KR101568461B1 - 인간 ｉｌ-２３ 항원 결합 단백질 - Google Patents

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Abstract

인간 IL-23 단백질에 결합하는 항원 결합 단백질이 제공된다. 항원 결합 단백질을 코딩하는 핵산, 벡터, 및 이를 코딩하는 세포 뿐만 아니라 진단 및 치료 목적을 위한 IL-23 항원 결합 단백질의 용도가 또한 제공된다.

Description

인간 ＩＬ-２３ 항원 결합 단백질 {HUMAN IL-23 ANTIGEN BINDING PROTEINS}
<관련 출원에 대한 상호 참조>
본 출원은 35 U.S.C. 119(e) 하에 2009년 10월 26일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/254,982 및 2010년 9월 9일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/381,287을 우선권 주장하고, 이들은 본원에 참고로 포함된다.
이종이량체 시토카인인 인터류킨 23 (IL-23)은 염증유발 시토카인의 강력한 유도제이다. IL-23은 둘 다 공통적인 p40 서브유닛을 공유하는 이종이량체 시토카인 인터류킨 12 (IL-12)와 관련된다. IL-23에서, 특징적인 p19 서브유닛이 p40 서브유닛에 공유 결합된다. IL-12에서, 특징적인 서브유닛은 p35이다 (문헌 [Oppmann et al., Immunity, 2000, 13: 713-715]). IL-23 이종이량체 단백질이 분비된다. IL-12와 같이, IL-23은 활성화 자극, 예컨대 CD40 라이게이션, Toll-유사 수용체 효능제 및 병원체에 반응하여 항원 제시 세포 (예컨대, 수지상 세포 및 대식세포)에 의해 발현된다. IL-23은 IL-12Rβ1 서브유닛 (IL-12 수용체와 공유됨) 및 특징적인 수용체 서브유닛, IL-23R을 포함하는 이종이량체 수용체에 결합한다. IL-12 수용체는 IL-12Rβ1 및 IL-12Rβ2로 이루어진다. IL-23은 그의 이종이량체 수용체에 결합하고, JAK2 및 Tyk2를 통해 신호를 전달하여 STAT1, 3, 4 및 5를 활성화시킨다 (문헌 [Parham et al., J. Immunol. 2002, 168:5699-708]). 수용체의 서브유닛은 활성화 또는 기억 T 세포 상에서 우세하게 공동발현되고, 또한 보다 낮은 수준에서 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, 소교세포, 각질세포 및 활막 섬유모세포 상에서 공동발현된다. IL-23 및 IL-12는 상이한 T 세포 서브세트 상에 작용하고, 생체내에서 실질적으로 상이한 역할을 수행한다.
IL-23은 활성화 및 기억 T 세포 상에 작용하고, T 세포 서브세트, Th17의 생존 및 증식을 촉진한다. Th17 세포는 IL-6, IL-17, TNFα, IL-22 및 GM-CSF를 포함하는 염증유발 시토카인을 생성한다. IL-23은 또한 천연 킬러 세포, 수지상 세포 및 대식세포 상에 작용하여 염증유발 시토카인 발현을 유도한다. IL-23과 달리, IL-12는 나이브 CD4+ T 세포의 성숙한 Th1 IFNγ-생성 이펙터 세포로의 분화를 유도하고, IFNγ 생성을 자극함으로써 NK 및 세포독성 T 세포 기능을 유도한다. IL-12에 의해 구동된 Th1 세포는 이전에 다수의 자가면역 질환에서 병원성 T 세포 서브세트인 것으로 생각되었으나, IL-12 대 IL-23의 개별적인 기여를 평가한 염증성 장 질환, 건선, 염증성 관절염 및 다발성 경화증의 모델에서의 보다 최근의 동물 연구는 IL-12가 아니라 IL-23이 자가면역/염증성 질환에서 핵심적인 구동인자라는 것을 확실하게 확립하였다 (문헌 [Ahern et al., Immun. Rev. 2008 226:147-159]; [Cua et al., Nature 2003 421:744-748]; [Yago et al., Arthritis Res and Ther. 2007 9(5): R96]). IL-12가 다수의 세포내 병원체 및 바이러스에 대한 보호성 선천적 및 후천적 면역 반응의 발생 및 종양 면역 감시에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 여겨진다. 문헌 [Kastelein, et al., Annual Review of Immunology, 2007, 25: 221-42]; [Liu, et al., Rheumatology, 2007, 46(8): 1266-73]; [Bowman et al., Current Opinion in Infectious Diseases, 2006 19:245-52]; [Fieschi and Casanova, Eur. J. Immunol. 2003 33:1461-4]; [Meeran et al., Mol. Cancer Ther. 2006 5: 825-32]; [Langowski et al., Nature 2006 442: 461-5]을 참조한다. 이와 같이, IL-23 특이적 억제 (IL-12 또는 공유된 p40 서브유닛 스페어링)는 IL-12 및 IL-23의 이중 억제와 비교하여 잠재적으로 우수한 안전성 프로파일을 가져야 한다.
따라서, IL-12를 스페어링하는 인간 IL-23을 억제하는 IL-23 특이적 길항제 (예컨대, 적어도 IL-23의 특징적인 p19 서브유닛에 결합하거나 또는 p19 및 p40 서브유닛 둘 다에 결합하는 항체)의 사용은 IL-12의 억제와 관련된 잠재적인 위험없이 IL-12 길항제 또는 p40 길항제와 동등하거나 또는 이들보다 큰 효능을 제공해야 한다. 재조합 IL-23의 억제를 위해 선택된 뮤린, 인간화 및 파지 디스플레이 항체가 기재되어 있다: 예를 들어 미국 특허 7,491,391, WIPO 공보 WO1999/05280, WO2007/0244846, WO2007/027714, WO 2007/076524, WO2007/147019, WO2008/103473, WO 2008/103432, WO2009/043933 및 WO2009/082624를 참조한다. 그러나, 천연 인간 IL-23을 억제할 수 있는 완전한 인간 치료제가 요망된다. 이러한 치료는 특히 생체내에서 표적에 대해 고도로 특이적이다. 생체내 표적의 완전한 억제는 보다 낮은 용량 제제, 보다 덜 빈번하고/거나 보다 더 효과적인 투여를 나타낼 수 있고, 이는 다시 감소된 비용 및 증가된 효율을 나타낸다. 본 발명은 이러한 IL-23 길항제를 제공한다.
<개요>
IL-23, 특히 천연 인간 IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질이 제공된다. 인간 IL-23 항원 결합 단백질은 IL-23과 관련된 생물학적 반응 중 적어도 하나를 감소, 억제, 방해 및/또는 조절할 수 있고, 이에 따라 IL-23 관련 질환 또는 장애의 효과를 개선하는데 유용하다. IL-23 항원 결합 단백질은 예를 들어 IL-23 신호전달, Th17 세포의 IL-23 활성화, NK 세포의 IL-23 활성화, 또는 염증유발 시토카인의 생성 유도를 감소, 억제, 방해 및/또는 조절하는데 사용될 수 있다.
또한, IL-23 항원 결합 단백질의 생성을 위한 세포주를 포함하는 발현 시스템 및 인간 IL-23과 관련된 질환을 진단 및 치료하는 방법이 제공된다.
제공되는 IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질 중 일부는 표 3에 제시된 바와 같은 CDRH1과 1개 이하의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실의 차이가 있는 CDRH1; 표 3에 제시된 바와 같은 CDRH2와 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실의 차이가 있는 CDRH2; 표 3에 제시된 바와 같은 CDRH3과 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실의 차이가 있는 CDRH3으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역; 및 표 3에 제시된 바와 같은 CDRL1과 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실의 차이가 있는 CDRL1; 표 3에 제시된 바와 같은 CDRL2와 1개 이하의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실의 차이가 있는 CDRL2; 표 3에 제시된 바와 같은 CDRL3과 1개 이하의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실의 차이가 있는 CDRL3으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 서열 91, 94, 97, 100 및 103으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH1; 서열 92, 95, 98, 101, 104, 107 및 110으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH2; 서열 93, 96, 99, 102 및 105으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH3; 서열 62, 65, 68, 71 및 74로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRL1; 서열 63, 66, 69, 72, 75 및 78로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRL2; 및 서열 64, 67, 70 및 73으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRL3을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 다른 실시양태에서, 서열 91, 106, 109, 112 및 115로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH1; 서열 113, 116, 118, 120, 121 및 122로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH2; 서열 108, 111, 114, 117 및 119로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRH3; 서열 77, 80, 83, 85, 86, 87, 88, 89 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRL1; 서열 81인 CDRL2; 및 서열 76, 79, 82 및 84로 이루어진 군으로부터 선택된 CDRL3을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 다른 실시양태에서, 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 적어도 2개의 중쇄 가변 영역 및 적어도 2개의 경쇄 가변 영역을 포함하는 상기 기재된 바와 같은 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 표지화 기에 커플링된 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
a) 서열 129의 CDRH1, 서열 132의 CDRH2, 서열 136의 CDRH3, 및 서열 123의 CDRL1, 서열 81의 CDRL2 및 서열 76의 CDRL3을 갖는 항원 결합 단백질; b) 서열 131의 CDRH1, 서열 134의 CDRH2, 서열 137의 CDRH3, 및 서열 124의 CDRL1, 서열 126의 CDRL2 및 서열 128의 CDRL3을 갖는 항원 결합 단백질; c) 서열 130의 CDRH1, 서열 133의 CDRH2, 서열 99의 CDRH3, 및 서열 68의 CDRL1, 서열 69의 CDRL2 및 서열 67의 CDRL3을 갖는 항원 결합 단백질; 및 d) 서열 91의 CDRH1, 서열 135의 CDRH2, 서열 138의 CDRH3, 및 서열 125의 CDRL1, 서열 127의 CDRL2 및 서열 64의 CDRL3을 갖는 항원 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된, IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
또한, 서열 31의 아미노산 잔기 31-35, 50-65 및 99-113을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 1의 아미노산 잔기 23-36, 52-58 및 91-101을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 34의 아미노산 잔기 31-35, 50-65 및 99-110을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 36의 아미노산 잔기 31-35, 50-66 및 99-110을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 4의 아미노산 잔기 23-36, 52-62 및 97-105를 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 38의 아미노산 잔기 31-35, 50-66 및 99-114를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 7의 아미노산 잔기 23-34, 50-61 및 94-106을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 40의 아미노산 잔기 31-35, 50-66 및 99-114를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 9의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 94-106을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 42의 아미노산 잔기 31-35, 50-66 및 99-114를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 11의 아미노산 잔기 23-34, 50-61 및 94-106을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 44의 아미노산 잔기 31-35, 50-65 및 98-107을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 13의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 46 또는 서열 153의 아미노산 잔기 31-37, 52-67 및 100-109를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 15의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 48의 아미노산 잔기 31-37, 52-67 및 100-109를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 17의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 50의 아미노산 잔기 31-37, 52-67 및 101-109를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 19의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 52의 아미노산 잔기 31-35, 50-65 및 98-107을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 21의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 98-107을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 54의 아미노산 잔기 31-37, 52-67 및 100-109를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 23의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열 56의 아미노산 잔기 31-37, 52-67 및 100-109를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 25의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열 58의 아미노산 잔기 31-37, 52-57 및 100-109를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 27의 아미노산 잔기 24-34, 500-56 및 89-97을 포함하는 경쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는, IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
본원에서 표 2에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역 서열과 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실의 차이가 있는 중쇄 가변 영역 서열; 및 표 1에 제시된 바와 같은 경쇄 가변 영역 서열과 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 치환, 부가 및/또는 결실의 차이가 있는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
또한, a) 서열 140의 중쇄 가변 영역 및 서열 30의 경쇄 가변 영역; b) 서열 141의 중쇄 가변 영역 및 서열 61의 경쇄 가변 영역; c) 서열 142의 중쇄 가변 영역 및 서열 4의 중쇄 가변 영역; 및 d) 서열 143의 중쇄 가변 영역 및 서열 139의 경쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된, IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
또한, 서열 31, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56 및 58과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 1, 4, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 및 27과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 다른 실시양태에서, 서열 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 및 153으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역, 및 서열 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25 및 27로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질이다. 또 다른 실시양태에서, 서열 31, 34, 36, 38, 40 및 42로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역, 및 서열 1, 4, 7, 9 및 11로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항원 결합 단백질이다.
또한, a) 서열 31의 중쇄 가변 영역 및 서열 1의 경쇄 가변 영역; b) 서열 34 또는 36의 중쇄 가변 영역 및 서열 4의 경쇄 가변 영역; c) 서열 38의 중쇄 가변 영역 및 서열 7의 경쇄 가변 영역; d) 서열 40의 중쇄 가변 영역 및 서열 9의 경쇄 가변 영역; e) 서열 42의 중쇄 가변 영역 및 서열 11의 경쇄 가변 영역; f) 서열 44의 중쇄 가변 영역 및 서열 13의 경쇄 가변 영역; g) 서열 46 또는 서열 153의 중쇄 가변 영역 및 서열 15의 경쇄 가변 영역; h) 서열 48의 중쇄 가변 영역 및 서열 17의 경쇄 가변 영역; i) 서열 50의 중쇄 가변 영역 및 서열 19의 경쇄 가변 영역; j) 서열 52의 중쇄 가변 영역 및 서열 21의 경쇄 가변 영역; k) 서열 54의 중쇄 가변 영역 및 서열 23의 경쇄 가변 영역; l) 서열 56의 중쇄 가변 영역 및 서열 25의 경쇄 가변 영역; 및 m) 서열 58의 중쇄 가변 영역 및 서열 27의 경쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 15의 잔기 접촉부 30, 31, 32, 49, 50, 52, 53, 56, 92 및 94를 포함하며, 여기서 잔기 접촉부는 용매 노출된 표면적에 의해 결정되는 바와 같이 10 Å2 이상의 차이 값을 갖는 것인, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태 내에서, 잔기 접촉부는 서열 46의 잔기 31-35, 54, 58-60, 66 및 101-105를 포함한다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 1의 잔기 접촉부 31-34, 51, 52, 55, 68, 93 및 98을 포함하며, 여기서 잔기 접촉부는 용매 노출된 표면적에 의해 결정되는 바와 같이 10 Å2 이상의 차이 값을 갖는 것인, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태 내에서, 잔기 접촉부는 서열 31의 잔기 1, 26, 28, 31, 32, 52, 53, 59, 76, 101, 102 및 104-108을 포함한다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때, X-선 결정학에 의해 결정되는 바와 같이 서열 46의 잔기 32-35, 54, 58-60, 66 및 101-105로부터 5 Å 이내에 있는, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 서열 46의 잔기 31-35, 54, 56, 58-60, 66 및 101-105로부터 5 Å 이내에 있다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때, X-선 결정학에 의해 결정되는 바와 같이 서열 15의 잔기 30-32, 49, 52, 53, 91-94 및 96으로부터 5 Å 이내에 있는, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 서열 15의 잔기 30-32, 49, 50, 52, 53, 56, 91-94 및 96으로부터 5 Å 이내에 있다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때, X-선 결정학에 의해 결정되는 바와 같이 서열 31의 잔기 26-28, 31, 53, 59, 102 및 104-108로부터 5 Å 이내에 있는, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 서열 31의 잔기 1, 26-28, 30-32, 52, 53, 59, 100, 및 102-108로부터 5 Å 이내에 있다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때, X-선 결정학에 의해 결정되는 바와 같이 서열 1의 잔기 31-34, 51, 52, 55, 68 및 93으로부터 5 Å 이내에 있는, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 서열 1의 잔기 29, 31-34, 51, 52, 55, 68, 93 및 100으로부터 5 Å 이내에 있다.
또한, 항체인 상기 기재된 바와 같은 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항체가 모노클로날 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체 또는 그의 항체 단편인 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 다른 실시양태에서, 항체 단편이 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 디아바디 또는 단일 쇄 항체 분자인 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 인간 항체인 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 모노클로날 항체인 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, IgG1-, IgG2-, IgG3- 또는 IgG4-유형의 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, IgG1- 또는 IgG2-유형의 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
상기 기재된 바와 같은 항원 결합 단백질을 코딩하는 단리된 핵산 분자가 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 적어도 하나의 중쇄 가변 영역이 서열 32, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 및 152로 이루어진 군으로부터 선택된 단리된 핵산 분자에 의해 코딩되고, 적어도 하나의 경쇄 가변 영역이 서열 2, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 및 28로 이루어진 군으로부터 선택된 단리된 핵산 분자에 의해 코딩되는 단리된 핵산 분자가 제공된다. 다른 실시양태에서, 제어 서열에 작동가능하게 연결된 핵산 분자가 제공된다. 다른 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같은 핵산 분자를 포함하는 벡터가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같은 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 기재된 바와 같은 핵산 분자의 단편 또는 그의 상보체인 혼성화 프로브, PCR 프라이머 또는 서열분석 프라이머로서 사용하기에 충분한 단리된 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
또한, 상기 기재된 바와 같은 항원 결합 단백질을 분비하는 숙주 세포로부터 상기 항원 결합 단백질을 제조하는 단계를 포함하는, 상기 기재된 바와 같은 항원 결합 단백질을 제조하는 방법이 제공된다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 145에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p19 서브유닛의 잔기 46-58 내의 잔기 접촉부, 잔기 112-120 내의 잔기 접촉부 및 잔기 155-163 내의 잔기 접촉부를 포함하며, 여기서 잔기 접촉부는 용매 노출된 표면적에 의해 결정되는 바와 같이 10 Å2 이상의 차이 값을 갖는 것인, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 145에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p19 서브유닛의 잔기 46-58 내의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 잔기 접촉부, 잔기 112-120 내의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 접촉부, 및 잔기 155-163 내의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 잔기 접촉부를 포함하는 것이 제공된다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합하였을 때 형성된 커버된 패치가 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 121-125 내의 잔기 접촉부를 포함하는 것이 제공된다. 관련 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 121-125 내의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 잔기 접촉부를 포함하는 것이 제공된다. 다른 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 145의 잔기 접촉부 46, 47, 49, 50, 53, 112-116, 118, 120, 155, 156, 159, 160 및 163을 포함하는 것이 제공된다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 145의 잔기 접촉부 46, 47, 49, 50, 53, 112-118, 120, 155, 156, 159, 160 및 163을 포함하는 것이 제공된다. 다른 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 서열 145의 잔기 46, 47, 49, 50, 53-55, 57, 58, 112-116, 118-120, 155, 156, 159, 160, 162 및 163을 포함하는 것이 제공된다. 관련 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 접촉부 122를 포함하는 것이 제공된다. 다른 관련 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 접촉부 122 및 124를 포함하는 것이 제공된다. 또 다른 관련 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 접촉부 121-123 및 125를 포함하는 것이 제공된다. 추가의 관련 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때 형성된 커버된 패치가 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 접촉부 121-123, 125 및 283을 포함하는 것이 제공된다.
또한, 인간 IL-23에 결합되었을 때, X-선 결정학에 의해 결정되는 바와 같이 서열 145에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p19 서브유닛의 잔기 46-58 내의 잔기, 잔기 112-123 내의 잔기, 및 잔기 155-163 내의 잔기로부터 5 Å 이내에 있는, 인간 IL-23에 결합하는 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 145에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p19 서브유닛의 잔기 46-58 내의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 잔기, 잔기 112-123 내의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기, 및 잔기 155-163 내의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 잔기로부터 5 Å 이내에 있다. 다른 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 145의 잔기 46-50, 113-116, 120, 156, 159, 160 및 163으로부터 5 Å 이내에 있다. 다른 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 145의 잔기 46-50, 112-120, 156, 159, 160 및 163으로부터 5 Å 이내에 있다. 관련 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 145의 잔기 46-50, 53, 112-120, 156, 159, 160 및 163으로부터 5 Å 이내에 있다. 다른 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 145의 잔기 46-50, 53-55, 58, 113-116, 120, 121, 156, 159, 160, 162 및 163으로부터 5 Å 이내에 있다. 관련 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 145의 잔기 46-51, 53-55, 57, 58, 112-116, 118-121, 123, 155, 156, 159, 160, 162 및 163으로부터 5 Å 이내에 있다. 추가의 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 X-선 결정학에 의해 결정되는 바와 같이 서열 147에 기재된 바와 같은 인간 IL-23p40 서브유닛의 잔기 121-125 내의 잔기로부터 5 Å 이내에 있다. 관련 실시양태에에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 상기 항원 결합 단백질은 서열 147의 잔기 122 및 124로부터 5 Å 이내에 있다. 다른 실시양태 내에서, 항원 결합 단백질이 인간 IL-23에 결합되었을 때, 항원 결합 단백질은 서열 147의 잔기 121-123 및 125로부터 5 Å 이내에 있다.
또한, a) 인간 IL-23 활성을 감소시키는 것; b) 염증유발 시토카인의 생성을 감소시키는 것; c) ≤ 5x10-8 M의 KD로 인간 IL-23에 결합하는 것; d) ≤ 5x10-6 1/s의 Koff 비율을 갖는 것; 및 d) ≤ 400 pM의 IC50을 갖는 것으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 특성을 갖는, 상기 기재된 바와 같은 단리된 항원 결합 단백질이 제공된다.
상기 기재된 바와 같은 적어도 하나의 항원 결합 단백질 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 한 실시양태에서, 표지화 기 또는 이펙터 기를 더 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 표지화 기가 동위원소 표지, 자기성 표지, 산화환원 활성 모이어티, 광학 염료, 비오티닐화 기, 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 이펙터 기가 방사성동위원소, 방사성핵종, 독소, 치료 기 및 화학치료 기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물이 제공된다.
또한, 상기 기재된 바와 같은 적어도 하나의 단리된 항원 결합 단백질의 유효량을 IL-23과 관련된 상태의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 IL-23과 관련된 상태를 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 상태가 염증성 장애, 류마티스성 장애, 자가면역 장애, 종양 장애 및 위장 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 상태가 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 암, 건선, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 전신 홍반성 루푸스, 건선성 관절염, 자가면역 심근염; 제1형 당뇨병 및 강직성 척추염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 항원 결합 단백질이 단독으로 또는 조합 요법으로서 투여되는 방법이 제공된다.
또한, 상기 기재된 바와 같은 적어도 하나의 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 IL-23 활성을 감소시키는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 상기 IL-23 활성이 염증유발 시토카인의 생성을 유도하는 것인, IL-23 활성을 감소시키는 방법이 제공된다.
도 1a: 재조합 인간 IL-23을 사용한 STAT-루시페라제 리포터 검정의 결과. 모든 항체가 재조합 인간 IL-23을 완전하게 억제하였다.
도 1b: 천연 인간 IL-23을 사용한 STAT-루시페라제 리포터 검정으로부터의 결과. 재조합 인간 IL-23을 완전하게 억제한 항체들 중 절반만이 천연 인간 IL-23을 완전하게 억제할 수 있었다.
<상세한 설명>
본 발명은 IL-23에 길항하는 분자, 예컨대 항-IL-23 항체, 항체 단편, 및 항체 유도체, 예를 들어 길항작용 항-IL-23 항체, 항체 단편, 또는 항체 유도체를 포함하는, IL-23 항원 결합 단백질과 관련된 조성물, 키트 및 방법을 제공한다. 또한, IL-23에 결합하는 폴리펩티드의 전부 또는 일부를 코딩하는 핵산, 예를 들어 항-IL-23 항체, 항체 단편, 또는 항체 유도체의 전부 또는 일부를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 유도체, 및 그의 단편, 이러한 핵산을 포함하는 플라스미드 및 벡터, 이러한 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터 및 플라스미드를 포함하는 세포 또는 세포주가 제공된다. 제공된 방법은 예를 들어 IL-23 항원 결합 단백질, 예컨대 항-IL-23 항체를 제조, 확인 또는 단리하는 방법, 분자가 IL-23에 결합하는지 여부를 결정하는 방법, 분자가 IL-23을 길항하는지 여부를 결정하는 방법, IL-23 항원 결합 단백질을 포함하는 조성물, 예컨대 제약 조성물을 제조하는 방법, 및 IL-23 항원 결합 단백질을 대상체에게 투여하는 방법, 예를 들어 IL-23에 의해 매개되는 상태를 치료하는 방법 및 생체내 및 시험관내에서 IL-23의 생물학적 활성을 길항하는 방법을 포함한다.
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 및 기술 용어는 당업계의 통상의 지식을 갖는 자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 또한, 문맥적으로 달리 요구되지 않는 한, 단수형 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수형 용어는 단수형을 포함할 것이다. 일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용된 명명법 및 이들의 기술은 당업계에 주지되어 있으며 통상적으로 사용되는 것들이다. 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 당업계에 주지된 통상적인 방법에 따라 및 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적 참고문헌 및 보다 구체적인 참고문헌에 기재된 바에 따라 실시된다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)] 및 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)], 및 [Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)]을 참조한다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조사의 설명서에 따라, 당업계에서 통상적으로 수행되는 바에 따라 또는 본원에 기재된 바에 따라 실시된다. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의약 및 제약 화학과 관련하여 사용된 용어법, 및 그의 실험 절차 및 기술은 당업계에 주지되어 있고 당업계에서 통상적으로 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 화학적 분석, 제약 제조, 제제화, 및 전달, 및 환자의 치료를 위한 표준 기술이 사용될 수 있다.
확인된 모든 특허 및 다른 간행물은 본원에 기재된 정보와 함께 사용될 수 있는 이같은 간행물에 기재된 방법론들을 예를 들어 기재하고 개시하기 위한 목적으로 전문이 본원에 명백하게 참고로 포함된다.
인간 IL-23의 p19 서브유닛의 폴리뉴클레오티드 및 단백질 서열 (서열 144 및 145), 공유된 p40 서브유닛 (서열 146 및 147), 인간 IL-23 수용체 이종이량체 서브유닛 IL-12Rβ1 (서열 150 및 151) 및 IL-23R (서열 148 및 149)이 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 진뱅크(GenBank) 승인 번호 AB030000; M65272, NM_005535, NM_144701 참조 (다른 포유동물 종으로부터의 것들임)). 단일 쇄 및 Fc 단백질을 포함하는 재조합 IL-23 및 IL-23 수용체 단백질 뿐만 아니라 IL-23 수용체를 발현하는 세포는 상업적 공급원으로부터 입수가능하다. (예를 들어, 문헌 [Oppmann et al., Immunity, 2000, 13: 713-715]; 알앤디 시스템즈(R&D Systems), 미네소타주 미네아폴리스; 유나이티드 스테이츠 바이올로지컬(United States Biological), 매사추세츠주 스왐프스코트; WIPO 공보 번호 WO 2007/076524 참조). 천연 인간 IL-23은 본원에 기재된 것을 포함하는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 인간 세포, 예컨대 수지상 세포로부터 수득할 수 있다.
IL-23은 공유된 p40 서브유닛에 공유 결합된 특징적인 p19 서브유닛으로 구성된 이종이량체 시토카인이다. p19 서브유닛은 A와 B 헬릭스 사이, B와 C 헬릭스 사이 및 C와 D 헬릭스 사이의 3개의 헬릭스내 루프에 의해 연결된 업-업-다운-다운 모티프에 4개의 α-헬릭스, "A", "B", "C" 및 "D"를 포함한다 (문헌 [Oppmann et al., Immunity, 2000, 13: 713-715] 및 [Beyer, et al., J Mol Biol, 2008. 382(4): 942-55] 참조). 4개 나선형 번들 시토카인의 A 및 D 헬릭스는 수용체 결합과 연관될 것으로 여겨진다. p40 서브유닛은 3개의 베타-시트 샌드위치 도메인 D1, D2 및 D3을 포함한다 (문헌 [Lupardus and Garcia, J. Mol. Biol., 2008, 382:931-941]).
용어 "폴리뉴클레오티드"는 단일 가닥 및 이중 가닥 핵산을 모두 포함하고, 정상적으로 자연에서 발견되는 서열과 회합되지 않은 게놈 DNA, RNA, mRNA, cDNA, 또는 합성 기원 또는 이들의 일부 조합을 포함한다. 특정 서열을 구성하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 특정 서열에 추가로, 10개 이하 또는 심지어 20개 이하의 다른 단백질 또는 그의 일부에 대한 코딩 서열을 포함할 수 있거나, 인용된 핵산 서열의 코딩 영역의 발현을 제어하는 작동가능하게 연결된 조절 서열을 포함할 수 있고/있거나 벡터 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드는 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드, 또는 두 가지 유형의 뉴클레오티드의 변형된 형태일 수 있다. 이러한 변형은 염기 변형, 예를 들어 브로모우리딘 및 이노신 유도체, 리보스 변형, 예컨대 2',3'-디데옥시리보스, 및 뉴클레오티드간 연결 변형, 예컨대 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐라데이트 및 포스포로아미데이트를 포함한다.
용어 "올리고뉴클레오티드"는 100개 이하의 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 길이가 10 내지 60개 염기이다. 다른 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 길이가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 내지 40개 뉴클레오티드이다. 올리고뉴클레오티드는 예를 들어, 돌연변이체 유전자의 구축에서 사용하기 위해 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 검출 검정을 위한 검출가능한 표지, 예를 들어 방사성 표지, 형광 표지, 합텐 또는 항원성 표지를 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 PCR 프라이머, 클로닝 프라이머 또는 혼성화 프로브로서 사용될 수 있다.
용어 "폴리펩티드" 또는 "단백질"은 천연 단백질, 즉 자연 발생 세포 및 비-재조합 세포에 의해 생성되는 단백질의 아미노산 서열을 갖는 거대분자를 의미하거나; 유전자 조작된 세포 또는 재조합 세포에 의해 생성되고, 천연 단백질의 아미노산 서열을 갖는 분자, 또는 천연 서열의 아미노산 잔기의 하나 이상의 결실, 부가, 및/또는 치환을 갖는 분자를 포함한다. 상기 용어는 또한 하나 이상의 아미노산이 대응하는 자연 발생 아미노산 및 중합체의 화학적 유사체인 아미노산 중합체를 포함한다. 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 항원 결합 단백질 서열의 아미노산 잔기의 하나 이상의 결실, 부가, 및/또는 치환을 갖는 IL-23 항원 결합 단백질 (예컨대, 항체) 및 서열을 포함한다. 용어 "폴리펩티드 단편"은 전장 천연 단백질에 비해 아미노-말단 결실, 카르복실-말단 결실, 및/또는 내부 결실을 갖는 폴리펩티드를 나타낸다. 이같은 단편은 또한 천연 단백질에 비해 변형된 아미노산을 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 단편은 길이가 약 5 내지 500개 아미노산이다. 예를 들어, 단편은 길이가 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 또는 450개 아미노산일 수 있다. 유용한 폴리펩티드 단편은 항체의 면역학상 기능적 단편, 예를 들어 결합 도메인을 포함한다. IL-23 항원 결합 단백질, 예컨대 항체의 경우에, 유용한 단편은 하나 이상의 CDR 영역, 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인, 항체 쇄의 일부 또는 3개 미만의 CDR을 포함하는 가변 영역의 일부 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
"아미노산"은 당업계에서 그의 일반적인 의미를 포함한다. 20개의 자연 발생 아미노산 및 그의 약어는 통상적인 관례에 따른다. 문헌 [Immunology-A Synthesis, 2nd Edition, (E. S. Golub and D. R. Gren, eds.), Sinauer Associates: Sunderland, Mass. (1991)]을 참조한다. 20개의 통상적인 아미노산의 입체이성질체 (예를 들어, D-아미노산), 비천연 아미노산, 예컨대 [알파]-, [알파]-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 및 다른 비통상적인 아미노산이 또한 폴리펩티드에 적합한 성분일 수 있다. 비통상적인 아미노산의 예는 4-히드록시프롤린, [감마]-카르복시글루타메이트, [엡실론]-N,N,N-트리메틸리신, [엡실론]-N-아세틸리신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시리신, [시그마]-N-메틸아르기닌, 및 다른 유사한 아미노산 및 이미노산 (예를 들어, 4-히드록시프롤린)을 포함한다. 본원에서 사용되는 폴리펩티드 표기에서, 표준 관례 및 관습에 따라 좌측 방향은 아미노 말단 방향이고, 우측 방향은 카르복시-말단 방향이다.
용어 "단리된 단백질"은 그의 치료, 진단, 예방, 연구 또는 다른 용도를 방해할 단백질 또는 폴리펩티드 또는 다른 오염물질로부터 정제되는 단백질, 예컨대 항원 결합 단백질 (그의 예는 항체일 수 있음)을 나타낸다. 본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 기재된 종의 분자가 존재하는 우세한 종임을, 즉 몰 기초로 동일한 혼합물 내에 임의의 다른 개별 종보다 더욱 풍부함을 의미한다. 특정 실시양태에서, 실질적으로 순수한 분자는 대상 종이 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 50％ (몰 기초)를 차지하는 조성물이다. 다른 실시양태에서, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물 내에 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 80％, 85％, 90％, 95％, 또는 99％를 차지할 것이다. 특정 실시양태에서, 본질적으로 균질한 물질은 오염 종이 통상적인 검출 방법에 의해 조성물 내에서 검출될 수 없고, 따라서 조성물이 단일 검출가능한 거대분자 종으로 이루어지는 정도로 정제된다.
폴리펩티드 (예를 들어, 항원 결합 단백질, 예컨대 항체)의 "변이체"는 하나 이상의 아미노산 잔기가 다른 폴리펩티드 서열에 비해 아미노산 서열에 삽입되고/되거나 이로부터 결실되고/되거나 이에 치환되는 아미노산 서열을 포함한다. 변이체는 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드의 "유도체"는 삽입, 결실, 또는 치환 변이체와 구분되는 일부 방식으로, 예를 들어 다른 화학적 모이어티에의 접합을 통해 화학적으로 변형된 폴리펩티드이다.
폴리펩티드, 핵산, 숙주 세포 등과 같은 생물학적 물질과 관련하여 본 명세서 전체에서 사용된 용어 "자연 발생" 또는 "천연"은 자연에서 발견되는 물질, 예컨대 천연 인간 IL-23을 나타낸다. 특정 측면에서, 천연 IL-23에 결합하는 재조합 항원 결합 단백질이 제공된다. 본 문맥에서, "재조합 단백질"은 재조합 기술을 이용하여, 즉, 본원에 기재된 바와 같은 재조합 핵산의 발현을 통해 제조된 단백질이다. 재조합 단백질의 생성을 위한 방법 및 기술은 당업계에 주지되어 있다.
용어 "항체"는 표적 항원에 대한 특이적 결합에 대해 무손상 항체와 경쟁할 수 있는 임의의 이소형의 무손상 이뮤노글로불린, 또는 그의 단편을 나타내고, 예를 들어 키메라, 인간화, 전체 인간, 및 이중특이적 항체를 포함한다. 이와 같이 항체는 항원 결합 단백질의 종이다. 달리 지시되지 않는 한, 용어 "항체"는, 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 포함하는 항체에 더하여, 그의 유도체, 변이체, 단편 및 돌연변이체를 포함하며, 이들의 예가 하기에 기재된다. 무손상 항체는 일반적으로 적어도 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 포함할 것이지만, 일부 경우에 단지 중쇄만을 포함할 수 있는 낙타류 내에서 자연 발생하는 항체와 같이 보다 적은 쇄을 포함할 수 있다. 항체는 전적으로 단일 공급원으로부터 유래할 수 있거나, "키메라"일 수 있고, 즉, 항체의 상이한 부분들은 아래에 추가로 기재된 바와 같이 2개의 상이한 항체로부터 유래할 수 있다. 항원 결합 단백질, 항체, 또는 결합 단편은 하이브리도마 내에서 재조합 DNA 기술에 의해, 또는 무손상 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성할 수 있다.
본원에 사용된 용어 항체 또는 이뮤노글로불린 쇄 (중쇄 또는 경쇄)의 "기능적 단편" (또는 간단히 "단편")은 전장 쇄 내에 존재하는 적어도 일부의 아미노산이 결여되지만 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 부분 (상기 부분이 얻어지거나 합성되는 방식에 무관하게)을 포함하는 항원 결합 단백질이다. 이같은 단편은 표적 항원에 특이적으로 결합하고, 주어진 에피토프에 대한 특이적 결합에 대해 무손상 항체를 포함한 다른 항원 결합 단백질과 경쟁할 수 있는 점에서 생물학적 활성이다. 한 측면에서, 이같은 단편은 전장 경쇄 또는 중쇄 내에 존재하는 적어도 하나의 CDR을 보유할 것이고, 일부 실시양태에서 단일 중쇄 및/또는 경쇄 또는 그의 일부를 포함할 것이다. 이들 생물학적 활성 단편은 재조합 DNA 기술에 의해 생성할 수 있거나, 무손상 항체를 포함한 항원 결합 단백질의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성할 수 있다. 단편은 면역학상 기능적 이뮤노글로불린 단편, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 도메인 항체 및 단일쇄 항체를 포함하나 이에 제한되지 않고, 인간, 마우스, 래트, 낙타류 또는 토끼를 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 포유동물 공급원으로부터 유래할 수 있다. 본원에 개시되는 항원 결합 단백질의 기능적 부분, 예를 들어, 하나 이상의 CDR이 제2 단백질에 또는 소분자에 공유 결합되어, 이중기능적 치료 특성을 갖거나 연장된 혈청 반감기를 갖는, 신체 내의 특정 표적에 대해 지시된 치료제를 생성할 수 있음이 추가로 고려된다.
항원 결합 단백질 (예를 들어, 중화 항원 결합 단백질 또는 중화 항체)과 관련하여 사용될 때 용어 "경쟁하는"은 시험되는 항원 결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 그의 면역학상 기능적 단편)이 공통 항원 (예를 들어, IL-23 단백질 또는 그의 단편)에 대한 참조 항원 결합 단백질 (예를 들어, 리간드 또는 참조 항체)의 특이적 결합을 방지하거나 억제하는 검정에 의해 결정되는 항원 결합 단백질들 사이의 경쟁을 의미한다. 다수의 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어 고상의 직접 또는 간접 방사성 면역검정 (RIA), 고상의 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정 (예를 들어, 문헌 [Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 92:242-253] 참조); 고상의 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619] 참조), 고상의 직접 표지된 검정, 고상의 직접 표지된 샌드위치 검정 (예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); I-125 표지를 사용하는 고상의 직접 표지 RIA (예를 들어, 문헌 [Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15] 참조); 고상의 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552] 참조); 및 직접 표지된 RIA (문헌 [Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82])를 사용할 수 있다. 일반적으로, 이같은 분석은 이들 표지되지 않은 시험 항원 결합 단백질 및 표지된 참조 항원 결합 단백질 중 어느 하나를 보유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 포함한다.
경쟁적 억제는 시험 항원 결합 단백질의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정한다. 일반적으로, 시험 항원 결합 단백질은 과량으로 존재한다. 경쟁 분석에 의해 확인된 항원 결합 단백질 (경쟁 항원 결합 단백질)은 참조 항원 결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질, 및 입체 장애가 일어나도록 참조 항원 결합 단백질이 결합하는 에피토프에 충분히 가까운 인접한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 일반적으로, 경쟁 항원 결합 단백질은 과량으로 존재할 때 공통 항원에 대한 참조 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 억제할 것이다. 일부 실시양태에서, 결합이 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 억제된다.
용어 "에피토프" 또는 "항원 결정기"는 항원 결합 단백질이 결합하는 항원 상의 부위를 나타낸다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병렬된 연속되지 않은 아미노산 또는 연속되는 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 연속되는 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로, 변성 용매에 대한 노출시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로, 변성 용매로의 처리시 상실된다. 에피토프 결정기는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 술포닐 기와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹을 포함할 수 있고, 특이적인 3차원 구조적 특징 및/또는 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 전형적으로, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35개의 아미노산을 특징적인 공간 형태로 포함한다. 에피토프는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
IL-23 항원 결합 단백질
본원에 사용된 "항원 결합 단백질"은 규정된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 단백질을 의미하고; 본원에 제공된 항원은 IL-23, 특히 인간 IL-23 (천연 인간 IL-23 포함)이다. 본원에 제공된 항원 결합 단백질은 IL-23의 특징적인 p19 서브유닛의 적어도 일부와 상호작용 (IL-23에 검출가능하게 결합)하지만; IL-12 (예를 들어, IL-12의 p40 및/또는 p35 서브유닛)에 임의로 유의하게 결합하지 않으므로, "IL-12를 스페어링"한다. 따라서, 본원에 제공된 항원 결합 단백질은 IL-12 또는 공유된 p40 서브유닛의 억제가 일어날 잠재적 위험 없이 IL-23 활성에 영향을 미칠 수 있다. 항원 결합 단백질은 예를 들어 수용체에 대한 결합에 영향을 미치고, 예컨대 수용체 회합을 방해함으로써 IL-23이 그의 수용체와 상호작용하는 능력에 영향을 미칠 수 있다. 특히, 이러한 항원 결합 단백질은 IL-23의 하나 이상의 생물학적 활성을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절한다. 이러한 억제 또는 중화는 항원 결합 단백질의 부재하의 반응과 비교하여 항원 결합 단백질의 존재하의 생물학적 반응을 파괴하고, 당업계에 공지되고 본원에 기재된 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 본원에 제공된 항원 결합 단백질은 IL-23-유도된 염증유발 시토카인 생성, 예를 들어 전혈 세포에서는 IL-23-유도된 IL-22 생성 및 NK 및 전혈 세포에서는 IL-23-유도된 IFNγ 발현을 억제한다. 생물학적 활성의 감소는 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 또는 그 초과일 수 있다.
항원 결합 단백질은 항원에 결합하는 부분, 및 임의로 항원 결합 부분이 항원에 대한 항원 결합 단백질의 결합을 촉진하는 형태를 채택하도록 하는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분을 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질의 예는 항체, 항체 단편 (예를 들어, 항체의 항원 결합 부분), 항체 유도체, 및 항체 유사체를 포함한다. 항원 결합 단백질은 CDR 또는 CDR 유도체가 그라프팅된 대안적인 단백질 스캐폴드 또는 인위적인 스캐폴드를 포함할 수 있다. 이같은 스캐폴드는 예를 들어 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키기 위해 도입된 돌연변이를 포함하는 항체-유래 스캐폴드, 뿐만 아니라 생체적합성 중합체가 예를 들어 포함되는 완전히 합성형인 스캐폴드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌 [Korndorfer et al., Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, (2003) Volume 53, Issue 1:121-129]; [Roque et al., Biotechnol. Prog., 2004, 20:639-654]을 참조한다. 또한, 펩티드 항체 모방체 ("PAM"), 뿐만 아니라 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 이용하는 항체 모방체를 기초로 하는 스캐폴드가 사용될 수 있다.
본원에서 설명되는 항원 결합 단백질은 항체이거나 항체로부터 유래한다. 이러한 항원 결합 단백질은 각각 모노클로날 항체, 이중특이적 항체, 미니바디, 도메인 항체, 합성 항체, 항체 모방체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체 융합체, 항체 접합체, 단일 쇄 항체 및 그의 단편을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 항원 결합 단백질은 항체의 면역학적 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 scFv)이다. 다양한 구조는 본원에서 추가로 기재하고 정의한다.
제공되는 특정 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 CDR (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 초과의 CDR)을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 항원 결합 단백질은 (a) 폴리펩티드 구조, 및 (b) 폴리펩티드 구조 내로 삽입되고/되거나 연결되는 하나 이상의 CDR을 포함한다. 폴리펩티드 구조는 다양한 상이한 형태를 취할 수 있다. 예를 들어, 상기 구조는 자연 발생 항체, 또는 그의 단편 또는 변이체의 프레임워크이거나 그를 포함할 수 있거나, 자연에서 완전히 합성될 수 있다. 다양한 폴리펩티드 구조의 예를 아래에서 추가로 기재한다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 해리 평형 상수 (KD)가 ≤ 10-8 M일 때 그의 표적 항원에 "특이적으로 결합"하는 것으로 지칭된다. 항원 결합 단백질은 KD가 ≤ 5 x 10-9 M일 때 "높은 친화도"로 KD가 ≤ 5 x 10-10 M일 때 "매우 높은 친화도"로 항원에 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 인간 IL-23에 ≤ 5 x 10-12 M의 KD로 결합할 것이고, 또 다른 실시양태에서 이는 KD ≤ 5 x 10-13 M으로 결합할 것이다. 본 발명의 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 ≤ 5 x 10-12 M의 KD 및 약 ≤ 5x10-6 1/s의 Koff를 갖는다. 다른 실시양태에서, Koff는 ≤ 5x10-7 1/s이다.
또 다른 측면은 시험관내에서 또는 생체내에서 (예를 들어, 인간 대상체에게 투여될 때) 반감기가 적어도 1일인 항원 결합 단백질을 제공한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질의 반감기는 적어도 3일이다. 다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 일부는 반감기가 4일 이상이다. 다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 일부는 반감기가 8일 이상이다. 다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 비유도체화되거나 비변형된 항체에 비해 반감기가 보다 길도록 유도체화되거나 변형된다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 WIPO 공보 번호 WO 00/09560에 기재된 바와 같은 혈청 반감기를 증가시키는 점 돌연변이를 함유한다.
항원 결합 단백질이 치료 용도에 사용되는 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 IL-23의 하나 이상의 생물학적 활성, 예컨대 염증유발 시토카인의 생성 유도를 감소, 억제, 방해 또는 조절할 수 있다. IL-23은 상이한 세포 유형에서 다수의 상이한 검정에서 측정될 수 있는 다수의 특징적인 생물학적 효과를 갖고, 이러한 검정의 예는 공지되어 있고 본원에 제공된다.
제공되는 항원 결합 단백질의 일부는 전형적으로 자연 발생 항체와 연관되는 구조를 갖는다. 이들 항체의 구조적 단위는 전형적으로 각각 2개의 동일한 상대의 폴리펩티드 쇄로 이루어지는 하나 이상의 사량체를 포함하지만, 일부 종의 포유동물은 또한 단일 중쇄만을 갖는 항체를 생성한다. 전형적인 항체에서, 각각의 쌍 또는 짝은 하나의 전장 "경쇄" (특정 실시양태에서, 약 25 kDa) 및 하나의 전장 "중쇄" (특정 실시양태에서, 약 50-70 kDa)를 포함한다. 각각의 개별 이뮤노글로불린 쇄은 각각 대략 90 내지 110개 아미노산으로 이루어지고 특징적인 폴딩 패턴을 나타내는 일부 "이뮤노글로불린 도메인"으로 구성된다. 이들 도메인은 항체 폴리펩티드를 구성하는 기초 단위이다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 전형적으로 항원 인식을 담당하는 가변 영역을 포함한다. 카르복시-말단 부분은 쇄의 다른 말단보다 진화상 더 보존되고, "불변 영역" 또는 "C 영역"으로 언급된다. 인간 경쇄는 일반적으로 카파 및 람다 경쇄로 분류되고, 이들은 각각 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 도메인 (CL1)을 함유한다. 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론 쇄로서 분류되고, 이들은 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의한다. IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하나 이에 제한되지 않는 일부 하위유형을 갖는다. IgM 하위유형은 IgM1 및 IgM2를 포함한다. IgA 하위유형은 IgA1 및 IgA2를 포함한다. 인간에서, IgA 및 IgD 이소형은 4개의 중쇄 및 4개의 경쇄를 함유하고; IgG 및 IgE 이소형은 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 함유하고; IgM 이소형은 5개의 중쇄 및 5개의 경쇄를 함유한다. 중쇄 불변 영역 (CH)은 전형적으로 이펙터 기능을 담당할 수 있는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 중쇄 불변 영역 도메인의 수는 이소형에 따라 결정될 것이다. 예를 들어, IgG 중쇄는 각각 CH1, CH2 및 CH3으로 공지된 3개의 CH 영역 도메인을 함유한다. 제공된 항체는 임의의 이들 이소형 및 하위유형을 가질 수 있고, 예를 들어 IL-23 항원 결합 단백질은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 하위유형의 것이다. 또한, IgG4가 바람직하다면, IgG4 항체에 불균질성을 일으킬 수 있는 H 쇄내 디술피드 결합을 형성하는 경향을 완화하기 위해 문헌 [Bloom et al., 1997, Protein Science 6:407]에 기재된 바와 같이 힌지 영역에 점 돌연변이 (CPSCP->CPPCP)를 도입하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 한 가지 유형의 본원에서 제공되는 항체는 서브클래스 스위칭 방법을 이용하여 상이한 유형으로 변화시킬 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:303-316]을 참조한다.
전장 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 여기서 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Fundamental Immunology, 2nd ed., Ch. 7 (Paul, W., ed.) 1989, New York: Raven Press]을 참조한다. 각각의 경쇄/중쇄쌍의 가변 영역은 일반적으로 항원 결합 부위를 형성한다.
가변 영역
본원에 제공된 다양한 중쇄 및 경쇄 가변 영역 (또는 도메인)이 표 1 및 2에도시되어 있다. 각각의 이러한 가변 영역은 예를 들어 상기 기재된 중쇄 및 경쇄 불변 영역에 부착될 수 있다. 또한, 각각이 이와 같이 생성된 중쇄 및 경쇄 서열이 조합되어 완전한 항원 결합 단백질 구조를 형성할 수 있다.
아래 표 1 및 2에 나타낸 바와 같이 VH1, VH2, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, VH12, VH13, VH14, VH15 및 VH16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 (VH) 및/또는 VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, VL6, VL7, VL8, VL9, VL10, VL11, VL12, VL13, VL14, VL15 및 VL16으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 경쇄 가변 영역 (VL)을 함유하는 항원 결합 단백질이 제공된다.
표 2에 열거된 각각의 중쇄 가변 영역은 표 1에 나타낸 임의의 경쇄 가변 영역과 조합되어 항원 결합 단백질을 형성할 수 있다. 일부 경우에, 항원 결합 단백질은 표 1 및 2에 열거된 것으로부터 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및/또는 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 경우에, 항원 결합 단백질은 표 1 및 2에 열거된 것으로부터 적어도 2개의 상이한 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 중쇄 가변 영역의 다양한 조합이 경쇄 가변 영역의 임의의 다양한 조합과 조합될 수 있다.
다른 경우에, 항원 결합 단백질은 2개의 동일한 경쇄 가변 영역 및/또는 2개의 동일한 중쇄 가변 영역을 함유한다. 예로서, 항원 결합 단백질은 표 1 및 2에 열거된 바와 같이 경쇄 가변 영역의 쌍 및 중쇄 가변 영역의 쌍과 조합하여 2개의 경쇄 가변 영역 및 2개의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 면역학상 기능적 단편일 수 있다. 2개의 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 이러한 항원 결합 단백질의 예는 항체 A VH14/VL14; 항체 B VH9/VL9; 항체 C VH10/VL10; 항체 D VH15/VL15; 항체 E VH1/VL1, 항체 F VH11/VL11; 항체 G VH12/VL12; 항체 H VH13/VL13; 항체 I VH8/VL8; 항체 J VH3/VL3; 항체 K VH7/VL7; 항체 L VH4/VL4; 항체 M VH5/VL5 및 항체 N VH6/VL6을 포함한다.
제공되는 일부 항원 결합 단백질은 표 1 및 2로부터 선택된 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 서열과 오직 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산 잔기에서 상이한 아미노산의 성열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 각각의 이러한 서열 차이는 독립적으로 하나의 아미노산의 결실, 삽입 또는 치환이다. 일부 항원 결합 단백질에서 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 표 1 및 2에 제공된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산의 서열을 포함한다. 또 다른 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체 또는 면역학상 기능적 단편은 또한 본원에 기재된 바와 같은 변이체 중쇄 영역 형태 및/또는 변이체 경쇄 영역 형태를 포함한다.
용어 "동일성"은 서열들을 정렬하고 비교함으로써 결정할 때 2개 이상의 폴리펩티드 분자 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드의 서열들 사이의 관계를 나타낸다. "동일성 백분율"은 비교된 분자 내의 아미노산 또는 뉴클레오티드 사이의 동일한 잔기의 백분율을 의미하고, 비교되는 분자 중 최소의 것의 크기에 기초하여 계산한다.
Figure 112012042207989-pct00001
Figure 112012042207989-pct00002
이들 계산을 위해, 정렬 내의 갭 (존재할 경우)은 특정 수학 모델 또는 컴퓨터 프로그램 (즉, "알고리즘")에 의해 어드레싱되어야 한다. 정렬된 핵산 또는 폴리펩티드의 동일성을 계산하기 위해 사용할 수 있는 방법은 문헌 [Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), 1988, New York: Oxford University Press]; [Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press]; [Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press]; [von Heinje, G., 1987, Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press]; [Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press]; 및 [Carillo et al., 1988, SIAM J. Applied Math. 48:1073]에 기재된 것을 포함한다.
동일성 백분율의 계산시에, 비교되는 서열들은 서열들 사이의 최대 매치를 제공하는 방식으로 정렬된다. 동일성 백분율을 결정하기 위해 사용되는 컴퓨터 프로그램은 GCG 프로그램 패키지이고, 이는 GAP (문헌 [Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387]; 제네틱스 컴퓨터 그룹 (Genetics Computer Group, 위스콘신 대학교 (University of Wisconsin, 미국 위스콘신주 매디슨))를 포함한다. 컴퓨터 알고리즘 GAP은 서열 동일성 백분율을 결정해야 할 2개의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 정렬시키기 위해 사용된다. 서열들은 그의 각각의 아미노산 또는 뉴클레오티드의 최적 매칭에 대해 정렬된다 (알고리즘에 의해 결정될 때 "매칭된 스팬"). 갭 개방 패널티 (3x 평균 대각으로서 계산됨, 여기서 "평균 대각"은 사용되는 비교 행렬의 대각의 평균이고; "대각"은 특정 비교 행렬에 의해 각각의 완전한 아미노산 매치에 지정된 스코어 또는 수임) 및 갭 연장 패널티 (일반적으로 갭 개방 패널티의 1/10배임), 및 비교 행렬, 예를 들어 PAM 250 또는 BLOSUM 62를 알고리즘과 연관하여 사용한다. 특정 실시양태에서, 표준 비교 행렬 (PAM 250 비교 행렬에 대해 문헌 [Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352]; BLOSUM 62 비교 행렬에 대해 문헌 [Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919] 참조)을 또한 알고리즘에 의해 사용한다.
GAP 프로그램을 사용하여 폴리펩티드 또는 뉴클레오티드 서열에 대한 동일성 백분율을 결정하기 위해 제안된 파라미터는 다음과 같다: 알고리즘: 문헌 [Needleman et al., 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453]; 비교 행렬: 문헌 [Henikoff et al., 1992, 상기 문헌]으로부터 BLOSUM 62; 갭 패널티: 12 (그러나, 말단 갭에 대해서는 패널티가 없음); 갭 길이 패널티: 4, 유사성의 역가: 0. 2개의 아미노산 서열들을 정렬하기 위한 특정 정렬 계획은 2개의 서열의 단지 짧은 영역의 매칭을 생성시킬 수 있고, 상기 작은 정렬된 영역은 2개의 전장 서열들 사이에 유의한 관계가 없는 경우에라도 매우 높은 서열 동일성을 가질 수 있다. 따라서, 선택된 정렬 방법 (GAP 프로그램)은 표적 폴리펩티드의 적어도 50개의 연속 아미노산에 이르는 정렬을 생성하도록 경우에 따라 조정될 수 있다.
본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 관련 항원 결합 단백질의 군으로부터 유래된 컨센서스 서열을 포함한다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 유사성에 대해 분석하였다. 4개의 군이 나타났으며, 한 군은 카파 경쇄 가변 영역, (VH9/VL9, VH10/VL10, VH11/VL11, VH13/VL13, VH14/VL14 및 VH15/VL15)을 갖고, 3개의 군은 람다 경쇄 가변 영역: 람다 군 1 (VH5/VL5, VH6/VL6 및 VH7/VL7), 람다 군 2 (VH3/VL3 및 VH4/VL4), 및 람다 군 3 (VH1/VL1 및 VH2/VL2)을 갖는다. 나타낸 경쇄 배선은 VK1/A30 및 VK1/L19를 포함한다. 나타낸 경쇄 람다 배선은 VL1/1e, VL3/3p, VL5/5c 및 VL9/9a를 포함한다. 나타낸 중쇄 배선은 VH3/3-30, VH3/3-30.3, VH3/3-33, VH3/3-48, VH4/4-31 및 VH4/4-59를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "컨센서스 서열"은 다수의 서열 중에서 공통적인 보존된 아미노산 및 주어진 아미노산 서열 내에서 달라지는 가변 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 나타낸다. 컨센서스 서열은 본원에 개시된 IL-23 항원 결합 단백질에 상응하는 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 표준 계통발생학적 분석을 이용하여 결정될 수 있다.
카파 군에 대한 경쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00003
이고, 여기서 X1은 I 또는 S로부터 선택되고; X2는 M 또는 L로부터 선택되고; X3은 G 또는 V로부터 선택되고, X4는 S, F 또는 I로부터 선택되고; X5는 S 또는 G로부터 선택되고; X6은 F 또는 L로부터 선택되고; X7은 K 또는 Q로부터 선택되고; X8은 K, N 또는 S로부터 선택되고; X9는 G 또는 V로부터 선택되고; X10은 D 또는 E로부터 선택되고, X11은 E 또는 A로부터 선택되고, X12는 Y 또는 F로부터 선택되고; X13은 I, V 또는 F로부터 선택된다.
람다 군 1에 대한 경쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00004
이고, X1은 V 또는 E로부터 선택되고; X2는 N 또는 S로부터 선택되고; X3은 Q 또는 L로부터 선택되고, X4는 I 또는 T로부터 선택되고; X5는 D 또는 E로부터 선택되고; X6은 Y 또는 S로부터 선택되고, X7은 S 또는 N으로부터 선택된다.
람다 군 3에 대한 경쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00005
이고, 여기서 X1은 T 또는 I로부터 선택되고; X2는 V 또는 L로부터 선택되고; X3은 G 또는 N으로부터 선택되고, X4는 R 또는 K로부터 선택된다.
카파 군에 대한 중쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00006
이고, 여기서 X1은 N 또는 S로부터 선택되고; X2는 S 또는 T로부터 선택되고; X3은 Y 또는 H로부터 선택되고, X4는 Y 또는 H로부터 선택되고; X5는 S 또는 N으로부터 선택되고; X6은 S 또는 T로부터 선택되고; X7은 V 또는 I로부터 선택되고; X8는 I 또는 M으로부터 선택되고; X9는 K 또는 Q로부터 선택되고; X10은 K 또는 S로부터 선택되고, X11은 R 또는 K로부터 선택되고; X12는 D 또는 N으로부터 선택되고; X13은 H, F 또는 Y로부터 선택된다.
람다 군 1에 대한 중쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00007
이고, 여기서 X1은 A 또는 V로부터 선택되고; X2는 A 또는 V로부터 선택되고; X3은 T 또는 S로부터 선택되고, X4는 Y 또는 F로부터 선택되고; X5는 S 또는 R로부터 선택되고; X6은 R 또는 I로부터 선택되고; X7은 H, Y 또는 I로부터 선택되고; X8는 P 또는 G로부터 선택되고; X9는 W 또는 F로부터 선택되고; X10은 G 또는 H로부터 선택되고, X11은 M 또는 L로부터 선택된다.
람다 군 2에 대한 중쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00008
이고, 여기서 X1은 G 또는 A로부터 선택되고; X2는 V 또는 L로부터 선택되고; X3은 A 또는 S로부터 선택되고, X4는 F 또는 H로부터 선택되고, X5는 L 또는 I로부터 선택된다.
람다 군 3에 대한 중쇄 가변 영역 컨센서스 서열은
Figure 112012042207989-pct00009
이고, 여기서 X1은 E 또는 K로부터 선택되고, X2는 T 또는 S로부터 선택된다.
상보성 결정 영역
상보성 결정 영역 또는 "CDR"은 이들이 항원 결합 및 인식을 담장하는 영역을 구성하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 프레임워크 내에 묻힌다. 동일한 종의 이뮤노글로불린 쇄의 가변 도메인은 예를 들어 일반적으로 유사한 전체 구조를 나타내고, 초가변 CDR 영역에 의해 연결된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다. 항원 결합 단백질은 1, 2, 3, 4, 5, 6개 또는 그 초과의 CDR을 가질 수 있다. 상기 논의된 가변 영역은 예를 들어 전형적으로 3개의 CDR을 포함한다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR은 전형적으로 프레임워크 영역에 의해 정렬되어 표적 항원 (예를 들어, IL-23)에 특이적으로 결합하는 구조를 형성한다. N-말단으로부터 C-말단까지, 자연 발생 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 둘 다 전형적으로 이러한 요소: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 상기 순서로 따른다. 예시적인 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인의 CDR 및 FR 영역을 표 1 및 2에서 강조하였다. CDR 및 FR 영역의 경계는 강조된 것으로부터 달라질 수 있는 것으로 인식된다. 각각의 이러한 도메인에서 위치를 차지하는 아미노산에 번호를 배정하기 위한 넘버링 시스템이 고안되었다. 주어진 항원 결합 단백질의 상보성 결정 영역 및 프레임워크 영역은 이러한 시스템을 이용하여 확인할 수 있다. 넘버링 시스템은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication No. 91-3242, 1991], 또는 [Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917]; [Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883]에서 규정된다. 이뮤노글로불린 쇄 내의 아미노산에 대한 다른 넘버링 시스템은 IMGT® (인터내셔널 이뮤노제네틱스(international ImMunoGeneTics) 정보 시스템; 문헌 [Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 2005, 29:185-203]); 및 AHo (문헌 [Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 2001, 309(3):657-670])를 포함한다. 본원에서 제공되는 CDR은 전통적인 항체 구조의 항원 결합 도메인을 규정하기 위해 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 본원에서 설명되는 다양한 다른 폴리펩티드 구조 내에 묻힐 수도 있다.
본원에 개시된 항원 결합 단백질은 하나 이상의 CDR이 그라프팅되고/되거나, 삽입되고/되거나, 연결된 폴리펩티드이다. 항원 결합 단백질은 예를 들어 하나의 중쇄 CDR1 ("CDRH1"), 및/또는 하나의 중쇄 CDR2 ("CDRH2"), 및/또는 하나의 중쇄 CDR3 ("CDRH3"), 및/또는 하나의 경쇄 CDR1 ("CDRL1"), 및/또는 하나의 경쇄 CDR2 ("CDRL2"), 및/또는 하나의 경쇄 CDR3 ("CDRL3")을 가질 수 있다. 일부 항원 결합 단백질은 CDRH3 및 CDRL3을 둘 다 포함한다. 특정 실시양태는 일반적으로 비-반복적인 CDR의 조합을 사용하고, 예를 들어 항원 결합 단백질은 일반적으로 하나의 가변 중쇄 영역 등에서의 2개의 CDRH2 영역으로 만들어지지 않는다. 항원 결합 단백질은 표 3에 제시된 CDR 중 하나 이상의 아미노산 서열과 동일하거나 또는 단지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개 아미노산 잔기에서 상이한 하나 이상의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 각각의 이러한 서열 차이는 독립적으로 하나의 아미노산의 결실, 삽입 또는 치환이다. 일부 항원 결합 단백질에서 CDR은 표 3에 열거된 CDR 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산의 서열을 포함한다. 일부 항원 결합 단백질에서, CDR은 "프레임워크" 영역 내로 묻히고, 이는 CDR(들)의 적합한 항원 결합 특성이 달성되도록 CDR(들)을 배향시킨다.
Figure 112012042207989-pct00010
서열 7 및 11의 아미노산 잔기 23-34; 서열 9, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 및 29의 아미노산 잔기 24-34; 서열 1, 3 및 4의 아미노산 잔기 23-36; 서열 31, 33, 34, 38, 40, 44, 52 및 60의 아미노산 잔기 31-35 및 서열 46, 48, 50, 54, 56 및 58의 아미노산 잔기 31-37을 포함하는 CDR1 영역이 본원에서 제공된다.
서열 9, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 및 29의 아미노산 잔기 50-56; 서열 7 및 11의 아미노산 잔기 50-61; 서열 4의 아미노산 잔기 52-62; 서열 31, 33, 44 및 52의 아미노산 잔기 50-65; 서열 36, 38, 40, 42 및 60의 아미노산 잔기 50-66; 서열 1 및 3의 아미노산 잔기 52-58 및 서열 46, 48, 50, 54, 56 및 58의 아미노산 잔기 52-67을 포함하는 CDR2 영역이 제공된다.
서열 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 및 29의 아미노산 잔기 89-97; 서열 1 및 3의 아미노산 잔기 91-101; 서열 7, 9 및 11의 아미노산 잔기 94-106; 서열 44 및 52의 아미노산 잔기 98-107; 서열 4의 아미노산 잔기 97-105; 서열 34 및 36의 아미노산 잔기 99-110; 서열 112의 아미노산 잔기 99-112; 서열 31 및 33의 아미노산 잔기 99-113; 서열 38, 40 및 42의 아미노산 잔기 99-114; 서열 46, 48, 54, 56 및 58의 아미노산 잔기 100-109; 및 서열; 50의 아미노산 잔기 101-019를 포함하는 CDR3 영역에 또한 제공된다.
본원에 개시된 CDR은 관련 서열의 군으로부터 유래된 컨센서스 서열을 포함한다. 이전에 기재된 바와 같이, 가변 영역 서열의 4개의 군, 카파 군 및 3개의 람다 군이 확인되었다. 카파 군으로부터의 CDRL1 컨센서스 서열은 RASQX1X2SX3WX4A (서열 123)로 구성되고, 여기서 X1은 G 또는 V로부터 선택되고; X2는 I, F 또는 S로부터 선택되고; X3은 S 또는 G로부터 선택되고, X4는 F 또는 L로부터 선택된다. 람다 군 1로부터의 CDRL1 컨센서스 서열은 TLX1SGYSDYKVD (서열 124)로 구성되고, 여기서 X1은 N 또는 S로부터 선택된다. 람다 군 3으로부터의 CDRL1 컨센서스 서열은 TGSSSNX1GAGYDVH (서열 125)로 구성되고, 여기서 X1은 I 또는 T로부터 선택된다.
람다 군 1로부터의 CDRL2 컨센서스 서열은 VGTGGX1VGSKGX2 (서열 126)로 구성되고, 여기서 X1은 I 또는 T로부터 선택되고, X2는 D 또는 E로부터 선택된다. 람다 군 3으로부터의 CDRL2 컨센서스 서열은 GSX1NRPS (서열 127)로 구성되고, 여기서 X1은 N 또는 G로부터 선택된다.
CDRL3 컨센서스 서열은 GADHGSGX1NFVYV (서열 128)를 포함하며, 여기서 X1은 S 또는 N이다.
카파 군으로부터의 CDRH1 컨센서스 서열은 SGGYYWX1 (서열 129)로 구성되고, 여기서 X1은 S 또는 T로부터 선택된다. 람다 군 1로부터의 CDRH1 컨센서스 서열은 X1X2SMN (서열 131)으로 구성되고, 여기서 X1은 S 또는 T로부터 선택되고, X2는 Y 또는 F로부터 선택된다. 람다 군 2로부터의 CDRH1 컨센서스 서열은 SYX1MH (서열 130)로 구성되고, 여기서 X1은 G 또는 A로부터 선택된다.
카파 군으로부터의 CDRH2 컨센서스 서열은 X1IX2YSGX3X4YYNPSLKS (서열 132)로 구성되고, 여기서 X1은 Y 또는 H로부터 선택되고; X2는 Y 또는 H로부터 선택되고; X3은 S 또는 N으로부터 선택되고, X4는 T 또는 S로부터 선택된다. 람다 군 1로부터의 컨센서스 서열은 YISSX1SSTX2YX3ADSVKG (서열 134)로 구성되고, 여기서 X1은 R 또는 S로부터 선택되고, X2는 I 또는 R로부터 선택되고, X3은 I, H 또는 Y로부터 선택된다. 람다 군 2로부터의 컨센서스 서열은 VISX1DGSX2KYYADSVKG (서열 133)로 구성되고, 여기서 X1은 F 또는 H이고, X2는 L 또는 T이다. 람다 군 3으로부터의 CDRH2 컨센서스 서열은 VIWYDGSNX1YYADSVKG (서열 135)로 구성되고, 여기서 X1은 K 또는 E로부터 선택된다.
카파 군으로부터의 CDRH3 컨센서스 서열은 X1RGX2YYGMDV (서열 136)로 구성되고, 여기서 X1은 N 또는 D로부터 선택되고, X2는 H, Y 또는 F로부터 선택된다. 람다 군 1로부터의 CDRH3 컨센서스 서열은 RIAAAGX1X2X3YYYAX4DV (서열 137)로 구성되고, 여기서 X1은 G 또는 P로부터 선택되고; X2는 F 또는 W로부터 선택되고; X3은 H 또는 G로부터 선택되고, X4는 L 및 M으로부터 선택된다. 람다 군 3으로부터의 CDRH3 컨센서스 서열은 DRGYX1SSWYPDAFDI (서열 138)로 구성되고, 여기서 X1은 S 또는 T로부터 선택된다.
모노클로날 항체
제공된 항원 결합 단백질은 IL-23에 결합하는 모노클로날 항체를 포함한다. 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여, 예를 들어, 면역화 일정의 완료 후 트랜스제닉 동물로부터 수확된 비장 세포를 불멸화시킴으로써, 모노클로날 항체를 생성할 수 있다. 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여, 예를 들어, 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 생성함으로써, 비장 세포를 불멸화시킬 수 있다. 하이브리도마-생성 융합 절차에서 사용하기 위한 골수종 세포는 바람직하게는 항체-생성성이 아니고, 융합 효율이 높으며, 원하는 융합된 세포 (하이브리도마)만 성장하도록 지지하는 선택 배지에서 골수종 세포가 성장할 수 없게 하는 효소 결핍이 있다. 마우스 융합에서 사용하기 위한 적합한 세포주의 예는 Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag41, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 및 S194/5XXO Bul을 포함하고; 래트 융합에서 사용되는 세포주의 예는 R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F 및 4B210을 포함한다. 세포 융합체에서 유용한 다른 세포주는 U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 및 UC729-6이다.
일부 경우에, 하이브리도마 세포주는 동물 (예를 들어, 인간 이뮤노글로불린 서열을 갖는 트랜스제닉 동물)을 IL-23 면역원으로 면역화하고; 면역화된 동물로부터 비장 세포를 수확하고; 수확된 비장 세포를 골수종 세포주에 융합시켜 하이브리도마 세포를 생성하고; 하이브리도마 세포로부터 하이브리도마 세포주를 확립하고, IL-12를 스페어링하면서 IL-23 폴리펩티드에 결합하는 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주를 확인함으로써 생성한다. 이같은 하이브리도마 세포주, 및 이들이 생성하는 항-IL-23 모노클로날 항체는 본원의 측면들이다.
하이브리도마 세포주에 의해 분비되는 모노클로날 항체를 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 정제할 수 있다. 하이브리도마 또는 mAb를 추가로 스크리닝하여, 특정한 특성, 예컨대 IL-23-유도된 활성을 억제하는 능력이 있는 mAb를 확인할 수 있다.
키메라 및 인간화 항체
상기한 서열에 기반한 키메라 및 인간화 항체를 또한 제공한다. 치료제로서 유용한 모노클로날 항체는 사용에 앞서 다양한 방식으로 변형될 수 있다. 한 예는 키메라 항체이고, 이는 공유 연결되어 기능성 이뮤노글로불린 경쇄 또는 중쇄 또는 그의 면역학상 기능적 부분을 생성하는 상이한 항체로부터의 단백질 절편들로 구성된 항체이다. 일반적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터 유래하거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 대응하는 서열과 동일하거나 상동성인 한편, 쇄(들)의 나머지 부분은 다른 종으로부터 유래하거나 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 대응하는 서열과 동일하거나 상동성이다. 키메라 항체에 관련한 방법에 대해서는 예를 들어, 미국 특허 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855]을 참조한다. CDR 그라프팅은 예를 들어 미국 특허 번호 6,180,370, 5,693,762, 5,693,761, 5,585,089, 및 5,530,101에 기재되어 있다.
하나의 유용한 종류의 키메라 항체는 "인간화" 항체이다. 일반적으로, 인간화 항체는 처음에 비-인간 동물에서 생성되는 모노클로날 항체로부터 생성된다. 일반적으로 항체의 비-항원 인식 부분으로부터의 상기 모노클로날 항체 내의 특정 아미노산 잔기는 대응하는 이소형의 인간 항체 내의 대응하는 잔기에 상동성이도록 변형된다. 인간화는 예를 들어, 인간 항체의 대응하는 영역에 대해 설치류 가변 영역의 적어도 일부를 치환함으로써 다양한 방법을 이용하여 수행할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,585,089 및 5,693,762; 문헌 [Jones et al., 1986, Nature 321:522-525]; [Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-27]; [Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536] 참조).
특정 실시양태에서, 하이브리드 항체를 생성하기 위해 인간 가변 영역(들)과 함께 인간 이외의 다른 종으로부터의 불변 영역을 사용할 수 있다.
완전 인간 항체
완전 인간 항체를 또한 제공한다. 인간을 항원에 노출시키지 않으면서 주어진 항원에 특이적인 완전 인간 항체 ("완전 인간 항체")를 제조하기 위한 방법이 이용가능하다. 완전 인간 항체의 생성을 실행하기 위해 제공되는 하나의 특정한 수단은 마우스 체액성 면역계의 "인간화"이다. 내인성 Ig 유전자를 불활성화시킨 마우스 내로 인간 이뮤노글로불린 (Ig) 로커스를 도입하는 것이 임의의 바람직한 항원으로 면역화시킬 수 있는 동물인 마우스에서 완전 인간 모노클로날 항체 (mAb)를 생성하는 하나의 수단이다. 완전 인간 항체를 사용하면 때때로 치료제로서 마우스 또는 마우스-유도체화된 mAb를 인간에게 투여함으로써 유발될 수 있는 면역원성 및 알레르기 반응을 최소화할 수 있다.
완전 인간 항체는 내인성 이뮤노글로불린 생성의 부재 하에 인간 항체의 레퍼토리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물 (일반적으로 마우스)을 면역화함으로써 생성할 수 있다. 상기 목적을 위한 항원은 일반적으로 6개 이상의 연속 아미노산을 갖고, 임의로 합텐과 같은 담체에 접합된다. 예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551-2555]; [Jakobovits et al., 1993, Nature 362:255-258]; 및 [Bruggermann et al., 1993, Year in Immunol. 7:33]을 참조한다. 이같은 방법의 한 예에서, 트랜스제닉 동물은 내부의 마우스 중쇄 및 경쇄 이뮤노글로불린 쇄을 코딩하는 내인성 마우스 이뮤노글로불린 로커스를 불능화시키고, 마우스 게놈 내로 인간 중쇄 및 경쇄 단백질을 코딩하는 로커스를 함유하는 인간 게놈 DNA의 큰 단편을 삽입함으로써 생성한다. 이어서, 인간 이뮤노글로불린 로커스의 완전 미만의 보완물을 갖는 부분 변형된 동물을 교배시켜 모든 원하는 면역계 변형을 갖는 동물을 수득하였다. 면역원을 투여하면, 이들 트랜스제닉 동물은 면역원에 면역특이적이지만 가변 영역을 포함하는, 뮤린 아미노산 서열이 아닌 인간 아미노산 서열을 갖는 항체를 생성한다. 이같은 방법의 추가의 상세한 내용에 대해서는 예를 들어 WIPO 특허 공보 WO96/33735 및 WO94/02602를 참조한다. 인간 항체를 제조하기 위한 트랜스제닉 마우스에 관련한 추가의 방법은 미국 특허 번호 5,545,807; 6,713,610; 6,673,986; 6,162,963; 5,545,807; 6,300,129; 6,255,458; 5,877,397; 5,874,299 및 5,545,806; WIPO 특허 공보 WO91/10741, WO90/04036, 및 EP 546073B1 및 EP 546073A1에 기재되어 있다.
상기 기재된 트랜스제닉 마우스는 재정렬되지 않은 인간 중쇄 ([뮤] 및 [감마]) 및 [카파] 경쇄 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 인간 이뮤노글로불린 유전자 미니로커스를 내인성 [뮤] 및 [카파] 쇄 로커스를 불활성화시키는 표적화된 돌연변이와 함께 함유한다 (문헌 [Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859]). 따라서, 마우스는 마우스 IgM 또는 [카파]의 감소된 발현을 나타내고, 면역화에 반응하여, 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스진이 클래스 스위칭 및 체세포 돌연변이를 거쳐 높은 친화도 인간 IgG [카파] 모노클로날 항체를 생성한다 (문헌 [Lonberg et al., 상기 문헌]; [Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93]; [Harding and Lonberg, 1995, Ann. N.Y Acad. Sci. 764:536-546]). 이러한 마우스의 제조는 문헌 [Taylor et al., 1992, Nucleic Acids Research 20:6287-6295]; [Chen et al., 1993, International Immunology 5:647-656]; [Tuaillon et al., 1994, J. Immunol. 152:2912-2920]; [Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859]; [Lonberg, 1994, Handbook of Exp. Pharmacology 113:49-101]; [Taylor et al., 1994, International Immunology 6:579-591]; [Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93]; [Harding and Lonberg, 1995, Ann. N.Y Acad. Sci. 764:536-546]; [Fishwild et al., 1996, Nature Biotechnology 14:845-85]에 상세하게 기재된다. 또한 미국 특허 번호 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; 및 5,770,429; 뿐만 아니라 미국 특허 번호 5,545,807; WIPO 공보 번호 WO 93/1227; WO 92/22646; 및 WO 92/03918을 참조한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서 인간 항체를 생성하는데 사용되는 기술은 또한 WIPO 공보 번호 WO 98/24893, 및 문헌 [Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156]에 개시된다. 예를 들어, HCo7 및 HCo12 트랜스제닉 마우스 계통을 사용하여 항-IL-23 항체를 생성할 수 있다.
하이브리도마 기술을 사용하여, 상기 설명한 것과 같은 트랜스제닉 마우스로부터 원하는 특이성을 갖는 항원-특이적 인간 mAb를 생성하고 선택할 수 있다. 이같은 항체는 적합한 벡터 및 숙주 세포를 사용하여 클로닝하고 발현시킬 수 있거나, 항체는 배양된 하이브리도마 세포로부터 수확할 수 있다.
완전 인간 항체는 또한 파지-디스플레이 라이브러리로부터 유래할 수 있다 (문헌 [Hoogenboom et al., 1991, J. Mol. Biol. 227:381]; [Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581]; WIPO 공보 번호 WO 99/10494에 개시된 바와 같음). 파지 디스플레이 기술은 필라멘트형 박테리오파지의 표면 상에서 항체 레퍼토리의 디스플레이를 통한 면역 선택, 및 선택되는 항원에 대한 결합에 의한 파지의 후속적인 선택을 모방한다.
이중특이적 또는 이관능성 항원 결합 단백질
"이중특이적", "이중-특이적" 또는 "이관능성" 항원 결합 단백질 또는 항체는 각각 2개의 상이한 항원 결합 부위, 예컨대 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 가변 영역을 갖는 하이브리드 항원 결합 단백질 또는 항체이다. 일부 경우에, 이들은 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인위적인 하이브리드 항체이다. 다중특이적 항원 결합 단백질 또는 "다중특이적 항체"는 하나 초과의 항원 또는 에피토프를 표적화하는 것이다. 이중특이적 항원 결합 단백질 및 항체는 다중특이적 항원 결합 단백질 항체의 종이고, 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 방법에 의해 생성할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Songsivilai and Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321]; [Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547-1553]을 참조한다.
면역학적 단편
항원 결합 단백질은 또한 항체의 면역학적 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 scFv)을 포함한다. "Fab 단편"은 하나의 경쇄 (경쇄 가변 영역 (VL) 및 그의 상응하는 불변 도메인 (CL)) 및 하나의 중쇄 (중쇄 가변 영역 (VH) 및 제1 불변 도메인 (CH1))로 구성된다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 디술피드 결합을 형성할 수 없다. "Fab' 단편"은 하나의 경쇄 및 CH1과 CH2 도메인 사이에 그 영역을 또한 함유하는 하나의 중쇄의 일부를 함유하여, 쇄간 디술피드 결합이 2개의 Fab' 단편의 2개의 중쇄 사이에 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있게 된다. 따라서, "F(ab')2 단편"은 2개의 중쇄 사이에 디술피드 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab' 단편으로 구성된다. "Fv 단편"은 항체의 단일 아암의 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역으로 구성된다. 단일쇄 항체 "scFv"는 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 가요성 링커에 의해 연결되어 단일 폴리펩티드 쇄을 형성하는 Fv 분자이고, 이것은 항원 결합 영역을 형성한다. 단일쇄 항체는 WIPO 공보 번호 WO 88/01649, 미국 특허 번호 4,946,778 및 5,260,203; 문헌 [Bird, 1988, Science 242:423]; [Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:5879]; [Ward et al., 1989, Nature 334:544], [de Graaf et al., 2002, Methods Mol Biol. 178:379-387]; [Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10:423]; [Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108] 및 [Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40]에서 상세하게 논의되어 있다. "Fc" 영역은 항체의 CH1 및 CH2 도메인을 포함하는 2개의 중쇄 단편을 포함한다. 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 디술피드 결합에 의해 및 CH3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 함께 유지된다.
중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 함유하는 면역학상 기능적 이뮤노글로불린 단편인 도메인 항체가 또한 포함된다. 일부 경우에, 2개 이상의 VH 영역은 펩티드 링커와 공유 연결되어 2가 도메인 항체를 생성한다. 2가 도메인 항체의 2개의 VH 영역은 동일하거나 상이한 항원을 표적화할 수 있다. 디아바디는 2개의 폴리펩티드 쇄을 포함하는 2가 항체이고, 여기서 각각의 폴리펩티드 쇄은 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이에 쌍이 형성되도록 하기에는 너무 짧아서 각각의 도메인이 또 다른 폴리펩티드 쇄 상의 상보적인 도메인과 쌍을 형성하도록 하는 링커에 의해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993] 및 [Poljak et al., Structure 2:1121-23, 1994] 참조). 유사하게, 트리아바디 및 테트라바디는 각각 3개 및 4개의 폴리펩티드 쇄을 포함하고 각각 3개 및 4개의 항원 결합 부위 (동일하거나 상이할 수 있음)를 형성하는 항체이다. 맥시바디는 IgG1의 Fc 영역에 공유 결합에 의해 추가된 2가의 scFv를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Fredericks et al., 2004, Protein Engineering, Design & Selection, 17:95-106]; [Powers et al., 2001, Journal of Immunological Methods, 251:123-135]; [Shu et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:7995-7999]; [Hayden et al., 1994, Therapeutic Immunology 1:3-15] 참조).
다양한 다른 형태
또한 상기 기재된 항원 결합 단백질의 다양한 형태가 제공되고, 항원 결합 단백질 중 일부는 표 1 및 2에 열거된 중쇄 또는 경쇄, 가변 영역 또는 CDR 중 하나 이상에서 예를 들어 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는다.
자연 발생 아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 기초하여 다음 클래스로 분류될 수 있다: 소수성 (노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile); 중성 친수성 (Cys, Ser, Thr, Asn, Gln); 산성 (Asp, Glu); 염기성 (His, Lys, Arg); 쇄 배향에 영향을 주는 잔기 (Gly, Pro); 및 방향족 (Trp, Tyr, Phe).
보존적 아미노산 치환은 이들 클래스 중 하나의 구성원을 동일한 클래스의 다른 구성원와 교환하는 것을 포함할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 일반적으로 생물학적 시스템 내의 합성보다는 화학적 펩티드 합성에 의해 포함되는 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이들은 펩티드모방체 및 다른 역전 또는 역위 형태의 아미노산 모이어티를 포함한다. 대안적으로, 본원에서 설명되는 항원 결합 단백질의 기능적 및/또는 생화학적 특징의 실질적인 변형은 (a) 치환 영역에서 분자 백본의 구조, 예를 들어, 시트 또는 나선형 입체형태, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 크기를 유지하는데 대한 그의 효과가 유의하게 상이한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열에서의 치환을 생성함으로써 달성할 수 있다.
비-보존적 치환은 다른 클래스의 구성원에 대한 상기 클래스 중 하나의 구성원의 교환을 포함할 수 있다. 이같은 치환된 잔기는 인간 항체와 상동성인 항체의 영역 내로, 또는 분자의 비-상동성 영역 내로 도입될 수 있다.
이같은 변화를 하는데 있어서, 특정 실시양태에 따르면, 아미노산의 수치 지수가 고려될 수 있다. 단백질의 수치 프로파일은 각각의 아미노산에 수치값 ("친수성 지수")을 지정한 후, 펩티드 쇄을 따라 이들 값을 반복적으로 평균함으로써 계산된다. 각각의 아미노산은 그의 소수성 및 전하 특성에 기초하여 수치 지수가 지정된다. 이들은 이소류신 (+4.5); 발린 (+4.2); 류신 (+3.8); 페닐알라닌 (+2.8); 시스테인/시스틴 (+2.5); 메티오닌 (+1.9); 알라닌 (+1.8); 글리신 (-0.4); 트레오닌 (-0.7); 세린 (-0.8); 트립토판 (-0.9); 티로신 (-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트 (-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 리신 (-3.9); 및 아르기닌 (-4.5)이다.
단백질에 상호작용적 생물학적 기능을 부여하는데 있어서 수치 프로파일의 중요성은 당업계에 알려져 있다 (예를 들어, 문헌 [Kyte et al., 1982, J. Mol. Biol. 157:105-131] 참조). 특정 아미노산이 유사한 수치 지수 또는 점수를 갖는 다른 아미노산으로 치환되고 유사한 생물학적 활성을 여전히 보유할 수 있음이 공지되어 있다. 수치 지수에 기초한 변화를 하는데 있어서, 특정 실시양태에서, 수치 지수가 ±2 내에 있는 아미노산의 치환이 포함된다. 일부 측면에서, 수치 지수가 ±1 내에 있는 아미노산의 치환이 포함되고, 다른 측면에서, ±0.5 내에 있는 아미노산의 치환이 포함된다.
유사한 아미노산의 치환은 특히 그에 의해 생성된 생물학적 기능성 단백질 또는 펩티드를 본 경우에서와 같이 면역학적 실시양태에서 사용하도록 의도하는 경우에 친수성에 기초하여 효과적으로 이루어질 수 있음이 또한 당업계에서 이해된다. 특정 실시양태에서, 그의 인접한 아미노산의 친수성에 의해 지배되는 단백질의 최대 국소 평균 친수성은 그의 면역원성 및 항원 결합 또는 항원성, 즉, 단백질의 생물학적 특성과 상호관련된다.
이들 아미노산 잔기에 다음의 친수성 값이 지정되었다: 아르기닌 (+3.0); 리신 (+3.0); 아스파르테이트 (+3.0±1); 글루타메이트 (+3.0±1); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글리신 (0); 트레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.5±1); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 류신 (-1.8); 이소류신 (-1.8); 티로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5) 및 트립토판 (-3.4). 유사한 친수성 값에 기초하여 변화를 이루는데 있어서, 특정 실시양태에서, 그의 친수성 값이 ±2 내에 있는 아미노산의 치환이 포함되고, 다른 실시양태에서, ±1 내에 있는 아미노산의 치환이 포함되고, 또 다른 실시양태에서, ±0.5 내에 있는 아미노산의 치환이 포함된다. 일부 경우에, 또한 친수성에 기초하여 1차 아미노산 서열로부터 에피토프를 확인할 수 있다. 이들 영역은 또한 "에피토프 코어 영역"으로서 언급된다.
예시적인 보존적 아미노산 치환을 표 4에 기재한다.
Figure 112012042207989-pct00011
보존적 아미노산 치환
당업자는 주지된 기술을 이용하여 본원에 기재된 바와 같이 폴리펩티드의 적합한 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 당업자는 활성에 중요한 것으로 생각되지 않는 영역을 표적화함으로써 활성을 파괴하지 않으면서 변화될 수 있는 분자의 적합한 영역을 확인할 수 있다. 당업자는 또한 유사한 폴리펩티드들 사이에 보존되는 분자의 잔기 및 부분을 확인할 수 있을 것이다. 추가의 실시양태에서, 심지어 생물학적 활성 또는 구조에 중요할 수 있는 영역이 생물학적 활성을 파괴하지 않으면서 또는 폴리펩티드 구조에 불리한 영향을 미치지 않으면서 보존적 아미노산 치환에 적용될 수 있다.
추가로, 당업자라면 활성 또는 구조에 중요한 유사한 폴리펩티드들 내의 잔기를 확인하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 이같은 비교를 고려하여, 유사한 단백질에서 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 대응하는 단백질 내의 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 당업자는 이같은 예측된 중요한 아미노산 잔기에 대해 화학적으로 유사한 아미노산 치환을 선택할 수 있다.
당업자는 또한 유사한 폴리펩티드 내의 해당 구조와 관련하여 3차원 구조 및 아미노산 서열을 분석할 수 있다. 이같은 정보를 고려하여, 당업자는 그의 3차원 구조에 관하여 항체의 아미노산 잔기의 정렬을 예측할 수 있다. 당업자는 단백질의 표면 상에 있을 것으로 예측되는 아미노산 잔기를 근본적으로 변화시키지 않도록 선택할 수 있으며, 그 이유는 이같은 잔기가 다른 분자와의 중요한 상호작용에 관련될 수 있기 때문이다. 또한, 당업자는 각각의 원하는 아미노산 잔기에서 단일 아미노산 치환을 함유하는 시험 변이체를 생성시킬 수 있다. 이어서, 이들 변이체는 IL-23 활성에 대한 분석 (아래 실시예 참조)을 이용하여 스크리닝될 수 있어서, 어떠한 아미노산이 변화될 수 있는지 및 변화되어서는 안 되는지에 관한 정보를 수득하였다. 즉, 이같은 일상적인 실험으로부터 모은 정보에 기초하여, 당업자는 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합으로 추가의 치환을 피해야 하는 아미노산 위치를 쉽게 결정할 수 있다.
다수의 과학 간행물이 2차 구조의 예측울 제공하였다. 문헌 [Moult, 1996, Curr. Op. in Biotech. 7:422-427]; [Chou et al., 1974, Biochem. 13:222-245]; [Chou et al., 1974, Biochemistry 113:211-222]; [Chou et al., 1978, Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 47:45-148]; [Chou et al., 1979, Ann. Rev. Biochem. 47:251-276]; 및 [Chou et al., 1979, Biophys. J. 26:367-384]을 참조한다. 또한, 2차 구조의 예측을 돕기 위하여 컴퓨터 프로그램이 현재 이용가능하다. 2차 구조를 예측하는 한 가지 방법은 상동성 모델링에 기초한다. 예를 들어, 서열 동일성이 30％를 초과하거나, 유사성이 40％를 초과하는 2개의 폴리펩티드 또는 단백질은 종종 유사한 구조적 구조 위상을 갖는다. 단백질 구조 데이터베이스 (PDB)의 최근의 성장은 폴리펩티드 또는 단백질 구조 내의 폴드의 잠재적인 수를 포함하여 2차 구조의 향상된 예측가능성을 제공하였다. 문헌 [Holm et al., 1999, Nucl. Acid. Res. 27:244-247]을 참조한다. 주어진 폴리펩티드 또는 단백질 내에 제한된 수의 폴드가 존재하고, 중요한 수의 구조가 밝혀진다면 구조 예측이 현저하게 더 정확해질 것으로 제안되었다 (문헌 [Brenner et al., 1997, Curr. Op. Struct. Biol. 7:369-376]).
2차 구조를 예측하는 추가의 방법은 "스레딩 (threading)" (문헌 [Jones, 1997, Curr. Opin. Struct. Biol. 7:377-387]; [Sippl et al., 1996, Structure 4:15-19]), "프로파일 분석" (문헌 [Bowie et al., 1991, Science 253:164-170]; [Gribskov et al., 1990, Meth. Enzym. 183:146-159]; [Gribskov et al., 1987, Proc. Nat. Acad. Sci. 84:4355-4358]) 및 "진화적 연결" (문헌 [Holm, 1999, 상기 문헌] 및 [Brenner, 1997, 상기 문헌] 참조)을 포함한다.
일부 실시양태에서, (1) 단백질분해에 대한 감수성을 감소시키고/거나, (2) 산화에 대한 감수성을 감소시키고/거나, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위한 결합 친화도를 변경시키고/거나, (4) 리간드 또는 항원 결합 친화도를 변경시키고/거나, (4) 이같은 폴리펩티드에 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 부여하거나 변경하는 아미노산 치환이 이루어지며, 예컨대 치환의 구역에서 분자 백본의 구조를 예를 들어 시트 또는 나선형 형태로 유지하거나, 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지 또는 변경하거나, 또는 측쇄의 크기를 유지 또는 변경시킨다.
예를 들어, 단일 또는 다수의 아미노산 치환 (특정 실시양태에서, 보존적 아미노산 치환)이 자연 발생 서열에서 이루어질 수 있다. 치환은 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들) 외부에 놓인 항체의 부분에서 이루어질 수 있다. 이같은 실시양태에서, 모 서열의 구조적 특징을 실질적으로 변화시키지 않는 보존적 아미노산 치환 (예를 들어, 모 또는 천연 항원 결합 단백질의 특징을 이루는 2차 구조를 파괴하지 않는 하나 이상의 교체 아미노산)이 사용될 수 있다. 당업계에서 인정되는 폴리펩티드 2차 및 3차 구조의 예는 문헌 [Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed.), 1984, W. H. New York: Freeman and Company]; [Introduction to Protein Structure (Branden and Tooze, eds.), 1991, New York: Garland Publishing]; 및 [Thornton et al., 1991, Nature 354:105]에 기재되어 있다.
추가의 변이체는 모 또는 천연 아미노산 서열 내의 하나 이상의 시스테인 잔기가 결실되거나 또 다른 아미노산 (예를 들어, 세린)으로 치환된 시스테인 변이체를 포함한다. 시스테인 변이체는 특히 항체 (예를 들어)가 생물학적 활성 형태로 다시 폴딩되어야 할 때 유용하다. 시스테인 변이체는 천연 항체보다 더 적은 시스테인 잔기를 가질 수 있고, 전형적으로 쌍이 형성되지 않은 시스테인으로 인한 상호작용을 최소화하기 위해 짝수의 시스테인을 갖는다.
개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 CDR은 IL-23 폴리펩티드에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 영역을 함유하는 항원 결합 단백질을 제조하는데 사용될 수 있다. "항원 결합 영역"은 항원과 상호작용하고 항원 결합 단백질에 표적 항원에 대한 그의 특이성 및 친화도를 부여하는 아미노산 잔기를 함유하는 영역과 같은 특정 항원에 특이적으로 결합하는 단백질 또는 단백질의 일부를 의미한다. 항원 결합 영역은 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있고, 특정 항원 결합 영역은 또한 하나 이상의 "프레임워크" 영역을 포함한다. 예를 들어, 표 3에 열거된 하나 이상의 CDR은 분자 (예를 들어, 폴리펩티드) 내로 공유 또는 비공유 결합에 의해 도입되어 이뮤노어드헤신을 제조할 수 있다. 이뮤노어드헤신은 CDR(들)을 보다 큰 폴리펩티드 쇄의 일부로서 포함할 수 있거나, CDR(들)을 또 다른 폴리펩티드 쇄에 공유 연결할 수 있거나, CDR(들)을 비공유 방식으로 포함할 수 있다. CDR(들)은 이뮤노어드헤신이 관심있는 특정 항원 (예를 들어, IL-23 폴리펩티드)에 특이적으로 결합할 수 있도록 한다.
다른 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 가변 영역 및 CDR에 기초한 모방체 (예를 들어, "펩티드 모방체" 또는 "펩티드모방체")를 포함한다. 이러한 유사체는 펩티드, 비-펩티드, 또는 펩티드와 비-펩티드 영역의 조합물일 수 있다. 문헌 [Fauchere, 1986, Adv. Drug Res. 15:29]; [Veber and Freidinger, 1985, TINS p. 392]; 및 [Evans et al., 1987, J. Med. Chem. 30:1229]. 치료상 유용한 펩티드에 구조상 유사한 펩티드 모방체가 유사한 치료 또는 예방 효과를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 화합물은 종종, 컴퓨터를 이용한 분자 모델링의 도움으로 개발된다. 일반적으로, 펩티드모방체는 원하는 생물학적 활성, 예컨대 IL-23에 결합하는 능력을 나타내는 항원 결합 단백질에 구조적으로 유사한 단백질이지만, 당업계에 주지된 방법에 의해 예를 들어 -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH-CH-(시스 및 트랜스), -COCH2-, -CH(OH)CH2-, 및 -CH2SO-로부터 선택된 연결로 임의로 교체되는 하나 이상의 펩티드 연결을 갖는다. 특정 실시양태에서, 동일한 종류의 D-아미노산으로의 컨센서스 서열의 하나 이상의 아미노산의 체계적인 치환 (예를 들어, L-리신 대신에 D-리신)은 보다 안정한 펩티드를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 컨센서스 서열 또는 실질적으로 동일한 컨센서스 서열 변이를 포함하는 구속형 펩티드는 당업계에 공지된 방법 (문헌 [Rizo and Gierasch, 1992, Ann. Rev. Biochem. 61:387])에 의해, 예를 들어, 펩티드를 고리화시키는 분자내 디술피드 브릿지를 형성할 수 있는 내부 시스테인 잔기를 첨가함으로써 생성될 수 있다.
본원에서 설명되는 항원 결합 단백질의 유도체를 또한 제공한다. 유도체화된 항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질 또는 단편에 원하는 특성, 예컨대 특정 용도에서 증가된 반감기를 부여하는 임의의 분자 또는 물질을 포함할 수 있다. 유도체화된 항원 결합 단백질은 예를 들어, 검출가능한 (또는 표지) 모이어티 (예를 들어, 방사성, 비색, 항원성 또는 효소적 분자, 검출가능한 비드 (예를 들어 자성 또는 전자치밀 (예를 들어, 금) 비드), 또는 또 다른 분자에 결합하는 분자 (예를 들어, 비오틴 또는 스트렙타비딘)), 치료 또는 진단 모이어티 (예를 들어, 방사성, 세포독성, 또는 제약 활성 모이어티), 또는 특정 용도 (예를 들어, 인간 대상체와 같은 대상체에의 투여, 또는 다른 생체내 또는 시험관내 용도)를 위한 항원 결합 단백질의 적합성을 증가시키는 분자를 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질을 유도체화하기 위해 사용될 수 있는 분자의 예는 알부민 (예를 들어, 인간 혈청 알부민) 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)를 포함한다. 항원 결합 단백질의 알부민-연결된 및 PEG화 유도체는 당업계에 주지된 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질은 트랜스사이레틴 (TTR) 또는 TTR 변이체에 접합되거나 다른 방식으로 연결된다. TTR 또는 TTR 변이체는 예를 들어 덱스트란, 폴리(n-비닐 피롤리돈), 폴리에틸렌 글리콜, 프로프로파일렌 글리콜 단일중합체, 폴리프로파일렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 및 폴리비닐 알콜로 이루어진 군으로부터 선택된 화학물질로 화학적으로 변형될 수 있다.
다른 유도체는 IL-23 항원 결합 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 이종성 폴리펩티드를 포함하는 재조합 융합 단백질의 발현에 의한 것과 같은, 다른 단백질 또는 폴리펩티드과 IL-23 항원 결합 단백질의 공유 또는 집합성 접합체를 포함한다. 예를 들어, 접합된 펩티드는 이종성 신호 (또는 리더) 폴리펩티드, 예를 들어, 효모 알파-인자 리더, 또는 에피토프 태그와 같은 펩티드일 수 있다. IL-23 항원 결합 단백질-함유 융합 단백질은 IL-23 항원 결합 단백질의 정제 또는 확인을 용이하게 하기 위해 첨가된 펩티드 (예를 들어, 폴리-His)를 포함할 수 있다. IL-23 항원 결합 단백질은 또한 문헌 [Hopp et al., 1988, Bio/Technology 6:1204]; 및 미국 특허 번호 5,011,912에 기재된 바와 같이 FLAG 펩티드에 연결될 수 있다. FLAG 펩티드는 고도로 항원성이고, 특이적 모노클로날 항체 (mAb)가 가역적으로 결합하는 에피토프를 제공하여, 발현된 재조합 단백질의 신속한 분석 및 용이한 정제를 가능하게 한다. FLAG 펩티드가 주어진 폴리펩티드에 융합되는 융합 단백질을 제조하기 위해 유용한 시약은 시판된다 (시그마 (Sigma, 미주리주 세인트루이스)).
하나 이상의 IL-23 항원 결합 단백질을 함유하는 올리고머는 IL-23 길항제로 사용될 수 있다. 올리고머는 공유결합으로 연결된 또는 비-공유결합으로 연결된 이량체, 삼량체, 또는 이보다 차수가 높은 올리고머의 형태일 수 있다. 2개 이상의 IL-23 항원 결합 단백질을 포함하는 올리고머가 사용이 고려되고, 이때 한 예는 동종이량체이다. 다른 올리고머에는 이종이량체, 동종삼량체, 이종삼량체, 동종사량체, 이종사량체 등이 포함된다. IL-23 항원 결합 단백질에 융합된 펩티드 모이어티 사이에 공유결합 또는 비-공유결합 상호작용을 통해 연결된 다중 IL-23-결합 단백질을 포함하는 올리고머가 또한 포함된다. 이같은 펩티드는 펩티드 링커 (스페이서), 또는 올리고머화를 촉진하는 성질이 있는 펩티드일 수 있다. 미국 특허 번호 4,751,180 및 4,935,233에 기재된 것들이 적합한 펩티드 링커 중 하나이다. 류신 지퍼 및 항체로부터 유래된 특정 폴리펩티드는 이에 부착된 IL-23 항원 결합 단백질의 올리고머화를 촉진할 수 있는 펩티드들 중 하나이다. 가용성 올리고머성 단백질을 생성하기에 적합한 류신 지퍼 도메인의 예는 WIPO 공보 번호 WO 94/10308, 문헌 [Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344:191]; 및 [Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-278]에 기재되어 있다. 한 접근법에서, 류신 지퍼 펩티드에 융합된 IL-23 항원 결합 단백질 단편 또는 유도체를 포함하는 재조합 융합 단백질을 적합한 숙주 세포 내에서 발현시키고, 형성되는 가용형 올리고머성 IL-23 항원 결합 단백질 단편 또는 유도체를 배양 상청액으로부터 수확한다.
이같은 올리고머는 2 내지 4개의 IL-23 항원 결합 단백질을 포함할 수 있다. 올리고머의 IL-23 항원 결합 단백질 모이어티는 상기 기재된 형태 중 임의의 것, 예를 들어 변이체 또는 단편일 수 있다. 바람직하게는, 올리고머는 IL-23 결합 활성을 갖는 IL-23 항원 결합 단백질을 포함한다. 올리고머는 이뮤노글로불린으로부터 유래된 폴리펩티드를 사용하여 제조될 수 있다. 항체-유래 폴리펩티드의 다양한 부분 (Fc 도메인 포함)에 융합된 특정 이종성 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질의 제조는 예를 들어 문헌 [Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:10535]; [Byrn et al., 1990, Nature 344:677]; 및 [Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, pages 10.19.1-10.19.11]에 기재되어 있다.
또한, IL-23 항원 결합 단백질을 항체의 Fc 영역에 융합시킴으로써 생성된 2개의 융합 단백질을 포함하는 이량체가 포함된다. 예를 들어, 융합 단백질을 코딩하는 유전자 융합체를 적합한 발현 벡터 내로 삽입하고, 재조합 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포에서 유전자 융합체를 발현시키고, 발현된 융합 단백질을 항체 분자와 유사하게 어셈블리되도록 하여, Fc 모이어티들 간에 쇄간 디술피드 결합이 형성되어 이량체가 생성됨으로써, 이량체가 제조될 수 있다. 이같은 Fc 폴리펩티드는 항체의 Fc 영역으로부터 유래된 천연 및 돌연변이체 형태의 폴리펩티드를 포함한다. 이량체화를 촉진하는 힌지 영역을 함유하는 이같은 폴리펩티드의 말단절단 형태가 또한 포함된다. Fc 모이어티를 포함하는 융합 단백질 (및 이로부터 형성된 올리고머)은 단백질 A 또는 단백질 G 칼럼 상에서의 친화성 크로마토그래피에 의한 용이한 정제의 장점을 제공한다. WIPO 공보 번호 WO 93/10151 및 US 미국 특허 번호 5,426,048 및 5,262,522에 기재된 한 적합한 Fc 폴리펩티드는 인간 IgG1 항체의 Fc 영역의 N-말단 힌지 영역으로부터 천연 C-말단까지 확장되는 단일 쇄 폴리펩티드이다. 다른 유용한 Fc 폴리펩티드는 미국 특허 번호 5,457,035, 및 문헌 [Baum et al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001]에 기재된 Fc 돌연변이체이다. 이러한 돌연변이체의 아미노산 서열은 아미노산 19가 Leu로부터 Ala로 변화되고, 아미노산 20이 Leu로부터 Glu로 변화되고, 아미노산 22가 Gly로부터 Ala로 변화되는 것을 제외하고, WIPO 공보 번호 WO 93/10151에 제시된 천연 Fc 서열의 것과 동일하다. 돌연변이체는 Fc 수용체에 대해 감소된 친화도를 나타낸다.
글리코실화
항원 결합 단백질은 천연 종에서 발견되는 것과 상이하거나 변경된 글리코실화 패턴을 가질 수 있다. 당업계에 공지된 바와 같이, 글리코실화 패턴은 단백질의 서열 (예를 들어, 아래에서 논의되는 특정 글리코실화 아미노산 잔기의 존재 또는 부재), 또는 단백질이 생성되는 숙주 세포 또는 유기체에 의해 결정될 수 있다. 특정 발현 시스템을 아래에서 논의한다.
폴리펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결은 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 나타낸다. 트리-펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 모이어티의 아스파라긴 측쇄에 대한 효소에 의한 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내의 상기 트리-펩티드 서열의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성시킨다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 및 자일로스 중의 하나의 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 대한 부착을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신도 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질에 대한 글리코실화 부위의 부가는 편리하게는 하나 이상의 상기한 트리-펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 (N-연결된 글리코실화 부위에 대해) 달성한다. 또한, 변경은 출발 서열에 대한 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우). 용이함을 위해, 항원 결합 단백질 아미노산 서열은 DNA 수준에서 변화를 통해, 특히 원하는 아미노산으로 번역될 코돈이 생성되도록 표적 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 예정된 염기에서 돌연변이시킴으로써 변경될 수 있다.
항원 결합 단백질에 대한 탄수화물 모이어티의 수를 증가시키는 또 다른 수단은 단백질에 대한 글리코시드의 화학적 또는 효소적 커플링에 의한 것이다. 이러한 절차는 N- 및 O-연결된 글리코실화를 위해 글리코실화 능력을 갖는 숙주 세포에서 단백질의 생성을 필요로 하지 않는다는 점에서 유리하다. 사용되는 커플링 방식에 따라, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카르복실 기, (c) 유리 술프히드릴 기, 예컨대 시스테인의 유리 술프히드릴 기, (d) 유리 히드록실 기, 예컨대 세린, 트레오닌 또는 히드록시프롤린의 유리 히드록실 기, (e) 방향족 잔기, 예컨대 페닐알라닌, 티로신 또는 트립토판의 방향족 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아미드 기에 부착될 수 있다. 이러한 방법은 PCT 공보 번호 WO 87/05330, 및 문헌 [Aplin and Wriston, 1981, CRC Crit. Rev, Biochem., pp. 259-306]에 기재되어 있다.
출발 항원 결합 단백질 상에 존재하는 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소에 의해 달성할 수 있다. 화학적 탈글리코실화는 화합물 트리플루오로메탄술폰산, 또는 동등한 화합물에 대한 단백질의 노출을 필요로 한다. 이러한 처리로, 폴리펩티드는 손상시키지 않으면서, 연결 당 (N-아세틸글루코스아민 또는 N-아세틸갈락토스아민)을 제외한 대부분의 또는 모든 당이 절단된다. 화학적 탈글리코실화는 문헌 [Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52] 및 [Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131]에 기재되어 있다. 폴리펩티드 상의 탄수화물 모이어티의 효소에 의한 절단은 문헌 [Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350]에 기재된 바와 같이 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용에 의해 달성될 수 있다. 잠재적인 글리코실화 부위에서의 글리코실화는 문헌 [Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:3105]에 기재된 바와 같이 화합물 투니카마이신의 사용에 의해 억제될 수 있다. 투니카마이신은 단백질-N-글리코시드 연결의 형성을 차단한다.
따라서, 측면은 모 폴리펩티드의 아미노산 서열에 비해 글리코실화 부위(들)의 수 및/또는 종류가 변경된 항원 결합 단백질의 글리코실화 변이체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 단백질 변이체는 모 폴리펩티드보다 더 많거나 더 적은 수의 N-연결된 글리코실화 부위를 포함한다. 이러한 서열을 제거하거나 변경시키는 치환은 모 폴리펩티드 내에 존재하는 N-연결된 탄수화물 쇄의 부가를 방지할 것이다. 예를 들어, 글리코실화는 Asn의 결실에 의해 또는 Asn을 상이한 아미노산으로 치환함으로써 감소시킬 수 있다. 항체는 일반적으로 Fc 영역 내에 N-연결된 글리코실화 부위를 갖는다.
표지 및 이펙터 기
항원 결합 단백질은 하나 이상의 표지를 포함할 수 있다. 용어 "표지" 또는 "표지화 기"는 임의의 검출가능한 표지를 나타낸다. 일반적으로, 표지는 이들이 검출되는 검정에 따라 다양한 클래스로 분류된다: a) 방사성 또는 중 동위원소일 수 있는 동위원소 표지; b) 자기성 표지 (예를 들어, 자기성 입자); c) 산화환원 활성 모이어티; d) 광학 염료; 효소 기 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼리성 포스파타제); e) 비오티닐화 기; 및 f) 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그 등). 일부 실시양태에서, 표지화 기는 전위 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다. 단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 적합한 표지화 기의 예는 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다: 방사성동위원소 또는 방사성핵종 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광기 (예를 들어, FITC, 로다민, 란타나이드 인광체), 효소 기 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광 기, 비오티닐 기, 또는 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그). 일부 실시양태에서, 표지화 기는 전위 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다. 단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 적합한 것으로 보일 때 사용될 수 있다.
용어 "이펙터 기"는 세포독성제로서 작용하는 항원 결합 단백질에 커플링된 임의의 기를 의미한다. 적합한 이펙터 기의 예는 방사성동위원소 또는 방사성핵종 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I)이다. 다른 적합한 기는 독소, 치료기 또는 화학치료기를 포함한다. 적합한 기의 예는 칼리케아미신, 아우리스타틴, 겔다나마이신 및 메이탄신을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이펙터 기는 전위 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다.
IL-23 항원 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드
항체의 쇄 중 하나 또는 둘 다, 또는 그의 단편, 유도체, 돌연변이체 또는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 중쇄 가변 영역 또는 CDR만을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 확인, 분석, 돌연변이 또는 증폭시키기 위해 혼성화 프로브, PCR 프라이머 또는 서열분석 프라이머로서 사용하기 위해 충분한 폴리뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드의 발현을 억제하기 위한 안티센스 핵산, 및 상기한 것의 상보성 서열을 포함하는, 본원에 기재된 항원 결합 단백질, 또는 그의 일부를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 폴리뉴클레오티드는 임의의 길이일 수 있다. 이는, 예를 들어 길이가 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 85, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1,000, 1,500, 3,000, 5,000개 또는 그 초과의 핵산일 수 있고/있거나 (사이의 모든 값 포함), 하나 이상의 추가의 서열, 예를 들어 조절 서열을 포함할 수 있고/있거나, 더 큰 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 벡터의 부분일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, RNA 및/또는 DNA 핵산 및 그의 인위적인 변이체 (예를 들어, 펩티드 핵산)를 포함할 수 있다.
특정 항원 결합 단백질, 또는 그의 일부 (예를 들어, 전장 항체, 중쇄 또는 경쇄, 가변 도메인, 또는 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, 또는 CDRL3)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 IL-23 또는 그의 면역원성 단편으로 면역화시킨 마우스의 B-세포로부터 단리될 수 있다. 통상적인 절차, 예컨대 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 폴리뉴클레오티드가 단리될 수 있다. 파지 디스플레이는 공지의 기술의 또 다른 예로서, 이에 의해 항체 및 다른 항원 결합 단백질의 유도체가 제조될 수 있다. 한 접근법에서, 관심있는 항원 결합 단백질의 성분인 폴리펩티드는 임의의 적합한 재조합 발현 시스템 내에서 발현되고, 발현된 폴리펩티드들은 어셈블리되어 항원 결합 단백질 분자를 형성하도록 허용될 수 있다. 파지 디스플레이는 또한 쇄 셔플링을 통해 상이한 특성 (즉, 이들이 결합하는 항원에 대한 친화도가 달라짐)을 갖는 항원 결합 단백질을 유래시키는데 사용된다 (문헌 [Marks et al., 1992, BioTechnology 10:779] 참조).
유전자 코드의 다의성으로 인해, 본원에 도시된 각각의 폴리펩티드 서열은 또한 제공된 것을 제외한 다수의 다른 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된다. 예를 들어, 본원에 제공된 중쇄 가변 도메인은 폴리뉴클레오티드 서열인 서열 32, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57 또는 59에 의해 코딩될 수 있다. 경쇄 가변 도메인은 폴리뉴클레오티드 서열인 서열 2, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 또는 28에 의해 코딩될 수 있다. 따라서, 당업자는 본원이 각각의 항원 결합 단백질을 코딩하는 각각의 다의성 뉴클레오티드 서열에 대한 적합한 설명 및 실행 방안을 제시하고 있음을 이해할 것이다.
한 측면은 특정 혼성화 조건 하에 다른 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 제공한다. 적합한 조건을 고안하기 위한 혼성화 상태 및 지시의 선택에 영향을 미치는 염기성 파라미터, 핵산을 혼성화하는 방법이 당업계에 주지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook, Fritsch, and Maniatis (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. and Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc.]을 참조한다. 본원에 정의된 바와 같이, 중등도로 엄격한 혼성화 조건은 5x 염화나트륨/시트르산나트륨 (SSC), 0.5％ SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0)를 함유하는 예비세정 용액, 약 50％ 포름아미드, 6x SSC의 혼성화 완충제, 및 55℃의 혼성화 온도 (또는 다른 유사한 혼성화 용액, 예컨대 약 50％ 포름아미드를 함유하는 용액과 42℃의 혼성화 온도), 및 0.5x SSC, 0.1％ SDS에서의 60℃의 세정 조건을 사용한다. 엄격한 혼성화 조건에서는, 6x SSC, 45℃에서의 혼성화 후, 68℃에서 0.1x SSC, 0.2％ SDS에서 1회 이상 세정된다. 또한, 당업자는 서로 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% (그 사이의 모든 값 포함) 동일한 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 전형적으로 서로 혼성화된 상태로 남아있도록 혼성화의 엄격도를 증가 또는 감소시키기 위해 혼성화 및/또는 세정 조건을 조작할 수 있다.
변화를 돌연변이에 의해 폴리뉴클레오티드에 도입하여, 이것이 코딩하는 폴리펩티드 (예를 들어, 항원 결합 단백질 또는 항원 결합 단백질 유도체)의 아미노산 서열에 변화를 일으킬 수 있다. 돌연변이는 당업계에 공지된 임의의 기술, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 및 무작위 돌연변이유발을 사용하여 도입될 수 있다. 돌연변이체 폴리펩티드는 원하는 특성을 위해 발현 및 선택될 수 있다. 돌연변이는 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드의 생물학적 활성을 유의하게 변경시키지 않고 폴리뉴클레오티드에 도입될 수 있다. 예를 들어, 비필수 아미노산 잔기에서의 치환. 대안적으로, 하나 이상의 돌연변이는 폴리뉴클레오티드가 코딩하는 폴리펩티드의 생물학적 활성을 선택적으로 변화시키는 폴리뉴클레오티드에 도입될 수 있다. 예를 들어, 돌연변이는 생물학적 활성을 정량적으로 또는 정성적으로 변화시킬 수 있고, 예컨대 항원 결합 단백질의 활성을 증가, 감소 또는 제거하고, 항원 결합 단백질의 항원 특이성을 변화시킬 수 있다.
또 다른 측면에서는 핵산 서열의 검출을 위한 프라이머 또는 혼성화 프로브로서 사용하기 위해 적합한 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 폴리뉴클레오티드는 전장 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 일부만, 예를 들어, 프로브 또는 프라이머로서 사용될 수 있는 단편, 또는 폴리펩티드의 활성 부분 (예를 들어, IL-23 결합 부분)을 코딩하는 단편을 포함할 수 있다. 핵산의 서열에 기초한 프로브는 핵산 또는 유사한 핵산, 예를 들어, 폴리펩티드를 코딩하는 전사체를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 프로브는 표지화 기, 예를 들어, 방사성동위원소, 형광 화합물, 효소, 또는 효소 보조인자를 포함할 수 있다. 이같은 프로브는 이러한 폴리펩티드를 발현하는 세포를 확인하는데 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질의 발현 방법
본원에 제공된 항원 결합 단백질은 임의의 다수의 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, IL-23 항원 결합 단백질은 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 재조합 발현 시스템에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al.(eds.) Plenum Press, New York (1980)]; 및 [Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988)]을 참조한다.
적어도 하나의 상기 설명되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 플라스미드, 발현 벡터, 전사 또는 발현 카세트 형태의 발현 시스템 및 구축물, 및 또한 상기 발현 시스템 또는 구축물를 포함하는 숙주 세포를 또한 본원에서 제공한다. 본원에 사용된 "벡터"는 단백질 코딩 정보를 숙주 세포 내로 전달하는데 사용하기 적합한 임의의 분자 또는 엔티티 (예를 들어, 핵산, 플라스미드, 박테리오파지 또는 바이러스)를 의미한다. 벡터의 예는 플라스미드, 바이러스 벡터, 비-에피솜형 포유동물 벡터 및 발현 벡터, 예를 들어, 재조합 발현 벡터를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 발현 벡터, 예컨대 재조합 발현 벡터는 숙주 세포의 형질전환에 유용하고, 그에 작동가능하게 연결된 하나 이상의 이종성 코딩 영역의 발현을 (숙주 세포와 연관하여) 지시하고/하거나 제어하는 핵산 서열을 함유한다. 발현 구축물은 그에 작동가능하게 연결된 코딩 영역의 전사, 번역에 영향을 미치거나 제어하고, 인트론이 존재하는 경우에 상기 코딩 영역의 RNA 스플라이싱에 영향을 미치는 서열을 포함할 수 있고 이에 제한되지 않는다. "작동가능하게 연결된"은 용어가 적용되는 성분들이 그의 본래의 기능을 수행하도록 하는 관계에 있는 것을 의미한다. 예를 들어, 단백질 코딩 서열에 "작동가능하게 연결된" 벡터 내의 제어 서열, 예를 들어, 프로모터는 제어 서열의 정상 활성이 단백질 코딩 서열의 전사를 일으켜 코딩된 단백질의 재조합 발현을 일으키도록 배열된다.
또 다른 측면은 재조합 발현 벡터와 같은 발현 벡터가 도입된 숙주 세포를 제공한다. 숙주 세포는 임의의 원핵생물 세포 (예를 들어, 이. 콜라이) 또는 진핵생물 세포 (예를 들어, 효모, 곤충, 또는 포유동물 세포 (예를 들어, CHO 세포))일 수 있다. 벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기술을 통해 원핵생물 또는 진핵생물 세포 내로 도입될 수 있다. 포유동물 세포의 안정적인 형질감염에 대해, 사용된 발현 벡터 및 형질감염 기술에 따라, 소량의 세포만이 자신의 게놈 내로 외래 DNA를 통합시킬 수 있음이 공지되어 있다. 이러한 통합체를 확인 및 선택하기 위해, 선택가능한 마커 (예를 들어, 항생제에 대한 저항성을 위한 마커)를 코딩하는 유전자가 관심 유전자와 함께 숙주 세포 내로 일반적으로 도입된다. 바람직한 선택가능한 마커는 약물, 예를 들어 G418, 히그로마이신 및 메토트렉세이트에 대한 저항성을 부여하는 것을 포함한다. 도입된 폴리뉴클레오티드로 안정적으로 형질감염된 세포가, 여러 방법들 중에서도, 약물 선택에 의해 확인될 수 있다 (예를 들어, 선택가능한 마커 유전자가 혼입된 세포는 생존하는 한편, 다른 세포는 사멸할 것임).
항원 결합 단백질은 하이브리도마 세포주 (예를 들어, 특히 항체는 하이브리도마에서 발현될 수 있음) 또는 하이브리도마 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 항원 결합 단백질을 코딩하는 발현 구축물을 사용하여 포유동물, 곤충 또는 미생물 숙주 세포를 형질전환시킬 수 있다. 형질전환은 미국 특허 번호 4,399,216; 4,912,040; 4,740,461; 4,959,455에 의해 예시된 바와 같이, 폴리뉴클레오티드를 바이러스 또는 박테리오파지에 패키징하고, 당업계에 공지된 형질감염 절차에 의해 숙주 세포를 구축물로 형질도입하는 것을 포함하는, 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입시키기 위한 임의의 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 사용되는 최적 형질전환 절차는 형질전환시킬 숙주 세포의 유형에 따라 결정될 것이다. 이종성 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포 내로 도입하기 위한 방법은 당업계에 주지되어 있고, 덱스트란-매개된 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌 매개된 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 폴리뉴클레오티드(들)의 리포솜 내 봉입, 핵산과 양전하를 갖는 지질의 혼합, 및 핵 내로 DNA의 직접 미세주사를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
재조합 발현 구축물은 전형적으로 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 폴리펩티드는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다: IL-23 항원 결합 단백질의 본원에 제공된 바와 같은 하나 이상의 CDR; 경쇄 가변 영역; 중쇄 가변 영역; 경쇄 불변 영역; 중쇄 불변 영역 (예를 들어, CH1, CH2 및/또는 CH3); 및/또는 다른 스캐폴드 부분. 이들 핵산 서열은 표준 라이게이션 기술을 이용하여 적절한 발현 벡터 내로 삽입된다. 한 실시양태에서, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역은 본원에 제공된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 C-말단에 첨부되고, 발현 벡터 내로 라이게이션된다. 벡터는 일반적으로 사용되는 특정 숙주 세포 내에서 기능성이 되도록 선택된다 (즉, 벡터는 숙주 세포 기구에 적합성이어서, 유전자의 증폭 및/또는 발현이 일어날 수 있도록 허용함). 일부 실시양태에서, 단백질 리포터, 예컨대 디히드로폴레이트 리덕타제를 사용하는 단백질-단편 상보성 검정을 이용하는 벡터가 사용된다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,270,964 참조). 적합한 발현 벡터는 예를 들어 인비트로젠 라이프 테크놀로지스 (Invitrogen Life Technologies, 캘리포니아주 칼스배드)) 또는 비디 바이오사이언시즈 (BD Biosciences, 캘리포니아주 산 호세)로부터 구입할 수 있다. 항체 및 단편을 클로닝하고 발현하기에 유용한 다른 벡터는 문헌 [Bianchi and McGrew, 2003, Biotech. Biotechnol. Bioeng. 84:439-44]에 기재된 것을 포함한다. 추가의 적합한 발현 벡터는 예를 들어 문헌 [Methods Enzymol., vol. 185 (D. V. Goeddel, ed.), 1990, New York: Academic Press]에 논의되어 있다.
전형적으로, 임의의 숙주 세포에서 사용되는 발현 벡터는 플라스미드 유지를 위한 및 외인성 뉴클레오티드 서열의 클로닝 및 발현을 위한 서열을 함유할 것이다. 특정 실시양태에서 "플랭킹 서열"로 통합적으로 지칭되는 이러한 서열은 전형적으로 하기 뉴클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함할 것이다: 프로모터, 하나 이상의 인핸서 서열, 복제 기점, 전사 종결 서열, 공여자 및 수용자 스플라이스 부위를 함유하는 완전한 인트론 서열, 폴리펩티드 분비를 위한 리더 서열을 코딩하는 서열, 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 서열, 발현될 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 삽입하기 위한 폴리링커 영역, 및 선택가능한 마커 요소. 제공되는 발현 벡터는 시판되는 벡터와 같은 출발 벡터로부터 구성될 수 있다. 이같은 벡터는 원하는 측면에 위치하는 서열을 모두 함유할 수 있거나 함유하지 않을 수 있다. 하나 이상의 본원에 기재되는 측면에 위치하는 서열이 벡터 내에 이미 존재하지 않는 경우에, 이들을 개별적으로 수득하여 벡터 내로 라이게이션할 수 있다. 각각의 측면에 위치하는 서열을 수득하기 위해 사용되는 방법은 당업자에게 주지되어 있다.
임의로, 벡터는 "태그"-코딩 서열, 즉, IL-23 항원 결합 단백질 코딩 서열의 5' 또는 3' 말단에 위치하는 올리고뉴클레오티드 분자; 폴리His (예컨대, 헥사His)를 코딩하는 올리고뉴클레오티드 서열, 또는 또 다른 "태그", 예컨대 FLAG®, HA (헤마글루티닌 인플루엔자 바이러스), 또는 myc (그에 대한 시판되는 항체가 존재함)를 함유할 수 있다. 이러한 태그는 폴리펩티드의 발현 시에 전형적으로 폴리펩티드에 융합되고, 숙주 세포로부터 IL-23 항원 결합 단백질의 친화도 정제 또는 검출을 위한 수단으로서 역할을 할 수 있다. 친화성 정제는 예를 들어 친화성 매트릭스로서 태그에 대한 항체를 사용하여 칼럼 크로마토그래피에 의해 성취될 수 있다. 임의로, 태그는 정제된 IL-23 항원 결합 단백질로부터 절단을 위해 특정 펩티다제를 사용하는 것과 같은 다양한 수단에 의해 후속적으로 제거될 수 있다.
측면에 위치하는 서열은 상동성 (즉, 숙주 세포로서 동일한 종 및/또는 균주로부터), 이종성 (즉, 숙주 세포 종 또는 균주 이외의 종으로부터), 하이브리드 (즉, 하나 초과의 공급원으로부터의 측면에 위치하는 서열들의 조합물), 합성 또는 천연일 수 있다. 따라서, 측면에 위치하는 서열의 공급원은 측면에 위치하는 서열이 숙주 세포 기구 내에서 기능성이고 그에 의해 활성화될 수 있다면 임의의 원핵생물 또는 진핵생물 유기체, 임의의 척추동물 또는 무척추동물 유기체, 또는 임의의 식물일 수 있다.
벡터에서 유용한 측면에 위치하는 서열은 당업계에 주지된 임의의 일부 방법에 의해 얻을 수 있다. 일반적으로, 본원에서 유용한 측면에 위치하는 서열은 이전에 맵핑에 의해 및/또는 제한 엔도뉴클레아제 소화에 의해 확인되었고, 따라서 적절한 제한 엔도뉴클레아제를 사용하여 적합한 조직 공급원으로부터 단리될 수 있다. 일부 경우에, 측면에 위치하는 서열의 전체 뉴클레오티드 서열은 알려질 수 있다. 여기서, 측면에 위치하는 서열은 핵산 합성 또는 클로닝에 대해 본원에 기재된 방법을 사용하여 합성할 수 있다.
플랭킹 서열의 모두 또는 단지 일부가 공지되어 있는지에 관계없이, 이는 동일한 또는 또 다른 종으로부터의 올리고뉴클레오티드 및/또는 플랭킹 서열 단편과 같은 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 및/또는 스크리닝에 의해 적합한 프로브를 갖는 게놈 라이브러리를 이용하여 수득될 수 있다. 측면에 위치하는 서열이 알려져 있지 않으면, 측면에 위치하는 서열을 함유하는 DNA의 단편은 예를 들어, 코딩 서열 또는 심지어 다른 유전자(들)를 함유할 수 있는 보다 큰 조각의 DNA로부터 단리될 수 있다. 단리는 적합한 DNA 단편을 생성하기 위한 제한 엔도뉴클레아제 소화에 이어, 아가로스 겔 정제, 퀴아젠(Qiagen)® 칼럼 크로마토그래피 (퀴아젠, 캘리포니아주 체츠워스), 또는 당업자에게 공지된 다른 방법을 사용하는 단리에 의해 달성할 수 있다. 상기 목적을 달성하기 위해 적합한 효소의 선택은 당업자에게 쉽게 명백해질 것이다.
복제 기점은 일반적으로 시판되는 원핵생물 발현 벡터의 일부이고, 숙주 세포 내에서 벡터의 증폭을 돕는다. 선택되는 벡터가 복제 기점 부위를 함유하지 않으면, 공지의 서열에 기초하여 합성하여 벡터 내로 라이게이션할 수 있다. 예를 들어, 플라스미드 pBR322로부터의 복제 기점 (뉴잉글랜드 바이오랩스 (New England Biolabs, 매사추세츠주 베벌리))이 대부분의 그람-음성 세균에 대해 적합하고, 다양한 바이러스 기점 (예를 들어, SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, 수포성 구내염 바이러스 (VSV), 또는 유두종 바이러스, 예컨대 HPV 또는 BPV)이 포유동물 세포에서 클로닝 벡터에 유용하다. 일반적으로, 복제 기점 성분은 포유동물 발현 벡터를 위해 요구되지 않는다 (예를 들어, SV40 기점이 또한 바이러스 조기 프로모터를 함유하기 때문에 종종 사용됨).
전사 종결 서열은 일반적으로 폴리펩티드 코딩 영역의 3' 말단에 위치하고, 전사를 종결시키는 역할을 한다. 일반적으로, 원핵 세포에서의 전사 종결 서열은 G-C 풍부 단편에 이은 폴리-T 서열이다. 서열은 라이브러리로부터 쉽게 클로닝되거나 벡터의 일부로서 시판되지만, 또한 본원에서 설명되는 방법과 같은 핵산 합성 방법을 이용하여 쉽게 합성될 수 있다.
선택가능한 마커 유전자는 선택적 배양 배지에서 성장하는 숙주 세포의 생존 및 성장에 필요한 단백질을 코딩한다. 전형적인 선택 마커 유전자는 (a) 원핵 숙주 세포에 있어서 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어 암피실린, 테트라시클린 또는 카나마이신에 대한 내성을 부여하거나, (b) 세포의 영양요구 결핍을 보완하거나, (c) 복합 또는 규정된 배지로부터 입수가능하지 않은 결정적인 영양소를 공급하는 단백질을 코딩한다. 특이적 선택가능한 마커는 카나마이신 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자, 및 테트라시클린 내성 유전자이다. 유리하게는, 네오마이신 내성 유전자가 또한 원핵생물 및 진핵생물 숙주 세포 모두로부터 선택을 위해 사용될 수 있다.
다른 선택가능한 유전자가 발현될 유전자를 증폭하기 위해 사용될 수 있다. 증폭은 성장 또는 세포 생존을 위해 중요한 단백질의 생성을 위해 요구되는 유전자가 재조합 세포의 후속 세대의 염색체 내에서 직렬로 반복되는 과정이다. 포유동물 세포에 적합한 선택가능한 마커의 예는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 및 프로모터 미함유 티미딘 키나제 유전자를 포함한다. 포유동물 세포 형질전환체는 단지 형질전환체가 벡터 내에 존재하는 선택가능한 유전자로 인해 생존하도록 특유하게 적응되는 선택 압력 하에 놓인다. 선택 압력은 배지 중 선택 작용제의 농도를 연속적으로 변화시킴으로써 선택가능한 유전자와, IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질과 같은 다른 유전자를 코딩하는 DNA 둘 다를 증폭시키는 조건 하에 형질전환 세포를 배양함으로써 가해진다. 그 결과, 증폭된 DNA로부터 증가하는 양의 폴리펩티드, 예를 들어 항원 결합 단백질이 합성된다.
리보솜-결합 부위는 일반적으로 rnRNA의 번역 개시에 필요하고, 샤인-달가노 (Shine-Dalgarno) 서열 (원핵생물) 또는 코작 (Kozak) 서열 (진핵생물)을 특징으로 한다. 상기 요소는 일반적으로 프로모터에 대해 3' 및 발현시킬 폴리펩티드의 코딩 서열에 대해 5'에 위치한다.
진핵생물 숙주 세포 발현 시스템에서 글리코실화가 요구되는 경우와 같은 일부 경우에, 글리코실화 또는 수율을 개선하기 위해 다양한 프리 (pre)- 또는 프로 (pro)-서열을 조작할 수 있다. 예를 들어, 특정 신호 펩티드의 펩티다제 절단 부위를 변경하거나, 프로서열을 부가할 수 있고, 이는 또한 글리코실화에 영향을 미칠 수 있다. 최종 단백질 생성물은 -1 위치 (성숙 단백질의 제1 아미노산에 비해)에서 발현에 부수적인 하나 이상의 추가의 아미노산을 가질 수 있고, 이는 완전히 제거되지 않을 수 있다. 예를 들어, 최종 단백질 생성물은 아미노-말단에 부착된, 펩티다제 절단 부위에서 발견되는 1 또는 2개의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 대안적으로, 일부 효소 절단 부위를 사용하여, 효소가 성숙 폴리펩티드 내에서 상기 영역에서 절단하면 약간 말단절단된 형태의 원하는 폴리펩티드를 생성할 수 있다.
발현 및 클로닝은 전형적으로 숙주 유기체에 의해 인식되고 IL-23 항원 결합 단백질을 코딩하는 분자에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유할 것이다. 프로모터는 구조 유전자의 전사를 제어하는, 구조 유전자의 출발 코돈에 대해 상류 (즉, 5')에 위치하는 비전사된 서열이다 (일반적으로 약 100 내지 1000 bp 범위 내). 프로모터는 통상적으로 유도성 프로모터 및 구성적 프로모터의 두 가지 클래스 중 하나로 분류된다. 유도성 프로모터는 영양소 또는 온도 변화의 존재 또는 부재와 같은 배양 조건의 일부 변화에 응답하여 그의 제어 하에서 DNA로부터 증가된 수준의 전사를 개시한다. 그 반면에, 구성적 프로모터는 그들이 작동가능하게 연결된 유전자를 균일하게 전사하고, 즉, 유전자 발현에 대한 제어가 거의 또는 전혀 없다. 다양한 잠재적인 숙주 세포에 의해 인식되는 다수의 프로모터가 공지되어 있다. 적합한 프로모터는 프로모터를 공급원 DNA로부터 제한 효소 소화에 의해 제거하고 원하는 프로모터 서열을 벡터 내로 삽입함으로써, IL-23 항원 결합 단백질의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된다.
효모 숙주에 사용하기에 적합한 프로모터는 또한 당업계에 주지되어 있다. 효모 인핸서는 효모 프로모터와 함께 유리하게 사용된다. 포유동물 숙주 세포에 사용하기에 적합한 프로모터는 주지되어 있고, 바이러스, 예컨대 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스 (예컨대, 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 시토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 원숭이 바이러스 40 (SV40)의 게놈으로부터 수득된 것을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 적합한 포유동물 프로모터는 이종성 포유동물 프로모터, 예를 들어 열 충격 프로모터 및 액틴 프로모터를 포함한다.
관심가질 수 있는 추가의 프로모터 SV40 초기 프로모터 (문헌 [Benoist and Chambon, 1981, Nature 290:304-310]); CMV 프로모터 (문헌 [Thornsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. 81:659-663]); 라우스 육종 바이러스의 3' 긴 말단 반복부에 함유된 프로모터 (문헌 [Yamamoto et al., 1980, Cell 22:787-797]); 헤르페스 티미딘 키나제 프로모터 (문헌 [Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:1444-1445]); 메탈로티오닌 유전자로부터의 프로모터 및 조절 서열 (문헌 [Prinster et al., 1982, Nature 296:39-42]); 및 원핵생물 프로모터, 예컨대 베타-락타마제 프로모터 (문헌 [Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731]); 또는 tac 프로모터 (문헌 [DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25])를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또한, 관심있는 것은 하기 동물 전사 제어 영역이고, 이는 조직 특이성을 나타내고, 트랜스제닉 동물에서 사용된다: 췌장 선방 세포에서 활성인 엘라스타제 I 유전자 제어 영역 (문헌 [Swift et al., 1984, Cell 38:639-646]; [Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409]; [MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515]); 췌장 베타 세포에서 활성인 인슐린 유전자 제어 영역 (문헌 [Hanahan, 1985, Nature 315:115-122]); 림프 세포에서 활성인 이뮤노글로불린 유전자 제어 영역 (문헌 [Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658]; [Adames et al., 1985, Nature 318:533-538]; [Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-1444]); 고환, 유방, 림프 및 비만 세포에서 활성인 마우스 유방 종양 바이러스 제어 (문헌 [Leder et al., 1986, Cell 45:485-495]); 간에서 활성인 알부민 유전자 제어 영역 (문헌 [Pinkert et al., 1987, Genes and Devel. 1 :268-276]); 간에서 활성인 알파-페토-단백질 유전자 제어 영역 (문헌 [Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5:1639-1648]; [Hammer et al., 1987, Science 253:53-58]); 간에서 활성인 알파 1-안티트립신 유전자 제어 영역 (문헌 [Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1:161-171]); 골수 세포에서 활성인 베타-글로빈 유전자 제어 영역 (문헌 [Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340]; [Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94]); 뇌의 희소돌기아교세포 세포에서 활성인 미엘린 염기성 단백질 유전자 제어 영역 (문헌 [Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712]); 골격근에서 활성인 미오신 경쇄-2 유전자 제어 영역 (문헌 [Sani, 1985, Nature 314:283-286]); 및 시상하부에서 활성인 생식선자극 방출 호르몬 유전자 제어 영역 (문헌 [Mason et al., 1986, Science 234:1372-1378]).
인핸서 서열은 고등 진핵생물에 의해 전사를 증가시키기 위해 벡터에 삽입될 수 있다. 인핸서는 전사를 증가시키도록 프로모터에 대해 작용하는 일반적으로 약 10 내지 300 bp 길이의 DNA의 시스 작용 요소이다. 인핸서는 전사 단위에 대해 5' 및 3' 모두의 위치에서 발견된, 비교적 배향 및 위치 비의존적이다. 포유동물 유전자로부터 이용가능한 일부 인핸서 서열이 공지되어 있다 (예를 들어, 글로빈, 엘라스타제, 알부민, 알파-페토-단백질 및 인슐린). 그러나, 일반적으로, 바이러스로부터의 인핸서가 사용된다. 당업계에 공지된 SV40 인핸서, 사이토메갈로바이러스 조기 프로모터 인핸서, 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서가 진핵생물 프로모터의 활성화를 위한 예시적인 증진 요소이다. 인핸서는 벡터 내에 코딩 서열에 대해 5' 또는 3'에 위치할 수 있지만, 일반적으로 프로모터로부터 5' 부위에 위치한다. 적절한 천연 또는 이종성 신호 서열 (리더 서열 또는 신호 펩티드)을 코딩하는 서열이 항체의 세포외 분비를 촉진하기 위해 발현 벡터 내로 포함될 수 있다. 신호 펩티드 또는 리더의 선택은 항체를 생성시킬 숙주 세포의 유형에 따라 결정되고, 이종성 신호 서열은 천연 신호 서열을 교체할 수 있다. 포유동물 숙주 세포에서 기능성인 신호 펩티드의 예는 다음을 포함한다: 미국 특허 번호 4,965,195에 기재된 인터류킨-7에 대한 신호 서열; 문헌 [Cosman et al.,1984, Nature 312:768]에 기재된 인터류킨-2 수용체에 대한 신호 서열; EP 특허 번호 0367 566에 기재된 인터류킨-4 수용체 신호 펩티드; 미국 특허 번호 4,968,607에 기재된 유형 I 인터류킨-1 수용체 신호 펩티드; EP 특허 번호 0 460 846에 기재된 유형 II 인터류킨-1 수용체 신호 펩티드.
벡터를 구축한 후, 완성된 벡터는 증폭 및/또는 폴리펩티드 발현을 위해 적합한 숙주 세포에 삽입될 수 있다. 항원 결합 단백질에 대한 발현 벡터의 선택된 숙주 세포로의 형질전환은 형질감염, 감염, 인산칼슘 공동-침전법, 전기천공법, 미세주입법, 리포펙션, 또는 DEAE-덱스트란 매개된 형질감염, 또는 다른 공지된 기술을 포함하는 주지된 방법에 의해 달성될 수 있다. 선택된 방법은 부분적으로는 사용할 숙주 세포의 유형에 따라 달라질 것이다. 이들 방법 및 다른 적합한 방법 당업자에게 주지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)]에 열거되어 있다.
숙주 세포는 적절한 조건 하에 배양될 때 단백질을 합성하고, 이는 후속적으로 배양 배지로부터 (숙주 세포가 이를 배지 내로 분비하는 경우) 또는 그를 생성하는 숙주 세포로부터 직접 (분비되지 않는 경우) 수집할 수 있다. 적절한 숙주 세포의 선택은 다양한 요인, 예컨대 원하는 발현 수준, 활성에 바람직하거나 필요한 폴리펩티드 변형 (예컨대, 글리코실화 또는 포스포릴화), 및 생물학적 활성 분자로의 폴딩의 용이성에 따라 달라질 것이다.
발현을 위한 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 당업계에 주지되어 있고, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 간세포 암종 세포 (예를 들어, Hep G2), 및 많은 다른 세포주를 포함하나 이에 제한되지 않는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection; ATCC)으로부터 이용가능한 불멸화 세포주를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 세포주는 어느 세포주가 높은 발현 수준을 갖는지 결정하는 것을 통하여 선택될 수 있고 구성적으로 IL-23 결합 특성을 갖는 항원 결합 단백질을 생성한다. 다른 실시양태에서, 그 자신의 항체를 제조하지 않지만 이종성 항체를 제조하고 분비하는 능력이 있는 B 세포 계열로부터의 세포주를 선택할 수 있다.
진단 및 치료 목적을 위한 인간 IL-23 항원 결합 단백질의 용도
항원 결합 단백질은 생물학적 샘플 내에서 IL-23을 검출하기 위해, 및 IL-23을 생성하는 세포 또는 조직을 확인하기 위해 유용하다. IL-23에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질은 IL-23과 관련된 질환의 진단 및/또는 치료를 필요로 하는 환자에서 IL-23과 관련된 질환의 진단 및/또는 치료에 사용될 수 있다. 일례로서, IL-23 항원 결합 단백질은 진단 검정, 예를 들어 혈액, 혈청, 세포 또는 조직 내에서 발현된 IL-23을 검출하고/하거나 정량하기 위한 결합 검정에서 사용될 수 있다. 또한, IL-23 항원 결합 단백질은 세포 또는 조직에서 IL-23의 하나 이상의 생물학적 활성을 감소, 억제, 방해 또는 조절하는데 사용될 수 있다. 따라서, IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질은 IL-23과 관련된 질환을 개선시키는데 치료 용도를 가질 수 있다.
적응증
본 발명은 또한 의학적 장애, 예컨대 본원에 개시된 것의 예방적 또는 치료적 치료에 사용하기 위한 IL-23 항원 결합 단백질의 용도에 관한 것이다. IL-23 항원 결합 단백질은 IL-23이 근본적인 질환 또는 장애와 관련되거나 또는 그에 대한 기여에서 소정의 역할을 하거나 또는 다르게는 음성 증상에 기여하는 다양한 상태를 치료하는데 유용하다.
IL-23 항원 결합 단백질에 의해 효과적으로 치료되는 상태는 염증 반응에서 소정의 역할을 수행한다. 이러한 염증성 장애는 치주 질환; 폐 장애, 예컨대 천식; 피부 장애, 예컨대 건선, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염; 류마티스성 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 진행성 전신 경화증 (경피증); 전신 홍반성 루푸스; 강직성 척추염, 건선성 관절염, 장병증성 관절염 및 반응성 관절염을 포함한 척추관절염을 포함한다. 또한, 보그트-코야나기-하라다병, 특발성 전방 및 후방 포도막염, 및 척추관절염과 관련된 포도막염을 포함한 포도막염이 고려된다. IL-23 항원 결합 단백질의 사용은 또한 다발성 경화증; 자가면역 심근염; 제1형 당뇨병 및 자가면역성 갑상선염을 포함하는 자가면역 장애의 치료를 위해 고려된다.
위장계의 변성 상태는 IL-23 항원 결합 단백질로 치료가능하거나 예방가능한다. 이러한 위장 장애는 염증성 장 질환: 크론병, 궤양성 결장염 및 셀리악병을 포함한다.
또한, 고형 기관 이식, 예컨대 심장, 간, 피부, 신장, 폐 또는 다른 이식물 (골수 이식물 포함)로부터 발생하는 이식편-대-숙주 질환, 및 이식편 거부와 같은 합병증을 위한 치료에 IL-23 항원 결합 단백질을 사용하는 것이 포함된다.
또한, 결장, 위, 전립선, 신세포, 자궁경부 및 난소 암, 및 폐암 (SCLC 및 NSCLC)을 포함하는 다양한 형태의 양를 포함하여 다양한 종양성 장애를 치료하기 위해 IL-23 항원 결합 단백질을 사용하는 방법에 본원이 제공된다. 또한, 육종, 골육종 및 암종, 예컨대 선암종 및 편평 세포 암종, 식도암, 위암, 담낭 암종, 백혈병 (급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 림프모구성 백혈병 및 모발상 세포 백혈병 포함), 및 다발성 골수종을 포함하는 고형 종양이 포함된다.
진단 방법
기재된 항원 결합 단백질은 IL-23과 연관된 질환 및/또는 상태를 검출, 진단, 또는 모니터링하기 위해 진단 목적으로 사용될 수 있다. IL-23의 존재의 검출에서 유용한 방법의 예는 면역검정, 예를 들어 효소 연결 면역흡착 검정 (ELISA) 및 방사성 면역검정 (RIA)을 포함한다.
진단 용도를 위해, 항원 결합 단백질은 일반적으로 검출가능한 표지 기로 표지될 것이다. 적합한 표지화 기의 예는 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다: 방사성동위원소 또는 방사성핵종 (예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광 기 (예를 들어, FITC, 로다민, 란타나이드 인광체), 효소 기 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광 기, 비오티닐 기, 또는 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그). 일부 실시양태에서, 표지화 기는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링된다. 단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 사용될 수 있다.
다른 진단 방법은 IL-23을 나타낸 세포 또는 세포를 확인하기 위해 제공된다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 단백질을 표지화 기로 표지하고, IL-23에 대한 표지된 항원 결합 단백질의 결합을 검출한다. 추가의 특정 실시양태에서, IL-23에 대한 항원 결합 단백질의 결합을 생체내에서 검출한다. 추가의 구체적 실시양태에서, IL-23 항원 결합 단백질은 단리되고 측정되고 기술 사용하기가 업계에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 and periodic supplements)]; [John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John Wiley & Sons]을 참조한다.
IL-23에 대한 결합에 대해 제공되는 항원 결합 단백질과 경쟁하는 시험 분자의 존재를 검출하는 다른 방법을 제공한다. 하나의 이같은 검정의 예는 시험 분자의 존재 또는 부재 하에 소정량의 IL-23을 함유하는 용액 내에서 유리 항원 결합 단백질의 양을 검출하는 것을 포함할 것이다. 유리 항원 결합 단백질 (즉, IL-23에 결합되지 않은 항원 결합 단백질)의 양 증가는 시험 분자가 IL-23 결합에 대해 항원 결합 단백질과 경쟁할 수 있음을 나타낼 것이다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단백질을 표지화 기로 표지한다. 대안적으로, 시험 분자를 표지하고, 유리 시험 분자의 양을 항원 결합 단백질의 존재 및 부재 하에 모니터링한다.
치료 방법: 제약 제제, 투여 경로
치료 유효량의 하나 또는 다수의 항원 결합 단백질 및 제약상 허용되는 부형제, 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제, 및/또는 아주반트를 포함하는 제약 조성물을 또한 제공한다. 또한, 이같은 제약 조성물을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법이 포함된다. 용어 "환자"는 인간 환자를 포함한다. 용어 "치료하다" 및 "치료"는 장애의 하나 이상의 증상 또는 다른 양상의 완화 또는 예방, 또는 질환 중증도의 감소 등을 포함한다. 용어 "치료 유효량" 또는 "유효량"은 포유동물에서 임의의 치료 반응을 생성하는 것으로 결정된 IL-23 항원 결합 단백질의 양을 나타낸다. 이같은 치료 유효량은 당업자에 의해 쉽게 확인된다.
항원 결합 단백질은 실용적인 치료제를 구성하기 위해 완전한 치유를 일으키거나 또는 질환의 모든 증상 또는 징후를 근절할 필요가 없다. 관련 분야에서 인지되는 바와 같이, 치료제로서 사용되는 약물은 주어진 질환의 상태의 중증도를 감소시킬 수 있지만, 유용한 치료제로 간주되기 위해 질환의 모든 징후를 없앨 필요는 없다. 유사하게, 예방적으로 투여되는 치료는 실용적인 예방제를 구성하기 위해 상태의 발병을 방지하는 것에서 완전히 효과적일 필요가 없다. 단지 질환의 영향을 감소시키거나 (예를 들어, 질환 증상의 수 또는 중증도를 감소시킴으로써, 또는 또 다른 치료의 유효성을 증가시킴으로써, 또는 또 다른 이로운 효과를 일으킴으로써), 또는 대상체에서 질환이 발생하거나 악화될 가능성을 감소시키는 것이면 충분하다. 본원에 제공된 특정 방법은 특정 장애의 중증도를 반영하는 지표의 기준선에 비해 지속적인 개선을 유도하는데 충분한 양 및 시간으로 IL-23 길항제 (예컨대, 본원에 개시된 항원 결합 단백질)를 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
관련 분야에서 이해되는 바와 같이, 본 발명의 분자를 포함하는 제약 조성물은 적응증에 적절한 방식으로 환자에게 투여된다. 제약 조성물은 비경구, 국소 또는 흡입을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 기술에 의해 투여될 수 있다. 주사되는 경우, 예를 들어, 동맥내, 정맥내, 근육내, 병변내, 복강내 또는 피하 경로를 통해, 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의해 제약 조성물이 투여될 수 있다. 이식물로부터의 지속 방출 및 경피 전달과 같이, 국소화된 투여, 예를 들어, 질환 또는 손상 부위에서의 투여가 고려된다. 흡입에 의한 전달에는, 예를 들어, 비강 또는 경구 흡입, 분무기의 사용, 에어로졸 형태의 길항제의 흡입 등이 포함된다. 다른 대안에는 점안제; 환제, 시럽, 로젠지 또는 츄잉검이 포함되는 경구 제제; 및 국소 제제, 예컨대 로션, 겔, 스프레이 및 연고가 포함된다.
생체외 절차에서의 항원 결합 단백질의 용도가 또한 고려된다. 예를 들어, 환자의 혈액 또는 다른 체액을 생체 외에서 IL-23 결합하는 항원 결합 단백질과 접촉시킬 수 있다. 적절한 불용성 매트릭스 또는 고체 지지체 물질에 항원 결합 단백질이 결합될 수 있다.
유리하게는, 하나 이상의 추가의 성분, 예컨대 생리학상 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 조성물의 형태로 항원 결합 단백질이 투여된다. 임의로, 조성물은 추가로 조합 요법을 위한 하나 이상의 생리학상 활성제를 포함한다. 제약 조성물은 IL-23 항원 결합 단백질을 완충제, 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 저분자량 폴리펩티드 (예컨대, 아미노산 10개 미만인 것), 단백질, 아미노산, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스 또는 덱스트린, 킬레이팅제, 예컨대 EDTA, 글루타티온, 안정화제, 및 부형제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 물질과 함께 포함할 수 있다. 중성의 완충 염수 또는 동종 혈청 알부민과 혼합된 염수가 적합한 희석제의 예이다. 적합한 산업 기준에 따라, 보존제, 예컨대 벤질 알콜이 또한 첨가될 수 있다. 적합한 부형제 용액 (예컨대 수크로스)을 희석제로 사용하여 조성물이 동결건조물로 제제될 수 있다. 적합한 성분들은 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이다. 제약 제제에서 사용될 수 있는 성분들의 추가의 예가 임의의 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences including the 21st Ed. (2005), Mack Publishing Company, Easton, PA]에서 제시된다.
의학 전문의가 사용하기 위한 키트는 임의의 본원에 논의된 상태를 치료하는데 사용하기 위한 IL-23 항원 결합 단백질 및 표지 또는 다른 설명서를 포함한다. 한 실시양태에서, 키트는 하나 이상의 IL-23 결합 항원 결합 단백질의 멸균 제제를 포함하고, 이는 상기 개시된 바와 같은 조성물의 형태일 수 있고, 하나 이상의 바이알 내에 있을 수 있다.
투여량 및 투여 빈도는 투여 경로, 사용되는 특정 항원 결합 단백질, 치료될 질환의 성질 및 중증도, 상태의 급성 또는 만성 여부, 및 대상체의 크기 및 일반적인 상태와 같은 요인에 따라 변할 수 있다. 관련 업계에 공지된 절차에 의해, 예를 들어, 용량의 단계적인 확대 연구를 수반할 수 있는 임상 시험에서, 적합한 투여량이 결정될 수 있다.
전형적인 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 0.1 ㎍/kg 내지 약 30 mg/kg 또는 이를 초과할 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여량은 0.1 ㎍/kg 내지 약 30 mg/kg, 임의로 1 ㎍/kg 내지 약 30 mg/kg, 임의로 10 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg, 임의로 약 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 또는 임의로 약 0.3 mg/kg 내지 3 mg/kg일 수 있다.
투여 빈도는 사용된 제제 내의 특정 인간 IL-23 항원 결합 단백질의 약동학 파라미터에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 임상의는 원하는 효과를 달성하는 투여량이 도달될 때까지 조성물을 투여할 것이다. 따라서, 조성물은 단일 용량으로서, 또는 시간 경과에 따라 2회 이상의 용량 (동일한 양의 원하는 분자를 함유할 수 있거나 함유하지 않을 수 있는)으로서, 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투여량은 적절한 용량-반응 데이터의 이용을 통해 알아낼 수 있다. 본 발명의 IL-23 항원 결합 단백질은, 예를 들어 1회 또는 1회 초과로, 예를 들어, 일정 기간에 걸쳐 규칙적인 간격으로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-23 항원 결합 단백질은 적어도 1개월 또는 이를 초과하는 기간에 걸쳐, 예를 들어, 1개월, 2개월 또는 3개월 또는 심지어 무기한 동안 투여된다. 만성 상태를 치료하기 위해, 장기 치료가 일반적으로 가장 효과적이다. 그러나, 급성 상태를 치료하기 위해, 더 짧은 기간, 예를 들어, 1주 내지 6주 동안의 투여가 충분할 수 있다. 일반적으로, 환자가 선택된 지표 또는 지표들에 대해 기준선에 비해 의학적으로 적절한 정도의 개선을 나타낼 때까지 항원 결합 단백질이 투여된다.
IL-23 항원 결합 단백질이 치료되는 장애의 중증도를 반영하는 적어도 하나의 지표에서 개선, 바람직하게는 지속적인 개선을 유도하는데 충분한 양 및 시간으로 환자에게 투여되는 것이 고려된다. 환자의 질병, 질환 또는 상태의 정도를 반영하는 다양한 지표가 치료의 양 및 시간이 충분한지 여부를 결정하기 위해 평가될 수 있다. 이같은 지표에는, 예를 들어, 당해 장애이 질환 중증도, 증상 또는 징후의 임상적으로 인정되는 지표가 포함된다. 한 실시양태에서, 대상체가 2주 내지 4주 간격의 적어도 2회의 시기에 개선을 나타낸다면, 개선이 지속적인 것으로 간주된다. 일반적으로 개선 정도는 의사에 의해 결정되고, 의사는 징후, 증상, 생검 또는 다른 시험 결과를 기초로 이러한 결정을 내릴 수 있고, 대상체에게 실행되는 질문서, 예컨대 주어진 질환에 대해 전개된 삶의 질 질문서를 또한 사용할 수 있다.
본 발명의 방법 및 조성물의 특정 실시양태는 IL-23 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 추가의 IL-23 길항제, 예를 들어, 2가지 이상의 본 발명의 항원 결합 단백질, 또는 본 발명의 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 다른 IL-23 길항제를 사용하는 것을 포함한다. 또한, 단독으로 또는 환자가 앓고 있는 상태를 치료하는데 유용한 다른 작용제와 함께 투여되는 IL-23 항원 결합 단백질이 제공된다. 이같은 작용제의 예로는 단백질성 및 비단백질성 약물 둘 다가 포함된다. 이러한 작용제는 항-염증성 특성 (예를 들어, IFN-γ, GM-CSF, IL-6, IL-8, IL-17, IL-22 및 TNF에 길항하는 비-스테로이드성 항염증제, 스테로이드, 면역조절제 및/또는 이와 같은 다른 시토카인 억제제) 또는 IL-23 항원 결합 단백질과 하나 이상의 다른 치료 (예를 들어, 수술, 초음파, 또는 염증을 감소시키는 것이 효과적인 치료)를 갖는 치료 모이어티를 포함한다. 다중 치료제가 공동-투여되는 경우, 관련 업계에 인지 또는 공지된 바와 같이, 투여량이 이에 따라 조정될 수 있다. IL-23 항원 결합 단백질과 조합될 수 있는 유용한 작용제는 예를 들어 크론병 또는 궤양성 결장염을 치료하는데 사용되는 것들, 예컨대 아미노살리실레이트 (예를 들어, 메살라민), 코르티코스테로이드 (프레드니손 포함), 항생제, 예컨대 메트로니다졸 또는 시프로플록사신 (또는 예를 들어 누로를 앓고 있는 환자를 치료하는데 유용한 다른 항생제), 및 면역억제제, 예컨대 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 타크롤리무스 및 시클로스포린을 포함한다. 이같은 작용제(들)는 경구 투여될 수 있거나, 또는 또 다른 경로에 의해, 예를 들어, 좌제 또는 관장제을 통해 투여될 수 있다. 건선의 치료에 IL-23 결합 단백질와 조합될 수 있는 작용제는 국소적으로 또는 전신적으로 사용되는 코르티코스테로이드, 칼시포트리엔 및 다른 비타민 D 유도체, 아세트레틴 및 다른 레티노산 유도체, 메토트렉세이트, 타크롤리무스 및 시클로스포린을 포함한다. 이러한 작용제는 동시에, 연속적으로, 교대로 또는 요법의 전체 과정이 효과적이도록 하는 임의의 다른 처방에 따라 투여될 수 있다.
인간 환자 뿐만 아니라, IL-23 항원 결합 단백질은 비-인간 동물, 예컨대 애완동물 (개, 고양이, 조류, 영장류 등), 가축 동물 (말, 소, 양, 돼지, 조류 등)의 치료에 유용하다. 이같은 경우에, 적절한 용량은 동물의 체중에 따라 결정될 수 있다. 예를 들어, 0.2-1 mg/kg의 용량을 사용할 수 있다. 대안적으로, 용량은 동물의 표면적에 따라 결정되고, 여기서 예시적인 용량은 0.1-20 mg/m2, 또는 보다 바람직하게는 5-12 mg/m2이다. 작은 동물, 예를 들어 개 또는 고양이의 경우에, 적합한 용량은 0.4 mg/kg이다. IL-23 항원 결합 단백질 (바람직하게는 수용자 종으로부터 유래된 유전자로부터 구축된)은 동물의 상태가 개선될 때까지 주사 또는 다른 적합한 경로에 의해 매주 1회 이상 투여되거나, 무기한 투여될 수 있다.
수행한 실험과 달성한 결과를 포함한 하기 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공하고, 첨부된 청구항의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
실시예
실시예 1
인간 IL-23 항체의 생성
제노마우스(XenoMouse)TM 기술 (암젠(Amgen), 캘리포니아주 싸우전드 오크스)을 사용하여 인간 IL-12를 스페어링하면서 천연 인간 IL-23 활성을 인식하여 억제하는 인간 모노클로날 항체를 생성하였다. 항체는 또한 재조합 시노몰구스 IL-23을 인식하여 억제하지만 뮤린 또는 래트 IL-23은 인식하지 않는다.
항체는 하기 기재된 STAT-루시페라제 리포터 검정을 사용하여 인간 단핵구-유래 수지상 세포 (MoDC)로부터 수득한 천연 인간 IL-23의 인식 및 완전한 억제를 위해 선택된다. 인간 단핵구를 음성 선택 (단핵구 단리 키트 II, 밀테니이 바이오텍(Miltenyi Biotec), 캘리포니아주 어번)을 사용하여 건강한 공여자로부터의 말초혈 단핵 세포로부터 단리하였다. MoDC는 10% 태아 소 혈청 완전 배지를 갖는 RPMI 1640에서 7일 동안 인간 GM-CSF (50 ng/㎖) 및 인간 IL-4 (100 ng/㎖)와 배양하여 생성하였다. 이어서, MoDC를 PBS로 2회 세정한 후에 추가의 48시간 동안 인간 CD40L (1 ㎍/㎖)로 자극하였다. CD40L-자극된 MoDC 상청액은 IL-23, IL-12 및 IL-12/23p40을 함유한다. ELISA를 사용하여 IL-12p70 (알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스), IL-23 (이바이오사언시즈(eBiosciences), 캘리포니아주 샌 디에고) 및 IL-12/23p40 (알앤디 시스템즈)의 양을 결정하였다. STAT-루시페라제 검정은 IL-23에 반응하고, IL-12 또는 유리 IL-12/23p40에는 반응하지 않으므로, 이 검정을 조 상청액과 사용하여 IL-23 활성을 평가할 수 있다. 하기 기재된 NK 세포 검정에 사용하기 위해, 천연 인간 IL-23 조 상청액을 IL-23 친화도 칼럼에 이어 크기 배제 크로마로그래피를 사용하여 정제하였다. IL-23 특이적 ELISA (이바이오사이언시즈)를 사용하여 농도를 결정하였다.
정제된 항체 상청액을 또한 STAT-루시페라제 검정에서 재조합 인간 (rhu) IL-23 및 재조합 시노몰구스 (cyno) IL-23에 대해 시험하였다. 재조합 인간 IL-23을 완전하게 억제하는 시험된 항체 중에서, 이들 항체 중 절반만이 천연 인간 IL-23을 인식하여 완전하게 억제하였다. 재조합 인간 IL-23의 인식 및 완전한 억제가 천연 인간 IL-23의 인식 및 완전한 억제를 예측하지 않으며 이와 관련되지 않았다. 도 1a 및 1b에 나타낸 바와 같이, 재조합 인간 IL-23을 완전하게 억제하는 항체 상청액 중에서, 이들 항체 중 절반만이 천연 인간 IL-23을 완전하게 억제하였다. 천연 인간 IL-23을 인식하여 완전하게 억제하는 항체를 추가의 특성화를 위해 선택하였다.
실시예 2
기능적 검정
a) STAT-루시페라제 검정
IL-23은 그의 이종이량체 수용체에 결합하고, JAK2 및 Tyk2를 통해 신호를 전달하여 STAT 1, 3, 4 및 5를 활성화시킨다고 알려져 있다. 이 검정에서, STAT/루시페라제 리포터 유전자로 형질감염된 세포를 사용하여 IL-23-유도된 생물활성을 억제하는 IL-23 항체의 능력을 평가하였다.
인간 IL-23 수용체를 발현하는 차이니즈 햄스터 난소 세포를 밤새 STAT-루시페라제 리포터로 일시적으로 형질감염시켰다. IL-23 항체를 96 웰 플레이트에 연속적으로 희석하였다 (37.5 ㎍/㎖로부터 출발하는 1:4 연속적인 희석의 12개 지점). 음성 인간 IL-23 (제조 방법은 실시예 1에 기재됨)을 2 ng/㎖의 농도에서 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 15 내지 20분 동안 인큐베이션하였다. 일시적으로 형질감염된 세포를 100 ㎕/웰의 최종 부피로 첨가하고 (8 x 103개 세포), 5시간 동안 37℃, 10% CO2에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 세포를 100 ㎕/웰 글로(Glo) 용해 완충제 (1x) (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨)를 사용하여 실온에서 5분 동안 용해시켰다. 50 마이크로리터의 세포 용해물을 50 ㎕ 브라이트-글로(Bright-Glo) 루시페라제 기질 (프로메가)과 함께 96웰 플레이트에 첨가하고, 발광측정기에서 판독하였다.
통계적 분석을 그래프패드 프리즘(GraphPad PRISM) 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어(GraphPad Software), 캘리포니아주 라 졸라)를 사용하여 수행할 수 있다. 결과를 평균±표준 편차 (SD)로 표현할 수 있다.
표 5에 나타낸 바와 같이, 모든 IL-23 항체는 용량 의존성 방식으로 천연 인간 IL-23-유도된 STAT/루시페라제 리포터를 강력하고 완전하게 억제하였다. 항체는 또한 재조합 인간 (rhu) IL-23 및 재조합 시노 (cyno) IL-23을 강력하고 완전하게 억제하였다. 항체는 모두 피코몰 범위의 IC50 값을 갖는다.
Figure 112012042207989-pct00012
b) NK 세포 검정
IL-23은 천연 킬러 세포 상에 작용하여 염증유발 시토카인, 예컨대 인터페론 γ (IFNγ)의 발현을 유도하는 것으로 알려져 있다. 이 검정에서, 인간 주요 천연 킬러 (NK) 세포를 사용하여 인간 IL-23에 대한 천연 수용체를 발현하는 세포에서 IL-23 항체가 IL-23-유도된 IFNγ 활성을 억제하는 능력을 평가하였다.
NK 세포를 음성 선택 (NK 세포 단리 키트, 밀테니이 바이오텍, 캘리포니아주 어번)을 통해 여러 인간 공여자로부터 단리하였다. 정제된 NK 세포 (1 x 106개 세포/㎖)를 재조합 인간 IL-2 (10 ng/㎖, 알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)가 보충된 10% 태아 소 혈청 완전 배지가 첨가된 RPMI 1640 중 6웰 플레이트에 10 ml/웰의 최종 부피로 첨가하였다. 세포를 7일 동안 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 이어서, IL-2-활성화된 NK 세포를 rhuIL-23 또는 cyno IL-23 (10 ng/㎖) 및 재조합 인간 IL-18 (20 ng/㎖, 알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)로 IL-23 항체의 연속적인 희석액 (3 ㎍/㎖로부터 출발하는 1:3 연속적인 희석의 11개 지점)의 존재하에 24시간 동안 자극하였다. IFNγ 수준을 제조사의 지시에 따라 IFNγ ELISA (알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)에 의해 상청액에서 측정하였다.
통계적 분석을 그래프래드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있다. 결과를 평균±표준 편차 (SD)로 표현할 수 있다.
표 6에 나타낸 바와 같이, 모든 항체는 NK 세포에서 용량 의존성 방식으로 rhuIL-23 및 cyno IL-23-유도된 IFNγ 발현을 강력하게 억제하였다. 항체는 모두 피코몰 범위에서 IC50 값을 갖는다. 검정을 천연 인간 IL-23 (30 ㎍/㎖, 제조 방법은 실시예 1에 기재됨) 및 rhuIL-18 (40 ng/㎖, 알앤디 시스템즈)을 사용하여 항체의 서브세트 상에서 수행하였고, 표 6에 나타낸 결과를 수득하였다. IL-23 특이적 항체에 대한 선택과 일치하게, 이들 항-IL-23 항체는 상기 기재된 검정을 사용한 NK 세포에서의 IL-12 자극된 IFNγ 생성에 영향을 미치지 않았으나, IL-12p35 특이적 중화 항체, mAb219 (알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)는 재조합 인간 IL-12를 강력하게 억제하였다.
Figure 112012042207989-pct00013
c) 인간 전혈 검정
인간 전혈은 항-응고제로 레플루단(Refludan)® (바이엘(Bayer), 펜실베니아주 피츠버그)을 사용하여 여러 건강한 공여자로부터 수집하였다. 전혈 중 레플루단®의 최종 농도는 10 ㎍/㎖이다. RPMI 1640 + 10% FBS 중 rhuIL-23 또는 cyno IL-23 (최종 농도 1 ng/㎖) + rhuIL-18 (최종 농도 20 ng/㎖) + rhuIL-2 (최종 농도 5 ng/㎖)의 자극 혼합물을 96웰 플레이트에 최종 농도 20 ㎕/웰로 첨가하였다. 연속적으로 희석된 IL-23 항체 (3 ㎍/㎖로부터 출발하는 1:3 연속적인 희석의 11개 지점)를 20 ㎕/웰에서 첨가하고, 자극 혼합물과 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 전혈을 첨가하고 (120 ㎕/웰), 최종 농도를 RPMI 1640 + 10% FBS로 200 ㎕/웰로 조정하였다. 전혈의 최종 농도는 60%이다. 플레이트를 24시간 동안 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션하였다. 세포 비함유 상청액을 수확하고, IFNγ 수준을 제조사의 지시에 따라 IFNγ ELISA (알앤디 시스템즈)에 의해 상청액으로부터 측정하였다.
통계적 분석을 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있다. 결과를 평균±표준 편차 (SD)로 표현할 수 있다.
표 7에 나타낸 바와 같이, 모든 항체는 용량 의존성 방식으로 전혈 세포에서 rhuIL-23-유도된 및 cyno-IL-23-유도된 IFNγ 발현을 강력하게 억제하였다. 항체는 모두 피코몰 범위의 IC50 값을 갖는다.
Figure 112012042207989-pct00014
d) IL-22 검정
IL-23은 염증유발 시토카인의 강력한 유도제인 것으로 알려져 있다. IL-23은 활성화 및 기억 T 세포 상에 작용하고, IL-22를 포함하는 염증유발 시토카인을 생성하는 Th17 세포의 생존 및 증식을 촉진한다. 이 검정에서, 인간 전혈을 사용하여 IL-23 항체가 IL-23-유도된 IL-22 생성을 억제하는 능력을 평가하였다.
전혈 검정을 IL-22 생성을 유도하기 위해 rhuIL-23 또는 cynoIL-23 (1 ng/㎖) 및 rhuIL-18 (10 ng/㎖)을 사용하는 것으로 변형하여 상기 기재된 바와 동일한 방식으로 수행하였다. IL-22 농도를 IL-22 ELISA (알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)에 의해 결정하였다.
표 8에 나타낸 바와 같이, 항체는 용량 의존성 방식으로 전혈 세포에서 rhuIL-23-유도된 및 cyno IL-23-유도된 IL-22 생성을 강력하게 억제하였다. 항체는 모두 피코몰 범위의 IC50 값을 갖는다.
Figure 112012042207989-pct00015
실시예 3
KinExA 기술을 사용한 항-IL-23 항체에 대한 평형 해리 상수 (KD)의 결정
IL-23 항체에 대한 rhuIL-23의 결합 친화도를 동역학 배제 검정 (KinExA 검정, 사피딘 인스트루먼츠, 인크.(Sapidyne Instruments, Inc.), 아이다호주 보이스)을 사용하여 평가하였다. 정상 인간 혈청 (NHS)-활성화된 세파로스 4 고속 유량 비드 (아머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences), 지이 헬스케어(GE Healthcare) 계열, 스웨덴 웁살라)를 rhuIL-23으로 미리 코팅하고, 10 mg/㎖ BSA를 포함하는 1 m 트리스 완충제로 차단하였다. 50 pM의 IL-23 항체를 실온에서 72시간 동안 rhuIL-23 (800 pM으로부터 출발하는 1:2 희석의 12개 지점)와 인큐베이션한 후에, 이를 rhuIL-23-코팅된 세파로스 비드를 통해 러닝시켰다. 비드-결합된 항체의 양을 형광 (Cy5) 표지된 염소 항-인간-Fc 항체 (잭슨 이뮤노 리서치(Jackson Immuno Research), 펜실베니아주 웨스트 그로브)에 의해 정량하였다. 결합 신호는 평형 상태에서 유리 항체의 양에 비례하였다.
해리 평형 상수 (KD) 및 결합률 (Kon)을 KinExA Pro 소프트웨어를 사용하여 곡선 핏팅으로부터 구하였다. 해리율 (Koff)은 KD=Koff/Kon로부터 유래한다.
표 9에 나타낸 바와 같이, 항체는 인간 IL-23에 대한 결합에 대해 높은 친화도를 갖는다. 모두는 pM 미만으로 낮은 KD 값을 갖는다.
Figure 112012042207989-pct00016
실시예 4
X-선 결정학을 이용한 구조 결정
항체-항원 복합체의 구조를 결정하는 한 가지 방식은 X-선 결정학을 사용하는 것이다 (예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990), p.23] 참조). IL-23의 결정 구조가 결정되었고 (문헌 [Lupardus and Garcia, J Mol Biol, 2008, 382: 931-941] 참조), IL-23/Fab 복합체의 결정 구조가 개시되어 있다 (문헌 [Beyer et al. J Mol Biol, 2008. 382(4): 942-55] 참조). 본원에 청구된 항체의 Fab 단편을 갖는 IL-23의 구조 결정을 X-선 결정학을 사용하여 수행하였다.
결정화를 위한 단백질
재조합적으로 유래된 인간 IL-23 이종이량체를 결정화 연구에 사용하였다 (문헌 [Beyer et al., 상기 문헌] 참조). 인간 p19 서브유닛의 서열은 서열 145의 잔기 20-189, 서열 154의 신호 서열 및 C-말단 6-His 태그 서열 155로 구성된다. 인간 p40 서브유닛의 서열은 서열 147의 위치 222에서의 글리코실화를 방지하기 위해 이 부위에서 아스파라긴을 글루타민으로 돌연변이시켰다 (문헌 [Beyer, et al., 상기 문헌]).
항체 B 및 항체 E로부터 유래된 Fab를 카스파제 절단 부위를 도입한 IgG1 스캐폴드 상에서 발현시켰다. Fab를 프로테아제 절단에 의해 처리하였다.
복합체 형성 및 결정화
IL-23-항체 B Fab 복합체는 2X 몰 과량의 항체 B Fab를 상기 기재된 인간 이종이량체 IL-23과 혼합하여 만들었다. 복합체를 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하여 잉여량의 항체 B Fab를 제거하고, 결정화를 위해 약 12 mg/㎖로 농축시켰다. IL-23-항체 B Fab 복합체를 0.1 M 헤페스 pH 7, 8% PEG 8000에서 결정화시켰다.
IL-23-항체 E Fab 복합체는 2X 몰 과량의 항체 E Fab를 상기 기재된 인간 이종이량체 IL-23과 혼합하여 만들었다. 복합체를 JBS 메틸화 키트를 제조사의 지시에 따라 사용하여 메틸화시켰다 (제나 바이오사이언스(Jena Bioscience), 독일 제나). 이어서, 복합체를 PNGase로 처리하여 단백질을 탈글리코실화시켰다. 이들 처리 후에, 복합체를 크기 배제 크로마토그래피에 의해 정제하여 잉여량의 항체 E Fab를 제거하고, 결정화를 위해 13.5 mg/㎖로 농축시켰다. IL-23-항체 E Fab 복합체를 0.1 M 트리스 pH 8.5, 0.2 M 염화마그네슘, 15% PEG 4000에서 결정화시켰다.
데이터 수집 및 구조 결정
IL-23-항체 B Fab 결정을 단위 셀 치수 a=70.93, b=71.27, c=107.37 Å, β=104.98˚를 갖는 P21 공간군에서 성장시키고, 2.0 Å 해상도로 회절시켰다. IL-23-항체 B Fab 구조는 IL-23 구조 (문헌 [Beyer et al. 상기 문헌])를 출발 검색 모델로 사용하여 프로그램 MOLREP (CCP4, 문헌 [The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1994. 50(Pt 5): p. 760-3])을 사용한 분자 교체에 의해 풀었다. IL-23 용액을 고정된 상태로 유지하면서, 항체 가변 도메인을 검색 모델로 사용하였다. IL-23-항체 가변 도메인 용액을 고정된 상태로 유지하면서, 항체 불변 도메인을 검색 모델로 사용하였다. 완전한 구조는 콴타(Quanta)를 사용한 다수회의 모델 구축 및 cnx을 사용한 정교화로 개선시켰다 (문헌 [Brunger, et al., Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1998, 54(Pt 5): p. 905-21]).
단백질 원자 사이의 거리는 프로그램 PyMOL을 사용하여 계산하였다 (문헌 [DeLano, W.L. The PyMOL Graphics System. Palo Alto, 2002]) (슈뢰딩거, 엘엘씨(Schrodinger, LLC); 뉴욕주 뉴욕)). 적어도 하나의 원자가 상대 단백질에 대해 필요한 거리 역치 내에 위치한다면 아미노산을 선택하였다.
항체 B Fab에 결합되었을 때 IL-23의 p19 서브유닛의 A, B, C 및 D 헬릭스의 경계는 서열 145의 A 헬릭스 잔기 28-47, B 헬릭스 잔기 86-105, C 헬릭스 잔기 119-134 및 D 헬릭스 잔기 154-187을 포함한다.
항체 B Fab에 결합되었을 때 IL-23p19 서브유닛 상의 상호작용의 영역은 서열 145의 Ser46-Glu58, Glu112-Glu123 및 Pro155-Phe163 내의 잔기를 포함한다.
항체 B Fab로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 IL-23p19 서브유닛 아미노산 잔기는 서열 145의 Ser46, Ala47, His48, Pro49, Leu50, His53, Met54, Asp55, Glu58, Pro113, Ser114, Leu115, Leu116, Pro120, Val121, Trp156, Leu159, Leu160, Arg162 및 Phe163을 포함한다. 항체 B Fab로부터 4 Å과 5 Å 사이에 있는 원자를 갖는 IL-23p19 아미노산 잔기는 서열 145의 Val51, Arg57, Glu112, Asp118, Ser119, Gln123, Pro155를 포함한다.
항체 B Fab로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 IL-23p40 서브유닛 아미노산 잔기는 서열 147의 Glu 122 및 Lys 124를 포함한다.
IL-23 이종이량체로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 항체 B Fab 중쇄 아미노산 잔기는 서열 46의 Gly32, Gly33, Tyr34, Tyr35, His54, Asn58, Thr59, Tyr60, Lys66, Arg101, Gly102, Phe103, Tyr104 및 Tyr105를 포함한다. IL-23 이종이량체로부터 ≤ 5 Å에 있는 원자를 갖는 항체 B Fab 중쇄 아미노산 잔기는 서열 46의 Ser31, Gly32, Gly33, Tyr34, Tyr35, His54, Ser56, Asn58, Thr59, Tyr60, Lys66, Arg101, Gly102, Phe103, Tyr104 및 Tyr105를 포함한다.
IL-23 이종이량체로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 항체 B Fab 경쇄 아미노산 잔기는 서열 15의 Ser30, Ser31, Trp32, Tyr49, Ser52, Ser53, Ala91, Asn92, Ser93, Phe94 및 Phe96을 포함한다. IL-23 이종이량체로부터 ≤ 5 Å에 있는 원자를 갖는 항체 B Fab 경쇄 아미노산 잔기는 서열 15의 Ser30, Ser31, Trp32, Tyr49, Ala50, Ser52, Ser53, Ser56, Ala91, Asn92, Ser93, Phe94 및 Phe96을 포함한다.
IL-23-항체 E Fab 복합체 결정을 단위 셀 치수 a=61.60, b=97.59, c=223.95 Å을 갖는 P2221 공간군에서 성장시키고, 3.5 Å 해상도로 회절시켰다. IL-23-항체 E Fab 복합체 구조는 3가지 출발 검색 모델로서 상기 기재된 바와 같은 IL-23 구조, 항체 가변 도메인 및 항체 불변 도멘인을 사용하여 프로그램 Phaser (CCP4, 상기 문헌)를 사용한 분자 교체에 의해 풀었다. 완전한 구조는 콴타를 사용한 다수회의 모델 구축 및 cnx을 사용한 정교화로 개선시켰다 (문헌 [Brunger, et al., 상기 문헌]). 항체 E Fab 불변 도메인은 단백질의 그 부분에 대해 매우 부족한 전자 밀도 때문에 최종 정교화된 구조에서 제외되었다.
항체 E Fab에 결합되었을 때 확인된 IL-23p19 서브유닛 상의 상호작용의 영역은 서열 145의 Ser46-His53, Glu112-Val120 및 Trp156-Phe163 내의 잔기를 포함한다.
항체 E Fab로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 IL-23p19 아미노산 잔기는 서열 145의 Ser46, Ala47, His48, Pro49, Leu50, Glu112, Pro113, Ser114, Leu115, Leu116, Pro117, Asp118, Ser119, Pro120, Trp156, Leu159, Leu160 및 Phe163을 포함한다. 항체 E Fab로부터 4 Å과 5 Å 사이에 있는 원자를 갖는 IL-23p19 아미노산 잔기는 서열 145의 His53을 포함한다.
항체 E Fab로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 IL-23p40 아미노산 잔기는 서열 147의 Lys121, Glu 122, Pro123 및 Asn 125를 포함한다.
IL-23 이종이량체로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 항체 E Fab 중쇄 아미노산 잔기는 서열 31의 Gly26, Phe27, Thr28, Ser31, Tyr53, Tyr59, Tyr102, Ser104, Ser105, Trp106, Tyr107, 및 Pro108을 포함한다. IL-23 이종이량체로부터 ≤ 5 Å에 있는 원자를 갖는 항체 E Fab 중쇄 아미노산 잔기는 서열 31의 Gln1, Gly26, Phe27, Thr28, Ser30, Ser31, Tyr32, Trp52, Tyr53, Tyr59, Arg100, Tyr102, Thr103, Ser104, Ser105, Trp106, Tyr107 및 Pro108을 포함한다.
IL-23 이종이량체로부터 4 Å 이내에 있는 원자를 갖는 항체 E Fab 경쇄 아미노산 잔기는 서열 1의 Ala31, Gly32, Tyr33, Asp34, Tyr51, Gly52, Asn55, Lys68 및 Tyr93을 포함한다. IL-23 이종이량체로부터 ≤ 5 Å에 있는 원자를 갖는 항체 B Fab 경쇄 아미노산 잔기는 서열 1의 Thr29, Ala31, Gly32, Tyr33, Asp34, Tyr51, Gly52, Asn55, Lys68, Tyr93 및 Trp100을 포함한다.
실시예 5
용매 접근가능한 표면적 차이를 통한 IL-23-항체 복합체 접촉 잔기의 결정
인간 IL-23-항체 B Fab 복합체 및 인간 IL-23-항체 E Fab 복합체에서 파라토프 (항원을 인식하는 항체의 일부) 및 파라토프에 의해 결합된 이것이 결합하는 항원의 일부에서의 잔기 접촉부를 용매 접근가능한 표면적 차이를 이용하여 결정하였다. 용매 접근가능한 표면적 계산은 분자 운영 환경 (케미칼 컴퓨팅 그룹(Chemical Computing Group), 퀘벡 몬트리올)을 사용하여 수행하였다.
IL-23-항체 B Fab 복합체에서 파라토프 잔기의 용매 접근가능한 표면적 차이는 항체 B Fab 잔기를 바람직한 세트로 설정하여 계산하였다. IL-23-항체 B Fab 복합체에 대해 실시예 4에서 얻은 구조적 정보를 사용하고, IL-23 이종이량체의 존재하에 항체 B Fab의 아미노산 잔기의 잔기 용매 접근가능한 표면적을 계산하여, 세트에 대해 "결합된 영역"으로 나타내었다.
IL-23 항원의 부재하에 각각의 항체 B Fab 잔기의 잔기 용매 접근가능한 표면적을 계산하여, 세트에 대해 "유리 영역"으로 나타내었다.
이어서, "결합된 영역"을 "유리 영역"으로부터 감하여 세트에서 각각의 잔기에 대해 "용매 노출된 표면적 차이"를 구하였다. 표면적에 변화가 없거나 0 차이를 갖는 항체 B Fab 잔기는 복합체화되었을 때 IL-23 항원의 잔기와 접촉하지 않았다. 차이 값 ≥ 10 Å2를 갖는 항체 B Fab 잔기를 IL-23 항원에서 잔기와 유의하게 접촉하는 것으로 간주하여, 항체 B Fab가 인간 IL-23에 결합되었을 때 이들 항체 B Fab 잔기가 적어도 부분적으로 내지 완전히 교합되도록 하였다. 항체 B Fab 잔기의 이러한 세트는 "커버된 패치"를 구성하고, 잔기는 항체 B Fab가 인간 IL-23에 결합되었을 때 인터페이스의 구조에 연관된다 (표 10 및 11 참조). 커버된 패치에서 항체 B Fab 잔기가 IL-23 항원의 잔기와의 결합 상호작용에 연관되지 않을 수 있으나, 커버된 패치 내의 임의의 단일 잔기의 돌연변이가 인간 IL-23에 대한 항체 B Fab의 결합에 영향을 미치게 될 활동적 차이를 도입할 수 있다. Tyr49를 제외로 하고, 모든 잔기가 항체 B Fab 경쇄 및 중쇄의 CDR 영역에 위치한다. 이들 잔기는 또한 실시예 4에 기재된 바와 같이 항체 B Fab에 결합되었을 때 IL-23 항원의 5 Å 이내에 있다.
Figure 112012042207989-pct00017
Figure 112012042207989-pct00018
IL-23-항체 E Fab 복합체에서 잔기의 용매 접근가능한 표면적 차이를 상기 기재된 바와 같이 계산하였다. 차이 값 ≥ 10 Å2를 갖는 항체 E Fab 잔기를 IL-23 항원에서 잔기와 유의하게 접촉하는 것으로 간주하고, 이들 항체 E Fab 잔기는 항체 E Fab가 인간 IL-23에 결합되었을 때 적어도 부분적으로 내지 완전하게 교합된다. 이러한 세트의 항체 E Fab 잔기가 커버된 패치를 구성하고, 잔기는 항체 E Fab가 인간 IL-23에 결합되었을 때 인터페이스의 구조에 연관된다 (표 12 및 13 참조). 이러한 커버된 패치에서 항체 E Fab 잔기가 IL-23 항원의 잔기와의 결합 상호작용에 연관되지 않을 수 있으나, 커버된 패치 내의 임의의 단일 잔기의 돌연변이는 인간 IL-23에 대한 항체 E Fab의 결합에 영향을 미치게 될 활동적 차이를 도입할 수 있다. 대부분의 경우, 이러한 커버된 패치 잔기는 항체 E Fab 중쇄 및 경쇄의 CDR 영역 내에 위치하였다. 이러한 잔기는 또한 실시예 4에 기재된 바와 같이 항체 E Fab에 결합되었을 때 IL-23 항원의 5 Å 이내에 있었다.
Figure 112012042207989-pct00019
Figure 112012042207989-pct00020
항체 B Fab의 파라토프에 의해 결합된 IL-23 이종이량체의 일부의 용매 접근가능한 표면적 차이는 IL-23 이종이량체 잔기를 바람직한 세트로서 설정하여 계산하였다. 항체 B Fab-IL-23 복합체에 대해 실시예 4에서 얻은 구조적 정보를 사용하고, 항체 B Fab의 존재하에 IL-23 이종이량체의 잔기 용매 접근가능한 표면적을 계산하여, 세트에 대해 결합된 영역을 나타내었다.
항체 B Fab의 부재하의 각각의 IL-23 이종이량체 잔기의 잔기 용매 접근가능한 표면적을 계산하여, 세트의 유리 영역을 나타내었다.
상기 기재된 바와 같이, 결합된 영역을 자유 영역으로부터 감하여 각각의 IL-23 잔기에 대한 용매 노출된 표면적 차이를 구하였다. 표면적에 변화가 없거나 또는 0 차이를 갖는 IL-23 이종이량체 잔기는 복합체화되었을 때 항체 B Fab의 잔기와 접촉하지 않았다. 차이 값 ≥ 10 Å2를 갖는 IL-23 이종이량체 잔기를 항체 B Fab의 잔기와 유의하게 접촉하는 것으로 간주하고, 이러한 IL-23 이종이량체 잔기는 인간 IL-23 이종이량체가 항체 B Fab에 결합되었을 때 적어도 부분적으로 내지 완전하게 교합된다. 이러한 세트의 IL-23 이종이량체 잔기가 커버된 패치를 구성하고, 잔기는 인간 IL-23 이종이량체가 항체 E Fab에 결합되었을 때 인터페이스의 구조에 연관된다 (표 14 참조). 이러한 커버된 패치에서 IL-23 이종이량체 잔기가 모두 항체 B Fab 상의 잔기와의 결합 상호작용에 연관되는 것은 아닐 수 있으나, 커버된 패치 내의 임의의 단일 잔기의 돌연변이는 인간 IL-23에 대한 항체 B Fab의 결합에 영향을 미치게 될 활동적 차이를 도입할 수 있다. 이러한 잔기는 또한 실시예 4에 기재된 바와 같이 항체 B Fab로부터 4 Å 이내에 있었다.
Figure 112012042207989-pct00021
항체 E Fab의 파라토프에 의해 결합된 IL-23 이종이량체의 부분의 용매 접근가능한 표면적 차이를 상기 기재된 바와 같이 계산하였다. 차이 값 ≥ 10 Å2을 갖는 IL-23 이종이량체 잔기를 항체 E Fab의 잔기와 유의하게 접촉된 것으로 간주하고, 이러한 IL-23 이종이량체 잔기는 인간 IL-23 이종이량체가 항체 E Fab에 결합되었을 때 적어도 부분적으로 내지 완전하게 교합된다. 이러한 세트의 IL-23 이종이량체 잔기가 커버된 패치를 구성하고, 잔기는 인간 IL-23 이종이량체가 항체 E Fab에 결합되었을 때 인터페이스의 구조에 연관된다 (표 15 참조). 이러한 커버된 패치에서 IL-23 이종이량체 잔기가 모두 항체 E Fab 상의 잔기와의 결합 상호작용에 연관되는 것은 아닐 수 있으나, 커버된 패치 내의 임의의 단일 잔기의 돌연변이는 인간 IL-23에 대한 항체 E Fab의 결합에 영향을 미치게 될 활동적 차이를 도입할 수 있다. 이러한 잔기는 또한 실시예 4에 기재된 바와 같이 항체 E Fab로부터 5 Å 이내에 있었다.
Figure 112012042207989-pct00022
SEQUENCE LISTING <110> Towne, Jennifer Cheng, Janet O'Neill, Jason Zhang, Yu Sun, Yu Cerne, Heather Piper, Derek Ketchem, Randal <120> HUMAN IL-23 ANTIGEN BINDING PROTEINS <130> A-1529-WO-PCT <140> to be assigned <141> 2010-10-26 <150> 61/381,287 <151> 2010-09-09 <150> 61/254,982 <151> 2009-10-26 <160> 155 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Thr Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Ser Gly Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 2 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcagctc caacaccggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcaa 120 gttccaggaa cagcccccaa actcctcatt tatggtagcg gcaatcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactggactc 240 caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttgg 300 gtgttcggcg gagggaccag gctgaccgtc ctg 333 <210> 3 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Ser Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 4 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Ala Ser Leu Thr Cys Thr Leu Arg Ser Gly Ile Asn Val Gly Thr 20 25 30 Tyr Arg Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro Pro Gln Tyr 35 40 45 Leu Leu Arg Tyr Lys Ser Asp Ser Asp Lys Gln Gln Gly Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Asp Ala Ser Ala Asn Ala Gly Ile 65 70 75 80 Leu Leu Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys 85 90 95 Met Ile Trp His Ser Ser Ala Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 100 105 110 Thr Val Leu 115 <210> 5 <211> 345 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 caggctgtgc tgactcagcc gtcttccctc tctgcatctc ctggagcatc agccagtctc 60 acctgcacct tacgcagtgg catcaatgtt ggtacctaca ggatatactg gtaccagcag 120 aagccaggga gtcctcccca gtatctcctg aggtacaaat cagactcaga taagcagcag 180 ggctctggag tccccagccg cttctctgga tccaaagatg cttcggccaa tgcagggatt 240 ttactcatct ctgggctcca gtctgaggat gaggctgact attactgtat gatttggcac 300 agcagcgctt cggtattcgg cggagggacc aagctgaccg tccta 345 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Glu Asn Thr Val Thr Ile Tyr Tyr Asn Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 7 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Asn Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45 Arg Val Gly Thr Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95 His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110 Val Thr Val Leu 115 <210> 8 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc 60 acctgcaccc tgaacagcgg ctacagtgat tataaagtgg actggtacca gcagagacca 120 gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggattgtggg atccaagggg 180 gatggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggta cctgaccatc 240 aagaatatcc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg 300 agcaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtccta 348 <210> 9 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45 Arg Val Gly Thr Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Glu Gly Ile Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95 His Gly Ser Gly Asn Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110 Val Thr Val Leu 115 <210> 10 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc 60 acctgcaccc tgagcagcgg ctacagtgat tataaagtgg actggtacca gcagagacca 120 gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggattgtggg atccaagggg 180 gaaggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggta cctgaccatc 240 aagaacatcc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg 300 aacaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtccta 348 <210> 11 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Gln Pro Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys 20 25 30 Val Asp Trp Tyr Gln Leu Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met 35 40 45 Arg Val Gly Thr Gly Gly Thr Val Gly Ser Lys Gly Glu Gly Ile Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Ser Leu Thr Ile 65 70 75 80 Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp 85 90 95 His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys 100 105 110 Val Thr Val Leu 115 <210> 12 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 cagcctgagt tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc 60 acctgcaccc tgagcagcgg ctacagtgat tataaagtgg actggtacca gctgagacca 120 gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggactgttgg atccaagggg 180 gaaggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggtc cctgaccatc 240 aagaacatcc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg 300 agcaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtccta 348 <210> 13 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Asp Ile Gln Leu Thr Pro Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Gly Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 14 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 gacatccagt tgaccccgtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattgcc ggctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctgacagtt tccctcccac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 15 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Ser Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Val Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys 100 105 <210> 16 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggttattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctagcctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtgtatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatttcaa a 321 <210> 17 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ser Ser Ser Trp 20 25 30 Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 18 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggaagtagc agctggtttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc caaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Asp Ser Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 gacagccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcct ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggtttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggcaagccc ctaacctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321 <210> 21 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Gly Gln Val Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Thr Ser Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 22 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 22 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgggtca ggttattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcg 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gacgattttg caacttacta ttgtcaacag gctaccagtt ttcccctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Gly Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 24 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc ggttggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct 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<221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa can be Ser or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa can be Phe or Leu. <400> 123 Arg Ala Ser Gln Xaa Xaa Ser Xaa Trp Xaa Ala 1 5 10 <210> 124 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa can be Asn or Ser <400> 124 Thr Leu Xaa Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Lys Val Asp 1 5 10 <210> 125 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa can be Ile or Thr <400> 125 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Xaa Gly Ala Gly Tyr Asp Val His 1 5 10 <210> 126 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa can be Ile or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa can be Asp or Glu <400> 126 Val Gly Thr Gly Gly Xaa Val Gly Ser Lys Gly Xaa 1 5 10 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa can be Asn or Gly <400> 127 Gly Ser Xaa Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 128 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa can be Ser or Asn <400> 128 Gly Ala Asp His Gly Ser Gly Xaa Asn Phe Val Tyr Val 1 5 10 <210> 129 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa can be Ser or Thr <400> 129 Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Xaa 1 5 <210> 130 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa can be Gly or Ala <400> 130 Ser Tyr Xaa Met His 1 5 <210> 131 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa can be Tyr or Phe <400> 131 Xaa Xaa Ser Met Asn 1 5 <210> 132 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be Tyr or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa can be Thr or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa can be Ser or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa can be Thr or Ser <400> 132 Xaa Ile Xaa Tyr Ser Gly Xaa Xaa Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 133 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa can be Phe or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa can be Leu or Thr <400> 133 Val Ile Ser Xaa Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 134 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa can be Arg or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa can be Ile or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa can be Ile, His or Try <400> 134 Tyr Ile Ser Ser Xaa Ser Ser Thr Xaa Tyr Xaa Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 135 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa can be Lys or Glu <400> 135 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 136 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be Asn or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa can be His, Tyr or Phe <400> 136 Xaa Arg Gly Xaa Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 137 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa can be Gly or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa can be Phe or Trp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa can be His or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Xaa can be Leu and Met <400> 137 Arg Ile Ala Ala Ala Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Ala Xaa Asp Val 1 5 10 15 <210> 138 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa can be Ser or Thr <400> 138 Asp Arg Gly Tyr Xaa Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 139 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> Xaa can be Ile or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Xaa can be Val or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> Xaa can be Gly or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (107)..(107) <223> Xaa can be Arg or Lys <400> 139 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Xaa Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Xaa Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Ser Xaa Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Xaa Arg Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 140 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> Xaa can be And or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> Xaa can be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> Xaa can be Tyr or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> Xaa can be Tyr or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (58)..(58) <223> Xaa can be Ser or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (59)..(59) <223> Xaa can be Ser or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (69)..(69) <223> Xaa can be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (71)..(71) <223> Xaa can be Val or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..(77) <223> Xaa can be Ile or Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> Xaa can be Lys or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(99) <223> Xaa can be Arg or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(100) <223> Xaa can be Asp or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (103)..(103) <223> Xaa can be His, Phe or Try <400> 140 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Xaa Ser Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Xaa Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Xaa Ile Xaa Tyr Ser Gly Xaa Xaa Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Xaa Thr Xaa Ser Val Asp Thr Ser Xaa Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Xaa Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Xaa Xaa Arg Gly Xaa Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 141 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa can be Ala or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa can be Ala or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa can be Thr or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> Xaa can be Tyr or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..(54) <223> Xaa can be Ser or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (58)..(58) <223> Xaa can be Arg or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (60)..(60) <223> Xaa can be His, Try or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (105)..(105) <223> Xaa can be Pro or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (106)..(106) <223> Xaa can be Trp or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (107)..(107) <223> Xaa can be Gly or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (112)..(112) <223> Xaa can be Met or Leu <400> 141 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Xaa Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Xaa 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Xaa Ser Ser Thr Xaa Tyr Xaa Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ile Ala Ala Ala Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Ala Xaa 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 142 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> Xaa can be Gly or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> Xaa can be Val or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (49)..(49) <223> Xaa can be Ala or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> Xaa can be Phe or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (57)..(57) <223> Xaa can be Leu or Ile <400> 142 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Xaa Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Xaa 35 40 45 Xaa Val Ile Ser Xaa Asp Gly Ser Xaa Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Thr Thr Leu Ser Gly Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 143 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (58)..(58) <223> Xaa can be Glu or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (103)..(103) <223> Xaa can be Thr or Ser <400> 143 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Xaa Ser Ser Trp Tyr Pro Asp Ala Phe Asp 100 105 110 Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 144 <211> 1026 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 144 aactcggtga acaactgagg gaaccaaacc agagacgcgc tgaacagaga gaatcaggct 60 caaagcaagt ggaagtgggc agagattcca ccaggactgg tgcaaggcgc agagccagcc 120 agatttgaga agaaggcaaa aagatgctgg ggagcagagc tgtaatgctg ctgttgctgc 180 tgccctggac agctcagggc agagctgtgc ctgggggcag cagccctgcc tggactcagt 240 gccagcagct ttcacagaag ctctgcacac tggcctggag tgcacatcca ctagtgggac 300 acatggatct aagagaagag ggagatgaag agactacaaa tgatgttccc catatccagt 360 gtggagatgg ctgtgacccc caaggactca gggacaacag tcagttctgc ttgcaaagga 420 tccaccaggg tctgattttt tatgagaagc tgctaggatc ggatattttc acaggggagc 480 cttctctgct ccctgatagc cctgtgggcc agcttcatgc ctccctactg ggcctcagcc 540 aactcctgca gcctgagggt caccactggg agactcagca gattccaagc ctcagtccca 600 gccagccatg gcagcgtctc cttctccgct tcaaaatcct tcgcagcctc caggcctttg 660 tggctgtagc cgcccgggtc tttgcccatg gagcagcaac cctgagtccc taaaggcagc 720 agctcaagga tggcactcag atctccatgg cccagcaagg ccaagataaa tctaccaccc 780 caggcacctg tgagccaaca ggttaattag tccattaatt ttagtgggac ctgcatatgt 840 tgaaaattac caatactgac tgacatgtga tgctgaccta tgataaggtt gagtatttat 900 tagatgggaa gggaaatttg gggattattt atcctcctgg ggacagtttg gggaggatta 960 tttattgtat ttatattgaa ttatgtactt ttttcaataa agtcttattt ttgtggctaa 1020 aaaaaa 1026 <210> 145 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 35 40 45 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60 Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 65 70 75 80 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly 85 90 95 Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu 115 120 125 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140 Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160 Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185 <210> 146 <211> 1399 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 146 ctgtttcagg gccattggac tctccgtcct gcccagagca agatgtgtca ccagcagttg 60 gtcatctctt ggttttccct ggtttttctg gcatctcccc tcgtggccat atgggaactg 120 aagaaagatg tttatgtcgt agaattggat tggtatccgg atgcccctgg agaaatggtg 180 gtcctcacct gtgacacccc tgaagaagat ggtatcacct ggaccttgga ccagagcagt 240 gaggtcttag gctctggcaa aaccctgacc atccaagtca aagagtttgg agatgctggc 300 cagtacacct gtcacaaagg aggcgaggtt ctaagccatt cgctcctgct gcttcacaaa 360 aaggaagatg gaatttggtc cactgatatt ttaaaggacc agaaagaacc caaaaataag 420 acctttctaa gatgcgaggc caagaattat tctggacgtt tcacctgctg gtggctgacg 480 acaatcagta ctgatttgac attcagtgtc aaaagcagca gaggctcttc tgacccccaa 540 ggggtgacgt gcggagctgc tacactctct gcagagagag tcagagggga caacaaggag 600 tatgagtact cagtggagtg ccaggaggac agtgcctgcc cagctgctga ggagagtctg 660 cccattgagg tcatggtgga tgccgttcac aagctcaagt atgaaaacta caccagcagc 720 ttcttcatca gggacatcat caaacctgac ccacccaaga acttgcagct gaagccatta 780 aagaattctc ggcaggtgga ggtcagctgg gagtaccctg acacctggag tactccacat 840 tcctacttct ccctgacatt ctgcgttcag gtccagggca agagcaagag agaaaagaaa 900 gatagagtct tcacggacaa gacctcagcc acggtcatct gccgcaaaaa tgccagcatt 960 agcgtgcggg cccaggaccg ctactatagc tcatcttgga gcgaatgggc atctgtgccc 1020 tgcagttagg ttctgatcca ggatgaaaat ttggaggaaa agtggaagat attaagcaaa 1080 atgtttaaag acacaacgga atagacccaa aaagataatt tctatctgat ttgctttaaa 1140 acgttttttt aggatcacaa tgatatcttt gctgtatttg tatagttaga tgctaaatgc 1200 tcattgaaac aatcagctaa tttatgtata gattttccag ctctcaagtt gccatgggcc 1260 ttcatgctat ttaaatattt aagtaattta tgtatttatt agtatattac tgttatttaa 1320 cgtttgtctg ccaggatgta tggaatgttt catactctta tgacctgatc catcaggatc 1380 agtccctatt atgcaaaat 1399 <210> 147 <211> 328 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Met Cys His Gln Gln Leu Val Ile Ser Trp Phe Ser Leu Val Phe Leu 1 5 10 15 Ala Ser Pro Leu Val Ala Ile Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val Tyr Val 20 25 30 Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val Val Leu 35 40 45 Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly Ile Thr Trp Thr Leu Asp Gln 50 55 60 Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr Ile Gln Val Lys 65 70 75 80 Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly Glu Val 85 90 95 Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly Ile Trp 100 105 110 Ser Thr Asp Ile Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys Thr Phe 115 120 125 Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Trp Trp 130 135 140 Leu Thr Thr Ile Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser Ser Arg 145 150 155 160 Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr Leu Ser 165 170 175 Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser Val Glu 180 185 190 Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu Pro Ile 195 200 205 Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn Tyr Thr 210 215 220 Ser Ser Phe Phe Ile Arg Asp Ile Ile Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn 225 230 235 240 Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val Ser Trp 245 250 255 Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Thr 260 265 270 Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys Asp Arg 275 280 285 Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val Ile Cys Arg Lys Asn Ala 290 295 300 Ser Ile Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Trp Ser 305 310 315 320 Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser 325 <210> 148 <211> 2826 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 148 acaagggtgg cagcctggct ctgaagtgga attatgtgct tcaaacaggt tgaaagaggg 60 aaacagtctt ttcctgcttc cagacatgaa tcaggtcact attcaatggg atgcagtaat 120 agccctttac atactcttca gctggtgtca tggaggaatt acaaatataa actgctctgg 180 ccacatctgg gtagaaccag ccacaatttt taagatgggt atgaatatct ctatatattg 240 ccaagcagca attaagaact gccaaccaag gaaacttcat ttttataaaa atggcatcaa 300 agaaagattt caaatcacaa ggattaataa aacaacagct cggctttggt ataaaaactt 360 tctggaacca catgcttcta tgtactgcac tgctgaatgt cccaaacatt ttcaagagac 420 actgatatgt ggaaaagaca tttcttctgg atatccgcca gatattcctg atgaagtaac 480 ctgtgtcatt tatgaatatt caggcaacat gacttgcacc tggaatgctg ggaagctcac 540 ctacatagac acaaaatacg tggtacatgt gaagagttta gagacagaag aagagcaaca 600 gtatctcacc tcaagctata ttaacatctc cactgattca ttacaaggtg gcaagaagta 660 cttggtttgg gtccaagcag caaacgcact aggcatggaa gagtcaaaac aactgcaaat 720 tcacctggat gatatagtga taccttctgc agccgtcatt tccagggctg agactataaa 780 tgctacagtg cccaagacca taatttattg ggatagtcaa acaacaattg aaaaggtttc 840 ctgtgaaatg agatacaagg ctacaacaaa ccaaacttgg aatgttaaag aatttgacac 900 caattttaca tatgtgcaac agtcagaatt ctacttggag ccaaacatta agtacgtatt 960 tcaagtgaga tgtcaagaaa caggcaaaag gtactggcag ccttggagtt cactgttttt 1020 tcataaaaca cctgaaacag ttccccaggt cacatcaaaa gcattccaac atgacacatg 1080 gaattctggg ctaacagttg cttccatctc tacagggcac cttacttctg acaacagagg 1140 agacattgga cttttattgg gaatgatcgt ctttgctgtt atgttgtcaa ttctttcttt 1200 gattgggata tttaacagat cattccgaac tgggattaaa agaaggatct tattgttaat 1260 accaaagtgg ctttatgaag atattcctaa tatgaaaaac agcaatgttg tgaaaatgct 1320 acaggaaaat agtgaactta tgaataataa ttccagtgag caggtcctat atgttgatcc 1380 catgattaca gagataaaag aaatcttcat cccagaacac aagcctacag actacaagaa 1440 ggagaataca ggacccctgg agacaagaga ctacccgcaa aactcgctat tcgacaatac 1500 tacagttgta tatattcctg atctcaacac tggatataaa ccccaaattt caaattttct 1560 gcctgaggga agccatctca gcaataataa tgaaattact tccttaacac ttaaaccacc 1620 agttgattcc ttagactcag gaaataatcc caggttacaa aagcatccta attttgcttt 1680 ttctgtttca agtgtgaatt cactaagcaa cacaatattt cttggagaat taagcctcat 1740 attaaatcaa ggagaatgca gttctcctga catacaaaac tcagtagagg aggaaaccac 1800 catgcttttg gaaaatgatt cacccagtga aactattcca gaacagaccc tgcttcctga 1860 tgaatttgtc tcctgtttgg ggatcgtgaa tgaggagttg ccatctatta atacttattt 1920 tccacaaaat attttggaaa gccacttcaa taggatttca ctcttggaaa agtagagctg 1980 tgtggtcaaa atcaatatga gaaagctgcc ttgcaatctg aacttgggtt ttccctgcaa 2040 tagaaattga attctgcctc tttttgaaaa aaatgtattc acatacaaat cttcacatgg 2100 acacatgttt tcatttccct tggataaata cctaggtagg ggattgctgg gccatatgat 2160 aagcatatgt ttcagttcta ccaatcttgt ttccagagta gtgacatttc tgtgctccta 2220 ccatcaccat gtaagaattc ccgggagctc catgcctttt taattttagc cattcttctg 2280 cctcatttct taaaattaga gaattaaggt cccgaaggtg gaacatgctt catggtcaca 2340 catacaggca caaaaacagc attatgtgga cgcctcatgt attttttata gagtcaacta 2400 tttcctcttt attttccctc attgaaagat gcaaaacagc tctctattgt gtacagaaag 2460 ggtaaataat gcaaaatacc tggtagtaaa ataaatgctg aaaattttcc tttaaaatag 2520 aatcattagg ccaggcgtgg tggctcatgc ttgtaatccc agcactttgg taggctgagg 2580 taggtggatc acctgaggtc aggagttcga gtccagcctg gccaatatgc tgaaaccctg 2640 tctctactaa aattacaaaa attagccggc catggtggca ggtgcttgta atcccagcta 2700 cttgggaggc tgaggcagga gaatcacttg aaccaggaag gcagaggttg cactgagctg 2760 agattgtgcc actgcactcc agcctgggca acaagagcaa aactctgtct ggaaaaaaaa 2820 aaaaaa 2826 <210> 149 <211> 629 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 149 Met Asn Gln Val Thr Ile Gln Trp Asp Ala Val Ile Ala Leu Tyr Ile 1 5 10 15 Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly Ile Thr Asn Ile Asn Cys Ser Gly 20 25 30 His Ile Trp Val Glu Pro Ala Thr Ile Phe Lys Met Gly Met Asn Ile 35 40 45 Ser Ile Tyr Cys Gln Ala Ala Ile Lys Asn Cys Gln Pro Arg Lys Leu 50 55 60 His Phe Tyr Lys Asn Gly Ile Lys Glu Arg Phe Gln Ile Thr Arg Ile 65 70 75 80 Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His 85 90 95 Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gln Glu Thr 100 105 110 Leu Ile Cys Gly Lys Asp Ile Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp Ile Pro 115 120 125 Asp Glu Val Thr Cys Val Ile Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys 130 135 140 Thr Trp Asn Ala Gly Lys Leu Thr Tyr Ile Asp Thr Lys Tyr Val Val 145 150 155 160 His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu Glu Gln Gln Tyr Leu Thr Ser 165 170 175 Ser Tyr Ile Asn Ile Ser Thr Asp Ser Leu Gln Gly Gly Lys Lys Tyr 180 185 190 Leu Val Trp Val Gln Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys 195 200 205 Gln Leu Gln Ile His Leu Asp Asp Ile Val Ile Pro Ser Ala Ala Val 210 215 220 Ile Ser Arg Ala Glu Thr Ile Asn Ala Thr Val Pro Lys Thr Ile Ile 225 230 235 240 Tyr Trp Asp Ser Gln Thr Thr Ile Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg 245 250 255 Tyr Lys Ala Thr Thr Asn Gln Thr Trp Asn Val Lys Glu Phe Asp Thr 260 265 270 Asn Phe Thr Tyr Val Gln Gln Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn Ile 275 280 285 Lys Tyr Val Phe Gln Val Arg Cys Gln Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp 290 295 300 Gln Pro Trp Ser Ser Leu Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro 305 310 315 320 Gln Val Thr Ser Lys Ala Phe Gln His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu 325 330 335 Thr Val Ala Ser Ile Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly 340 345 350 Asp Ile Gly Leu Leu Leu Gly Met Ile Val Phe Ala Val Met Leu Ser 355 360 365 Ile Leu Ser Leu Ile Gly Ile Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly Ile 370 375 380 Lys Arg Arg Ile Leu Leu Leu Ile Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp Ile 385 390 395 400 Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gln Glu Asn Ser 405 410 415 Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gln Val Leu Tyr Val Asp Pro 420 425 430 Met Ile Thr Glu Ile Lys Glu Ile Phe Ile Pro Glu His Lys Pro Thr 435 440 445 Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 450 455 460 Gln Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr Ile Pro Asp Leu 465 470 475 480 Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gln Ile Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 485 490 495 His Leu Ser Asn Asn Asn Glu Ile Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 500 505 510 Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gln Lys His Pro 515 520 525 Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr Ile 530 535 540 Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu Ile Leu Asn Gln Gly Glu Cys Ser Ser 545 550 555 560 Pro Asp Ile Gln Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 565 570 575 Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr Ile Pro Glu Gln Thr Leu Leu Pro Asp 580 585 590 Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly Ile Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser Ile 595 600 605 Asn Thr Tyr Phe Pro Gln Asn Ile Leu Glu Ser His Phe Asn Arg Ile 610 615 620 Ser Leu Leu Glu Lys 625 <210> 150 <211> 2100 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 150 ggtggctgaa cctcgcaggt ggcagagagg ctcccctggg gctgtggggc tctacgtgga 60 tccgatggag ccgctggtga cctgggtggt ccccctcctc ttcctcttcc tgctgtccag 120 gcagggcgct gcctgcagaa ccagtgagtg ctgttttcag gacccgccat atccggatgc 180 agactcaggc tcggcctcgg gccctaggga cctgagatgc tatcggatat ccagtgatcg 240 ttacgagtgc tcctggcagt atgagggtcc cacagctggg gtcagccact tcctgcggtg 300 ttgccttagc tccgggcgct gctgctactt cgccgccggc tcagccacca ggctgcagtt 360 ctccgaccag gctggggtgt ctgtgctgta cactgtcaca ctctgggtgg aatcctgggc 420 caggaaccag acagagaagt ctcctgaggt gaccctgcag ctctacaact cagttaaata 480 tgagcctcct ctgggagaca tcaaggtgtc caagttggcc gggcagctgc gtatggagtg 540 ggagaccccg gataaccagg ttggtgctga ggtgcagttc cggcaccgga cacccagcag 600 cccatggaag ttgggcgact gcggacctca ggatgatgat actgagtcct gcctctgccc 660 cctggagatg aatgtggccc aggaattcca gctccgacga cggcagctgg ggagccaagg 720 aagttcctgg agcaagtgga gcagccccgt gtgcgttccc cctgaaaacc ccccacagcc 780 tcaggtgaga ttctcggtgg agcagctggg ccaggatggg aggaggcggc tgaccctgaa 840 agagcagcca acccagctgg agcttccaga aggctgtcaa gggctggcgc ctggcacgga 900 ggtcacttac cgactacagc tccacatgct gtcctgcccg tgtaaggcca aggccaccag 960 gaccctgcac ctggggaaga tgccctatct ctcgggtgct gcctacaacg tggctgtcat 1020 ctcctcgaac caatttggtc ctggcctgaa ccagacgtgg cacattcctg ccgacaccca 1080 cacagaacca gtggctctga atatcagcgt cggaaccaac gggaccacca tgtattggcc 1140 agcccgggct cagagcatga cgtattgcat tgaatggcag cctgtgggcc aggacggggg 1200 ccttgccacc tgcagcctga ctgcgccgca agacccggat ccggctggaa tggcaaccta 1260 cagctggagt cgagagtctg gggcaatggg gcaggaaaag tgttactaca ttaccatctt 1320 tgcctctgcg caccccgaga agctcacctt gtggtctacg gtcctgtcca cctaccactt 1380 tgggggcaat gcctcagcag ctgggacacc gcaccacgtc tcggtgaaga atcatagctt 1440 ggactctgtg tctgtggact gggcaccatc cctgctgagc acctgtcccg gcgtcctaaa 1500 ggagtatgtt gtccgctgcc gagatgaaga cagcaaacag gtgtcagagc atcccgtgca 1560 gcccacagag acccaagtta ccctcagtgg cctgcgggct ggtgtagcct acacggtgca 1620 ggtgcgagca gacacagcgt ggctgagggg tgtctggagc cagccccagc gcttcagcat 1680 cgaagtgcag gtttctgatt ggctcatctt cttcgcctcc ctggggagct tcctgagcat 1740 ccttctcgtg ggcgtccttg gctaccttgg cctgaacagg gccgcacggc acctgtgccc 1800 gccgctgccc acaccctgtg ccagctccgc cattgagttc cctggaggga aggagacttg 1860 gcagtggatc aacccagtgg acttccagga agaggcatcc ctgcaggagg ccctggtggt 1920 agagatgtcc tgggacaaag gcgagaggac tgagcctctc gagaagacag agctacctga 1980 gggtgcccct gagctggccc tggatacaga gttgtccttg gaggatggag acaggtgcaa 2040 ggccaagatg tgatcgttga ggctcagaga gggtgagtga ctcgcccgag gctacgtagc 2100 <210> 151 <211> 662 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 151 Met Glu Pro Leu Val Thr Trp Val Val Pro Leu Leu Phe Leu Phe Leu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Gln Gly Ala Ala Cys Arg Thr Ser Glu Cys Cys Phe Gln 20 25 30 Asp Pro Pro Tyr Pro Asp Ala Asp Ser Gly Ser Ala Ser Gly Pro Arg 35 40 45 Asp Leu Arg Cys Tyr Arg Ile Ser Ser Asp Arg Tyr Glu Cys Ser Trp 50 55 60 Gln Tyr Glu Gly Pro Thr Ala Gly Val Ser His Phe Leu Arg Cys Cys 65 70 75 80 Leu Ser Ser Gly Arg Cys Cys Tyr Phe Ala Ala Gly Ser Ala Thr Arg 85 90 95 Leu Gln Phe Ser Asp Gln Ala Gly Val Ser Val Leu Tyr Thr Val Thr 100 105 110 Leu Trp Val Glu Ser Trp Ala Arg Asn Gln Thr Glu Lys Ser Pro Glu 115 120 125 Val Thr Leu Gln Leu Tyr Asn Ser Val Lys Tyr Glu Pro Pro Leu Gly 130 135 140 Asp Ile Lys Val Ser Lys Leu Ala Gly Gln Leu Arg Met Glu Trp Glu 145 150 155 160 Thr Pro Asp Asn Gln Val Gly Ala Glu Val Gln Phe Arg His Arg Thr 165 170 175 Pro Ser Ser Pro Trp Lys Leu Gly Asp Cys Gly Pro Gln Asp Asp Asp 180 185 190 Thr Glu Ser Cys Leu Cys Pro Leu Glu Met Asn Val Ala Gln Glu Phe 195 200 205 Gln Leu Arg Arg Arg Gln Leu Gly Ser Gln Gly Ser Ser Trp Ser Lys 210 215 220 Trp Ser Ser Pro Val Cys Val Pro Pro Glu Asn Pro Pro Gln Pro Gln 225 230 235 240 Val Arg Phe Ser Val Glu Gln Leu Gly Gln Asp Gly Arg Arg Arg Leu 245 250 255 Thr Leu Lys Glu Gln Pro Thr Gln Leu Glu Leu Pro Glu Gly Cys Gln 260 265 270 Gly Leu Ala Pro Gly Thr Glu Val Thr Tyr Arg Leu Gln Leu His Met 275 280 285 Leu Ser Cys Pro Cys Lys Ala Lys Ala Thr Arg Thr Leu His Leu Gly 290 295 300 Lys Met Pro Tyr Leu Ser Gly Ala Ala Tyr Asn Val Ala Val Ile Ser 305 310 315 320 Ser Asn Gln Phe Gly Pro Gly Leu Asn Gln Thr Trp His Ile Pro Ala 325 330 335 Asp Thr His Thr Glu Pro Val Ala Leu Asn Ile Ser Val Gly Thr Asn 340 345 350 Gly Thr Thr Met Tyr Trp Pro Ala Arg Ala Gln Ser Met Thr Tyr Cys 355 360 365 Ile Glu Trp Gln Pro Val Gly Gln Asp Gly Gly Leu Ala Thr Cys Ser 370 375 380 Leu Thr Ala Pro Gln Asp Pro Asp Pro Ala Gly Met Ala Thr Tyr Ser 385 390 395 400 Trp Ser Arg Glu Ser Gly Ala Met Gly Gln Glu Lys Cys Tyr Tyr Ile 405 410 415 Thr Ile Phe Ala Ser Ala His Pro Glu Lys Leu Thr Leu Trp Ser Thr 420 425 430 Val Leu Ser Thr Tyr His Phe Gly Gly Asn Ala Ser Ala Ala Gly Thr 435 440 445 Pro His His Val Ser Val Lys Asn His Ser Leu Asp Ser Val Ser Val 450 455 460 Asp Trp Ala Pro Ser Leu Leu Ser Thr Cys Pro Gly Val Leu Lys Glu 465 470 475 480 Tyr Val Val Arg Cys Arg Asp Glu Asp Ser Lys Gln Val Ser Glu His 485 490 495 Pro Val Gln Pro Thr Glu Thr Gln Val Thr Leu Ser Gly Leu Arg Ala 500 505 510 Gly Val Ala Tyr Thr Val Gln Val Arg Ala Asp Thr Ala Trp Leu Arg 515 520 525 Gly Val Trp Ser Gln Pro Gln Arg Phe Ser Ile Glu Val Gln Val Ser 530 535 540 Asp Trp Leu Ile Phe Phe Ala Ser Leu Gly Ser Phe Leu Ser Ile Leu 545 550 555 560 Leu Val Gly Val Leu Gly Tyr Leu Gly Leu Asn Arg Ala Ala Arg His 565 570 575 Leu Cys Pro Pro Leu Pro Thr Pro Cys Ala Ser Ser Ala Ile Glu Phe 580 585 590 Pro Gly Gly Lys Glu Thr Trp Gln Trp Ile Asn Pro Val Asp Phe Gln 595 600 605 Glu Glu Ala Ser Leu Gln Glu Ala Leu Val Val Glu Met Ser Trp Asp 610 615 620 Lys Gly Glu Arg Thr Glu Pro Leu Glu Lys Thr Glu Leu Pro Glu Gly 625 630 635 640 Ala Pro Glu Leu Ala Leu Asp Thr Glu Leu Ser Leu Glu Asp Gly Asp 645 650 655 Arg Cys Lys Ala Lys Met 660 <210> 152 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 152 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ctggatccgc 120 cagcacccag ggaagggcct ggagtggatt gggcacatcc attacagtgg gaacacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagttacc atatcagtag acacgtctaa gaatcagttc 240 tccctgaaac tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tgtattactg tgcgcgaaat 300 cgcgggttct actacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 153 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 153 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly His Ile His Tyr Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asn Arg Gly Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 154 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Honeybee melittin signal <400> 154 Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr Ile 1 5 10 15 Ser Tyr Ile Tyr Ala Ala Ala 20 <210> 155 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> His Tag <400> 155 His His His His His His 1 5 1

Claims (69)

  1. (i) a) 서열 91의 CDRH1;
    b) 서열 92의 CDRH2;
    c) 서열 93의 CDRH3
    을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함하고;
    d) 서열 62의 CDRL1;
    e) 서열 63의 CDRL2;
    f) 서열 64의 CDRL3
    을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하거나,
    (ii) a) 서열 109의 CDRH1;
    b) 서열 116의 CDRH2;
    c) 서열 111의 CDRH3
    을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함하고;
    d) 서열 80의 CDRL1;
    e) 서열 81의 CDRL2;
    f) 서열 76의 CDRL3
    을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는,
    IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서,
    (i)
    서열 91의 CDRH1;
    서열 92의 CDRH2;
    서열 93의 CDRH3;
    서열 62의 CDRL1;
    서열 63의 CDRL2; 및
    서열 64의 CDRL3을 포함하거나,
    (ii)
    서열 109의 CDRH1;
    서열 116의 CDRH2;
    서열 111의 CDRH3;
    서열 80의 CDRL1;
    서열 81의 CDRL2; 및
    서열 76의 CDRL3을 포함하는,
    항원 결합 단백질.
  3. a) 서열 31의 아미노산 잔기 31-35, 50-65 및 99-113을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함하고,
    서열 1의 아미노산 잔기 23-36, 52-58 및 91-101을 포함하는 적어도 하나의경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    b) 서열 46의 아미노산 잔기 31-37, 52-67 및 100-109를 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함하고,
    서열 15의 아미노산 잔기 24-34, 50-56 및 89-97을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는,
    IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. a) 적어도 하나의 서열 31의 중쇄 가변 영역 및 적어도 하나의 서열 1의 경쇄 가변 영역을 포함하거나, 또는
    b) 적어도 하나의 서열 46의 중쇄 가변 영역 및 적어도 하나의 서열 15의 경쇄 가변 영역을 포함하는,
    IL-23에 결합하는 항원 결합 단백질.
  8. 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체인 항원 결합 단백질.
  9. 제8항에 있어서,
    (i) 상기 항체가 모노클로날 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체 또는 그의 항체 단편이거나,
    (ii) 상기 항체 단편이 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 디아바디 또는 단일 쇄 항체 분자이거나,
    (iii) 상기 항원 결합 단백질이 인간 항체이거나,
    (iv) 상기 항원 결합 단백질이 모노클로날 항체인
    항원 결합 단백질.
  10. (i) 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 코딩하거나,
    (ii) 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 코딩하되, 적어도 하나의 중쇄 가변 영역이 서열 32의 핵산 분자에 의해 코딩되고, 적어도 하나의 경쇄 가변 영역이 서열 2의 핵산 분자에 의해 코딩되며, 상기 핵산 분자가 임의로 조절 서열에 작동가능하게 연결되거나,
    (iii) 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 코딩하되, 적어도 하나의 중쇄 가변 영역이 서열 47의 핵산 분자에 의해 코딩되고, 적어도 하나의 경쇄 가변 영역이 서열 16의 핵산 분자에 의해 코딩되며, 상기 핵산 분자가 임의로 조절 서열에 작동가능하게 연결된,
    핵산 분자.
  11. 제10항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  12. 제10항에 따른 핵산 분자 또는 제10항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  13. 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 분비하는 숙주 세포로부터 상기 항원 결합 단백질을 제조하는 단계를 포함하는, 상기 항원 결합 단백질의 제조 방법.
  14. 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 인간 IL-23 활성을 감소시키는 것;
    b) 염증유발 시토카인의 생성을 감소시키는 것;
    c) ≤ 5x10-8 M의 KD로 인간 IL-23에 결합하는 것;
    d) ≤ 5x10-6 1/s의 Koff 속도를 갖는 것; 및
    e) ≤ 400 pM의 IC50을 갖는 것
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 특성을 갖는 항원 결합 단백질.
  15. 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 항원 결합 단백질 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는, 환자에서 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 암, 건선, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 결장염, 전신 홍반성 루푸스, 건선성 관절염, 자가면역 심근염; 제1형 당뇨병 및 강직성 척추염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 상태를 치료 또는 예방하기 위한 제약 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    (i) 표지화 기 또는 이펙터 기를 더 포함하거나,
    (ii) 동위원소 표지, 자기성 표지, 산화환원 활성 모이어티, 광학 염료, 비오티닐화 기 및 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프로 이루어진 군으로부터 선택되는 표지화 기를 더 포함하거나,
    (iii) 방사성동위원소, 방사성핵종, 독소, 치료 기 및 화학치료 기로 이루어진 군으로부터 선택되는 이펙터 기를 더 포함하거나, 또는
    (iv) 상기 항원 결합 단백질이 커플링된 표지화 기를 더 포함하는
    제약 조성물.
  17. (i) 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 코딩하되, 적어도 하나의 중쇄 가변 영역이 서열 32의 핵산 분자에 의해 코딩되고, 적어도 하나의 경쇄 가변 영역이 서열 2의 핵산 분자에 의해 코딩되며, 상기 핵산 분자가 임의로 조절 서열에 작동가능하게 연결된 핵산 분자, 또는
    (ii) 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항의 항원 결합 단백질을 코딩하되, 적어도 하나의 중쇄 가변 영역이 서열 47의 핵산 분자에 의해 코딩되고, 적어도 하나의 경쇄 가변 영역이 서열 16의 핵산 분자에 의해 코딩되며, 상기 핵산 분자가 임의로 조절 서열에 작동가능하게 연결된 핵산 분자
    의 단편 또는 그의 상보체로서, 혼성화 프로브, PCR 프라이머 또는 서열분석 프라이머로서 사용하기에 충분한 핵산 분자.
  18. 삭제
  19. 제15항에 있어서, 단독으로 또는 조합 요법으로서 투여되는 제약 조성물.
  20. 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에서 IL-23 활성을 감소시키기 위한 적어도 하나의 항원 결합 단백질.
  21. 제20항에 있어서, 상기 IL-23 활성이 염증유발 시토카인의 생성을 유도하는 것인 항원 결합 단백질.
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ZA (1) ZA201203058B (ko)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
EP2635601B1 (en) 2010-11-04 2016-07-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23 antibodies
BR112013018374A2 (pt) * 2011-01-25 2016-10-11 Monell Chemical Senses Centre composições e métodos para fornecer ou modular o sabor doce e métodos para rastrear os mesmos
EP2583979B1 (en) * 2011-10-19 2015-12-16 Effimune Methods to prepare antibodies directed against p19 subunit of human IL-23
PL3326649T3 (pl) * 2012-05-03 2022-04-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Przeciwciała anty-il-23p19
US9803010B2 (en) 2012-06-27 2017-10-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystalline anti-human IL-23p19 antibodies
CA2906384A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Amgen Inc. Methods for treating crohn's disease using an anti-il23 antibody
US20160060337A1 (en) 2013-03-15 2016-03-03 Amgen Inc. Methods for treating psoriasis using an anti-il-23 antibody
AU2015247742A1 (en) 2014-04-15 2016-11-24 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind WISP1
EP4198059A1 (en) 2014-05-27 2023-06-21 The University of Queensland Modulation of cellular stress
WO2016010927A1 (en) 2014-07-14 2016-01-21 Amgen Inc. Crystalline antibody formulations
JP2017524359A (ja) 2014-07-24 2017-08-31 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｉｌ−２３ａ関連疾患の処置に有用なバイオマーカー
SG11201701423RA (en) 2014-09-03 2017-03-30 Boehringer Ingelheim Int Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
JP6909208B2 (ja) 2015-09-17 2021-07-28 アムジェン インコーポレイテッド Ｉｌ２３経路バイオマーカーを使用するｉｌ２３アンタゴニストに対する臨床応答の予測
TWI733695B (zh) * 2015-09-18 2021-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 治療發炎性疾病之方法
AU2016340826C1 (en) * 2015-10-19 2023-05-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Immunoassay to detect cleaved high molecular weight kininogen
JP2019508370A (ja) 2015-12-22 2019-03-28 アムジェン インコーポレイテッド Ｉｌ２３アンタゴニストに対する臨床応答の予測因子としてのｃｃｌ２０
WO2018156180A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Kindred Biosciences, Inc. Anti-il31 antibodies for veterinary use
JOP20190248A1 (ar) 2017-04-21 2019-10-20 Amgen Inc بروتينات ربط مولد ضد trem2 واستخداماته
CA3071922A1 (en) * 2017-08-04 2019-02-07 The Hospital For Sick Children Nanoparticle platform for antibody and vaccine delivery
WO2019023812A1 (en) * 2017-08-04 2019-02-07 The Hospital For Sick Children VACCINE COMPOSITION AGAINST MALARIA AND METHOD THEREOF
TWI837532B (zh) 2018-03-30 2024-04-01 美商美國禮來大藥廠 治療潰瘍性結腸炎之方法
US20210277105A1 (en) * 2018-07-13 2021-09-09 Astrazeneca Collaboration Ventures, Llc Treating ulcerative colitis with brazikumab
US20200385453A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Janssen Biotech, Inc. Safe and Effective Method of Treating Psoriatic Arthritis with Anti-IL23 Specific Antibody
WO2020263879A1 (en) * 2019-06-26 2020-12-30 Ap Biosciences, Inc. Antibodies for t-cell activation
CA3164996A1 (en) 2019-12-20 2021-06-14 Novarock Biotherapeutics, Ltd. Anti-interleukin-23 p19 antibodies and methods of use thereof
CN112807428A (zh) * 2020-06-12 2021-05-18 江苏荃信生物医药有限公司 包含抗人白介素23单克隆抗体的药物组合物
WO2022041390A1 (zh) * 2020-08-28 2022-03-03 江苏荃信生物医药股份有限公司 包含高浓度抗人白介素23单克隆抗体的低粘度液体制剂及其制备方法
TW202224702A (zh) 2020-09-10 2022-07-01 美商美國禮來大藥廠 治療性抗體調配物
CN113156134B (zh) * 2020-11-26 2024-01-23 江苏荃信生物医药股份有限公司 用于检测人白介素23的elisa试剂盒及检测方法
US20220373539A1 (en) * 2021-05-24 2022-11-24 Amgen Inc. Prediction of clinical response to il23-antagonists using il23 pathway biomarkers
WO2022272153A1 (en) * 2021-06-25 2022-12-29 Sangamo Therapeutics, Inc. Antigen binders specific for il-23r and uses thereof
WO2023056417A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Eli Lilly And Company Anti-il-23p19 antibody regulation of genes involved in bowel urgency in ulcerative colitis
CN114994331B (zh) * 2022-05-17 2023-02-24 无锡科金生物科技有限公司 一种检测蛋白表达水平的试剂盒及其制备方法和应用
WO2024077113A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 Eli Lilly And Company Methods of treating fatigue in ulcerative colitis

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008103432A1 (en) 2007-02-23 2008-08-28 Schering Corporation Engineered anti-il-23p19 antibodies

Family Cites Families (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4751180A (en) 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
US4935233A (en) 1985-12-02 1990-06-19 G. D. Searle And Company Covalently linked polypeptide cell modulators
JPS63502716A (ja) 1986-03-07 1988-10-13 マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー 糖タンパク安定性の強化方法
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
EP0281604B1 (en) 1986-09-02 1993-03-31 Enzon Labs Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
AU643427B2 (en) 1988-10-31 1993-11-18 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
US5457038A (en) 1988-11-10 1995-10-10 Genetics Institute, Inc. Natural killer stimulatory factor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6683046B1 (en) 1989-12-22 2004-01-27 Hoffmann-La Roche Inc. Purification and characterization of cytotoxic lymphocyte maturation factor and monoclonal antibodies thereto
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6713610B1 (en) 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69133566T2 (de) 1990-01-12 2007-12-06 Amgen Fremont Inc. Bildung von xenogenen Antikörpern
WO1991018982A1 (en) 1990-06-05 1991-12-12 Immunex Corporation Type ii interleukin-1 receptors
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0590076A4 (en) 1991-06-14 1997-02-12 Dnx Corp Production of human hemoglobin in transgenic pigs
JPH06508880A (ja) 1991-07-08 1994-10-06 ユニバーシティ　オブ　マサチューセッツ　アット　アムハースト サーモトロピック液晶セグメント化ブロックコポリマー
SG47979A1 (en) 1991-11-14 1998-04-17 Charles Weissman Transgenic animals lacking prion proteins
US5262522A (en) 1991-11-22 1993-11-16 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M and leukemia inhibitory factor
JPH07509137A (ja) 1992-07-24 1995-10-12 セル　ジェネシス，インク． 異種抗体の生産
ES2198414T3 (es) 1992-10-23 2004-02-01 Immunex Corporation Procedimientos para preparar proteinas oligomericas solubles.
US5457035A (en) 1993-07-23 1995-10-10 Immunex Corporation Cytokine which is a ligand for OX40
KR20050085971A (ko) 1995-04-27 2005-08-29 아브게닉스, 인크. 면역화된 제노마우스 유래의 인간 항체
EP2314625B1 (en) 1996-12-03 2014-05-07 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
CA2196496A1 (en) 1997-01-31 1998-07-31 Stephen William Watson Michnick Protein fragment complementation assay for the detection of protein-protein interactions
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6060284A (en) 1997-07-25 2000-05-09 Schering Corporation DNA encoding interleukin-B30
PE20000183A1 (es) 1997-07-25 2000-03-11 Schering Corp Citoquinas de mamiferos y reactivos relacionados
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
CN101239185A (zh) 1998-03-17 2008-08-13 中外制药株式会社 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂
ATE474849T1 (de) 1998-04-14 2010-08-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Neues cytokinartiges protein
CA2341029A1 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US7883704B2 (en) 1999-03-25 2011-02-08 Abbott Gmbh & Co. Kg Methods for inhibiting the activity of the P40 subunit of human IL-12
HU230679B1 (en) 1999-09-09 2017-08-28 Merck Sharp & Dohme Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions
US7090847B1 (en) 1999-09-09 2006-08-15 Schering Corporation Mammalian cytokines; related reagents and methods
KR101053412B1 (ko) 2002-10-30 2011-08-01 제넨테크, 인크. Ｉｌ―１７ 생성의 억제
EP1587834B1 (en) 2002-12-23 2011-07-06 Schering Corporation Uses of il-23 mammalian cytokine; related reagents
WO2004071517A2 (en) 2003-02-06 2004-08-26 Schering Corporation Uses of il-23 related reagents
US7282204B2 (en) 2003-03-10 2007-10-16 Schering Corporation Uses of IL-23 agonists and antagonists; related reagents
CA2525184C (en) 2003-05-09 2012-10-30 Centocor, Inc. Il-23p40 specific immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US20050287593A1 (en) 2004-05-03 2005-12-29 Schering Corporation Use of cytokine expression to predict skin inflammation; methods of treatment
BRPI0510617A (pt) 2004-05-03 2007-10-30 Schering Corp uso de expressão de il-17 para prever inflamação de pele; processos de tratamento
AR051444A1 (es) 2004-09-24 2007-01-17 Centocor Inc Proteinas derivadas de inmunoglobulina especifica de il-23p40, composiciones, epitopos, metodos y usos
EP1853707A2 (en) 2004-12-20 2007-11-14 Schering Corporation Uses of il-23 antagonists in the treatment of diabetes mellitus
SG158150A1 (en) 2004-12-21 2010-01-29 Centocor Inc Anti-il-12 antibodies, epitopes, compositions, methods and uses
HUE042561T2 (hu) 2005-06-30 2019-07-29 Janssen Biotech Inc Anti-IL-23-ellenanyagok, készítmények, eljárások és alkalmazások
CN101379085B (zh) 2005-06-30 2013-03-27 Abbvie公司 Il-12/p40结合蛋白
DK1937721T3 (da) 2005-08-25 2010-10-18 Lilly Co Eli Anti-IL-23 antistoffer
SG165322A1 (en) 2005-08-31 2010-10-28 Schering Corp Engineered anti-il-23 antibodies
CN1955248B (zh) 2005-10-28 2011-10-12 安集微电子（上海）有限公司 钽阻挡层用化学机械抛光浆料
BRPI0620914A2 (pt) 2005-12-28 2011-11-29 Centocor Inc marcadores e métodos para avaliar e tratar psorìase e distúrbios relacionados
ES2517420T3 (es) 2005-12-29 2014-11-03 Janssen Biotech, Inc. Anticuerpos anti-IL-23 humanos, composiciones, procedimientos y usos
US7790862B2 (en) 2006-06-13 2010-09-07 Zymogenetics, Inc. IL-17 and IL-23 antagonists and methods of using the same
US7910703B2 (en) 2006-03-10 2011-03-22 Zymogenetics, Inc. Antagonists to IL-17A, IL-17F, and IL-23P19 and methods of use
CN104524567A (zh) * 2007-01-16 2015-04-22 阿布维公司 用于治疗银屑病的方法
TWI426918B (zh) 2007-02-12 2014-02-21 Merck Sharp & Dohme Ｉｌ-２３拮抗劑於治療感染之用途
CN101663320A (zh) 2007-02-23 2010-03-03 先灵公司 工程改造的抗IL-23p19抗体
AR068723A1 (es) 2007-10-05 2009-12-02 Glaxo Group Ltd Proteina que se une a antigenos que se une a il-23 humana y sus usos
AU2008328781A1 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against heterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprising the same
WO2009082624A2 (en) 2007-12-10 2009-07-02 Zymogenetics, Inc. Antagonists of il-17a, il-17f, and il-23 and methods of using the same
KR20100126515A (ko) 2008-03-18 2010-12-01 아보트 러보러터리즈 건선의 치료방법
KR20160116056A (ko) 2008-08-14 2016-10-06 테바 파마슈티컬즈 오스트레일리아 피티와이 엘티디 항-ｉｌ-12/ｉｌ-23 항체
US8263748B2 (en) 2008-08-27 2012-09-11 Schering Corporation Lyophilized formulations of engineered anti-IL-23p19 antibodies
CA2757237A1 (en) 2009-04-01 2010-10-14 Jane Elizabeth Clarkson Anti-il-23 immunoglobulins
WO2010115092A2 (en) 2009-04-02 2010-10-07 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating or preventing inflammatory bowel disease and colon cancer
EP2435480A1 (en) 2009-05-27 2012-04-04 Ablynx N.V. Biparatopic protein constructs directed against il-23
WO2011032148A1 (en) * 2009-09-14 2011-03-17 Abbott Laboratories Methods for treating psoriasis
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
CN102821787B (zh) 2010-01-15 2015-07-29 麒麟-安姆根有限公司 抗体制剂和治疗方案
AU2011218243A1 (en) 2010-02-18 2012-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind IL-23
MX341309B (es) 2010-07-20 2016-08-12 Cephalon Australia Pty Ltd Anticuerpos especificos del heterodimero de anti-il-23.
CN103813804A (zh) 2010-10-06 2014-05-21 Abbvie公司 用于治疗银屑病的方法
EP4137514A1 (en) 2010-10-08 2023-02-22 Novartis AG Methods of treating psoriasis using il-17 antagonists
EP2635601B1 (en) 2010-11-04 2016-07-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23 antibodies
JP2014506132A (ja) 2011-01-07 2014-03-13 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｉｌ−１２／ｉｌ−２３抗体およびその使用
CA2906384A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Amgen Inc. Methods for treating crohn's disease using an anti-il23 antibody
JP6909208B2 (ja) 2015-09-17 2021-07-28 アムジェン インコーポレイテッド Ｉｌ２３経路バイオマーカーを使用するｉｌ２３アンタゴニストに対する臨床応答の予測
JP2019508370A (ja) 2015-12-22 2019-03-28 アムジェン インコーポレイテッド Ｉｌ２３アンタゴニストに対する臨床応答の予測因子としてのｃｃｌ２０
US20210277105A1 (en) 2018-07-13 2021-09-09 Astrazeneca Collaboration Ventures, Llc Treating ulcerative colitis with brazikumab
US20210079086A1 (en) 2019-08-21 2021-03-18 Astrazeneca Collaboration Ventures, Llc Use of Brazikumab to Treat Crohn's Disease

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008103432A1 (en) 2007-02-23 2008-08-28 Schering Corporation Engineered anti-il-23p19 antibodies

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Publication number Publication date
AR078778A1 (es) 2011-11-30
BR112012009854A8 (pt) 2019-10-08
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NZ599875A (en) 2014-10-31
WO2011056600A1 (en) 2011-05-12
JP2022033730A (ja) 2022-03-02

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