述癌患者所單離之生物學試樣中的前述游離GPC3濃度，係血漿試樣或血清試樣中之濃度；〔19〕如〔15〕至〔18〕中任一項之治療劑，其中前述游離GPC3之特定值係0.1ng/mL至60ng/mL之範圍；〔20〕如〔15〕至〔19〕中任一項之治療劑，其中前述游離GPC3濃度，係使用免疫學方法測定；〔21〕如〔15〕至〔20〕中任一項之治療劑，其中接受GPC3標的治療劑療法之後，前述游離GPC3濃度係增 大；〔22〕如〔15〕至〔21〕中任一項之治療劑，其中前述患者係GPC3之組織免疫染色評分顯示高表現的患者；〔23〕如〔15〕至〔22〕中任一項之治療劑，其中前述癌患者係肝癌患者；〔24〕如〔15〕至〔23〕中任一項之治療劑，其中前述GPC3標的治療劑，係以癌患者之血中谷底濃度值成為200μg/ml以上的方式投與；〔25〕如〔15〕至〔24〕中任一項之治療劑，其中前述GPC3標的治療劑係含有抗GPC3抗體作為有效成分之治療劑；〔26〕如〔25〕之治療劑，其中前述抗GPC3抗體，係具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞傷害(CDC)活性之抗體；〔27〕如〔25〕或〔26〕之治療劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下(1)至(5)中任一者；(1)分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(2)分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3； (3)分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(4)分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或(5)分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；之抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體；〔28〕如〔25〕至〔27〕中任一項之治療劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下任一者；(1)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域；(2)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、 序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域；(3)以序列編號：67表示之重鏈可變區域、及以序列編號：68表示之輕鏈可變區域；(4)以序列編號：69表示之重鏈可變區域、及以序列編號：70表示之輕鏈可變區域；(5)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：72表示之輕鏈可變區域；或(6)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：73表示之輕鏈可變區域；之抗體；〔29〕如〔25〕之治療劑，其中前述GPC3標的治療劑係於抗GPC3抗體結合有細胞傷害性物質而得之抗體；〔30〕一種用以進行GPC3標的治療之製劑，其係包含對自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與的指示書；〔31〕一種用以進行GPC3標的治療之製劑，其係包含進一步對自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與的指示書；〔32〕如〔30〕或〔31〕之製劑，其中前述游離 GPC3濃度，係自癌患者所單離之全血試樣、血漿試樣、或血清試樣中之濃度；〔33〕如〔32〕之製劑，其中自前述癌患者所單離之生物學試樣中的前述游離GPC3濃度，係血漿試樣或血清試樣中之濃度；〔34〕如〔30〕至〔33〕中任一項之製劑，其中前述游離GPC3之特定值係0.1ng/mL至100ng/mL之範圍；〔35〕如〔30〕至〔34〕中任一項之製劑，其中前述游離GPC3濃度，係使用免疫學方法測定；〔36〕如〔30〕至〔35〕中任一項之製劑，其中接受GPC3標的治療劑療法之後，前述游離GPC3濃度係增大；〔37〕如〔30〕至〔36〕中任一項之製劑，其中前述患者係GPC3之組織免疫染色評分顯示高表現的患者；〔38〕如〔30〕至〔37〕中任一項之製劑，其中前述癌患者係肝癌患者；〔39〕如〔30〕至〔38〕中任一項之製劑，其中前述GPC3標的治療劑，係以癌患者之血中谷底濃度值成為200μg/ml以上的方式投與；〔40〕如〔30〕至〔39〕中任一項之製劑，其中前述GPC3標的治療劑係含有抗GPC3抗體作為有效成分之治療劑；〔41〕如〔40〕之製劑，其中前述抗GPC3抗體，係具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細 胞傷害(CDC)活性之抗體；〔42〕如〔40〕或〔41〕之製劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下(1)至(5)中任一者；(1)分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(2)分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(3)分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(4)分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或(5)分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；之抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體； 〔43〕如〔40〕至〔42〕中任一項之製劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下任一者；(1)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域；(2)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域；(3)以序列編號：67表示之重鏈可變區域、及以序列編號：68表示之輕鏈可變區域；(4)以序列編號：69表示之重鏈可變區域、及以序列編號：70表示之輕鏈可變區域；(5)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：72表示之輕鏈可變區域；或(6)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：73表示之輕鏈可變區域；之抗體； 〔44〕如〔40〕之製劑，其中前述GPC3標的治療劑係於抗GPC3抗體結合有細胞傷害性物質而得之抗體；〔45〕一種癌之治療方法，其係以對藉由如〔1〕至〔14〕之方法所決定之患者投與GPC3標的治療劑而進行。
依照本發明，可簡便且確實地決定GPC3標的治療劑療法有效與否、或應繼續進行GPC3標的治療劑療法與否。藉此，可提高GPC3標的治療劑療法之效果、改善接受治療之患者的QOL，實現更優越的癌治療。
[圖1A]係顯示以GPC3-IHC(染色法1)，於染色評分評估為高表現之組織染色像之圖。各染色像之上部所示的數字係表示患者編號。
[圖1B]係顯示以GPC3-IHC(染色法1)，於染色評分評估為陰性或低表現之組織染色像之圖。各染色像之上部所示的數字係表示患者編號。
[圖2]係顯示經投與GC33之20個病例之GC33投與期間的圖。1循環係表示GC33(每週投與1次)之4次投與。
[圖3]係顯示遵照以Autoclave法進行抗原活化之染 色法，經單離分為合計評分7以上、未達7之2群試樣的患者群之無惡化生存期間的相異圖。實線表示合計評分7以上之群(9例)、虛線表示未達7之群(7例)之無惡化生存期間。相對於合計評分未達7之群，7以上之群的風險比(hazard ratio)係0.376(95%信賴區間：0.116-1.227、p=0.0852)。
[圖4A]係顯示評估為GPC3高表現之群中，血清中所驗出之游離GPC3濃度與腫瘤組織之GPC3-IHC評分的相關關係之圖。縱軸表示血清中之游離GPC3濃度(ng/mL)，橫軸表示接受GPC3標的治療劑療法之後的經過日數(日)。
[圖4B]係顯示評估為GPC3低表現或陰性之群中，血清中所驗出之游離GPC3濃度與腫瘤組織之GPC3-IHC評分的相關關係之圖。縱軸表示血清中之游離GPC3濃度(ng/mL)，橫軸表示接受GPC3標的治療劑療法之後的經過日數(日)。
[圖5A]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。縱軸表示生存率，橫軸表示接受GPC3標的治療劑療法之後的無惡化生存期間(日)。實線表示可測定游離GPC3之群(6例)、虛線表示GPC3值未達測定極限(0.4ng/mL)之群(14例)的無惡化生存期間。
[圖5B]係顯示自由試驗期間中(包含GPC3標的治療 劑療法前後)之患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。縱軸表示生存率，橫軸表示接受GPC3標的治療劑療法之後的無惡化生存期間(日)。實線表示可測定自由接受GPC3標的治療劑療法之前或GPC3標的治療劑療法中的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3之群(9例)、虛線表示GPC3標的治療劑療法之前後，自由接受過該療法之患者所採取之血清中所單離之血清中GPC3值均未達測定極限(0.4ng/mL)之群(11例)的無惡化生存期間。
[圖6A]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。縱軸表示生存率，橫軸表示接受GPC3標的治療劑療法之後的無惡化生存期間(日)。實線表示可測定游離GPC3之群(8例)、虛線表示GPC3值未達測定極限(0.4ng/mL)之群(19例)的無惡化生存期間。相對於未達檢測極限之群，可檢測之群的風險比係0.265(95%信賴區間：0.077-0.914、p=0.0219)。
[圖6B]係顯示自由試驗期間中(包含GPC3標的治療劑療法前後)之患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。縱軸表示生存率，橫軸表示接受GPC3標的治療劑療法之後的無惡化生存期間(日)。實線表示可測定自由接受GPC3標的治療劑療法之前或GPC3標的治療劑療法中的 患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3之群(13例)、虛線表示GPC3標的治療劑療法之前後，自由接受過該療法之患者所採取之血清中所單離之血清中GPC3值均未達測定極限(0.4ng/mL)之群(14例)的無惡化生存期間。相對於未達檢測極限之群，可檢測之群的風險比係0.283(95%信賴區間：0.112-0.715、p=0.0038)。
[圖7A]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度少於中央值(1129.7pg/mL)的群中與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(34例)、虛線表示GC33之推測谷底濃度值少於中央值之群(GC33低暴露群：19例)、點線表示GC33之推測谷底濃度值為中央值以上之群(GC33高暴露群：34例)的無惡化生存期間。無惡化生存期間之中央值，於安慰劑群為83日、於GC33低暴露群為43.5日、於GC33高暴露群為124日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.803(p=0.397)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.425(p=0.010)。
[圖7B]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度為中央值(1129.7pg/mL)以上之群中，與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(24例)、虛線表示GC33低暴露群(40例)、點線表示GC33高暴露群(24例)之無惡化生存期間。無惡化生存期間之中央值於安 慰劑群為44日、於GC33低暴露群為46.5日、於GC33高暴露群為87日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.510(p=0.036)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.572(p=0.056)。
[圖7C]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度少於中央值(1129.7pg/mL)之群中，與該患者之全生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(34例)、虛線表示GC33低暴露群(19例)、點線表示GC33高暴露群(34例)之全生存期間。全生存期間之中央值於安慰劑群為203日、於GC33低暴露群為86日、於GC33高暴露群為295日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.590(p=0.200)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.329(p=0.008)。
[圖7D]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度為中央值(1129.7pg/mL)以上群中，與該患者之全生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(24例)、虛線表示GC33低暴露群(40例)、點線表示GC33高暴露群(24例)之無惡化生存期間。全生存期間之中央值於安慰劑群為121日、於GC33低暴露群為177日、於GC33高暴露群為308日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.303(p=0.005)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.280(p=0.002)。
[圖7E]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度顯示高於175pg/mL之值的群中，與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(51例)、虛線表示GC33低暴露群(56例)、點線表示GC33高暴露群(47例)之無惡化生存期間。無惡化生存期間之中央值於安慰劑群為51日、於GC33低暴露群為45日、於GC33高暴露群為124日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.597(p=0.0184)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.439(p=0.0003)。
[圖7F]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度顯示高於175pg/mL之值的群中，與該患者之全生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(51例)、虛線表示GC33低暴露群(56例)、點線表示GC33高暴露群(47例)之無惡化生存期間。全生存期間之中央值於安慰劑群為203日、於GC33低暴露群為141日、於GC33高暴露群為308日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.402(p=0.0037)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.238(p=<0.0001)。
[圖8A]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度少於中央值(1161.5pg/mL)之群中，與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(31例)、虛線 表示GC33低暴露群(20例)、點線表示GC33高暴露群(36例)之無惡化生存期間。無惡化生存期間之中央值於安慰劑群為82日、於GC33低暴露群為43日、於GC33高暴露群為124日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.713(p=0.197)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.392(p=0.004)。
[圖8B]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度為中央值(1161.5pg/mL)以上之群中，與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(27例)、虛線表示GC33低暴露群(39例)、點線表示GC33高暴露群(22例)之無惡化生存期間。無惡化生存期間之中央值於安慰劑群為45日、於GC33低暴露群為47日、於GC33高暴露群為87日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.588(p=0.092)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.626(p=0.116)。
[圖8C]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度少於中央值(1161.5pg/mL)之群中，與該患者之全生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(31例)、虛線表示GC33低暴露群(20例)、點線表示GC33高暴露群(36例)之全生存期間。全生存期間之中央值於安慰劑群為203日、於GC33低暴露群為86日、於GC33高暴露群為295日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係 0.508(p=0.100)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.287(p=0.002)。
[圖8D]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度為中央值(1161.5pg/mL)以上之群中，與該患者之全生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(27例)、虛線表示GC33低暴露群(39例)、點線表示GC33高暴露群(22例)之無惡化生存期間。全生存期間之中央值於安慰劑群為176日、於GC33低暴露群為177日、於GC33高暴露群為291日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.300(p=0.022)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.324(p=0.005)。
[圖8E]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度顯示高於259.7pg/mL之值的群中，與該患者之無惡化生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(50例)、虛線表示GC33低暴露群(55例)、點線表示GC33高暴露群(47例)之無惡化生存期間。無惡化生存期間之中央值於安慰劑群為46.5日、於GC33低暴露群為45.5日、於GC33高暴露群為124日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.567(p=0.010)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.467(p=0.0009)。
[圖8F]係顯示自由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者所採取之血清中所單離之血清中的游離GPC3濃度 顯示高於259.7pg/mL之值的群中，與該患者之全生存期間的相關關係之圖。實線表示安慰劑群(50例)、虛線表示GC33低暴露群(55例)、點線表示GC33高暴露群(47例)之無惡化生存期間。全生存期間之中央值於安慰劑群為185日、於GC33低暴露群為156日、於GC33高暴露群為308日。相對於安慰劑群，GC33高暴露群之風險比係0.414(p=0.0043)、相對於GC33低暴露群，GC33高暴露群之風險比係0.304(p=<0.0001)。
本說明書係包含本案之優先權基礎的日本特願2012-280304號說明書所記載之內容。
定義
本說明書中，若無其他特別之定義，關於本發明所用之化學用語及技術用語，係具有所屬技術領域中具有通常知識者一般所理解之意義。
不定冠詞
「一(a)」及「一(an)」之不定冠詞，在本發明中，係指一個或二個以上(亦即至少一個)在其不定冠詞之文法上的對象。例如「一(a)要素」，意指一個要素或二個以上之要素。
胺基酸
本說明書中，例如如表述為Ala/A、Leu/L、Arg/R、Lys/K、Asn/N、Met/M、Asp/D、Phe/F、Cys/C、Pro/P、Gln/Q、Ser/S、Glu/E、Thr/T、Gly/G、Trp/W、His/H、Tyr/Y、Ile/I、Val/V般，胺基酸係以1字編碼或3字編碼、或以其兩者來表述。
胺基酸之改變
為了改變抗原結合分子之胺基酸序列中之胺基酸，可適當採用定點誘導突變法(Kunkel等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82,488-492))或Overlap extension PCR等公眾所知之方法。又，作為取代為天然胺基酸以外之胺基酸的胺基酸之改變方法，亦可採用複數個公眾所知方法(Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.(2006)35,225-249、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(11),6353-6357)。例如，亦可適合使用包含非天然胺基酸結合於終止密碼子之一的UAG密碼子(琥珀(amber)密碼子)之互補的琥珀抑制型tRNA而得的tRNA之無細胞轉譯系統(Clover Direct(Protein Express))等。
本說明書中，表示胺基酸之改變部位時所用之「及/或」的用語之意義，係包含將「及」與「或」適當組合的任何組合。具體而言，例如「43位、52位、及/或105位之胺基酸被取代」係包含以下之胺基酸改變的變化； (a)43位、(b)52位、(c)105位、(d)43位及52位、(e)43位及105位、(f)52位及105位、(g)43位及52位及105位。
EU編號及Kabat編號
依照本發明中使用之方法，分配到抗體之CDR與FR之胺基酸位置，係遵照Kabat所規定(Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health,Bethesda,Md.,1987年及1991年)。本說明書中，抗原結合分子為抗體或抗原結合片段的情況時，可變區域之胺基酸係遵照Kabat編號，恆定區域之胺基酸係遵照準用Kabat之胺基酸位置的EU編號而表示。
生物學試樣
本發明中，「生物學試樣」之用語，係指由對象單離之組織或流體的試樣。作為如此試樣之非限定的一態樣，係包含例如血漿、血清、脊髓液、淋巴液、皮膚、氣管、腸管、及尿生殖道之外部切片、眼淚、唾液、痰、乳、全血或任何的血液區分、血液衍生物、血球、腫瘤、神經組織、器官或任何類型的組織、藉由洗淨所得之任何試樣(例如支氣管系者)、以及體外(in vitro)之細胞培養物的構成成分之試樣。
游離GPC3之濃度，可於自患者所單離之生物學試樣中測定。例如，可測定全血試樣中之游離GPC3 濃度、或血清或血漿等之血液區分之試樣(本說明書中，分別亦稱為全血試樣、血清試樣或血漿試樣)中之游離GPC3濃度。作為非限定的一態樣，例如可使用市售之Human Glypican-3 ELISA kit(BioMosaic Inc.)、或Enzyme-linked Immunosorbent Assay Kit For Glypican 3(GPC3)(USCN Life Science Inc.)，使用經EDTA處理之全血試樣、血清試樣或血漿試樣來測定患者之全血試樣、血清試樣或血漿試樣中之游離GPC3濃度。
「單離」意指由其天然的狀態經「人為的」 變化，亦即，為天然產生的情況時，係指由其本來的環境經變化及/或取出者。例如，生物中所存在之多核苷酸或多胜肽雖未經單離，但本發明中，將自於天然狀態下一起存在之材料所分離之相同多核苷酸或多胜肽，意指為經單離。進一步地，將藉由轉形、遺傳學操作或任何其他重組方法而導入於生物中之多核苷酸或多胜肽，即使尚存在於生物(可為生存亦可為非生存)內的情況，亦為經單離。
游離GPC3
本發明中，「游離GPC3」，係指未停留於表現GPC3之細胞的GPC3，包含於生體內或試驗管內之特定條件下可容易自停留於表現GPC3之細胞的GPC3解離之分泌型GPC3片段。作為「游離GPC3」之非限定的一態樣，可舉例序列編號：1規定之多胜肽所構成之GPC3之358位起向胺基末端側之多胜肽、序列編號：1規定之多胜肽所構 成之GPC3之374位起向胺基末端側之多胜肽、存在於羧基末端之GPI錨(anchor)被分解而游離之GPC3多胜肽及該等之片段等(專利文獻7)。為了特定游離GPC3之構造，所屬技術領域中具有通常知識者可適當選擇公眾所知之手法。作為非限定之態樣，除了藉由上述專利文獻7記載之方法等直接檢測患者或模式動物之血清或血漿中存在的游離GPC3並解析其構造之方法以外，亦可適當使用例如藉由使轉換酶、磷脂酶D或Notum等之解離游離GPC3之酵素作用於表現在試驗管內培養的細胞之GPC3，檢測所產生之游離GPC3並解析其構造之方法等(J.Cell.Biol.(2003)163(3),625-635等)。
游離GPC3濃度之測定方法
游離GPC3濃度可藉由選自下述所成群組中之一個以上之方法來測定：NMR(核磁共振)或質譜(MS)等之分光法；SELDI(-TOF)、MALDI(-TOF)、利用1D凝膠之分析、利用2D凝膠之分析、液體層析(例如、高壓液體層析(HPLC)或低壓液體層析(LPLC))、薄層層析、及利用LC-MS之技術。若列舉適切的LCMS技術，可舉例ICAT(註冊商標)(Applied Biosystems)或iTRAQ(註冊商標)(Applied Biosystems)。又，亦可適當採用檢測將游離GPC3經適當酵素進一步消化所得之游離GPC3之進一步更小片段之方法。
游離GPC3之測定，可藉由直接或間接的檢 測方法來實施。游離GPC3，可透過酵素、結合、受體或輸送蛋白質、抗體、胜肽、適合體(aptamer)或寡核苷酸、或能夠專一性結合游離GPC3之任意的合成化學上的受體或化合物等與配位子或配位子類的相互作用，直接或間接地檢測。該配位子可被發光標識、螢光標識或放射性標識、及/或親和性標籤(tag)等之可檢測之標識修飾。
免疫學方法
作為游離GPC3之適合的測定方法，可舉例使用與存在於GPC3之抗原決定基結合的抗體之免疫學方法。作為此免疫學方法，可列舉例如酵素免疫測定法(ELISA、EIA)、螢光免疫測定法(FIA)、放射免疫測定法(RIA)、發光免疫測定法(LIA)、酵素抗體法、螢光抗體法、免疫層析法、免疫比濁法、乳膠比濁法、乳膠凝集反應測定法等。又，本發明之免疫學方法中之測定，可藉由手動操作之手法進行、亦可使用分析裝置等裝置進行。
本發明中之免疫學方法，可遵照例如三明治法等公眾所知之方法進行。例如使固定化於載子之第一抗體、與藉由生物學試樣及標識物質所修飾之第二抗體同時或依序反應。藉由上述反應，形成固定化於載子之第一抗體、藉由游離GPC3及標識物質所修飾之第二抗體的複合體，藉由將此複合體中所含之連結於第二抗體的標識物質定量，可測定生物學試樣中所含之游離GPC3的量(濃度)。
例如，酵素免疫測定法的情況時，適合使用 固定化有第一抗體之微孔盤、經系列稀釋之生物學試樣、經HRP等酵素所修飾之第二抗體、洗淨緩衝液、及含有HRP等之接受酵素反應之基質的溶液。於非限定的測定之一態樣中，在其最適條件下使基質與修飾第二抗體之酵素反應，可藉由光學方法等測定其酵素反應生成物之量。 又，螢光免疫測定法的情況時，可適合使用固定化有第一抗體之光波導、經系列稀釋之生物學試樣、經螢光物質所修飾之第二抗體、洗淨緩衝液。於非限定的測定之一態樣中，藉由對修飾第二抗體之螢光物質所照射之激發光，可測定該螢光物質所發出之螢光強度。
進一步地放射免疫測定法的情況時，係測定 放射性物質之放射線量。又，發光免疫測定法的情況時，係測定發光反應系統之發光量。又，免疫比濁法、乳膠比濁法、乳膠凝集反應測定法等的情況時，係藉由終點(endpoint)法或速率(rate)法測定穿透光或散射光。又，藉由目視測定免疫層析法等的情況時，係目視測定試驗線上所出現之標識物質的顏色。再者，可適當使用分析裝置等機器，以取代此目視測定。
本發明之免疫學方法中，可將固定化於載子 之第一抗體與載子，藉由物理吸附法、化學鍵結法或合併使用此等等之方法，使其吸附、結合。藉由物理吸附法將抗體固定化之方法，可適當使用公眾所知方法。可列舉例如，使抗體與載子在緩衝液等溶液中混合並接觸之方法、 使溶解於緩衝液等之抗體與載子接觸之方法等。又，藉由化學鍵結法亦可將抗體固定化於載子。例如可舉例使抗體與載子，與戊二醛、碳二醯亞胺、亞胺酸酯(imidoester)或馬來醯亞胺等二價性之交聯試藥混合並接觸，使抗體與載子雙方的胺基、羧基、硫醇基、醛基、或羥基等反應的方法等。固定化時，為了抑制非專一性反應、或使抗體固定化之載子的自然凝集等，而必須進行處理時，可藉由公眾所知方法進行固定化後之處理。可列舉例如使牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、明膠、蛋白白蛋白或該等之鹽等之蛋白質、界面活性劑或脫脂粉乳等接觸、被覆於經固定化有抗體之載子的表面或內壁面之方法等。
本發明之免疫學方法中，可將經標識物質所 修飾之第二抗體與標識物質，藉由物理吸附法、化學鍵結法或合併使用該等等之方法，予以吸附、結合。藉由物理吸附法，使標識物質與抗體結合之方法，可適當使用公眾所知之方法。可列舉例如使抗體與標識物質在緩衝液等溶液中混合並接觸之方法、使溶解於緩衝液等之抗體與標識物質接觸的方法等。例如，標識物質為金膠體(gold colloid)或乳膠時，物理吸附法為有效，可藉由使抗體與金膠體在緩衝液中混合並接觸，得到具有金膠體標識之抗體。又，藉由化學鍵結法亦能夠以標識物質修飾抗體。例如可舉例使抗體與標識物質，與戊二醛、碳二醯亞胺、亞胺酸酯或馬來醯亞胺等二價性之交聯試藥混合、接觸，使抗體與標識物質雙方之胺基、羧基、硫醇基、醛基、或羥 基等反應的方法等。例如，標識物質為螢光物質或酵素、或化學發光物質的情況時，化學鍵結法為有效。修飾時，為了抑制非專一性反應、或經標識物質所修飾之抗體的自然凝集等，而必須進行處理時，可藉由公眾所知方法來進行標識後的處理。可列舉例如使牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、明膠、蛋白白蛋白或其鹽等蛋白質、界面活性劑或脫脂粉乳等，與結合有標識物質之抗體接觸並被覆之方法等。
作為標識物質，酵素免疫測定法的情況時， 可使用過氧化酶(POD)、鹼性磷酸酯酶(ALP)、β-半乳糖苷酶、尿素酶、觸酶(catalase)、葡萄糖氧化酶、乳酸脫氫酵素、或澱粉酶等。又，螢光免疫測定法的情況時，可使用螢光異硫氰酸鹽(FITC)、四甲基玫紅異硫氰酸鹽、取代玫紅異硫氰酸鹽、二氯三嗪異硫氰酸鹽、花青素、或部花青素等。又，放射免疫測定法的情況時，可使用氚、碘125或碘131等。發光免疫測定法的情況時，可使用發光胺系、螢光素酶系、吖啶鎓酯系、或二氧雜環丁烷化合物系等。又，免疫層析法、免疫比濁法、乳膠比濁法、乳膠凝集反應測定法的情況時，可使用由聚苯乙烯、苯乙烯-苯乙烯磺酸鹽共聚物、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、氯乙烯-丙烯酸酯共聚物、乙酸乙烯酯-丙烯酸共聚物、聚丙烯醛、苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯-縮水甘油基(甲基)丙烯酸共聚物、苯乙烯-丁二烯共聚物、甲基丙烯酸聚合物、丙烯酸聚合物、乳膠、明膠、微脂體、微膠襄、二 氧化矽、氧化鋁、碳黑、金屬化合物、金屬、金屬膠體、陶瓷、或磁性體等材質所成之微粒子。
本發明之免疫學方法中所使用之載子，可適 當使用由聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚乙烯基甲苯、聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、耐綸、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯醯胺、乳膠、微脂體、明膠、洋菜糖、纖維素、交聯洋菜糖(Sepharose)、玻璃、金屬、陶瓷、或磁性體等材質所成之珠、微孔盤、試驗管、桿、膜、或試驗片等形狀之固相載子。
藉由本發明，亦提供含有本發明之免疫學方 法所使用之成分的測定套組。該測定套組中，係含有至少一種之與存在於GPC3之抗原決定基結合的抗體。該抗體係能夠以前述之固定化於載子的狀態提供、亦可與載子個別地提供。又，該套組中，可追加地含有經系列稀釋之游離GPC3之標準液。該測定套組中，可進一步含有至少一種與和前述存在於GPC3之抗原決定基不同的抗原決定基結合之抗體。關於本發明之免疫學測定套組所使用之測定原理等，係與前述免疫學方法相同。本發明之免疫學測定套組中，可使用各種水系溶劑作為溶劑。作為此水系溶劑，可列舉例如純水、生理食鹽水、或TRIS緩衝液、磷酸緩衝液或磷酸緩衝液生理食鹽水等各種緩衝液。作為此緩衝液之pH，可選擇適當適切的pH。pH值並無特殊限定，通常係選擇pH3~12範圍內之pH來使用。
又，本發明之免疫學測定套組中，於前述成 分以外，可適當含有牛血清白蛋白(BSA)、人類血清白蛋白(HSA)、酪蛋白或其鹽等之蛋白質、各種鹽類、各種糖類、脫脂粉乳、正常兔血清等之各種動物血清、疊氮化鈉或抗生素等之各種防腐劑、活性化物質、反應促進物質、聚乙二醇等之感度增加物質、非專一性反應抑制物質、或非離子性界面活性劑、兩性界面活性劑或陰離子性界面活性劑等之各種界面活性劑等的一種或二種以上。此外，於測定試藥中含有此等時的濃度並無特殊限定，較佳為0.001~10%(W/V)、特別係由0.01~5%(W/V)的範圍中選擇適當適合的濃度。
進一步地，本發明之免疫學測定套組中，於 前述成分以外，亦可與其他試藥組合。作為其他試藥，可列舉例如緩衝液、適合生物學試樣之稀釋液、試藥稀釋液、含有標識物質之試藥、含有會生成顯色等訊息之物質的試藥、含有與顯色等訊息生成相關之物質的試藥、含有用以進行校正(Calibration)之物質的試藥、或含有用以進行精度管理之物質的試藥等。
本發明之免疫學測定套組之形態並無特殊限 定，為了短小時且簡便地進行測定，亦可提供作為本發明之免疫學測定套組之構成成分成為一體的一體型之診斷套組。上述一體型之診斷套組，可列舉例如ELISA套組、螢光免疫測定套組、免疫層析套組等。例如作為ELISA套組之形態，係包含固定化有第一抗體之微孔盤、經系列稀釋之游離GPC3標準液、經HRP等酵素所修飾之第二抗 體、洗淨緩衝液、及該酵素反應之基質溶液等。又，螢光免疫測定套組的情況時，係包含固定化有第一抗體之光波導、經系列稀釋之游離GPC3標準液、經螢光物質所修飾之第二抗體、及洗淨緩衝液等。又，免疫層析套組的情況時，可列舉於反應盒內容納有膜，於該膜上的一端(下游側)固定化有前述第一抗體。又，膜上之相反的一端(上游側)，安裝有展開液，於其附近的下游側，係配置有添加了上述標識劑之基質的墊片，於膜的中間部配置有添加了如前述方式所標識之第二抗體的墊片之態樣等。
又，本發明中，作為用以檢測組織中GPC3 之表現量的生物學試樣，可適合列舉被檢驗體試樣。較佳之被檢驗體試樣，係由被檢驗體所得到之組織，更佳為被檢驗體之肝癌或肝細胞癌組織。作為採取肝癌或肝細胞癌組織之方法，可適合使用公眾所知方法之活體組織切片(biopsy)。肝活體組織切片係指細長的針直接由皮膚表面刺入肝臟，採取肝臟組織的方法。通常，針所穿刺之部位係在右胸下部之肋間。於術前使用超音波檢查裝置確認穿刺部之安全性後，消毒穿刺部。再者由皮膚至肝臟表面係麻醉的對象，穿刺部之皮膚切開小切口後，將穿刺針穿刺。
為了於顯微鏡下藉由穿透光線觀察組織試 樣，組織試樣係以使顯微鏡所使用之光線充分透過的程度而切薄片。作為切薄片之前階段，係固定組織試樣。亦即，藉由使組織‧細胞之蛋白質引起脫水或變性而凝固， 使構成組織之細胞迅速死亡，而穩定化及不溶化其構造。首先，作為固定對象之組織試樣，係以手術用刀等刀具切取適於製作石蠟包埋切片之大小及形狀的片段。接著，將該片段浸漬於用以實施固定之試藥即固定液中。作為固定液，適合使用甲醛、更佳為中性緩衝甲醛。中性緩衝甲醛之濃度係隨著組織試樣之特性或物性而適當選擇。濃度可於1~50%、較佳為5~25%、更佳為10~15%之間適當變更來使用。使用真空泵，對浸漬有組織試樣之固定液適當脫氣。藉由將組織標本於常壓及室溫之條件下，放置於固定液中數小時，而實施固定。固定所需之時間，可於1小時至7日、較佳為2小時至3日、又較佳為3小時至24小時、更佳為4小時至16小時之範圍適當選擇。固定後係於磷酸緩衝液等中進一步適當浸漬數小時(可於2小時至48小時、較佳為3小時至24小時、更佳為4小時至16小時之範圍適當選擇之時間)。
接著，可使用凍結切片法或石蠟切片法，由施以固定之組織試樣中適合地製作切片。凍結切片法之適合的例子，可列舉將組織投入O.C.T.compound(Miles.Inc)中並冷凍後，使用低溫恆溫器(冷凍切片製作裝置)切薄片的方法。石蠟切片法中，藉由將固定所施用之組織試樣浸漬於包埋劑並硬化，而賦予均勻且適切的硬度。包埋劑可適合使用石蠟。使用乙醇將固定所施用之組織試樣脫水。具體而言，將組織試樣依序浸漬於70%乙醇、80%乙醇、100%乙醇中，藉以將該組織試樣脫水。浸漬所需之 時間及次數，可於1小時至數日及1次至3次之範圍中適當選擇。又，亦可於室溫或4℃浸漬，但於4℃浸漬時，浸漬時間係為一整夜等，其時間越長較佳。接著將其液相取代為二甲苯後，藉由石蠟包埋組織試樣。其液相取代為二甲苯所需之時間，可於1小時至數小時之範圍適當選擇。此時，可於室溫取代、亦可於4℃取代，但於4℃取代時，取代之時間係為一整夜等，其時間越長較佳。石蠟包埋所需之時間及次數，可於1小時至數小時及1次至4次之範圍適當選擇。此時，可於室溫包埋、亦可於4℃包埋，但於4℃包埋時，包埋之時間係為一整夜等，其時間越長較佳。又，可藉由使用將石蠟包埋反應自動化處理的石蠟包埋裝置(EG1160、Leica等)，適合地以石蠟包埋組織試樣。
藉由將經如上述方式以石蠟包埋之組織試樣 接著於基台，以製作「石蠟塊」，藉由微切片機，將此石蠟塊切薄片為由1至20μm之厚度中選擇之期望厚度。藉由將經切薄片之組織切片靜置於透過性之支持體即載玻片上以固定接著。此情況時，為了防止組織切片之剝離，於載玻片塗佈0.01%聚-L-離胺酸(Sigma)並乾燥之載玻片亦可適合使用。將經固定接著之組織切片，風乾由數分鐘至1小時之間中所選擇的適當時間。
抗原活化
較佳之態樣中，係將因甲醛固定使與抗體之反應性減 弱的抗原之反應性予以活化。本發明中，亦可應用蛋白酶抗原活化法(PIER法)、亦可應用熱誘導抗原活化法(HIER法)。又，於非限定的一態樣中，亦可對如下述所示方式配製的「可視為相同之二個組織試樣」當中之一個試樣，應用PIER法，對另一試樣應用HIER法，將與抗體反應時兩者間的染色程度之差異予以數值化。
於非限定的一態樣中，係準備一組於「生物 學試樣」之項目中所示般配製，且安裝於透過性之支持體上的二個組織試樣。此該組織試樣，較佳為組織上可視為相同之二個組織試樣。「可視為相同」，意指相比較的二個組織試樣，於該組織試樣所由來的被檢驗體試樣中大致由相同之細胞或組織所構成。例如，作為鄰接的切片被配製之二個組織試樣，係可視為相同之二個組織試樣。本發明中若無特別記載，「可視為相同之二個組織試樣」係指作為鄰接的切片被配製之二個組織試樣，但此外，即使未作為鄰接的切片被配製，只要構成二個組織試樣之細胞或組織的構成，在該二個組織試樣間可視為相同者，則為「可視為相同之二個組織試樣」。細胞或組織之構成在該二個組織試樣間可視為相同的情況時，例如適合地舉例：(1)組織切片中之平面座標上於相同位置存在有來自相同細胞之細胞的切片的情況、(2)該細胞之切片在該平面座標上之相同位置存在的比例為至少50%以上、較佳為60%以上、又較佳為70%以上、更佳為80%以上、又更佳為90%以上、特佳為95%以上的情況等。
熱誘導抗原活化法，可適當使用微波之加熱 方法或熱壓釜(autoclave)之加熱方法、或煮沸處理之加熱方法等。以780W之輸出進行煮沸處理，使液溫保持於約98℃的情況時，處理等活化所需要之時間係由5分鐘~60分鐘之間適當選擇，例如為10分鐘。抗原之活化處理，除了10mM檸檬酸鈉緩衝液之外，可於市售之Target Retrieval Solution(DakoCytomation)等中進行。下述實施例中係使用Target Retrieval Solution。只要作為活化處理之結果，抗GPC3抗體所認識之抗原中的抗原決定基係獲得與抗體之結合性，可檢測後述之抗原與抗體的複合體者，任意緩衝液、水溶液均可適合使用。
蛋白酶抗原活化法中所使用之蛋白酶，其種 類或由來並無特殊限定，可適當選擇一般可獲得之蛋白酶來使用。所使用之蛋白酶的例子，可適合列舉0.01N鹽酸中0.05%濃度之胃蛋白酶、或進一步含有pH7.6之Tris緩衝液中0.01%濃度之CaCl2的0.1%濃度之胰蛋白酶、含有10mM之EDTA及0.5%之SDS的pH7.8之10mM Tris鹽酸緩衝液中1~50μg/ml濃度之蛋白酶K等。再者使用蛋白酶K時，其反應液之pH係由6.5至9.5之間適當選擇，亦可適當利用SH試藥、胰蛋白酶阻止劑或胰凝乳蛋白酶阻止劑。作為如此之適合的蛋白酶之具體例子，亦可列舉Histofine HER2套組(MONO)(Nichirei Bioscience)所添附之蛋白酶。蛋白酶抗原活化，通常係在37℃進行，反應溫度可於25℃至50℃之範圍內適當變更。在37℃進行蛋白 酶抗原活化時，反應時間係於例如1分鐘至5小時之間適當選擇，例如為15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時等。活化處理結束後，藉由洗淨用緩衝液洗淨施以該處理之組織試樣。洗淨用緩衝液可適合使用PBS(Phosphate buffer saline)以外、亦可適合使用Tris鹽酸緩衝液。通常，作為洗淨條件，係採用於室溫實施3次5分鐘洗淨的方法，但洗淨時間及溫度可適當變更。
組織試樣與抗GPC3抗體之反應
對經施以熱誘導抗原活化法之抗原活化處理的組織試樣及/或經施以蛋白酶抗原活化法之抗原活化處理的組織試樣，使後述抗GPC3抗體作為一次抗體而反應。該反應係在於欲使抗GPC3抗體認識抗原中之抗原決定基而形成抗原抗體複合體所適當之條件下實施。通常，該反應係於4℃實施一整夜、或於37℃實施1小時，但反應條件在於欲使抗體認識抗原中之抗原決定基而形成抗原抗體複合體所適當之範圍可作適當變更。例如，反應溫度可於4℃至50℃的範圍內變更、反應時間可於1分鐘至7日之間變更。於低溫實施反應的情況時，較佳係長時間反應。一次抗體反應結束後，以洗淨用緩衝液洗淨組織試樣。洗淨用緩衝液可適合使用PBS(Phosphate buffer saline)以外，亦可適合使用Tris鹽酸緩衝液。通常，作為洗淨條件，雖採用實施3次於室溫洗淨5分鐘之方法，但洗淨之時間及 溫度可適當變更。
接著，對經施以一次抗體反應之組織試樣， 使認識一次抗體之二次抗體反應。通常，係使用經由用以使二次抗體可見化之標識物質預先標識之二次抗體。作為標識物質，可適合列舉FITC(螢光異硫氰酸鹽)或Cy2(Amersham)、Alexa488(Molecular Probe)等之螢光色素；過氧化酶或鹼性磷酸酯酶等之酵素；或金膠體等。
與二次抗體之反應，係在欲使抗GPC3抗體 與認識該抗GPC3抗體之二次抗體形成抗原抗體複合體所適當的條件下實施。通常，該反應係於室溫或37℃實施30分鐘至1小時，但可於欲使抗GPC3抗體與二次抗體形成抗原抗體複合體所適切的範圍中作適當變更。例如，反應溫度可於4℃至50℃之範圍內變更、反應時間可於1分鐘至7日之間變更。於低溫實施反應時，較佳為長時間反應。二次抗體反應結束後，以洗淨用緩衝液洗淨組織試樣。洗淨用緩衝液可適合使用PBS(Phosphate buffer saline)以外，亦可適合使用Tris鹽酸緩衝液。通常，作為洗淨條件，係採用實施3次於室溫5分鐘之洗淨的方法，但洗淨時間及溫度可適當變更。
接著，對經施以二次抗體反應之組織試樣， 使用以使標識物質可見化的物質反應。使用過氧化酶作為二次抗體之標識物質時，組織試樣係定溫培置(incubate)於反應液中，該反應液係使0.02%過氧化氫水與經pH 7.2之0.1M TRIS鹽酸緩衝液調整為0.1%濃度的DAB(二胺 基聯苯胺)溶液在正欲定溫培置前等量混合而得。於DAB以外，可適當選擇DAB-Ni或AEC+(以上、DAKO)等之顯色基質。定溫培置過程中，不時在顯微鏡下觀察顯色程度，於確認了適切顯色的階段時，將組織試樣浸漬於PBS，藉以停止可見化反應。
使用了鹼性磷酸酯酶作為二次抗體之標識物 質時，組織試樣係於BCIP(5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸)/NBT(四唑氮藍、Nitroblue tetrazolium)(Zymed)基質溶液(於含有10mM濃度之MgCl2及28mM濃度之NaCl的pH9.8之50mM碳酸鈉緩衝液中，溶解有0.4mM濃度之NBT及0.38mM濃度之BCIP者)中定溫培置。又，於BCIP及NBT以外，亦可適當使用Permanent Red、Fast Red、或Fuchsin+(以上、DAKO)等。定溫培置之前，亦可與含有1mM濃度之內在性鹼性磷酸酯酶阻止劑即氯化左旋咪唑衍生物(levamisole chloride)(Nacalai Tesque)、0.1M氯化鈉及50mM氯化鎂的0.1M TRIS-鹽酸緩衝液(pH 9.5)，在室溫預定溫培置1分鐘至數小時。定溫培置之過程中，不時在顯微鏡下觀察，在觀察到反應最終產物之紫色的甲(formazan)沈積的階段，將組織試樣以水洗或含有2%聚乙烯醇之TBS使反應停止後，以TBST(含有0.1%之Tween20的TBS)洗淨。使用金膠體作為二次抗體之標識時，係以銀增感，使金屬銀附著於金粒子，藉以使金膠體可見化。銀增感之方法，係所屬技術領域中具有通常知識者所公眾所知。
使用FITC(螢光異硫氰酸鹽)或 Cy2(Amersham)、Alexa488(Molecular Probe)等螢光色素作為二次抗體之標識物質時，不需要可見化物質之反應步驟，而係照射該螢光物質之激發波長的光，可藉由使用螢光顯微鏡，適當檢測出所放出的光。
組織免疫染色評分
本發明之非限定的一態樣中，除了游離GPC3濃度以外，亦由以上述方法所檢測出之組織中GPC3表現量，來決定GPC3標的治療劑療法係有效、或亦提供決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法之方法。非限定的一態樣中，以上述方法所檢測出之組織中GPC3表現，例如係藉由下述所舉例之非限定的方法而予以數值化。本發明中，如此方式數值化之組織中GPC3之表現量，係稱為「GPC3之組織免疫染色評分」。
將遵照WO2009116659記載之方法，依照表1 所示基準所算出之陽性細胞率(Positive cell rate：PR)、細胞質或細胞膜之染色強度(Staining intensity of cytoplasm：SI-cp,Staining intensity of cell membrane：SI-cm)及細胞膜染色模式(Staining pattern of cell membrane：Sp-cm)的各評分，再依式1及式2之計算式加算而得之評分，乃作為本發明之非限定之GPC3組織免疫染色評分(姑且稱為「複合評估評分1」)的例示。
(Sp-Cm評估時，係評估於使用4倍或10倍之物鏡的顯微鏡檢查下，視野中細胞之染色)[數1]IHC total=PR+SI-Cp+SI-Cm+Sp-Cm
[數2]IHC cm=PR+SI-Cm+Sp-Cm
此外，已知有將細胞膜、或細胞質內之染色 強度分類為0~3，且以顯示各自染色強度之細胞比例為基準所算出的H評分(文獻：KS.McCarty Jr.et al.,Use of a monoclonal anti-Estrogen receptor antibody in the immunohistochemical evaluation of human tumors.Cancer Res.Suppl.(1986)46,4244s-4248s)。
另一方面，以膜、以及細胞質之染色強度、 染色比例為基準，例示了分類為0~3+之下述評分演算法及基於同演算法而得之評估評分(複合評估評分2)。
本發明中，作為「GPC3之組織免疫染色評 分」，可為例如該等複合評估評分1、H評分、複合評估評分2等之單獨，或組合該等使用。於非限定之一態樣，「GPC3之組織免疫染色評分」可使用複合評估評分1、於其他非限定之一態樣，「GPC3之組織免疫染色評分」可使用複合評估評分2。
GPC3標的治療劑
本發明中，「GPC3標的治療劑」之用語，係指造成包含由GPC3所媒介之訊息路徑的GPC3之生物學活性之阻斷、抑制、阻止、或減低；或造成對表現GPC3之細胞 的細胞傷害之任何分子。「標的治療」之用語，亦非暗示具有生物學作用之特定機制，而是包含GPC3之藥理學、生理學、及生化學相互作用當中具有可能性之全部作用的概念。GPC3標的治療劑之例子，係包含：(1)對結合於GPC3之配位子之GPC3結合的拮抗阻止劑或非拮抗阻止劑，因而干涉GPC3與其配位子之結合的作用物質、(2)雖未干涉GPC3與其配位子之結合，作為取代地，係使GPC3對其配位子之結合所產生的活性阻止或減少之作用物質、(3)使GPC3之表現減少的作用物質、(4)可對表現GPC3之細胞誘發細胞傷害活性的作用物質。作為配位子之非限定的一態樣，可舉例wnt(Cancer Res.(2005)65,6245-6254)、IGF-II(Carcinogenesis(2008)29(7),1319-1326)或Fibroblast Growth Factor2(Int.J.Cancer(2003)103(4),455-465)等。作為如此作用物質之非限定的一態樣，可包含抗體(包含其抗原結合區域)、核酸分子(反意或RNAi分子等)、胜肽、非胜肽低分子有機物等。
作為本發明之GPC3標的治療劑所使用的非 胜肽性之低分子有機物之非限定的一態樣，可舉例作用於甲基化抑制基因之非胜肽性低分子喹啉衍生物(WO2008/046085)等。又，亦可舉例誘發細胞傷害性T細胞之細胞傷害活性的HLA-A2限制性GPC3胜肽144-152(序列編號：2)或HLA-A24限制性GPC3胜肽298-306(序列編號：3)(Clin.Cancer Res.(2006)12(9),2689-2697)等。
抗GPC3抗體
作為本發明之GPC3標的治療劑所使用的抗GPC3抗體之非限定的一態樣，可舉例於(BioMosaic公司之型錄編號B0134R所販售之)1G12抗體(WO2003/100429)上連結有細胞傷害性物質的抗體藥物複合體(Antibody drug conjugate(ADC))(WO2007/137170)。
又，作為與上述相異之非限定的一態樣，可 舉例WO2006/006693或WO2009/041062記載之人類化抗GPC3抗體。亦即，作為本發明之GPC3標的治療劑，可使用含有分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3的人類化抗GPC3抗體。該人類化抗GPC3抗體製作時，可適當選擇與序列編號：10表示之重鏈框架(framework)序列或序列編號：11表示之輕鏈框架序列的序列同一性高的人類框架序列後，作為人類化時的模板使用。
作為進一步相異之非限定的一態樣，可使用 含有分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3的抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標 的治療劑。該人類化抗GPC3抗體製作時，可適當選擇與序列編號：18表示之重鏈框架序列或序列編號：19表示之輕鏈框架序列的序列同一性高的人類框架序列後，作為人類化時的模板使用。
作為另外相異之非限定的一態樣，可使用含 有分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3的抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標的治療劑。該人類化抗GPC3抗體製作時，可適當選擇與序列編號：26表示之重鏈框架序列或序列編號：27表示之輕鏈框架序列的序列同一性高的人類框架序列後，作為人類化時的模板使用。
作為進而另外相異之非限定的一態樣，可使 用含有分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3的抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標的治療劑。該人類化抗GPC3抗體製作時，可適當選擇與序列編號：34表示之重鏈框架序列或序列編號：35表示之輕鏈框架序列的序列同一性高的人類框架序列後，作為人類化時的模板使用。
又，作為另外相異之非限定的一態樣，可使 用含有分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3的抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標的治療劑。該人類化抗GPC3抗體製作時，可適當選擇與序列編號：42表示之重鏈框架序列或序列編號：43表示之輕鏈框架序列的序列同一性高的人類框架序列後，作為人類化時的模板使用。
又，作為進而另外相異之非限定的一態樣， 可使用含有由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域的人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標的治療劑。 作為其他非限定的一態樣，可使用含有由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域；以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編 號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域的人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標的治療劑。
又，作為其他相異之非限定的一態樣，亦可 使用含有序列編號：67表示之重鏈可變區域及序列編號：68表示之輕鏈可變區域的人類化抗GPC3抗體、含有序列編號：69表示之重鏈可變區域及序列編號：70表示之輕鏈可變區域的人類化抗GPC3抗體、含有序列編號：71表示之重鏈可變區域及序列編號：72表示之輕鏈可變區域的人類化抗GPC3抗體、或含有序列編號：71表示之重鏈可變區域及序列編號：73表示之輕鏈可變區域的人類化抗GPC3抗體，作為本發明之GPC3標的治療劑。
細胞傷害活性
作為本發明之抗GPC3抗體，可舉例具有細胞傷害活性之抗GPC3抗體。本發明中，作為細胞傷害活性之非限定的例子，可列舉例如抗體依賴性細胞媒介性細胞傷害(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity：ADCC)活性、補體依賴性細胞傷害(complement-dependent cytotoxicity：CDC)活性及T細胞所致之細胞傷害活性等。本發明中，CDC活性意指補體系統所致之細胞傷害活性。另一方面，ADCC活性，意指免疫細胞等透過表現於該免疫細胞之Fcγ受體而結合於包含與表現於標的細胞之細胞膜的膜型分子結合之抗原結合區域的抗原結合分子 Fc區域，該免疫細胞對標的細胞造成傷害之活性。目標之抗原結合分子有無ADCC活性、或有無CDC活性，係可藉由公眾所知方法測定(例如Current protocols in Immunology,Chapter7.Immunologic studies in humans、Coligan等人編(1993)等)。
具體而言，首先配製作用細胞、補體溶液、標的細胞。
(1)作用細胞之配製
於RPMI1640培養基(Invitrogen)中，自由CBA/N小鼠等取出之脾臟中分離脾臟細胞。將以含有10%胎牛血清(FBS、HyClone)之同培養基洗淨的該脾臟細胞之濃度配製為5×106/mL，藉此可配製作用細胞。
(2)補體溶液之配製
藉由以含有10% FBS之培養基(Invitrogen)將Baby Rabbit Complement(CEDARLANE)稀釋為10倍，可配製補體溶液。
(3)標的細胞之配製
將表現抗原之細胞，與0.2mCi之51Cr-鉻酸鈉(GE Healthcare Bioscience)一起在含有10% FBS之DMEM培養基中37℃培養1小時，藉此該標的細胞可被放射性標識。放射性標識後，藉由將以含有10% FBS之RPMI1640 培養基洗淨3次後的細胞濃度配製為2×105/mL，藉此可配製該標的細胞。
可藉由下述方法測定ADCC活性、或CDC活 性。ADCC活性測定時，將添加於96孔U形底盤(Becton Dickinson)之各50μl的標的細胞與抗原結合分子在冰上反應15分鐘。之後，添加作用細胞100μl，將該盤靜置於二氧化碳氣體培養箱內4小時。抗體(抗原結合分子)之終濃度例如可設定為0或10μg/ml等濃度。靜置後，使用伽瑪計數器(COBRAII AUTO-GAMMA、MODEL D5005、Packard Instrument Company)測定由各孔所回收之100μl上清液的放射活性。可使用測定值，基於(A-C)/(B-C)×100之計算式來計算細胞傷害活性(%)。A表示各試樣之放射活性(cpm)、B表示添加1% NP-40(nacalai tesque)後之試樣的放射活性(cpm)、C表示僅含有標的細胞之試樣的放射活性(cpm)。
另一方面，CDC活性測定時，將添加於96孔 平底盤(Becton Dickinson)之各50μl的標的細胞與抗原結合分子在冰上反應15分鐘。之後，添加補體溶液100μl，將該盤靜置於二氧化碳氣體培養箱內4小時。抗體(抗原結合分子)之終濃度例如可設定為0或3μg/mL等濃度。靜置後，使用伽瑪計數器測定由各孔所回收之100μl上清液的放射活性。細胞傷害活性可由與ADCC活性測定同樣的方式計算。
細胞傷害性物質
又，作為本發明之抗GPC3抗體之非限定的一態樣，亦可舉例連結有細胞傷害性物質之抗GPC3抗體。如此之抗GPC3-抗體藥物複合體(Antibody drug conjugate(ADC))雖具體揭示於WO2007/137170等，但不限定於此。亦即，作為細胞傷害性物質，可為以下所例示之化學療法劑、亦可為Alley等人(Curr.Opin.Chem.Biol.(2010)14,529-537)或WO2009/140242所揭示之化合物，此等化合物可由適切的連接子(linker)等與抗原結合分子結合。
結合於本發明之抗GPC3抗體的化學療法劑 可舉例如以下者：阿扎立平(azaribine)、安美達錠(anastrozole)、氮雜胞嘧啶核苷(azacytidine)、博來黴素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、苔蘚蟲素-1(bryostatin-1)、硫酸布他卡因(busulfan)、喜樹鹼(camptothecin)、10-羥基喜樹鹼(10-hydroxycamptothecin)、卡莫司汀(carmustine)、希樂葆(celebrex)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、順鉑(cisplatin)、愛萊諾迪肯(irinotecan)、卡鉑定(carboplatin)、克拉屈濱(cladribine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、阿拉伯糖基胞嘧啶(cytarabine)、達卡巴仁(dacarbazine)、多烯紫杉醇(docetaxel)、放線菌素(dactinomycin)、道諾黴素葡萄糖醛酸苷(daunomycin glucuronide)、道諾黴素(daunorubicin)、地塞松(dexamethasone)、乙烯雌酚(diethylstilbestrol)、阿黴素(doxorubicin)、阿黴素葡萄糖醛酸苷(doxorubicin glucuronide)、表阿黴素(epirubicin)、乙炔雌二醇(ethinyl estradiol)、雌二醇氮芥(estramustine)、依妥普賽(etoposide)、依妥普賽葡萄糖醛酸苷(etoposide glucuronide)、氟尿苷(floxuridine)、福達樂(fludarabine)、氟塔醯胺(flutamide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟羥甲基睪酮(fluoxymesterone)、吉西他濱(gemcitabine)、羥基孕酮己酸酯(hydroxyprogesterone caproate)、羥基尿素(hydroxyurea)、艾達魯比辛(idarubicin)、依弗醯胺(ifosfamide)、菊白葉酸(leucovorin)、洛莫司汀(lomustine)、美登醇(maytansinoid)、甲氮芥(mechlorethamine)、乙酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、乙酸美皆斯妥(megestrol acetate)、氮芥苯丙胺酸(melphalan)、巰嘌呤(mercaptopurine)、胺甲葉酸(methotrexate)、雙羥蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素(mithramycin)、絲裂黴素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、苯丁酸(phenylbutyrate)、普賴松(prednisone)、甲基苄肼(procarbazine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、噴司他汀(pentostatin)、司莫司汀(semustine)、鏈尿佐菌素(streptozocin)、他莫西芬(tamoxifen)、紫杉烷類(taxanes)、紫杉醇(taxol)、丙酸睪固酮(testosterone propionate)、沙利多邁(thalidomide)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、沙奧特帕(thiotepa)、坦尼坡賽(teniposide)、癌康定(topotecan)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、長春花鹼(vinblastine)、溫諾平(vinorelbine)、長春新鹼(vincristine)。
本發明中，較佳之化學療法劑，係低分子化 學療法劑。低分子化學療法劑，在本發明之抗GPC3-抗體藥物複合體結合後，干涉抗GPC3抗體功能之可能性亦低。本發明中，低分子之化學療法劑，通常具有100~2000、較佳為200~1000之分子量。此處所例示之化學療法劑，均為低分子化學療法劑。此等之本發明中之化學療法劑，包含於生體內會轉換為活性化學療法劑之前驅藥。前驅藥之活性化，可為酵素轉換、亦可為非酵素轉換。
又，連結於本發明之抗GPC3-抗體藥物複合 體的細胞傷害性物質，亦可舉例Pseudomonas exotoxin A、Saporin-s6、Diphtheria toxin、Cnidarian toxin等毒性胜肽(毒素)或Radioiodine、Photosensitizer。毒性胜肽之例子，例如可適合列舉以下者。
白喉毒素A鏈(Diphtheria toxin A Chain)(Langone等人(Methods in Enzymology(1983)93,307-308))；綠膿桿菌外毒素(Pseudomonas Exotoxin)(Nature Medicine(1996)2,350-353)；蓖麻毒素鏈(Ricin A Chain)(Fulton等人(J.Biol.Chem.(1986)261,5314-5319)、Sivam等人(Cancer Res.(1987)47,3169-3173)、Cumber等人、(J.Immunol.Methods(1990)135,15-24、Wawrzynczak等人(Cancer Res.(1990)50,7519-7562)、及Gheeite等人(J.Immunol.Methods(1991)142,223-230))；無糖鏈蓖麻毒素A鏈(Deglycosylated Ricin A Chain)(Thorpe等人(Cancer Res.(1987)47,5924-5931))；雞母珠毒素A鏈(Abrin A Chain)(Wawrzynczak等人(Br.J.Cancer(1992)66,361-366)、Wawrzynczak等人(Cancer Res.(1990)50,7519-7562)、Sivam等人(Cancer Res.(1987)47,3169-3173)、及Thorpe等人(Cancer Res.(1987)47,5924-5931))；重組植物毒素(Gelonin)(Sivam等人(Cancer Res.(1987)47,3169-3173)、Cumber等人(J.Immunol.Methods(1990)135,15-24)、Wawrzynczak等人(Cancer Res.,(1990)50,7519-7562)、及Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.(1992)89,341-346))；商陸抗病毒蛋白(PAP-s；Pokeweed anti-viral protein fromseeds)(Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.(1992)89,341-346))；異株瀉根毒蛋白(Bryodin)(Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.(1992)89,341-346))；皂草素(Saporin)(Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.(1992)89,341-346))；木鱉子素(Momordin)(Cumber等人(J.Immunol.Methods(1990)135,15-24)；Wawrzynczak等人(Cancer Res.(1990)50,7519-7562)、及Bolognesi等人(Clin.exp. Immunol.(1992)89,341-346))；木鳖根蛋白(Momorcochin)(Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.(1992)89,341-346))；石竹素32(Dianthin 32)(Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.(1992)89,341-346))；石竹素30(Dianthin 30)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；蒴蓮根毒蛋白(Modeccin)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；槲寄生素(Viscumin)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；蒴蓮素(Volkensin)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；商陸毒蛋白(Dodecandrin)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；麥芽凝集素(Tritin)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；絲瓜素(Luffin)(Stirpe F.,Barbieri L.(FEBS letter(1986)195,1-8))；及括樓素(Trichokirin)(Casellas等人(Eur.J.Biochem.(1988)176,581-588)、及Bolognesi等人(Clin.exp.Immunol.,(1992)89,341-346))。
另一方面，測定本發明之抗GPC3-抗體藥物複合體所致細胞傷害活性時，係於96孔平底盤(Becton Dickinson)中添加標的細胞、與該抗GPC3-抗體藥物複合體之每孔50μl，於冰上實施15分鐘反應。該盤係於二氧化碳氣體培養箱內定溫培置1至4小時。抗GPC3-抗體藥物複合體之終濃度，可於0至3μg/ml之範圍內適當使用。培養後，回收100μl上清液，以伽瑪計數器測定該上清具有之放射活性。細胞傷害活性可與ADCC活性測定同樣方式計算。
Fc區域
本發明之抗GPC3抗體中所含之恆定區域中所含之Fc區域，可由人類IgG取得，但不限定於IgG之特定的次型(subclass)。Fc區域，係指EU編號表示之大約216位之胺基酸之由木瓜酵素切斷部位的絞鏈(hinge)區域之N末端起，包含該絞鏈、CH2及CH3區域之抗體的重鏈恆定區域。該Fc區域之適合的例子，可列舉如後述之對Fcγ受體具有結合活性的Fc區域。作為如此之Fc區域的非限定的一態樣，可舉例人類IgG1(序列編號：74)、IgG2(序列編號：75)、IgG3(序列編號：76)、或IgG4(序列編號：77)表示之恆定區域所含之Fc區域。
Fcγ受體(FcγR)
Fcγ受體(亦記載為FcγR)，係指可與IgG1、IgG2、IgG3、IgG4單株抗體之Fc區域結合之受體，實質上亦意指被Fcγ受體基因所編碼之蛋白質家族的任何成員。在人 類中，此家族係包含有包含同型異構物FcγRIa、FcγRIb及FcγRIc之FcγRI(CD64)；包含同型異構物FcγRIIa(包含他型H131及R131。亦即FcγRIIa(H)及FcγRIIa(R))、FcγRIIb(包含FcγRIIb-1及FcγRIIb-2)及FcγRIIc之FcγRII(CD32)；及包含同型異構物FcγRIIIa(包含他型V158及F158。亦即FcγRIIIa(V)及FcγRIIIa(F))及FcγRIIIb(包含他型FcγRIIIb-NA1及FcγRIIIb-NA2)之FcγRIII(CD16)、以及亦包含任何未發現之人類FcγR類或FcγR同型異構物或他型，但不限定為該等。FcγR，係包含人類、小鼠、大鼠、兔及猴，但不限定為該等，任何生物來源均可。小鼠FcγR類中，包含FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)及FcγRIII-2(FcγRIV、CD16-2)、以及亦包含任何未發現之小鼠FcγR類或FcγR同型異構物或他型，但不限定為該等。如此之Fcγ受體之適合的例子，可列舉人類FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16)及/或FcγRIIIb(CD16)。 人類FcγRI之多胜肽序列係記載於序列編號：78(NP_000557.1)、人類FcγRIIa(他型H131)之多胜肽序列係記載於序列編號：79(AAH20823.1)(他型R131係序列編號：79之第166號胺基酸被取代為Arg之序列)、FcγRIIb之多胜肽序列係記載於序列編號：80(AAI46679.1)、FcγRIIIa之多胜肽序列係記載於序列編號：81(AAH33678.1)、及FcγRIIIb之多胜肽序列係記載於序列編號：82(AAI28563.1)(括號內表示RefSeq等之資料庫 登錄編號)。Fcγ受體，對IgG1、IgG2、IgG3、IgG4單株抗體之Fc區域是否具有結合活性，可藉由FACS或ELISA方式，此外可藉由ALPHA篩選(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)或利用了表面電漿子共振(SPR)現象之BIACORE法等公眾所知之方法來確認(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2006)103(11),4005-4010)。
包含FcγRIa、FcγRIb及FcγRIc之FcγRI (CD64)以及包含同型異構物FcγRIIIa(包含他型V158及F158)及FcγRIIIb(包含他型FcγRIIIb-NA1及FcγRIIIb-NA2)之FcγRIII(CD16)，與IgG之Fc區域結合的α鏈及具有於細胞內傳達活性化訊息之ITAM的共通γ鏈會締合。另一方面，包含同型異構物FcγRIIa(包含他型H131及R131)及FcγRIIc之FcγRII(CD32)之本身的細胞質區域(cytoplasmic domain)中係包含ITAM。該等之受體，係表現於巨噬細胞或肥大細胞、抗原呈現細胞等多數的免疫細胞。藉由使該等受體結合於IgG之Fc區域所傳達的活性化訊息，會促進巨噬細胞的吞噬能力或發炎性細胞激素之產生、肥大細胞之去顆粒、抗原呈現細胞之功能亢進。 如上述般具有傳達活性化訊息之能力的Fcγ受體，於本說明書中稱為活性型Fcγ受體。
另一方面，FcγRIIb(包含FcγRIIb-1及 FcγRIIb-2)之本身的細胞質內區域中係包含傳達抑制型訊息的ITIM。於B細胞中，藉由FcγRIIb與B細胞受體 (BCR)之交聯，抑制來自BCR之活性化訊息的結果，會抑制BCR之抗體產生。於巨噬細胞中，藉由FcγRIII與FcγRIIb之交聯，會抑制吞噬能力或發炎性細胞激素之產生能力。如上述般具有傳達抑制化訊息之能力的Fcγ受體，於本說明書中稱為抑制型Fcγ受體。
Fc區域對FcγR之結合活性
如前所述，作為本發明之抗GPC3抗體中所含之Fc區域，可列舉對Fcγ受體具有結合活性之Fc區域。作為如此之Fc區域之非限定的一態樣，可舉例以人類IgG1(序列編號：74)、IgG2(序列編號：75)、IgG3(序列編號：76)、或IgG4(序列編號：77)表示之恆定區域中所含之Fc區域。Fcγ受體對IgG1、IgG2、IgG3、IgG4單株抗體之Fc區域是否具有結合活性，除了FACS或ELISA方式以外，亦可藉由ALPHA篩選(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)或利用了表面電漿子共振(SPR)現象之BIACORE法等公眾所知之方法加以確認(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2006)103(11),4005-4010)。
ALPHA篩選，係藉由使用予體(donor)與接受體(acceptor)之2種珠的ALPHA技術，基於下述原理來實施。結合於予體珠之分子，與結合於接受體珠之分子，會進行生物學上的相互作用，僅在2種珠接近的狀態時，會檢測出發光訊息。被雷射所激發之予體珠內的光敏劑，會 將周邊的氧轉換為激發狀態之一重態氧。一重態氧會向予體珠周邊擴散，一到達附近之接受體珠，會引起珠內之化學發光反應，最終會放出光。結合於予體珠之分子結合於接受體珠之分子無相互作用時，予體珠所產生之一重態氧不會到達接受體珠，故不引起化學發光反應。
例如，含有經生物素標識之Fc區域的抗GPC3抗體結合於予體珠，經麩胱甘肽S轉移酶(GST)標籤化之Fcγ受體結合於接受體珠。在不存在有包含競爭之Fc區域改變體之抗GPC3抗體之下，具有天然型Fc區域之抗GPC3抗體與Fcγ受體會相互作用，產生520-620nm之訊息。包含未經標籤化之Fc區域改變體的抗GPC3抗體，會與具有天然型Fc區域之抗GPC3抗體與Fcγ受體間之相互作用競爭。藉由將競爭結果所顯現之螢光減少予以定量，可決定相對的結合親和性。使用Sulfo-NHS-生物素等將抗體予以生物素化乃是公眾所知事項。作為將Fcγ受體以GST予以標籤化的方法，可適當採用保有將使編碼Fcγ受體之多核苷酸與編碼GST之多核苷酸予以框內(in-frame)融合而得的融合基因連結為可作動的載體之細胞等中表現，且使用麩胱甘肽管柱純化之方法等。所得訊息係藉由使用例如GRAPHPAD PRISM(GraphPad公司、San Diego)等軟體來擬合於利用非線形回歸解析之單位置競爭(one-site competition)模式，以適當地解析。
將觀察相互作用之物質的一方(配位子)固定於感測晶片之金薄膜上，當照光使得由感測晶片之背側起， 於金薄膜與玻璃之界面全反射時，於反射光的一部分會形成反射強度降低的部分(SPR訊息)。將觀察相互作用之物質的另一方(分析物、analyte)流過感測晶片之表面，當配位子與分析物結合時，經固定化之配位子分子的質量會增加，感測晶片表面之溶劑折射率會變化。藉由此折射率之變化，SPR訊息之位置會偏移(相反地，該結合解離時訊息的位置會返回)。Biacore系統係以上述偏移量、亦即感測晶片表面之質量變化作為縱軸，以質量之時間變化作為測常數據而予以表示(傳感圖、sensorgram)。由傳感圖之曲線求出動力學表現：結合速度常數(ka)與解離速度常數(kd)，且由該常數的比求出親和力(KD)。BLACORE法中亦可適合使用阻止測定法。阻止測定法的例子例於Lazor等人(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2006)103(11),4005-4010)中記載。
Fcγ受體(FcγR)結合改變Fc區域
作為本發明之抗GPC3抗體所含之Fc區域，於以人類IgG1(序列編號：74)、IgG2(序列編號：75)、IgG3(序列編號：76)、或IgG4(序列編號：77)表示之恆定區域中所含的Fc區域以外，亦可適合使用相較於天然型人類IgG之Fc區域對Fcγ受體的結合活性而言，對Fcγ受體的結合活性更高之FcγR結合改變Fc區域。本說明書中，「天然型人類IgG之Fc區域」，意指舉例為序列編號：74、75、76或77之人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之恆 定區域所含的Fc區域之EU編號297位所結合的糖鏈為含有岩藻糖之糖鏈的Fc區域。如此之FcγR結合改變Fc區域，可藉由將天然型人類IgG之Fc區域胺基酸予以改變而製作。FcγR結合改變Fc區域之對FcγR的結合活性，是否高於天然型人類IgG之Fc區域對FcγR之結合活性，除了前述FACS或ELISA方式以外，亦可使用ALPHA篩選(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)或利用了表面電漿子共振(SPR)現象之BIACORE法等公眾所知方法來適當實施。
本發明中，所謂Fc區域之「胺基酸之改變」 或「胺基酸改變」，係包含改變為與起始Fc區域之胺基酸序列相異之胺基酸序列。只要起始Fc區域之修飾改變體可於pH中性區域結合於人類Fcγ受體，則任意之Fc區域均可作為起始Fc區域使用。又，以已施加改變之Fc區域作為起始Fc區域，進一步施加了改變的Fc區域亦可適合作為本發明之Fc區域而使用。起始Fc區域可意指多胜肽本身、包含起始Fc區域之組成物、或編碼起始Fc區域之胺基酸序列。起始Fc區域中，可包含於抗體之項目所概說過的經重組而產生之公眾所知Fc區域。起始Fc區域之起源，並無限定，可由非人類動物之任意生物或由人類取得。較佳之任意生物，可適合列舉由小鼠、大鼠、天竺鼠、倉鼠、沙鼠、貓、兔、狗、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝、及非人類靈長類中選擇之生物。於另外的態樣中，起始Fc區域亦可由食蟹猴、絨猿、恆河猴、黑猩猩、或人 類中取得。較佳為，起始Fc區域可由人類IgG1中取得，但不限定為IgG之特定型。此係意指能夠以人類IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之Fc區域作為起始Fc區域而適當使用。同樣地，本說明書中，意指可將來自前述任意生物之IgG的任意型或次型的Fc區域，較佳作為起始Fc區域使用。天然存在之IgG的變異型或經操作之型的例子，係記載於公眾所知文獻(Curr.Opin.Biotechnol.(2009)20(6),685-91、Curr.Opin.Immunol.(2008)20(4),460-470、Protein Eng.Des.Sel.(2010)23(4),195-202、國際公開WO2009/086320、WO2008/092117、WO2007/041635、及WO2006/105338)，但不限定於該等。
作為改變的例子，係包含一個以上之變異， 例如包含取代為與起始Fc區域之胺基酸不同的胺基酸殘基之變異、或對於起始Fc區域之胺基酸插入一個以上之胺基酸殘基或由起始Fc區域之胺基酸缺失一個以上之胺基酸等。較佳為於改變後之Fc區域的胺基酸序列中，包含含有天然所不產生之Fc區域的至少一部分的胺基酸序列。如此變種必然具有與起始Fc區域未達100%之序列同一性或類似性。較佳之實施形態中，變種係具有與起始Fc區域之胺基酸序列約75%~未達100%之胺基酸序列同一性或類似性、更佳為約80%~未達100%、又更佳為約85%~未達100%、再更佳為約90%~未達100%、最佳為約95%~未達100%之同一性或類似性的胺基酸序列。於本發明之非限定之一態樣中，起始Fc區域及本發明之FcγR結 合改變Fc區域之間，係有至少1個胺基酸的差異。起始Fc區域與本發明之FcγR結合改變Fc區域之胺基酸的相異，亦可適合地藉由特別是以前述EU編號所特定之胺基酸殘基的位置之經特定的胺基酸的不同來特定。
為了改變Fc區域之胺基酸，可適當採用定點 誘導突變法(Kunkel等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82,488-492))或Overlap extension PCR等公眾所知之方法。又，作為取代為天然胺基酸以外之胺基酸的胺基酸之改變方法，亦可採用複數個之公眾所知方法(Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.(2006)35,225-249、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(11),6353-6357)。例如亦可適合使用包含有使非天然胺基酸結合於終止密碼子之一即UAG密碼子(琥珀密碼子)的互補琥珀抑制型tRNA而得的tRNA之無細胞轉譯系統(Clover Direct(Protein Express))等。
本發明之抗原結合分子中所含之對Fcγ受體 之結合活性高於天然型人類IgG之Fc區域對Fcγ受體之結合活性的FcγR結合改變Fc區域，可藉由任何方法取得，但具體而言，可藉由作為起始Fc區域使用之人類IgG型免疫球蛋白之胺基酸改變，來取得該FcγR結合改變Fc區域。用以改變之較佳IgG型免疫球蛋白之Fc區域，可列舉例如舉例為序列編號：74、75、76或77之人類IgG(IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4、及該等之改變體)之恆定區域中所含之Fc區域。
對其他胺基酸之改變，只要對Fcγ受體之結 合活性，比天然型人類IgG之Fc區域對Fcγ受體之結合活性更高，則任何位置之胺基酸均可改變。抗原結合分子，含有人類IgG1之Fc區域作為人類Fc區域時，較佳為包含造成：使對Fcγ受體之的結合活性相較於結合於EU編號297位之糖鏈為含有岩藻糖之糖鏈的天然型人類IgG之Fc區域對Fcγ受體之結合活性更高的效果之改變。如此之胺基酸的改變，係於例如國際公開WO2007/024249、WO2007/021841、WO2006/031370、WO2000/042072、WO2004/029207、WO2004/099249、WO2006/105338、WO2007/041635、WO2008/092117、WO2005/070963、WO2006/020114、WO2006/116260及WO2006/023403等中有報告。
作為可進行如此改變之胺基酸，可列舉例如 由EU編號表示之221位、222位、223位、224位、225位、227位、228位、230位、231位、232位、233位、234位、235位、236位、237位、238位、239位、240位、241位、243位、244位、245位、246位、247位、249位、250位、251位、254位、255位、256位、258位、260位、262位、263位、264位、265位、266位、267位、268位、269位、270位、271位、272位、273位、274位、275位、276位、278位、279位、280位、281位、282位、283位、284位、285位、286位、288位、290位、291位、292位、293位、294位、295位、 296位、297位、298位、299位、300位、301位、302位、303位、304位、305位、311位、313位、315位、317位、318位、320位、322位、323位、324位、325位、326位、327位、328位、329位、330位、331位、332位、333位、334位、335位、336位、337位、339位、376位、377位、378位、379位、380位、382位、385位、392位、396位、421位、427位、428位、429位、434位、436位及440位的群組中選擇之至少一個以上之胺基酸。藉由該等胺基酸之改變，可取得對Fcγ受體之結合活性高於天然型人類IgG之Fc區域對Fcγ受體之結合活性的Fc區域(FcγR結合改變Fc區域)。
為了使用於本發明，特佳之改變，可列舉例如Fc區域之由EU編號表示之；221位之胺基酸為Lys或Tyr之任一者；222位之胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr之任一者；223位之胺基酸為Phe、Trp、Glu或Lys之任一者；224位之胺基酸為Phe、Trp、Glu或Tyr之任一者；225位之胺基酸為Glu、Lys或Trp之任一者；227位之胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr之任一者；228位之胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr之任一者；230位之胺基酸為Ala、Glu、Gly或Tyr之任一者；231位之胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr之任一者；232位之胺基酸為Glu、Gly、Lys或Tyr之任一者； 233位之胺基酸為Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；234位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；235位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；236位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；237位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；238位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；239位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；240位之胺基酸為Ala、Ile、Met或Thr之任一者；241位之胺基酸為Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr之任一者； 243位之胺基酸為Leu、Glu、Leu、Gln、Arg、Trp或Tyr之任一者；244位之胺基酸為His、245位之胺基酸為Ala、246位之胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr之任一者；247位之胺基酸為Ala、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Thr、Val或Tyr之任一者；249位之胺基酸為Glu、His、Gln或Tyr之任一者；250位之胺基酸為Glu或Gln之任一者；251位之胺基酸為Phe、254位之胺基酸為Phe、Met或Tyr之任一者；255位之胺基酸為Glu、Leu或Tyr之任一者；256位之胺基酸為Ala、Met或Pro之任一者；258位之胺基酸為Asp、Glu、His、Ser或Tyr之任一者；260位之胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr之任一者；262位之胺基酸為Ala、Glu、Phe、Ile或Thr之任一者；263位之胺基酸為Ala、Ile、Met或Thr之任一者；264位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr之任一者；265位之胺基酸為Ala、Leu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、 Trp或Tyr之任一者；266位之胺基酸為Ala、Ile、Met或Thr之任一者；267位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；268位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Trp之任一者；269位之胺基酸為Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；270位之胺基酸為Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr之任一者；271位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；272位之胺基酸為Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；273位之胺基酸為Phe或Ile之任一者；274位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；275位之胺基酸為Leu或Trp之任一者；276位之胺基酸為、Asp、Glu、Phe、Gly、His、 Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；278位之胺基酸為Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp之任一者；279位之胺基酸為Ala、280位之胺基酸為Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gln、Trp或Tyr之任一者；281位之胺基酸為Asp、Lys、Pro或Tyr之任一者；282位之胺基酸為Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr之任一者；283位之胺基酸為Ala、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg或Tyr之任一者；284位之胺基酸為Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr之任一者；285位之胺基酸為Asp、Glu、Lys、Gln、Trp或Tyr之任一者；286位之胺基酸為Glu、Gly、Pro或Tyr之任一者；288位之胺基酸為Asn、Asp、Glu或Tyr之任一者；290位之胺基酸為Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp或Tyr之任一者；291位之胺基酸為Asp、Glu、Gly、His、Ile、Gln或Thr之任一者；292位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr 之任一者；293位之胺基酸為Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；294位之胺基酸為Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；295位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；296位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr或Val之任一者；297位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；298位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；299位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr之任一者；300位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp之任一者； 301位之胺基酸為Asp、Glu、His或Tyr之任一者；302位之胺基酸為Ile、303位之胺基酸為Asp、Gly或Tyr之任一者；304位之胺基酸為Asp、His、Leu、Asn或Thr之任一者；305位之胺基酸為Glu、Ile、Thr或Tyr之任一者；311位之胺基酸為Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr之任一者；313位之胺基酸為Phe、315位之胺基酸為Leu、317位之胺基酸為Glu或Gln、318位之胺基酸為His、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr之任一者；320位之胺基酸為Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；322位之胺基酸為Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；323位之胺基酸為Ile、324位之胺基酸為Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；325位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；326位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、 Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；327位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；328位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；329位之胺基酸為Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；330位之胺基酸為Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；331位之胺基酸為Asp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；332位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr之任一者；333位之胺基酸為Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val或Tyr之任一者；334位之胺基酸為Ala、Glu、Phe、Ile、Leu、Pro或Thr之任一者；335位之胺基酸為Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、 Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr之任一者；336位之胺基酸為Glu、Lys或Tyr之任一者；337位之胺基酸為Glu、His或Asn之任一者；339位之胺基酸為Asp、Phe、Gly、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Ser或Thr之任一者；376位之胺基酸為Ala或Val之任一者；377位之胺基酸為Gly或Lys之任一者；378位之胺基酸為Asp；379位之胺基酸為Asn；380位之胺基酸為Ala、Asn或Ser之任一者；382位之胺基酸為Ala或Ile之任一者；385位之胺基酸為Glu；392位之胺基酸為Thr；396位之胺基酸為Leu；421位之胺基酸為Lys；427位之胺基酸為Asn；428位之胺基酸為Phe或Leu之任一者；429位之胺基酸為Met；434位之胺基酸為Trp；436位之胺基酸為Ile；或440位之胺基酸為Gly、His、Ile、Leu或Tyr之任一者之群組中選擇的至少一個以上的胺基酸之改變。又，改變之胺基酸個數並無特殊限定，可僅改變一處的胺基酸、亦可改變二處以上之胺基酸。作為二處以上之胺基酸改變 的組合，可列舉例如表3(表3-1~表3-3)所記載之組合。又，含有對Fcγ受體之結合活性高於天然型人類IgG之Fc區域對Fcγ受體之結合活性的FcγR結合改變Fc區域(FcγR結合改變Fc區域)之抗GPC3抗體的具體例子，係記載於WO2007/047291。
測定本發明之抗GPC3抗體中所含之Fcγ受體 結合區域與Fcγ受體之結合活性之pH條件可適當使用pH酸性區域至pH中性區域之條件。作為測定本發明之抗原結合分子中所含之Fcγ受體結合區域與Fcγ受體之結合活性的條件之pH酸性區域至pH中性區域，通常意指pH5.8~pH8.0。較佳為以pH6.0~pH7.4之任意pH值所示之範圍，較佳為由pH6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、 6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、及7.4中選擇，特佳為接近癌組織之pH的pH6.15~7.4(Vaupel等人(Cancer Res.(1989)49,6449-6665))。作為測定條件所使用之溫度，Fc區域與人類Fcγ受體之結合親和力，能夠於10℃~50℃之任意溫度評估。較佳為，為了決定Fc區域與人類Fcγ受體之結合親和力，係使用15℃~40℃之溫度。更佳為，如20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、及35℃之任一者的20℃至35℃之任意溫度，亦同樣地為了決定Fc區域與Fcγ受體之結合親和力而被使用。25℃之溫度乃是本發明之態樣的非限定之一例。
本說明書中，FcγR結合改變Fc區域對Fcγ受 體之結合活性高於天然型Fc區域對Fcγ受體之結合活性，係指FcγR結合改變Fc區域對FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa及/或FcγRIIIb之任一者的人類Fcγ受體之結合活性，高於天然型Fc區域對該等人類Fcγ受體之結合活性。例如，係指基於上述解析方法，相較於作為對照之含有人類IgG天然型Fc區域之抗GPC3抗體的結合活性，含有FcγR結合改變Fc區域之抗GPC3抗體的結合活性，為105%以上、較佳為顯示110%以上、115%以上、120%以上、125%以上、特佳為130%以上、135%以上、140%以上、145%以上、150%以上、155%以上、160%以上、165%以上、170%以上、175%以上、180%以上、185%以上、190%以上、195%以上、2倍以上、2.5倍 以上、3倍以上、3.5倍以上、4倍以上、4.5倍以上、5倍以上、7.5倍以上、10倍以上、20倍以上、30倍以上、40倍以上、50倍以上、60倍以上、70倍以上、80倍以上、90倍以上、100倍以上之結合活性。作為天然型Fc區域，可使用起始Fc區域、亦可使用相同次型之抗體的天然型Fc區域。
本發明中，作為對照之人類IgG之天然型Fc 區域，可適合使用結合於EU編號表示之297位胺基酸之糖鏈為含有岩藻糖之糖鏈的天然型人類IgG之Fc區域。 結合於EU編號表示之297位胺基酸之糖鏈是否為含有岩藻糖之糖鏈，可使用公眾所知手法確認。例如，可藉由如下述之方法，判定結合於天然型人類IgG之Fc區域的糖鏈是否為含有岩藻糖之糖鏈。藉由使N-Glycosidase F(Roche diagnostics)與被檢驗天然型人類IgG反應，糖鏈會從被檢驗天然型人類IgG游離(Weitzhandler等人(J.Pharma.Sciences(1994)83,12,1670-1675)。接著，將使乙醇反應而去除蛋白質之反應液(Schenk等人(J.Clin.Investigation(2001)108(11)1687-1695)之濃縮乾固物，藉由2-胺基苄醯胺進行螢光標識(Bigge等人(Anal.Biochem.(1995)230(2)229-238)。將藉由使用了纖維素匣(cellulose cartridge)的固相萃取而經去試藥之經螢光標識的2-AB化糖鏈，藉由順相層析解析。藉由觀察檢測出之層析圖之波峰，可判定結合於人類IgG之天然型Fc區域的糖鏈是否為含有岩藻糖之糖鏈。
作為對照之含有相同次型之抗體的天然型Fc 區域之抗GPC3抗體，可適當使用具有IgG單株抗體之Fc區域的抗GPC3抗體。作為該Fc區域之構造，可舉例序列編號：74(資料庫登錄編號AAC82527.1之N末端附加A)、75(資料庫登錄編號AAB59393.1之N末端附加A)、76(資料庫登錄編號CAA27268.1)、及77(資料庫登錄編號AAB59394.1之N末端附加A)記載之恆定區域中所含之Fc區域。又，使用某特定同型之抗GPC3抗體作為被檢測物質時，藉由使用該特定同型之抗GPC3抗體作為對照，來驗證含有被檢驗Fc區域之抗GPC3抗體對Fcγ受體之結合活性的效果。如上述方式，適當選擇含有經驗證對Fcγ受體之結合活性高的Fc區域之抗GPC3抗體。
對活性型Fcγ受體之結合活性高於對抑制型Fcγ受體之結合活性的Fc區域
如前所述，作為活性型Fcγ受體，可適合列舉包含FcγRIa、FcγRIb及FcγRIc之FcγRI(CD64)；FcγRIIa以及包含同型異構物FcγRIIIa(包含他型V158及F158)及FcγRIIIb(包含他型FcγRIIIb-NA1及FcγRIIIb-NA2)之FcγRIII(CD16)。又，作為抑制型Fcγ受體之適合的例子，可列舉FcγRIIb(包含FcγRIIb-1及FcγRIIb-2)。
本發明之作為非限定的一態樣，可列舉含有對活性型Fcγ受體之結合活性高於對抑制型Fcγ受體之結合活性的Fc區域之抗GPC3抗體。此時，對活性型Fcγ受體之結合活性高於對抑制型Fcγ受體之結合活性，係指 對Fc區域之FcγRIa、FcγRIIa、FcγRIIIa及/或FcγRIIIb之任一者的人類Fcγ受體之結合活性，高於對FcγRIIb之結合活性。例如，係指基於上述解析方法，含有Fc區域之抗原結合分子對FcγRIa、FcγRIIa、FcγRIIIa及/或FcγRIIIb之任一者的人類Fcγ受體之結合活性，係對FcγRIIb之結合活性的105%以上、較佳為顯示110%以上、120%以上、130%以上、140%以上、特佳為150%以上、160%以上、170%以上、180%以上、190%以上、200%以上、250%以上、300%以上、350%以上、400%以上、450%以上、500%以上、750%以上、10倍以上、20倍以上、30倍以上、40倍以上、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍以上之結合活性。含有如此之Fc區域的IgG抗體，已知前述ADCC活性係有增強，因此含有該Fc區域之抗GPC3抗體，係有用於作為本發明之GPC3標的治療劑。
本發明之非限定的一態樣中，作為對活性型 Fcγ受體之結合活性高於對抑制型Fcγ受體之結合活性(對活性型Fcγ受體具有選擇性的結合活性)的Fc區域之例子，可適合列舉由前述EU編號表示之221位、222位、223位、224位、225位、227位、228位、230位、231位、232位、233位、234位、235位、236位、237位、238位、239位、240位、241位、243位、244位、245位、246位、247位、249位、250位、251位、254位、255位、256位、258位、260位、262位、263位、264 位、265位、266位、267位、268位、269位、270位、271位、272位、273位、274位、275位、276位、278位、279位、280位、281位、282位、283位、284位、285位、286位、288位、290位、291位、292位、293位、294位、295位、296位、297位、298位、299位、300位、301位、302位、303位、304位、305位、311位、313位、315位、317位、318位、320位、322位、323位、324位、325位、326位、327位、328位、329位、330位、331位、332位、333位、334位、335位、336位、337位、339位、376位、377位、378位、379位、380位、382位、385位、392位、396位、421位、427位、428位、429位、434位、436位及440位之群組中選擇的至少一個以上之胺基酸被改變為與天然型Fc區域相異之胺基酸的Fc區域。
本發明之非限定的一態樣中，對活性型Fcγ 受體之結合活性高於對抑制型Fcγ受體之結合活性(對活性型Fcγ受體具有選擇性的結合活性)的Fc區域之例子，可適合列舉由表3-1至3-3記載之複數個胺基酸被改變為與天然型Fc區域相異之胺基酸的Fc區域。
糖鏈經修飾之Fc區域
本發明所提供之抗GPC3抗體中所含之Fc區域，亦可含有經修飾之Fc區域，使結合於Fc區域之糖鏈組成係結合岩藻糖缺損糖鏈之Fc區域比例提高、或使附加有平 分型(bisecting)N-乙醯葡萄糖胺之Fc區域的比例提高。已知自結合於抗體Fc區域之N-醣苷結合複合型糖鏈還原末端之N-乙醯葡萄糖胺去除岩藻糖殘基時，對FcγRIIIa之親和性會增強(Sato等人(Expert Opin.Biol.Ther.(2006)6(11),1161-1173))。已知包含如此Fc區域之IgG1抗體，上述ADCC活性會增強，因此含有該Fc區域之抗原結合分子，亦有用於作為本發明之醫藥組成物中所含之抗原結合分子。作為自結合於抗體Fc區域之N-醣苷結合複合型糖鏈還原末端之N-乙醯葡萄糖胺去除岩藻糖殘基的抗體，可列舉例如下述抗體；
-經修飾醣化之抗體(國際公開WO1999/054342等)、 -附加於糖鏈之岩藻糖缺損的抗體(國際公開WO2000/061739、WO2002/031140、WO2006/067913等)。又，含有經修飾之Fc區域，使結合於Fc區域之糖鏈組成係結合岩藻糖缺損糖鏈之Fc區域比例提高、或使附加有平分型N-乙醯葡萄糖胺之Fc區域的比例提高之抗GPC3抗體的具體例子，係記載於WO2006/046751及WO2009/041062。
更具體而言，作為自結合於抗體Fc區域之N -醣苷結合複合型糖鏈還原末端之N-乙醯葡萄糖胺去除岩藻糖殘基之抗體的不同之非限定的一態樣，為了製作附加於糖鏈之岩藻糖有缺損的抗體(國際公開WO2000/061739、WO2002/031140、WO2006/067913等)，而改變了形成受糖鏈修飾之多胜肽的糖鏈構造之活性的結果，會 製作於糖鏈附加岩藻糖的能力低之宿主細胞。藉由於該宿主細胞中表現所期望的抗體基因，可由該宿主細胞之培養液中回收該糖鏈中的岩藻糖有缺損的該抗體。作為形成多胜肽糖鏈構造之活性，可列舉由岩藻糖轉移酶(EC 2.4.1.152)、岩藻糖轉運蛋白(SLC35C1)、GMD(GDP-甘露糖4,6-脫水酶)(EC 4.2.1.47)、Fx(GDP-酮-6-去氧甘露糖3,5-表異構酶，4-還原酶)(EC 1.1.1.271)、及GFPP(GDP-β-L-岩藻糖焦磷酸化酶)(EC 2.7.7.30)所成群組中選擇之酵素或轉運蛋白之活性作為非限定之適合的例子。該等酵素或轉運蛋白，只要可發揮其活性，則其構造並無特別的特定。本說明書中，將可發揮該等活性之蛋白質稱為功能性蛋白質。改變該等活性之方法的非限定之一態樣，可列舉該等活性之缺失。為了製作該等活性經缺失之宿主細胞，可適當採用將該等功能性蛋白質之基因破壞為無法發揮功能的方法等公眾所知之方法(國際公開WO2000/061739、WO2002/031140、WO2006/067913等)。如此之活性經缺失的宿主細胞，可藉由將CHO細胞、BHK細胞、NS0細胞、SP2/0細胞、YO骨髓腫細胞、P3X63小鼠骨髓腫細胞、PER細胞、PER.C6細胞、HEK293細胞、或融合瘤細胞等之內在性的該等功能性蛋白質之基因破壞為無法發揮功能之方法等而製作。
具有含有平分型GlcNAc之糖鏈的抗體(國際 公開WO2002/079255等)乃為公眾所知。於非限定之一態樣中，為了製作具有含有平分型GlcNAc之糖鏈的抗體， 係製作表現編碼具有GnTIII(β-1,4-甘露糖-糖蛋白，4-β-N-乙醯葡萄糖胺轉移酶)(EC 2.4.1.144)活性或GalT(β-1,4-半乳糖轉移酶)(EC 2.4.1.38)活性之功能性蛋白質的基因之宿主細胞。其他非限定之適合的一態樣中，於前述功能性蛋白質以外，係製作編碼具有人類ManII(甘露糖苷酶II)(3.2.1.114)活性之功能性蛋白質的基因、編碼具有GnTI(β-1,2-乙醯葡萄糖胺轉移酶I)(EC 2.4.1.94)活性之功能性蛋白質的基因、編碼具有GnTII(β-1,2-乙醯葡萄糖胺轉移酶II)(EC 2.4.1.143)活性之功能性蛋白質的基因、編碼具有ManI(甘露糖苷酶)(EC 3.2.1.113)活性之功能性蛋白質的基因、及α-1,6-岩藻糖轉移酶(EC 2.4.1.68)共同表現的宿主細胞(國際公開WO2004/065540)。
藉由如前述之於對糖鏈附加岩藻糖之能力低 的宿主細胞、及具有形成包含平分型GlcNAc構造之糖鏈的活性之宿主細胞中轉導入包含抗體基因之表現載體，可分別製作自結合於抗體Fc區域之N-醣苷結合複合型糖鏈還原末端之N-乙醯葡萄糖胺經去除岩藻糖殘基之抗體、及具有含有平分型GlcNAc之糖鏈的抗體。該等抗體之製造方法，亦可應用於本發明之含有經修飾之改變Fc區域，使結合於Fc區域之糖鏈組成係結合岩藻糖缺損糖鏈之Fc區域比例提高、或使附加有平分型N-乙醯葡萄糖胺之Fc區域的比例提高的抗原結合分子之製造方法。結合於藉由如此之製造方法所製作之本發明之抗原結合分子中所含之Fc區域的糖鏈組成，可藉由前述「Fcγ受體(FcγR) 結合改變Fc區域」所記載的方法予以確認。
等電點經改變之抗GPC3抗體
作為本發明中使用之抗GPC3抗體之非限定的一態樣，亦可舉例改變抗GPC3抗體之胺基酸殘基，使其等電點(pI)變化的抗GPC3抗體。本發明所提供之抗GPC3抗體之「胺基酸殘基之電荷改變」的適合的例子，可列舉以下者。作為使pI值增加的改變，例如可進行由：序列編號：50表示之抗GPC3抗體之重鏈可變區域中以Kabat編號表示之43位之Q取代為K、52位之D取代為N、105位之Q取代為R中選擇之至少一個取代，例如改變為序列編號：67表示之胺基酸序列。又，例如可進行由：序列編號：51或序列編號：66表示之抗GPC3抗體之輕鏈可變區域中以Kabat編號表示之17位之E取代為Q、27位之Q取代為R、105位之Q取代為R中選擇之至少一個取代，例如改變為序列編號：68表示之胺基酸序列。另一方面，作為使pI值減少的改變，可進行由：序列編號：50表示之抗GPC3抗體之重鏈可變區域中以Kabat編號表示之19位之K取代為T、43位之Q取代為E、61位之G取代為E、62位之K取代為S、64位之K取代為Q、65位之G取代為D中選擇之至少一個取代，例如改變為序列編號：69、序列編號：71表示之胺基酸序列。 又，例如可進行由：序列編號：51或序列編號：66表示之抗GPC3抗體之輕鏈可變區域中以Kabat編號表示之24 位之R取代為Q、27位之Q取代為E、74位之K取代為T、77位之R取代為S、107位之K取代為E中選擇之至少一個取代，例如改變為序列編號：70、序列編號：72、序列編號：73表示之胺基酸序列。進一步地，作為使pI值減少的改變，可列舉序列編號：74表示之重鏈恆定區域中，由EU編號表示之268位、274位、355位、356位、358位、419位中選擇之胺基酸的至少一者的取代。 該等之取代，可列舉例如序列編號31表示之重鏈恆定區域之以EU編號表示之268位之H取代為Q、274位之K取代為Q、355位之R取代為Q、356位之D取代為E、358位之L取代為M、419位之Q取代為E中選擇之至少一個取代作為適合的例子。該等取代之結果，係構築人類抗體之IgG1之恆定區域與IgG4之恆定區域的嵌合體。亦即，藉由該取代，對所改變之抗體之免疫原性不會產生影響，可製作具有所期望之pI的抗體。
用以減低異質性(heterogeneity)之改變
序列編號：74、75、76或77表示之IgG恆定區域中之以EU編號表示之446位之Gly及447位之Lys經缺損的IgG恆定區域，亦可使用作為本發明之抗GPC3抗體中所含之恆定區域。藉由使該等胺基酸兩者缺損，可減低來自抗體之重鏈恆定區域之末端的異質性。
抗體之修飾
多胜肽之轉譯後修飾，係指多胜肽之生合成中，對經轉譯之多胜肽的化學修飾。抗體之一次構造係由多胜肽形成，因此本發明之抗GPC3抗體中，亦含有抗GPC3抗體之一次構造之多胜肽受過轉譯後修飾的修飾物。多胜肽之轉譯後修飾，可大略分類為官能基附加、多胜肽或胜肽之附加(ISG化、SUMO化、泛素化)、胺基酸之化學性質轉換(矽烷化或脫胺、脫醯胺)、及構造轉換(雙硫化、蛋白酶分解)。作為本發明中轉譯後修飾之非限定的一態樣，可列舉對多胜肽之形成單位即胺基酸殘基的胜肽附加或官能基附加。作為該修飾，具體而言可列舉磷酸化(絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、天門冬胺酸等)、葡萄糖苷化(絲胺酸、蘇胺酸、天門冬胺酸等)、醯化(離胺酸)、乙醯化(離胺酸)、羥基化(離胺酸、脯胺酸)、異戊二烯化(半胱胺酸)、棕櫚醯化(半胱胺酸)、烷基化(離胺酸、精胺酸)、聚麩胺醯化(麩胺酸)、羧基化(麩胺酸)、聚甘胺醯化(麩胺酸)、瓜胺酸化(精胺酸)、琥珀醯亞胺形成(天門冬胺酸)等。例如，受到以N末端之麩醯胺的焦麩胺醯化所進行之對焦麩胺酸的修飾的抗GPC3抗體亦當然包含於本發明之抗GPC3抗體中。又，例如藉由意指二個硫原子之間所形成之共價鍵之「雙硫鍵」，以連結重鏈與輕鏈、或重鏈之間的而得之抗GPC3抗體之轉譯後修飾物，亦包含於本發明之抗GP C3抗體中。胺基酸之半胱胺酸中所含之硫醇基，可與第二硫醇基形成雙硫鍵或交聯。一般而言，IgG分子中，其CH1及CL區域藉由雙硫鍵連結，而形成重鏈之二 個多胜肽，係藉由EU編號表示之226位及229位之半胱胺酸殘基間之雙硫鍵而連結。藉由如此之雙硫鍵而連結之抗GPC3抗體之轉譯後修飾物，亦包含於本發明之抗GPC3抗體中。
GPC3標的治療劑療法
「GPC3標的治療劑療法」之用語，係指將GPC3標的治療劑對患者投與。
「GPC3標的治療劑療法對癌的有效性」或「GPC3標的治療劑療法對癌有效」之用語，係指被診斷為癌的患者中，GPC3標的治療劑療法會產生所期望或有益的效果。所期望或有益的效果，可包含(1)阻止癌細胞進一步成長或擴散、(2)癌細胞之死亡、(3)阻止癌的復發、(4)與癌關聯的症狀(疼痛等)之緩和、減低、減輕、阻止、或前述症狀頻率的減低、或(5)患者之生存率的改善。癌之復發的阻止，係包含至今為止係藉由放射線、化學療法、外科手術、或其他技術而治療，而阻礙癌於癌之原發部位及於周邊組織的成長、以及癌不於新的遠端部位成長。所期望或有益的效果，可為被患者所知覺者或客觀者的任一者。例如，患者為人類時，人類對於改善或療法的反應，可認識氣力或活力的改善或疼痛之減少，作為被患者所知覺的徵兆。或者臨床醫師可基於身體檢査、實驗參數、腫瘤標記、或X射線攝影之所見，可發覺腫瘤尺寸或腫瘤組織量之減少。關於對治療之反應，臨床醫師可觀 察到的數個實驗徵兆，係包含白血球數、紅血球數、血小板數、紅血球沈降速度、及各種酵素量等之試驗結果的標準化。進一步地，臨床醫師可觀察到可檢測之腫瘤標記的減少。或者，為了評估客觀的改善，可使用超音波診斷、核磁共振試驗、及正子放出試驗等其他之試驗。
作為本發明之GPC3標的治療劑療法之對象 的癌，只要係標的之GPC3有高表現的癌，則任何癌均可。作為如此癌的一例，可舉例由乳癌、子宮頸癌、大腸癌、子宮體癌、頭頸部癌、肝臟癌、肺癌、惡性類癌(Malignant carcinoid)、惡性神經膠瘤(Malignant glioma)、惡性淋巴瘤(Malignant lymphoma)、惡性黑色素瘤(Malignant melanoma)、卵巢癌、胰臟癌、攝護腺癌、腎臟癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、尿道上皮癌等中選擇之癌。
決定GPC3標的治療劑療法之有效性的方法、或決定繼續進行GPC3標的治療劑療法之方法
本發明之非限定的一態樣中，係提供監測由接受GPC3標的治療劑療法之前的患者及/或接受GPC3標的治療劑療法後之患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度，當該游離GPC3濃度為特定值時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效之方法、或決定繼續進行該療法之方法。「接受GPC3標的治療劑療法之前的患者」，係指被診斷為癌之患者，且係未經歷投與上述GPC標的治療劑 的患者，進一步地，該患者，亦可由上述組織中GPC3之表現量，來決定GPC3標的治療法為有效。又，「接受GPC3標的治療劑療法後之患者」，係指具有投與上述GPC3標的治療劑之經歷的患者。GPC3標的治療劑之投與路徑，可依據所投與之GPC3標的治療劑的性狀等，適當選擇適合的投與路徑。例如，作為投與路徑之例子，可舉例非經口投與。作為非經口投與之進一步的例子，例如可舉例注射投與、經鼻投與、經肺投與、經皮投與。例如作為注射投與之進一步的例子，可舉例以靜脈內注射投與、肌肉內注射投與、腹腔內注射投與、皮下注射投與等所進行之全身或局部投與。
本發明完成以前，GPC3之多胜肽序列中之特 定部位中，藉由轉換酶、磷脂酶D或Notum等而接受處理，於自肝癌患者所單離之血漿中檢測分泌於血漿中之游離GPC3，另一方面，已知習知技術中，自健康人所單離之血漿中檢測不出游離GPC3之結果(專利文獻7等)。若基於如此結果，假設GPC3標的治療劑療法有效時，亦可推測血清中或血漿中所檢測出的游離GPC3之濃度，會隨著治療的繼續進行而經時減少。然而令人驚訝的，本發明者等人在如前述之情況下努力進行研究後，自對GPC3標的治療劑療法具有顯示反應的可能性之穩定疾病(Stable disease)的患者中所單離的血清中或血漿中之游離GPC3濃度，與其說減少，不如說是顯示穩定或增加。又，GPC3標的治療劑療法之投與前，亦顯示血清中或血漿中 所檢測出之游離GPC3之濃度，為特定濃度以上時，GPC3標的治療劑療法為有效。
本發明之非限定的一態樣中，包含監測自前 述患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度，此處，該濃度為特定值時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效，或決定繼續該療法。特定值可由0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3ng/mL、0.4ng/mL、0.5ng/mL、0.6ng/mL、0.7ng/mL、0.8ng/mL、0.9ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、3.0ng/mL、4.0ng/mL、5.0ng/mL、6.0ng/mL、7.0ng/mL、8.0ng/mL、9.0ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、25.0ng/mL、30.0ng/mL、35.0ng/mL、40.0ng/mL、45.0ng/mL、50.0ng/mL、55.0ng/mL、60.0ng/mL、65.0ng/mL、70.0ng/mL、75.0ng/mL、80.0ng/mL、85.0ng/mL、90.0ng/mL、100.0ng/mL等之特定值所決定，能夠以將由上述特定值之群組中任意選擇之特定值作為上限及下限的數值範圍來決定。作為如此數值範圍之例子，可由0.1ng/mL至100ng/mL之數值範圍適當選擇。例如可舉例0.1至100ng/mL、0.5至80ng/mL、1.0至60ng/mL、2.0至55ng/mL、3.0至50ng/mL、4.0至45ng/mL、5.0至40ng/mL、6.0至35ng/mL、7.0至30ng/mL、8.0至25ng/mL、9.0至20ng/mL、10至20ng/mL。作為較佳之數值範圍，可舉例0.1至0.35ng/mL，作為更佳之數值範圍，可舉例0.15至0.3ng/mL，但不限定為此等。游離 GPC3濃度之特定之值，係依賴許多因子，例如所用之分析方法、測定游離GPC3之試樣類型、試樣之保存條件(溫度及期間等)、患者之民族的同一性等，可有少許變化。預測、預期或決定上述為有效之方法、或決定繼續進行該療法之方法中，游離GPC3之濃度，係測定自患者所單離之血液、血漿或血清試樣中之濃度。
前述游離GPC3之濃度，可於開始GPC3標的 治療劑療法之前及/或開始之後所單離之試樣中測定，但該等以特定時間間隔所採取之複數的試樣亦可測定。以特定時間間隔所採取之複數的試樣當中任一者的游離GPC3濃度為上述特定濃度時，則預測、預期或決定該患者之GPC3標的治療劑療法對癌有效、或決定繼續進行該療法。特定之時間間隔可適當設定，作為該間隔之非限定的一態樣，可於GPC3標的治療劑初次投與後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日(亦即1週)、8日、9日、10日、11日、12日、13日、14日(亦即2週)、15日、16日、17日、18日、19日、20日、21日(亦即3週)、22日、23日、24日、25日、26日、27日、28日(亦即4週)、29日、30日、1個月、5週、6週、7週、8週、9週、10週、2個月、3個月、4個月、5個月、或6個月、或1次、2次、3次、4次、或其以上之治療循環後等之療法開始與結束之間的任何時間點採取。投與間隔亦即治療循環可適當設定，作為非限定的一例，可列舉例如1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日(亦即1週)、8 日、9日、10日、11日、12日、13日、14日(亦即2週)、15日、16日、17日、18日、19日、20日、21日(亦即3週)、22日、23日、24日、25日、26日、27日、28日(亦即4週)、29日、30日、1個月、5週、6週、7週、8週、9週、10週、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月等。
於非限定的一態樣中，本方法係包含監測於 開始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度係由0.1ng/mL至100ng/mL的範圍時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。於其他非限定之一態樣中，本方法係包含監測開始GPC3標的治療劑療法之2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度係0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。
於非限定的一態樣中，本方法係包含監測開 始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。於其他非限定的一態樣中，本方法係包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6 個月後自接受過該療法之患者所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。
又，本發明之非限定的其他一態樣中，該等 係可與開始GPC3標的治療劑療法之前自患者所單離之血液、血漿或血清試樣中所測定的游離GPC3之濃度(「基線濃度」)比較。本態樣中之游離GPC3濃度之「特定值」，意指自接受過GPC3標的治療劑療法之患者所單離之生物學試樣中之游離GPC3濃度，為該基線濃度以上的情況。亦即同一患者中接受GPC3標的治療劑療法前後，游離GPC3濃度為相同或增加時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效，或決定繼續進行該療法。接受GPC3標的治療劑療法前後，游離GPC3濃度為相同或增加的比例，可為所屬技術領域中具有通常知識者適當選擇，不限定為特定值。作為如此之比例，可由1倍至106倍之數值範圍中適當選擇。例如，為1倍以上、1.05倍以上、1.1倍以上、1.2倍以上、1.3倍以上、1.4倍以上、1.5倍以上、1.6倍以上、1.7倍以上、1.8倍以上、1.9倍以上、2倍以上、2.1倍以上、2.2倍以上、2.3倍以上、2.4倍以上、2.5倍以上、2.6倍以上、2.7倍以上、2.8倍以上、2.9倍以上、3倍以上、3.1倍以上、3.2倍以上、3.3倍以上、3.4倍以上、3.5倍以上、3.6倍以上、3.7倍以上、3.8倍以上、3.9倍以上、4倍以上、 4.1倍以上、4.2倍以上、4.3倍以上、4.4倍以上、4.5倍以上、4.6倍以上、4.7倍以上、4.8倍以上、4.9倍以上、5倍以上、5.1倍以上、5.2倍以上、5.3倍以上、5.4倍以上、5.5倍以上、5.6倍以上、5.7倍以上、5.8倍以上、5.9倍以上、6倍以上、6.1倍以上、6.2倍以上、6.3倍以上、6.4倍以上、6.5倍以上、6.6倍以上、6.7倍以上、6.8倍以上、6.9倍以上、7倍以上、7.1倍以上、7.2倍以上、7.3倍以上、7.4倍以上、7.5倍以上、7.6倍以上、7.7倍以上、7.8倍以上、7.9倍以上、8倍以上、8.1倍以上、8.2倍以上、8.3倍以上、8.4倍以上、8.5倍以上、8.6倍以上、8.7倍以上、8.8倍以上、8.9倍以上、9倍以上、9.1倍以上、9.2倍以上、9.3倍以上、9.4倍以上、9.5倍以上、9.6倍以上、9.7倍以上、9.8倍以上、9.9倍以上、10倍以上、11倍以上、12倍以上、13倍以上、14倍以上、15倍以上、16倍以上、17倍以上、18倍以上、19倍以上、20倍以上、21倍以上、22倍以上、23倍以上、24倍以上、25倍以上、26倍以上、27倍以上、28倍以上、29倍以上、30倍以上、31倍以上、32倍以上、33倍以上、34倍以上、35倍以上、36倍以上、37倍以上、38倍以上、39倍以上、40倍以上、41倍以上、42倍以上、43倍以上、44倍以上、45倍以上、46倍以上、47倍以上、48倍以上、49倍以上、50倍以上、55倍以上、60倍以上、65倍以上、70倍以上、75倍以上、80倍以上、85倍以上、90倍以上、95倍以上、100 倍以上、105倍以上、110倍以上、120倍以上、130倍以上、140倍以上、150倍以上、160倍以上、170倍以上、180倍以上、190倍以上、200倍以上、220倍以上、240倍以上、260倍以上、280倍以上、300倍以上、320倍以上、340倍以上、360倍以上、380倍以上、400倍以上、420倍以上、440倍以上、460倍以上、480倍以上、500倍以上、550倍以上、600倍以上、650倍以上、700倍以上、750倍以上、800倍以上、850倍以上、900倍以上、950倍以上、1000倍以上、2000倍以上、3000倍以上、4000倍以上、5000倍以上、6000倍以上、7000倍以上、8000倍以上、9000倍以上、104倍以上、2 x 104倍以上、4 x 104倍以上、6 x 104倍以上、8 x 104倍以上、105倍以上、2 x 105倍以上、4 x 105倍以上、6 x 105倍以上、8 x 105倍以上、或106倍以上時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效、或決定繼續進行該療法。
於非限定的一態樣中，本方法係包含監測開 始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度係基線濃度以上時，於其他非限定的一態樣中，本方法係包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍 以上至106倍以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。
上述之該游離GPC3濃度為基線濃度以上 時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效時，亦可考慮自該患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量。亦即，亦包含對象患者中之游離GPC3濃度為基線濃度以上，且自對象患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中之GPC3之表現量為特定之評估評分以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。 於其他非限定的一態樣中，本方法係指包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上，且自該患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。
自患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織 之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時之非限定的一態樣，可舉例以染色法1算出染色之結果的複合評估評分為高表現、或低或中表現(各個IHC total評分為7以上或未達7)。又亦可舉例以染色法2算出染色之結果的GPC3-IHC評分為1+、2+、3+的情況等，作為特定之組織免疫染色評分以上的情況之非限定之 一態樣。
於非限定的一態樣中，本方法係指包含監測 開始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度係基線濃度以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。於其他非限定的一態樣中，本方法係指包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。
上述之、該游離GPC3濃度為基線濃度以上 時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法時，亦可考慮含有自該患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量。亦即，亦包含對象患者中之游離GPC3濃度為基線濃度以上，且自對象患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中之GPC3之表現量為特定之評估評分以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。於其他非限定的一態樣中，本方法係指包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上，且自該 患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。
自患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織 之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時的非限定之一態樣，可舉例以染色法1算出染色之結果的複合評估評分為高表現、或低或中表現(各個IHC total評分為7以上或未達7)。又亦可舉例以染色法2算出染色之結果的GPC3-IHC評分為1+、2+、3+的情況等，作為特定之組織免疫染色評分以上的情況之非限定之一態樣。
治療劑及製劑
本發明中，治療劑通常係指用以治療或預防、或檢查‧診斷疾病之藥劑。又，本發明中，「用以對自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者所投與之GPC3標的治療劑」之用語，亦可換稱為「包含用以對自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與GPC3標的治療劑之癌之治療方法」、亦可換稱為「用以對自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與之GPC3標的治療劑之使用，其係用於製造用以治療癌之醫藥」。又，本發明中， 「用以對自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者進一步投與之GPC3標的治療劑」之用語，亦可換稱為「包含對自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者進一步投與GPC3標的治療劑之癌之治療方法」、亦可換稱為「用以對自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者進一步投與之GPC3標的治療劑之使用，其係用於製造用以治療癌之醫藥」。又，「自接受過GPC3標的治療劑療法之癌患者中所單離之生物學試樣中之游離GPC3濃度為特定值」之用語，亦可換稱為「自接受過GPC3標的治療劑療法之癌患者中所單離之生物學試樣中之前述游離GPC3濃度，在接受GPC3標的治療劑療法之後有增大」。
本發明之治療劑，可使用對所屬技術領域中具有通常知識者係公眾所知之方法予以製劑化。例如，能夠以與水或其以外之藥學上可容許的液體的無菌性溶液、或懸浮液劑之注射劑的形式，非經口地使用。例如，能夠與藥理學上容許之載子或媒體、具體而言係滅菌水或生理食鹽水、植物油、乳化劑、懸浮劑、界面活性劑、穩定劑、香味劑、賦形劑、載運子(vehicle)、防腐劑、結合劑等適當地組合，藉由以一般認可之製藥實施所要求的單位用量形態混合而予以製劑化。該等製劑中之有效成分量，係設定為可得到指示範圍之適當容量。
用以注射之無菌組成物，可藉由使用如注射 用蒸餾水般之載運子，遵照通常之製劑實施予以處方。注射用之水溶液，可列舉例如含有生理食鹽水、葡萄糖或其他輔助藥(例如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化鈉)之等張液。可合併使用適切之溶解輔助劑、例如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇、聚乙二醇等)、非離子性界面活性劑(Polysorbate 80(TM)、HCO-50等)。
油性液可列舉芝麻油、大豆油，作為溶解輔 助劑，亦可合併使用安息香酸苄酯及/或苄醇。又，能夠與緩衝劑(例如磷酸鹽緩衝液及乙酸鈉緩衝液)、無痛化劑(例如普魯卡因鹽酸鹽)、穩定劑(例如、苄醇及酚)、抗氧化劑摻合。所配製之注射液通常係填充於適切的安瓿中。
本發明之治療劑，較佳為藉由非經口投與來 投與。例如係投與注射劑型、經鼻投與劑型、經肺投與劑型、經皮投與型之治療劑。可藉由例如靜脈內注射、肌肉內注射、腹腔內注射、皮下注射等，對全身或局部投與。
投與方法可由患者年齡、症狀而適當選擇。 含有前述治療劑之醫藥用製劑之投與量，例如可於每一次體重每1kg由0.0001mg至1000mg之範圍內設定。或例如可設定每個患者0.001~100000mg之投與量，但本發明並不一定限制於此等數值。投與量及投與方法，係隨患者之體重、年齡、症狀等而變動，所屬技術領域中具有通常知識者，可考慮該等條件，設定適當的投與量及投與方法。例如，作為本發明之較佳投與量與投與方法之一例， 可以使患者之血中谷底濃度值成為一定量以上的方式投與。較佳之血中谷底濃度值，可列舉例如150μg/mL以上、160μg/mL以上、170μg/mL以上、180μg/mL以上、190μg/mL以上、200μg/mL以上、210μg/mL以上、220μg/mL以上、230g/mL以上、240μg/mL以上、250μg/mL以上、260μg/mL以上、270μg/mL以上、280μg/mL以上、290μg/mL以上、300μg/mL以上、400μg/mL以上。更佳可列舉200μg/mL以上。
本發明之製劑中，係包含對自接受GPC3標 的治療劑療法之後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者進一步投與的指示書。又，於其他非限定之一態樣中，係包含對自接受過GPC3標的治療劑療法之癌患者中所單離之生物學試樣中之游離GPC3濃度在接受GPC3標的治療劑療法之後有增大之患者進一步投與的指示書。
本發明之非限定的一態樣中，係提供包含記 載了包含監測自接受GPC3標的治療劑療法之患者中所單離之生物學試樣中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為特定值時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效、或決定繼續進行該療法之指示書的製劑。
本發明之非限定的一態樣中，係提供包含記 載了包含監測自前述患者中所單離之生物學試樣中之游離GPC3濃度，於此該濃度為特定值時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效，或決定繼續 進行該療法之指示書的製劑。特定值可由0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3ng/mL、0.4ng/mL、0.5ng/mL、0.6ng/mL、0.7ng/mL、0.8ng/mL、0.9ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、3.0ng/mL、4.0ng/mL、5.0ng/mL、6.0ng/mL、7.0ng/mL、8.0ng/mL、9.0ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、25.0ng/mL、30.0ng/mL、35.0ng/mL、40.0ng/mL、45.0ng/mL、50.0ng/mL、55.0ng/mL、60.0ng/mL、65.0ng/mL、70.0ng/mL、75.0ng/mL、80.0ng/mL、85.0ng/mL、90.0ng/mL、100.0ng/mL等之特定值中決定，能夠以將由上述特定值之群組中任意選擇之特定值作為上限及下限的數值範圍來決定。 作為如此之數值範圍的例子，可由0.1ng/mL至100ng/mL之數值範圍中適當選擇。例如可舉例0.1至100ng/mL、0.5至80ng/mL、1.0至60ng/mL、2.0至55ng/mL、3.0至50ng/mL、4.0至45ng/mL、5.0至40ng/mL、6.0至35ng/mL、7.0至30ng/mL、8.0至25ng/mL、9.0至20ng/mL、10至20ng/mL。作為較佳之數值範圍可舉例0.1至0.35ng/mL、作為更佳之數值範圍，可舉例0.15至0.3ng/mL，但不限定為該等。游離GPC3濃度之特定值，係依賴於許多因子，例如所用之分析方法、測定游離GPC3之試樣的類型、試樣之保存條件(溫度及期間等)、患者之民族的同一性等，可有少許變化。 預測、預期或決定上述為有效之方法、或決定繼續進行該療法之方法中，游離GPC3之濃度，係測定自患者所單離 之血液、血漿或血清試樣中之濃度。
前述之游離GPC3之濃度，可於開始GPC3標 的治療劑療法之前及/或開始之後所單離之試樣中來測定，但該等亦能夠於以特定時間間隔所採取之複數個試樣來測定。以特定時間間隔所採取之複數當中試樣任一者中之游離GPC3濃度為上述特定濃度時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效，或決定繼續進行該療法。開始GPC3標的治療劑療法後之試樣採取的指定時間間隔係可適當設定，作為該間隔之非限定的一態樣，可於GPC3標的治療劑初次投與後1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日(亦即1週)、8日、9日、10日、11日、12日、13日、14日(亦即2週)、15日、16日、17日、18日、19日、20日、21日(亦即3週)、22日、23日、24日、25日、26日、27日、28日(亦即4週)、29日、30日、1個月、5週、6週、7週、8週、9週、10週、2個月、3個月、4個月、5個月、或6個月、或1次、2次、3次、4次、或其以上之治療循環後等之療法開始與結束之間的任何時間點採取。投與間隔亦即治療循環，係可適當設定，可列舉例如1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日(亦即1週)、8日、9日、10日、11日、12日、13日、14日(亦即2週)、15日、16日、17日、18日、19日、20日、21日(亦即3週)、22日、23日、24日、25日、26日、27日、28日(亦即4週)、29日、30日、1個月、5週、6週、7週、8週、9 週、10週、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月等作為非限定的一例。
於非限定的一態樣中，前述指示書中，係記 載包含監測開始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。於其他非限定的一態樣中，前述指示書中，係記載包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。
於非限定的一態樣中，前述指示書中，係記 載包含監測開始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。於其他非限定的一態樣中，前述指示書中，係記載包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為0.1ng/mL至100ng/mL之範圍時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。
又，本發明之非限定之其他一態樣中，該等 可與開始GPC3標的治療劑療法之前自患者中所單離之血液、血漿或血清試樣中測定的游離GPC3之濃度(「基線濃度」)比較。本態樣中，游離GPC3濃度之「特定值」，意指自接受GPC3標的治療劑療法之患者中所單離之生物學試樣中之游離GPC3濃度為該基線濃度以上的情況。亦即同一患者中接受GPC3標的治療劑療法前後，游離GPC3濃度係相同或有增加時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效，或決定繼續進行該療法。接受GPC3標的治療劑療法前後，游離GPC3濃度為相同或有增加之比例，可由所屬技術領域中具有通常知識者適當選擇，但不限定於特定值。作為如此之比例，可由1倍至106倍之數值範圍中適當選擇。例如，為1倍以上、1.05倍以上、1.1倍以上、1.2倍以上、1.3倍以上、1.4倍以上、1.5倍以上、1.6倍以上、1.7倍以上、1.8倍以上、1.9倍以上、2倍以上、2.1倍以上、2.2倍以上、2.3倍以上、2.4倍以上、2.5倍以上、2.6倍以上、2.7倍以上、2.8倍以上、2.9倍以上、3倍以上、3.1倍以上、3.2倍以上、3.3倍以上、3.4倍以上、3.5倍以上、3.6倍以上、3.7倍以上、3.8倍以上、3.9倍以上、4倍以上、4.1倍以上、4.2倍以上、4.3倍以上、4.4倍以上、4.5倍以上、4.6倍以上、4.7倍以上、4.8倍以上、4.9倍以上、5倍以上、5.1倍以上、5.2倍以上、5.3倍以上、5.4倍以上、5.5倍以上、5.6倍以上、5.7倍以上、5.8倍 以上、5.9倍以上、6倍以上、6.1倍以上、6.2倍以上、6.3倍以上、6.4倍以上、6.5倍以上、6.6倍以上、6.7倍以上、6.8倍以上、6.9倍以上、7倍以上、7.1倍以上、7.2倍以上、7.3倍以上、7.4倍以上、7.5倍以上、7.6倍以上、7.7倍以上、7.8倍以上、7.9倍以上、8倍以上、8.1倍以上、8.2倍以上、8.3倍以上、8.4倍以上、8.5倍以上、8.6倍以上、8.7倍以上、8.8倍以上、8.9倍以上、9倍以上、9.1倍以上、9.2倍以上、9.3倍以上、9.4倍以上、9.5倍以上、9.6倍以上、9.7倍以上、9.8倍以上、9.9倍以上、10倍以上、11倍以上、12倍以上、13倍以上、14倍以上、15倍以上、16倍以上、17倍以上、18倍以上、19倍以上、20倍以上、21倍以上、22倍以上、23倍以上、24倍以上、25倍以上、26倍以上、27倍以上、28倍以上、29倍以上、30倍以上、31倍以上、32倍以上、33倍以上、34倍以上、35倍以上、36倍以上、37倍以上、38倍以上、39倍以上、40倍以上、41倍以上、42倍以上、43倍以上、44倍以上、45倍以上、46倍以上、47倍以上、48倍以上、49倍以上、50倍以上、55倍以上、60倍以上、65倍以上、70倍以上、75倍以上、80倍以上、85倍以上、90倍以上、95倍以上、100倍以上、105倍以上、110倍以上、120倍以上、130倍以上、140倍以上、150倍以上、160倍以上、170倍以上、180倍以上、190倍以上、200倍以上、220倍以上、240倍以上、260倍以上、280倍以上、300倍以上、320 倍以上、340倍以上、360倍以上、380倍以上、400倍以上、420倍以上、440倍以上、460倍以上、480倍以上、500倍以上、550倍以上、600倍以上、650倍以上、700倍以上、750倍以上、800倍以上、850倍以上、900倍以上、950倍以上、1000倍以上、2000倍以上、3000倍以上、4000倍以上、5000倍以上、6000倍以上、7000倍以上、8000倍以上、9000倍以上、104倍以上、2×104倍以上、4×104倍以上、6×104倍以上、8×104倍以上、105倍以上、2×105倍以上、4×105倍以上、6×105倍以上、8×105倍以上、或106倍以上時，則預測、預期或決定該患者中GPC3標的治療劑療法對癌有效，或決定繼續進行該療法。
於非限定的一態樣中，前述指示書中，係記 載包含監測開始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，當該游離GPC3濃度係基線濃度以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。於其他非限定的一態樣中，前述指示書中，係記載包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，當該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。
上述之記載了該游離GPC3濃度為基線濃度 以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效的指示書中，亦可記載一併考慮自該患者中所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中的GPC3之表現量。亦即，亦可記載對象患者中之游離GPC3濃度為基線濃度以上，且自對象患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中之GPC3之表現量為特定之評估評分以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。於其他非限定的一態樣中，可記載包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，當該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上，且自該患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效。
自患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織 之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時之非限定的一態樣，可舉例以染色法1算出染色之結果的複合評估評分為高表現、或低或中表現(各個IHC total評分為7以上或未達7)。又亦可舉例以染色法2算出染色之結果的GPC3-IHC評分為1+、2+、3+的情況等，作為特定之組織免疫染色評分以上的情況之非限定之一態樣。
於非限定的一態樣中，前述指示書中，係記 載包含監測開始GPC3標的治療劑療法30日後或1個月 後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度係基線濃度以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。於其他非限定的一態樣中，前述指示書中，係記載包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。
上述之記載了該游離GPC3濃度為基線濃度 以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法之指示書中，亦可記載一併考慮自該患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中之GPC3之表現量。亦即，亦可記載對象患者中之游離GPC3濃度為基線濃度以上，且自對象患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中之GPC3之表現量為特定之評估評分以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法。於其他非限定的一態樣中，前述指示書，可記載包含監測開始GPC3標的治療劑療法2個月後、3個月後、4個月後、5個月後或6個月後自接受過該療法之患者中所單離之血液、血漿或血清中之游離GPC3濃度，當該游離GPC3濃度為基線濃度之1倍以上至106倍以上，且自該患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時，則決定繼續進行該GPC3標的治療劑 療法。
自患者所單離之組織、特別是含有肝癌組織之癌組織中GPC3之表現量為特定之組織免疫染色評分以上時的非限定之一態樣，可舉例以染色法1算出染色之結果的複合評估評分為高表現、或低或中表現(各個IHC total評分為7以上或未達7)。又亦可舉例以染色法2算出染色之結果的GPC3-IHC評分為1+、2+、3+的情況等，作為特定之組織免疫染色評分以上的情況之非限定之一態樣。
以下藉由實施例具體地說明本發明，但本發明不受該等實施例限制。
[實施例1]
GC33，係對人類GPC3具備高的親和性而結合之基因重組人類化IgG1單株抗體(WO2006/006693)。為了確認GC33之進行及/或復發性肝細胞癌(HCC)患者中之Dose Limiting Toxicity(DLT)，實施多設施第I期臨床試驗(GC-001US試驗)。以進行及/或復發性HCC患者中之安全性及/或容忍性之確認、GC33之藥物動力樣態(pharmacokinetics profile)、抗腫瘤效果、及生物標記探索為目的之本試驗中，係藉由使用一週一次的點滴的靜脈注射，對HCC患者投與GC33(2.5mg/kg~20mg/kg)。
經探討投與之HCC患者，於組織學或細胞學上確認了具有不適合外科手術及/或治癒性治療之進行性 或轉移性HCC。適格患者為至少18歲，美國東海岸癌臨床試驗群/表現狀態(performance status)為0或1、且Child-Pugh指數為A或B級。又，遵照固體腫瘤之治療效果基準(RECIST)，具有至少1個可評估之病變。作為其他基準，係評估了GPC3免疫組織染色(GPC3-IHC)所用之HCC腫瘤組織(針活體組織切片標本)之提供、適切之造血功能(絕對嗜中性球數≧1500/μl、血小板≧50000/μl)、肝功能(總膽紅素≦正常之3倍、天門冬胺酸胺基轉移酶及丙胺酸胺基轉移酶≦正常之5倍、PT-INR≦2.0)、及腎功能(血清肌酸酐≦正常之2倍)。孕婦、授乳婦或懷孕檢查陽性(懷孕檢查係以自登錄日起12個月以內有過月經之女性作為對象)之患者、無意使用適切之避孕法的患者、HIV抗體陽性患者、具有HBV或HCV以外之需要治療的活動性感染症之患者、具有無病期間未達5年之其他活動性惡性腫瘤之患者、過去有移植經歷之患者、可觀察到伴隨著症狀之腦轉移的患者、對同意或實施臨床試驗之理解有障礙之具有中樞神經系統障礙或其他精神障礙之患者、因肝性腦症所致顯示中樞神經系統症狀之患者、對於其他抗體醫藥品或由CHO細胞所製造之醫藥品已知有過敏性之患者，係為登錄的除外對象。又，GPC3標的治療劑投與前之4週以內接受過包含主要的外科手術、放射線療法、其他化學療法之治療的患者、2週以內接受過Sorafenib之治療的患者或1週以內接受過針活體組織切片之患者雖為GPC標的治療劑療法登錄之除外對象，但特定期間之 wash-out以後係實施GPC3標的治療。實驗計劃係遵照醫藥品臨床試驗之實施基準之規範來實施，並經各自所參加之臨床試驗倫理審査委員會認可。全部的患者係於登錄之前，於書面的告知後同意(informed consent)上簽名。患者係以GC33之4次投與作為1循環，只要未表現疾病進行或無法容許之毒性，則繼續投與GC33。腫瘤之評估係以基線來實施，至疾病進行為止每2循環反覆來評估。疾病狀態係經臨床試驗責任醫師評估。
HCC腫瘤組織中之GPC3蛋白質表現，係藉由 GPC3組織免疫染色(GPC3-IHC)來評估。GPC3-IHC係於美國Charles River Laboratory來實施其中央測定。於各醫院以針活體組織切片摘取之後，實施甲醛固定及由石蠟法包埋之腫瘤石蠟塊所配製之HCC腫瘤組織之未染色玻片的免疫組織染色。美國Charles River Laboratory中測定時之抗原活化法等組織染色手法，係根據WO2009/116659記載之方法。作為抗體係使用小鼠GC33抗體、及作為陰性對照抗體係使用小鼠IgG2a抗體(WO2006/006693)。
關於Charles River Laboratory所實施之 GPC3-IHC(染色法1)，係將遵照表4所示基準來算出之：陽性細胞率(Positive cell rate：PR)、細胞質或細胞膜之染色強度(Staining intensity of cytoplasm：SI-cp,Staining intensity of cell membrane：SI-cm)及細胞膜染色型態(Staining pattern of cell membrane：Sp-cm)之各個評分，基於式1及式2之計算式予以加算，評估染色後之各試 樣。各染色試樣之評估，係經3名病理醫師的Peer review meeting予以最終化。
(Sp-Cm之評估時，係評估使用了4倍或10倍物鏡之顯微鏡檢查下，視野中細胞之染色) [數3]IHC total=PR+SI-Cp+SI-Cm+Sp-Cm
本試驗中所登錄，且進行投與之20個病例當中，1個病例無法得到標本、3個病例未包含用以評估所充分的腫瘤細胞，因此最終可評估16個病例。將以熱壓釜法之抗原活化法所進行之染色中IHC total評分，以最大值(14)之一半即7前後分為二群時，各病例之評估結果 示於表5及圖1。
[實施例2]
評估GPC3標的治療中GC33投與所致的抗腫瘤效果。如上述般，經投與GC33之20個病例的投與期間，係如圖2所示。評估病勢的結果，於4個病例中觀察到5個月以上之病勢穩定狀態(Stable disease：SD)。
調查了腫瘤組織中之GPC3之表現與GC33之抗腫瘤效果的關聯性。顯示了可評估GPC3-IHC之16個病例的IHC total評分與投與期間之關聯性的結果，以IHC total評分為7以上、或未達7來分為二群時，可得以下結果：觀察到5個月以上之長期間SD的病例係全部包含在高值群中、且高值群中之長期間SD病例所佔的比例亦高(表6)。
接著，比較IHC total評分7以上之群、與未 達7之群之無惡化生存期(PFS：Progression-free survival)，顯示了7以上之群中顯示了顯著的PFS為長(圖3)。
又，使用上述評估之腫瘤檢體的一部分，追 加GPC3-IHC而評估。使用BenchMark自動染色裝置(Ventana Medical Systems公司製)，藉由遵照anti-glypican 3 Mouse GC33 Monoclonal Primary Antibody(Ventana Medical System Inc.)添附之指示書的美國Ventana Medical System，進行所得14例之標本的染色中央測定。以Ventana Medical System實施之GPC3-IHC(染色法2)中，係遵照添附之指示書染色後，藉由腫瘤細胞之染色比例、強度等，以0~3+為止的4階段來評分化，得到如表7所示之分布。
又，染色法2中，分為0及1+與2+及3+二 群時，2+/3+群包含高比率且全部顯示長期間SD之病例(表8)。
[實施例3]
GPC3標的治療中，測定經投與GC33之患者血清中的游離GPC3之濃度。將各自以成為7.5μg/mL的方式以固定化緩衝液(0.05mol/L碳酸氫鈉，pH 9.6)稀釋之小鼠抗GPC3單株抗體M3C11及L9G11抗體(WO2004/022739)，於各孔各分注100μL後，於室溫靜置1小時後，將盤之各孔以洗淨緩衝液(0.05mol/L Tris buffered saline,pH 8.0,0.05% Tween-20)洗淨3次。之後，將阻斷(blocking)緩衝液(25mmol/L Tris-HCl buffer,pH 8.1,0.5mmol/L氯化鎂，72mmol/L氯化鈉，0.05% ProClin 150,5mg/mL牛血清白蛋白，0.025% Tween-20,1% Block Ace)，對各孔各分注200μL，於室溫靜置2小時，製作經固定化上述抗體之盤。該盤未立即使用時，係在4℃保存後，於測定使用。
將以稀釋緩衝液(25mmol/L Tris-HCl buffer, pH 8.1,0.5mmol/L氯化鎂，72mmol/L氯化鈉，0.05% ProClin 150,5mg/mL牛血清白蛋白，0.025% Tween-20,0.4% Block Ace)稀釋4倍之上述臨床試驗中所採取的患者血清，對各孔各添加100μL，將該盤於4℃靜置整夜。再者，作為GPC3標準物質，係使用將495位以及509位之絲胺酸殘基取代為丙胺酸殘基，使硫酸乙醯肝素糖鏈不結合之重組GPC3(Hippo等人(Cancer Res.(2004)64,2418-2423))。
接著，於經洗淨緩衝液洗淨3次之該盤的各 孔中，各添加經稀釋緩衝液稀釋為0.3μg/mL之生物素標識抗Glypican-3多株抗體(R&D system公司製)100μL。進一步於25℃靜置1小時後，將該盤之各孔以洗淨緩衝液洗淨3次。之後，遵照指示書，於各孔添加經稀釋緩衝液稀釋之100μL之HRP標識卵白素(Streptavidin-Poly HRP80)(Streptspecific Detection Technologies公司製)後，將前述盤於25℃靜置1小時。之後，將前述盤之各孔以洗淨緩衝液洗淨3次後，遵照套組所附之指示書，使用TMB Microwell Peroxidase Substrate System(Kirkegaard & Perry Laboratories Inc公司製)顯色後，測定前述各孔反應液於 450nm以及650nm之吸光度。使用基於含有前述重組GPC3之標準試樣所作成之檢量線(標準曲線)，由所得各孔之吸光度，算出各患者之血清中GPC3抗原。
[實施例
將實施例2中決定之腫瘤組織GPC3-IHC評分分為高值群與低值群二群，將於實施例3算出之血清中所檢測出之游離GPC濃度的遞移示於圖4。基於GPC3-IHC評分評估為GPC3高表現之群(圖4A)中，測定到游離GPC3之病例數多。進一步地，顯示長期間SD之病例中，觀察到游離GPC3濃度之上昇、或穩定化。相對於此，基於GPC3-IHC評分評估為GPC3低表現或陰性之群(圖4B)中，測定到游離GPC3之病例數少。
又，篩選時、或初次投與前採血之血清中，係比較了經測定GPC3之群(GPC3陽性群)、檢測極限以下之群的無惡化生存期間(Progression free survival：PFS)。GPC3標的治療實施前之血清GPC3之陽性群之PFS，可觀察到比陰性群之PFS更長(圖5A)。進一步地，血清GPC3之陽性群含有GPC3標的治療劑之投與開始後經測定血清GPC3之血清的情況時，對數排序檢定之結果，相較於陰性群(與GPC3標的治療劑之投與無關地，測定極限以下之病例)之PFS、陽性群之PFS而言，均顯示顯著地為長(圖5B)。
[實施例5]
又，如表9以及表10所示，使用染色法1及染色法2評估之GPC3-IHC評分之高值群且血清GPC3值為陽性時的長期間SD之比例，相較於GPC3-IHC評分為高值群時的長期間SD之比例，顯示為更高(表6、8至10)。
[實施例6]
該臨床試驗中，基於染色法1之結果，GPC3-IHC之IHC total評分為7以上、且Child-Pugh評分A之病例，進一步追加登錄了7例(其中，1例之IHC total評分，最終評估之結果IHC total評分判定為6)。遵照實施例3之方法，測定了血清中之GPC3值。又，與實施例4同樣地評估經投與GPC3標的治療劑之合計27病例的PFS。使用對數排序檢定，來探討該等病例血清中之 GPC3值與PFS之關聯性的結果，投與前可測定血清中之GPC3之群的PFS(圖6A)、及投與前以及投與後任一者可測定血清中之GPC3之群(圖6B)之PFS，均顯示較血清中之GPC3為測定極限以下之群的PFS更顯著地長。
[實施例7]
為了確認GC33之進行及/或復發性肝細胞癌(HCC)患者中之有效性、安全性，實施了以之前有治療經歷之無法切除進行性或轉移性肝細胞癌成人患者為對象之隔週投與GC33 1600mg之多設施共同隨機化雙盲試驗安慰劑對照第II期臨床試驗(NP27884試驗)。患者係以2：1之比率對GC33群(以1600mg固定用量，1週間隔2次投與後，隔週投與，n=21例)或安慰劑群(n=60例)隨機化分配及藉由使用GPC3-IHC套組(Ventana公司製)之IHC染色，基於GPC3表現量(0,1+,2+/3+)，階層化為3群組。主要解析，係於在臨床試驗實施計畫書中計畫之128例的無復發生存(PFS)事件所發生的時間點實施。
經探討投與之HCC患者，於組織學上確認了不適合於治癒性療法(外科切除、肝移植等)及/或局部療法、或具有治療後惡化之進行性或轉移性HCC(fibrolamellar型除外)，具有至少1劑之全身療法的以往治療經歷。適格患者為至少18歲，且可提供GPC3測定用腫瘤樣本、美國東海岸癌臨床試驗群/表現狀態為0或1、且Child-Pugh指數為A級。又，遵照固體腫瘤之治療 效果基準(RECIST)，具有至少1個可評估之病變。作為其他基準，係評估了適切之造血功能(絕對嗜中性球數≧1500/μl、血小板≧50000/μl、血紅素≧8.0g/dl)、肝功能(總膽紅素≦2mg/dl、天門冬胺酸胺基轉移酶及丙胺酸胺基轉移酶≦正常上限值之5倍)、及腎功能(血清肌酸酐≦正常上限值之2倍)。對於停經前的女性，臨床試驗藥投與開始前10日以內實施之血清懷孕檢查確認為陰性的患者係可登錄；對於接受過外科避孕處置、或停經後經過1年以上無懷孕可能性之女性，則停經後(12個月以上無月經)、或接受過外科避孕處置(卵巢及/或子宮之切除)以外的女性同意在臨床試驗治療中及臨床試驗藥投與結束後至少3個月以上使用2種適切之避孕方法的患者係可登錄。 男性的情況時，除了臨床試驗治療中以外，同意於臨床試驗藥投與結束後使用基於至少40日之屏障法的避孕方法的患者係被登錄。另一方面，GPC3標的治療劑投與前2週以內接受過主要外科手術或尚未由嚴重障礙回復之患者、確認有對腦或軟腦膜之轉移的患者、過去5年以內有過惡性腫瘤之患者、具有B型/C型肝炎以外之需要治療之活動性感染症的患者、臨床試驗藥投與開始前4週以內根據NCI CTCAE v4.0有過Grade 3以上出血之患者、有過包含肝移植之臟器移植的患者、有投與本試驗投與之藥劑以外之抗癌劑的預定或投與中之患者、試驗登錄前2週以內投與過抗癌劑之患者、尚未由對肝細胞癌之前次局部區域療法或全身療法之副作用完全回復的患者、干擾素療 法施行中之患者、基線之QTc超過470ms、或基線中安靜時呈現徐脈(未達45次/分鐘)之患者、臨床試驗藥投與開始前2週以內，經投與以治療為目的之抗凝血劑或血栓溶解劑的患者(以去除導管堵塞為目的、或以預防目的之低用量投與除外)、懷孕中或授乳中之患者、HIV陽性患者、或AIDS關聯疾病發病之患者、對類似藥劑(單株抗體、含蛋白製劑、來自中國倉鼠卵巢之製劑)有過敏症經歷的患者、有重要之併存疾病，臨床試驗責任/分擔醫師判斷因臨床試驗藥會有惡化可能性患者，係登錄之除外對象。
實驗計劃，係遵照醫藥品臨床試驗之實施基 準的規範來實施，並經各自所參加之臨床試驗倫理審査委員會認可。全部的患者係於登錄之前，於書面的告知後同意上簽名。患者只要未表現疾病進行或無法容許之毒性，則繼續投與GC33。腫瘤之評估係以基線來實施，至疾病進行為止。自投與開始起4循環、7循環、10循環之時間點，之後係每4循環反覆來評估。再者，1循環為2週，疾病狀態係經臨床試驗責任醫師評估。
HCC腫瘤組織中之GPC3蛋白質表現，係藉由 GPC3組織免疫染色(GPC3-IHC)來評估。GPC3-IHC係於美國Ventana Medical Systems實施中央測定。於各醫院以針活體組織切片摘取之後，實施甲醛固定及由石蠟法包埋之腫瘤石蠟塊所配製之HCC腫瘤組織之未染色玻片的免疫組織染色。抗體係使用小鼠GC33抗體。
[實施例8]
GPC3標的治療中，經投與GC33或安慰劑之病例之初次投與前血清中之游離GPC3之濃度，係藉由結合於2種不同之游離GPC3的抗體之組合(由GT30抗體與GT607抗體所成之組合、或由GT114與GT165所成之組合)來測定。GT30、GT607、GT114及GT165，係遵照WO2004/022739記載之方法來製作，選擇結合於游離GPC3之抗體。GT30之H鏈及L鏈係分別以序列編號：83及84表示、GT607之H鏈及L鏈係分別以序列編號：85及86表示、GT114之H鏈及L鏈係分別以序列編號：87及88表示、GT165之H鏈及L鏈係分別以序列編號：89及90表示。
於96孔微孔盤中，各添加25μL之於磁粒子珠(JSR公司製)結合有GT30或GT114的抗體結合粒子液，接著進一步添加檢量線用標準試樣液(使用上述實施例3中之GPC3標準物質)、或適當稀釋之血清試樣各25μL、進一步添加標識有鹼性磷酸酯酶之GT607或GT165再各25μL。於25℃振盪20分鐘後，使用Dyna-Mag-96 Side Skirted(Veritas公司製)，於集磁之狀態下，以洗淨液洗淨5次，各添加50μL之預先加溫至37℃之發光基質液。於室溫振盪1分鐘後，藉由靜置4分鐘使其發光。化學發光強度係使用光度計(Veritas公司製)測定。
使用基於含有重組GPC3之標準試樣所作成之檢量線 (標準曲線)，自所得各孔之化學發光強度算出各患者之血清中GPC3抗原。
[實施例9]
如上述般經投與GC33之125個病例以及經投予安慰劑之60個病例當中，於得到128個病例分之PFS事件的時間點，藉由PFS評估GPC3標的治療中GC33投與所致之效果。又，作為二次評估，係藉由全生存(OS)到達78個事件之時間點的OS來評估。
又，GC33投與群中，藉由使用本第II期臨床試驗中之GC33血清濃度值所得之集團PK模式，推測第3循環‧第1日(自初次投與開始之第4週)之投與前血中GC33谷底濃度值，以谷底濃度值之中央值即230μg/ml作為截止(cut-off)，分為GC33之暴露少之群(GC33低暴露群)、或GC33之暴露多之群(GC33高暴露群)之2群，藉由Kaplan-Meier法來比較各自之群、或與安慰劑群之間作為臨床效果之指標的無惡化生存期間(PFS)或全生存期間(OS)。
[實施例10]
關於實施例8中算出之血清中所檢測出之各游離GPC3濃度，係基於GT30與GT607之組合之系統中的測定值之中央值，分類為低值群、高值群之2群，如實施例9所示，GC33低暴露、高暴露或安慰劑群中之PFS 曲線或OS曲線係如圖7A~D所示。又，同樣地基於GT114與GT165之組合之系統中的中央值，將分類為2群時之PFS曲線或OS曲線示於圖8A~D。
所有情況中，於游離GPC3濃度低之群中， PFS期間以及OS期間之延長效果小，相對於此，血清中之游離GPC3濃度高之群中，GC33高暴露群相對於低暴露群或安慰劑群，於PFS期間以及OS期間中顯示了顯著低之風險比。
又，探討顯著差最小之游離GPC3之截止值 的結果，GT30-GT607中175pg/mL、GT114-GT165係259.7pg/mL，較各自截止值顯示高之游離GPC3值的患者群中之PFS曲線及OS曲線，係分別示於圖7E及F、以及圖8E及F。同樣地，於GC33高暴露群，顯示了顯著低之風險比、亦即各生存期間之延長。
本說明書中所引用之全部刊物、專利及專利申請，均直接作為參考，援引至本說明書中。
〔產業上之可利用性〕
本發明係供G PC3標的治療劑療法之有效性提高、與接受治療之患者的QOL改善者，有用於以肝癌為始之癌的治療。
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<110> Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha
<120> GPC3-targetted therapeutic agent to be administered to patients who is responsible to GPC3-targetted therapy
<130> PCG-9038WO
<150> JP2012-280304
<151> 2012-12-21
<160> 90
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 580
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Claims (44)

  1. 一種決定GPC3標的治療劑療法對患者中之癌之有效性、或決定對患者繼續進行GPC3標的治療劑療法之方法，其係包含監測接受GPC3標的治療劑療法之前的患者及/或自接受GPC3標的治療劑療法之患者中所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度，當該游離GPC3濃度為特定值時，則決定該GPC3標的治療劑療法為有效、或決定繼續進行該GPC3標的治療劑療法之方法。
  2. 如請求項1之方法，其中前述游離GPC3濃度，係自患者中所單離之全血試樣、血漿試樣、或血清試樣中的濃度。
  3. 如請求項2之方法，其中前述自患者中所單離之生物學試樣中的前述游離GPC3濃度，係血漿試樣或血清試樣中的濃度。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中前述游離GPC3之特定值係0.1ng/mL至100ng/mL之範圍。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中前述游離GPC3濃度，係使用免疫學方法測定。
  6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中前述游離GPC3濃度，相較於在開始GPC3標的治療劑療法之前自該患者中所單離之生物學試樣中游離GPC3濃度而言，係有所增大。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中前述患者係GPC3之組織免疫染色評分顯示高表現的患者。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中前述癌為肝癌。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中前述GPC3標的治療劑，係以癌患者之血中谷底濃度值成為200μg/ml以上的方式投與。
  10. 如請求項1至9中任一項之方法，其中前述GPC3標的治療劑係含有抗GPC3抗體作為有效成分之治療劑。
  11. 如請求項10之方法，其中前述抗GPC3抗體，係具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞傷害(CDC)活性之抗體。
  12. 如請求項10或11之方法，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下(1)至(5)中任一者；(1)分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(2)分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(3)分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3； (4)分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或(5)分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；之抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體。
  13. 如請求項10至12中任一項之方法，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下任一者；(1)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域；(2)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域； (3)以序列編號：67表示之重鏈可變區域、及以序列編號：68表示之輕鏈可變區域；(4)以序列編號：69表示之重鏈可變區域、及以序列編號：70表示之輕鏈可變區域；(5)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：72表示之輕鏈可變區域；或(6)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：73表示之輕鏈可變區域；之抗體。
  14. 如請求項10之方法，其中前述GPC3標的治療劑係含有細胞傷害性物質與抗GPC3抗體連結而得之抗體。
  15. 一種GPC3標的治療劑，其係用以對自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與。
  16. 一種GPC3標的治療劑，其係用以對自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者進一步投與。
  17. 如請求項15或16之治療劑，其中前述游離GPC3濃度，係自癌患者所單離之全血試樣、血漿試樣、或血清試樣中之濃度。
  18. 如請求項17之治療劑，其中自前述癌患者所單離之生物學試樣中的前述游離GPC3濃度，係血漿試樣或血清試樣中之濃度。
  19. 如請求項15至18中任一項之治療劑，其中前述 游離GPC3之特定值係0.1ng/mL至60ng/mL之範圍。
  20. 如請求項15至19中任一項之治療劑，其中前述游離GPC3濃度，係使用免疫學方法測定。
  21. 如請求項15至20中任一項之治療劑，其中接受GPC3標的治療劑療法之後，前述游離GPC3濃度係增大。
  22. 如請求項15至21中任一項之治療劑，其中前述患者係GPC3之組織免疫染色評分顯示高表現的患者。
  23. 如請求項15至22中任一項之治療劑，其中前述癌患者係肝癌患者。
  24. 如請求項15至23中任一項之治療劑，其中前述GPC3標的治療劑，係以癌患者之血中谷底濃度值成為200μg/ml以上的方式投與。
  25. 如請求項15至24中任一項之治療劑，其中前述GPC3標的治療劑係含有抗GPC3抗體作為有效成分之治療劑。
  26. 如請求項25之治療劑，其中前述抗GPC3抗體，係具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞傷害(CDC)活性之抗體。
  27. 如請求項25或26之治療劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下(1)至(5)中任一者；(1)分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示 之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(2)分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(3)分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(4)分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或(5)分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；之抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體。
  28. 如請求項25至27中任一項之治療劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下任一者；(1)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域； (2)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域；(3)以序列編號：67表示之重鏈可變區域、及以序列編號：68表示之輕鏈可變區域；(4)以序列編號：69表示之重鏈可變區域、及以序列編號：70表示之輕鏈可變區域；(5)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：72表示之輕鏈可變區域；或(6)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：73表示之輕鏈可變區域；之抗體。
  29. 如請求項25之治療劑，其中前述GPC3標的治療劑係於抗GPC3抗體結合有細胞傷害性物質而得之抗體。
  30. 一種用以進行GPC3標的治療之製劑，其係包含對自接受GPC3標的治療劑療法之前的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與的指示書。
  31. 一種用以進行GPC3標的治療之製劑，其係包含進一步對自接受過GPC3標的治療劑療法後的癌患者所單離之生物學試樣中的游離GPC3濃度為特定值之患者投與的指示書。
  32. 如請求項30或31之製劑，其中前述游離GPC3濃度，係自癌患者所單離之全血試樣、血漿試樣、或血清試樣中之濃度。
  33. 如請求項32之製劑，其中自前述癌患者所單離之生物學試樣中的前述游離GPC3濃度，係血漿試樣或血清試樣中之濃度。
  34. 如請求項30至33中任一項之製劑，其中前述游離GPC3之特定值係0.1ng/mL至100ng/mL之範圍。
  35. 如請求項30至34中任一項之製劑，其中前述游離GPC3濃度，係使用免疫學方法測定。
  36. 如請求項30至35中任一項之製劑，其中接受GPC3標的治療劑療法之後，前述游離GPC3濃度係增大。
  37. 如請求項30至36中任一項之製劑，其中前述患者係GPC3之組織免疫染色評分顯示高表現的患者。
  38. 如請求項30至37中任一項之製劑，其中前述癌患者係肝癌患者。
  39. 如請求項30至38中任一項之製劑，其中前述GPC3標的治療劑，係以癌患者之血中谷底濃度值成為200μg/ml以上的方式投與。
  40. 如請求項30至39中任一項之製劑，其中前述GPC3標的治療劑係含有抗GPC3抗體作為有效成分之治療劑。
  41. 如請求項40之製劑，其中前述抗GPC3抗體，係具有抗體依賴性細胞傷害(ADCC)活性及/或補體依賴性細胞傷害(CDC)活性之抗體。
  42. 如請求項40或41之製劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下(1)至(5)中任一者；(1)分別以序列編號：4、序列編號：5、及序列編號：6表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：7、序列編號：8、及序列編號：9表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(2)分別以序列編號：12、序列編號：13、及序列編號：14表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：15、序列編號：16、及序列編號：17表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(3)分別以序列編號：20、序列編號：21、及序列編號：22表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：23、序列編號：24、及序列編號：25表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；(4)分別以序列編號：28、序列編號：29、及序列編號：30表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：31、序列編號：32、及序列編號：33表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；或 (5)分別以序列編號：36、序列編號：37、及序列編號：38表示之重鏈CDR1、重鏈CDR2及重鏈CDR3；以及分別以序列編號：39、序列編號：40、及序列編號：41表示之輕鏈CDR1、輕鏈CDR2及輕鏈CDR3；之抗GPC3嵌合體抗體或人類化抗GPC3抗體。
  43. 如請求項40至42中任一項之製劑，其中前述抗GPC3抗體，係含有以下任一者；(1)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及以序列編號：51表示之輕鏈可變區域；(2)由以序列編號：44、序列編號：45、序列編號：46、序列編號：47、序列編號：48、序列編號：49、及序列編號：50表示之重鏈可變區域之群中選擇之重鏈可變區域、以及由以序列編號：52、序列編號：53、序列編號：54、序列編號：55、序列編號：56、序列編號：57、序列編號：58、序列編號：59、序列編號：60、序列編號：61、序列編號：62、序列編號：63、序列編號：64、序列編號：65、及序列編號：66表示之輕鏈可變區域之群中選擇之輕鏈可變區域；(3)以序列編號：67表示之重鏈可變區域、及以序列編號：68表示之輕鏈可變區域；(4)以序列編號：69表示之重鏈可變區域、及以序列編號：70表示之輕鏈可變區域； (5)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：72表示之輕鏈可變區域；或(6)以序列編號：71表示之重鏈可變區域、及以序列編號：73表示之輕鏈可變區域；之抗體。
  44. 如請求項40之製劑，其中前述GPC3標的治療劑係於抗GPC3抗體結合有細胞傷害性物質而得之抗體。
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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070087005A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Lazar Gregory A Anti-glypican-3 antibody
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
EP3141603A4 (en) * 2014-05-08 2017-12-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Gpc3-targeted therapeutic agent for administration to patients for whom gpc3-targeted therapeutic agent therapy is effective
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
US10537626B2 (en) 2014-10-07 2020-01-21 Cytlimic Inc. HSP70-derived peptide, pharmaceutical composition for treating or preventing cancer using same, immunity inducer, and method for producing antigen presenting cell
TW201636358A (zh) * 2014-12-09 2016-10-16 腫瘤療法 科學股份有限公司 對於ｔｈ１細胞之ｇｐｃ３抗原決定位胜肽及含此之疫苗
BR112017018703A2 (pt) * 2015-03-09 2018-04-17 Cytlimic Inc. peptídeo derivado de gpc3, composição farmacêutica para tratamento ou prevenção de câncer usando o mesmo, indutor de imunidade, e método para produzir células de apresentação de antígeno
BR112017020404A2 (pt) 2015-04-07 2018-07-10 Cytlimic Inc. medicamento
US11376326B2 (en) 2015-07-01 2022-07-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha GPC3-targeting therapeutic agent which is administered to patient for whom the GPC3-targeting therapeutic agent is effective
DK3333192T3 (da) * 2015-08-03 2021-05-31 Cafa Therapeutics Ltd Antistof imod glypican-3 og anvendelse deraf
EP3153230A1 (en) * 2015-10-08 2017-04-12 The Provost, Fellows, Foundation Scholars, & the other members of Board, of the College of Holy and Undiv. Trinity of Queen Elizabeth near Dublin A method for the production of poly(methyl methacrylate) (pmma) membranes and uses thereof
KR101796688B1 (ko) * 2015-10-29 2017-12-01 재단법인 목암생명과학연구소 신규 항-글리피칸 3 항체 및 이를 포함하는 약학적 조성물
CN105759051B (zh) * 2016-02-25 2018-12-18 广州科方生物技术股份有限公司 一种磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析试剂盒及其制备方法
KR102018774B1 (ko) * 2016-03-07 2019-09-04 포항공과대학교 산학협력단 Glypican-3에 선택적으로 결합하는 압타머 및 이의 용도
EP3430054B1 (en) 2016-03-15 2021-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies
TW201813664A (zh) 2016-10-11 2018-04-16 賽多利克公司 醫藥
TWI831365B (zh) 2017-01-10 2024-02-01 國立大學法人山口大學 抗ｇｐｃ３抗體
CA3065447A1 (en) * 2017-06-05 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Methods of engineering surface charge for bispecific antibody production
US20200216542A1 (en) 2017-09-20 2020-07-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
WO2020089769A1 (en) * 2018-10-29 2020-05-07 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding hla-dr/colii_259 complex and their uses
KR102154683B1 (ko) * 2019-11-08 2020-09-11 주식회사 압타머사이언스 글리피칸-3 특이적 변형 압타머 및 이의 용도
CN113444179B (zh) * 2020-03-26 2022-09-02 苏州普乐康医药科技有限公司 一种抗gpc3抗体和包含该抗体的药物组合物
WO2022171100A1 (zh) * 2021-02-10 2022-08-18 江苏先声药业有限公司 Gpc3人源化抗体及其应用
WO2022268196A1 (zh) * 2021-06-25 2022-12-29 天辰生物医药(苏州)有限公司 靶向gpc3的抗原结合蛋白
CN113817055B (zh) * 2021-10-27 2023-04-18 福州迈新生物技术开发有限公司 抗Actin蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用
CA3237201A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Sotio Biotech Inc. Treatment of myxoid/round cell liposarcoma patients
WO2023174401A1 (zh) * 2022-03-18 2023-09-21 映恩生物制药（苏州）有限公司 Gpc3抗体药物偶联物及其用途

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5322678A (en) 1988-02-17 1994-06-21 Neorx Corporation Alteration of pharmacokinetics of proteins by charge modification
AU3272695A (en) 1994-08-12 1996-03-07 Immunomedics Inc. Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
US6617156B1 (en) 1997-08-15 2003-09-09 Lynn A. Doucette-Stamm Nucleic acid and amino acid sequences relating to Enterococcus faecalis for diagnostics and therapeutics
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
DK1156823T3 (da) 1999-02-12 2009-01-19 Scripps Research Inst Fremgangsmåder til behandling af tumorer og metastaser ved anvendelse af en kombination af anti-angiogene terapier og immunoterapier
PT1914244E (pt) 1999-04-09 2013-07-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para regular a actividade de moléculas funcionais sob o ponto de vista imunológico
CA2785941C (en) 2000-10-06 2017-01-10 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Antibody composition-producing cell
US6436411B1 (en) * 2000-10-23 2002-08-20 The Center For The Improvement Of Human Functioning, Int'l., Inc. Cancer treatment method
WO2002040545A2 (en) 2000-11-17 2002-05-23 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Reduction of the nonspecific animal toxicity of immunotoxins by mutating the framework regions of the fv to lower the isoelectric point
WO2002079255A1 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Idec Pharmaceuticals Corporation RECOMBINANT ANTIBODIES COEXPRESSED WITH GnTIII
JP4281869B2 (ja) 2001-06-22 2009-06-17 中外製薬株式会社 抗グリピカン３抗体を含む細胞増殖抑制剤
EP3960855A1 (en) 2001-12-28 2022-03-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for stabilizing proteins
AUPS054702A0 (en) * 2002-02-14 2002-03-07 Immunaid Pty Ltd Cancer therapy
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
WO2003100429A2 (en) 2002-05-23 2003-12-04 Sunnybrook And Women's College Health Sciences Centre Diagnosis of hepatocellular carcinoma
WO2004023145A1 (ja) 2002-09-04 2004-03-18 Perseus Proteomics Inc. Ｇｐｃ3の検出による癌の診断方法
AU2002338020A1 (en) 2002-09-04 2004-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody against blood-solubilized n-terminal peptide in gpc3
AU2002328429A1 (en) 2002-09-04 2004-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha CONSTRUCTION OF ANTIBODY USING MRL/lpr MOUSE
DK2345671T3 (en) 2002-09-27 2016-02-15 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
NZ541503A (en) 2003-01-22 2008-09-26 Glycart Biotechnology Ag Fusion constructs and use of same to produce antibodies with increased Fc receptor binding affinity and effector function
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
WO2005023301A1 (ja) 2003-09-04 2005-03-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 胆管癌治療剤および検出薬
US20080089892A1 (en) 2004-01-12 2008-04-17 Eli Lilly And Co. Fc Region Variants
JP4658926B2 (ja) * 2004-04-28 2011-03-23 株式会社ペルセウスプロテオミクス 肝癌治療後の再発予測判定薬
JP4331227B2 (ja) * 2004-07-09 2009-09-16 中外製薬株式会社 抗グリピカン３抗体
NZ579543A (en) 2004-07-09 2011-07-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-glypican 3 antibody
DK1776384T3 (da) 2004-08-04 2013-09-02 Mentrik Biotech Llc VARIANT-Fc-REGIONER
CA2577370A1 (en) 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Inc. Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
KR20070057839A (ko) 2004-08-19 2007-06-07 제넨테크, 인크. 변경된 이펙터 기능을 갖는 폴리펩티드 변이체
KR20130103580A (ko) * 2004-08-24 2013-09-23 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항 글리피칸 3 항체를 이용한 어쥬번트 요법
WO2006038588A1 (ja) 2004-10-05 2006-04-13 Perseus Proteomics Inc. 肝炎重篤化のモニター薬
NZ554940A (en) 2004-10-26 2010-04-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-glypican 3 antibody having modified sugar chain
AU2005335714B2 (en) 2004-11-10 2012-07-26 Macrogenics, Inc. Engineering Fc antibody regions to confer effector function
JPWO2006067847A1 (ja) 2004-12-22 2008-06-12 中外製薬株式会社 フコーストランスポーターの機能が阻害された細胞を用いた抗体の作製方法
AU2006230413B8 (en) 2005-03-31 2011-01-20 Xencor, Inc Fc variants with optimized properties
US8008443B2 (en) 2005-04-26 2011-08-30 Medimmune, Llc Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
CA2614181A1 (en) 2005-07-01 2007-01-11 Medimmune, Inc. An integrated approach for generating multidomain protein therapeutics
DK1919503T3 (en) 2005-08-10 2014-12-15 Macrogenics Inc Identification and preparation of antibodies with variant fc regions and methods of use thereof
JP2007093274A (ja) * 2005-09-27 2007-04-12 Perseus Proteomics Inc 癌の診断方法および治療薬
EP1931709B1 (en) 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
US20070087005A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Lazar Gregory A Anti-glypican-3 antibody
WO2007059782A1 (en) 2005-11-28 2007-05-31 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
US7723043B2 (en) 2006-01-04 2010-05-25 Picobella, Lp Methods for screening for prostate cancer
WO2007137170A2 (en) 2006-05-20 2007-11-29 Seattle Genetics, Inc. Anti-glypican-3 antibody drug conjugates
ATE501436T1 (de) 2006-09-13 2011-03-15 Glycode Verfahren zur untersuchung der reaktion auf eine behandlung mit einem monoklonalen antikörper
EP2174938A1 (en) 2006-10-12 2010-04-14 SuperGen, Inc. Quinoline derivatives for modulating DNA methylation
WO2008092117A2 (en) 2007-01-25 2008-07-31 Xencor, Inc. Immunoglobulins with modifications in the fcr binding region
EP3689912A1 (en) 2007-09-26 2020-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
BRPI0817637A2 (pt) * 2007-09-28 2015-09-08 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpo anti-glipican-3 tendo cinéticas aperfeiçoadas no plasma
ES2532461T3 (es) 2007-12-26 2015-03-27 Xencor, Inc. Variantes de FC con enlazamiento alterado a FCRN
US8663929B2 (en) 2008-03-17 2014-03-04 University Of Miyazaki Method for detection of liver cancer cell using anti-glypican-3 antibody
CL2009000647A1 (es) 2008-04-04 2010-06-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composicion farmaceutica para tratar o prevenir cancer hepatico que comprende una combinacion de un agente quimioterapeutico y un anticuerpo anti-glipicano 3; agente para atenuar un efecto secundario que comprende dicho anticuerpo; metodo para tratar o prevenir un cancer hepatico de un sujeto.
CN101377506A (zh) * 2008-04-16 2009-03-04 北京科美东雅生物技术有限公司 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
US8541178B2 (en) 2008-05-13 2013-09-24 Genentech, Inc. Analysis of antibody drug conjugates by bead-based affinity capture and mass spectrometry
EP2420515A4 (en) * 2009-04-16 2013-08-28 Univ Tokyo DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CANCER USING ANTI-TMPRSS11E ANTIBODY
EP2496690A4 (en) * 2009-11-05 2013-07-24 Sloan Kettering Inst Cancer CATENAE: SERIOUS CANCER STEM CELLS
CN102276721B (zh) 2010-06-12 2013-12-25 上海市肿瘤研究所 一种用于肝癌血清学诊断的单克隆抗体及其用途
SG190727A1 (en) 2010-11-30 2013-07-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
EP3070104B1 (en) * 2011-04-19 2017-12-27 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Human monoclonal antibodies specific for glypican-3 and use thereof
US20140322216A1 (en) 2011-11-08 2014-10-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Glypican-3-specific antibody and uses thereof
CN113480639A (zh) 2012-02-09 2021-10-08 中外制药株式会社 抗体的Fc区变异体
BR112014018374A8 (pt) 2012-03-02 2017-07-11 Roche Glycart Ag Método para predizer a resposta d eum paciente com câncer, kit, anticorpo, método para o tratamento do câncer e composição farmacêutica
JP6494507B2 (ja) 2012-06-01 2019-04-03 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ グリピカン−３に対する高親和性モノクローナル抗体およびその使用
EP2863224A4 (en) 2012-06-18 2016-05-04 Nat Cancer Ct KIT FOR DIAGNOSING MALIGNANT MELANOMA
TWI693073B (zh) 2012-12-21 2020-05-11 日商中外製藥股份有限公司 對ｇｐｃ３標的治療劑療法為有效之患者投與的ｇｐｃ３標的治療劑
JP5876012B2 (ja) * 2013-07-25 2016-03-02 株式会社スギノマシン 継手

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