TW201121567A - Human IL-23 antigen binding proteins - Google Patents

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Description

201121567 六、發明說明： 本申請案根據35 U.S.C. 119 (e)主張2009年1〇月26曰申 請之美國專利申請案第61/254,982號及2010年9月9曰申請 之美國專利申請案第61/381,287號的權益，該等專利以引 用的方式併入本文中。 【先前技術】 介白素23(IL-23)為一種雜二聚細胞激素，其為促發炎細 胞激素之有效誘導劑。IL_23與雜二聚細胞激素介白素 12(11^-12)有關，兩者共享一共有134〇次單元。在化_23中， 獨特P19次單元共價結合於p4〇次單元。在比_12中，獨特 -人單元為p35(Oppmann等人，Immunity，2000，13: 713. 715)。IL-23雜二聚蛋白為分泌型蛋白質。類似IL_12，IL_ 23由抗原呈現細胞（諸如樹突狀細胞及巨噬細胞）回應於活 化刺激（諸如CD40連接、Toll樣受體促效劑及病原體）而表 現。IL-23結合包含IL-12R01次單元（其係與比-12受體共 旱）及獨特受體次單元IL-23R之雜二聚受體。il-1 2受體由 IL-12RP1及IL-12Rp2組成。IL-23結合其雜二聚受體且經由 JAK2及Tyk2進行信號傳導以活化STAT1、3、4及5(Parham 等人，J. Immunol. 2002，168:5699-708)。該受體之次單主 要共表現於活化或記憶T細胞及天然殺手細胞上並且亦以 低含量共表現於樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞 '微神 經膠質細胞、角質細胞及滑液纖維母細胞上。IL-23及IL -12作用於不同T細胞子集且在活體内起實質上不同的作 15I613.doc 201121567 用。 IL-23作用於活化及記憶T細胞且促進T細胞子集Thl7之 存活及擴增。Th 17細胞產生促發炎細胞激素，包括il-6、 IL-17、TNFa、IL-22及 GM-CSF。IL-23 亦作用於天然殺手 細胞、樹突狀細胞及巨噬細胞以誘導促發炎細胞激素表 現。不同於IL-23，IL-12誘導原生CD4+ T細胞分化成產生 IFNy之成熟Th 1效應細胞，且藉由刺激IFNy產生來誘導NK 及細胞毒性T細胞功能。以前認為由IL-12驅動之Th 1細胞 為许多自體免疫性疾病中之病原性T細胞子集，然而，在 發炎性腸病、牛皮癬、發炎性關節炎及多發性硬化症之模 型（評估IL-12與IL-23之個別作用）中的最新近動物研究已 明確確定IL-23而非IL-12為自體免疫性/發炎性疾病之關鍵 驅動者（Ahern等人，Immun. Rev. 2008 226:147-159 ; Cua 等人，Nature 2003 421:744-748 ; Yago等人，Arthritis Res and Ther. 2007 9(5): R96)。咸信IL-12在對許多細胞内病原 體及病毒之保護性先天及應變性免疫反應的發展中及在腫 瘤免疫監視中起關鍵作用。參見Kastelein等人，Annual
Review of Immunology，2007，25: 221-42 ; Liu 等人， Rheumatology, 2007，46(8): 1266-73 ; Bowman 等人， Current Opinion in Infectious Diseases, 2006 19:245-52 ； Fieschi 及 Casanova, Eur. J. Immunol. 2003 3 3:1461-4 ；
Meeran 等人，Mol. Cancer Ther. 2006 5: 825-32 ; Langowski等人，Nature 2006 442: 461-5。因此，與il-12 及IL-23之雙重抑制相比，il-23特異性抑制（不破壞il- 12 151613.doc 201121567 或共享之p40次單元）應具有潛在優良的安全概況。 因此，使用抑制人類IL-23且不破壞IL-12之IL-23特異性 拮抗劑（諸如結合至少獨特pl9次單元或結合IL-23之pl9與 p40次單元兩者的抗體）應提供等於或大於IL-12拮抗劑或 p40枯抗劑之功效而無與抑制IL-12相關之潛在危險。已描 述選用於抑制重組IL-23之鼠類、人類化及噬菌體呈現抗 體；參見例如美國專利7,491，391 、WIPO公開案 WO1999/05280、W02007/0244846、W02007/027714、WO 2007/076524、W02007/147019、W02008/103473、WO 2008/103432、W02009/043933及 W02009/082624。然而’ 對能夠抑制原生人類IL-23之完全人類治療劑存在需要。 該等治療劑對於目標、尤其活體内目標具有高度特異性。 對活體内目標之完全抑制會使得調配物劑量較低、給藥較 不頻繁及/或更有效，此又會使得成本降低及效率增加。 本發明提供該等IL-23拮抗劑。 【發明内容】 本發明提供結合IL-23、尤其原生人類IL-23之抗原結合 蛋白。人類IL-23抗原結合蛋白可減少、抑制、干擾及/或 調節至少一種與IL-23有關之生物反應’且因此’適用於 改善IL-23相關性疾病或病症之影響。IL-23抗原結合蛋白 可例如用於減少、抑制、干擾及/或調節IL-23信號傳導、 Thl7細胞之IL-23活化、NK細胞之IL-23活化’或促發炎細 胞激素之誘導產生。 亦提供用於產生IL-23抗原結合蛋白之表現系統’包括 151613.doc 201121567 細胞株，及診斷及治療與人類IL-23有關之疾病的方法。
所提供之一些結合IL-23之抗原結合蛋白包含至少一個 重鏈可變區，其包含選自由以下組成之群的CDRH1、 CDRH2及CDRH3 :與表3如中所示之CDRH1有不超過一個 胺基酸取代、插入或缺失不同之CDRH1 ;與如表3中所示 之CDRH2有不超過三個、兩個或一個胺基酸取代、插入及/ 或缺失不同之CDRH2 ;與如表3中所示之CDRH3有不超過 三個、兩個或一個胺基酸取代、插入及/或缺失不同之 CDRH3 ;且包含至少一個輕鏈可變區，其包含選自由以下 組成之群的CDRL1、CDRL2及CDRL3 :與如表3中所示之 CDRL1有不超過三個、兩個或一個胺基酸取代、插入及/ 或缺失不同之CDRL 1 ;與如表3中所示之CDRL2有不超過 三個、兩個或一個胺基酸取代、插入及/或缺失不同之 CDRL2 ;與如表3中所示之CDRL3有不超過三個、兩個或 一個胺基酸取代、插入及/或缺失不同之CDRL3。在一實 施例中，提供經分離之抗原結合蛋白，其包含：選自由 SEQ ID NO:91、94、97、100及 103組成之群的 CDRH1 ; 選自由 SEQ ID NO:92、95、98、101、1 04、1 07及 11 0組成 之群的 CDRH2 ;選自由 SEQ ID NO:93、96、99、102及 105組成之群的 CDRH3 ;選自由 SEQ ID NO:62、65、68、 71及74組成之群的CDRL1 ;選自由SEQ ID NO:63、66、 69、72、75及78組成之群的CDRL2 ;及選自由SEQ ID NO:64、67、70及73組成之群的CDRL3。在另一實施例 中，提供經分離之抗原結合蛋白，其包含：選自由SEQ ID 151613.doc -6- 201121567 N0.91、106、109、112及115組成之群的CDRH1 ;選自由 SEQ m 勵113、116、118、120、121 及 122組成之群的 CDRH2;選自由SEQ ID NO:l08、⑴、114、117 及 ιι9 組 成之群的 CDRH3 ;選自由SEQ ID N〇:77、8〇、83、85、 86、87、88、89 及 90 組成之群的 CDru ; cdrl2J^eqid N〇:81;及選自由SEQ ID NO:76、79、82及84組成之群的 CDRL3。在另-實施例中，提供—種經分離之抗原結合蛋 白，其包含至少一個重鏈可變區及至少一個輕鏈可變區。 在另一實施例中，提供一種如上文所述之經分離之抗原結 合蛋白包含至少兩個重鏈可變區及至少兩個輕鏈可變 區。在另-實施例中’提供一種經分離之抗原結合蛋白， 其中該抗原結合蛋白偶合於標記基團。
亦提供結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其選自由 以下組成之群：a)具有SEQ ID N0:l29之CDRm、SEQ ID
N〇:132 之 CDRH2、SEQ ID N〇:l36 之 CDRH3 以及 seq ⑴ N〇:123之CDRL1、SEQ ID购別之⑶⑴及㈣m >10.76之0〇111^3的抗原結合蛋白；4具有8]£(^11：)]^〇:131之 CDRH1、SEQ ID NO:134 之 CDRH2、SEQ ID NO:l37 之 CDRH3 以及 SEQ ID NO:124 之 CDRL1、SEQ ID N0126 之 CDRL2及SEQ ID NO:128之CDRL3的抗原結合蛋白；c)具 有 SEQ ID NO:130之 CDRH1、SEQ ID NO:133之 CDRH2、 SEQ ID NO:99之 CDRH3 以及 SEQ ID NO:68之 CDRL1、SEQ ID NO:69之CDRL2及SEQ ID NO:67之CDRL3的抗原結合蛋 白；及（1)具有 CDRH1 SEQ ID NO:91 > CDRH2 SEQ ID 151613.doc 201121567 NO:135、CDRH3 SEQ ID NO:138 以及 CDRLl SEQ ID NO:125、CDRL2 SEQ ID NO:127及 CDRL3 SEQ ID NO:64 之抗原結合蛋白。 亦提供結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含選 自由以下組成之群的至少一個重鏈可變區及至少一個輕鍵 可變區：包含SEQ ID NO:31之胺基酸殘基31-35、50-65及 99-113的重鏈可變區；及包含SEQ ID ΝΟ:1之胺基酸殘基 23-36、52-58及91-101的輕鏈可變區；包含SEQ ID NO:34 之胺基酸殘基31-35、50-65及99-110的重鏈可變區及包含 SEQ ID NO:36之胺基酸殘基31-35、50-66及99-110的重鏈 可變區；及包含SEQ ID NO:4之胺基酸殘基23-36、52-62 及97-105的輕鏈可變區；包含SEQ ID NO:38之胺基酸殘基 31-35、50-66及99-114的重鏈可變區；及包含SEQ ID NO:7 之胺基酸殘基23·34、50-61及94-106的輕鏈可變區；包含 SEQ ID ΝΟ:40之胺基酸殘基31-35、50-66及99-114的重鏈 可變區；及包含SEQ ID ΝΟ:9之胺基酸殘基24-34、50-56 及94-106的輕鏈可變區；包含SEQ ID ΝΟ:42之胺基酸殘基 31-35、50-66及99-114的重鏈可變區；及包含SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸殘基23-34、50-61及94-106的輕鏈可變區； 包含SEQ ID NO:44之胺基酸殘基31-35、50-65及98-107的 重鏈可變區；及包含SEQ ID NO:13之胺基酸殘基24-34、 50-56及89-97的輕鏈可變區；包含SEQ ID NO:46或SEQ ID NO: 153之胺基酸殘基31-37、52-67及100-109的重鏈可變 區；及包含SEQ ID NO:15之胺基酸殘基24-34、50-56及89- 151613.doc -8 · 201121567 97的輕鏈可變區；包含SEQ ID NO:48之胺基酸殘基31-37、52-67及100-109的重鏈可變區；及包含SEQ ID NO:17 之胺基酸殘基24-34、50-56及89-97的輕鏈可變區；包含 SEQ ID NO:50之胺基酸殘基3 1-37、52-67及101-109的重鏈 可變區；及包含SEQ ID ΝΟ:19之胺基酸殘基24-34、50-56 及89-97的輕鏈可變區；包含SEQ ID NO:52之胺基酸殘基 31-35、50-65及98-107的重鏈可變區；及包含SEQ ID NO:21之胺基酸殘基24-34、50-56及98-107的輕鏈可變 區；包含SEQ ID NO: 54之胺基酸殘基3 1-3 7、52-67及100-109的重鏈可變區；及包含SEQ ID NO:23之胺基酸殘基24-34、50-56及89-97的輕鏈可變區；包含SEQ ID NO:56之胺 基酸殘基31-37、52-67及100-109的重鏈可變區；及包含 SEQ ID NO:25之胺基酸殘基24-34、50-56及89-97的輕鏈可 變區；及包含8£()10 1^0:58之胺基酸殘基31-37、52-57及 100-109的重鏈可變區；及包含SEQ ID NO:27之胺基酸殘 基24-34、50-5 6及89-97的輕鏈可變區。 本文提供一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其 包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區序列與 如表2中所示之重鏈可變區序列有不超過13、12、11% 10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸取代、添加及/ 或缺失不同；且其中該輕鏈可變區序列與如表1中所示之 輕鏈可變區序列有不超過13、12、U、1〇、9、8、7、6、 5、4、3、2或1個胺基酸取代、添加及/或缺失不同。 亦提供一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其選 151613.doc -9- 201121567 自由以下組成之群：a)SEQ ID NO: 140之重鏈可變區及 SEQ ID NO:30之輕鏈可變區；b)SEQ ID NO:141之重鏈可 變區及SEQ ID N〇:61之輕鏈可變區；c)SEq ID n〇:142之 重鏈可變區及SEQ id NO:4之輕鏈可變區；及d)SEQ ID 1^0:143之重鍵可變區及犯(^1]：)>^〇:139之輕鏈可變區。 亦提供一種經分離之抗原結合蛋白，其包含重鏈可變 區’該重鍵可變區包含與SEq ID N〇:31、34、36、38、 40、42、44、46、48、50、52、54、56 及 58 具有至少 90°/〇、95%、96°/。、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸 序列；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含與SEq ID ΝΟ:1、4、7、9、11、π、15、17、19、21、23、25及 27 具有至少90%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例 中’為一種經分離之抗原結合蛋白，其包含選自*SEqID NO:44、46、48、50、52、54、56、58 及 153 組成之群的重 鏈可變區’及選自由SEQ ID NO: 13、15、17、19、21、 23、25及27組成之群的輕鍵可變區。在另一實施例中，為 一種經分離之抗原結合蛋白，其包含選自由SEQ ID NO:3 1、34、36、38、40及42組成之群的重鏈可變區，及 選自由SEQ ID NO: 1、4、7、9及11組成之群的輕鏈可變 區0 亦提供一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包 含選自由以下組成之群的重鏈可變區及輕鏈可變區： a)SEQ ID NO:31之重鏈可變區及SEQ ID N〇:l之輕鏈可變 區；b)SEQ ID NO:34或36之重鏈可變區及SEQ ID NO:4之 151613.doc • 10· 201121567 輕鏈可變區；c)SEQ ID NO:38之重鏈可變區及SEQ ID NO:7之輕鏈可變區；d)SEQ ID NO:40之重鏈可變區及SEQ ID NO:9之輕鏈可變區；e)SEQ ID NO:42之重鏈可變區及 SEQ ID ΝΟ:11之輕鏈可變區；f)SEQ ID NO:44之重鏈可變 區及SEQ ID NO:13之輕鏈可變區；g)SEQ ID NO:46或 SEQ ID NO:153之重鏈可變區及SEQ ID NO:15之輕鏈可變 區；h)SEQ ID NO:48之重鏈可變區及SEQ ID NO: 17之輕鏈 可變區；i)SEQIDNO:50之重鏈可變區及SEQIDNO:19之 輕鏈可變區；j)SEQ ID NO :52之重鏈可變區及SEQ ID NO:21之輕鏈可變區；k)SEQ ID NO:54之重鏈可變區及 SEQIDNO··23之輕鏈可變區；l)SEQIDNO:56之重鏈可變 區及SEQ ID NO:25之輕鏈可變區；及m)SEQ ID NO:58之 重鏈可變區及SEQ ID NO:27之輕鏈可變區。 亦提供一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包 含至少一個包含CDRH1、CDRH2及CDRH3之重鏈可變 區，其中該CDRH1包含根據AHO編號系統位置33之絲胺 酸、位置34及38之甘胺酸、及位置39及40之酪胺酸；該 CDRH2包含根據AHO編號系統位置59之組胺酸、位置67之 天冬醯胺、位置68之蘇胺酸、位置69之酪胺酸、及位置75 之離胺酸；且該CDRH3包含根據AHO編號系統位置110之 精胺酸、位置111之甘胺酸、位置112之苯丙胺酸、及位置 133及134之酪胺酸；及至少一個包含CDRL1、CDRL2及 CDRL3之輕鏈可變區，其中該CDRL1包含根據AHO編號系 統位置32及33之絲胺酸、及位置40之色胺酸；該CDRL2包 151613.doc 201121567 含根據AHO編號系統位置58之丙胺酸、位置68、69及72之 絲胺酸殘基；且該CDRL3包含根據AHO編號系統位置11〇 之天冬醯胺、及位置135之苯丙胺酸。在一實施例中，至 少一個重鏈可變區包含根據AHO編號系統位置33及65之絲 胺酸、位置34、38及111之甘胺酸、位置39、4〇、69、133 及134之酪胺酸、位置59之組胺酸、位置67之天冬醯胺、 位置68之蘇胺酸、位置75之離胺酸、位置ι10之精胺酸、 及位置112之苯丙胺酸；且至少一個輕鍵可變區包含根據 AHO編號系統位置32、33、68、69、72及111之絲胺酸、 位置40之色胺酸、位置57之酪胺酸、位置58及1〇9之丙胺 酸、位置110之天冬醯胺、及位置135及137之苯丙胺酸。 在其他實施例中’提供一種重鍵可變區，其包含與SEQ id NO:46 具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列；及一種 輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO: 15具有至少90%、 91%、92%、93%、94°/。、95%、96%、97%、98%或 99%序 列一致性之胺基酸序列。 亦提供一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包 含至少一個包含CDRH1、CDRH2及CDRH3之重鏈可變 區，其中該CDRH1包含根據AHO編號系統位置33之絲胺 酸、及位置39之酪胺酸，·該CDRH2包含根據AHO編號系統 位置59之色胺酸、及位置60及69之酪胺酸；且該CDRH3包 含根據AHO編號系統位置111之甘胺酸、位置112及132之 酪胺酸、位置114及115之絲胺酸、位置131之色胺酸、及 151613.doc 12 201121567 位置133之脯胺酸；及至少一個包含CDRL1、CDRL2及 CDRL3之輕鏈可變區，其中該CDRL1包含根據AHO編號系 統位置33之丙胺酸、位置34之甘胺酸、位置39之酪胺酸、 及位置40之天冬胺酸；該CDRL2包含根據AHO編號系統位 置58之甘胺酸、及位置69之天冬醯胺；且該CDRL3包含根 據AHO編號系統位置109之酪胺酸、及位置13 5之絲胺酸。 在一實施例中’提供至少一種重鏈可變區，其包含根據 AHO編號系統位置1之麩胺酸、位置27及111之甘胺酸、位 置30及113之蘇胺酸、位置32、33、114及11 5之絲胺酸、 位置39、60、69、112及132之酪胺酸、位置59及131之色 胺酸、位置86之離胺酸、位置11〇之精胺酸、及位置133之 脯胺酸；及至少一種輕鏈可變區’其包含根據AHO編號系 統位置31之蘇胺酸、位置33之丙胺酸、位置34及58之甘胺 酸、位置39、57及109之酪胺酸、位置40之天冬胺酸、位 置69之天冬醯胺、位置82之離胺酸、位置135之絲胺酸、 及位置137之色胺酸。在其他實施例中，提供一種重鏈可 變區’其包含與SEQ ID NO:31具有至少90%、91%、 920/〇、93%、94。/〇、95%、96%、97%、98%或 99%序列一致 性之胺基酸序列；及一種輕鏈可變區，其包含與SEQ ID ΝΟ:1 具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96°/。、97%、98%或99%序列一致性之胺基酸序列。 亦提供一種如上文所述之經分離之抗原結合蛋白，其中 s亥抗原結合蛋白為抗體。在一實施例中，提供一種經分離 之抗原結合蛋白，其中該抗體為單株抗體、重組抗體、人 151613.doc •13· 201121567 類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗體 片段。在另一實施例中’提供一種經分離之抗原結合蛋 白’其中該抗體片段為Fab片段、Fab，片段、F(ab，）2片段、 Fv片段、雙功能抗體（diab〇dy)或單鍵抗體分子。在另一實 施例中’提供一種經分離之抗原結合蛋白，其中該抗原結 合蛋白為人類抗體。在又一實施例中，提供一種經分離之 抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白為單株抗體。在另一 實施例中，提供一種經分離之抗原結合蛋白，其中該抗原 結合蛋白為IgGl、IgG2、IgG3或IgG4型。在另一實施例 中’提供一種經分離之抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋 白為IgGl或IgG2型。 亦長：供一種編碼如上文所述之抗原結合蛋白的經分離之 核酸分子。在一實施例中，提供一種經分離之核酸分子， 其中至少一個重鏈可變區由選自由SEQ ID N〇:32、35、 37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59及 152組成之群的經分離之核酸分子編碼且至少一個輕鏈可 變區由選自由 SEQ ID Ν0:2、5、ό、8、1〇、ΐ2、14、1ό、 18 ' 20 ' 22、24、26及28組成之群的經分離之核酸分子編 碼。在另一實施例中，提供一種核酸分子，其中該核酸分 子可操作地連接於控制序列。在另一實施例中，提供一種 載體，其包含如上文所述之核酸分子。在另一實施例中， 提供一種宿主細胞，其包含如上文所述之核酸分子。在另 一實施例中，提供一種宿主細胞，其包含上述載體。在另 一實施例中’提供一種足以用作雜交探針、PCR引子或定 151613.doc 201121567 序引子之經分離之聚核苷酸，其為如上文所述之核酸分子 的片段或其互補序列。 亦提供一種製備如上文所述之抗原結合蛋白的方法，其 包含自分泌該抗原結合蛋白之宿主細胞製備該抗原結合蛋 白的步驟。 亦提供一種結合人類IL-23之經分離之抗原結合蛋白， 其中該抗原結合蛋白結合人類IL-23之pl9次單元的A、C及 D螺旋之每一者而非b螺旋中的至少一個胺基酸殘基。 亦提供一種結合人類IL-23之經分離之抗原結合蛋白， 其中該抗原結合蛋白結合SEQ ID NO: 145之殘基46-58中之 至少一個或多個殘基、殘基112_123中之至少一個或多個 殘基及殘基155-163中之至少一個或多個殘基。在一實施 例中，當抗原結合蛋白結合於人類IL-23時，SEQ ID NO:145之殘基46-58中之殘基、殘基ι12·123中之殘基及殘 基155-163中之殘基具有大於或等於1〇人2之差值。在一相 關實施例中，SEQ ID NO:145之殘基46、47、49、50、 53、112-116、118、120、155、150、159、160及 163 具有 大於或等於10 A2之差值。在另一相關實施例中，當抗原 結合蛋白結合於人類IL-23時，SEQ ID NO:147之殘基121-125中之殘基具有大於或等於1〇入2之差值。在另一實施例 中’當抗原結合蛋白結合於人類IL_23時，抗原結合蛋白 距離SEQ ID NO:145之殘基46-58中之殘基、殘基112-123 中之殘基及殘基15 5-163中之殘基為5人或更小。在一相關 實施例中，當抗原結合蛋白結合於人類IL_23時，抗原結 151613.doc 15· 201121567 合蛋白距離SEQ ID ΝΟΠ45之殘基46-50、113-116、120、 156、159、160及163為5 A或更小。在另一相關實施例 中，當抗原結合蛋白結合於人類IL-23時，抗原結合蛋白 距離SEQ ID NO:147之殘基121-125中之殘基為5 A或更 小 〇 亦提供一種如上文所述之經分離之抗原結合蛋白，其中 該抗原結合蛋白具有至少一種選自由以下組成之群的性 質.a)降低人類il-23活性；b)減少促發炎細胞激素產生； c)以 $5x10-8 Μ 之 KD 結合於人類 IL_23 ; d)具有 $5x10-6 1/s 之Koff速率；及d)具有goOpM之IC50。 提供一種醫藥組合物，其包含至少一種如上文所述之抗 原結合蛋白及醫藥學上可接受之賦形劑。在一實施例中， 提供藥組合物’其進―步包含標記基團或效應基 團在另實施例中，提供一種醫藥組合物，其中該標記 基團係選自由以下組成之群：同位素標記、磁性標記、氧 化還原活性部分、光學染料、生物素化基團&由第二報 導體識別之預定多肽抗原決定基。在另一實施例中，提供 一種醫藥組合物， 群：放射性同位素 治療基團。 其中该效應基團係選自由以下組成之 、放射性核種、毒素、治療基團 及化學 / 種治療或預防患者之與1L_23相關之病狀的方 法’其包3向有需要之患者投與有效量 所述的經分離之抗原結合 文 古沐甘Α 京臼在一實施例中，提供一種 方法，其中该病狀係選自由 田發炎病症、風濕性病症、自 151613.doc 201121567 體免疫性病症、致癌病症及腸胃病症組成之群。在另一實 施例中’提供—種方法，其中該病狀係、選自由以下組成之 群：多發性硬化症、類風濕性關節炎、癌症、牛皮癬、發 炎性腸病 '克羅恩氏病(Crohn、disease)、潰瘍性結腸炎、 全身性紅斑狼瘡、牛皮癬性關節炎、自體免疫性心肌炎； 第1型糖尿病及僵直性脊椎炎。在又一實施例中，提供i 種方法’ m經分離之抗原結合蛋白係單獨投與或以組 合療法形式投與。 亦提供一種降低患者之比_23活性的方法，其包含投與 有效量之至少一種如上文所述的抗原結合蛋白。在一實施 例中，提供一種降mIL-23活性之方法’其中該IL23活性 為誘導促發炎細胞激素產生。 【實施方式】 本發明提供與IL-23抗原結合蛋白相關之組合物、套組 及方法，該等IL-23抗原結合蛋白包括拮抗IL_23之分子， 諸如抗IL-23抗體、抗體片段及抗體衍生物，例如拮抗性 抗IL-23抗體、抗體片段或抗體衍生物。亦提供聚核苷酸 及其衍生物及片段，其包含編碼結合於IL_23之多肽之全 部或一部分的核酸序列，例如編碼抗IL_23抗體、抗體片 段或抗體衍生物之全部或一部分的聚核苷酸；包含該等核 酸之質體及載體；及包含該等聚核苷酸及/或載體及質體 之細胞或細胞株。所提供之方法包括例如製備、鑑別或分 離IL-23抗原結合蛋白（諸如抗乩·^抗體）之方法，判定分 子是否結合於IL-23之方法，判定分子是否拮抗江_23之方 151613.doc Π· 201121567 法，製備包含IL-23抗原結合蛋白之組合物（諸如醫藥組合 物）之方法，及向個體投與IL-23抗原結合蛋白之方法’例 如治療由IL-23介導之病狀及活體内或活體外拮抗IL-23之 生物活性的方法。 除非本文另有規定，否則與本發明關聯使用之科學及技 術術語應具有一般技術者通常所瞭解之含義。此外’除非 本文另有要求，否則單數術語應包括複數且複數術語應包 括單數。通常，本文所述之與細胞及組織培養、分子生物 學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質與核酸化學及雜 交關聯使用之命名法及其術語為此項技術中所熟知及常用 者。除非另有指示，否則本發明之方法及技術一般根據此 項技術中熟知之習知方法來進行及如本說明書中通篇所引 用及論述之各種一般及更特定之參考文獻中所述來進行。 參見例如 Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第 3 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press， Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)，及 Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992)，及Harlow及Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)。酶促反應及純化技術係根據製造商 之說明，如此項技術中通常所實現或如本文所述來進行。 本文所述之與分析化學、合成有機化學及醫學及藥物化學 關聯使用之術語及其實驗室程序與技術為此項技術中所熟 知及常用者。對於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配 151613.doc • 18 · 201121567 及傳遞以及患者治療可使用標準技術。 所有專利及其他所標示公開案均明確地以全文引用的方 式併入本文中用於描述及揭示例如該等公開案中所述之可 與本文所述資訊關聯使用之方法的目的。 人類IL-23之pl9次單元（SEQ ID NO:144及145)、共享之 p40次單元（SEQ ID NO:146及147)、人類IL-23受體雜二聚 次單元 IL-12R01(SEQ ID NO:150 及 151)及 IL-23R(SEQ ID NO: 148及149)的聚核苷酸及蛋白質序列為此項技術中所已 知，參見例如GenBank寄存編號AB030000、M65272、 NM_005 53 5、NM_144701，來自其他哺乳動物物種之序列 同樣如此。重組IL-23及IL-23受體蛋白（包括單鏈及Fc蛋 白）以及表現IL-23受體之細胞已有描述且可自商業來源獲 得。（參見例如 Oppmann等人，1111111111^)^，2000，13:713-715 ； R&D Systems, Minneapolis. Minnesota; United States Biological, Swampscott，Massachusetts ; WIP◦公開案第 WO 2007/076524號）。原生人類IL-23可使用此項技術中已 知之方法（包括本文所述之方法）獲自人類細胞，諸如樹突 狀細胞。 IL-23為包含獨特pl9次單元共價結合於共享之p40次單 元之雜二聚細胞激素。該ρ 19次單元包含四個α螺旋， 「A」、「Β」、「C」及「D」，呈由位於Α與Β螺旋之間、Β與 C螺旋之間及C與D螺旋之間的三個螺旋内環連接之上-上-下·下基元形式，參見Oppmann等人，Immunity，2000，13: 713-715，及 Beyer等人，J Mol Biol，2008. 382(4): 942- 151613.doc -19- 201121567 55 »咸信4螺旋束細胞激素之八及〇螺旋與受體結合有關。 該p40次單元包含三個β片夹心域，D1、D2及D3(Lupardus 及 Garcia，J. Mol. Biol.，2008, 382:931-941)。 術語「聚核普酸」包括單股與雙股核酸且包括基因組 DNA、RNA、mRNA、cDNA或不與自然界中通常發現之序 列相關聯的合成來源或其一些組合。包含指定序列之經分 離之聚核苷酸除該等指定序列外亦可包括多達1〇種或甚至 多達20種其他蛋白質或其部分之編碼序列，或可包括控制 所述核酸序列之編碼區之表現的可操作地連接的調節序 列’及/或可包括載體序列。構成聚核苷酸之核苷酸可為 核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸或任一類型核苷酸之經修飾 形式。修飾包括驗基修飾’諸如溴尿皆及肌苦衍生物；核 糖修飾’諸如2'，3’-二去氧核糖；及核苷酸間鍵聯修飾，諸 如硫代填酸自旨、二硫代璃酸醋、砸代碟酸醋、二砸代碟酸 酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯及磷醯胺酸酯。 術語「寡核苷酸」意謂包含100個或更少核苷酸之聚核 苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸長度為10至60個驗基。 在其他實施例中，寡核苷酸長度為12、13、14、15、16、 17、18、19或20至40個核苷酸。寡核苷酸可為單股或雙 股，例如以供用於構建突變基因。寡核苷酸可為有義或反 義寡核苷酸。寡核苷酸可包括用於偵測檢定之可伯測標 記，諸如放射性標記、螢光標記、半抗原或抗原性標記。 寡核苷酸可例如用作PCR引子、選殖引子或雜交探針。 術語「多肽」或「蛋白質」意謂具有原生蛋白質之胺基 151613.doc -20- 201121567 夂序列的大刀子，亦即由天然存在及非重組細胞產生之蛋 白質；或其由遺傳工程改造或重組細胞產生，且包含具有 原生蛋白質之胺基酸序列的分子，或與原生序列之胺基酸 殘基相比具有一或多個缺失、插入及/或取代之分子。該 術語亦包括一或多個胺基酸為相應天然存在之胺基酸及聚 合物之化學類似物的胺基酸聚合物。術語「多肽」及「蛋 白質」涵蓋與抗原結合蛋白序列之胺基酸殘基相比具有一 或多個缺失、添加及/或取代之IL_23抗原結合蛋白（諸如抗 體）及序列。術語「多肽片段」係指與全長原生蛋白質相 比具有胺基％缺失、敌基端缺失及/或内部缺失之多肽。 與原生蛋白質相比，該等片段亦可含有經修飾之胺基酸。 在某些實施例中’片段長度為約5至500個胺基酸。舉例而 言，片段長度可為至少5、6、7、8、9、10、11、12、 13 、 14 、 15 、 16 、 17 、 18 、 19 、 20 、 50 、 70 、 1〇〇 、 11〇 、 150、200、250、300、3 50、400 或 450個胺基酸。適用多 肽片段包括抗體之免疫功能片段，包括結合域。在IL_23 抗原結合蛋白（諸如抗體）之情況下，適用片段包括（但不限 於）一或多個CDR區、重鏈或輕鏈之可變域、抗體鏈之一 部分、可變區之一部分（包括少於三個CDR)及其類似物。 「胺基酸」包括其在此項技術中之一般含義。二十種天 然存在之胺基酸及其縮寫遵循習知用法。參見
Immunology-A Synthesis,第 2 版’（E. S. Golub 及 D. R. Gren編）’ Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991)。 二十種習知胺基酸之立體異構體（例如D-胺基酸）、非天然 151613.doc •21 - 201121567 胺基酸（諸如[α]-，[α]_雙取代之胺基酸）、N_烷基胺基酸及 其他非習知胺基酸亦可為多肽之適合組分。非習知胺基酸 之實例包括：4-羥基脯胺酸、[γ]·羧基麩胺酸、[ε]_Ν，Ν，Ν_ 二甲基離胺酸、[ε]-Ν-乙醯離胺酸、〇_磷酸絲胺酸、Ν_乙 醯絲胺酸、Ν-甲醯甲硫胺酸、3_甲基組胺酸、5_羥基離胺 酸、[σ]-Ν-甲基精胺酸，及其他類似胺基酸及亞胺基酸（例 如4-羥基脯胺酸）。在本文中所使用之多肽表示法中，根據 標準用法及慣例，左手方向為胺基端方向，右手方向為緩 基端方向。 術語「經分離之蛋白質」係指自會干擾治療、診斷、預 防、研究或其他用途之蛋白質或多肽或其他污染物純化之 蛋白質，諸如抗原結合蛋白（其實例可為抗體）。如本文中 所使用，「實質上純」意謂所述分子種類為存在之主要種 類亦即以莫耳汁，其比同一混合物中之任何其他個別種 a畐在某些貫細*例中，實質上純之分子為目標種類佔 存在之所有大分子種類的至少5〇%(以莫耳計）之組合物。 在其他實施例中，實質上純之組合物將佔組合物中存在之 所有大分子種類的至少8〇%、85%、9〇%、95%或99%。在 某上實鈿例中，基本上均質之物質已純化至藉由習知偵測 方法不能在組合物t偵測到污染種類之程度，且因此組合 物由單一可偵測之大分子種類組成。 夕狀（例如抗原結合蛋白，諸如抗體）之「變異體」包含 相對於另一多肽序列在胺基酸序列中有一或多個胺基酸殘 基插入、缺失及/或取代之胺基酸序列。變異體包括融 1516l3.doc -22· 201121567 蛋白。多肽之「衍生物」為以不同於插人、缺失或取代變 異體之-些方式（例如經由結合於另—化學部分）進行化學 修飾之多肽。 如說明書中與生物物質(諸如多狀、核酸、宿主細胞及 其類似物）關聯使用之術語「天然存在」《「原生」係指 自然界中發現之物f，諸如原生人航_23。在某些態樣 中’提供結合原生IL_23之重組抗原結合蛋白。在此文 中重、.且蛋白」為使用重組技術（亦即經由本文所述之重 組核酸表現)所製備之蛋白質。製備重組蛋白之方法及技 術為此項技術中所熟知。 術語「抗體」係指任何同型之完整免疫球蛋白或其可與 完整抗體競爭特異性結合於目標抗原之片&，且包括例如 喪合、人類化、完全人類及雙特異性抗體。因&，抗體為 -種抗原結合蛋白。除非另有指*，否則術語「抗體」除 包含兩條全長重鏈及兩條全長輕鏈之抗體外亦包括其衍生 物、變異體、片段及突變蛋白(mutein)，其實例描述如 下。完整抗體-般將包含至少兩條全長重鍵及兩條全長輕 鏈，但在一些情況下可包括較少m天然存在於路轮 類動物中之抗體可僅包含重鏈.抗體可僅來源於單一來 源，或可為「嵌合的」’亦即抗體之不同部分可來源於兩 種不同抗體，如下文進一步描述。抗原結合蛋白、抗體或 結合片段可在融合瘤中藉由重組DNA技術或藉由完整抗體 之酶促或化學裂解來產生。 如本文中所使用，抗體或免疫球蛋白鏈（重鏈或輕鏈）之 151613.doc -23· 201121567 術語「功能片段」（或簡稱「片段」）為包含缺少至少一些 於全長鏈中所存在之胺基酸但能夠特異性結合於抗原的抗 體之一部分（不考慮該部分如何獲得或合成）之抗原結合蛋 白。該等片段具有生物活性，亦即其特異性結合於目標抗 原且可與其他抗原結合蛋白（包括完整抗體）競爭特異性結 合於指定抗原決定基。在一態樣中，該種片段將保留至少 一個於全長輕鏈或重鏈中所存在之CDR，且在一些實施例 中將包含單-重鏈及/或輕鍵或其部分。此等生物活性片 &可藉由重組DNA技術來產生，或可藉由抗原結合蛋白 (包括完整抗體）之酶促或化學裂解來產生^段包括（但不 限於）免疫功能片段，諸如Fab、Fab,、F(ab，）2、Fv、域抗 體及單鍵抗體，且可來源於㈣哺乳動物來源，包括（但 不限於）人類、小鼠、大鼠、路㈣動物或兔子。進一步 預期本文所揭示之抗原結合蛋白的功能性部分（例如一或 夕個CDR)可共價結合於第二蛋白質或小分子以形成針對 體内特疋目標且具有雙功能治療性質或具有延長之血清半 衰期的治療劑。 當在抗原結合蛋白(例如中和抗原結合蛋白或中和抗體) 之情形中使㈣，術語「競爭」意謂抗原結合蛋白之間的 競爭，如藉由#中所測試抗原結合蛋白（例如抗體或其免 疫功能片段）阻止或抑制參考抗原結合蛋白（例如配位體或 參考抗體）特異性結合於共同抗原（例如江_23蛋白或其片 段）之檢定所判定。可使用許多類型之競爭性結合檢定， 例如.固相直接或間接放射免疫檢定（RIA)、固相直接或 J5J613.doc •24· 201121567 間接酶免疫檢定（ΕΙΑ)、夾心競爭檢定（參見例如Stahli等 A 5 1983, Methods in Enzymology 92:242-253)；固相直接 生物素-抗生物素蛋白EIA(參見例如Kirkland等人，1986, J. Immunol. 137:3614-3619);固相直接標記檢定、固相直 接標記夾心檢定（參見例如Harlow及Lane， 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press);使用1-125標記之固相直接標記ria(參見例如 Morel等人，1988，Molec. Immunol. 25:7-15);固相直接生 物素-抗生物素蛋白EIA(參見例如Cheung等人，1990, Virology 176:546-552);及直接標記RIA(M〇ldenhauer 等 人，1990, Scand. J. ImmunoL 32:77_82)。該種檢定通常涉 及使用結合於帶有此等未標記之測試抗原結合蛋白及標記 之參考抗原結合蛋白中之任一者的固體表面或細胞之經純 化抗原。 競爭性抑制可藉由測定在測試抗原結合蛋白存在下結合 於固體表面或細胞之標記的量來量測。測試抗原結合蛋白 通常乂過畺存在。藉由競爭檢定鑑別之抗原結合蛋白(競 爭抗原結合蛋白)包括與參考抗原結合蛋白結合相同抗原 決定基的抗原結合蛋白及妓夠接近由參考抗原結合蛋白 結合之抗原衫基之相鄰抗原決^基結合從而發生位阻的 k原結合蛋白。通常’當競爭抗原結合蛋白以過量存在 :’其將抑制參考抗原結合蛋白與共同抗原之特異性結合 達至少 40%、45%、<co/ , 0、55/。、60%、65%、70%或 75%。 在一些情況下’抑制結合達至少嶋、⑽、90%、91%、 151613.doc -25- 201121567 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。 術語「抗原決定基」或「抗原決定子」係指抗原上抗原 結合蛋白所結合之位點。抗原決定基可由相連胺基酸或因 蛋白質之二級指疊而®It鄰之非相連胺基酸形成β由相連胺 基酸形成之抗原決定基通常在暴露於變性溶劑時保留，而 由二級摺疊形成之抗原決定基通常在用變性溶劑處理時喪 失。抗原決定基決定子可包括分子之化學活性表面群組， 諸如胺基酸、糖側鍵、填醯基或續醢基，且可具有特定= 維結構特徵及/或特定電荷特徵。抗原決定基通常在獨特 空間構形中包括至少3、4、5、6、7、8、9、1〇、、 12、13 ' 14、15、16、17、18、19、20、25、30、35個胺 基酸。抗原決定基可使用此項技術中已知之方法來判定。 IL-23抗原結合蛋白 如本文中所使用，「抗原結合蛋白」意謂特異性結合指 定目標抗原之蛋白質；如本文所提供之抗原為IL_23，尤 其為人類IL-23，包括原生人類IL-23。如本文所提供之抗 原結合蛋白與IL-23之獨特pi9次單元的至少—部分相互作 用，從而可偵測地結合IL-23 ;但不以任何顯著性結合於 比-12(例如IL_12ip40及/或p35次單元），因此「不破壞江、 12」。因此，本文所提供之抗原結合蛋白能夠影響江·幻活 - 性而不會招致抑制IL_12或共享之p4〇次單元之潛在危險。 . 抗原結合蛋白可影響比_23與其受體相互作用之能^，你 如藉由影響與受體之結合’諸如藉由干擾受體締二詳:j 之’該等抗原結合蛋白完全或部分降低、抑制、干擾或二 151613.doc -26- 201121567 節IL-23之一或多種生物活性。與不存在抗原結合蛋白之 反應相比，該抑制或中和破壞在抗原結合蛋白存在下之生 物反應，且可使用此項技術中已知及本文所述之檢定進行 測定。本文所提供之抗原結合蛋白抑制IL-23誘導之促發 炎細胞激素產生，例如全血細胞中之IL-23誘導之IL-22產 生、及NK及全血細胞中之IL-23誘導之IFNy表現。生物活 性之降低可為約 20%、30%、40%、50%、60%、70%、 80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、 97%、98%、99%或更多。 抗原結合蛋白可包含結合於抗原之部分及允許抗原結合 部分採用促進抗原結合蛋白結合於抗原之構形的視情況存 在之骨架或構架部分。抗原結合蛋白之實例包括抗體、抗 體片段（例如抗體之抗原結合部分）、抗體衍生物及抗體類 似物。抗原結合蛋白可包含具有移植CDR或CDR衍生物之 替代蛋白質骨架或人造骨架。該等骨架包括（但不限於）抗 體衍生骨架，包含引入以例如穩定抗原結合蛋白之三維結 構的突變；以及完全合成骨架，包含例如生物相容性聚合 物。參見例如 Korndorfer 等人，Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics，（2003)第 53 卷，第 1 期：1 2 1-129 ; Roque 等人，Biotechnol. Prog., 2004, 20:639-654。 另外，可使用肽抗體模擬物（「PAM」），以及基於利用纖 維結合蛋白組分作為骨架之抗體模擬物的骨架。 本文所述之某些抗原結合蛋白為抗體或來源於抗體。該 等抗原結合蛋白分別包括（但不限於）單株抗體、雙特異性 151613.doc -27- 201121567 抗體、微型抗體、域抗體、合成抗體、抗體模擬物、嵌合 抗體、人類化抗體、人類抗體、抗體融合物、抗體結合 物、單鏈抗體及其片段。在一些情況下，抗原結合蛋白為 抗體之免疫學片段（例如Fab、Fab，、F(ab，)24scFv)。各種 結構在本文中進一步描述及定義。 所提供之某些抗原結合蛋白可包含一或多個如本文所述 之CDR(例如1、2、3、4、5、6或更多個CDR)。在一些情 况下，抗原結合蛋白包含多肽結構及一或多個插入 ”亥夕肽、乡。構中及/或聯接於該多狀結構之CDR。多肽結構 可採用錢*同形I舉例而言，其可為或包含天然存在 之抗體或其片段或變異體的構架，或其在本質上可為完全 合成的。各種多肽結構之實例在下文進一步描述。
當解離平衡常數（KD)為$1〇_8 m時，認為本發明之抗原 結合蛋白「特異性結合」其目標抗原。當KDgyxl〇_9 M 時，抗原結合蛋白以「高親和力」特異性結合抗原，且當 KD為少ΠΜΟ M時，抗原結合蛋白以「極高親和力」特 異性結合抗原。在一實施例中，抗原結合蛋白將以 Μ之KD結合於人類α·23，且在另一實施例中， 其將W5x10-13 μ之KD結合。在本發明之另一實施例 中’抗原結合蛋白之KD為5x1(M2河且尺。"為㈣χ1〇6 1/s » 在另一實施例中，K〇ffAs5xl〇_7 "s。 另-態樣提供-種抗原結合蛋白，其在活體外或活體内 (例如當投與人類個體時）具有至少一天之半衰期。在一實 施例中’抗原結合蛋白之半衰期為至少三天。在另一實施 151613.doc •28- 201121567 例中，抗體或其部分之半衰期為四天或更長。在另一實施 例中’抗體或其部分之半衰期為八天或更長。在另一實施 例中，抗體或其抗原結合部分經衍生化或修飾以使得其半 衰期比未經何生化或未經修飾之抗體長。在另一實施例 中’抗原結合蛋白含有點突變以增加血清半衰期，諸如 WIPO公開案第wc> GG/G956(m巾所描述。 在將抗原、‘口蛋白用於治療應用之實施例中抗原結合 蛋白可降低、抑制、干擾或調節IL-23之一或多種生物活 性，諸如促發炎細胞激素之誘導產生。IL-23具有許多不 同生物作帛，其可在許多不同檢定中在不同細胞類型中進 仃1測；該等檢定之實例為已知的且提供於本文中。 一些所提供之抗原結合蛋白具有通常與天然存在之抗體 相關聯的結構。此等抗體之結構單元通常包含一或多個四 聚體’各由相同的兩對多肽鏈構成，但—些哺乳動物物種 亦產生僅具有單一重鏈之抗體。在一典型抗體中，各對包 括一條全長「輕」鏈（在某些實施例中為約25 kDa)及一條 全長「重」鏈（在某些實施例中為約5〇_7〇 kDa) ^各個別免 疫球蛋白鏈由若干個「免疫球蛋白域」構成，各域由約％ 至110個胺基酸組成且表現特徵性摺疊模式。此等域為構 成抗體多肽之基本單元。各鏈之胺基端部分通常包括負責 抗原識別之可變區《羧基端部分在演化上比鏈之另—端更 保寸且稱為「恆定區」或「c區」。人類輕鏈一般分類為K 及λ輕鏈，且此等鏈各含有一個可變區及一個值定域 (CL1)。重鏈通常分類*μ、S、γ、0或6鏈，且此等鏈分別 151613.doc -29- 201121567 將抗體之同型定義為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。IgG具 有若干亞型，包括（但不限於）IgGl、IgG2、IgG3及IgG4。 IgM亞型包括IgM及IgM2。IgA亞型包括IgAl及IgA2。在人 類中，IgA及IgD同型含有四條重鏈及四條輕鏈；IgG及IgE 同型含有兩條重鏈及兩條輕鏈；而IgM同型含有五條重鏈 及五條輕鏈》重鏈恆定區（CH)通常包含一或多個可能負責 效應功能之域。重鏈恆定區域之數目將視同型而定。舉例 而言，IgG重鏈各含有三個CH區域，稱為CHI、CH2及 CH3。所提供之抗體可具有任何此等同型及亞型，例如IL-23抗原結合蛋白為IgGl、IgG2或IgG4亞型。若需要IgG4， 則亦可需要如 Bloom 等人，1997，Protein Science 6:407 中 所述將點突變（CPSCP->CPPCP)引入鉸鏈區中以減輕形成 會導致IgG4抗體異質性之Η鏈内二硫鍵的趨勢。可使用子 類轉換方法將一種類型之本文所提供之抗體變為不同類 型。參見例如 Lantto 等人，2002，Methods Mol. Biol. 178:303-316。 在全長輕鏈及重鏈中，可變區及恆定區由具有約12個或 更多個胺基酸之「J」區聯接，其中重鏈亦包括具有約10 個或更多個胺基酸之「D」區。參見例如Fundamental Immunology，第 2版，第 7章（Paul, W.編）1989，New York: Raven Press。各輕鏈/重鏈對之可變區通常形成抗原結合 位點。 可變區 本文提供之各種重鏈及輕鏈可變區（或域）描述於表1及2 151613.doc -30- 201121567 中。此等可變區各自可例如連接於上述重鏈及輕鏈恆定 區。此外，如此產生之重鏈及輕鏈序列各自可組合形成完 整抗原結合蛋白結構。 提供含有至少一個重鏈可變區（VH)及/或至少一個輕鏈 可變區（VL)之抗原結合蛋白，該至少一個重鏈可變區選自 由 VH1、VH2、VH3、VH4、VH5、VH6、VH7、VH8、 VH9、VH10、VH11、VH12、VH13、VH14、VH15 及 VH1 6組成之群，該至少一個輕鏈可變區選自由^、 VL2、VL3、VL4、VL5、VL6、VL7、VL8、VL9、 VL10、VL11、VL12、VL13、VL14、VL15 及 VL16 組成之 群，如下表1及2所示。 表2中所列之重鏈可變區各自可與表1中所示之任何輕鏈 可’菱區組合形成抗原結合蛋白。在一些情況下，抗原結合 蛋白包括來自表1及2中所列之至少一個重鏈可變區及/或 一個輕鏈可變區。在一些情況下，抗原結合蛋白包括來自 表1及2中所列之至少兩個不同重鏈可變區及/或輕鏈可變 區。重鏈可變區之各種組合可與輕鏈可變區之各種組合的 任一者組合。
在其他情況下，抗原結合蛋白含有兩個相同輕鍵可變區 及/或兩個相同重鏈可變區。舉例而言，抗原結合蛋白可 為抗體或免疫功能片段’其包含呈如表1及2中所列之輕鍵 可隻區對與重鏈可變區對之级合形式的兩個輕鏈可變區及 兩個重鏈可變區。該等抗原結合蛋白之實例包含兩個相同 重鏈及輕鏈可變區’包括：抗體A Vili4/VL14 ;抗體B 1516J3.doc 201121567 VH9/VL9 ;抗體 C VH10/VL10 ;抗體 D VH15/VL15 ;抗體 E VH1/VL1、抗體 F VH11/VL11 ;抗體 G VH12/VL12 ;抗 體 H VH13/VL13 ;抗體 I VH8/VL8 ;抗體 J VH3/VL3 ;抗體 K VH7/VL7 ;抗體 L VH4/VL4 ;抗體 M VH5/VL5 及抗體 N VH6/VL6。 一些所提供之抗原結合蛋白包含重鏈可變區及/或輕鏈 可變區，其包含與選自表1及2之重鏈可變區及/或輕鍵可 變區之序列僅有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14或15個胺基酸殘基不同的胺基酸序列，其中該 序列差異各獨立地為一個胺基酸之缺失、插入或取代。在 一些抗原結合蛋白中，輕鏈及重鏈可變區包含與表丨及2中 所提供之胺基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、 90%、91〇/〇、92%、93%、94。/。、95%、96%、97。/〇、98°/〇 或 99%序列一致性的胺基酸序列。其他抗原結合蛋白（例如抗 體或免疫功能片段）亦包括如本文所述之變異型重鏈區形 式及/或變異型輕鏈區形式。 術語「一致性」係指兩個或兩個以上多肽分子或兩個或 兩個以上聚核苷酸之序列之間的關係，如藉由對準及比較 序列所判定。「一致性百分比」意謂所比較分子之胺基酸 或核苷酸之間的一致殘基百分比且基於所比較分子之最小 者的大小來計算。 151613.doc -32· 201121567 6szsa3s Ζζ:〇2α1 a3s M5AXLoa-o:aiA/J/.ys;Ko'o,uA>-Hvtt-a3a-a-JSSInltt-alososot/5ssd>as075'5rKAn-J^dv:MO<oiaaAA\KliyH.y-y.yl:1oi5ry311JAciao>svs>ssdsaf-sga-J> 5ΓΟζαΙαωΜ :M>a>:>ilodiMZ.;/?'tl'§Ko,o,o;iAlvu-Gvdcns-rIlu-alosot/,osssd/lo507y5rKAn-J2dv^ocDlaa>-MXti/ii.y5*so,c"5u-lAtt:ao>SVSASSa-sarlcyIa 寸 Ρλ £rozaIa3w ^Ia>uiiodo:UJWtt;.WKo,ol3A>-Hvu-awda-JSSIruu-alosososssd/\os07syKKAnT>idv^o<Dlao,AMrMi?590^K2olIlAosao>svs>ssdsal2a5 εΡΛ Is2ala3s ΝΞΛ^ΙΟΟΟΗΙΤί/^δδ^ΟΛΛΙνΗαα^&Ί^-ΗΊΙΗαϋιο^οπί^δεΛοδτάγκκΛΠΊ^ίίνΜοίοιδδΛΜηΉί^δ^ίκνο-ΙΛΉαοΛ^νΜΛ^ε^&ΙΡΜδια 3ΡΛ -ozalas MiaA>Ilodo:lz.iw^§s3u>-Alvu-awa-o,-Jt/5SIX-Jl&losososu-Qisa-/vo5075xrKAn-JzdvcyOCDIcy0AMKK",y57i>ayKyuIU>oiao>SVSASSo-saHs0wa ιΡλ -ONalbs ^Ia>21ododz./c/t<-§KoloioAAlvu-a3dalssIruu-al9sososssd>o5075:srKAn-J^<iv:>Iod;MaaAMKB"5y8ol5'KiotiAoiaiMSVS>ssdsalscyIa 0ΡΛ -6za-as -:ON9as Il0zala3w -J>l>:M1010stk'^s5a:ci3uH>-as3a33gN^Irls>!z-J0s0J>s:raa-0la£>JW^/l』0iui>/iois>;ratt-0:M0a->nbAM§JM<7st3^5'7JurIlASV0-Jsvsvsa-darI3dap 6O2sa3s ΊΛ1Λ:Μ1010&/Μι1'Λ^8ϋ5ακ8ΗΛα[/,3α3σΙΝ:ΜΙΙΤΛΉ3ϋιΛ01Λ1/,δα-0§^Λ1/8&」ί"2Λδα·0^<ί^αό>·Λ\§!<Λσδ.9.93』υ^^ 9〆 Z-OMSa3s 1Λ1ΛΝ1010 亡 tli'A^;93a:£5K9:>HAasaH3aIz:MIruQi2-Jowo-J>[/,sadIO§JW*9/150』5!/ici2>sdDNOJ^aaAM§xia205:v7』urIl>svo-JMvsvc,5ddaJn>dcySJA ，ozaIa3s J>lTMlooo&,yKy5™§3AAiwwa3t/,0-JosndovNvsva:^o^ssdi\08oioi!<Q.y£5s:iMos-JlAaa-Q-sod'Mc/0AAU/iMJ^/iJV/t3&5a!7Jurl^vsv0dsvslc,5sdal-J>va寸" ^0zala3s lAll^looosyKSS^/名uAAOV3a3s0-JosndovMvsvcrMSOSu-Disa->080,0,ki75'i75*XI>n-JAbddso<Dlcya>-AU/iM』i>/i^/l;157n:z31-Jsvsvodsvs-JssD-ain>vc>ΓΛ ^OMGIbHW 「02°1&3的 lAn^loooJ/^iw^iYs.y^^AAavaaaYcnolIvlsvslos^SOSJ^adAOSWA^SOAnl^dvlodA^bAM^ls^KaLviY^iuu-lAHbodvosAsiwainAwb Ρλ 2J 3Ή8 s ΠΉ8 ΠΉ8 E fli^n^輿剧^激^'长 f# 151613.doc •33· 201121567
09O2Qaas SSAlAll0cy0M/la/l^w/^u/t』A^WuAAAVla3v>nwifnATLlsDIt,32§SIJL:i^s(>3c5KL{i<A^.9aLii/7VAM3-Jo:Modvaoiyvi/VMcosu-lJOSWuST>nsosOCI0,AAOOOWUJ>JaA&-ΧΛ °°£Όζα1αΉΜ 9s:0zala3OT -Ozala3s SOMalbs SSAJA-JlogAua,y^t8a5§luA>->vlawiAt/,2Mlsu-cy§slaI-JA^k75VMMAa8mao-JMw-JONOdda-M^l<'/ic,SISaoc,5Alurls-J13SJM>-JDidoscy-JbA5-ΙΛ 0szala3s ^^>^ΗΗΟαο>^1^^§^95υ^><Η95Η>^3^Ί-^^α§ΜΗα>^-Η>^^δ>^εκδδ^&ϋ^ω1-ο^ο^χα^ι^κε^ϋδ^οα^>ΗυΗ^2&^δ>^α^ϋΜωα^α>α 1-ΙΛ ?02Q- αω^ SSAXAJJ.Oaolaw^usyinlvuAAAVlavvxAWSTMlsdbN&slaA-lAusy-MV/MLiysBMOIMHloModHasMail/ui^sssoDWAlullsTLawcrMAJOdoscnbAb 0-s> 9,οζαΙαωΜ ss>JAtoa°l1:1w^tti-i>yAofvuAA>vxavviAt/5s-J:Mlsu-&N^slaA-lA>Lsy75VMLUA^M^a:/a:OIM3-Jo:ModHboilMmwuu5*-soos/aurIS-Jlbt/,crMA-JDdosHa-Jc>Aa 6ΙΛ 寸寸：ozaIaHM SMAlxDaolsoAXAD^inlvuAAAVlavvlA^rl^nsdaND^lcn^mAHWTS^AMA/Ks^slurloIMSlo^ovdcmiA^yluxl-SOOSAlansllHSS/aodosHinaAa «Ι> K ^ zszalaHS SSAiAiloboM/HKLWiwiJt3KmyHVuAAAVla3crinc/3icy-JA-JSKMVN§-XJHiwMS*e5KUS5:sv5yMSAMwJo:>I0dvaosAAW/v5su-lu-OSA>uSTa-Jsooa-a/nooos3Alcy>3 5 / 0sz9aww SSA!A110a0lQ5K/ixi§si-rK/inivuAA>vla3§-Jsia-JAlc/3Nciv2§SIl:DliwM&5clKa{s5^5ss7XSAM30^0dv0,osAAW/v2 卜 SJlJOSVVDSlylsoodayvlooosw/abAW $> / ^ »S2Q« aww ΘΛΙΛΙΙΟσοΜ/ιστκΜ,ί.Η^^ΚΚΚ/ΪΓΗνοΛΛΛΥΙαΗα^η^ιδΊΛΊ^Μ^νΜα^-ϋ^ίλϊΜ^σκΜΛίίϊνίϊγ/ι^ΛΛνωΊΟ^ίΜν^ΗΛΜΛ^Ιΰνί^ευοΜνλο^ΤΗ^^οο^αΛΊΟΟΟ^ΗΛΙϋΛΗ ςΗ> , ^ 9SKSa3s ww>H>JHOao>^§^83fc§^u^><HQW<^JWlaJbHS-w2§w-HMi^s§s^^§QSS3>^wl-o^o^<a^>l^ss^tow<<uw12J20^a>>oaaww>1-a>a 5 ^εΌ29α3Μ ε^ΟΜαιδω^ swAJAmoaDM/a:f'5<n5,s*2i>aiaHVu>-A>vla3v>nt/3iiyu-Jlr'D!t/32§-lJ^J!WSKUk^8a/ui//lvAAVH-Jo:Modva£,:AM///vi>:>'6,sdlu-0svvusl>nsoso0-0,>AOOOS3/acy>al=> ΙεοζαΙδΗ^ SSAlAs10cy0M/SKaALi<sx:z/IOaiaHV0AA>vla3v>nsi0,-J>--Jl§l/,z§SIUaoJ^5Y7K/Ltwiv8cw/M//!VAMUJ-J0^0dvbQi>M/iwyss-6,su-lu-0svvus-Jai-Js>Ioa-a>AO00SHA-Jayva-Ι> 2J iou E iQU 2i iQU E 151613.doc -34. 201121567 對於此等計算，須藉由特定數學模型或電腦程式（亦即 「演算法」）處理對準中之間隙（若存在）。可用於計算所對 準核酸或多肽之一致性的方法包括以下文獻中所述之方 法·. Computational Molecular Biology, (Lesk，A. M.編）， 1988，New York: Oxford University Press ; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D· W.編），1993,
New York: Academic Press ； Computer Analysis of
Sequence Data，Part I，（Griffin，A· M.及 Griffin，H. G.編）， 1994，New Jersey: Humana Press ; von Heinje, G” 1987,
Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press ； Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. 及 Devereux，J.編），1991，New York: M. Stockton Press ; 及 Carillo專人，1988, 5X4A/V.却p/ied Λ/αί/2 48:i〇73。 在計算一致性百分比時，以獲得序列之間最大匹配的方 式對準所比較之序列。用於確定一致性百分比之電腦程式 為GCG程式包’其包括GAP(Devereux等人，1984，
Acid Res. 12:387 ； Genetics Computer Group, University of Wisconsin’ Madison，WI)。電腦演算法GAP用於對準待確 定序列一致性百分比之兩個多肽或聚核苷酸。將序列對準 以最佳匹配其各別胺基酸或核苷酸（「匹配範圍」，.如藉由 演算法所確定）。間隙開放罰分（其計算為3χ平均對角線， 其中該「平均對角線」為所用比較矩陣之對角線的平均 值；「對角線」為由特定比較矩陣賦予各完全胺基酸匹配 的分數或數值）及間隙擴展罰分（其通常為間隙開放罰分之 151613.doc •35· 201121567 1/10)，以及比較矩陣（諸如PAM 250或BLOSUM 62)與演算 法結合使用。在某些實施例中，演算法亦使用標準比較矩 陣（對於PAM 250比較矩陣，請參見Dayhoff等人，1978, di/as 〇/ Proiez’w S叫wewce SirMCiwre 5:345-352 ;對於 BLOSUM 62比較矩陣，請參見Henikoff等人，1992，户"0£；· dcad. t/U. 89:10915-10919)。 使用GAP程式確定多肽或核苷酸序列之一致性百分比的 推薦參數如下：演算法：Needleman等人，1970, «/· Mo/. 5ζ·ο/. 48:443-453 ;比較矩陣：BLOSUM 62，來自 Henikoff 等人’ 1992，同上；間隙罰分：12(但無末端間隙之罰 分）’間隙長度罰分：4，相似性臨限值：〇。用於對準兩 個胺基酸序列之某些對準流程可導致兩個序列之僅較短區 域匹配且此小對準區域可能具有極高序列一致性，即使在 兩個全長序列之間不存在明顯關係。因此，必要時可調整 所選對準方法（GAP程式）以獲得涵蓋目標多肽之至少5〇個 相連胺基酸的對準。 本文所揭示之重鏈及輕鏈可變區包括來源於相關抗原結 合蛋白群組之共同序列。分析重鏈及輕鏈可變區之胺基酸 序列的相似性。出現四個群組，一個群組具有 <輕鏈可變 區（VH9/VL9、VH10/VL10、VH11/VL11、Vh13/vli3、 \^14/\^14及\^15/\^15)’而三個群組具有人輕鏈可變區： λ 組 1(Vh5/Vl5、VH6/VL6 及 VH7/VL7)、λ 組 2(VH3/VL3 及 VH4/VL4)及λ組3(VH1/VL1及VH2/VL2)。代表之輕鏈生殖系 包括VK1/A30及VK1/L19。代表之輕鏈入生殖系包括 151613.doc •36· 201121567 VLl/le、VL3/3p、VL5/5c及VL9/9a。代表之重鏈生殖系包 括 VH3/3-30、VH3/3-30.3、VH3/3-33、VH3/3-48、VH4/4-3 1及VH4/4-59 »如本文中所使用，「共同序列」係指具有 許多序列中共有之保守性胺基酸及在指定胺基酸序列中改 變之可變胺基酸的胺基酸序列。共同序列可使用對對應於 本文所揭示之IL-23抗原結合蛋白的輕鍵及重鏈可變區進 行之標準系統發生分析來確定。
κ組之輕鏈可變區共同序列為DXWXzTQSPSSVSASV gdrvtitcrasqgx3x4sx5wx6awyqqkpgx7apx8lliya ASSLQSGVPSRFSGSX9SGTX10FTLTISSLQPXnDFATYX12C QQANSFPFTFGPGTKVDX13K(SEQ ID NO:30)，其中 乂，選 自I或S; X2選自M或L; X3選自G或V且X4選自S、F或I; X5選自S或G ; X6選自F或L ; X7選自K或Q ; X8選自K、N或 S ; X9選自G或V ; X1()選自D或E，Xh選自E或A ; X12選自 Y或F ;且X13選自I、V或F »
λ組1之輕鏈可變區共同序列為QPX丨LTQPPSASASLG ASVTLTCTLX2SGYSDYKVDWYQX3RPGKGPRFVMRVGTG gx4vgskgx5gipdrfsvlgsglnrx6ltikniqeedesdyh CGADHGSGX7NFVYVFGTGTKVTVL(SEQ ID NO:61)，其 中X!選自V或E; X2選自N或S; X3選自Q或L且X4選自I或 T ; X5選自D或E ; X6選自Y或S ;且X7選自S或N。
λ組3之輕鏈可變區共同序列為QSVLTQPPSVSGAP GQRVTISCTGSSSNXiGAGYDVHWYQQX2PGTAPKLLIYGS X3NRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSY 151613.doc •37- 201121567 DSSLSGWVFGGGTX4RLTVL(SEQ ID NO:139)，其中 乂】選 自T或I ; X2選自V或L ; X3選自G或N且X4選自R或K。 κ組之重鏈可變區共同序列為QVQLQESGPGLVKPSQT LSLTCTVSGGSIX,SGGYYWX2WIRQHPGKGLEWIGX3lX4Y sgx5x6yynpslksrx7tx8svdtsx9nqfslx10lssvtaad TAVYYCAXnX12RGX13YYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:140)，其中X,選自N或S; X2選自S或T; X3選自Y或H 且X4選自Y或H ; X5選自S或N ; X6選自S或T ; X7選自V或 I ; X8選自I或Μ ; X9選自K或Q ; X1()選自K或S，Xn選自R 或K ; X12選自D或N;且X丨3選自H、F或Y。 λ組1之重鏈可變區共同序列為EVQLVESGGGLVQPGGS LRLSCX,X2SGFTFSX3X4SMNWVRQAPGKGLEWVSYISSX5 sstx6yx7adsvkgrftisrdnaknslylqmnslrdedtav YYCARRIAAAGX8X9X10YYYAXnDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:141)，其中X,選自A或V; X2選自A或V; X3選自T 或S且X4選自Y或F ; X5選自S或R ; X6選自R或I ; X7選自 Η、Y或I ; X8選自P或G ; X9選自W或F ; X1()選自G或H且 Xn選自M或L。 λ組2之重鏈可變區共同序列為QVQLVESGGGVVQPGR SLRLSCAASGFTFSSYX1MHWVRQAPGKGLEWX2X3VISX4 dgsx5kyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedta VYYCARERTTLSGSYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 142)， 其中X丨選自G或A ; X2選自V或L ; X3選自A或S，且X4選自 F或Η，且X5選自L或I。 151613.doc -38- 201121567 λ組3之重鏈可變區共同序列為QVQLVESGGGVVQPGRS LRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGS NXJYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYY CARDRGYX2SSWYPDAFDIWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO: 143) > 其中X!選自E或K且X2選自T或S。 互補決定區 互補決定區或「CDR」係嵌埋在重鏈及輕鏈可變區之構 架中，其中其構成負責抗原結合及識別之區域。相同物種 之免疫球蛋白鏈的可變域例如一般展現類似總體結構；包 含由高變CDR區聯接之相對保守性構架區（FR)。抗原結合 蛋白可具有1、2、3、4、5、6個或更多個CDR。上述可變 區例如通常包含三個CDR。重鏈可變區及輕鏈可變區之 CDR通常經由構架區排列以形成特異性結合於目標抗原 (例如IL-23)上之結構。自N端至C端，天然存在之輕鏈及 重鏈可變區通常皆符合此等元件之以下順序：FR1、 CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3 及 FR4。例示性輕鏈可 變域及重鏈可變域之CDR及FR區在表1及2中突出顯示。應 認識到，CDR及FR區之邊界可不同於彼等突出顯示區域。 已設計用於賦予佔據此等各域中之位置的胺基酸編號之編 號系統。指定抗原結合蛋白之互補決定區及構架區可使用 此等系統來標識。編號系統在以下文獻中定義：Kabat等 人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，US Dept, of Health and Human Services, PHS，NIH， NIH Publication No. 91-3242, 1991，或 Chothia 及 Lesk， 151613.doc •39- 201121567 1987，·/. Mo/·价〇/· 196:901-917 ; Chothia 等人，1989, 342:878-883。用於免疫球蛋白鏈中之胺基酸的其 他編號系統包括IMGT®(國際免疫遺傳學資訊系統 (international ImMuno Gene Tics information system) Lefranc^ A ' Dev. Comp. Immunol. 2005, 29:185-203) ! AHo(HoneggerA Pluckthun, J. Mol. Biol. 2001, 309(3):657-670) »本文所提供之CDR可不僅用於界定傳統抗體結構之 抗原結合域，而且亦可如本文所述嵌入多種其他多肽結構 中〇 本文所揭示之抗原結合蛋白為内部可移植、插入、嵌入 及/或聯接一或多個CDR之多肽。抗原結合蛋白可具有例 如一個重鏈CDR1(「CDRH1」）、及/或一個重鏈CDR2 (「CDRH2」）、及/或一個重鏈CDR3(「CDRH3」）、及/或 一個輕鏈CDR1(「CDRL1」）、及/或一個輕鏈CDR2 (「CDRL2」）、及 / 或一個輕鏈 CDR3(「CDRL3」）。一些 抗原結合蛋白包括CDRH3與CDRL3兩者。特定實施例一般 利用不重複CDR之組合，例如一般不使抗原結合蛋白在一 個可變重鏈區中具有兩個CDRH2區等。抗原結合蛋白可包 含一或多個與表3中所呈現之一或多個CDR的胺基酸序列 一致或僅有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、1〇、11、12、 13、14或15個胺基酸殘基不同之胺基酸序列，其中各該種 序列差異獨立地為一個胺基酸之缺失、插入或取代° & 抗原結合蛋白中之CDR包含與表3中所列之CDR序歹J # 至少 80%、85% ' 90% > 91% ' 92% ' 93% ' 94% ' 95/〇 151613.doc -40- 201121567 96%、97%、98°/。或99%序列一致性的胺基酸序列。在一些 抗原結合蛋白中，CDR嵌入「構架」區中’該「構架」區 使CDR定向以便達成CDR之適當抗原結合性質。 表3 例示性CDRH及CDRL序列 例示性CDRL序列 CDRL1 CDRL2 CDRL3 TGSSSNTGAGYDVH GSGNRPS QSYDSSLSGWY SEQ ID NO:62 SEQ ID NO:63 SEQ ID NO-.64 TGSSSNIGAGYDVH GSNNRPS MIWHSSASV SEQ ID NO:65 SEQ ID NO:66 SEQ ID NO:67 TLRSGINVGTYRIY YKSDSDKQQG5 GADHGSGSNFVYV SEQ ID NO:68 SEQ ID NO:69 SEQ ID NO:70 TLNSGYSDYKV VGTGGIVGSKGD GADHGSGNNFVYV SEQ ID NO:71 SEQ ID NO:72 SEQIDNO:73 TLSSGYSDYKV VGTGGIVGSKGE QQANSFPFT SEQ ID NO:74 SEQIDNO:75 SEQIDNO:76 RASQGFSGWLA VGTGGTVGSKGE QQATSFPLT SEQ ID NO:77 SEQ ID NO:78 SEQ ID NO:79 RASQVISSWLA AASSLQS QQADSFPPT SEQ ID NO:80 SEQ ID NO:81 SEQ ID NO:82 RASQVISSWFA LQHNSYPPT SEQ ID NO:83 SEQ ID NO:84 RASQGSSSWFA SEQ ID NO:85 RASQGISSWFA SEQ ID NO:86 RAGQVISSWLA SEQIDNO:87 RASQGIAGWLA SEQIDNO:88 RASQGIRNDLG SEQ ID NO:89 151613.doc •41 - 201121567 例示性CDRH序列 CDRH1 CDRH2 CDRH3 SYGMH VIWYDGSNEYYADSVKG DRGYTSSWYPDAFDI SEQ ID NO:91 SEQ ID NO:92 SEQ ID NO:93 SYAMH VIWYDGSNKYYADSVKG DRGYSSSWYPDAFDI SEQ ID NO:94 SEQ ID NO:95 SEQ ID NO:96 TYSMN VISFDGSLKYYADSVKG ERTTLSGSYFDY SEQ ID NO:97 SEQ ID NO:98 SEQ ID NO:99 SYSMN VISHDGSIKYYADSVKG RIAAAGGFHYYYALDV SEQ ID NO: 100 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102 SFSMN YISSRSSTIYIADSVKG RIAAAGPWGYYYAMDV SEQ ID NO: 103 SEQ ID NO :104 SEQ ID NO: 105 SGGYYWT YISSSSSTRYHADSVKG NRGYYYGMDV SEQ ID NO: 106 SEQ ID NO :107 SEQ ID NO: 108 SGGYYWS YISSRSSTIYYADSVKG NRGFYYGMDV SEQ ID NO: 109 SEQ ID NO:110 SEQIDNO:lll SYFWS YIYYSGNTYYNPSLKS DRGHYYGMDV SEQIDNO:112 SEQ ID NO: 113 SEQ ID NO: 114 TYYWS HIHYSGNTYYNPSLKS DRGSYYGSDY SEQIDNO:115 SEQIDNO:116 SEQ ID NO: 117 YIYYSGSTYYNPSLKS DRGYYYGVDV SEQIDNO:118 SEQ ID NO: 119 YIYYSGSSYYNPSLKS ENTVTIYYNYGMDV SEQ ID NO :120 SEQ ID NO:6 YIYYSGSTNYNPSLKS SEQIDNO:121 LIYTSGSTNYNPSLKS SEQ ID NO :122 LIWYDGSNKYYADSVKG SEQ ID NO:90 本文提供包含以下之CDR1區：SEQ ID NO:7及11之胺基 酸殘基 23-34 ; SEQ ID NO:9、13、15、17、19、21、23、 151613.doc • 42· 201121567 25、27及29之胺基酸殘基24-34 ; SEQ ID ΝΟ:1、3及4之胺 基酸殘基23-36 ; SEQ ID NO:31、33、34、38、40、44、 52 及 60 之胺基酸殘基 31-35，及 SEQ ID NO:46、48、50、 54、56及58之胺基酸殘基31-37。 提供包含以下之CDR2區：SEQ ID NO:9、13、15、17、 19、21、23、25、27 及 29 之胺基酸殘基 50-56 ; SEQ ID NO:7及11之胺基酸殘基50-61 ; SEQ ID NO:4之胺基酸殘基 52-62 ; SEQ ID NO:31、33、44 及 52 之胺基酸殘基 50-65 ; SEQ ID ΝΟ··36、38、40、42 及 60 之胺基酸殘基 50-66 ; SEQ ID ΝΟ:1 及 3 之胺基酸殘基 52-58，及 SEQ ID ΝΟ:46、 48、50、54、56及58之胺基酸殘基52-67。 亦提供包含以下之CDR3區：SEQ ID ΝΟ:13、15、17、 19、21、23、25、27及 29 之胺基酸殘基 89-97 ; SEQ ID ΝΟ:1及3之胺基酸殘基91-101 ; SEQ ID NO:7、9及11之胺 基酸殘基94-106; SEQ ID NO:44及52之胺基酸殘基 98-107 ; SEQ ID NO:4之胺基酸殘基 97-105 ; SEQ ID NO:34及36之胺基酸殘基99-110 ; SEQ ID NO:112之胺基酸 殘基99-112 ; SEQ ID NO:31及33之胺基酸殘基99-113 ; SEQ ID NO:38、40 及 42 之胺基酸殘基 99-114 ; SEQ ID NO:46、48、54、56 及 58 之胺基酸殘基 100-109 ;及 SEQ ID NO:50之胺基酸殘基101-019 » 本文所揭示之CDR包括來源於相關序列群組之共同序 列。如先前所述’鑑別出四個可變區序列群組，亦即一個 κ組及三個λ組。κ組之CDRL1共同序列由raSQXjXJX; 151613.doc 43· 201121567 \\^4八（3£(^10>10:123)組成，其中乂1選自0或¥;乂2選自 I、F或S ; X3選自S或G且X4選自F或L。λ組1之CDRL1共同 序列由TLX丨SGYSDYKVD(SEQ ID NO:124)組成，其中X, 選自N或組3之CDRL1共同序列由TGSSSNX! GAGYDVH(SEQIDNO:125)組成，其中X,選自 I或 T。 λ 組 1 之 CDRL2 共同序列由 VGTGGX1VGSKGX2(SEQ ID NO: 126)組成，其中X丨選自I或T且X2選自D或E。λ組3之 CDRL2共同序列由GSXiNRPSCSEQ ID ΝΟ:127)組成，其中 X!選自Ν或G。 CDRL3 共同序列包括 GADHGSGX1NFVYV(SEQ ID NO:128)，其中 乂!為 S 或 N。 κ組之CDRHl共同序列由SGGYYWX丨（SEQIDNO:129)組 成，其中X〗選自S或Τ°λ組1之CDRH1共同序列由 X]X2SMN(SEQ ID ΝΟ:131)組成，其中X!選自S或Τ且Χ2選 自Υ或F。λ組2之CDRH1共同序列由ΒΥΧ,ΜΗβΕί) ID NO:130)組成，其中X,選自G或A。 κ組之 CDRH2共同序列由 XJXaYSGXsXAYYNPSLKSCSEQ ID NO:132)組成，其中X!選自Y或Η ; X2選自Y或Η ; X3選 自S或N且X4選自T或S。λ組1之共同序列由 YISSXjSTXzYXsADSVKGCSEQ ID ΝΟ:134)組成，其中X! 選自R或S，Χ2選自I或R，Χ3選自I、Η或Υ。λ組2之共同序 列由 VISXPGSXsKYYADSVKGCSEQ ID ΝΟ:133)組成，其 中Χι為F或Η且Χ2為L或Τ。λ組3之CDRH2共同序列由 VIWYDGSNXJYADSVKGCSEQ ID ΝΟ:135)組成，其中X】 151613.doc -44- 201121567 選自K或E。 κ 組之 CDRH3 共同序列由 XAGXzYYGMDVCSEQ ID NO:136)組成，其中X1選自N或D且X2選自H、Y或F。λ組l 之 CDRH3 共同序列由 RIAAAGXiXzXsYYYAXADVCSEQ ID NO:137)組成，其中X!選自G或P ; X2選自F或W ; X3選自Η 或G且Χ4選自L及Μ。λ組3之CDRH3共同序列由 DRGYXjSWYPDAFDKSEQIDNOzm)組成，其中X,選自 S或T 〇 單株抗體 所提供之抗原結合蛋白包括結合於IL-23之單株抗體。 單株抗體可使用此項技術中已知之任何技術來產生，例如 藉由對完成免疫時程後自轉殖基因動物收集之脾細胞進行 永生化。脾細胞可使用此項技術中已知之任何技術進行永 生化，例如藉由使其與骨髓瘤細胞融合產生融合瘤。用於 產生融合瘤之融合程序的骨髓瘤細胞較佳不產生抗體，具 有高融合效率，及具有使其不能在僅支持所需融合細胞 (融合瘤）生長之某些選擇性培養基中生長之酶缺陷。適合 用於小鼠融合之細胞株的實例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、 P3-X63-Ag8.653、NSl/l.Ag 4 1、Sp210-Agl4、FO、 NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG 1.7 及 S194/5XXO Bui ;用於大鼠融合之細胞株的實例包括11210.1^丫：3、丫3-Ag 1.2.3、IR983F及4B210。適用於細胞融合之其他細胞 株為 U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2 及 UC729-6 〇 151613.doc 45- 201121567 在一些情況下，融合瘤細胞株係藉由以下步驟產生：用 IL-23免疫原對動物（例如具有人類免疫球蛋白序列之轉殖 基因動物）進行免疫；自經免疫動物收集脾細胞；使收集 之脾細胞與骨趙瘤細胞株融合，由此產生融合瘤細胞；由 融合瘤細胞建立融合瘤細胞株，並鑑別產生結合IL_23多 肽而不破壞IL-12之抗體的融合瘤細胞株。該等融合瘤細 胞株及由其產生之抗IL-23單株抗體為本申請案之態樣。 由融合瘤細胞株分泌之單株抗體可使用此項技術中已知 之任何技術來純化。可進一步篩選融合瘤或mAb以鑑別具 有特定性質（諸如抑制IL-23誘導之活性的能力）之mAb。 嵌合及人類化抗體 亦提供基於上述序列之嵌合及人類化抗體。用作治療劑 之單株抗體可在使用之前以各種方式進行修飾。一個實例 為嵌合抗體，其為由來自不同抗體之蛋白質區段構成之抗 體，該等區段共價聯接產生功能性免疫球蛋白輕鏈或重鏈 或其免疫功能部分。重鏈及/或輕鏈之一部分一般與來源 於特定物種或屬於特定抗體類別或子類之抗體中的相應序 列一致或同源，而該等鏈之其餘部分與來源於另一物種或 屬於另一抗體類別或子類之抗體中的相應序列一致或同 源。關於與嵌合抗體相關之方法，請參見例如美國專利第 4,816,567 號；及 Morrison 等人，1985，/>"〇<^.^^3^/._(4<^〇^· t/a 81:685 1-6855。CDR移植例如描述於美國專利第 6，180,370 號、第 5,693,762 號、第 5,693,761 號、第 5,585,089號及第 5,530，101號中。 151613.doc •46· 201121567 一種適用類型之嵌合抗體為「人類化」抗體。人類化抗 體一般自最初在非人類動物中產生之單株抗體製造。此單 株抗體中之某些胺基酸殘基（通常來自抗體之非抗原識別 部分）通常經修飾成與相應同型之人類抗體_的相應殘基 同源。人類化可例如使用各種方法，藉由用齧齒動物可變 區之至少一部分取代人類抗體之相應區域來進行（參見例 如美國專利第5,585,089號及第5,693,762號；Jones等人， 1986,編，321:522_525 ; Rieehm_等人，1988,施㈣ 332:323-27 ; Verhoeyen 等人，1988，239:1534- 1536)。 在某些實施例中，來自除人類外之物種的恆定區可與人 類可變區一起用於產生雜交抗體。 完全人類抗趙 亦提供完全人類抗體。可獲得製備對於指定抗原具有特 異性而無需使人類接觸抗原之完全人類抗體（「完全人類 抗體」）的方法。提供用於實施完全人類抗體製造之一種 特定方法為小鼠體液免疫系統之「人類化」。將人類免疫 球蛋白（Ig)基因座引入内源性Ig基因已去活之小鼠體内為 一種在小鼠（一種可用任何所需抗原進行免疫之動物）體内 產生元全人類單株抗體（mAb)之方法。使用完全人類抗體 可使有時可因向人類投與小鼠或小鼠衍生之mAb作為治療 劑所引起之免疫原性及過敏性反應減至最少。 完全人類抗體可藉由對能夠在不存在内源性免疫球蛋白 產生下產生人類抗體譜系之轉殖基因動物（通常為小鼠）進 151613.doc -47- 201121567 行免疫來製造。出於此目的，抗原通常具有6個或6個以上 相連胺基酸，及視情況結合於載體（諸如半抗原）^參見例 如 Jakobovits 等人 ’ 1993，iVoc. Wai/· Jca乂 5W. ί/以 90:255 1-2555 ; Jakobovits 等人，1993， Nature 3 62:255-258 ;及 Bruggermann 等人，1993, /mww«o/. 7:33。在該種方法之一實例中，轉殖基因動物係 藉由以下步驟產生.使其中編碼小鼠免疫球蛋白重鏈及輕 鏈之内源性小鼠免疫球蛋白基因座失能，及向小鼠基因組 中插入含有編碼人類重鏈及輕鏈蛋白質之基因座之人類基 因組DNA的大片段。接著對具有少於一整套人類免疫球蛋 白基因座之經部分修飾之動物進行雜交育種以獲得具有所 有所需免疫系統修飾之動物。當投與免疫原時，此等轉殖 基因動物產生對免疫原具有免疫特異性、但具有人類而非 鼠類胺基酸序列（包括可變區）之抗體。關於該等方法之其 他詳情，請參見例如WIP0專利公開案W096/33735及 W094/02602。其他用於製備人類抗體之與轉殖基因小鼠 有關的方法描述於以下文獻中：美國專利第5,545,807號； 第 6,713,610 號；第 6,673,986 號；第 6 162 963 號；第
5,545,807 號；第 6,300，129 號；第 6,255,458 號；第 5,877,397號；第 5,874,299號及第 5,545,806號；WIPO專利 公開案 WO91/10741、W090/04036，及 EP 546073B1 及 EP 546073A1 ° 上述轉殖基因小鼠含有編碼未重排人類重鏈（[μ]及[γ])及 [κ]輕鏈免疫球蛋白序列以及使内源性[μ]及[κ]鏈基因座去 151613.doc -48 · 201121567 活之靶向突變的人類免疫球蛋白基因微型基因座（Lonberg 等人，1994，368:856-859)。因此，小鼠展現小鼠 IgM或[κ]之表現降低及對免疫作出反應，且所引入之人類 重鏈及輕鏈轉殖基因經歷類別轉換及體細胞突變以產生高 親和力人類IgG [κ]單株抗體（Lonberg等人，同上；Lonberg 及 Huszar，1995，/wierw. /mww«o/. 13: 65-93 ; Harding 及 Lonberg, 1995，dm AT. Γ /cat/. Sci. 764:536-546)。該等 小鼠之製備詳細描述於以下文獻中：Taylor等人，1992, Nucleic Acids Research 20:6287-6295 ； Chen 等人，1993, International Immunology 5:647-656 i Tuaillon^ A 5 1994, J. Immunol. 152:2912-2920 ； Lonberg 等人，1994, Nature 368:856-859 ; Lonberg, 1994, Handbook of Exp.
Pharmacology 113:49-101 ; Taylor 等人，1994,
International Immunology 6:579-591 ; Lonberg 及 Huszar， 1995, Intern. Rev. Immunol. 1 3 :65-93 ; Harding及 Lonberg， 1995, TV.y dead. 764:536-546 ; Fishwild等人， 1996，iVaiwre 价£?化<^/2«£?/〇幻；14:845-85。進一步參見美國專 利第 5,545,806 號；第 5,569,825 號；第 5,625,126 號；第 5,633,425 號；第 5,789,650 號；第 5,877,397 號；第 5,661,016號；第5,814,318號；第 5,874,299 號；及第 5,770,429號；以及美國專利第5,545,807號；WIPO公開案 第 WO 93/1227號；第 WO 92/22646號；及第 WO 92/03918 號。用於在此等轉殖基因小鼠體内產生人類抗體之技術亦 揭示於WIPO公開案第WO 98/24893號及Mendez等人， 151613.doc • 49- 201121567 1997’ G15:146 156中。舉例而言可使用 HCo7及HCol2轉殖基因小鼠品系來產生抗IL 23抗體。 使用融合瘤技術，可自諸如上述之轉殖基因小鼠產生及 選擇具有所需特異性之抗原特異性人類mAb。該等抗體可 使用適合載體及宿主細胞進行選殖及表現，或抗體可自培 養之融合瘤細胞收集。 完全人類抗體亦可自噬菌體呈現文庫獲得（諸如
Hoogenboom 等人，1991，J. Mo/. 5/〇/· 227:381 ; Marks 等 人，1991，《/.从〇/.价〇/. 222:581 ; WIPO 公開案第 WO 99/10494號中所揭示）。噬菌體呈現技術模擬經由使抗體譜 系呈現於絲狀噬菌體之表面上並隨後使其結合於所選抗原 對噬菌體進行選擇來進行免疫選擇。 雙特異性或雙功能性抗原結合蛋白 「雙特異性」、「雙重特異性」或「雙功能性」抗原結合 蛋白或抗體分別為具有兩個不同抗原結合位點（諸如如上 文所述之一或多個CDR或一或多個可變區）之雜交抗原結 合蛋白或抗體。在一些情況下，其為具有兩個不同重鏈/ 輕鏈對及兩個不同結合位點之人造雜交抗體。多特異性抗 原結合蛋白或「多特異性抗體」為靶向一個以上抗原或抗 原決定基之抗原結合蛋白或抗體。雙特異性抗原結合蛋白 及抗體為一類多特異性抗原結合蛋白及抗體且可藉由多種 方法製造’包括（但不限於）使融合瘤融合或對Fab'片段進 行連接。參見例如 Songsivilai 及 Lachmann，1990, Clin. Exp. Wwwwo/· 79:315-321 ; Kostelny 等人，1992，乂 151613.doc ·50· 201121567 148:1547-1553 ° 免疫學片段 抗原結合蛋白亦包括抗體之免疫學片段（例如Fab、 Fab1、F(ab')2或scFv)。「Fab片段」包含一條輕鏈（輕鏈可變 區（Vl)及其相應怪定域（CL))及一條重鏈（重鏈可變區（VH)及 第一恆定域（CH1))。Fab分子之重鏈不能與另一重鏈分子形 成二硫鍵。「Faiy片段」含有一條輕鍵及一條重鍵中亦含有 CH1域與CH2域之間的區域之一部分，以使得可在兩個Fab， 片段之兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵以形成F(ab，）2分子。 因此’「F(ab·)2片段」由利用兩條重鏈之間的二硫鍵保持 在一起之兩個Fab'片段構成。「Fv片段」由抗體單一臂之 可變輕鏈區及可變重鏈區組成。單鏈抗體r scFv」為重鏈 及輕鏈可變區已由可撓性連接子連接形成單一多肽鏈，從 而形成抗原結合區之Fv分子。單鏈抗體詳細論述於以下文 獻中：WIPO公開案第WO 88/01649號、美國專利第 4,946,778 號及第 5,260,203 號；Bird，1988, 242:423 ; Huston等人，1988, Proc. A^i/· deal 5W. t/U. 85:5879 ; Ward等人，1989，334:544 ; de Graaf等 人，2002，Mo/ 价〇/. 178:379-387 ; Kortt等人， 1997，/Voi. fng. 10:423 ; Kortt等人，2001，Bzowo/·五ng. 18:95-108及 Kriangkum等人，2001，£«g.l8:31- 40。「Fc」區含有兩個包含抗體之Ch1及cH2域之重鏈片 段。兩個重鏈片段由兩個或兩個以上二硫鍵及Ch3域之疏 水性相互作用保持在一起。 I51613.doc •51 · 201121567 亦包括域抗體，僅含有重鏈之可變區或輕鏈之可變區之 免疫功能性免疫球蛋白片段。在一些情況下，兩個或兩個 以上vH區由肽連接子共價聯接形成二價域抗體。二價域抗 體之兩個vH區可㉒向相同或不同抗原。雙功能抗體為包含 兩條多肽鏈之二價抗體，其中各多肽鏈包含vH及、域，該 等域由過短而無法使同一鏈上之兩個域之間進行配對，從 而使各域與另一多肽鏈上之互補域配對的連接子聯接（參 見例如 Holliger 等人 ’ ^ 90:6444-48，1993 及 P〇ljak 等人，2:1121-23, 1994)。類似地’微型三功能抗體及微型四功能抗體分別 為包含三條及四條多肽鏈之抗體，且分別形成三個及四個 可相同或不同之抗原結合位點。最大抗體包含二價scFv* 4貝連接於IgG丨之Fc區（參見例如Fredericks等人，2004, Protein Engineering, Design & Selection, 17:95-106 ； k ’ 2QQ1, Journal of Immunological Methods， 25 1:1 21-135 ; Shu等人，1993, /Voc. TVa". 如.. 90.7995-7999 ，Hayden 等人，1994， Therapeutic Immunology 1:3-15)。 各種其他形式 亦提供以上所揭示之抗原結合蛋白的變異形式，一些抗 原結合蛋白在表1及2中所列之一或多個重鏈或輕鏈可變區 或CDR中具有例如一或多個保守性胺基酸取代。 天然存在之胺基酸可基於常見側鏈性質分成以下類別： 疏水性（正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、lie);中性親水 151613.doc -52- 201121567 性（Cys、Ser、Thr (His、Lys、Arg); (Trp 、 Tyr 、 Phe)。 、Asn、Gin);酸性（Asp、Glu);鹼性 影響鏈取向之殘基（Gly、Pro);及芳族 保守性胺基酸取代可包括此等類別之一的成員與同一類 別之另一成員的交換。保守性胺基酸取代可涵蓋非天然存 在之胺基酸殘基，其通常藉由化學肽合成而非藉由生物系 統中之合成來併入。此等殘基包括肽模擬物及其他反轉或 倒轉形式之胺基酸部分。本文所述之抗原結合蛋白的功能 性及/或生物化學特徵之該等實質性修飾可藉由在重鏈及 輕鍵之胺基酸序列中形成取代來達成，該等取代在其對維 持以下之作用方面顯著不同：（a)取代區域中分子骨架的結 構，例如呈片狀或螺旋構形；（b)分子之目標位點處之電荷 或疏水性；或（c)側鏈之體積。 非保守性取代可包括將以上類別之一的成員換成另—類 別之成員。該等取代之殘基可引入抗體中與人類抗體同源 之區域或分子之非同源區域中。 在作出該等變化時’根據某些實施例，可考慮胺基酸之 親水指數。蛋白質之親水概況係藉由賦予各胺基酸以數值 (「親水指數」）且接著沿肽鏈重複計算此等值之平均值來 計算。已基於疏水性及電荷特徵對各胺基酸賦予親水指 數。其為：異白胺酸（+4.5);纈胺酸（+4 2);白胺酸 (+3.8);笨丙胺酸（+2.8);半胱胺酸/胱胺酸（+2 5);曱硫胺 酸（+1.9);丙胺酸（+1.8);甘胺酸（_0·4);蘇胺酸（_〇7);絲 胺酸（-0.8);色胺酸（-0.9);酪胺酸（j.3);脯胺酸（_丨6); 151613.doc •53· 201121567 組胺酸（-3.2);麵胺酸（_3·5);麩醯胺酸（-3.5);天冬胺酸 (-3_5);天冬醯胺（-3.5);離胺酸（-3.9);及精胺酸（-4.5)。 此項技術中瞭解親水概況對賦予蛋白質相互作用生物功 能之重要性（參見例如Kyte等人，1982，Mo/. 157:105-131)。已知某些胺基酸可取代具有類似親水指數 或分數之其他胺基酸且仍保留類似生物活性。在基於親水 指數作出變化時’在某些實施例中，納入親水指數在土2内 之胺基酸的取代。在一些態樣中，納入在± 1内之彼等胺基 酸，且在其他態樣中，納入在土〇·5内之彼等胺基酸。 此項技術中亦應瞭解，類似胺基酸之取代可基於親水性 有效地進行，尤其當由此形成之生物功能性蛋白質或肽意 欲用於免疫學實施例中時，如在本發明之情況中。在某些 實施例中，蛋白質之最大局部平均親水性（取決於其相鄰 胺基酸之親水性）與其免疫原性及抗原結合或免疫原性（亦 即與該蛋白質之生物性質）有關。 已賦予此等胺基酸殘基以下親水性值：精胺酸（+3.0); 離胺酸（+3.0);天冬胺酸（+3.0±1);麩胺酸（+3.0±1);絲胺 酸（+0.3);天冬醯胺（+0.2);麩醯胺酸（+0.2);甘胺酸（〇); 蘇胺酸（-0.4);脯胺酸（-〇·5±1);丙胺酸（-0.5);組胺酸 (-0.5);半胱胺酸（-1.0);曱硫胺酸（-1.3);纈胺酸（_ι.5); 白胺酸（-1.8);異白胺酸（-1.8);酪胺酸（-2.3);苯丙胺酸 (-2.5)及色胺酸（·3.4)。在基於類似親水性值作出變化時， 在某些實施例中，納入親水性值在±2内之胺基酸的取代， 在其他實施例中，納入在± 1内之彼等胺基酸，且在其他實施 151613.doc •54· 201121567 例中，納入在士0·5内之彼等胺基酸。在一些情況下，亦可 基於親水性自一級胺基酸序列鑑別抗原決定基。此等區域 亦稱為「抗原決定基核心區」。 . 例示性保守性胺基酸取代闡述於表4中。 表4 保守性胺基酸取代 殘基 取代 殘基 取代 殘基 取代 殘基 取代 Ala Ser Gin Asn Leu lie、Val Thr Ser Arg Lys Glu Asp Lys Arg、Gin、 Glu Trp Tyr Asn Gin、His Gly Pro Met Leu、lie Tyr Trp ' Phe Asp Glu His Asn、Gin Phe Met、Leu、 Tyr Val lie、Leu Cys Ser lie Leu、Val Ser Thr Thr Ser 殘基=初始殘基，取代=例示性取代 熟習此項技術者將能夠使用熟知技術判定如本文所闡述 之多肽的適合變異體。熟習此項技術者可藉由靶向咸信對 於活性不重要之區域來鑑別分子中可改變而不破壞活性之 適合區域。熟習此項技術者亦將能夠鑑別分子中在類似多 肽中具有保守性之殘基及部分。在其他實施例中，甚至對 於生物活性或對於結構可能重要之區域亦可進行保守性胺 基酸取代而不破壞生物活性或不會不利地影響多肽結構。 另外，熟習此項技術者可回顧鑑別類似多肽中對於活性 或結構重要之殘基的結構-功能研究。鑒於該種比較，可 預測蛋白質中對應於類似蛋白質中對於活性或結構重要之 151613.doc •55· 201121567 胺基酸殘基之胺基酸殘基的重要性。熟習此項技術者可選 擇對該等所預測重要的胺基酸殘基進行化學上類似的胺基 酸取代。 熟習此項技術者亦可與類似多肽之結構相聯繫對三維結 構及胺基酸序列進行分析。鑒於該資訊，熟習此項技術者 可關於抗體之三維結構預測其胺基酸殘基之排列。熟習此 項技術者可選擇不對預測位於蛋白質表面上之胺基酸殘基 作出根本變化，因為該等殘基可能參與與其他分子之重要 相互作用。此外，熟習此項技術者可產生在各所需胺基酸 殘基處含有單一胺基酸取代之測試變異體。接著可使用檢 定針對IL-23活性篩選此等變異體，（參見以下實例）由此得 到關於可改變哪些胺基酸及不可改變哪些胺基酸之資訊。 換言之，基於自該等常規實驗收集之資訊，熟習此項技術 者可容易地判定應避免單獨進行進一步取代或與其他突變 組合進行進一步取代的胺基酸位置。 許多科學出版物已致力於預測二級結構。參見Moult， 1996， Curr. Op. in Biotech. 7:422-427 ; Chou等人，1974, •β/oc/ze/w. 13:222-245，Chou 等人 ’ 1974， 11 3 :211-222 ; Chou等人，1978, Adv. Enzymol. Relat. Areas Λ/ο/· 5/o/. 47:45_148 ; Chou 等人 ’ 1979， 47:251-276 ;及 Chou 等人，1979，乂 26:3 67-384。此外，目前可使用電腦程式幫助預測二級結 構。一種預測二級結構之方法係基於同源性模型化。舉例 而言，序列一致性大於30%或相似性大於40%之兩種多肽 151613.doc •56· 201121567 或蛋白質通常具有類似結構拓撲學。蛋白質結構資料庫 (PDB)之最新發展已使得二級結構之可預測性提高，包括 多狀或蛋白質結構中之潛在摺疊數。參見Holm等人， 1999, iVwc/· 及以· 27:244-247。已表明（Brenner等人， 1997，Cwrr Op. 出〇/· 7:369-376)指定多肽或蛋白質 中存在有限數目的摺疊且一旦解析臨界數目之結構，則結 構預測將會變得顯著更準確。 預測二級結構之其他方法包括「穿線法（threading)」 (Jones, 1997, Curr. 〇pin. Struct. Biol. 7:377-387 ； Sippl# 人，1996，4:15_19)、「輪廓分析（pr〇file analysis)」（Bowie 等人’ 1991，253:i64 i7〇 ;
Gribskov等人’ mo ia 押 183:146 159 ; Gribsk〇v 等人，1987, proc· wai. 5W. 84:4355_4358)及「演化 關聯（eV〇luti〇nary linkage)」（參見 H〇lm，1999，同上；及
Brenner，1997，同上）。 在二貫施例中，進行具有如下作用之胺基酸取代： ⑴降低對蛋白轉之敏感性；（2)降低對氧化之敏感性； (3)改變結合親和力以形成蛋白質複合物；⑷改變配位體 或抗原結合親和力；及/或⑷賦予該等多肽以其他物理化 子或性質或改良該等性質，諸如維持取代區域中之分 子骨^的結構，例如呈片狀或螺旋構形；維持或改變分子 之目標位點處之電荷或疏水性’或維持或改變側鍵之體 積。 舉例而言，可在天然存在之序列中進行單—或多個胺基 151613.doc -57- 201121567 酸取代（在某些實施例中為保守性胺基酸取代）。可在抗體 中位於形成分子間接觸之結構域以外的部分中進行取代。 在該等實施例中’可使用不會實質上改變親本序列之結構 特徵的保守性胺基酸取代（例如不會破壞為親本或原生抗 原結合蛋白之特徵的二級結構之一或多個置換胺基酸）。 業内公認之多肽二級及三級結構的實例描述於以下文獻 中.Proteins， Structures and Molecular Principles (Creighton 編）’ 1984，W. H. New York: Freeman and Company ’ Introduction to Protein Structure (Branden 及 Tooze 編），1991，New York: Garland Publishing ;及 Thornton等人，1 99 1, iVaiwre 354:1 05 ° 其他變異體包括半胱胺酸變異體，其中親本或原生胺基 酸序列中之一或多個半胱胺酸殘基已缺失或經另一胺基酸 (例如絲胺酸）取代。半胱胺酸變異體為適用的，尤其當抗 體（例如）必須再摺疊成生物活性構形時。與原生蛋白質相 比，半胱胺酸變異體可具有較少半胱胺酸殘基，且通常具 有偶數個以使由未配對半胱胺酸引起之相互作用減至最 少〇 所揭示之重鏈及輕鏈可變區及CDR可用於製備含有可特 異性結合於IL-23多肽之抗原結合區的抗原結合蛋白。「抗 原結合區」意謂特異性結合指定抗原之蛋白質或蛋白質之 一部分’諸如含有與抗原相互作用且賦予抗原結合蛋白其 對於目標抗原之特異性及親和力的胺基酸殘基之區域。抗 原結合區可包括一或多個CDR且某些抗原結合區亦包括一 151613.doc -58 - 201121567 或多個「構架」區。舉例而言，表3中所列之一或多個 ⑽可共價或非共價併入分子(例如多肽)中以產生免疫黏 附。免疫黏附可合併CDR作為較大多狀鍵之__部分可使 CDR共價連接於另一多肽鏈，或可非共價合併cdr。cdr 能夠使免疫黏附特異性結合於所關注之特定抗原(例如& 23多肽）。 其他抗原結合蛋白包括基於本文所述之可變區及cdr的 模擬物（例如「肽模擬物」此等類似物可為狀、非狀或 肽與非肽區域之組合。Fauchere，1986，仏叹及以 15:29; Veber及Freidinger，1985, Γ/Λ^ 第 392頁；&Evans 等人，1987,义Md. Chm. 30:1229。結構上類似於治療上 適用之狀的肽模擬物可用於產生類似治療性或預防性作 用。該等化合物通常藉助於電腦化分子模型化來開發。肽 模擬物一般為結構上類似於顯示所需生物活性（諸如結合 IL-23之能力）之抗原結合蛋白的蛋白質，但肽模擬物中一 或多個肽鍵視情況藉由此項技術中熟知之方法置換為選自 例如以下之鍵聯·· -CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH-CH-(順式及反式）、-COCH2-、-CH(OH)CH2-& _CH2SO-。用同 一類型之D -胺基酸系統性取代共同序列之一或多個胺基酸 (例如用D-離胺酸替代L-離胺酸）可在某些實施例中用於產 生更穩疋的蛋白質。另外’包含共同序列或實質上一致的 共同序列變化之限制性肽可藉由此項技術中已知之方法 (Rizo及 Gierasch，1992，3««· 61:387)產生， 例如藉由添加能夠形成使肽環化之分子内二硫橋鍵的内部 151613.doc •59· 201121567 半胱胺酸殘基》 .亦提供本文所述之抗原結合蛋白的衍生物。衍生化之抗 原結合蛋白可包含賦予抗原結合蛋白或片段以所需性質 (諸如在特定用途中半衰期增加）之任何分子或物質。衍生 化之抗原結合蛋白可包含例如可偵測（或標記）部分（例如放 射性、比色、抗原性或酶促分子、可偵測珠粒（諸如磁性 或電子緻密（例如金）珠粒）或結合於另一分子之分子（例如 生物素或抗生蛋白鏈菌素））、治療或診斷部分（例如放射 性、細胞毒性或醫藥活性部分）、或增加抗原結合蛋白對 於特定用途（例如向諸如人類個體之個體投藥，或其他活 體内或活體外用途）之適用性的分子β可用於對抗原辞八 蛋白進行衍生化之分子的實例包括白蛋白（例如人類血清 白蛋白）及聚乙二醇（PEG)。抗原結合蛋白之白蛋白連接型 及聚乙二醇化衍生物可使用此項技術中熟知之技術來製 備。在一實施例中’抗原結合蛋白結合或以其他方式連接 於甲狀腺素轉運蛋白（transthyretin，TTR)或打尺變異體。 TTR或TTR變異體可用例如選自由以下組成之群的化學物 質進行化學修飾：葡聚糖、聚（n_乙烯基吡咯啶酮）、聚乙 二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、 聚氧乙烯化多元醇及聚乙烯醇。 其他衍生物包括IL-23抗原結合蛋白與其他蛋白質戋夕 肽之共價或聚集結合物，諸如藉由表現包合里 夕 。各吳源多肽融合 於IL-23抗原結合蛋白之Ν端或c端的重組融人 σ烫"白。舉例 而言’結合之肽可為異源信號（或前導）多肽 肮（例如酵母α-因 151613.doc -60- 201121567 子前導序列）’或肽（諸如抗原決定基標籤）。含有il 23抗 原、纟。。蛋白之融合蛋白可包含經添加以促進IL-23抗原結 合蛋白之純化或鏗別的肽（例如聚Hisp IL_23抗原結合蛋 白亦可連接於FLAG肽，如H〇pp等人，1988, 6:12〇4及美國專利第5,〇11912號中所述。 FLAG肽具有高度抗原性且提供由特定單株抗體（mAb)可逆 結合之抗原決定基，從而能夠實現對所表現之.重組蛋白的 快速檢定及簡便純化。適用於製備FLag肽融合於指定多 肽之融合蛋白的試劑可購得（Sigma, st L〇uis，M〇)。 含有一或多個IL-23抗原結合蛋白之寡聚物可用作il_23 拮抗劑。寡聚物可呈共價連接或非共價連接之二聚物、三 聚物或更南級寡聚物形式。預期使用包含兩個或兩個以上 IL-23抗原結合蛋白之寡聚物，其中一個實例為均二聚 物。其他寡聚物包括雜二聚物、均三聚物、雜三聚物、均 四聚物、雜四聚物等。亦包括包含經由融合於IL_23抗原 結合蛋白之肽部分之間的共價或非共價相互作用連接之多 個IL-23結合蛋白的寡聚物。該等肽可為肽連接子（間隔 子），或具有促進寡聚合之性質的肽。適合肽連接子包括 美國專利第4,751,180號及第4,935,233號中所述之肽連接 子。白胺酸拉鏈及來源於抗體之某些多肽亦為可促進所連 接IL-23抗原結合蛋白之寡聚合的肽。適合於產生可溶性 寡聚蛋白質之白胺酸拉鏈域的實例描述於WIPO公開案第 WO 94/10308 號；Hoppe 等人，1994，以耶 344:191，及 Fanslow 等人，1994, 6:267- 151613.doc -61 - 201121567 278中。在一種方法中，包含江_23抗原結合蛋白片段或衍 生物融合於白胺酸拉鏈肽之重組融合蛋白可在適合宿主細 胞中表現，且自培養物上清液回收所形成之可溶性寡聚 IL-23抗原結合蛋白片段或衍生物。 該等寡聚物可包含兩至四個IL_23抗原結合蛋白。寡聚 物之IL-23抗原結合蛋白部分可呈任何上述形式，例如變 異體或片段。較佳地，寡聚物包含具有IL_23結合活性之 IL-23抗原結合蛋白。寡聚物可使用來源於免疫球蛋白之 多肽來製備。包含某些異源多肽融合於抗體來源多肽之各 種部分（包括Fc域）的融合蛋白之製備已例如由以下文獻描 述：Ashkenazi 等人，1991， 88:10535 ; Byrn 等人，1990，344:677 ;及
Hollenbaugh 等人，1992 「 Construction 〇f
Immunoglobulin Fusion Proteins j , Current Protocols in
Immunology，增刊4，第 1〇_ΐ9·1-1〇·19·11 頁。 亦包括包含兩個藉由使IL-23抗原結合蛋白融合於抗體 之Fc區所形成之融合蛋白的二聚物。該二聚物可藉由例如 以下步驟製備：將編碼融合蛋白之基因融合物插入適當表 現載體中’在經重組表現載體轉型之宿主細胞中表現基因 融合物，及使所表現之融合蛋白更類似於抗體分子般組 裝，隨後在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以得到二聚物。該 等Fc多肽包括自抗體之fc區得到的多肽之原生及突變蛋白 形式。亦包括含有促進二聚合之鉸鏈區的該等多肽之截短 形式。包含Fc部分之融合蛋白（及由其形成之寡聚物）提供 151613.doc •62· 201121567 藉由以蛋白質A或蛋白質G管柱進行親和層析來進行簡便 純化之優點。WIPO公開案第WO 93/10151號及美國專利第 5,426,048號及第5,262,522號中所述之一種適合的fc多肽為 自人類IgGl抗體之Fc區的N端鉸鏈區延伸至原生c端之單 鏈多肽。另一適用Fc多肽為美國專利第5,457,035號及
Baum等人，1994，乂 13:3992-4001 中所述之Fc突變 蛋白。此突變蛋白之胺基酸序列與WIp〇公開案第w〇 93/10151號中提供之原生Fe序列一致，除了胺基酸19已由 Leu變為Ala,胺基酸20已由Leu變為Glu，且胺基酸22已由 Gly變為Ala以外。突變蛋白展現對於Fc受體之親和力降 低。 糖基化 抗原結合蛋白可具有與天然物種中所見不同或有所改變 之糖基化模式。如此項技術中所已知，糖基化模式可視蛋 白質之序列（例如存在或不存在以下所論述之特定糖基化 胺基酸殘基）或產生蛋白質之宿主細胞或生物體而定。以 下論述特定表現系統。 多肽之糖基化通常為N-連接型或〇_連接型。Ν·連接型係 指碳水化合物部分連接於天冬醯胺殘基之側鏈。三肽序列 天冬醯胺-X-絲胺酸及天冬醯胺_χ_蘇胺酸（其中χ為除脯胺 酸以外之任何胺基酸）為碳水化合物部分與天冬醯胺側鏈 酶促連接之識別序列。因此，多肽中存在任一此等三肽序 列形成潛在糖基化位點^ 連接型糖基化係指糖Ν_乙醯半 乳胺糖、半乳糖或木糖中之一者連接於羥基胺基酸，最通 151613.doc •63- 201121567 常為絲胺酸或蘇胺酸，不過亦可使用5-羥基脯胺酸或5-經 基離胺酸。 向抗原結合蛋白中添加糖基化位點宜藉由改變胺基酸序 列以使得其含有一或多個上述三肽序列來實現（用於Ν·連 接型糖基化位點）。該變化亦可藉由向起始序列中添加一 或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基或用絲胺酸或蘇胺酸殘基進行 取代來進行（用於0-連接型糖基化位點）。出於便利性，抗 原結合蛋白胺基酸序列可經由在DNA層面上進行改變來改 變’尤其藉由使編碼目標多肽之DNA在預選驗基處突變以 使得產生將轉譯為所需胺基酸之密碼子。 另一增加抗原結合蛋白上碳水化合物部分之數目的方法 為使糖苷化學或酶促偶合於蛋白質。此等程序為有利的， 因為其不需要在具有糖基化能力之宿主細胞中產生蛋白質 來進行Ν-連接型及〇_連接型糖基化。視所用之偶合模式而 定，糖可連接於（a)精胺酸及組胺酸；（b)游離羧基；（〇游 離氫硫基，諸如半胱胺酸之氫硫基；（d)游離羥基，諸如絲 胺酸、蘇胺酸或羥基脯胺酸之羥基；芳族殘基，諸如苯 丙胺酸、酪胺酸或色胺酸之芳族殘基；或（f)麵醯胺酸之醯 胺基。此等方法描述於PCT公開案第w〇 87/〇533〇號及 Apiin 及 Wriston，1981，c/?c ☆".細細咖所，第㈣-306頁中。 起始抗原結合蛋白上存在之碳水化合物部分的移除可以 化學方法或以酶促方法f現。化學去糖基化需要使蛋白質 暴露於化合物三氟甲烧績酸或等效化合物。此處理導致除 151613.doc •64· 201121567 了連接糖（N-乙醯葡糖胺或N-乙醯半乳糖胺）以外的大部分 或所有糖裂解，同時保持多肽完整。化學去糖基化由 Hakimuddin等人，1987，259:52及 Edge等人，1981，5/oc/zem· 118:131描述。多肽上之 碳水化合物部分的酶促裂解可如Thotakura等人，1987, Mei/z. 1 38:350所述藉由使用多種内切及外切糖苷 酶來達成。可如Duskin等人，1982，乂 5ζ·ο/. C/zem. 257: 3 1 05所述藉由使用化合物衣黴素（tunicamycin)防止潛在糖 基化位點處之糖基化。衣黴素阻斷蛋白質_N-糖苷鍵之形 成。 因此，態樣包括抗原結合蛋白之糖基化變異體，其中與 親本多肽之胺基酸序列相比，糖基化位點之數目及/或類 型已有所改變。在某些實施例中，與親本多肽相比，抗原 結合蛋白變異體包含更多或更少數目之N-連接型糖基化位 點。消除或改變此序列之取代將防止添加親本多肽中存在 之N-連接型碳水化合物鏈。舉例而言，可藉由使Asn缺失 或藉由用不同胺基酸取代Asn來減少糖基化。抗體通常在 Fc區中具有N_連接型糖基化位點。 標記及效應基團 抗原結合蛋白可包含一或多個標記。術語「標記」或 「標記基團」係指任何可偵測標記。一般而言，標記分成 多種類別，此視對其進行偵測之檢定而定：a)同位素標 5己，其可為放射性或重同位素；b)磁性標記（例如磁性粒 子）；c)氧化還原活性部分；d)光學染料；酶促基團（例如 151613.doc -65- 201121567 辣根過氧化酶、β·半乳糖㈣ ㈣素化基團；及f)由第酶); 決定帛-報導體識別之預定多狀抗原 决疋基（例如白胺酸拉鍵對序列、第二抗體之結合 金屬結合域、抗原決定基標籤等)。在一些實施例中” 記基團經由各種長度之間隔臂偶合於抗原結合蛋 潛在位阻。標記蛋白f之各種方法為此項技術中所已知。 適合標記基團的實例包括（但不限於）以下：放射性同位素 或放射性核種（例如3h 15
N 125 35S、90Υ、99Tc ηιΙη (rhodamine) 化酶、β·半乳糖：g:酶、勞光素酶、驗性峨酸酶）、化學發; 基團、生物素基團，或由第二報導體識別之預定多狀抗乂 決定基（例如白胺酸拉鏈對序列、第二抗體之結合位點 金屬結合域、抗原決定基標籤）。在一些實施例中，標言 基團經由各種長度之間隔臂偶合於抗原結合蛋白以降低2 在位阻。標記蛋白質之各種方法為此項技術中所已知且$ 適當使用。 4)、螢光基團（例如FITC、若丹明 系元素磷光體）、酶促基團（例如辣根過氧 術語「效應基團」意謂偶合於抗原結合蛋白且充當細胞 ·#·性劑之任何基團。適合效應基團的實例為放射性同位素 或放射性核種（例如 3H、14c、15N、35S、9()Y、99Tc、 Π1Ιη、125I、131I)。其他適合基團包括毒素、治療基團或化 學治療基團。適合基團的實例包括刺孢黴素 (calicheamicin)、奥瑞他汀（auristatin)、格爾德徽素 (geldanamycin)及美登素（maytansine)。在一些實施例中， 151613.doc -66· 201121567 效應基團經由各種長度之間隔臂偶合於抗原結合蛋白以降 低潛在位阻。 編碼IL-23抗原結合蛋白之聚核苷酸 亦提供編碼本文所述之抗原結合蛋白或其部分的聚核苦 酸，包括編碼抗體之一條或兩條鏈或其片段、衍生物、突 變蛋白或變異體的聚核苷酸，編碼重鏈可變區或僅之 聚核普酸，足以用作用於鑑別、分析、突變或擴增編碼多 肽之聚核苷酸之雜交探針、PCR引子或序列引子的聚核苷 酸，抑制聚核苷酸表現之反義核酸，及上述之互補序列。 聚核苷酸可為任何長度。其長度可為例如5、1〇、15、 20 、 25 、 30 、 35 、 40 、 45 、 50 、 75 、 85 、 95 、 1〇〇 、 125 、 150 、 175 、 200 、 250 、 300 、 350 、 400 、 450 、 500 、 750 、 1，000、1，500、3,000、5,000個或更多個核酸，包括中間所 有值’及/或其可包含一或多個其他序列（例如調節序列）及/ 或較大聚核苷酸之一部分（例如載體）。聚核苷酸可為單股 或雙股且可包含RNA及/或DNA核酸及其人造變異體（例如 肽核酸）。 編碼某些抗原結合蛋白或其部分（例如全長抗體、重鍵 或輕鍵、可變域或 CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、 CDRL2或CDRL3)之聚核苷酸可自已用IL-23或其免疫原性 片段免疫之小鼠的B細胞分離。聚核苷酸可藉由諸如聚合 酶鏈反應（PCR)之習知程序來分離。噬菌體呈現為可用以 製備抗體之衍生物及其他抗原結合蛋白之已知技術的另一 實例。在一種方法中，作為所關注之抗原結合蛋白之組分 151613.doc -67· 201121567 的多肽在任何適合重組表現系統中表現，且使所表現之多 肽組裝形成抗原結合蛋白分子。亦使用噬菌體呈現經由鍵 改組來獲得具有不同性質之抗原結合蛋白（亦即改變對於 其所結合之抗原的親和力），參見Marks等人，1992, BioTechnology Ί0·.ΊΊ9 〇 由於遺傳密碼子簡併性’所以本文所述之各多肽序列亦 由除彼等所提供者外之許多其他聚核苷酸序列編碼。舉例 而言’本文所提供之重鏈可變域可由聚核苷酸序列犯卩① ΝΟ:32、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、
55、57或59編碼。輕鏈可變域可由聚核苷酸序列SEq ID NO:2、5、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26 或28編碼。一般技術者應瞭解，本申請案由此提供充分書 面描述及編碼各抗原結合蛋白之各簡併核苷酸序列的實 施。 一態樣進一步提供在特定雜交條件下與其他聚核苷酸分 子雜交之聚核苷酸。雜交核酸之方法、影響雜交條件選擇 之基本參數及設計適合條件之指導原則為此項技術中所熟 知。參見例如 Sambrook，Fritsch 及 Maniatis (2001， Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. and
Current Protocols in Molecular Biology，1995, Ausubel等人 編’ John Wiley & Sons，Inc·。如本文所定義，中等嚴格雜 交條件使用含有5χ氣化鈉/檸檬酸鈉（ssc)、〇 5% SDS、 1.0 mM EDTA(pH 8.0)之預洗滌溶液，約5〇〇/〇甲醯胺、 151613.doc -68- 201121567 6XSSC及55t之雜交溫度之雜交緩衝液（或其他類似雜交溶 液，諸如含有約50%甲醯胺之溶液’其中雜交溫度為 42。〇，及6(TC、〇.5xSSC、〇.1% SDS中之洗條條件。嚴格 雜交條件在45°C下在6xSSC中雜交，隨後在6fC下在 (MxSSC'0.2% SDS中洗條―❹次。此外，熟習此項技 術者可操作雜交及/或洗滌條件以增加或降低雜交之嚴格 度以使得包含彼此至少65%、70%、75%、80%、85%、 90。/。、91%、92%、93%、94%、95%、㈣、—、98%或 99 /〇 —致（包括中間所有值;)之核酸序列的聚核苷酸通常保 持彼此雜交。 可藉由在聚核苷酸中進行突變來引入變化，由此導致其 所編碼之多肽（例如抗原結合蛋白或抗原結合蛋白衍生物） 的胺基酸序列發生變化。可使用此項技術中已知之任何技 術來引入突變，諸如定點突變誘發及隨機突變誘發。可表 現突變多肽並根據所需性質進行選擇。突變可引入聚核苷 酸中而不顯著改變其所編碼之多肽的生物活性。舉例而 言，對非必需胺基酸殘基進行取代。或者，一或多個突變 可引入聚核苷酸中，從而選擇性改變其所編碼之多肽的生 物活性。舉例而言，突變可定量或定性地改變生物活性， 諸如增加'降低或消除抗原結合蛋白之活性及改變抗原結 合蛋白之抗原特異性。 另一態樣提供適用作用於偵測核酸序列之引子或雜交探 針的聚核苷酸。聚核苷酸可僅包含編碼全長多肽之核酸序 列之一部分，例如可用作探針或引子之片段，或編碼多肽 151613.doc -69· 201121567 之活性部分（例如IL_23結合部分）的片段。基於核酸序列之 探針可用於偵測核酸或類似核酸，例如編碼多肽之轉錄 物。探針可包含標記基團，例如放射性同位素、螢光化合 物、酶或酶輔因子。該等探針可用於鑑別表現多肽之細 胞。 表現抗原結合蛋白之方法 本文所提供之抗原結合蛋白可藉由許多習知技術中之任 一者來製備。舉例而言’ IL-23抗原結合蛋白可藉由重組 表現系統，使用此項技術中已知之任何技術來產生。參見 例如 Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses，Kennet等人（編）Plenum press，New York (1980);及 Antibodies: A Laboratory Manual，Harlow 及 Lane (編）’ Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold
Spring Harbor, N.Y. (1988) ° 本文亦提供包含至少一種如上文所述之聚核苷酸的呈質 體、表現載體、轉錄或表現卡匣形式之表現系統及構築 體，以及包含該等表現系統或構築體之宿主細胞。如本文 中所使用，「載體」意謂適用於將蛋白質編碼資訊轉移至 宿主細胞中之任何分子或實體（例如核酸、質體、噬菌體 或病毒）。載體之實例包括（但不限於）質體、病毒載體、非 游離型哺乳動物載體及表現載體，例如重組表現載體。表 現載體（諸如重組表現載體）適用於對宿主細胞進行轉型且 含有引導及/或控制（結合宿主細胞）一或多個可操作地連接 於其之異源編碼區之表現的核酸序列。表現構築體可包括 151613.doc -70- 201121567 不限於）¾響或控制轉錄、轉譯及（若存在内含子）影響 可知作地連接於其之編碼區之rna煎接的序列。「可操作 地連接j思謂該術語所應用之組分處於允許其執行其固有 力&之關係中°舉例而t ’載體中「可操作地連接」於蛋 質編碼序列之控制序列（例如啟動子）經排列以使得控制 序列之正常活性引起蛋白質編碼序列轉錄，從而引起所編 碼蛋白質之重組表現。 =一態樣提供其中已引入表現載體（諸如重組表現載體） 俏主、、’田i佰主細胞可為任何原核細胞（例如大腸桿菌 (五.或真核細胞（例如酵母、昆蟲或哺乳動物細胞（例 如CHO細胞））。載體DNA可經由習知轉型或轉染技術引入 原核或真核細胞中。對於哺乳動物細胞之穩定轉染，已知 視所用之表現載體及轉染技術而定，僅一小部分細胞可將 外源DNA整合至其基因組中。為鑑別及選擇此等整合體， 一般將編碼可選擇標記（例如針對對抗生素之抗性）之基因 與所關注之基因一起引入宿主細胞中。較佳可選擇標記包 括賦予針對諸如G418、潮黴素（hygr〇mycin)及甲胺喋呤 (methotrexate)之藥物之抗性者。其中，經所引入之聚核苷 酸穩定轉染的細胞可藉由藥物選擇來鑑別（例如已合併可 選擇標記基因之細胞將存活’而其他細胞死亡）。 抗原結合蛋白可在融合瘤細胞株中（例如特定言之抗體 可在融合瘤中表現）或在除融合瘤以外之細胞株中表現。 編碼抗原結合蛋白之表現構築體可用於轉型哺乳動物、昆 蟲或微生物宿主細胞。轉型可使用用於將聚核苷酸引入宿 151613.doc •71· 201121567 主細胞中之任何已知方法來進行，包括例如將聚核苷酸封 裝於病毒或喔菌體中及藉由此項技術中已知之轉染程序用 構築體轉導宿主細胞，如由美國專利第4,399,216號、第 4,912,040號、第 4,740,461 號、第 4,959,455 號所例示。所 用之最佳轉型程序將視所轉型之宿主細胞類型而定。將異 源聚核苷酸引入哺乳動物細胞中之方法為此項技術所熟 知，且包括（但不限於）葡聚糖介導之轉染、填酸飼沈澱、 凝聚胺（polybrene)介導之轉染、原生質體融合、電穿孔、 聚核苷酸囊封於脂質體中、將核酸與帶正電之脂質混合、 及將DNA直接顯微注射至細胞核中。 重組表現構築體通常包含編碼多肽之聚核苷酸。多肽可 包含以下一或多者：一或多個CDR ’諸如本文所提供之 CDR ;輕鏈可變區；重鏈可變區；輕鏈恆定區；重鏈恆定 區（例如CH1、CH2及/或CH3);及/或IL-23抗原結合蛋白之 另一骨架部分。使用標準連接技術將此等核酸序列插入適 當表現載體中。在一實施例中，重鏈或輕鏈恆定區附接於 本文所提供之重鏈或輕鏈可變區的C端且連接於表現載體 中。通常選擇在所用特定宿主細胞中有功能之載體（亦即 載體與宿主細胞機構相容，從而允許進行基因之擴增及/ 或表現）。在一些實施例中，使用採用利用蛋白質報導體 (諸如二氫葉酸還原酶）進行之蛋白質-片段互補檢定的載體 (參見例如美國專利第6,270,964號）。適合表現載體可購自 例如 Invitrogen Life Technologies (Carlsbad, CA)或 BD Biosciences(San Jose，CA)。其他適用於選殖及表現抗體及 151613.doc -72· 201121567 片 4又之載體包括 Bianchi 及 McGrew，2003，β/oiec/i. 5zoiec/mo/. 5z〇e«g. 84:439-44中所述者。其他適合表現載 體例如論述於MeAoA五W2;；mo/”第185卷（D v Goeddel 編）’ 1990，New York: Academic Press 中。 通常’用於任何宿主細胞中之表現載體將含有用於質體 維持及用於選殖及表現外源性核苷酸序列之序列。在某些 貫施例中’總稱為「側接序列」之該等序列通常將包括一 或多個以下核苷酸序列：啟動子、一或多個強化子序列、 複製起點、轉錄終止序列、含有供者及受者剪接位點之完 整内含子序列、編碼用於多肽分泌之前導序列的序列、核 糖體結合位點、聚腺苷酸化序列、用於插入編碼待表現多 肽之聚核苷酸的多酶切點接頭區域及可選擇標記元件。所 提供之表現載體可自起始載體（諸如市售載體）建構。該等 載體可旎含有或可能不含所有所需側接序列。當本文所述 之一或多個側接序列尚不存在於載體中時，其可個別地獲 得且連接於載體中。用於獲得各側接序列之方法為熟習此 項技術者所熟知。 視情況，載體可含有「標籤」編碼序列，亦即位於 IL-23抗原結合蛋白編碼序列之5，或3，末端的寡核苷酸分 子；該寡核苷酸序列編碼聚His(諸如六ms);或另一「標 籤」，諸如FLAG®、HA(血球凝集素（hemaglutinin)流感病 毒）或myc其中存在針對其之市售抗體。此標籤通常在多 肽表現時融合於多&，且可用作自宿主細胞對iL_23抗原 結合蛋白進行親和純化或彳貞測之方法。親和純化可例如藉 151613.doc -73- 201121567 由管柱層析，使用針對標籤之抗體作為親和基質來實現。 視情況，標籤可隨後藉由各種方法（諸如使用某些肽酶進 行裂解）自經純化之IL-23抗原結合蛋白移除。 側接序列可為同源（亦即來自與宿主細胞相同之物種及/ 或菌株）、異源（亦即來自不同於宿主細胞物種或品系之物 種）、雜交（亦即來自一個以上來源之侧接序列的組合）、合 成或原生序列。因此’側接序列之來源可為任何原核或真 核生物體、任何脊椎動物或無脊椎動物生物體或任何植 物’其限制條件為側接序列在宿主細胞機構中具有功能且 可由宿主細胞機構活化。 適用於載體中之側接序列可藉由此項技術中熟知之若干 方法中的任一者來獲得。通常，適用於本文之側接序列將 已藉由定位及/或藉由限制性核酸内切酶消化預先鑑別且 因此可使用適當限制性核酸内切酶自適當組織來源分離。 在一些情況下，側接序列之完全核苷酸序列可為已知的。 在本文中’側接序列可使用本文所述用於核酸合成或選殖 的方法來合成。 無論已知側接序列之全部抑或僅一部分，其均可使用聚 合酶鏈反應（PCR)及/或藉由用適合探針（諸如來自相同或不 同物種之寡核苷酸及/或側接序列片段）篩選基因組文庫來 獲得。當側接序列不為已知時，含有侧接序列之DNA的片 段可自可含有例如編碼序列或甚至其他基因之較大DNA片 段分離。分離可藉由限制性核酸内切酶消化以產生適當 DNA片段’隨後使用瓊脂糖凝膠純化、Qiagen®管柱層析 151613.doc •74· 201121567 (Qiagen，Chatsworth，CA)或熟習此項技術者已知之其他方 法進行分離來完成。選擇適合酶來實現此目的對於二般技 術者將顯而易知。 複製起點通常為在市面上購得之彼等原核表現載體的一 4分，且該起點幫助載體在宿主細胞中擴增。若所選載體 不含複製起點位點，則其可基於已知序列以化學方法合 成’且連接於載體中。|例而言’來自質體卿叫.
England Biolabs，Beverly，ΜΑ)之複製起點適合於大部分革 蘭氏陰性細菌（gram_negative bacteria)，且各種病毒起點 (例如SV40、多瘤病毒、腺病毒 '水泡性口炎病毒（vsv)或 礼頭狀瘤病毒（諸如HPV或BPV))適用於在哺乳動物細胞中 選殖載體。哺乳動物表現載體一般不需要複製起點組分 (例如通常僅使用SV40起點，因為其亦含有病毒早期啟動 子）。 轉錄終止序列通常位於多肽編碼區末端之3，方向且用以 終止轉錄。通常，原核細胞中之轉錄終止序列為富含G_c 之片段，其後為聚T序列。雖然序列容易自文庫選殖或甚 至作為載體之一部分在市面上購得，但其亦可容易使用核 酸合成方法（諸如本文所述之彼等方法）合成。 可選擇標記基因編碼在選擇性培養基中生長之宿主細胞 之存活及生長所必需之蛋白質。典型選擇標記基因編碼如 下蛋白質：（a)賦予對抗生素或其他毒素（例如用於原核宿 主細胞之安比西林（ampiciUin)、四環素（tetracycHne)或康 黴素（kanamycin))之抗性；（…補充細胞之營養缺陷；或（c) 151613.doc -75- 201121567 供應無法自複合培養基或限定培養基獲得之關鍵營養物。 特定可選擇標記為康黴素抗性基因、安比西林抗性基因及 四環素抗性基因。有利的是，新黴素（n_yein)抗性基因 亦可用於原核與真核宿主細胞中之選擇。 其他可選擇基因可用於擴增將表現之基因1增為使產 生對於生長或細胞存活關鍵之蛋白質所需之基因在連續數 代重組細胞之染色體中串聯重複的過程。適合於哺乳動物 細胞之可選擇標記的實例包括二氫葉酸還原酶⑴及 無啟動子胸苷激酶基因。將哺乳動物細胞轉型體置於選擇 壓力下，其中由於載體中存在可選擇基因而使僅轉型體唯 一適應得以存活。藉由在培養基中選擇藥劑之濃度逐次增 加的條件下培養轉型細胞來施加選擇壓力，從而引起可選 擇基因與編碼另一基因（諸如結合於IL-23之抗原結合蛋白） 之DNA均發生擴增。因此，由擴增之DNA合成數量增加之 多肽（諸如抗原結合蛋白）。 核糖體結合位點通常為rnRNA之轉譯啟始所必需且特徵 為Shine-Dalgamo序列（原核生物）或K〇zak序列（真核生 物）。該元件通常位於啟動子之3,方向及待表現多肽之編碼 序列的5'方向。 在一些情況下，諸如當真核宿主細胞表現系統中需要糖 基化時’可操作各種前序列或原序列來改良糖基化或產 量。舉例而言，可改變特定信號肽之肽酶裂解位點，或添 加原序列’其亦可能會影響糖基化。最終蛋白質產物可能 在-1位置（相對於成熟蛋白質之第一胺基酸）具有一或多個 151613.doc -76 - 201121567 附帶表現之額外胺基酸’其可能尚未完全移除。舉例而 言’最終蛋白質產物可具有在肽酶裂解位點中所發現之一 或兩個胺基酸殘基連接於胺基端。或者，使用一些酶裂解 位點可tb產生所需多肽之稍微截短的形式，若該酶在成熟 多肽中之該區域切割。 表現及選殖通常將含有由宿主生物體識別且可操作地連 接於編碼IL-23抗原結合蛋白之分子的啟動子。啟動子為 位於結構基因起始密碼子之上游（亦即5，）的非轉錄序列（一 般在約100至1〇〇〇 bp内），其控制該結構基因之轉錄。啟動 子通常分成兩類：誘導性啟動子及組成性啟動子。誘導性 啟動子回應於培養條件之一些變化（諸如存在或不存在營 養物或溫度變化）引發在其控制下自DNA之轉錄量增加。 另一方面，組成性啟動子均一地轉錄其可操作地連接之基 因，亦即對基因表現之控制極小或無控制。由多種潛在宿 主細胞識別之許多啟動子為熟知的。藉由使用限制酶消化 自來源DNA移除啟動子並將所需啟動子序列插入載體中來 使適合啟動子可操作地連接於編碼IL_23抗原結合蛋白之 重鏈可變區或輕鏈可變區的DNA。 適用於酵母宿主之啟動子亦為此項技術中所熟知。酵母 強化子宜與酵母啟動子一起使用。適合用於哺乳動物宿主 細胞之啟動子為熟知的且包括（但不限於）自以下病毒基因 ’、且獲彳于之彼·#啟動子：諸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒 (諸如腺病毒2)、牛乳頭狀瘤病毒、禽肉瘤病毒、細胞巨大 病毒、反轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿猴病毒4〇(8¥4〇)。 151613.doc •77· 201121567 其他適合哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子，例如 熱休克啟動子及肌動蛋白啟動子。 可能受到關注之其他啟動子包括（但不限於）：SV40早期 啟動子（Benoist及 Chambon，1981, Nature 290:304-310)； CMV啟動子（Thornsen等人，1984，/Voc. iWj//. t/U. 81:659-663);勞斯肉瘤病毒（Rous sarcoma virus)之 3'長末 端重複序列中所含的啟動子（Yamamoto等人，1980，Ce// 22:787-797);疱疹胸苷激酶啟動子（Wagner等人，1981， Prop. iVa". Jcad 5W. t/U. 78:1444-1445);來自金屬硫 蛋白基因之啟動子及調節序列（Prinster等人，1982, iWziwre 296:39-42);及原核啟動子，諸如β-内醯胺酶啟動子（Villa-Kamaroff 等人，\9Ί、Proc. Natl, Acad. Sci, U.S.A, 75:3727-3731);或 tac啟動子（DeBoer 等人，1983，iVoc. iVa". dcac/. *Scz·· C/U. 80:21-25)。亦關注以下動物轉錄控 制區，其展現組織特異性且已在轉殖基因動物中使用：在 胰臟腺泡細胞中具有活性之彈性蛋白酶I基因控制區（Swift 等人 ’ 1984，Ce// 38:639-646 ; Ornitz等人，1986，Co/i/ Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409 ； MacDonald, 1987，T/epaio/og;; 7:425-515);在胰臟β細胞中具有活性之 胰島素基因控制區（Hanahan，1985，iVaiwre 315:115-122); 在淋巴細胞中具有活性之免疫球蛋白基因控制區 (Grosschedl等人，1984，Ce// 38:647-658 ; Adames等人， 1985, JVaiwre 318:533-538 ; Alexander等人，1987，Mo/. CW/. 5ζ’σ/· 7:1436-1444);在睾丸、乳房、淋巴及肥大細胞 151613.doc -78- 201121567 中具有活性之小鼠乳腺瘤病毒控制區（Leder等人，1986, CW/ 45:485-495);在肝中具有活性之白蛋白基因控制區 (Pinkert等人，1987，1 :268-276);在肝 t具有活性之α-胎蛋白基因控制區（Krumlauf等人，1985, Μσ/· CW/· 5/〇/· 5:1639-1648 ; Hammer等人，1987， 253:53-5 8);在肝中具有活性之αΐ-抗胰蛋白酶基因控制區 (Kelsey等人 ’ 1987, Genes and Deve/. 1:161-171);在骨髓 細胞中具有活性之β-血球蛋白基因控制區（Mogram等人， 1985, iVaiwre 3 15:338-340 ; Kollias等人，1986, Ce// 46:89- 94);在腦中之寡樹突神經膠質細胞中具有活性之髓鞘鹼 性蛋白基因控制區（Readhead等人，1987, Ο// 48:703-712)，在骨骼肌中具有活性之肌凝蛋白輕鏈·2基因控制區 (Sani，1985, 314:283-286);及在下視丘中具有活性 之促性腺釋放激素基因控制區（Mason等人，1986， 234:1372-1378)。 可在載體中插入強化子序列以增加高等真核生物之轉 錄。強化子為DNA之順式作用元件，通常長度為約1〇_3〇〇 bp，其作用於啟動子以增加轉錄。強化子相對不依賴於取 向及位置，已發現其位於轉錄單元之5，與3，方向的位置。 可自哺乳動物基因獲得之若干個強化子序列為已知的(例 如血球蛋白、彈性蛋㈣、白蛋白、&胎蛋白及胰島 素)。然而，通常使用來自病毒之強化子。此項技術中已 知之SV40強化子、細胞巨大病毒早期啟動子強化子、多瘤 病毒強化子及腺病毒強化子為用於活化真核啟動子之例示 151613.doc -79- 201121567 性強化元件。當強化子可位於載體中編碼序列之5'或3'方 向時，其通常位於啟動子5'之位點。編碼適當原生或異源 信號序列（前導序列或信號肽）之序列可併入表現載體中以 促進抗體之細胞外分泌。信號肽或前導序列之選擇視待產 生抗體之宿主細胞的類型而定，且異源信號序列可置換原 生信號序列。在哺乳動物宿主細胞中具有功能之信號肽的 實例包括以下：美國專利第4,965,195號中所述之介白素·7 的信號序列；Cosman等人，1984, iVaiwre 312:768中所述之 介白素-2受體的信號序列；EP專利第0367 566號中所述之 介白素-4受體信號肽；美國專利第4,968,607號中所述之I 型介白素-1受體信號肽；EP專利第〇 460 846號中所述之Π 型介白素-1受體信號肽》 已建構載體後’可將完成之載體插入適合於擴增及/或 多肽表現之宿主細胞中。將抗原結合蛋白之表現載體轉型 至所選宿主細胞中可藉由熟知方法完成，包括轉染、感 染、磷酸鈣共沈澱、電穿孔、顯微注射、脂質轉染法、 DEAE-葡聚糖介導之轉染或其他已知技術。所選方法將部 分與待使用之宿主細胞類型有關。此等方法及其他適合方 法為熟習此項技術者所熟知，且陳述於例如Sambr〇〇k# 乂，M〇lecular Cloning: A Lab〇rat〇ry M刪ai，第 3版，
Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)中。 宿主細胞在適當條件下培養時合成蛋白質，隨後該蛋白 質可自培養基收集（若宿主細胞將其分泌於培養基中）或直 151613.doc •80· 201121567 接自產生其之宿主細胞收集（若其未分泌適當宿主細胞 之選擇將視各種因素而定，諸如所需表現量、活性所需或 必需之多肽修飾（諸如糖基化或磷酸化）及摺疊成生物活性 分子之容易性。 可獲得用作表現宿主的哺乳動物細胞株為此項技術中所 熟知且包括（但不限於）購自美國菌種保存中心（American
Type Culture Collection，ATCC)之永生化細胞株，包括（但 不限於）中國倉鼠印巢（CHO)細胞、海拉細胞（HeLa ceU)、 幼倉鼠腎（BHK)細胞、猴腎細胞（c〇s)、人類肝細胞癌細 胞（例如Hep G2)及許多其他細胞株。在某些實施例中，可 經由判定哪些細胞株具有高表現量且組成性產生具有IL_ 23結合性質之抗原結合蛋白來選擇細胞株。在另一實施例 中，亦可選擇來自不產生自身抗體但具有產生及分泌異源 抗體之能力的B細胞譜系之細胞株。 人類IL-23抗原結合蛋白用於診斷及治療目的之用途 抗原結合蛋白適用於偵測生物樣品中之IL_23及鑑別產 生IL-23之細胞或組織。特異性結合於IL_23之抗原結合蛋 白可用於診斷及/或治療有需要之患者的與IL_23有關之疾 病。舉例而言，IL-23抗原結合蛋白可用於診斷檢定，例 如債測及/或定量金液、血清、細胞或組織中所表現之 23的結合檢定》另外’ IL_23抗原結合蛋白可用於降低、 抑制、干擾或調節細胞或組織中之IL-23的一或多種生物 /舌比。因此，結合於IL - 2 3之抗原結合蛋白在改善與I l _ 2 3 有關之疾病方面可具有治療用途。 151613.doc •81· 201121567 適應症 本發明亦係關於IL_23抗原結合蛋白用於預防或治療性 處理醫學病症（諸如本文所揭示之彼等病症）之用途。il_23 抗原結合蛋白適用於治療IL_23與基礎疾病或病症相關或 在造成基礎疾病或病症中起作用或在其他方面造成負面症 狀之多種病狀。 IL-23抗原結合蛋白可有效治療之病狀在發炎性反應中 起作用。該等發炎性病症包括牙周疾病；肺部病症，諸如 哮喘；皮膚病症，諸如牛皮癣、異位性皮膚炎、接觸性皮 膚炎；風濕性病症，諸如類風濕性關節炎、進行性全身性 硬化症（硬皮病）；全身性紅斑狼瘡；脊椎關節病，包括僵 直性脊椎炎、牛皮癬性關節炎、腸病性關節炎及反應性關 節炎。亦涵蓋葡萄膜炎，包括福格特-小柳-原田氏病 (Vogt-Koyanagi-Harada disease)、特發性前葡萄膜炎及後 葡萄膜炎、及與脊椎關節炎相關之葡萄膜炎。亦涵蓋使用 IL-23抗原結合蛋白治療自體免疫性病症，包括多發性硬 化症，自體免疫性心肌炎，·第丨型糖尿病及自體免疫性甲 狀腺炎。 腸胃系統之退化性病狀可用IL_23抗原結合蛋白來治療 或預防。該等腸胃病症包括發炎性腸病：克羅恩氏病、潰 瘍性結腸炎及乳糜瀉。 亦包括使用IL-23抗原結合蛋白來治療移植物抗宿主疾 病及併發症，諸如由實體器官移植引起之移植物排斥反 應，諸如心臟、肝、皮膚、腎、肺或其他移植物，包括骨 151613.doc -82 - 201121567 趙移植物。 本文亦提供使用IL-23抗原結合蛋白治療各種腫瘤病症 之方法’該等病症包括各種形式之癌症，包括結腸癌、胃 癌、前列腺癌、腎細胞癌、子宮頸癌及卵巢癌以及肺癌 (SCLC及NSCLC)。亦包括實體腫瘤，包括肉瘤、骨肉瘤及 癌瘤，諸如腺癌及鱗狀細胞癌、食管癌、胃癌、膽囊癌、 白血病（包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、骨 聽白血病、慢性或急性淋巴母細胞性白血病及毛細胞白血 病）及多發性骨髓瘤。 診斷方法 所述抗原結合蛋白可出於診斷目的用於偵測、診斷或監 測與IL-23相關之疾病及/或病狀。適用於偵測IL23存在之 方法的貫例包括免疫檢定，諸如酶聯免疫吸附檢定 (ELISA)及放射免疫檢定（RIA)。 對於診斷應用，通常以可偵測標記基團對抗原結合蛋白 進行標δ己。適合標§己基團的貧例包括（但不限於）以下：放 射性同位素或放射性核種（例如3H、14c、15ν、35s、90γ、 99Tc、ηιΙη、125I、131I)、螢光基團（例如 FITC、若丹明、 鑭系元素磷光體）、酶促基團（例如辣根過氧化酶、卜半乳 糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶）、化學發光基團、生物 素基團，或由第二報導體識別之預定多肽抗原決定基（例 如白胺酸拉鏈對序列、第二抗體之結合位點、金屬結合 域、抗原決定基標籤）。在一些實施例中，標記基團經由 各種長度之間隔臂偶合於抗原結合蛋白以降低潛在位阻。 151613.doc -83- 201121567 標記蛋白質之各種方法為此項技術中所已知且可使用。 提供鑑別表現IL-23之細胞的其他診斷方法。在一特定
實施例中，用標記基團標記抗原結合蛋白且偵測經標記抗 原結合蛋白與IL-23之結合。在另一特定實施例中，活體 内偵測抗原結合蛋白與IL-23之結合。在另一特定實施例 中’分離IL-23抗原結合蛋白且使用此項技術中已知之技 術進行量測。參見例如//ar/ow及1988，J
Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (1991^-編及定期增刊）；Joh五編，1993， 尸⑼oco/i New Y〇rk: J〇hn WUey & s〇ns 〇 提供偵測與所提供之抗原結合蛋白競爭結合於比_23之 測試分子之存在的其他方法。一種該檢定之一實例涉及在 存在或不存在測試分子下偵測含有一定量之比23的溶液 中游離抗原結合蛋白之量。游離抗原結合蛋白(亦即未結 合於IL-23之抗原結合蛋白)之量增加將指示測試分子能夠 與抗原結合蛋白競爭IL·23結合。在-實施例中，用標記 基團標記抗原結合蛋白。充土 口赏曰或者’對測試分子進行標記且在 子在及不存在抗原結合蛋白下監測游離測試分子之量。 治療方法：醫藥調配物、投藥途徑 提供包含治療有效量$ 之—種或多種抗原結合蛋白及醫藥 学上了接受之賦形劑、蘇雜杰 ^ Μ 7X釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、 防腐劑及/或佐劑的醫藥 藥组'… 物。另外，包括投與該等醫 樂組合物來治療患者之 ^ 0 Γ .. ^ 去。術語「患者」包括人類患 者術浯「治療」涵蓋減輕 4預防病症之至少一種症狀或 151613.doc •84· 201121567 其他態樣，或降低疾病嚴重程度，及其類似作用。術語 「治療有效量」或「有效量」係指所測定之IL-23抗原結 合蛋白在哺乳動物體内產生任何治療反應的量。該等治療 有效量容易由此技術中一般技術者確定。 杬原結合蛋白無需影響完全治癒，或根除疾病之每種症 狀或表現，即構成可行治療劑。如相關領域中所認知，用 作治療劑之藥物可降低指定疾病病況之嚴重程度，而無需 消除疾病之每種表現，即視為適用治療劑。類似地，預防 性投與治療無需完全有效地預防病狀發作，即構成可行預 防劑。僅降低疾病影響（例如藉由降低其症狀之數目或嚴 重程度’或藉由增加另一治療之有效性，或藉由產生另— 有益作用）或降低個體疾病發生或惡化之可能性即足夠。 本文所提供之某些方法包含向患者投與IL_23拮抗劑（諸如 本文所揭示之抗原結合蛋白)足以誘導反映特定病症嚴重 程度之指標相對於基線持續改善的量及時間。 如相關領域中所瞭解，以適合適應症之方式向患者投盘 包含本發明分子的㈣組合物L合物可藉由任何適 合技術投與，包括（但不限於）非經腸、局部或吸入。若注 射，則醫藥組合物可例如經由關節内、靜脈内、肌肉内： 腹膜内或皮下途徑’藉由快速注射伽心 m声叫或連續輸注投與。涵蓋局部投藥（例如在疾病或 損傷部位），亦涵蓋經皮傳遞及自植人物持續釋放。藉由 吸入傳遞包括例如經鼻或經口吸入、使用霧化器、 溶膠形式之拮抗劑，及其類似方式。其他#代方式包括滴 151613.doc •85- 201121567 眼劑；口服製劑，包括丸劑、糖漿、含片（丨〇zenges)或口 嚼鍵；及局部製劑’諸如洗劑、凝膠、喷霧及軟膏。 亦涵蓋在離體程序中使用抗原結合蛋白。舉例而言，可 使患者之血液或其他體液與結合IL_23之抗原結合蛋白離 體接觸。抗原結合蛋白可結合於適合之不溶性基質或固體 支樓材料。 抗原結合蛋白宜以包含一或多種其他組分（諸如生理上 可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑）之組合物形式投與。視 情況’該組合物另外包含一或多種生理活性劑以用於組合 療法。醫藥組合物可包含IL 23抗原結合蛋白以及一或多 種選自由以下組成之群的物質：緩衝劑、抗氧化劑（諸如 抗壞血酸）、低分子量多肽（諸如少於ίο個胺基酸之彼等多 肽）、蛋白質、胺基酸、碳水化合物（諸如葡萄糖、蔗糖或 糊精）、螯合劑（諸如EDTA)、麩胱甘肽、穩定劑及賦形 劑中丨生緩衝生理食鹽水或與同種血清白蛋白混合之生理 食鹽水為適當稀釋劑之實例。根據適當工業標準，亦可添 加諸如苯甲醇之防腐劑。組合物可使用適當賦形劑溶液 (例如嚴糖）作為稀釋劑來調配成康乾物。適合組分在所用 之劑1及濃度下對接受者無毒性。可用於醫藥調配物中之 ，、且刀的其他實例提供於Remingt〇n，s Pharmaceuticai ciences，包括第 21 版（2〇〇5)，Mack Publishing Company， Easton，PA 中。 醫學從業者使用之套組包括IL-23抗原結合蛋白及關於 在治療本文所論述之任何病狀中使用的標籤或其他說明。 151613.doc •86· 201121567 在一實施例中，該套組包括一或多種IL-23結合抗原結合 蛋白之無菌製劑，其可呈如以上所揭示之組合物形式且 可存在於一或多個小瓶中。 投藥之劑量及頻率可根據以下因素來改變：諸如投藥途 位所用之特疋抗原結合蛋白、待治療疾病之性質及^重 程度、病狀為急性抑或慢性、及個體之體型及—般狀況。 適當劑量可藉由相關技術中已知之程序來確定，例如在可 涉及劑量遞增研究之臨床試驗中確定。 典型劑量視上文所提及之因素而定可在約〇1 pg/kg至約 3〇 mg/kg或更大之範圍内。在特定實施例中，劑量可在 Kg/kg至約30 mg/kg、視情況i gg/kg至約3〇 mg/kg、視情況 1〇 Kg/kg至約1〇 mg/kg、視情況約〇」111§/]^至5 mg/kg或視 情況約0.3 mg/kg至3 mg/kg之範圍内。 給藥頻率將視所用調配物中特定人類IL_23抗原結合蛋 白之藥物動力學參數而定。臨床醫師通常投與組合物直至 達到達成所需作用之劑量。因此，組合物可隨時間以單次 劑置或以兩次或兩次以上劑量（其可能含有或可能不含相 同置之所需分子）投與，或經由植入裝置或導管以連續輸 /主形式投與。適當劑量可經由使用適當劑量-反應資料來 確疋本發明之IL-23抗原結合蛋白可例如在一段時間内 以規律時間間隔投與例如一次或超過一次。在特定實施例 中，投與IL-23抗原結合蛋白持續至少一個月或更長時 間，例如持續一個月、兩個月或三個月或甚至無限期投 與。對於治療慢性病狀，長期治療一般最有效。然而，對 15I6I3.doc -87· 201121567 :治：：性二病狀’較短期投藥(例如一至六週)可能即足 般而。杈與抗原結合蛋白直至患者關於所選指標 相對於基線表現出醫學上相關程度之改善。 λ在足以誘導至少—種反映所治療病症之嚴重程度之 s標之改善（較佳為持續改善）的量及時間下向患者投與I l _ 原° σ蛋白。可评估反映患者疾病或病狀程度之各種 指標以判定治療之量及時間是否足夠。該等指標包括例如 戶^病症^疾病嚴重程度、症狀或表現之臨床上認可的指 貫施例中，若個體顯示間隔兩至四週出現至少兩 2改善’則改善視為持續改善。改善程度-般由醫師判 定，該醫師可基於徵死、症狀、活組織檢查或其他測試結 果來作出此判疋，且該醫師亦可利用給予個體之調查表， 諸如開發用於指定疾病之生活品質調查表。 本發明之方法及組合物的特定實施例涉及使用辽_23抗 原結合蛋白及一或多種其他IL_23拮抗劑，例如兩種或兩 種以上本發明之抗原結合蛋白，或本發明之抗原結合蛋白 及或夕種其他IL-23拮抗劑。亦提供單獨投與或與適用 於^療患者所患病狀之其他藥劑組合投與之IL_23抗原結 合蛋白。該等藥劑之實例包括蛋白質性與非蛋白質性藥 物。6亥·#藥劑包括具有消炎性質之治療性部分（例如非類 固醇消炎劑、類固醇、免疫調節劑及/或其他細胞激素抑 制劑，諸如拮抗例如 IFN-γ、GM-CSF、IL-6、IL-8、IL-17、IL-22及TNF之彼等抑制劑），*IL-23抗原結合蛋白之 治療性部分及一或多種其他治療（例如手術、超音波或有 151613.doc • 88 · 201121567 效減少炎症之治療）。當共投與多種治療劑時，可適當地 調整劑量’如相關技術中所公認或已知。可與IL_23抗原 結合蛋白組合之適用藥劑包括用於治療例如克羅恩氏病或 潰瘍性結腸炎之彼等藥劑，諸如胺基水楊酸鹽（例如美沙 胺（mesalamine));皮質類固醇（包括潑尼松（predis〇ne)); 抗生素，諸如曱ί肖健β坐（metr〇nidaz〇ie)或環丙沙星 (ciprofloxacin^或適用於治療例如罹患瘺管病之患者的其 他抗生素），及免疫抑制劑，諸如硫唑嘌呤（azathi〇prine)、 6-酼基嘌呤、甲胺喋呤、他克莫司（taer〇iimus)及環孢靈 (cyclosporine)。該或該等藥劑可經口投與或藉由另一途徑 投與，例如經由栓劑或灌腸劑投與。可與比_23結合蛋白 組合治療牛皮癬之藥劑包括局部或全身使用之皮質類固 醇、鈣泊三醇（calcipotriene)及其他維生素D衍生物、阿維 A脂（acetretin)及其他視黃酸衍生物、甲胺喋呤、他克莫司 及環抱靈。該等藥劑可同時、連續 '交替或根據使得總體 治療過程有效之任何其他方案來投與。 除人類患者外’ IL-23抗原結合蛋白亦適用於治療非人 類動物，諸如家養寵物（犬、； 、貓、鳥 '靈長類動物等）、家
合蛋白（較佳由自來源於接受者物種 1; 5-12 mg/m2。對於小 4 mg/kg。IL-23抗原結 之基因建構）藉由注射 151613.doc •89· 201121567 或其他適合途徑每週投與一或多次直至動物病狀得到改 善，或其可無限期投與。 以下實例（包括所進行之實驗及所達成之結果）僅出於說 明性目的提供且不應理解為限制隨附申請專利範圍之範 疇。 實例 實例1 產生人類IL-23抗體 使用 XenoMouseTM技術（Amgen, Thousand Oaks，CA)來開 發識別及抑制原生人類IL-23活性而不破壞人類IL-12之人 類單株抗體。該等抗體亦識別及抑制重組獼猴IL-23，但 不識別鼠類或大鼠IL-23。 使用下文所述之STAT-螢光素酶報導體檢定選擇識別及 完全抑制自人類單核細胞衍生之樹突狀細胞（MoDC)獲得 的原生人類IL-23之抗體。使用陰性選擇自來自健康供者 之周邊血液單核細胞分離人類單核細胞（單核細胞分離套 組II，Miltenyi Biotec，Auburn, CA)。藉由將單核細胞與人 類 GM-CSF(50 ng/ml)及人類 IL-4(100 ng/ml)—起在含有 10%胎牛血清完全培養基之RPMI 1640中培養7天來產生 MoDC。接著用PBS洗滌MoDC兩次，隨後再用人類 CD40L(1 pg/ml)刺激48小時。經CD40L刺激之MoDC上清 液含有 IL-23、IL-12 及 IL-12/23p40。使用 ELISA 測定 IL-12p70(R&D System, Minneapolis, MN) 、 IL-23
(eBiosciences, San Diego, CA)及 IL-12/23p40(R&D 151613.doc -90- 201121567
Systems)之量。STAT-螢光素酶檢定對^]有反應而對IL-12或游離IL-12/23p40無反應，因此可將檢定用於粗上清液 以評估IL-23活性。對於在下文所述之nk細胞檢定中使 用，相繼使用IL-23親和管柱及尺寸排阻層析來純化原生 人類IL-23粗上清液。使用il-23特異性ELISA (eBiosciences)測定濃度。 亦在STAT-螢光素酶檢定中針對重組人類（rhu)IL-23及重 組獼猴（cyno)IL-23測試經純化之抗體上清液。在完全抑制 重組人類IL-23之所測試抗體中，僅一半彼等抗體識別及 完全抑制原生人類IL-23 »識別及完全抑制重組人類IL-23 並不預示識別及完全抑制原生人類IL-23，亦與其無關。 如完全抑制重組人類IL-23之抗體上清液的圖1A及1B中所 示’僅一半彼等抗體完全抑制原生人類IL-23 »選擇識別 及完全抑制原生人類IL-23之彼等抗體進行進一步表徵。 實例2 功能檢定 a)STAT-螢光素酶檢定 已知IL-23結合其雜二聚受體且經由JAK2及Tyk2進行信 號傳導來活化STAT 1、3、4及5。在此檢定中，使用經 STAT/螢光素酶報導基因轉染之細胞來評估IL-23抗體抑制 IL-23誘導之生物活性的能力。 用STAT-螢光素酶報導體短暫轉染表現人類IL-23受體之 中國倉鼠卵細胞隔夜。在96孔板中連續稀釋IL-23抗體（以 37.5 pg/ml開始，12個點的1:4連續稀釋液）。原生人類IL-23 151613.doc •91 - 201121567 (製備方法描述於實例1中）添加至各孔中至2 ng/ml之濃度 並在室溫下培育15-20分鐘。添加經短暫轉染之細胞（8χ103 個細胞）至每孔100 μΐ之最終體積且在37°C、10% C02下培 育5小時。培育後，在室溫下使用每孔100 pL Glo溶解緩衝 液（lx)(Promega，Madison，Wisconsin)溶解細胞5分鐘。將 50微升細胞溶解產物與50 μι Bright-Glo螢光素酶受質 (Promega) —起添加至96孔板中且在光度計上讀取。 統計分析可使用GraphPad PRISM軟體（GraphPad Software, La Jolla, CA)進行。結果可表述為平均值士標準 偏差（SD)。 如在表5中可見，所有IL-23抗體均以劑量依賴性方式有 效且完全抑制原生人類IL-23誘導之STAT/螢光素酶報導 體。抗體亦有效且完全抑制重組人類（rhu)IL-23及重組獼 猴（cyno)IL-23。抗體之IC5〇值均在微微莫耳濃度範圍内。 表5. STAT-螢光素酶檢定中IL-23抗體之平均IC5G(pM)值 的表格。 原生 huIL-23 rhuIL-23 Cyno IL-23 抗體 ICs〇+/-SD 重複次數 IC50+/-SD 重複次數 IC50+/-SD 重複次數 A 114+/-70 3 190+/-99 3 379+/-213 3 B 45+/-5 4 100+/-59 4 130+/-60 3 C 107+/-31 3 211+/-93 3 376+/-89 3 D 65+/-5 3 107+/-30 3 184+/-77 3 E 140+/-52 3 142+/-52 3 188+/-59 3 F 86+/-47 4 187+/-116 4 366+/-219 4 G 156+/-74 5 296+/-133 5 421+/-174 5 Η 192+/-35 4 253+/-184 4 1024+/-533 4 151613.doc -92- 201121567 I 208+/-33 3 338+/-140 3 650+/-42 3 J 83+/-54 2 36+/-6 2 56+/-2 2 K 71+/-38 3 43+/-20 3 61+/-10 3 L 113+/-80 3 23+/-7 3 47+/-1 3 Μ 34+/-11 2 40+/-8 2 56+/-6 2 Ν 361+/-164 3 145 1 238 1 b)NK細胞檢定 已知IL-23作用於天然殺手細胞以誘導促發炎細胞激素 (諸如干擾素γ(ΙΡΝγ))之表現。在此檢定中，使用人類初級 天然殺手（ΝΚ)細胞來評估在表現人類il-23之原生受體的 細胞中IL-23抗體抑制IL-23誘導之IFNy活性的能力。 經由陰性選擇自多個人類供者分離NK細胞（NK細胞分離 套組’ Miltenyi Biotec，Auburn, CA)。將經純化之NK細胞 (每毫升1χ1〇6個細胞）添加至6孔板中之補充有重組人類11^-2(10 ng/ml，R&D Systems, Minneapolis，ΜΝ)的 RPMI 1640 加10%胎牛血清完全培養基中至每孔10 ml之最終體積。在 37°C、5% C02下培養細胞7天。接著在IL-23抗體之連續稀 釋液（以3 pg/ml開始，11個點的1:3連續稀釋液）存在下用 rhuIL-23 或 cyno IL-23(10 ng/ml)及重組人類 IL-18(20 ng/ml，R&D Systems, Minneapolis，MN)刺激經IL-2活化之 NK細胞24小時。根據製造商之說明，藉由IFNY ELISA (R&D Systems，Minneapolis, MN)量測上清液中之 IFNy含 量。 統計分析可使用GraphPadPRISM軟體進行。結果可表述 為平均值±標準偏差（SD)。 151613.doc -93- 201121567 如在表6中可見，所有抗體均以劑量依賴性方式有效抑 制NK細胞中之rhuIL-23及cyno IL-23誘導之IFNy表現。抗 體之IC5〇值均在微微莫耳濃度範圍内。使用原生人類IL-23(30 pg/ml，製備方法描述於實例1中）及rhuIL-18(40 ng/m卜R&D Systems)對抗體子集進行檢定且得到表6中所 示之結果。與對IL-23特異性抗體之選擇一致，使用上述 檢定，此等抗IL-23抗體對NK細胞中之IL-12刺激之IFNy產 生無影響，而IL-12p35特異性中和抗體mAb219(R&D Systems，Minneapolis，MN)有效抑制重組人類 IL-12。 表6. NK細胞檢定中IL-23抗體之平均IC5Q(pM)值的表 格。 原生 huIL-23 rhuIL-23 Cyno IL-23 抗體 IC50+/-SD 重複次數 ICs〇+/-SD 重複次數 IC50+/-SD 重複次數 A 42+/-12 2 31+/-21 2 B 85+/-30 2 48+/-30 3 19+/-8 2 C 32+/-19 4 29+/-16 2 D 37+/-21 2 29+/-19 2 E 158+/-50 2 57+/-14 3 21+/-3 2 F 25+/-15 2 21+/-17 2 G 152+/-72 2 45+/-30 3 23+/-8 2 Η 29+/-28 2 33+/-17 2 I 69 1 52 1 J 4+/-3 2 5+/-3 2 K 7+/-2 2 8+/-6 2 L 3+/-1 2 4+/-1 2 Μ 8 1 12 1 151613.doc -94- 201121567 C)人類全血檢定 使用 Refludan®(Bayer Pittsburgh, PA)作為抗凝血劑’自 多個健康供者收集人類全血。全血中Ref>ludan®之最終濃度 為 10 pg/ml。將 rhuIL-23 或 cyno IL-23(最終濃度為 1 ng/ml)+rhuIL-18(最終濃度為 20 ng/ml)+rhuIL-2(最終濃度 為5 ng/ml)於RPMI 1640 + 10% FBS中之刺激混合物添加至 96孔板中，最終體積為每孔20 μΐ。以每孔20 μΐ添加連續 稀釋之IL-23抗體（以3 pg/ml開始，11個點的1:3連續稀釋 液）且在室溫下與該刺激混合物一起培育30分鐘。接著添 加全血（每孔120 μΐ)且用RPMI 1640 +10% FBS將最終體積 調整至每孔200 μΐ。全血之最終濃度為60%。在3 7°C、5% C02下培育板24小時。收集無細胞上清液且根據製造商之 說明，藉由IFNy ELIS A(R&D Systems)量測上清液之IFNy 含量。 統計分析可使用GraphPad PRISM軟體進行。結果可表述 為平均值±標準偏差（SD)。 如在表7中可見，所有抗體均以劑量依賴性方式有效抑 制全血細胞中之rhuIL-23誘導及cyno IL-23誘導之IFNy表 現。抗體之IC5〇值均在微微莫耳濃度範圍内。 表7. IFNy人類全血檢定中IL-23抗體之平均IC5〇(pM)值的 表格 151613.doc -95- 201121567 rhuIL-23 Cyno IL-23 抗體 IC50+/-SD 重複次數 IC50+/-SD 重複次數 B 117+/-94 7 161+/-95 6 E 29+/-8 3 54+/-33 3 G 53+/-13 3 93+/-44 3 F 66+/-13 3 166+/-189 3 D 88+/-6 3 110+/-14 3 C 97+/-31 3 186+/-194 3 d)IL-22 檢定 已知IL-23為促發炎細胞激素之有效誘導劑。IL-23作用 於活化及記憶T細胞且促進產生促發炎細胞激素（包括IL-22)之Thl7細胞的存活及擴增。在此檢定中，使用人類全 血來評估IL-23抗體抑制IL-23誘導之IL-22產生的能力。 以與上述相同之方式進行全血檢定，其中修改之處為使 用 1 ng/ml 之 rhuIL-23 或 cynoIL-23 及 10 ng/ml 之 rhuIL-1 8 來 誘導 IL-22 產生。藉由 IL-22 ELISA(R&D Systems, Minneapolis，MN)測定 IL-22 濃度。 如在表8中可見，抗體以劑量依賴性方式有效抑制全血 細胞中之rhuIL-23誘導及cyno IL-23誘導之IL-22產生。抗 體之IC5〇值均在微微莫耳濃度範圍内。 表8. IL-22人類全血檢定中IL-23抗體之平均IC5G(pM)值 的表格 151613.doc -96- 201121567 rhuIL-23 Cyno IL-23 抗體 ic5〇+/-sd 重複次數 ICs〇+/-SD 重複次數 B 117+/-68 4 113+/-65 3 E 87+/-109 3 56+/-60 3 G 83+/-59 3 66+/-45 3 實例3 使用KinExA技術測定抗IL-23抗體之平衡解離常數（KD) 使用動力學排阻檢定（KinExA檢定，Sapidyne Instruments, Inc., Boise，ID)評估rhuIL-23與IL-23抗體之結合親和力。 用rhuIL-23預塗佈正常人類血清（NHS)活化之瓊脂糖4速流 珠粒（Amersham Biosciences，GE Healthcare 之部門， Uppsala，Sweden)且用含 10 mg/mL BSA之 1 m Tris缓衝液阻 斷。在室溫下將50 pM IL-23抗體與rhuIL-23(以800 pM開 始，12個點的1:2稀釋液）一起培育72小時，隨後使其流過 塗有rhuIL-23之瓊脂糖珠粒。利用經螢光（Cy5)標記之山羊 抗人類Fc抗體（Jackson Immuno Research, West Grove, Pa.) 定量結合珠粒之抗體的量。在平衡狀態下結合信號與游離 抗體之量成正比。 使用KinExA Pro軟體，自曲線擬合獲得解離平衡常數 (KD)及締合速率（Κοη)。解離速率（KQff)自以下得到： KD=K0ff/K0n。 如在表9中可見，抗體對於結合於人類IL-23具有高親和 力。所有抗體之KD值均在低pM至次pM範圍内。 151613.doc -97- 201121567 表 9 KD(pM)、Kon(l/MS)及 Koff(l/s)速率之表格 抗體 Κ〇(ρΜ) K〇„(l/MS) K〇ff(l/s) E 0.131 9.12E+05 1.4E-07 D 0.126 1.72E+06 2.2E-07 B 3.99 1.17E+06 4.7E-06 C 2.56 1.36E+06 4.1E-06 F 2.62 5.69E+05 1.5E-06 L 1.08 3.34E+06 3.7E-06 G 2.00 4.00E+05 8.1E-07 實例4 使用X -射線結晶學進行結構測定 一種測定抗體-抗原複合物之結構的方法為使用X-射線 結晶學，參見例如 Harlow 及 Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)，第23頁。已測定IL-23之晶體結構（參 見 Lupardus及 Garcia, J Mol Biol，2008, 382: 931-941)且已 揭示IL-23/Fab複合物之晶體結構（參見Beyer等人J Mol Biol, 2008. 382(4): 942-55)。使用 X-射線結晶學獲得 IL-23 與本文所主張之抗體的Fab片段之結構測定。 用於結晶之蛋白質 使用以重組方式獲得之人類IL-23雜二聚體進行結晶研 究（參見Beyer等人，同上）。人類pl9次單元之序列包含 5丑(5 1〇]^〇:145之殘基20，189、8£(^1〇]^〇:154之信號序列 及C端6-His標籤SEQ ID NO:155。人類p40次單元之序列在 SEQ ID NO: 147之位置222處自天冬醯胺突變為麩醯胺酸以 151613.doc -98- 201121567 阻止此位點之糖基化（Beyer等人，同上）。 自抗體B及抗體E獲得之Fab表現於併有卡斯蛋白酶裂解 位點之IgGl骨架上。藉助於蛋白酶裂解對Fab進行處理。 複合物形成及結晶 IL-23-抗體B Fab複合物藉由將2倍莫耳過量之抗體B Fab 與上述人類雜二聚IL-23混合來製備。藉由尺寸排阻層析 純化該複合物以移除過量抗體B Fab並濃縮至約12 mg/ml 以供結晶。IL-23-抗體B Fab複合物在0.1 M Hepes(pH 7)、 8% PEG 8000 中結晶。 IL-23-抗體E Fab複合物藉由將2倍莫耳過量之抗體E Fab 與上述人類雜二聚IL-23混合來製備。根據製造商之說 明，使用 JBS 甲基化套組（Jena Bioscience, Jena, Germany) 對複合物進行曱基化。接著用PNGase處理複合物以使蛋白 質去糖基化。此等處理後，藉由尺寸排阻層析純化複合物 以移除過量抗體E Fab並濃縮至13.5 mg/ml以供結晶。IL-23-抗體 E Fab 複合物在 0.1 M Tris(pH 8.5) 、 0.2 Μ 氯化鎂、 15% PEG 4000 中結晶。 資料收集及結構測定 IL-23-抗體B Fab晶體以單位晶胞尺寸為a=70.93、 b=71.27 ' c=107.37 A、β = 1 04·98°之P2丨空間群生長且繞射 至2.0 A解析度。藉由分子置換，用程式MOLREP(CCP4， The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1994. 50(Pt 5):第 760-3 頁），使用IL-23結構（Beyer等人，同上）作為起始搜尋模型 151613.doc -99- 201121567 來解出IL-23-抗體B Fab結構。保持IL-23溶液固定，使用 抗體可變域作為搜尋模型。保持IL-23-抗體可變域溶液固 定，使用抗體恆定域作為搜尋模型。經由多輪使用量子 (Quanta)進行模型建立及使用cnx進行改進來改良完整結構 (Brunger等人，Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1998, 54(Pt 5):第 905-21 頁）。 使用程式 PyMOL(DeLano，W.L. The PyMOL Graphics System. Palo Alto, 2002)(Schrodinger, LLC; New York, NY))計算蛋白質原子之間的距離。若至少一個原子位於與 搭配物蛋白質之所需距離臨限值内，則選擇胺基酸。 當IL-23結合於抗體B Fab時，IL-23之pl9次單元之A、 B、C及D螺旋的邊界包括SEQ ID NO:145之A螺旋殘基28-47、B螺旋殘基86-105、C螺旋殘基119-134及D螺旋殘基 154-187 。 當IL-23pl9次單元結合於抗體B Fab時，IL-23pl9次單元 上之相互作用區域包括SEQIDNO:145之Ser46-Glu5 8、 01\1112-0111123及？1'〇155-?1^163中的殘基。 具有距離抗體B Fab 4 A或更小之原子的IL-23p 19次單元 胺基酸殘基包括 SEQ ID NO:145 之 Ser46、Ala47、His48、 Pro49、Leu50、His53、Met54、Asp55、Glu58、Proll3、 Serll4、Leull5、Leull6、Prol20、Vall21、Trpl56、 Leul59、Leul60、Argl62及 Phel63。具有距離抗體B Fab 4 A與5 A之間的原子之IL-23pl9胺基酸殘基包括SEQ ID NO:145 之 Val51 、Arg57、Glull2、Aspll8、Serll9、 151613.doc •100- 201121567
Gin 123、Pro 155 〇 具有距離抗體B Fab 4 A或更小之原子的IL-23p40次單元 胺基酸殘基包括SEQIDNO:147之Glul22及Lysl24。 具有距離IL-23雜二聚體4 A或更小之原子的抗體B Fab 重鏈胺基酸殘基包括SEQ ID NO:46之Gly32、Gly33、 Tyr34、Tyr35、His54、Asn58、Thr59、Tyr60、Lys66、 ArglOl、Glyl02、Phel03、Tyrl04 及 Tyrl05。具有距離 IL-23雜二聚體£5 A之原子的抗體B Fab重鏈胺基酸殘基包括 SEQ ID NO:46 之 Ser31、Gly32、Gly33、Tyr34、Tyr35、 His54、Ser56、Asn58、Thr59、Tyr60、Lys66、ArglOl、 Glyl02、Phel03、Tyrl04及 Tyrl05。 具有距離IL-23雜二聚體4 A或更小之原子的抗體B Fab 輕鏈胺基酸殘基包括SEQ ID NO:15之Ser30、Ser31、 Trp32、Tyr49、Ser52、Ser53、Ala91、Asn92、Ser93、 Phe94及Phe96。具有距離IL-23雜二聚體$ 5 A之原子的抗 體B Fab輕鏈胺基酸殘基包括SEQ ID NO:15之Ser30、 Ser31、Trp32、Tyr49、Ala50、Ser52、Ser53、Ser56、 Ala91 、 Asn92 、 Ser93 、 Phe94及Phe96 。 IL-23-抗體E Fab複合物晶體以單位晶胞尺寸為 a=61.60、b=97.59、c=223.95 A 之 P222i 空間群生長且繞射 至3·5 A解析度。如上文所述，藉由分子置換，用程式 Phaser(CCP4，同上），使用IL-23結構、抗體可變域及抗體 恆定域作為三個起始搜尋模型來解出IL-23-抗體E Fab複合 物結構。經由多輪使用量子（Quanta)進行模型建立及使用 151613.doc -101 - 201121567 cnx進行改進來改良完整結構（Brunger等人，同上）。抗體E Fab恆定域由於蛋白質之彼部分的電子密度極低而不保留 最終改進結構中。 當IL-2 3pl9次單元結合於抗體e Fab時，所鑑別之 IL-23pl9次單元上的相互作用區域包括SEQ ID NO:145之 Ser46-His53、Glull2-Vall20 及 Trpl56-Phel63 中的殘基。 具有距離抗體E Fab 4 A或更小之原子的iL-23pl9胺基酸 殘基包括 SEQ ID NO:145 之 Ser46、Ala47、His48、 Pro49 、 Leu50 、 Glull2 、 Proll3 、 Serll4 、 Leull5 、 Leull6、Proll7、Aspll8、Serll9、Prol20、Trpl56、 Leu 159、Leu 160 及Phe 163。具有距離抗體E Fab 4 A與 5 A 之間之原子的IL-23pl9胺基酸殘基包括SEQ ID NO:145之 His53 。 具有距離抗體E Fab 4 A或更小之原子的IL-23p40胺基酸 殘基包括8£卩10 1^0:147之1^3 121、〇111122、？1'〇123及 Asn 125。 具有距離IL-23雜二聚體4 A或更小之原子的抗體E Fab重 鍵胺基酸殘基包括SEQ ID NO:31之Gly26、Phe27、 Thr28、Ser31、Tyr53、Tyr59、Tyrl02、Serl04、 861'105、1'卬106、丁71*107及？1'〇108。具有距離11^23雜二聚 體S5 A之原子的抗體E Fab重鏈胺基酸殘基包括SEQ ID NO:31 之 Glnl、Gly26、Phe27、Thr28、Ser30、Ser31、 Tyr32、Trp52、Tyr53、Tyr59、ArglOO、Tyrl02、 Thrl03、Serl04、Serl05、Trpl06、Tyrl07及 Prol08。 151613.doc • 102· 201121567 具有距離IL-23雜二聚體4A或更小之原子的抗體e Fab輕 鏈胺基酸殘基包括SEQ ID NO: 1之Ala3 1、Gly32、Tyr33、 Asp34、Tyr51、Gly52、Asn55、Lys68 及 Tyr93。具有距離 IL-23雜二聚體$ 5 A或更小之原子的抗體b Fab輕鏈胺基酸 殘基包括 SEQ ID NO: 1 之 Thr29、Ala3 1、Gly32、Tyr33、 Asp34、Tyr51、Gly52、Asn55、Lys68、Tyr93及 TrplOO。 實例5 經由溶劑可接近表面積差來確定IL-23-抗體複合物接觸 殘基 使用溶劑可接近表面積差來確定互補位（抗體中識別抗 原之部分）及其所結合之由人類IL_23_抗體B Fab複合物及 人類IL-23-抗體E Fab複合物中之互補位結合的抗原部分中 之殘基接觸。溶劑可接近表面積計算係使用M〇iecuiar Operating Environment(Chemical Computing Group, Montreal, Quebec)來進行。 IL-23-抗體B Fab複合物中之互補位殘基的溶劑可接近表 面積差藉由將抗體B Fab殘基設定為所需組來計算。使用 實例4中獲仔之關於I l · 2 3 -抗體b F ab複合物的結構資訊且 計算在IL-23雜二聚體存在下抗體B Fab之胺基酸殘基的殘 基溶劑可接近表面積並代表該組之「結合面積」。 計算在IL-23抗原不存在下各抗體B Fab殘基之殘基溶劑 可接近表面積且代表該組之「游離面積」。 接著自「游離面積」減去「結合面積」，得到組内各殘 基之「溶劑接觸表面積差」。當複合時，表面積無變化或 151613.doc 201121567 差值為零之抗體B Fab殘基不與IL-23抗原之殘基接觸。差 值210 A2之抗體B Fab殘基被視為明顯與IL-23抗原中之殘 基接觸以使得當抗體B Fab結合於人類IL-23時，此等抗體 B Fab殘基至少部分至完全被遮蔽。此組抗體B Fab殘基構 成「覆蓋補丁」，當抗體B Fab結合於人類IL-23時該等殘 基牽涉於界面結構中，參見表10及11。此覆蓋補丁内之抗 體B Fab殘基可能不全部牽涉於與IL-23抗原之殘基的結合 相互作用中，但覆蓋補丁内任何單個殘基之突變可能引入 能量差異，此將影響抗體B Fab與人類11^23之結合。除 Tyr49外，所有殘基均位於抗體B Fab輕鏈及重鏈之CDR區 中。當IL-23抗原結合於抗體B Fab時，此等殘基亦在IL-23 抗原之5 A或更小以内，如實例4中所述。 表10抗體B Fab輕鏈之溶劑可接近性表面積差 殘基 AHO編號 殘基位置 SEQ ID NO: 15 溶劑暴露表面積差(A2) Ser32 Ser30 44.9 Ser33 Ser31 41.1 Trp40 Trp32 79.0 Tyr57 Tyr49 40.7 Ala58 Ala50 20.3 Ser68 Ser52 43.6 Ser69 Ser53 38.9 Ser72 Ser56 19.1 AsnllO Asn92 34.0 Phel35 Phe94 51.4 151613.doc -104- 201121567 表11抗體B Fab重鏈之溶劑可接近性表面積差 殘基 AHO編號 殘基位置 SEQ ID NO:46 溶劑暴露表面積差(A2) Ser33 Ser31 18.2 Gly34 Gly32 49.5 Gly38 Gly33 33.8 Tyr39 Tyr34 51.4 Tyr40 Tyr35 30.7 His59 His54 29.5 Asn67 Asn58 66.7 Thr68 Thr59 26.0 Tyr69 Tyr60 59.4 Lys75 Lys66 32.6 ArgllO ArglOl 47.2 Glylll Glyl02 21.7 Phell2 Phel03 35.5 Tyrl33 Tyrl04 83.0 Tyrl34 Tyrl05 91.7 如上文所述計算IL-23-抗體E Fab複合物中之殘基的溶劑 可接近表面積差。差值210 A2之抗體E Fab殘基被視為明 顯與IL-23抗原中之殘基接觸且當抗體E Fab結合於人類 IL-23時，此等抗體E Fab殘基至少部分至完全被遮蔽。此 組抗體E Fab殘基構成覆蓋補丁，當抗體E Fab結合於人類 IL-23時該等殘基牽涉於界面結構中，參見表12及13。此 覆蓋補丁内之抗體E Fab殘基可能不全部牽涉於與IL-23抗 原之殘基的結合相互作用中，但覆蓋補丁内任何單個殘基 之突變可能引入能量差異，此將影響抗體E Fab與人類 151613.doc -105· 201121567 IL-23之結合。此等覆蓋補丁殘基大部分位於抗體E Fab重 鏈及輕鏈之CDR區中。當IL-23抗原結合於抗體E Fab時， 此等殘基亦在IL-23抗原之5 A或更小以内，如實例4中所 述。 表12抗體E Fab輕鏈之溶劑可接近性表面積差 殘基 AHO編號 殘基位置 SEQ ID NO:l 溶劑暴露表面積差(A2) Ala33 Ala31 11.6 Gly34 Gly32 51.2 Tyr39 Tyr33 47.2 Asp40 Asp34 36.8 Tyr57 Tyr51 16.1 Gly58 Gly52 11.1 Asn69 Asn55 29.4 Lys82 Lys68 20.1 Tyrl09 Tyr93 27.3 Seri 35 Ser98 11.3 表13抗體EFab重鏈之溶劑可接近性表面積差 殘基 AHO編號 殘基位置 SEQIDNO:31 溶劑暴露表面積差(A2) Glnl Glnl 41.1 Gly27 Gly26 24.6 Thr30 Thr28 82.2 Ser33 Ser31 40.7 Tyr39 Tyr32 30.7 Trp59 Trp52 11.3 Tyr60 Tyr53 44.7 Tyr69 Tyr59 42.4 151613.doc -106- 201121567
Lys86 Lys76 17.4 Glylll GlylOl 12.8 Tyrll2 Tyrl02 103.1 Seri 14 Seri 04 21.0 Seri 15 Serl05 91.4 Trpl31 Trpl06 145.0 Tyrl32 Tyrl07 71.6 Pro133 Pro 108 20.4 IL-23雜二聚體中由抗體B Fab之互補位結合之部分的溶 劑可接近表面積差藉由將IL-23雜二聚體殘基設定為所需 組來計算。使用實例4中所獲得之關於抗體B Fab-IL-23複 合物的結構資訊且計算在抗體B Fab存在下IL-23雜二聚體 之胺基酸殘基的殘基溶劑可接近表面積並代表該組之結合 面積。 計算在抗體B Fab不存在下各IL-23雜二聚體殘基之殘基 溶劑可接近表面積且代表該組之游離面積。 如上文所述，自游離面積減去結合面積，得到各IL-23 殘基之溶劑接觸表面積差。當複合時，表面積無變化或差 值為零之IL-23雜二聚體殘基不與抗體B Fab之殘基接觸。 差值210 A2之IL-23雜二聚體殘基被視為明顯與抗體B Fab 之殘基接觸且當人類IL-23雜二聚體結合於抗體B Fab時， 此等IL-23雜二聚體殘基至少部分至完全被遮蔽。此組 IL-23雜二聚體殘基構成覆蓋補丁，當人類IL-23雜二聚體 結合於抗體E Fab時該等殘基牽涉於界面結構中，參見表 14。此覆蓋補丁内之IL-23雜二聚體殘基可能不全部牽涉 151613.doc -107- 201121567 於與抗體B Fab上之殘基的結合相互作用中，但覆蓋補丁 内任何單個殘基之突變可能引入能量差異，此將影響抗體 B Fab與人類IL-23之結合。此等殘基亦在距離抗體B Fab 5 A或更小以内，如實例4所述。 表14 IL-23雜二聚體殘基之溶劑可接近性表面積差 pl9 殘基(SEQIDNO:145) 溶劑暴露表面積差(A2) Ser46 26.5 Ala47 12.7 Pro49 59.6 Leu50 122.2 His53 47.8 Met54 13.9 Asp55 20.5 Arg57 14.6 Glu58 96.5 Glull2 29.7 Proll3 64.8 Seri 14 30.0 Leull5 31.4 Leull6 60.0 Aspll8 14.4 Seri 19 19.7 Pro120 64.7 Prol55 19.4 Typl56 61.9 Leul59 72.8 Leu160 27.0 Argl62 14.4 Phel63 67.5 p40 殘基(SEQIDNO:147) Glul22 29.1 Lysl24 60.9 151613.doc -108 - 201121567 如上文所述計算IL-23雜二聚體中由抗體E Fab之互補位 結合之部分的溶劑可接近表面積差。差值210 A2之IL-23雜 二聚體殘基被視為明顯與抗體E Fab之殘基接觸且當人類 IL-23雜二聚體結合於抗體E Fab時，此等IL-23雜二聚體殘 基至少部分至完全被遮蔽。此組IL-23雜二聚體殘基構成 覆蓋補丁，當人類IL-23雜二聚體結合於抗體E Fab時該等 殘基牽涉於界面結構中，參見表1 5。此覆蓋補丁内之 IL-23雜二聚體殘基可能不全部牽涉於與抗體E Fab上之殘 基的結合相互作用中，但覆蓋補丁内任何單個殘基之突變 可能引入能量差異，此將影響抗體E Fab與人類IL-23之結 合。此等殘基亦在距離抗體E Fab 5A或更小以内，如實例 4中所述。 表15 IL-23雜二聚體殘基之溶劑可接近性表面積差 pl9 殘基(SEQIDNO:145) 溶劑暴露表面積差(A2) Ser46 18.7 Ala47 14.9 Pro49 79.8 Leu50 99.5 His53 61.2 Glull2 62.8 Proll3 45.7 Seri 14 69.5 Leull5 50.3 Leull6 127.2 Proll7 54.1 Aspll8 37.0 Pro120 18.8 151613.doc •109· 201121567
Pro155 16.9 Trpl56 140.7 Leul59 21.8 Leu160 17.0 Phel63 56.6 p40 殘基(SEQIDNO:147) Lysl21 86.2 Glul22 21.8 Pro123 22.1 Asnl25 26.7 Arg283 22.6 【圖式簡單說明】 圖1A :使用重組人類IL-23進行之STAT-螢光素酶報導體 檢定的結果。所有抗體均完全抑制重組人類IL-23。 圖1B :使用原生人類IL-23進行之STAT-螢光素酶報導體 檢定的結果。僅一半彼等完全抑制重組人類IL-23之抗體 能夠完全抑制原生人類IL-23。 151613.doc 110- 201121567 序列表 <110>美商安美基公司 <120> 人類EL-23抗原結合蛋白 <130> A-1529-US-PSP2 <140 099136594 <141> 2010-10-26 <150> 61/254,982; 61/381,287 <151> 2009-10-26 ; 2010-09-09 <160> 155 <170> Patentln version 3.5 > > > > 0 12 3 1 1 X 1 2 2 2 2 < < V < <400> 1
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Thr Gly Ala Gly 20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gin Gin Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Leu lie Tyr Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95
Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu 100 105 110 > > > > 0 12 3 1—II ϊ—I 1 2 2 2 2 < < < < 2 333
DNA 智人 <400> 2 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 151613-序列表.doc 201121567 tcctgcactg ggagcagctc caacaccggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcaa 120 gttccaggaa cagcccccaa actcctcatt tatggtagcg gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactggactc 240 caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttgg 300 gtgttcggcg gagggaccag gctgaccgtc ctg 333 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < <
<400〉 3
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn lie Gly Ala Gly 20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Leu lie Tyr Gly Ser Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95
Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 4 <211> 115 <212> PRT <213> 智人 <400> 4
Gin Ala Val Leu Thr Gin Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Ala Ser Leu Thr Cys Thr Leu Arg Ser Gly lie Asn Val Gly Thr 20 25 30
Tyr Arg He Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Ser Pro Pro Gin Tyr 35 40 45 151613-序列表.d〇c 201121567
Leu Leu Arg Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Lys Gin Gin Gly Ser Gly Val 50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Asp Ala Ser Ala Asn Ala Gly He 65 70 75 80
Leu Leu lie Ser Gly Leu Gin Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 85 90 95
Met lie Trp His Ser Ser Ala Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu • 100 105 110
Thr Val Leu - 115 <210> 5 <211> 345 <212> DNA <213> 智人 <400> 5 caggctgtgc tgactcagcc gtcttccctc tctgcatctc ctggagcatc agccagtctc 60 acctgcacct tacgcagtgg catcaatgtt ggtacctaca ggatatactg gtaccagcag 120 aagccaggga gtcctcccca gtatctcctg aggtacaaat cagactcaga taagcagcag 180 ggctctggag tccccagccg cttctctgga tccaaagatg cttcggccaa tgcagggatt 240 ttactcatct ctgggctcca gtctgaggat gaggctgact attactgtat gatttggcac 300 agcagcgctt cggtattcgg cggagggacc aagctgaccg tecta 345 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < <400> 6
Glu Asn Thr Val Thr lie Tyr Tyr Asn Tyr Gly Met Asp Val 15 10 <210> Ί <211> 116 <212> PRT <213> 智人 <400〉 7
Gin Pro Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 15 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Asn Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30 151613-序列表.doc 201121567
Val Asp Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45
Arg Val Gly Thr Gly Gly lie Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly lie Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr lie 65 70 75 80
Lys Asn lie Gin Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95
His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110
Val Thr Val Leu 115 <210> 8 <211> 348 <212> DNA <213> 智人 <400> 8 cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc acctgcaccc tgaacagcgg ctacagtgat tataaagtgg actggtacca gcagagacca gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggattgtggg atccaagggg gatggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggta cctgaccatc aagaatatcc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg agcaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtccta <210> 9 <211> 116 <212> PRT <213> 智人 <400> 9
Gin Pro Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 15 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gin Gin Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45
Arg Val Gly Thr Gly Gly lie Val Gly Ser Lys Gly Glu Gly lie Pro 50 55 60 -4- 60 120 180 240 300 348 151613-序列表.doc 201121567 Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr lie 65 70 75 80 Lys Asn lie Gin Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95 His Gly Ser Gly Asn Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110 Val Thr Val Leu 115 8说人 1034DN智 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < <400> 10 cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc 60 acctgcaccc tgagcagcgg ctacagtgat tataaagtgg actggtacca gcagagacca 120 gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggattgtggg atccaagggg 180 gaaggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggta cctgaccatc 240 aagaacatcc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg 300 aacaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtccta 348 <210> 11 <211> 116 <212> PRT <213> 智人 <400> 11
Gin Pro Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 15 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gin Leu Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45
Arg Val Gly Thr Gly Gly Thr Val Gly Ser Lys Gly Glu Gly lie Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Ser Leu Thr lie 65 70 75 80
Lys Asn lie Gin Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95 151613-序列表.doc 201121567
His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110
Val Thr Val Leu 115 <210> 12 <211> 348 <212> DNA <213> 智人 <400> 12 60 120 180 240 300 348 cagcctgagt tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc acctgcaccc tgagcagcgg ctacagtgat tataaagtgg actggtacca gctgagacca gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggactgttgg atccaagggg gaaggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggtc cctgaccatc aagaacatcc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg agcaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtccta <210> 13 <211> 107 <212> PRT <213> 智人 <400> 13
Asp lie Gin Leu Thr Pro Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ala Gly Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asp Ser Phe Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 14 <211> 321
<212> DNA 151613·序列表.doc 60 201121567 <213> 智人 <400> 14 120 180 240 300 321 gacatccagt tgaccccgtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggtattgcc ggctggttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctgacagtt tccctcccac tttcggcgga . gggaccaagg tggagatcaa a <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> 智人 <400> 15
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Ser Ser Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Ser Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Val Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys 100 105 <210> 16 <211> 321 <212> DNA <213> 智人 <400> 16 60 120 180 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca ggttattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctagcctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtgtatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 151613-序列表.doc 240 201121567 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatttcaa a 321 <210> 17 <211> 107 <212> PRT <213> 智人 <400> 17
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ser Ser Ser Trp 20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 1及人 1832DN智 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < <400> 18 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggaagtagc agctggtttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc caaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213〉 智人 8- 151613-序列表.doc 201121567 <400> 19
Asp Ser Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp 20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Asn Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 <210> 20 <211> 321 <212> DNA <213> 智人 <400> 20 gacagccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcct ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggtttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggcaagccc ctaacctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 7(T人 1 o R 2 1 p智 > > > > 0 12 3 11 I--1 1 2 2 2 2 < < < < <400> 21
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Gly Gin Val lie Ser Ser Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 151613-序列表.doc 201121567
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Thr Ser Phe Pro Leu 85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210〉 22 <211> 321 <212> DNA <213> 智人 <400> 22 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgggtca ggttattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcg aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gacgattttg caacttacta ttgtcaacag gctaccagtt ttcccctcac tttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa a <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> 智人 <400> 23
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Phe Ser Gly Trp 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 •10- 60 120 180 240 300 321 151613·序列表.doc 201121567
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 <210> 24 <211> 321 <212> DNA <213〉 智人 <400> 24 60 120 180 240 300 321 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc ggttggttag cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct gggaccaaag tggatatcaa a <210> 25 <211> 107 <212> PRT <213〉 智人 <400> 25
Asp lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Val lie Ser Ser Trp 20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys 100 105 <210〉 26 <211> 321 <212> DNA <213> 智人 151613·序列表.doc - II - 60 201121567 <400> 26 gacatccagt tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca ggttattagc agctggtttg cctggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gcagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct gggaccaaag tggatgtcaa a <210> 27 <211> 107 <212> PRT <213〉 智人 <400> 27
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Sex Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly Ser Ser Ser Trp 20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 . 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 <210> 28 <211> 321 <212> DNA <213> 智人 <400> 28 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgtc gggcgagtca gggtagtagc agctggtttg cctggtatca acagaaacca gggaaagccc caaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca •12· 120 180 240 300 321 60 120 151613·序列表.doc 180 240 240 201 121567 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct gggaccaaag tggatatcaa a 300 321 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < <400> 29
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg 20
Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 50 55
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 65 70
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 85
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val 100
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15
Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 25 30
Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 45
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 75 80
Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Pro 90 95
Glu lie Glu 105 <210> 30 <211> 108 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (2) .7(2) <223> Xaa可為De或Ser <220> <221> MISC FEATURE <222> (4) .7(4) <223> Xaa可為Met或Leu <220> <221> MISC FEATURE <222> (29)7.(29) 151613·序列表.doc 201121567 <223> Xaa 可為 Gly 或 Val <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (30)7.(30) <223〉 Xaa可為Ser、Phe或lie <220> <221> MISC一FEATURE <222> (32)7.(32) <223> Xaa 可為 Ser 或 Gly <220> <2 21> MISC一FEATURE <222> (34)7.(34) <223> Xaa 可為 Phe <Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)7.(43) <2 2 3> Xaa 可為 Lys 或 Gin <220> <221> MISC一FEATURE <222> (46)7.(46) <223〉 Xaa可為Lys、Asn或Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (67)7.(67) <223> Xaa 可為 Gly 或 Val <220> <2 21> MISC_FEATURE <222〉 (71)7.(71) <223> Xaa 可為 Asp 咸 Glu <220> <221> MISC一FEATURE <222> (82)7.(82) <223〉义 aa 奇為 Glu 或 Ala <220> <221> MISC一FEATURE <222> (88)7.(88) < 2 2 3 > Xaa 计為 Ty r 或 Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (107)". . (107) <223〉 Xaa可為lie、Val或Phe <400〉 30
Asp Xaa Gin Xaa Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -14· 15】6】3_序列表.doc 201121567
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys 20 Trp Xaa Ala Trp Tyr Gin Gin 35 lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 50 55 Gly Ser Xaa Ser Gly Thr Xaa 65 70 Pro Xaa Asp Phe Ala Thr Tyr 85 Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr 100 <210> 31 <211> 124 <212> PRT <213> 智人 <400> 31 Gin Val Gin Leu Val Glu Ser 1 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 20
Gly Met His Trp Val Arg Gin 35
Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly 50 55
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser 65 70
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg 85
Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Thr 100 lie Trp Gly Gin Gly Thr Met 115
Arg Ala Ser Gin Gly Xaa Xaa Ser Xaa 25 30
Lys Pro Gly Xaa Ala Pro Xaa Leu Leu 40 45
Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 60
Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 75 80
Xaa Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro 90 95
Lys Val Asp Xaa Lys 105
Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 10 15
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 25 30
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 40 45
Ser Asn Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 60
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 75 80
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95
Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp 105 110
Val Thr Val Ser Ser 120 <210> 32 <211> 372 <212> DNA <213> 智人 <400> 32 •15- 1516Π-序列表.doc 60 201121567 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa tgaatactat gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcgg gggtatacca gtagctggta ccctgatgct tttgatatct ggggccaagg gacaatggtc accgtctctt ca <210> 33 <211> 124 <212> PRT <213> 智人 <400> 33
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp 100 105 110
He Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 121 <212> PRT <213> 智人 <400> 34
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 1 5 10 15 -16- 120 180 240 300 360 372 151613-序列表 doc 201121567
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Ser Phe Asp Gly Ser Leu Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr . 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys e 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Thr Thr Leu Ser Gly Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <400> 35 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agetatggea tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatttg atggaagtet taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agetgaggae acggctgtgt attactgtgc gagagaaegg 300 actactttaa gtgggagcta ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tea 363
3说人 3536D 智 > > > > 0 12 3 111 1—I 2 2 2 2 < < < V <210> 36 <211> 121 <212> PRT <213〉 智人 <400> 36
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 151613-序列表.doc ·17· 201121567
Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Ser Val lie Ser His Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Thr Thr Leu Ser Gly Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 > > > > 0 12 3 1 1 1 I—I 2 2 2 2 < < V <
<400> 37 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg gttgtcagtt atatcacatg atggaagtat taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agetgaggae acggctgtgt attactgtgc gagagaaegg 300 actactctaa gtgggagcta ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 38 <211> 125 <212> PRT <213〉 智人 <400> 38
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 • 18 - 151613-序列表.doc 201121567
Sex Tyr lie Ser Ser Arg Ser Ser Thr lie Tyr lie Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Arg lie Ala Ala Ala Gly Gly Phe His Tyr Tyr Tyr Ala Leu . 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 39 <211> 375 <212> DNA <213> 智人 <400〉 39 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagta tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcgtac attagtagta ggagtagtac catatacatc 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agacgaagac acggctgtgt attactgtgc gagacggata 300 gcagcagctg gtgggttcca ctactactac gctttggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 40 <211> 125 <212> PRT <213〉 智人 <400> 40
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Ser Ser Ser Thr Arg Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 •19· 151613-序列表.doc 201121567
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Arg lie Ala Ala Ala Gly Pro Trp Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 41 <211> 375 <212> DNA <213> 智人 <400> 41 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatagca tgaactgggt ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagca gtagtagtac cagataccac gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagacgtata gcagcagctg gtccgtgggg ctactactac gctatggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cctca <210> 42 <211> 125 <212> PRT <213〉智人 <400> 42
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Arg Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 •20· 60 120 180 240 300 360 375 151613-序列表.doc 201121567
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Arg lie Ala Ala Ala Gly Pro Trp Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 43 <211> 375 <212> DNA <213> 智人 <400> 43 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgtag tctctggatt caccttcagt agttttagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagtc gtagtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attattgtgc gagacgtata 300 gcagcagctg gtccgtgggg ctactactac gctatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 44 <211> 118 <212> PRT <213〉 智人 <400> 44
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Thr Tyr 20 25 30
Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Leu lie Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr Met Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 •21 · 151613-序列表 _doc 201121567
Arg Asp Arg Gly Tyr Tyr Tyr Gly Val Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 4说人 4535DN智 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt acttactact ggagctggat ccggcagccc 120 gccgggaagg gactggagtg gattgggctt atctatacca gtgggagcac caactacaac 180 ccctccctca agagtcgagt caccatgtca ttagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aggctgacct ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtttatt actgtgcgag agatcgtggg 300 tactactacg gtgtggacgt ctggggccag gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 46 <211> 120 <212> PRT <213> 智人 <400> 46
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp He Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp lie Gly His lie His Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Lys Asn Arg Gly Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 -22- 151613·序列表.doc 201121567 <210> 47 <211> 360 <212> DNA <213> 智人 <400> 47 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggcacatcc attacagtgg gaacacctac 180 • tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaatcagttc 240 tccctgaaac tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgaaaaat 300 cgcgggttct actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 48 <211> 120 <212> PRT <213> 智人 <400> 48
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Asn Ser Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp He Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp lie Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Gin Asn Gin Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Arg Gly His Tyr Tyr Gly Met. Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 49 <211> 360 <212> DNA <213> 智人 151613-序列表.doc 23- 60 201121567 <400> 49 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg ctccatcaac agtggtggtt actactggag ctggatccgc cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagctcctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctca gaaccagttc tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat cgggggcact actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210> 50 <211> 120 <212> PRT <213> 智人 <400> 50
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp lie Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 360 <212> DNA <213> 智人 <400> 51 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agtggtggtt actactggag ctggatccgc -24- 120 180 240 300 360 60 151613·序列表.doc 120 180 201121567 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacattt attacagtgg gagcacctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaaccagttc tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat cggggccact actatggaat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210> 52 <211〉 118 <212> PRT <213> 智人 <400> 52
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Arg Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser lie Ser Ser Tyr 20 25 30
Phe Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45
Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser lie Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95
Arg Asp Arg Gly Ser Tyr Tyr Gly Ser Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 53 <211> 354 <212> DNA <213> 智人 <400> 53 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaaga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtga ctccatcagt agttacttct ggagctggat ccggcagccc ccagggaagg gactggagtg gcttgggtat atctattaca gtgggagcac caactacaac ccctccctca agagtcgagt caccatatca atagacacgt ccaagaacca gttctccctg aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtacgag agatcggggg •25· 240 300 360 60 120 180 240 151613-序列表.doc 300 201121567 agctactacg gatctgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> 智人 <400> 54 0^人 5 6 N ^ 5 3 D智 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 V < < <
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Thr Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp lie Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg He Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80 Ser Leu Ser Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asn Arg Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <400> 55 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggac ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gaacacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgaattacc atatcagtgg acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgagcc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagaaat 300 cgcgggtact actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 56 -26- 151613-序列表.doc 201121567 <211〉 120 <212> PRT <213> 智人 <400〉 56
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly . 20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu . 35 40 45
Trp lie Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Lys Asn Arg Gly Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 57 <211> 360 <212> DNA <213〉 智人 <400> 57 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcacctac tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atgtcagtag acacgtctaa gaaccagttc tccctgaaac tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgaaaaat cgcgggttct actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca <210> 58 <211> 120 <212> PRT <213〉 智人 <400> 58 •27- 60 120 180 240 300 360 151613·序列表.doc 201121567
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Asn Ser Gly 20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp lie Gly Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120
0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < V
0^人 9 6)N?> 5 3 DIP <400> 59 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcaat agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggtacatct attacagtgg gagcagctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagttg acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgagagat 300 cgggggcact actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 60 <211> 123 <212> PRT <213> 智人 <400> 60
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 28- 151613·序列表.doc 201121567
Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Leu lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys . 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Thr Val Thr lie Tyr Tyr Asn Tyr Gly Met Asp Val . 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 116 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223〉 共同序列 > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < <
MISC_FEATURE (3) .7(3)
Xaa可為Val或Glu <220> <221> MISC FEATURE <222〉 (25)7. (25) <223> Xaa 可為 Asni^Ser <220〉 <221> MISC FEATURE <222> (38)7.(38) <223> Xaa可為Gin或Leu <220> <221> MISC FEATURE <222> (55)7.(55) <223> Xaa可為lie或Thr <220> <221> MISC FEATURE <222> (61)7.(61) <223> Xaa可為Asp或Glu <220> <221> MISC FEATURE <222> (77)T.(77) <223〉 Xaa可為Tyr或Ser ·29· 151613-序列表.doc 201121567 <220> <221> MISC FEATURE <222> (101)-. . (101) <223> Xaa可為Ser或Asn <400> 61
Gin Pro Xaa Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 15 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Xaa Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gin Xaa Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45
Arg Val Gly Thr Gly Gly Xaa Val Gly Ser Lys Gly Xaa Gly lie Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Xaa Leu Thr lie 65 70 75 80
Lys Asn lie Gin Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95
His Gly Ser Gly Xaa Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110
Val Thr Val Leu 115 T人 6214PR智 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < <400> 62
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Thr Gly Ala Gly Tyr Asp Val His 15 10 <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213〉 智人 <400> 63
Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 64 <211> 11 <212> PRT <213> 智人 • 30· 151613-序列表.doc 10 201121567 <400> 64
Gin Ser Tyr Asp Ser 1 5 <210> 65 <211> 14 <212> PRT <213> 智人 <400> 65 Thr Gly 'Ser Ser Ser 1 5 <210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> 智人 <400> 66 Gly Ser Asn Asn Arg 1 5 <210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> 智人 <400> 67 Met lie ! Trp His Ser 1 5 <210> 68 <211> 14 <212> PRT <213> 智人 <400> 68 Thr Leu Arg Ser Gly 1 5 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> 智人 <400> 69 10 10 151613-序列表.doc •31 · 201121567
Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Lys Gin Gin Gly Ser 15 10 <210> 70 <211> 13 <212> PRT <213> 智人 <400〉 70
Gly Ala Asp His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val 1 5 10 1 1RT^ 7 1 p智 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < <400〉 71 1 <210> 72 <211> 12 <212> PRT <213> 智人 <400> 72 Val Gly Thr 1 <210> 73 <211〉 13 <212> PRT <213〉 智人 <400> 73 Gly Ala l Asp 1 <210> 74 <211> 11 <212> PRT <213> 智人 <400> 74 Thr Leu l Ser
Thr Leu Asn Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys Val 5 10 10
Gly Ala Asp His Gly Ser Gly Asn Asn Phe Val Tyr Val 5 10 32· 151613·序列表.doc 10 201121567 <210> 75 <211> <212> <213> 12 PRT 智人 <400〉 75
Val Gly Thr Gly Gly lie Val Gly Ser Lys Gly Glu 1 5 10 <210> <211> . <212> <213> 76 9 PRT 智人 <400> 76
Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> ΊΊ 11 PRT 智人 <400> ΊΊ
Arg Ala Ser Gin Gly Phe Ser Gly Trp Leu Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 78 12 PRT 智人 <400> 78
Val Gly Thr Gly Gly Thr Val Gly Ser Lys Gly Glu 1 5 10 <210> <211〉 <212> <213> 79 9 PRT 智人 <400> 79
Gin Gin Ala Thr Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 80 11 PRT 智人 33- 151613-序列表.doc 201121567 <400> 80
Arg Ala Ser Gin Val lie Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> <211> 81 7 <212> <213> PRT 智人 <400> 81
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 82 9 PRT 智人 <400> 82
Gin Gin Ala Asp Ser Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 83 11 PRT 智人 <400> 83
Arg Ala Ser Gin Val lie Ser Ser Trp Phe Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 84 9 PRT 智人 <400> 84
Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 85 11 PRT 智人 <400> 85 -34- 151613·序列表.doc 201121567
Arg Ala Ser Gin Gly Ser Ser Ser Trp Phe Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 86 11 PRT 智人 <400> 86
Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Trp Phe Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 8 7 11 PRT 智人 <400> 8 7
Arg Ala Gly Gin Val lie Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 88 11 PRT 智人 <400> 88
Arg Ala Ser Gin Gly lie Ala Gly Trp Leu Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 89 11 PRT 智人 <400> 89
Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp Leu Gly 1 5 10 ' <210> <211> <212> ' <213> 90 17 PRT 智人 <400> 90
Leu lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly •35· 151613·序列表.doc 201121567 <210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 91 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 92 <211> 17 <212> PRT <213> 智人 <400> 92 Val lie ：Trp Tyr Asp 1 5 Gly <210> 93 <211> 15 <212> PRT <213> 智人 <400> 93 Asp Arg ，Gly Tyr Thr 1 5 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 94 Ser Tyr Ala Met His 1 5 <210> 95 <211> 17 <212> PRT <213> 智人 <400> 95 Val lie Trp Tyr Asp 1 5 10 10 15 15 151613·序列表.doc 36- 201121567 Gly <210> 96 <211> 15 <212> PRT <213> 智人 <400> 96 Asp Arg Gly Tyr Ser Ser Ser 1 5 <210> 9Ί <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 97 Thr Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 98 <211> 17 <212> PRT <213> 智人 <400> 98 Val lie ；Ser Phe Asp Gly Ser 1 5 Gly <210> 99 <211> 12 <212> PRT <213> 智人 <400> 99 Glu Arg Thr Thr Leu Ser Gly 1 5 <210> 100 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 100 Ser Tyr Phe Asp Tyr 10
Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp lie 10 15
Leu Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 10 15 151613-序列表.doc •37· 201121567
Ser Tyr Ser Met Asn 1 <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> 智人 <400〉 101
Val lie Ser His Asp Gly Ser lie Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 102 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 102
Arg lie Ala Ala Ala Gly Gly Phe His Tyr Tyr Tyr Ala Leu Asp Val 15 10 15 > > > > 0 12 3 1 1 1 τ_ 2 2 2 2 < < < < 3 T人 105PR智 <400> 103
Ser Phe Ser Met Asn 1 <210> 104 <211〉 17 <212> PRT <213> 智人 <400> 104
Tyr lie Ser Ser Arg Ser Ser Thr lie Tyr lie Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 V < V < 5 T人 ο 6r?> 1 1 ρ智 •38. 151613-序列表.doc 201121567 <400> 105
Arg lie Ala Ala Ala Gly Pro Trp Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val 1 5 10 15 <210> <211> 106 7 <212> PRT <213> 智人 <400> 106
Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 107 17 PRT 智人 <400> 107
Tyr lie Ser Ser Ser Ser Ser Thr Arg Tyr His Ala Asp Ser Val Lys 1 Gly 5 10 15 <210> <211> 108 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 108
Asn Arg Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> <211> 109 7 . <212> <213> PRT 智人 <400> 109
Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 110 17 PRT 智人 39- 151613·序列表.doc 201121567 <400> 110
Tyr lie Ser Ser Arg Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
y 1 G > > > > 0 12 3 1 1 1 1 2 2 2 2 < < < < 111 10 PRT 智人 <400> 111 Asn Arg Gly Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 > > > > 0 12 3 111 1 2 2 2 2 < < < < 112 5 PRT 智人 <400> 112 Ser Tyr Phe Trp Ser 1 5 <210> 113 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 113 Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 114 <211> 10 <212〉 PRT <213> 智人 <400> 114
Asp Arg Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 115 <211〉 5 <212> PRT <213〉 智人 <400> 115 151613-序列表.doc 40· 201121567
Thr Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 116 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 116 His lie His Tyr Ser 1 5 <210> 117 <211> 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 117 Asp Arg Gly Ser Tyr 1 5 <210> 118 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 118 Tyr lie ：Tyr Tyr Ser 1 5 <210> 119 <211> 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 119 Asp Arg Γ Gly Tyr Tyr 1 5 <210> 120 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 120 Gly Asn Thr Tyr Tyr 10 Tyr Gly Ser Asp Tyr 10 Gly Ser Thr Tyr Tyr 10 Tyr Gly Val Asp Val 10
Asn Pro Ser Leu
Lys 15
Ser
Asn Pro Ser Leu
Lys 15
Ser 151613-序列表.doc • 41 - 201121567
Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly 1 5 <210> 121 <211> 16 <212〉 PRT <213> 智人 <400> 121 Tyr lie Tyr Tyr Ser Gly 1 5 <210> 122 <211> 16 <212> PRT <213> 智人 <400> 122 Leu lie Tyr Thr Ser Gly 1 5 <210> 123 <211> 11 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (5) . .(5) <223> Xaa可為Gly或Val <220> <221〉 MISC FEATURE <222〉 (6) . . (6) <223> Xaa可為lie、 Phe或Ser <220> <221> MISC FEATURE <222> (8) ·: (8) <223> Xaa 可為 Ser 或 Gly 10 10 10 15 15 15 > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < MI SC—FEATURE (10)丁·（10) Xaa可為Phe或Leu <400> 123 42- 151613-序列表.doc 201121567
Arg Ala Ser Gin Xaa Xaa Ser Xaa Trp Xaa Ala 1 5 10 <210> 124 <211> 12 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223〉 共同序列 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3).7(3) <223> Xaa 可為 Asn 或 Ser <400> 124
Thr Leu Xaa Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys Val Asp 1 5 10 <210> 125 <211> 14 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223>共同序列 <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (7).7(7) <223> Xaa 可為 Ue 或 Thr <400> 125
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Xaa Gly Ala Gly Tyr Asp Val His 15 10 <210> 126 <211> 12 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (6) .7(6) <223> Xaa可為De或Thr 43- 151613-序列表.doc 201121567 <220> <221> MISC FEATURE <222> (12)7.(12) <223> Xaa可為Asp或Glu <400> 126
Val Gly Thr Gly Gly Xaa Val Gly Ser Lys Gly Xaa 1 5 10 <210〉 127 <211〉 7 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 V < < < MISC_FEATURE (3)-:(3) Xaa可為Asn或Gly <400> 127 Gly Ser Xaa Asn Arg Pro Ser 1 5 > > > > 0 12 3 111 1 2 2 2 2 < < V < 128 13 PRT 人造序列 <220> <223> 共同序列 > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < V < MISC_FEATURE (8) .7(8) Xaa可為Ser或Asn <400> 128
Gly Ala Asp His Gly Ser Gly Xaa Asn Phe Val Tyr Val 10 <210> 129 <211〉 7 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 151613-序列表.doc -44- 201121567 <220> <221> <222> <223> MISC FEATURE (7) .7(7) Xaa可為Ser或Thr <400> 129
Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Xaa 1 5 <210> <211> . <212> <213> 130 5 PRT 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> <222> <223> MISC FEATURE (3).7(3) Xaa可為Gly或Ala <400> 130
Ser Tyr Xaa Met His 1 5 <210> 131 <211> <212> <213> 5 PRT 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220〉 <221> <222> <223> MISC FEATURE (1) .7(1) Xaa可為Ser或Thr <220> <221> ' <222> <223> MISC FEATURE (1) ·:(1) Xaa可為Ser或Thr ' <220〉 <221> <222> <223> MISC FEATURE ⑵.：(2) Xaa可為Tyr或Phe <400> 131 -45· 151613-序列表.doc > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < 201121567
Xaa Xaa Ser Met Asn 1 5 <210〉 132 <211> 16 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> ⑴.：(1) <223> Xaa可為Tyr或His MISC—FEATURE (3).:(3)
Xaa可為Thr或His <220> <221> MISC FEATURE <222> (7) .7(7) <223> Xaa可為Ser或Asn <220> <221> MISC FEATURE <222> (8) .:(8) <223> Xaa可為Thr或Ser <400> 132 Xaa lie Xaa Tyr Ser 1 5 <210> 133 <211> 17 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (4) .7(4) <223> Xaa可為Phe或His <220> <221> MISC FEATURE <222> (8) .7(8) <223> Xaa可為Leu或Thr 10 15 151613-序列表.doc -46· 201121567 <400> 133
Val lie Ser Xaa Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 134 <211> 17 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <2 21> MISC_FEATURE <222〉 (5).7(5) <2 23> Xaa 可為 Aig 或 Ser <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (9).7(9) <223> Xaa 可為 lie 或 Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)7.(11) <2 23> *aa奇為lie ' His或Tyr <400> 134
Tyr lie Ser Ser Xaa Ser Ser Thr Xaa Tyr Xaa Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15
Gly <210> 135 <211〉 17 <212〉 PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (9) 7(9) <223> Xaa可為Lys或Glu <400> 135 47· 151613-序列表.doc 201121567 Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys . 15 10 15 Gly <210〉 136 <211> 10 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223〉 共同序列 <220> <2 21> MISC_FEATURE <222〉 (1).7(1) <223〉 Xaa 可為 Asn 或 Asp <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (4),7(4) <223> kaa可為His、Tyr或Phe <400> 136
Xaa Arg Gly Xaa Tyr Tyr Gly Met Asp Val 15 10 > > > > 0 12 3 111 1 2 2 2 2 < < < < 137 16 PRT 人造序列 <220> <223> 共同序列 > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < MISC一FEATURE (7).7(7) Xaa可為Gly或Phe > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < MISC_FEATURE (8).7(8) 父aa可為Pile或Trp
<220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (9).7(9) <223〉 Xaa 可為 His 或 Gly <220> <221> MISC FEATURE 151613·序列表.doc ·48- 201121567 <222> (14) .. (14) <223〉 Xaa 可為 Leu 及 Met <400> 137
Arg lie Ala Ala Ala Gly Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 138 <211> 15 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (5).7(5) <223> Xaa可為Ser或Thr <400> 138 Asp Arg Gly Tyr Xaa Ser Ser Trp Tyr 1 5 <210> 139 <211> 112 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (29)7. (29) <223> Xaa可為lie或Thr <220> <221> MISC FEATURE <222> (41)7. (41) <223> Xaa可為Val或Leu <220> <221> MISC FEATURE <222> (54)7.(54) <223> Xaa可為Gly或Asn > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < MISC—FEATURE (107Y..(107) Xaa可為Arg或Lys • 49- 151613-序列表.doc 201121567 <400> 139
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gin 15 10 15
Arg Val Thr lie Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Xaa Gly Ala Gly 20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gin Gin Xaa Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Leu lie Tyr Gly Ser Xaa Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala lie Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95
Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Xaa Arg Leu Thr Val Leu 100 105 110 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2 < V < < 140 120
PRT 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)7.(30) < 2 2 3 > Xaa 可為 And 盏 Ser <220> <2 21> MISC_FEATURE <222〉 (37)7.(37) <223> Xaa 可為 Ser^Thr 0 12 3 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 vv<< <<<< > > > > MISC_FEATURE (52)7.(52) Xaa可為Tyr或His > > > > MISC一FEATURE (54):.(54) Xaa可為Tyr或His <220> <2 21> MISC一FEATURE <222〉 (58)7.(58) <2 2 3 > 计為 Ser 或 Asn <220> 50- 151613-序列表.doc 201121567 <2 21> MISC一FEATURE <222> (59)7.(59) < 2 2 3 > 女aa 奇為 Ser 或 Asn > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < MISC_FEATURE (69)7.(69) Xaa可為Ser或Thr
> > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < V V MISC_FEATURE (71)T. (71) Xaa可為Val或lie > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < MISC_FEATURE (77)7.(77) Xaa可為lie或Met > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 V < < < MISC_FEATURE (83)7. (83) iCaa计為 Lys 或 Gin <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 (99)7.(99) <223> Xaa 竒為 Arg 或 Lys > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 V < < < MISC_FEATURE (10〇7..(100) kaa可為Αφ或Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222〉 (1037,.(103) <223> Xaa可為His、Phe或Tyr <400> 140 Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Xaa Ser Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Xaa Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp lie Gly Xaa lie Xaa Tyr Ser Gly Xaa Xaa Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Xaa Thr Xaa Ser Val Asp Thr Ser Xaa Asn Gin Phe 65 70 75 80 Ser Leu Xaa Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 1516丨3-序列表.doc • 51 · 201121567
Cys Ala Xaa Xaa Arg Gly Xaa Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 141 <211> 125 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <221> MISC FEATURE <222> (23)7.(23) <223> Xaa可為Ala或Val <220> <221> MISC FEATURE <222> (24)7.(24) <223> Xaa可為Ala或Val > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < V V < MISC一FEATURE (31)7.(31) Xaa可為Thr或Ser <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (32)7.(32) <2 23> icaa 可為 fyr 滅 Phe <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (54)7.(54) <2 23> Xaa 可為Ser 或Aig <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (58)7.(58) <2 23> Xaa 可為 Arg 或 lie <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (60)7.(60) <223> Xaa可為His、Tyr或lie
> > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < V MISC一FEATURE (1057..(105) Xaa可為Pro或Gly <220> 151613·序列表.doc 52· 201121567 <221> MISC_FEATURE <222> (10β7..(106) <223> Xaa 可為 Tip 或 Phe <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (107)". . (107) <2 2 3 > Xaa 可為 Gly 或 His <220>
. <2 21> MISC一FEATURE <222> (112) .. (112) < 2 2 3 > Xaa 可為 Met 或 Leu <400> 141
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Xaa Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Xaa 20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr lie Ser Ser Xaa Ser Ser Thr Xaa Tyr Xaa Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 Ί5 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Arg 工le Ala Ala Ala Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Ala Xaa 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 142 <211> 121 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> < 2 21> MI SC一FEATURE <222> (33)7.(33) <223〉Xaa 可為 Gly 或 Ala <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (48)7·(48) •53· 151613-序列表.doc 201121567 <223> Xaa 可為 Val 或 Leu <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (49)7.(49) <2 2 3 > Xaa 可為 Ala 或 Ser 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 V < < < MI SC一FEATURE (53)7.(53) kaa奇為Phe或His <220> <2 21> MISC_FEATURE <222> (57)7.(57) < 2 2 3 > 大aa 计為 Leu Alle <400> 142
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Xaa Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Xaa 35 40 45
Xaa Val lie Ser Xaa Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Thr Thr Leu Ser Gly Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 143 <211> 124 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223> 共同序列 <220> <2 21> MISC一FEATURE <222> (58)7.(58) <223> Xaa 可為 Glu 或 Lys 151613-序列表.doc -54- 201121567 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1037..(103) < 2 2 3 > icaa 可為 Thr 或 Ser <400> 143
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Xaa Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp 100 105 110 lie Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 144 <211> 1026 <212> DNA <213> 智人 <400> 144 aactcggtga acaactgagg gaaccaaacc agagacgcgc tgaacagaga gaatcaggct caaagcaagt ggaagtgggc agagattcca ccaggactgg tgcaaggcgc agagccagcc agatttgaga agaaggcaaa aagatgctgg ggagcagagc tgtaatgctg ctgttgctgc tgccctggac agctcagggc agagctgtgc ctgggggcag cagccctgcc tggactcagt gccagcagct ttcacagaag ctctgcacac tggcctggag tgcacatcca ctagtgggac acatggatct aagagaagag ggagatgaag agactacaaa tgatgttccc catatccagt gtggagatgg ctgtgacccc caaggactca gggacaacag tcagttctgc ttgcaaagga tccaccaggg tctgattttt tatgagaagc tgctaggatc ggatattttc acaggggagc cttctctgct ccctgatagc cctgtgggcc agcttcatgc ctccctactg ggcctcagcc 55· 60 120 180 240 300 360 420 480 151613·序列表.doc 540 600 201121567 aactcctgca gcctgagggt caccactggg agactcagca gattccaagc ctcagtccca gccagccatg gcagcgtctc cttctccgct tcaaaatcct tcgcagcctc caggcctttg tggctgtagc cgcccgggtc tttgcccatg gagcagcaac cctgagtccc taaaggcagc agctcaagga tggcactcag atctccatgg cccagcaagg ccaagataaa tctaccaccc caggcacctg tgagccaaca ggttaattag tccattaatt ttagtgggac ctgcatatgt tgaaaattac caatactgac tgacatgtga tgctgaccta tgataaggtt gagtatttat tagatgggaa gggaaatttg gggattattt atcctcctgg ggacagtttg gggaggatta tttattgtat ttatattgaa ttatgtactt ttttcaataa agtcttattt ttgtggctaa aaaaaa <210> 145 <211> 189 <212> PRT <213〉 智人 <400> 145
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15
Ala Gin Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gin 20 25 30
Cys Gin Gin Leu Ser Gin Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 35 40 45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60
Thr Asn Asp Val Pro His lie Gin Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gin 65 70 75 80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gin Phe Cys Leu Gin Arg lie His Gin Gly 85 90 95
Leu lie Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp lie Phe Thr Gly Glu 100 105 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gin Leu His Ala Ser Leu 115 120 125
Leu Gly Leu Ser Gin Leu Leu Gin Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140
Gin Gin lie Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gin Pro Trp Gin Arg Leu Leu 145 150 155 160
Leu Arg Phe Lys lie Leu Arg Ser Leu Gin Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175 •56· 660 720 780 840 900 960 1020 1026 151613-序列表.doc 201121567
Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185 <210> 146 <211> 1399 <212> DNA <213> 智人 <400> 146 ctgtttcagg gtcatctctt aagaaagatg gtcctcacct gaggtcttag cagtacacct aaggaagatg acctttctaa acaatcagta ggggtgacgt tatgagtact cccattgagg ttcttcatca aagaattctc tcctacttct gatagagtct agcgtgcggg tgcagttagg gccattggac ggttttccct tttatgtcgt gtgacacccc gctctggcaa gtcacaaagg gaatttggtc gatgcgaggc ctgatttgac gcggagctgc cagtggagtg tcatggtgga gggacatcat ggcaggtgga ccctgacatt tcacggacaa cccaggaccg ttctgatcca tctccgtcct ggtttttctg agaattggat tgaagaagat aaccctgacc aggcgaggtt cactgatatt caagaattat attcagtgtc tacactctct ccaggaggac tgccgttcac caaacctgac ggtcagctgg ctgcgttcag gacctcagcc ctactatagc ggatgaaaat gcccagagca gcatctcccc tggtatccgg ggtatcacct atccaagtca ctaagccatt ttaaaggacc tctggacgtt aaaagcagca gcagagagag agtgcctgcc aagctcaagt ccacccaaga gagtaccctg gtccagggca acggtcatct tcatcttgga ttggaggaaa agatgtgtca tcgtggccat atgcccctgg ggaccttgga aagagtttgg cgctcctgct agaaagaacc tcacctgctg gaggctcttc tcagagggga cagctgctga atgaaaacta acttgcagct acacctggag agagcaagag gccgcaaaaa gcgaatgggc agtggaagat ccagcagttg atgggaactg agaaatggtg ccagagcagt agatgctggc gcttcacaaa caaaaataag gtggctgacg tgacccccaa caacaaggag ggagagtctg caccagcagc gaagccatta tactccacat agaaaagaaa tgccagcatt atctgtgccc attaagcaaa atgtttaaag acacaacgga atagacccaa aaagataatt tctatctgat ttgctttaaa acgttttttt aggatcacaa tgatatcttt gctgtatttg tatagttaga tgctaaatgc tcattgaaac aatcagctaa tttatgtata gattttccag ctctcaagtt gccatgggcc ttcatgctat ttaaatattt aagtaattta tgtatttatt agtatattac tgttatttaa cgtttgtctg ccaggatgta tggaatgttt catactctta tgacctgatc catcaggatc agtccctatt atgcaaaat 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 •57· 151613-序列表.doc 1399 201121567 <210> 147 <211> 328 <212> PRT <213> 智人 <400> 147
Met Cys His Gin Gin Leu Val lie Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu 1 5 10 15
Ala Ser Pro Leu Val Ala lie Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val 20 25 30
Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu 35 40 45
Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly lie Thr Trp Thr Leu Asp Gin 50 55 60
Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr lie Gin Val Lys 65 70 75 80
Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gin Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val 85 90 95
Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly lie Trp 100 105 110
Ser Thr Asp lie Leu Lys Asp Gin Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe 115 120 125
Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp 130 135 140
Leu Thr Thr lie Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg 145 150 155 160
Gly Ser Ser Asp Pro Gin Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser 165 170 175
Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu 180 185 190
Cys Gin Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro lie 195 200 205
Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr 210 215 220
Ser Ser Phe Phe lie Arg Asp lie lie Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn 225 230 235 240
Leu Gin Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gin Val Glu Val Ser Trp 245 250 255 58· 151613·序列表.doc 201121567
Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser 260
Phe Cys Val Gin Val Gin Gly 275
Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser 290 295
Ser lie Ser Val Arg Ala Gin . 305 310
Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys . 325
Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr 265 270
Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg 280 285
Ala Thr Val lie Cys Arg Lys Asn Ala 300
Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser 315 320
Ser <210> 148 <211> 2826 <212> DNA <213> 智人 <400> 148 acaagggtgg cagcctggct ctgaagtgga attatgtgct tcaaacaggt tgaaagaggg aaacagtctt ttcctgcttc cagacatgaa tcaggtcact attcaatggg atgcagtaat agccctttac atactcttca gctggtgtca tggaggaatt acaaatataa actgctctgg ccacatctgg gtagaaccag ccacaatttt taagatgggt atgaatatct ctatatattg ccaagcagca attaagaact gccaaccaag gaaacttcat ttttataaaa atggcatcaa agaaagattt caaatcacaa ggattaataa aacaacagct cggctttggt ataaaaactt tctggaacca catgcttcta tgtactgcac tgctgaatgt cccaaacatt ttcaagagac actgatatgt ggaaaagaca tttcttctgg atatccgcca gatattcctg atgaagtaac ctgtgtcatt tatgaatatt caggcaacat gacttgcacc tggaatgctg ggaagctcac ctacatagac acaaaatacg tggtacatgt gaagagttta gagacagaag aagagcaaca gtatctcacc tcaagctata ttaacatctc cactgattca ttacaaggtg gcaagaagta cttggtttgg gtccaagcag caaacgcact aggcatggaa gagtcaaaac aactgcaaat tcacctggat gatatagtga taccttctgc agccgtcatt tccagggctg agactataaa tgctacagtg cccaagacca taatttattg ggatagtcaa acaacaattg aaaaggtttc ctgtgaaatg agatacaagg ctacaacaaa ccaaacttgg aatgttaaag aatttgacac caattttaca tatgtgcaac agtcagaatt ctacttggag ccaaacatta agtacgtatt tcaagtgaga tgtcaagaaa caggcaaaag gtactggcag ccttggagtt cactgttttt tcataaaaca cctgaaacag ttccccaggt cacatcaaaa gcattccaac atgacacatg 151613-序列表.doc •59- 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 201121567 gaattctggg ctaacagttg cttccatctc tacagggcac cttacttctg acaacagagg 1140 agacattgga cttttattgg gaatgatcgt ctttgctgtt atgttgtcaa ttctttcttt 1200 gattgggata tttaacagat cattccgaac tgggattaaa agaaggatct tattgttaat 1260 accaaagtgg ctttatgaag atattcctaa tatgaaaaac agcaatgttg tgaaaatgct 1320 acaggaaaat agtgaactta tgaataataa ttccagtgag caggtcctat atgttgatcc 1380 catgattaca gagataaaag aaatcttcat cccagaacac aagcctacag actacaagaa 1440 ggagaataca ggacccctgg agacaagaga ctacccgcaa aactcgctat tcgacaatac 1500 tacagttgta tatattcctg atctcaacac tggatataaa ccccaaattt caaattttct 1560 gcctgaggga agccatctca gcaataataa tgaaattact tccttaacac ttaaaccacc 1620 agttgattcc ttagactcag gaaataatcc caggttacaa aagcatccta attttgcttt 1680 ttctgtttca agtgtgaatt cactaagcaa cacaatattt cttggagaat taagcctcat 1740 attaaatcaa ggagaatgca gttctcctga catacaaaac tcagtagagg aggaaaccac 1800 catgcttttg gaaaatgatt cacccagtga aactattcca gaacagaccc tgcttcctga I860 tgaatttgtc tcctgtttgg ggatcgtgaa tgaggagttg ccatctatta atacttattt 1920 tccacaaaat attttggaaa gccacttcaa taggatttca ctcttggaaa agtagagctg 1980 tgtggtcaaa atcaatatga gaaagctgcc ttgcaatctg aacttgggtt ttccctgcaa 2040 tagaaattga attctgcctc tttttgaaaa aaatgtattc acatacaaat cttcacatgg 2100 acacatgttt tcatttccct tggataaata cctaggtagg ggattgctgg gccatatgat 2160 aagcatatgt ttcagttcta ccaatcttgt ttccagagta gtgacatttc tgtgctccta 2220 ccatcaccat gtaagaattc ccgggagctc catgcctttt taattttagc cattcttctg 2280 cctcatttct taaaattaga gaattaaggt cccgaaggtg gaacatgctt catggtcaca 2340 catacaggca caaaaacagc attatgtgga cgcctcatgt attttttata gagtcaacta 2400 tttcctcttt attttccctc attgaaagat gcaaaacagc tctctattgt gtacagaaag 2460 ggtaaataat gcaaaatacc tggtagtaaa ataaatgctg aaaattttcc tttaaaatag 2520 aatcattagg ccaggcgtgg tggctcatgc ttgtaatccc agcactttgg taggctgagg 2580 taggtggatc acctgaggtc aggagttcga gtccagcctg gccaatatgc tgaaaccctg 2640 tctctactaa aattacaaaa attagccggc catggtggca ggtgcttgta atcccagcta 2700 cttgggaggc tgaggcagga gaatcacttg aaccaggaag gcagaggttg cactgagctg 2760 agattgtgcc actgcactcc agcctgggca acaagagcaa aactctgtct ggaaaaaaaa 2820 -60- 151613·序列表.doc 201121567 aaaaaa 2826 <210> 149 <211> 629 <212> PRT <213> 智人 <400> 149
Met Asn Gin Val Thr lie Gin Trp Asp Ala Val lie Ala Leu Tyr lie 15 10 15
Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly lie Thr Asn lie Asn Cys Ser Gly 20 25 30
His lie Trp Val Glu Pro Ala Thr lie Phe Lys Met Gly Met Asn lie 35 40 45
Ser lie Tyr Cys Gin Ala Ala lie Lys Asn Cys Gin Pro Arg Lys Leu 50 55 60
His Phe Tyr Lys Asn Gly lie Lys Glu Arg Phe Gin lie Thr Arg lie 65 70 75 80
Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His 85 90 95
Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gin Glu Thr 100 105 110
Leu lie Cys Gly Lys Asp lie Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp lie Pro 115 120 125
Asp Glu Val Thr Cys Val lie Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys 130 135 140
Thr Trp Asn Ala Gly Lys Leu Thr Tyr lie Asp Thr Lys Tyr Val Val 145 150 155 160
His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu Glu Gin Gin Tyr Leu Thr Ser 165 170 175
Ser Tyr lie Asn lie Ser Thr Asp Ser Leu Gin Gly Gly Lys Lys Tyr 180 185 190
Leu Val Trp Val Gin Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys 195 200 205
Gin Leu Gin lie His Leu Asp Asp lie Val lie Pro Ser Ala Ala Val 210 215 220 lie Ser Arg Ala Glu Thr lie Asn Ala Thr Val Pro Lys Thr lie lie 225 230 235 240
Tyr Trp Asp Ser Gin Thr Thr lie Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg 245 250 255 •61 · 151613-序列表.doc 201121567 Tyr Lys Ala Thr Thr Asn Gin Thr Trp Asn Val Lys Glu Phe Asp Thr 260 265 270 As η Phe Thr Tyr Val Gin Gin Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn lie 275 280 285 Lys Tyr Val Phe Gin Val Arg Cys Gin Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp 290 295 300 Gin Pro Trp Ser Ser Leu Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro 305 310 315 320 Gin Val Thr Ser Lys Ala Phe Gin His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu 325 330 335 Thr Val Ala Ser lie Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly 340 345 350 Asp lie Gly Leu Leu Leu Gly Met He Val Phe Ala Val Met Leu Ser 355 360 365 lie Leu Ser Leu lie Gly He Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly lie 370 375 380 Lys Arg Arg lie Leu Leu Leu lie Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp lie 385 390 395 400 Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gin Glu Asn Ser 405 410 415 Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gin Val Leu Tyr Val Asp Pro 420 425 430 Met lie Thr Glu lie Lys Glu lie Phe lie Pro Glu His Lys Pro Thr 435 440 445 Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 450 455 460 Gin Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr lie Pro Asp Leu 465 470 475 480 Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gin lie Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 485 490 495 His Leu Ser Asn Asn Asn Glu lie Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 500 505 510 Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gin Lys His Pro 515 520 525 Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr lie 530 535 540 Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu lie Leu Asn Gin Gly Glu Cys Ser Ser 545 550 555 560 151613·序列表.doc 62- 201121567
Pro Asp lie Gin Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 565 570 575
Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr lie Pro Glu Gin Thr Leu Leu Pro Asp 580 585 590
Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly lie Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser lie 595 600 605
Asn Thr Tyr Phe Pro Gin Asn lie Leu Glu Ser His Phe Asn Arg lie . 610 615 620
Ser Leu Leu Glu Lys . 625 <210> 150 <211> 2100 <212> DNA <213> 智人 <400> 150 ggtggctgaa cctcgcaggt ggcagagagg ctcccctggg gctgtggggc tctacgtgga tccgatggag ccgctggtga cctgggtggt ccccctcctc ttcctcttcc tgctgtccag gcagggcgct gcctgcagaa ccagtgagtg ctgttttcag gacccgccat atccggatgc agactcaggc tcggcctcgg gccctaggga cctgagatgc tatcggatat ccagtgatcg ttacgagtgc tcctggcagt atgagggtcc cacagctggg gtcagccact tcctgcggtg ttgccttagc tccgggcgct gctgctactt cgccgccggc tcagccacca ggctgcagtt ctccgaccag gctggggtgt ctgtgctgta cactgtcaca ctctgggtgg aatcctgggc caggaaccag acagagaagt ctcctgaggt gaccctgcag ctctacaact cagttaaata tgagcctcct ctgggagaca tcaaggtgtc caagttggcc gggcagctgc gtatggagtg ggagaccccg gataaccagg ttggtgctga ggtgcagttc cggcaccgga cacccagcag cccatggaag ttgggcgact gcggacctca ggatgatgat actgagtcct gcctctgccc cctggagatg aatgtggccc aggaattcca gctccgacga cggcagctgg ggagccaagg • aagttcctgg agcaagtgga gcagccccgt gtgcgttccc cctgaaaacc ccccacagcc tcaggtgaga ttctcggtgg agcagctggg ccaggatggg aggaggcggc tgaccctgaa agagcagcca acccagctgg agcttccaga aggctgtcaa gggctggcgc ctggcacgga ggtcacttac cgactacagc tccacatgct gtcctgcccg tgtaaggcca aggccaccag gaccctgcac ctggggaaga tgccctatct ctcgggtgct gcctacaacg tggctgtcat ctcctcgaac caatttggtc ctggcctgaa ccagacgtgg cacattcctg ccgacaccca 151613·序列表.doc • 63 · 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 201121567 cacagaacca gtggctctga atatcagcgt cggaaccaac gggaccacca tgtattggcc agcccgggct cagagcatga cgtattgcat tgaatggcag cctgtgggcc aggacggggg ccttgccacc tgcagcctga ctgcgccgca agacccggat ccggctggaa tggcaaccta cagctggagt cgagagtctg gggcaatggg gcaggaaaag tgttactaca ttaccatctt tgcctctgcg caccccgaga agctcacctt gtggtctacg gtcctgtcca cctaccactt tgggggcaat gcctcagcag ctgggacacc gcaccacgtc tcggtgaaga atcatagctt ggactctgtg tctgtggact gggcaccatc cctgctgagc acctgtcccg gcgtcctaaa ggagtatgtt gtccgctgcc gagatgaaga cagcaaacag gtgtcagagc atcccgtgca gcccacagag acccaagtta ccctcagtgg cctgcgggct ggtgtagcct acacggtgca ggtgcgagca gacacagcgt ggctgagggg tgtctggagc cagccccagc gcttcagcat cgaagtgcag gtttctgatt ggctcatctt cttcgcctcc ctggggagct tcctgagcat ccttctcgtg ggcgtccttg gctaccttgg cctgaacagg gccgcacggc acctgtgccc gccgctgccc acaccctgtg ccagctccgc cattgagttc cctggaggga aggagacttg gcagtggatc aacccagtgg acttccagga agaggcatcc ctgcaggagg ccctggtggt agagatgtcc tgggacaaag gcgagaggac tgagcctctc gagaagacag agctacctga gggtgcccct gagctggccc tggatacaga gttgtccttg gaggatggag acaggtgcaa ggccaagatg tgatcgttga ggctcagaga gggtgagtga ctcgcccgag gctacgtagc <210> 151 <211> 662 <212> PRT <213> 智人 <400> 151
Met Glu Pro Leu Val Thr Trp Val Val Pro Leu Leu Phe Leu Phe Leu 15 10 15 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100
Cys Cys Phe Gin 30 Ser Gly Pro Arg 45 Glu Cys Ser Trp
Leu Arg Cys Cys 80
Leu Ser Arg Gin Gly Ala 20 Asp Pro Pro Tyr Pro Asp 35 Asp Leu Arg Cys Tyr Arg 50 Gin Tyr Glu Gly Pro Thr 65 70
Ala Cys Arg Thr Ser Glu 25 Ala Asp Ser Gly Ser Ala 40 lie Ser Ser Asp Arg Tyr 55 60 Ala Gly Val Ser His Phe 75 •64· 151613-序列表.doc 201121567
Leu Ser Ser Gly Arg Cys Cys Tyr Phe Ala Ala Gly Ser Ala Thr Arg 85 90 95
Leu Gin Phe Ser Asp Gin Ala Gly Val Ser Val Leu Tyr Thr Val Thr 100 105 110
Leu Trp Val Gin Ser Trp Ala Arg Asn Gin Thr Glu Lys Ser Pro Glu 115 120 125
Val Thr Leu Gin Leu Tyr Asn Ser Val Lys Tyr Glu Pro Pro Leu Gly ， 130 135 140
Asp lie Lys Val Ser Lys Leu Ala Gly Gin Leu Arg Met Glu Trp Glu • 145 150 155 160
Thr Pro Asp Asn Gin Val Gly Ala Glu Val Gin Phe Arg His Arg Thr 165 170 175
Pro Ser Ser Pro Trp Lys Leu Gly Asp Cys Gly Pro Gin Asp Asp Asp 180 185 190
Thr Glu Ser Cys Leu Cys Pro Leu Glu Met Asn Val Ala Gin Glu Phe 195 200 205
Gin Leu Arg Arg Arg Gin Leu Gly Ser Gin Gly Ser Ser Trp Ser Lys 210 215 220
Trp Ser Ser Pro Val Cys Val Pro Pro Glu Asn Pro Pro Gin Pro Gin 225 230 235 240
Val Arg Phe Ser Val Glu Gin Leu Gly Gin Asp Gly Arg Arg Arg Leu 245 250 255
Thr Leu Lys Glu Gin Pro Thr Gin Leu Glu Leu Pro Glu Gly Cys Gin 260 265 270
Gly Leu Ala Pro Gly Thr Glu Val Thr Tyr Arg Leu Gin Leu His Met 275 280 285
Leu Ser Cys Pro Cys Lys Ala Lys Ala Thr Arg Thr Leu His Leu Gly 290 295 300
Lys Met Pro Tyr Leu Ser Gly Ala Ala Tyr Asn Val Ala Val lie Ser 305 310 315 320
Ser Asn Gin Phe Gly Pro Gly Leu Asn Gin Thr Trp His lie Pro Ala . 325 330 335
Asp Thr His Thr Glu Pro Val Ala Leu Asn lie Ser Val Gly Thr Asn . 340 345 350
Gly Thr Thr Met Tyr Trp Pro Ala Arg Ala Gin Ser Met Thr Tyr Cys 355 360 365 lie Glu Trp Gin Pro Val Gly Gin Asp Gly Gly Leu Ala Thr Cys Ser 370 375 380 •65· 151613·序列表.doc 201121567
Leu Thr Ala Pro Gin Asp Pro Asp Pro Ala Gly Met Ala Thr Tyr Ser 385 390 395 400
Trp Ser Arg Glu Ser Gly Ala Met Gly Gin Glu Lys Cys Tyr Tyr lie 405 410 415
Thr lie Phe Ala Ser Ala His Pro Glu Lys Leu Thr Leu Trp Ser Thr 420 425 430
Val Leu Ser Thr Tyr His Phe Gly Gly Asn Ala Ser Ala Ala Gly Thr 435 440 445
Pro His His Val Ser Val Lys Asn His Ser Leu Asp Ser Val Ser Val 450 455 460
Asp Trp Ala Pro Ser Leu Leu Ser Thr Cys Pro Gly Val Leu Lys Glu 465 470 475 480
Tyr Val Val Arg Cys Arg Asp Glu Asp Ser Lys Gin Val Ser Glu His 485 490 495
Pro Val Gin Pro Thr Glu Thr Gin Val Thr Leu Ser Gly Leu Arg Ala 500 505 510
Gly Val Ala Tyr Thr Val Gin Val Arg Ala Asp Thr Ala Trp Leu Arg 515 520 525
Gly Val Trp Ser Gin Pro Gin Arg Phe Ser lie Glu Val Gin Val Ser 530 535 540
Asp Trp Leu lie Phe Phe Ala Ser Leu Gly Ser Phe Leu Ser lie Leu 545 550 555 560
Leu Val Gly Val Leu Gly Tyr Leu Gly Leu Asn Arg Ala Ala Arg His 565 570 575
Leu Cys Pro Pro Leu Pro Thr Pro Cys Ala Ser Ser Ala lie Glu Phe 580 585 590
Pro Gly Gly Lys Glu Thr Trp Gin Trp lie Asn Pro Val Asp Phe Gin 595 600 605
Glu Glu Ala Ser Leu Gin Glu Ala Leu Val Val Glu Met Ser Trp Asp 610 615 620
Lys Gly Glu Arg Thr Glu Pro Leu Glu Lys Thr Glu Leu Pro Glu Gly 625 630 635 640
Ala Pro Glu Leu Ala Leu Asp Thr Glu Leu Ser Leu Glu Asp Gly Asp 645 650 655
Arg Cys Lys Ala Lys Met 660 <210> 152 <211> 360
<212> DNA 66- 151613·序列表.doc 201121567 <213> 智人 <400> 152 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggcacatcc attacagtgg gaacacctac 180 r tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaatcagttc 240 tccctgaaac tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgcgaaat 300 cgcgggttct actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 153 <211> 120 <212> PRT <213> 智人 <400> 153
Gin Val Gin Leu Gin Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gin 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45
Trp lie Gly His lie His Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95
Cys Ala Arg Asn Arg Gly Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 154 <211> 23 <212> PRT <213〉 人造序列 <220> <223> 蜜蜂蜂毒狀信號 <400> 154 ·67· 151613·序列表.doc 201121567
Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr lie 15 10 15
Ser Tyr lie Tyr Ala Ala Ala 20 <210> 155 <211> 6 <212> PRT <213> 人造序列 <220> <223〉 His 標籤 <400> 155
His His His His His His 1 5 68- 151613·序列表.doc

Claims (1)

  1. 201121567 七、申請專利範圍·· 1. 一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含至少一 個重鏈可變區包含選自由以下組成之群的CDRH1、 CDRH2及 CDRH3 : a) 與表3所示之CDRH1有不超過一個胺基酸取代、插 入或缺失不同之CDRH1 ; b) 與表3所示之CDRH2有不超過三個胺基酸取代、插 入及/或缺失不同之CDRH2 ; c) 與表3所示之CDRH3有不超過三個胺基酸取代、插 入及/或缺失不同之CDRH3 ;及 包含至少一個輕鏈可變區包含選自由以下組成之群的 CDRL1、CDRL2及 CDRL3 : d) 與表3所示之CDRL 1有不超過三個胺基酸取代、插入 及/或缺失不同的CDRL1 ; e) 與表3所示之CDRL2有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同之CDRL2 ; f) 與表3所示之CDRL3有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同之CDRL3。 2. 如請求項1之經分離之抗原結合蛋白，其包含至少一個 重鏈可變區包含選自由以下組成之群的CDRH1、CDRH2 及CDRH3: a) 與表3所示之CDRH1有不超過一個胺基酸取代、插 入或缺失不同之CDRH1 ; b) 與表3所示之CDRH2有不超過兩個胺基酸取代、插 151613.doc 201121567 入及/或缺失不同之CDRH2 ; c) 與表3所示之CDRH3有不超過兩個胺基酸取代、插 入及/或缺失不同之CDRH3 ;及 亦包含至少一個輕鏈可變區包含選自由以下組成之群 的CDRL1、CDRL2及 CDRL3 : d) 與表3所示之CDRL1有不超過兩個胺基酸取代、插入 及/或缺失不同的CDRL1 ; e) 與表3所示之CDRL2有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同之CDRL2 ; f) 與表3所示之CDRL3有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同之CDRL3。 3.如請求項1之經分離之抗原結合蛋白，其包含至少一個 重鏈可變區包含選自由以下組成之群的CDRH1、CDRH2 及CDRH3: a) 與表3所示之CDRH1有不超過一個胺基酸取代、插 入或缺失不同之CDRH1 ; b) 與表3所示之CDRH2有不超過一個胺基酸取代、插 入或缺失不同之CDRH2 ; c) 與表3所示之CDRH3有不超過一個胺基酸取代、插 入或缺失不同之CDRH3 ;及 亦包含至少一個輕鏈可變區包含選自由以下組成之群 的CDRL1、CDRL2及 CDRL3 : d) 與表3所示之CDRL1有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同的CDRL1 ; 151613.doc 201121567 e) 與表3所示之CDRL2有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同之CDRL2 ; f) 與表3所示之CDRL3有不超過一個胺基酸取代、插入 或缺失不同之CDRL3。 4· 一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其係選自由以 下組成之群： a) 具有 SEQ ID NO:129 之 CDRH1、SEQ ID NO:132 之 CDRH2、SEQ ID NO: 136 之 CDRH3、以及 SEQ ID NO:123 之 CDRL1、SEQ ID NO:81 之 CDRL2 及 SEQ ID NO:76之CDRL3的抗原結合蛋白； b) 具有 SEQ ID NO:131 之 CDRH1、SEQ ID NO:134 之 CDRH2、SEQ ID NO: 137 之 CDRH3、以及 SEQ ID NO:124 之 CDRL1、SEQ ID N0126 之 CDRL2 及 SEQ ID NO:128之CDRL3的抗原結合蛋白； c) 具有 SEQ ID ΝΟ··130 之 CDRH1、SEQ ID ΝΟ··133 之 CDRH2、SEQ ID NO:99之 CDRH3、以及 SEQ ID NO: 68 之 CDRL1、SEQ ID NO:69之 CDRL2及 SEQ ID NO: 67之 CDRL3的抗原結合蛋白；及 d) 具有 CDRH1 SEQ ID NO:91 ' CDRH2 SEQ ID NO: 135、CDRH3 SEQ ID NO:138、以及CDRL1 SEQ ID NO: 125、CDRL2 SEQ ID NO:127及 CDRL3 SEQ ID NO:64之 抗原結合蛋白。 5.如請求項1之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 選自由SEQ ID ΝΟ:91、94、97、100及103組成之群的 151613.doc 201121567 CDRHl； 選自由 SEQ ID NO:92、95、98、101、104、107及 110 組成之群的CDRH2 ; 選自由SEQ ID NO:93、96、99、102及105組成之群的 CDRH3； 選自由SEQ ID NO:62、65、68、71及74組成之群的 CDRL1 ； 選自由SEQ ID NO:63、66、69、72、75及78組成之群 的CDRL2 ;及 選自由SEQ ID NO:64、67、70及73組成之群的 CDRL3。 6. 如請求項1之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 選自由 SEQ ID NO:91、106、109、112及 115組成之群 的 CDRH1 ; 選自由 SEQ ID NO:113、116、118、120、121及 122組 成之群的CDRH2 ; 選自由 SEQ ID NO: 108、111、114、117 及 119 組成之 群的CDRH3 ; 選自由 SEQ ID NO:77、80、83、85、86、87、88、89 及90組成之群的CDRL1 ; CDRL2為 SEQ ID NO:81 ;及 選自由SEQ ID NO:76、79、82及84組成之群的 CDRL3。 7. —種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含至少一 151613.doc -4- 201121567 個重鏈可變區及至少一個輕鏈可變區，選自由以下組成 之群： a) 包含SEQ ID NO:31之胺基酸殘基31-35、50-65及99-113的重鏈可變區；及 包含SEQ ID ΝΟ:1之胺基酸殘基23-36、52-58及Μ- ΐ 01 的 輕鏈可 變區； b) 包含SEQ ID ΝΟ:34之胺基酸殘基31-35、50-65及99-110的重鏈可變區及包含SEQ ID ΝΟ:36之胺基酸殘基31-35、50-66及99-110的重鏈可變區；及 包含SEQ ID ΝΟ:4之胺基酸殘基23-36、52-62及97- 105的輕鏈可變區； c) 包含SEQ ID ΝΟ:38之胺基酸殘基31-35、50-66及99-114的重鏈可變區；及 包含SEQ ID ΝΟ:7之胺基酸殘基23·34、50-61及94· 106的輕鏈可變區； d) 包含SEQ ID ΝΟ:40之胺基酸殘基31-35、50-66及99-114的重鏈可變區；及 包含SEQ ID ΝΟ:9之胺基酸殘基24-34、50-56及94- 106的輕鏈可變區； e) 包含SEQ ID ΝΟ:42之胺基酸殘基31-35、50-66及99-114的重鏈可變區；及 包含SEQ ID ΝΟ:11之胺基酸殘基23-34、50-61及94- 106的輕鏈可變區； f) 包含SEQ ID ΝΟ··44之胺基酸殘基31-35、50-65及98- 151613.doc 201121567 107的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:13之胺基酸殘基24-34、50-56及89- 97的輕鏈可變區； g) 包含SEQ ID NO:46或153之胺基酸殘基31-3 7、52-67 及100-109的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:15之胺基酸殘基24-34、50-56及89-97的輕鏈可變區； h) 包含SEQ ID NO:48之胺基酸殘基31-37、52-67及 100- 109的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:17之胺基酸殘基24-34、50-56及89-97的輕鏈可變區； 0包含SEQ ID NO:50之胺基酸殘基31-37、52-67及 101- 109的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:19之胺基酸殘基24-34、50-56及89- 97的輕鏈可變區； j) 包含SEQ ID NO:52之胺基酸殘基31-35、50-65及98-107的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:21之胺基酸殘基24-34、50-56及98-107的輕鏈可變區； k) 包含SEQ ID NO:54之胺基酸殘基31-37、52-67及 100-109的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:23之胺基酸殘基24-34、50-56及89-97的輕鏈可變區； l) 包含SEQ ID NO:56之胺基酸殘基31-37、52-67及 151613.doc -6 - 201121567 100-109的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:25之胺基酸殘基24-34、50-56及89- 97的輕鏈可變區；及 m)包含SEQ ID NO:58之胺基酸殘基31-37、52-57及 100-109的重鏈可變區；及 包含SEQ ID NO:27之胺基酸殘基24-34、50-56及89- 97的輕鏈可變區。 8. 如請求項1之經分離之抗原結合蛋白，其包含至少—個 重鏈可變區及至少一個輕鏈可變區。 9. 如請求項1之經分離之抗原結合蛋白，其包含至少兩個 重鏈可變區及至少兩個輕鏈可變區。 10· —種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含重鍵可 變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區序列與表2所示 之重鏈可變區序列有不超過13個胺基酸取代、添加及/或 缺失不同；且其中該輕鏈可變區序列與表1所示之輕鏈 可變區序列有不超過13個胺基酸取代、添加及/或缺失不 同。 11. 如請求項1 〇之經分離之抗原結合蛋白，其中該重鏈可變 區序列與表2所示之重鏈可變區序列有不超過η個胺基 酸取代、插入及/或缺失不同。 12. 如請求項1〇之經分離之抗原結合蛋白，其中該重鏈可變 區序列與表2所示之重鏈可變區序列有不超過5個胺基酸 取代、插入及/或缺失不同。 13. 如請求項1〇之經分離之抗原結合蛋白，其中該重鏈可變 151613.doc 201121567 區序列與表2所示之重鏈可變區序列有不超過2個胺基酸 取代、插入及/或缺失不同。 14.如請求項1〇之經分離之抗原結合蛋白，其中該重鏈可變 區序列與表2所示之重鏈可變區序列有不超過1個胺基酸 取代、插入或缺失不同。 1 5.如請求項1 〇之經分離之抗原結合蛋白，其中該輕鏈可變 區序列與表1所示之輕鏈可變區序列有不超過7個胺基酸 取代、插入及/或缺失不同。 16. 如請求項10之經分離之抗原結合蛋白，其中該輕鏈可變 區序列與表1所示之輕鏈可變區序列有不超過4個胺基酸 取代、插入及/或缺失不同。 17. 如請求項10之經分離之抗原結合蛋白，其中該輕鍵可變 區序列與表1所示之輕鏈可變區序列有不超過2個胺基酸 取代、插入及/或缺失不同。 18. 如請求項10之經分離之抗原結合蛋白，其中該輕鏈可變 區序列與表1所示之輕鍵可變區序列有不超過1個胺基酸 取代、插入及/或缺失不同。 19. 一種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其係選自由以 下組成之群： a) SEQ ID NO:140之重鏈可變區及SEQ ID NO:30之輕 鏈可變區； b) SEQ ID NO:141之重鏈可變區及SEQ ID N0..61之輕 鏈可變區； c) SEQIDNO:142之重鏈可變區及SEQIDNO:4之輕鏈 I51613.doc -8- 201121567 可變區；及 (1)8£〇10 1<0:143之重鏈可變區及8£(^10>10:139之輕 鍵可變區。 20. —種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與 SEQ ID NO:31、34、36、38、40、42、44、 46、48、50、52、54、56及58具有至少90%序列一致性 之胺基酸序列的重鏈可變區；及 包含與 SEQ ID ΝΟ:1、4、7、9、11、13、15、17、 19、21、23、25及27具有至少90°/〇序歹一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 21. 如請求項20之經分離之抗原結合蛋白， 包含與 SEQ ID NO:31、34、36、38、40、42、44、 46、48、50、52、54、56及58具有至少95%序歹一致性 之胺基酸序列的重鏈可變區；及 包含與 SEQ ID ΝΟ:1、4、7、9、11、13、15、17、 19、21、23、25及27具有至少95%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 22. 如請求項20之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與 SEQ ID NO:31、34、36、38、40、42、44、 46、48、50、52、54、56及58具有至少97%序列一致性 之胺基酸序列的重鏈可變區；及 包含與 SEQ ID ΝΟ:1、4、7、9、11、13、15、17、 19、21、23、25及27具有至少97%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 151613.doc -9- 201121567 23. 如請求項20之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與 SEQ ID NO:31、34、36、38、40、42、44、 46、48、50、52、54、56及58具有至少98%序列一致性 之胺基酸序列的重鍵可變區；及 包含與 SEQ ID ΝΟ:1、4、7、9、11、13、15、17、 19、21、23、25及27具有至少98%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 24. 如請求項20之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 選自由 SEQ ID NO:44、46、48、50、52、54、56、58 及153組成之群的重鏈可變區，及 選自由 SEQ ID NO:13、15、17、19、21、23、25及 27 組成之群的輕鍵可變區。 25. 如請求項20之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 選自由SEQ ID NO:31、34、36、38、40及42組成之群 的重鍵可變區，及 選自由SEQ ID ΝΟ:1、4、7、9及11組成之群的輕鍵可 變區。 26. —種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含選自由 以下組成之群的重键可變區及輕鍵可變區： a) SEQ ID NO:31之重鏈可變區及SEQ ID ΝΟ:1之輕键 可變區； b) SEQIDN0:34或36之重鏈可變區及SEQIDN0.4之 輕鏈可變區； c) SEQ ID NO:38之重鏈可變區及SEQ ID N〇:7之輕键 151613.doc -10- 201121567 可變區； d) SEQ ID NO:40之重鏈可變區及SEQ ID NO:9之輕鏈 可變區； e) SEQ ID NO:42之重鏈可變區及SEQ ID ΝΟ:11之輕鏈 可變區； f) SEQ ID NO:44之重鏈可變區及SEQ ID NO:13之輕鏈 可變區； g) SEQ ID NO:46 或 153 之重鏈可變區及 SEQ ID NO:15 之輕鍵可變區； h) SEQIDNO:48之重鏈可變區及SEQIDNO:17之輕鏈 可變區； i) SEQ ID NO:50之重鏈可變區及SEQ ID NO:19之輕鏈 可變區； j) SEQ ID NO:52之重鏈可變區及SEQ ID NO:21之輕鏈 可變區； 1〇8£(^10>10:54之重鏈可變區及3£(^10>40:23之輕鏈 可變區； l) SEQ ID NO:56之重鏈可變區及SEQ ID NO:25之輕鏈 可變區；及 m) SEQ IDNO:58之重鏈可變區及SEQ ID NO:27之輕鏈 可變區。 27. —種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 至少一個包含CDRH1、CDRH2及CDRH3之重鏈可變 區，其中該CDRH1包含根據AHO編號系統位置33之絲胺 151613.doc 201121567 酸、位置34及38之甘胺酸、及位置39及40之酪胺酸；該 CDRH2包含根據AHO編號系統位置59之組胺酸、位置67 之天冬醯胺酸、位置68之蘇胺酸、位置69之酪胺酸 '及 位置75之離胺酸；且該CDRH3包含根據AHO編號系統位 置110之精胺酸、位置111之甘胺酸、位置112之苯丙胺 酸、及位置133及134之酿·胺酸；及 至少一個包含CDRL1、CDRL2及CDRL3之輕鏈可變 區’其中該CDRL1包含根據AHO編號系統位置32及33之 絲胺酸、及位置40之色胺酸；該CDRL2包含根據AHO編 號系統位置58之丙胺酸、位置68、69及72之絲胺酸殘 基；且該CDRL3包含根據AHO編號系統位置11 〇之天冬 酿胺酸、及位置13 5之苯丙胺酸。 28. 如請求項27之結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包 含： 至少一個重鏈可變區包含根據AHO編號系統位置33及 65之絲胺酸、位置34、38及111之甘胺酸、位置39、 40、69、133及134之酷·胺酸、位置59之組胺酸、位置67 之天冬酿胺酸、位置68之蘇胺酸、位置75之離胺酸、位 置Π0之精胺酸、及位置112之苯丙胺酸；及 至少一個輕鏈可變區包含根據AHO編號系統位置32、 33、68、69、72及111之絲胺酸、位置40之色胺酸、位 置57之酷·胺酸、位置58及109之丙胺酸、位置11〇之天冬 醯胺酸、及位置135及137之苯丙胺酸。 29. 如請求項28之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 151613.doc 12 201121567 包含與SEQ ID NO:46具有至少90%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID NO:15具有至少90%序列一致性之胺基 酸序列的輕鏈可變區。 3 0.如請求項2 8之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與SEQ ID NO:46具有至少95%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID NO:15具有至少95%序列一致性之胺基 酸序列的輕鏈可變區。 3 1.如請求項28之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與SEQ ID NO:46具有至少97%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID NO: 15具有至少97%序列一致性之胺基 酸序列的輕鏈可變區。 32. 如請求項28之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與SEQ ID NO:46具有至少98%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID NO:15具有至少98%序列一致性之胺基 酸序列的輕鏈可變區。 33. —種結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 至少一個包含CDRH1、CDRH2及CDRH3之重鏈可變 區，其中該CDRH1包含根據AHO編號系統位置33之絲胺 酸、及位置39之酪胺酸；該CDRH2包含根據AHO編號系 統位置59之色胺酸、及位置60及69之酪胺酸；且該 151613.doc -13- 201121567 CDRH3包含根據AHO編號系統位置111之甘胺酸、位置 112及132之酪胺酸、位置114及115之絲胺酸、位置131之 色胺酸、及位置133之脯胺酸；及 至少一個包含CDRL1、CDRL2及CDRL3之輕鏈可變 區’其中該CDRL1包含根據AHO編號系統位置33之丙胺 酸、位置34之甘胺酸、位置39之酪胺酸、及位置40之天 冬胺酸；該CDRL2包含根據AHO編號系統位置58之甘胺 酸、及位置69之天冬醯胺酸；且該CDRL3包含根據AHO 編號系統位置109之酪胺酸、及位置135之絲胺酸。 34.如請求項33之結合IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其包 含： 至少一個重鏈可變區包含根據AHO編號系統位置1之 麩胺酸、位置27及111之甘胺酸、位置30及113之蘇胺 酸、位置32、33、114及115之絲胺酸、位置39、60、 69、112及132之酪胺酸、位置59及131之色胺酸、位置 86之離胺酸、位置11〇之精胺酸、及位置133之脯胺酸；及 至少一個輕鏈可變區包含根據AHO編號系統位置3 1之 蘇胺酸、位置33之丙胺酸、位置34及58之甘胺酸、位置 39、57及109之酪胺酸、位置4〇之天冬胺酸、位置69之 天冬酿胺酸、位置82之離胺酸、位置135之絲胺酸、及 位置137之色胺酸。 3 5.如請求項34之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與SEQ ID NO:31具有至少90%序列一致性之胺基 酸序列的重鍵可變區；及 151613.doc -14· 201121567 包含與SEQ ID NO: 1具有至少9〇%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 36.如請求項34之經分離之抗原結合蛋白，其包含： • 包含與SEQ ID N〇:3 1具有至少95%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID ΝΟ:1具有至少95%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 3 7.如請求項34之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與SEQ ID NO:31具有至少97%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID ΝΟ:1具有至少97%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 38.如請求項34之經分離之抗原結合蛋白，其包含： 包含與SEQ ID NO:31具有至少98%序列一致性之胺基 酸序列的重鏈可變區；及 包含與SEQ ID NO: 1具有至少98%序列一致性之胺基酸 序列的輕鏈可變區。 3 9.如清求項i、4、7、1〇、ι9、2〇、26、27或33之經分離 • 之抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白為抗體。 ' 4〇.如睛求項39之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗體為單 株抗體、重組抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗 體' 多特異性抗體，或其抗體片段。 41.如請求項4〇之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗體片段 為Fab片段、Fab，片段、F(ab，）2片段、Fv片段、雙功能抗 151613.doc -15· 201121567 體（diabody)或單鏈抗體分子。 42. 43. 44. 45. 46. 47. 48. 49. 50. 51. 52. 其中該抗原結合 其中該抗原結合 如請求項40之經分離之抗原結合蛋白 蛋白為人類抗體。 如請求項40之經分離之抗原結合蛋白 蛋白為單株抗體。 如請求項39之經分離之抗原結合蛋白， 贫曰，其中該抗原結合 蛋白為 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4型。 如請求項44之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗原結合 蛋白為IgGl或IgG2型。 一種經分離之核酸分子，其編碼如請求項丨、4、7、 1G、19、20或26之抗原結合蛋白。 如請求項46之經分離之核酸分子，其中至少一個重鏈习 變區由選自由 SEQ ID NO:32、35、37、39、41、43、 45、47、49、51、53、55、57、59及 152 組成之群的經 分離之核酸分子編碼，及至少—個輕鍵可變區由選自由 SEQIDNO:2、5、6、8、1〇、i2、i4、i6、i8、2〇、 22、24、26及28組成之群的經分離之核酸分子編碼。 如請求項47之核酸分子’其中該核酸分子可操作地連接 於控制序列。 -種載體，其包含如請求項46之核酸分子。 一種宿主細胞，其包含如請求項46之核酸分子。 一種宿主細胞，其包含如請求項49之載體。 一種❹離之聚核㈣，其足以用作雜交探針、PCR引 子或疋序引子’其為如請求項47之核酸分子的片段或其 151613.doc •16· 201121567 53 54. 55. 56. 57. 58. 互補序列。 種製備如凊求項1、4、7、1G、19、2G或26之抗原結 〇蛋白的方法’其包含自分泌該抗原結合蛋白之宿主細 胞製備該抗原結合蛋白的步驟。 種結合人類IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗 原。蛋白結合人類IL_23之ρ〗9次單元的A、c及D螺旋 之每一者而非B螺旋中的至少一個胺基酸殘基。 一種結合人類IL-23之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗 原結合蛋白結合SEQ ID NO: 145之殘基46_58中之至少一 個殘基、殘基112-123中之至少一個殘基、及殘基155_ 163中之至少一個殘基。 如π求項55之經分離之抗原結合蛋白，其中當該抗原結 合蛋白結合於人類IL-23時，SEQ ID ΝΟ:147之殘基121- 125中的殘基具有大於或等於1〇 Α2之差值。 如請求項 1、4、7、10、19、20、26、27、33、54 或 55 之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗原結合蛋白具有至 少一種選自由以下組成之群的性質： a) 降低人類IL-23活性； b) 減少促發炎細胞激素產生； c) 以S5xl0·8 Μ之KD結合於人類IL-23 ; d) 具有S5xl0·6 Ι/s之Koff速率；及 e) 具有 S400 pM之IC50。 一種醫藥組合物’其包含至少一種如請求項丨、4、7、 10、19、20、26、27或33之抗原結合蛋白及醫藥學上可 151613.doc -17- 201121567 接受之賦形劑。 59 60. 61. 62. 63. 64. 65. 66. •如請求項58之醫藥組合物 應基團。 其進一步包含標記基團或效 下έ 項59之醫藥組合物，其中該標記基團係選自由以 卜組成之· .β位素標記、磁性標記、氧化還原活性部 分、光學逛M , ^ '生物素化基團、及由第二報導體識別之 預疋多肽抗原決定基。 青长項59之醫藥組合物，其中該效應基團係選自由以 成之群.放射性同位素、放射性核種、毒素、治療 基團及化學治療基團” 如清求項59之經分離之抗原結合蛋白，其中該抗原結合 蛋白偶合於標記基團。 7、10、19、20、26、27 或 33 之經 的用途，其係用於製造用於治療或 一種如請求項1、4、 分離之抗原結合蛋白 預防IL-23相關病狀的藥劑。 如清求項63之用途，其中該病狀係選自由發炎病症、風 濕性病症、自體免疫性病症、致癌病症及腸胃病症組成 之群。 如請求項64之用途，其中該病狀係選自由以下組成之 群：多發性硬化症、類風濕性關節炎、癌症、牛皮癬、 發炎性腸病、克羅恩氏病（Cr〇hn，s disease)、潰瘍性結腸 炎、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬性關節炎、自體免疫性心 肌炎；第1型糖床病及僵直性脊椎炎。 如請求項63之用途，其中該經分離之抗原結合蛋白係單 151613.doc •18- 201121567 獨投與或以組合#法投與。 67. 一種如請求項1、4、7、10、19、20、26、27或33之抗 原結合蛋白的用途，其係用於製造用於降低比_23活性之 藥劑。 68. 如請求項67之用途 激素產生。 其中該IL-23活性 為誘導促發炎細胞 151613.doc -19-
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