TW200930704A - Kinesin inhibitors as cancer therapeutics - Google Patents

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TW200930704A
TW200930704A TW097148535A TW97148535A TW200930704A TW 200930704 A TW200930704 A TW 200930704A TW 097148535 A TW097148535 A TW 097148535A TW 97148535 A TW97148535 A TW 97148535A TW 200930704 A TW200930704 A TW 200930704A
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cancer
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tumor
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TW097148535A
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Tinya Abrams
Paul Barsanti
David Duhl
Michel Faure
Paul A Renhowe
Annette Olga Walter
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Novartis Ag
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Description

200930704 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於藉由投予KSP抑制劑以治療增生病症（譬 如癌症）之方法。 【先前技術】 傳動素為運送蛋白質，當其沿著微管運行時，其會使腺 甞三磷酸水解，並產生機械力。此等蛋白質之特徵為含有 具約350個胺基酸殘基之運送功能部位。數種激動素運送功 ❺ 能部位之晶體結構已被解析。 目前，約一百種傳動素相關蛋白質（KRP)已被確認。傳動 素係涉及多種細胞生物學過程，包括細胞器與泡囊之輸送， 及内質網之維持。數種KRP會與有絲分裂紡錘體之微管， 或與染色體直接交互作用，且在細胞循環之有絲分裂階段 期間，顯示扮演樞軸角色。此等有絲分裂KRP對於癌症治 療劑之發展特別令人感興趣。 傳動素紡錘體蛋白質（KSP)(亦稱為Eg5、HsEg5、KNSL1或 Φ KIF11)係為數種似傳動素運送蛋白質之一，該蛋白質係被定 位至有絲分裂紡錘體，且已知係為兩極有絲分裂紡錘體之 形成及/或功能所需要。 於1995年，使用抗體導引針對KSP之C-末端之KSP耗乏， 經証實會在具有單星狀體微管陣列之有絲分裂中遏制HeLa 細胞（Blangy 等人，Cd/ 汜：1159-1169, 1995)。於 bimC 與 cut7 基因 中之突變型，其係被認為是KSP之同系物，其會造成禕美 澇享(Enos, A.R 與 N.R. Morris, &// 仞：1019-1027, 1990)與 if 涿裘 136297 200930704 產摩 # (Hagan, I.與 M. Yanagida, iVaiwre : 563-566, 1990)中之中 心體分離上之失效。以無論是atra (全反式-視黃酸），其會 降低KSP在蛋白質層次上之表現，或使用反有意義寡核苷 酸之KSP耗乏，以處理細胞，顯現出DAN-G胰癌細胞中之顯 著生長抑制，這表示KSP可能涉及全反式-視黃酸之抗增生 作用（Kaiser，A.等人，/.历ο/. CT^m. 274, 18925-18931，1999)。令人 感興趣的是，A #裡龙邀相關之蛋白質激酶pEg2經証實會 結合且磷醯基化XlEg5 (Giet，R.等人，/所从274 : 15005-〇 15013，1999)。極尤禮-相關激酶之潛在受質，對於癌症藥物 發展，特別令人感興趣。例如，襁尤邀1與2激酶係過度表 現於蛋白質與RNA層次上，且此等基因係在結腸癌病患中 被放大。 KSP之第一種細胞可透過小分子抑制劑"單星醇 (monastrol)"，經証實會遏制具有單極性纺錘體之細胞，而不 會影響微管聚合作用，正如習用化學治療劑之情況，譬如 紅豆杉烷類與長春花植物鹼（Mayer, T.U.等人，Sdence 2恥： _ 971-974, 1999)。單星醇(monastrol)係在表現型為基礎之篩檢中 經確認為抑制劑，並指出此化合物可充作抗癌藥發展之前 導。此抑制經測定，關於與KSP之腺苷三磷酸交互作用並 非競爭性，且已發現係迅速地可逆（DeBonis，S.等人， #2 : 338-349, 2003 ; Kapoor，T.M.等人，CeZZ 历从 750 : 975-988, 2000)。 在明白經改良化學治療劑之重要性後，仍需要KSP抑制 劑，其係為KSP與KSP-相關蛋白質之有效活體内抑制劑。一 136297 200930704 些KSP之抑制劑已於先前被報告過。例如，w〇 〇6/〇〇襲與 PCT/US2_/G31129係揭示某些種類之化合物，顯示係為Ksp 之抑制齊J。意斯平席伯（ispinesib) (SB_715992)為得自細胞動力 學之臨床候選者，其係顯示充作Ksp抑制劑。本發明係提 供具有㈣良活性之新賴KSP抑制劑，及使用此等聊抑制 劑之新賴方法。此外，提供有效抵抗對其他治療劑（譬如培 克里他索（paclitaxel))具抗藥性之癌細胞之新穎Ksp抑制劑， 該抗藥性係由於其充作射録之P·糖蛋白之表現所致。 【發明内容】 本發明係提供-種在哺乳動物中治療選自固態腫瘤或血 液學癌症之增生疾病之方法，其包括對該哺乳動物投予治 療上有效量之結構J化合物、該化合物之互變異構物、該化 =物之藥學上可接受鹽、該互變異構物之藥學上可接受鹽 或其混合物，其中結構I化合物為
Ra η\^ν r1 X>H-^ R6 N N-Rb
Rc/ (D 其中： R1係選自下列組成之組群：胺醯基、醢基胺基、缓基、羧 基酯、芳基及視情況被羥基或鹵基取代之烷基； R2係選自下列組成之組群：氫、烷基及芳基；土 以為乙-八1 ; L係選自下列組成之組群：_s(〇v，其中q為一或二，與視 凊況被羥基、齒基或醯基胺基取代之(^至（：5伸炫基； 136297 200930704 A1係選自下列組成之組群：芳基、經取代之芳基、雜芳基、 經取代之雜芳基、雜環族、經取代之雜環族、環烷基及 經取代之環烷基； R6係選自下列組成之組群：雜環族、芳基及雜芳基，其全 部可視情況被-(R8)m取代，纟中尺8係如本文定義，且爪為 1至3之整數； R8係選自下列組成之組群：氰基、烷基、烯基、炔基、_CF3、 烷氧基、画基及羥基；其條件是，當„1為2或3時，各R8 © 可為相同或不同；
Rb 為 R4 或 R5 ; R4係選自下列組成之組群：氫、線性烷基、_伸烷基_胺醯基、 伸烷基-氧基醯基、-伸烷基-醯氧基、·伸烷基·經基、·[伸 烷基]p_含氮雜環族、-[伸烷基]P_含氮經取代之雜環族、 •[伸烷基]p-含氮雜芳基、_[伸烷基]P _含氮經取代之雜芳基 及-[伸烷基]p-NR10Rn，其中p為〇或J，且R4伸烷基為直 鍵伸烧基，視情況被前述取代基之一單_或二取代，取 代基選自下列組成之組群：胺基、經取代之胺基、經基、 烷基、經取代之烷基、羧基、羧基酯、酮基、螺環烷基 及齒基； R10與R11係獨立選自下列組成之組群：氫、烷基、經取代 之烷基、-S(0>烷基、-S(O)-經取代之烷基、·s(〇)2·烧基、 -s(o)2_經取代之烷基、雜環族、經取代之雜環族、酿基、 芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、環烷 基及經取代之環烷基，或當RU)為氫時，RU為羥基、烷 136297.doc -9- 200930704 氧基或經取代之烷氧基； R係選自下列組成之組群··氫、烧基、經取代之烧基、烯 基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經 取代之環烷基、雜環族、經取代之雜環族、芳基、經取 代之芳基、雜芳基及經取代之雜芳基；
Rc係選自下列組成之組群：尺3與_c(〇)_N(Rl3)(Rl4); R3係選自下列組成之組群：氫與_χ_Α ,其中χ係選自下列 組成之組群：-c(0)_、_c⑸…s(0)_、_s(0)2_ 及·s(〇)2 _N傅， 其中R為氫或烷基； A係選自下列組成之組群：氫、視情況經取代之烷基、視 情況經取代之烷氧基、視情況經取代之芳基、羧基、羧 基酯、胺醯基、視情況經取代之雜芳基、視情況經取代 之雜環族及視情況經取代之環烷基，其中視情況經取代 之基團係被1至4個取代基取代，取代基選自下列組成之 組群：烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取代之烷氧基、 胺基、經取代之胺基、芳氧基、經取代之芳氧基、氰基、 芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環 族、經取代之雜環族、雜環基氧基、經取代之雜環基氧 基、酿基、叛基、叛基g旨、酮基（惟當A為視情況經取代 之芳基或視情況經取代之雜芳基時除外）、齒基、羥基、 •S(0)2—R9 ’其中R9為烷基、經取代之烷基、芳基、經取 代之芳基、雜芳基或經取代之雜芳基及硝基；且 R13與R14係獨立選自下列組成之組群：氫、羥基 '烷基、 經取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、經取 136297 10· 200930704 基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經取代 ”環族’其條件是R1 3戋Rl 4中σ右1伽达 與R"和懸垂至Α上之氧二：有個為經基；或Rl3 其上之氮原子—起接合，㈣成雜環族 或經取代之雜環族。 於項具體貫施例中，本發明传接彳j£接 户m奉毛月係耗供-種在哺乳動物中 二:：4腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法，其包 私 物有效量之結構I化合物、該化合 之互變異構物、該化 β 構物之筚“ 樂于上7接丈鹽、該互變異 〃 °妾焚鹽或其混合物，丨中該固態腫瘤係選 自下列組成之祖雜·吐广^ . 、 群.肺癌、乳房癌、印巢癌、皮膚癌、結 料、膀胱癌、肝癌、胃癌'前列腺癌、腎細胞癌'鼻咽 =狀細胞癌、甲狀腺乳頭癌、子宮頸癌、小細胞肺癌 料細胞肺癌、姨癌、頭部與頸部鱗狀細胞癌及 肉瘤。 於另—項具體實施例中，固態腫瘤為乳房癌。於進一步 ❹具體實施例中’乳房癌為轉移性乳房癌。 、於-項具體實施例中，本發明係提供一種在哺乳動物中 治療選自固態腫瘤或Α液學癌症之增生疾病之方法，其包 括對該哺乳動物投予治療上有效量之結構！化合物、該化合 物之互變異構物、該化合物之藥學上可接受鹽、該互變異 構物之藥學上可接受鹽或其混合物，其中該固態胃 %r〇r ^ 725 0 於f -項具體實施例中，固態腫瘤為前列腺癌。於一項 /、貫施例中，本發明係提供一種其中腫瘤為多重抗藥性 136297 -11 · 200930704 腫瘤之治療方法。於另一項具體實施例中，多重抗藥性腫 瘤係表現高含量之p-糖蛋白。在一些具體實施例中，治療 包括使用式（I)化合物，其中： R1為C1-C6烷基或環烷基；及/或 R2為Η或C1-C4烷基；及/或 R6為視情況經取代之芳基；及/或
Ra為視情況經取代之苄基或芳基曱基；及/或
Rb為胺基取代之C2-C6伸烷基，其可進一步被羥基、 ® 烷基、C1-C4鹵烷基、C1-C4羥烷基、酮基或鹵基取代； 及/或 ，其中-X為-C(0)_，且A為烷基，其可被至高四 個基團取代，選自胺基、鹵基、經基、烧氧基、氰基、 經取代之胺基或S(0)2R9，其中R9為C1-C4炫基。 於一項具體實施例中，本發明係提供一種在哺乳動物中 治療選自固態腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法其包 φ 括對該哺乳動物投予治療上有效量之結構I化合物、該化合 物之互變異構物、該化合物之藥學上可接受鹽、該互變異 構物之藥學上可接受鹽或其混合物，其中該血液學癌症係 選自下列組成之組群：霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤（HL)、非霍 奇金（non-Hodgkin)氏淋巴瘤（NHL)、白血病、骨髓性白血病、 淋巴球白血病、急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白血 病（CML)、急性淋巴球白血病（ALL)、慢性淋巴球白血病 (CLL)、脊髓發育不良徵候簇（MDS)、有毛細胞白血病及多 發性骨髓瘤。哺乳動物可為人類。 136297 -12- 200930704 於進U實施例中，血液學癌症為急性骨趙性白企 病在#替代具體實施例中，血液學癌症為多發性骨髓 瘤。 於較佳具體實施例中，式I化合物係具有至少-種下述較 佳結構特徵： 在些此等較佳具體實施例中，於式j化合物中之Rl為 C1-C6烧基或環烧基。… 在一些此等較佳具體實施例中，於式I化合物中之R2為H ⑩ 或C1-C4烧基。 在一些此等較佳具體實施例中，於式I化合物中之R6為視 情況經取代之芳基；在某些具體實施例中，其係為鹵基取 代之苯環。 在一些此等較佳具體實施例中，於式j化合物中之Ra為視 情況經取代之苄基或芳基甲基（-CH2·芳基）；在某些具體實 施例中’其係為未經取代之苄基。 在些此等車父佳具體實施例中，於式I化合物中之Rb為胺 基取代之C2-C6伸院基’其可進一步被經基、ci_C4院基、 C1-C4鹵院基、C1-C4羥烧基、酮基或鹵基取代。 在一些此等較佳具體實施例中，於式I化合物中之^為 -X-A ’其中-X為-C(O)- ’且A為烧基，其可被至高四個基團 取代’取代基選自胺基、鹵基、經基、烧氧基、氰基、經 取代之胺基或S(0)2R9，其中R9為C1-C4烷基。 在特定較佳具體實施例中，式I化合物包含至少兩個上文 關於R1，R2, R6, Ra，Rb及Rc所確認之較佳基團。在進一步具 136297 •13· 200930704 體實施例中，其包含至少三個此等較佳基團。在進一步具 體實施例中，式I化合物包含至少四個該較佳基團。 意欲使用於本發明方法中之化合物之進一步具體實施例 係揭示於標題為''經取代之咪唑衍生物”，且於2006年1月5 曰公告之W02006/002236中，此公報係據此以其全文併入供 參考。化合物之又進一步具體實施例係揭示於2006年8月9 曰提出申請，標題為π經取代之咪唑化合物作為KSP抑制劑" 之PCT/US2006/031129中，其係據此以其全文併入供參考。化 © 合物之又進一步具體實施例係揭示於標題為環狀衍生物作 為EG-5抑制劑，且於2007年1月5日提出申請之美國臨時申 請案號60/883740中，其係以全文併入供參考。 於另一項具體實施例中，係提供一種在哺乳動物中治療 選自固態腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法，其包括對 該哺乳動物投予治療上有效量之式II化合物、該化合物之 互變異構物、該化合物之藥學上可接受鹽、該互變異構物 之藥學上可接受鹽或其混合物，其中式II化合物為：
其中： 尺1<:係選自下列組成之組群：乙基、異丙基、第三-丁基、 136297 -14- 200930704 苯基、-CH(CH2 )2 〇(環氧丙烷_3-基）及-CCH3 (CH2 )2 0(3-甲基環氧 丙烧-3-基）； R2e為氫或曱基； R15, R16, R17及R18各獨立選自Η、鹵基、C1-4烷基、C1-4 鹵烷基及CN ; R19, R2G及R21各獨立為Η或視情況經取代之C1-C10醯基； R22為C1-C4鹵烷基； Ρ為1至3之整數；且 © q為1-3之整數； 或其藥學上可接受之鹽。 在式II化合物之一些具體實施例中， 尺1<:係選自下列組成之組群：乙基、異丙基及第三_丁 基； 尺2(:為Η ; R15，R17及R18各獨立選自Η、鹵基、C1-4烧基、ci-4鹵 烷基及CN ; 參 R16為Η或C1-C4烷基； R19, R2G及R21各獨立為Η或視情況經取代之cl cl〇醯 基； R22 為 C1-C4 _ 烷基； P為2 ;且 q為1。 此等化合物亦包括其相應之藥學上可接受鹽。 式II與式Ila-IIc化合物（下文）為式I化合物之子集，且其特 136297 -15· 200930704 參
徵為自由態羥基或自由態羥基之前體藥物變型存在於醯基 部份基團中，意即在此等化合物中，R1、H，或r19為醯基土， 其可在活體内水解脫落，以提供其中1^9為11之化合物。其 中R19為適當醯基之化合物係為會立即地在身體中水解，以 產生其中R19為Η之化合物之前體藥物。已發現其中為η 之化合物具有令人驚料良好之活性，用於治療某些症狀， 例如前列腺癌，且係特別有效抵抗其中表現p_gp之腫瘤及 在某些血液學癌症巾。特定言之，此等化合物財效抵抗 表現Ρ-gp之抗藥性腫瘤，其為—種常見抗藥性機制，缺而 即使，極類似而未具有經基之化合物係遠較不有效抵抗此 種抗藥性腫瘤。雖然對於自由馳基，在藥物候選者中之 不期望特徵係為常見，此係由於代謝問題所致，譬如氧化 作用與糖基化作用，但已令人驚料發現式II或IIa、IIb或 瓜化合物在活體内係更有效抵抗某些腫瘤，勝過未含有自 由態經基，及不能夠立即地水解以提供自由態經基(r19=h) 之類似化合物。其抵抗抗藥性腫瘤之有效性使得此等式H 化合物特別可用於治療癌症。 於進:步具體實施射，係提供-種在魏動物中治療 選自固態m血液學癌症之增生疾病之方法，其包括對 該哺乳動物投予治療上有效量之式π化合物、該^合物之 互：異構物、該化合物之藥學上可接受鹽、該互變異構物 之樂學上可接受鹽或其混合物中固態腫瘤係選自下列 組成之組群：肺癌、乳房癌、印巢癌、皮膚癌、結腸癌、 膀胱癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、腎細胞癌、鼻咽癌、鱗 136297 -16- 200930704 狀細胞癌、f狀腺乳頭癌、？宮頸癌、小細胞肺癌(sclc) 非小細胞肺癌、姨癌、腦癌、頭部與頸賴狀細胞癌及肉 瘤？某些具體實施例中，腫瘤為具多重抗藥性者，或會 表現高含量P-糖蛋白（p_gp)者。 於進一步具體實施例中，係提供—種其中固態廢瘤為乳 房癌之方法。於進—步具體實施例中，乳房癌為轉移性乳 在-項替代具體實施例中’固態腫瘤為胃癌。於進一步 具體實施例中’固態腫瘤為前列腺癌。於一項具體實施例 中’本發明係提供—種治療選自固態或血液學癌症之增生 疾病之方法，纟包括投予式灯，其中腫瘤為多重抗藥二癌 症。在-些具體實施财，血液學惡性病症係選自急性骨 趙性白血病（AML)、慢性骨髓性白血病（CML)、急性淋巴胚 細胞白血病（all)、多發性骨髓瘤（MM)、非霍奇金 (ncm-Hodgkin)氏淋巴瘤_L)及霍奇金（H〇dgkin)氏淋巴瘤
(HL)。在某些具體實施例中，惡性病症為具多重抗藥性者， 或會表現高含量P-糖蛋白（P_gp)者。 於進一步具體實施例中，係提供—種在哺乳動物中治療 選自固態腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法，其包括對 該喷乳動物投予治療上有效量之式„化合物、該化合物之 互變異構物、該化合物之藥學上可接受鹽、該互變異構物 之藥學上可接受鹽或其混合物’纟中血液學癌症係選自下 列組成之組群：霍奇金（H〇dgkin)氏淋巴瘤_)、非霍奇金 白血病、骨雜^病、淋巴 136297 •17· 200930704 球白血病、急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白血病 (CML)、急性淋巴球白血病（ALL)、慢性淋巴球白血病（CLL)、 脊髓發育不良徵候簇（MDS)、有毛細胞白血病及多發性骨髓 瘤。 於進一步具體實施例中，係提供一種其中該血液學癌症 為急性骨髓性白血病之方法。在一項替代具體實施例中， 血液學癌症為多發性骨髓瘤。 於另一項具體實施例中，係提供一種在哺乳動物中治療 〇 選自固態腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法，其中此方 法包括對該哺乳動物投予一數量之式（I)或式（II) KSP抑制 劑，及進一步包括投予第二種抗癌治療劑。於一項具體實 施例中，該第二種抗癌治療劑係在以式（I)或式（II) KSP抑制 劑治療之前、伴隨著或於其之後給予。 第二種抗癌治療劑可選自伊利諾提肯（irinotecan)、拓波提 肯（topotecan)、真西塔賓（gemictabine)、愛馬 丁尼伯（imatinib)、 搓史圖諸馬伯（trastuzumab)、5-氣尿0f。定、甲醯四氫葉酸、礙 氯胺钻、順氣胺翻、多謝他索（docetaxel)、培克里他索 (paclitaxel)、帖札西塔賓（tezacitabine)、環鱗醯胺、長春花植物 驗、慧環素、利圖西馬伯（rituximab)及尼洛提尼伯（nilotinib)。 在一些具體實施例中，第二種化合物為Bcr-Abl抑制劑。 在特定具體實施例中，Bcr-Abl抑制劑係選自愛馬汀尼伯 (imatinib)與尼洛提尼伯（nilotinib)。 於又進一步具體實施例中，KSP抑制劑為式（I)化合物， 其中’· 136297 -18- 200930704 R1為C1-C6烷基或環烷基；及/或 R2為Η或C1-C4烷基；及/或 R6為視情況經取代之芳基；及/或 Ra為視情況經取代之苄基或芳基甲基；及/或 Rb為胺基取代之C2-C6伸烷基，其可進一步被羥基、C1_C4 烧基、C1-C4鹵烧基、C1-C4經院基、酮基或鹵基取代；及/ 或
Re為-X-A，其中-X為-C(O)-，且A為烧基，其可被至高四 ® 個基團取代，選自胺基、鹵基、羥基、烷氧基、氰基、經 取代之胺基或S(0)2R9，其中R9為C1-C4烷基。 本發明係提供式（II)化合物：
R1 c係選自下列組成之組群：乙基、異丙基、第三_丁基、 苯基、_CH(CH2)2〇(環氡丙烷-3-基）及-CCH3(CH2)20(3-甲基環氡 丙烷-3-基）； R2e為氫或曱基； R15’ R16, R17及各獨立選自H、鹵基、C1_4烷基、C14 136297 -19- 200930704 鹵烷基及CN ;
Rl9’ R2G及R21各獨立為Η或視情況經取代之C1-C10醯基； R22為C1-C4鹵烷基； p為1至3之整數；且 q為1-3之整數； 或其藥學上可接受之鹽。 於一項具體實施例中，R22為氟基甲基。 於另一項具體實施例中，p為2。 © 於進一步具體實施例中，q為1。 於另一項具體實施例中，R2c與Rl5各為H。 於進一步具體實施例中，R17與R18各為豳基。 於又另一項具體實施例中，R19，R20及R2i各為Η。 於進一步具體實施例中，Ri9為Η。 於另一項具體實施例中，Rl9為視情況經取代之α_α〇醯 基。 在一些具體實施例中，化合物包含兩種或多種上文關於 R22，P，q，R2。及R”_R21所述之結構特徵。在_些具體實施例 中’化合物包含至少三種此等結構特徵。在此等化合物之 一些較佳具體實施例中，r22為氟基甲基，且p為2，及^為 卜而R2e與RB各為H。在一些此種具體實施例中，R”與— 各表不F。而且在一些此等較佳具體實施例中’ν' 及 R21各為Η。在此等具體實施例中’ Rlc較佳係選自乙基、異 丙基及第三-丁基。 本發明亦提供式Ila化合物： 136297 -20- 200930704
Πα 或其藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供式lib化合物：
lib 〇 或其藥學上可接受之鹽。 本發明亦提供式lie化合物：
F (S)-N-((S)-3-胺基-4-氟基 丁基)-N-((R)-1-(1-苄基-4-(2,5-二氟苯基)-111-咪唑-2-基)-2,2-二曱基丙基)-2-羥基丙醯胺 或其藥學上可接受之鹽 -21 - 136297 200930704 於一項具體實施例中，本發明係提供一種在哺乳動物中 療k自固態腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法，其中 此方法包括對該哺乳動物投予治療上有效量之式π、；na、IIb 或任個之化合物、任一種此等化合物之互變異構物、 任種此等化合物之藥學上可接受鹽、該互變異構物之藥 學上可接受鹽或其混合物。 〃 於進步具體實施例中，固態腫瘤係選自下列組成之組 群肺癌、乳房癌、印巢癌、皮膚癌、結腸癌、膀胱癌、 ©肝癌、胃癌、前列腺癌、腎細胞癌、鼻咽癌、鱗狀細胞癌、 曱狀腺乳頭癌、子宮頸癌、小細胞肺癌（SCLC)、非小細胞 肺癌胰癌、頭部與頸部鱗狀細胞癌、腦癌及肉瘤。在某 些具體實施例中，固態腫瘤係為對其他癌症藥物具抗藥性 之腫瘤。其可為會表現促進抗藥性之射流泵譬如p即之癌 症，或已被証實對以藥物例如培克里他索（paclitaxel)或 SB 715992 /α療具抗藥性之癌症。由於藉射流泵特別是p糖蛋 粵白^即）之癌細胞之過度表現，故對藥物譬如培克里他索 (paclitaxel)具抗藥性之癌症，係對式II化合物敏感，如本文所 s正實，然而缺乏式Π化合物羥基之類似化合物在此等抗藥 性腫瘤中可能不為有效。式IIa、皿及此化合物係尤其可用 於/〇療會表現P-gp且顯示對其他治療劑之抗藥性之腫瘤。 此等化合物對於此令人意外之治療抗藥性腫瘤之能力為有 利。咸s忍其對於抗藥性腫瘤之活性係與式n醯胺部份基團 上之自由態羥基有關聯。 於另一項具體實施例中，固態腫瘤為乳房癌。於進一步 136297 -22· 200930704 «實施例中’乳房癌為轉移性乳房癌。 在—項替代具體實施例中，固態腫瘤為胃癌。 於另—項具體實施例中，固態廬瘤為前列腺癌。 ，在各此等具體實施例中，腫瘤有時為對其他藥物具抗藥 性者。/ —些具體實施例中，腫瘤係選自腎臟、.肝臟、結 人窗腦口P或乳癌。在某些具體實施例中，其係為會表現高 θ gp之腫瘤。p-gp之此種提高表現可自然地發生，或由 於以其他藥物之治療所造成。 © 於另—項具體實施例中，本發明係提供-種在嗜乳動物 中m療選自固態腫瘤或血液學癌症之增生疾病之方法，其 包括對該哺乳動物投予治療上有效量之式na、皿或Ilc任— 個之化合物、任一種此等化合物之互變異構物、任一種此 等化合物之藥學上可接受鹽、該互變異構物之藥學上可接 受鹽或其混合物，其中血液學癌症係選自下列組成之組群： 霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤（HL)、非霍奇金(n〇n_H〇dgkin)氏淋巴 ❹瘤（NHL)、白血病、骨髓性白血病、淋巴球白血病、急性骨 髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白血病（CML)、急性淋巴球 白血病（ALL)、慢性淋巴球白血病（CLL)、脊髓發育不良徵候 簇（MDS)、有毛細胞白血病及多發性骨髄瘤。 於另一項具體實施例中，血液學癌症為急性骨髓性白血 病0 於另一項具體實施例中，血液學癌症為多發性骨髓瘤。 本發明之具體實施例 A. 定義與概論 136297 -23· 200930704 應明瞭的是’於本文中利之術料僅為達成描述特定 具體實施例之目的，並非意欲限制本發明之範圍。必須指 出的是，當於本文及請求項中使用日夺，單數形式„一個:、 -種”及"該”係包括複數指示物，除非内文另有清楚指 述。在本專利說明書中及在下文請求項中，將參考許多術 語，其將被定義以具有下述意義： 於本文中使用之”烷基”係指單價飽和脂族直鏈、分枝狀 或環狀烴基，具有1至10個碳原子，且更佳為！至4個碳原 ® 子。此術語係以下列基團為例’譬如甲基、乙基、正_丙基、 異丙基、異丁基、正-丁基、第三_ 丁基、正戊基等。 線性烧基一 s5)係指不為分枝狀之烧基。 經取代之烧基係指烧基，具有—或多個取代基，經常 為1至4個，且較佳為1至2個取代基。關於燒基之適當取代 基係選自下列組成之組群：經取代或未經取代之烧氧基、 經取代或未經取代之酿基、經取代或未經取代之酿基胺基、 經取代或未經取代之醯氧基、經取代或未經取代之胺基、 響 經取代或未經取代之胺醯基、芳基、經取代之芳基、芳氧 基、經取代之芳氧基、氰基、齒素、經基、确基、叛基、 酮基、羥基-亞胺基、經取代或未經取代之烷氧基_亞胺基羧 基C1-C4酯類、環烷基、經取代之環烷基、經取代或未經取 代之螺環烷基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族、經取 代之雜環族、-S〇2 -烧基、-S〇2 -經取代之烧基，其中該取代 基係定義於本文中。關於烷基之較佳取代基包括烷氧基、 起基，_基，其較佳為F或C1，氰基、嗣基、經取代或未經 136297 -24- 200930704 取代之胺基、經取代或未經取代之醯氧基及經取代或未經 取代之醯基胺基。 鹵烷基"一詞係指烷基，其中至少一個氫原子係被鹵原 子置換。於一項具體實施例中，此術語係指氟基甲基、二 氟曱基或三氟曱基等。 經烧基” 一詞係指烷基，其中至少一個氫原子係被羥基 置換。於一項具體實施例中’此術語係指經甲基、丨_或2_ 經乙基、1-，2-或3-羥丙基等。 ® 伸院基係指二價飽和脂族烴基，較佳係具有1至5個， 且更佳為1至3個碳原子，其為直鏈狀或分枝狀。此術語係 以下列基團為例，譬如亞甲基（_CH2·)、伸乙基（_CH2CH2_)、 正-伸丙基（-CH2 CH2 CH2 -)、異-伸丙基（-CH2 CH(CH3)-)等。”經 取代之伸烷基"係指伸烷基，具有一或多個取代基，較 佳為1-4個’而更佳為1_2個取代基，選自適合烷基之取 代基。 ,烷氧基"係指基團”烷基舉例言之，其係包括甲氧 ❹基、乙氧基、正-丙氧基、異丙氧基、正-丁氧基、第三-丁 氧基、第二-丁氧基、正-戊氧基等。 經取代之炫氧基”係指基團”經取代之燒基。 "酿基”係指基團H-C(O)-、烷基-C(O)-、經取代之烷基 -C(O)-、烯基-C(o)·、經取代之烯基、炔基、經取 代之炔基-c(o>、環烷基-C(0)_、經取代之環烷基_c(〇)_、芳 基-c(o)-、經取代之芳基<(〇)·、雜芳基_c(0)、經取代之雜 芳基-C(0)_、雜環族-C(O)-及經取代之雜環族-c(o)-，其中烷 136297.doc -25· 200930704 基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代 之炔基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、經取代之芳基、 雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經取代之雜環族均如 本文定義。 ”胺醯基''係指基團-C(0)NRR，其中各R係獨立選自下列組 成之組群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯 基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、環烷基、 經取代之環烷基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經 © 取代之雜環族，且其中兩個R基團可被接合，伴隨著其所 連接之氮原子一起形成雜環族或經取代之雜環，其中烷 基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、炔基、經取代 之炔基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、經取代之芳基、 雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經取代之雜環族均如 本文定義。在兩個R基團接合以形成環之情況下，其係常 常為5-6員環，其係視情況如根據可在R基團上之取代基所 允許經取代；其係經常選自四氳吡咯、六氫吡啶、嗎福啉、 硫代嗎福p林及六氫p比p井。 "醯氧基"係指基團烷基-C(0)0-、經取代之烷基-c(o)o-、 稀基-c(o)o-、經取代之烯基-c(o)o-、炔基-c(o)o-、經取代 之炔基-c(o)o-、芳基-c(o)o-、經取代之芳基-c(o)o-、環烷 基-c(o)o-、經取代之環烷基-c(o)o-、雜芳基-c(o)o-、經取 代之雜芳基-c(o)o-、雜環族-c(o)o-及經取代之雜環族 -c(o)o-，其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、 炔基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、 136297 -26- 200930704 經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經取 代之雜環族均如本文定義。 氧基醯基或緩基S旨"係指基團-C(〇)〇-燒基、經取代之 C(〇)〇-院基、_c(〇)〇-稀基、_c(〇)〇·經取代之烯基、_〔(〇)〇_炔 基、-c(o)〇-經取代之炔基、_C(〇)〇·芳基、_c(〇)〇經取代之芳 基、-c(0)〇環烷基、_c(0)0_經取代之環烷基、_c(〇)〇雜芳基、 -C(0)〇-經取代之雜芳基、_c(〇)〇_雜環族及_c(〇)〇經取代之雜 環族，其中烷基、經取代之烷基、烯基、經取代之烯基、 ® 块基、經取代之炔基、環烷基、經取代之環烷基、芳基、 經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經取 代之雜環族均如本文定義。 '1烯基”係指烯基，具有2至6個碳原子，且較佳為2至4 個碳原子’並具有至少“固，且較佳為m個烯基不飽和 位置。此種基團係以乙烯基、烯丙基、丁_3稀小基等為例。 "經取代之烯基”係指烯基，具有一或多個，較佳為丨至4 個取代基，而更佳為1至2個取代基。適當取代基包括本文 中關於烷基所述者。 炔基係指炔基，具有2至6個碳原子，且較佳為2至3 個被原子，及具有至少1個，且較佳為1至2個炔基不飽和 位置。 ，，經取代之炔基"係指炔基，具有一或多個，較佳為丨至4 個取代基，而更佳為個取代基。適當取代基包括如本 文中關於境基之取代基所述者。’，氰基’，係指基團-CN。 ”胺基”係指基團-ΝΗ2。 136297 27- 200930704 "經取代之胺基"係指基團-NR'R”，其中R’與R”係獨立選自 下列組成之組群：氫、烷基、經取代之烷基、烯基、經取 代之烯基、炔基、經取代之炔基、芳基、經取代之芳基、 環烷基、經取代之環烷基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜 環族、經取代之雜環族、-so2-烷基、-so2-經取代之烷基， 且其中R’與R”係視情況和結合至其上之氮一起接合，以形 成雜環族或經取代之雜環族基團，其條件是R’與R”不皆為 氫。當R'為氫，且R”為烷基時，經取代之胺基於本文中有 ® 時係被稱為烷胺基。當R’與R"為烷基時，經取代之胺基於 本文中有時係被稱為二烷胺基。當指稱單取代胺基時，係 意謂R’或R"為氫，但非兩者皆是。當指稱二取代胺基時， 係意謂R’或R"皆不為氫。 "酿基胺基"係指基團-NRC(O)烷基、-NRC(O)經取代之烷 基、-NRC(O)環烷基、-NRC(O)經取代之環烷基、-NRC(O)烯基、 -NRC(O)經取代之烯基、-NRC(O)炔基、-NRC(O)經取代之炔基、 -NRC(O)芳基、-NRC(O)經取代之芳基、-NRC(O)雜芳基、-NRC(O) ® 經取代之雜芳基、-NRC(O)雜環族及-NRC(O)經取代之雜環 族，其中R為氫或烷基，且其中烷基、經取代之烷基、烯 基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、經取 代之環烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經取代之雜 芳基、雜環族及經取代之雜環族均如本文定義。 ”硝基"係指基團-N〇2。 "氰基"係指基團-CN。 "芳基”或"Ar"係指6至14個碳原子之單價芳族碳環基團， 136297.doc -28- 200930704 具有單環（例如苯基）或多重縮合環（例如莕基或蒽基），其 中縮合環可以或可以不為芳族（例如2-苯并噚唑啉酮、 2H-1，4-苯并呤畊-3(4H)-酮-7-基等），其條件是連接點係在芳族 破原子處。較佳芳基包括苯基與莕基。 ”經取代之芳基''係指芳基，其係被一或多個，較佳為1 至3個取代基，而更佳為1至2個取代基取代。適當取代基 包括羥基、醯基、醯基胺基、醯氧基、烷基、經取代之烷 基、烷氧基、經取代之烷氧基、烯基、經取代之烯基、炔 〇 基、經取代之炔基、胺基、經取代之胺基、胺醯基、芳基、 經取代之芳基、芳氧基、經取代之芳氧基、羧基、羧基酯 類、氰基、硫醇、烷硫基、經取代之烷硫基、芳基硫基、 經取代之芳基硫基、雜芳基硫基、經取代之雜芳基硫基、 環烷基硫基、經取代之環烷基硫基、雜環族硫基、經取代 之雜環族硫基、環烷基、經取代之環烷基、函基、硝基、 雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族、經取代之雜環族、雜 芳基氧基、經取代之雜芳基氧基、雜環基氧基、經取代之 ® 雜環基氧基、胺基磺醯基（nh2-so2-)及經取代之胺基磺醯 基。 ”芳氧基”係指基團芳基-0-，舉例言之，其係包括苯氧 基、萘氧基等。 ”經取代之芳氧基"係指經取代之芳基-〇-基團。 ”苄基"係指基團-ch2-苯基。 π芳基甲基”係指基團-ch2-芳基。 ”羧基”係指-COOH或其鹽。 136297 -29· 200930704 ”羧基酯”係指具有式-COOR之基團，其中r為經取代或未 經取代之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜 芳烧基。經常情況是’ R為視情況經取代之CK4炫基，毯 如甲基、乙基、異丙基或甲氧基乙基。 %烧基"係指3至10個碳原子之環烧基，具有單一或多 重環狀環’舉例言之’係包括金鋼烷基、環丙基、環丁基、 環戊基、環辛基等。 "螺環烷基"係指3至10個碳原子之環狀基團，具有環烷 © 基環，伴隨著一個螺接（藉由單一原子形成之連接，該原子 係為環之唯一共用成員），如以下列結構為例，其中兩個開 放價鍵係連接在一起，以形成環： 經取代之環烷基”係指環烷基，具有丨至5個取代基，選 自下列組成之組群：烷基、經取代之烷基、酮基（=〇)、硫 φ 酮基（=S)、烷氧基、經取代之烷氧基 '醯基、醯基胺基、 醯氧基、胺基、經取代之胺基、胺醯基、芳基、經取代之 芳基、芳氧基、經取代之芳氧基、氰基、齒素、羥基 '硝 基、羧基、綾基酯類、環烷基、經取代之環烷基、雜芳基、 經取代之雜芳基、雜環族及經取代之雜環族。 鹵基或鹵素係指氟基、氣基、溴基或块基，而較佳 為氟基或氣基。 ”經基"係指基團-OH。 ’’鲷基"係指基團：=〇。 136297 •30· 200930704 ”雜芳基”係指芳族基圏，„5至職彻子 4個選自下列組成 发 ^31至 成之，·且群·乳、氮及碗之雜原子作為。 此種雜芳基可具有單援,如t 有早％(例如吡啶基或呋畴基 環（例如♦井基或苯并嘆 八夕重縮合 為芳族及/或包含料子^ 環心或可以不 基/ 其條件是連接㈣㈣芳族雜芳 :個原子。於一項具體實施例中，雜芳基之氮炉 係視情況被氧化，以提㈣氧化 心 ❹ 參 =酸基部份基團。較佳雜芳基_ = :二硫笨:广基™，基、異-基 氺坐基二唑基及呋喃基。 ==芳基1指雜芳基，其係被⑴個取代基， 為…㈣絲取代，取代基選自關於絲 疋義之相同取代基組群。 斤 3氮雜芳基π與”含氮經取代 铋而△ 叫n您雜方基係指雜芳基與 、、’取代之雜芳基，包含至少一個 、 其# Μ $ 個氮衣原子，且視情況包含 、"雜原子，譬如硫、、氮或氧等作為環員。 雜芳基氧基”係指基團_〇_雜芸发 氧美,，r… 土圏0雜方基’而"經取代之雜芳基 之雜芳基均如本文定義。 ”中雜方基與經取代 或=衷"2”雜環族I雜環燒基，，或，，雜環基，，係指飽和 及蟬二：團’具有早裱或多重縮合環，包括稠合、橋接 之心糸：’3至1〇個環原子，包含…個選自下列組成 -或夕,/硫及氧之雜原子作為環員；在稠合環系統中， -夕固％可為環烷基、芳基或雜芳基，其條件是連接點 136297 •31- 200930704 係、、、二過雜環。於一項具體實施例中，雜環族基團之氮及/ 或硫原子係視情況被氧化，以提供队氧化物、亞磺醯基、 項醯基部份基團。 ’’經取代之雜環族”或”經取代之雜環烷基”或”經取代之 雜環基，，係指雜環基，其係被—或多個，且較佳為⑴個 取代基取代’取代基選自本文巾所述之取代基。適當取代 基包括本文中關於烷基與環烷基所述者。
、雜壌基與雜芳基之實例包括但不限於一氮四圜、吡咯、 咪唑、吡°坐、吡啶、吡畊、嘧啶、嗒畊、十井、異 < 哚、 «二二氫_、十坐H十井、異如林、唆淋、吹 畊、恭基吡啶、喹咩啉、喳唑啉、唓啉、喋啶、咔唑、咔 林菲疋、吖啶、二氮菲、異嘍唑、啡畊、異呤唑'啡呤 m井、四氫畔唑、二氫咪唑、六氫吡啶、六氫吡呼、 …丨噪、鄰苯二甲醯亞胺、以认四氫-異喹啉、4,5,6,7_四 氫苯并_吩、m㈣"塞吩、苯并_吩、嗎福 林基、硫代嗎福啉基（亦被稱為硫基嗎福啉基）、ι，ι二酮基 硫代嗎福琳基、六氫峨絲、四氫㈣、四氫吱喃基等。 ”含氮雜環族"與"含氮經取代之雜冑族，，係指雜環族基 團與經取代之雜環族基團，包含至少―個氮環原子，且視 情況包含其他選自硫、氧等之雜原子作為環原子。 ”硫醇"係指基團-SH。 烷硫基，，或”硫代烷氧基，，係指基團各烷基。 團 ，、二取代之烷硫基"或”經取代之硫代烷氧基"係指美 -S-經取代之烷基。 '曰土 136297 -32- 200930704 其中芳基係定義於上文。 -S-取代之芳基，其中經取 方基硫基"係指基團-S-芳基， ”經取代之芳基硫基”係指基團 代之芳基係定義於上文。 其中雜芳基係如上文 "雜芳基硫基"係指基團_s_雜芳基 定義。 "經取代之雜芳基硫基”係指其 土货、钿I團-S-取代之雜芳基，兑中 經取代之雜芳基係定義於上文。 /、 ❹ ”雜環族硫m基目·s•料m取狀雜環族硫 基係指基團-S-取代之雜環族，其中雜環族與經取代之雜環 族均如上文定義。 雜環基氧基”係指基團雜提装^ ^ 圈雜環基-〇-，而”經取代之雜環基 氧基係指基團經取代之雜環其η -, 雜衣基，其中雜環基與經取代 之雜環基均如上文定義。 ”環烧基硫基”係指基圍ς jsa h甘 τ相丞圏S_%烷基，而"經取代之環烷基硫 基係指基團-S-取代之環拉其，甘山^ 磙烷基，其中環烷基與經取代之環烷 基均如上文定義。 於本文中使用之’丨生物畢活w , 巧予/舌性係指當在實例1-13中所概 述之至少一種檢測中測試時之抑制濃度。 於本文中使用之”藥學上可接 甲上』接又鹽一詞，係指式①與（11) 化合物之無毒性酸或鹼土金屬 生屬鹽。此等鹽可在式（I)與（II)化 合物之最後單離與純化期間當場製成，或經由個別地使驗 或酸官能基與適當有機或無機酸或驗個別地反應而製成。 代表性藥學上可接受之睡 1類包括但不限於下列：醋酸鹽、 己二酸鹽、海藻酸鹽、檸糢 悴稼峻鹽天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、 136297 -33- 200930704 ❹ ❹ 苯磺酸鹽、酸性硫酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、 二葡萄糖酸鹽、環戊烷丙酸鹽、十二基磺酸鹽、乙烷續酸 鹽、葡萄糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己 酸鹽、反丁烯二酸鹽、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氣 碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲 烷磺酸鹽、菸鹼酸鹽、2-莕磺酸鹽、草酸鹽、雙羥茶酸鹽、 果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、三甲 基醋酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氛 酸鹽、對-甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。鹼性含氮基團亦可以 作用劑四級化，譬如烷基_化物，譬如甲基、乙基、丙基 及丁基氯化物、溴化物及碘化物；二烷基硫酸鹽，例如二 甲基、二乙基、二丁基及二戊基硫酸鹽，長鏈函化物，嬖 ο 如癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂基氯化物、溴化物及碘 化物；芳烷基_化物，例如苄基與苯乙基溴化物，及其他。 於是獲得水或油可溶性或可分散性產物。 可被彳木用以形成藥學上可接受酸加成鹽類之酸類實例， 包括無機酸類’譬如鹽酸、硫酸及磷酸，與有機酸類，譬 如醋酸、馬尿酸、朝酿、贫 孔fee 卓I、順丁烯二酸、甲烧續酸、 ❹酸及檸檬酸。鹼性加成鹽可在式①與⑼化合物之最後 單離…純化期間虽場製成，或個別地經由使叛酸部份基團 與適當驗’譬如藥學上可接a人极b 子工』接戈金屬陽離子之氫氧化物、碳 酸鹽或重碳酸鹽，或盘患 /、風次有機一級、二級或三級胺反應 而製成。藥學上可接受之醆 ^ 風包括但不限於以鹼金屬與鹼土 金屬為基礎之陽離子，嬖如 =如鈉、鋰、鉀、鈣、鎂、鋁鹽等， 136297 •34- 200930704 以及銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、 四乙基録、f胺、二曱胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。其 他可用於形成鹼加成鹽之代表性有機胺類，包括二乙胺、 乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、六氫吡畊等。 於本文中使用之”藥學上可接受之酯”一詞，係指酯類， 其係在活體内水解，且包括在人類身體中分解，以留下其 母體化合物或鹽者。適當酯基包括例如衍生自藥學上可接 受之脂族羧酸類者，特別是烷酸、烯酸、環烷酸及烷二酸， 其中各烷基或烯基部份基團係有利地具有不超過6個碳原 子。特定酯類之代表性實例包括但不限於曱酸酯、醋酸酯、 丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯及乙基琥珀酸酯。 於本文中使用之"藥學上可接受之前體藥物”一詞，係指 本發明化合物之前體藥物，其係在安全可靠醫學判斷之範 圍内，適用於與人類及低等動物之組織接觸，而無不當毒 性、刺激性、過敏性回應等，伴隨著合理利益/風險比，及 ❹對於其所意欲之用途有效，以及在可能之情況下，為本發 明化合物之兩性離子形式。，，前體藥物”一詞係指會在活體 内迅速地轉變，而產生上式母體化合物之化合物，例如經 由在血液中水解。一項討論係提供於，前 體藥物作為新穎傳輸系統，A.C.S.論集系列之第μ卷，及在 Edward B. Roche編著，在藥物設計中之生物可逆載劑，美國 醫藥協會與Pergamon出版社，1987，此兩者均併於本文供表 考。 / 於本文中使用之"抗癌劑"或"用於治療癌症之藥劑”或，, 136297 -35- 200930704 癌症治療劑”係指藥劑，僅舉例言之’係包括會引致細胞调 零之藥劑；多核苷酸（例如核糖酵素）；多肽（例如酵素藥 物；生物擬似物；植物鹼；烷基化劑；抗腫瘤抗生素；抗 代謝物，激素；鉑化合物；單株抗體；與抗癌藥、毒素及/ 或放射性核素共輛之單株抗體；生物回應改變劑（例如干擾 素與間白血球活素等）；繼承性免疫療法劑；造血生長因子； 引致腫瘤細胞分化之藥劑（例如全反式視黃酸等基因療 法式劑，反有意義療法試劑與核嘗酸；腫瘤疫苗；血管生 成之抑制劑等。許多其他藥劑係良好地在熟諸此藝者所知 之範圍内。 應明瞭的是’在上文定義之所有經取代基團中，藉由界 疋取代基具有對其本身之其他取代基（例如經取代之芳基， 具有經取代之芳基作為取代基，其本身係被經取代之芳基 所取代等)所達到之聚合體’並不意欲包含於此處。在此： f況中’此種取代基之最大數目為三。換言之，上述之各 ©定義係受極限所束缚’例如••經取代之芳基，'係、被限制於_ 經取代之芳基-(經取代之芳基）_經取代之芳基。 同樣地’應明瞭的是’上文定義並不意欲包括不容許之 戈坚式（例如甲基被5個氟基或經基，在乙烯性或乙快性 不，和上，或一價基團，譬如綱基，在笨環上取代）。此種 不容許取代型式係為熟練技師所習知。 由於化合物中有—或多個不對稱或對掌中心存在，故本 匕〇物可顯不立體異構現象。本發明意欲涵蓋各不同 體異構物及其混合物。某些本發明化合物包含經不對稱 136297 -36- 200930704 取代之碳原子。此龍不對稱取狀W子可 發明化合物包含立體里播私^ $人& 在特定經不對稱取 反原子處，或單—立體異構物。因此，本發明化合物 之外消旋混合物、非對映異構物之混合物、單—對 物以及平-非對映異構物’係被包含在本發明内。於本文 中使用之術語”S ”與”R”組態，係如由IUPAC 1974 ”關於段落Ε i ^ iL ^ ^ 4 ", Pure Appl. Chem. 45 ： 13-30, 1976 ^
者。所要之對掌異構物可自市購可得之對掌性起始物質， 藉此項技藝中所習知之方法，藉由對掌性合成獲得，或可 利用已知技術，經由分離所要之對掌異構物，得自對掌異 構物之混合物。對於式⑼化合物之-些具體實施例，單二 異，物係針對化合物中之至少—個立體中心描♦•在—個 特疋立體中心之單—異構物係經㈣之情況下，所描繪之 、’邑對相對立體化學為較佳具體實施例。在未指示特定立體 化學之情況下，立體中心可呈…組態，或其可為該兩種 之任何混合物，包括外消旋混合物。 本發明化合物亦可顯示幾何異構現象。幾何異構物係包 八有又鍵，4如烯基、肟、亞胺，或伸烯基部份基團之 本發明化合物之順式與反式形式。本發明係包括個別幾何 異構物與立體異構物及其混合物。 本發明化合物可藉此項技藝中已知，及進一步描述於本 文中之方法製成。例如，製造式(I)與式(II)化合物之方法係 彻述於已公告之申請案PCT/us2005/022062 (wo 06/00223句及其 相應之美國專利申請案中。可應用於製備式（II)化合物之其 136297 -37- 200930704 他合成方法之實例係提供於本文中。 集·備某些式I及/或式Π KSP抑制劑之實例係示於下文圖 式1中。 圖式1
使化合物1.1與1.2及K2C〇3 ’在含有KI之丙酮中反應.已 發現使用K^CO3/丙_係優於Cs2C〇3/乙醇，因k2C03之較低 成本’及因化合物1.3於添加水時會自丙酮溶液沉澱，移除 ❹對於水溶液處理以萃取1.3之需要。然後，使酮酯^以醋酸 銨（NH4 OAc) ’在甲苯中回流，而得咪嗤1<4。已發現使用甲 本會獲彳于較咼產率之p米峻，在與使用Dean stark集氣瓶，於 二甲苯中回流比較下，因後述方法會導致自反應混合物移 除醋酸銨至集氣瓶中。；u與溴化苄及K2C〇3在二曱基曱醯 胺中之反應係獲得1.5，其可於添加水時自反應溶液沉澱。 1.5以甲醇與氯化乙醯之處理係獲得L62HC1鹽，當以Na〇H/ 甲醇溶液滴定時，其係接著被轉化成其自由態鹼。已發現 136297 -38· 200930704 1·6自1·1與L2之形成係以81%產率進行，具有高純度（當藉 HPLC測定時為>97%)與高光學純度（>99% e.e.(對掌異構物過 量））。 化合物1.6可與醛HC(0)Rb’，在還原胺化條件下，或與Y_Rb 反應’其中Y為脫離基，以將烷基引進於胺氮上，然後可 使其醯基化，以提供式①或（11)化合物。圖式2係說明醛之 製備，其可用於還原胺化步驟中，以製備式或式（11)化 合物’及特別是式Ila或lib或lie化合物。
OH nh2 (Vila) 圖式2
och3 nh3ci
(VUc)
OH (Vllb)
nh2
❹ 於還原胺化作用後，使用已知酿化劑與條件，以使二級 胺醯化’以提供式（D或⑼化合物。圖式3係說明還原胺化 作用’以提供VIIIa。胺之醯化作用，接著為鄰笨二甲酿亞 胺之去除保護，及自由態羥基上之保護基之移除，係提供 化合物IIa。對於經基之適當保護基包括例如亨基醚類，其 136297 -39- 200930704 y左由氫解作用被移除，與烷基碳酸酯類，其可以試劑， %如埃化三τ基梦院，被選擇性地移除。藉由高解析質量 光°曰法測侍之所度量化合物IIa之質量為503.2609，對於 [M+H]+離子’其係與分子式C27H33N4〇2F3-致。
圖式3
Villa
OH Ilia
此化合物係藉由其IR光譜被進一步特徵鑒定，具有吸收 帶在 3500-2700 (br)、1641、1591、1508、1491 分_ 1下。其進一步特徵為下列nmr數據： 1162 及 1088 公 # δ1Ή. [ppm] r^H 多重性* 1 7.84 1 d 2 7.74 1 m 3 7.38 2 t 4 7.34-7.27 4 m 5 7.09 1 m # 513C [ppm] 1 -— 172.9 2** 1— 158.4 3** —i— 154.8 、4 144.4 5 — 136.7 136297 •40- 200930704 # δ1Έί [ppm] 多重性* 6 5.71 1 s 7 5.16 2 AB 8 4.65 1 s，寬廣 9 4.21 2 AB 10 3.72 2 d, t 11 3.55 1 t 12 2.41 1 m 13 1.43 2 s，寬廣 14 0.96 1 m 15 0.91 3 s 16 -0.77 1 m # <513C [ppm] 6 131.6 7 128.5 8 127.8 9 127.4 10** 123.5 11氺％ 121.0 12** 117.2 13** 113.6 14** 112.4 15** 87.2 16 59.9 17 53.1 18** 49.1 19 48.5 20 41.7 21 37.1 22 32.2 23 27.3
*多重性：AB(AB四重峰），b(寬廣），d(二重峰），dd (二重峰之二重峰）， m (多重+)，s (單峰）’ t (三重峰）。 ** 19F-偶合多重峰之中點位移。
應注意的是，在此分子中之對掌中心之絕對立體化學係 以已知起始物質或中間物之對掌性為基礎而經確認。HpLC 與nmr數據係支持上述方法會以單_異構物提供化合物之 結論。 使用相同方法，化合物IIc係利用已知對掌性仏羥醯基化 劑製成。其係、顯示關於所指$結構之預期質#，包括在_ = 5Π.3下之分子離子M+H，與分析HPLCRt=37〇分鐘（逆相）。 LC/ESI-MS數據係使用具有雙電噴霧電離源與Agiiem丨ι〇〇液 136297 -41- 200930704 體層析儀之Waters LCT Premier質譜儀記錄。MS系統之解析度 為大約12000 (FWHM定義）。HPLC分離係在1.0毫升/分鐘流率 下進行，使用10%至95%之梯度液，於2.5分鐘内。10 mM曱 酸銨係作為水相中之改質添加劑使用。磺胺二甲氧畊 (Sigma ;質子化分子m/z 311.0814)係作為參考物使用，且每第 三次掃描係經過LockSprayTM通道獲取。已發現系統之質量 準確度為<5 ppm。 關於醯化步驟之適當醯化劑與酸類包括具有適當Rc基團 Ο 之醯基鹵化物、酐類及酸類（參閱式I)。適當醯胺偶合條件 包括使用多種醯胺偶合試劑，以形成醯胺鍵結，譬如碳化 二亞胺類，N-N’-二環己基碳化二亞胺（DCC)、N-NL二異丙基 碳化二亞胺（DIPCDI)及1-乙基-3-(3'-二曱胺基丙基）碳化二亞 胺（EDCI)。碳化二亞胺類可搭配添加劑使用，譬如二曱胺基 吡啶（DMAP)，或苯并三唑類，譬如7-氮-1-羥基苯并三唑 (HOAt)、1-羥基苯并三唑（HOBt)及6-氯基-1-羥基苯并三唑 (Cl-HOBt);關於此種醯胺鍵結形成之條件係為此項技藝中所 醫習知。 其他醯胺偶合試劑亦包括錁與鱗為基礎之試劑。錁鹽包 括六氟磷酸N-[(二曱胺基）-1Η-1，2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-1-基亞 甲基]-N-曱基錁N-氧化物（HATU)、六氟磷酸N-[(1H-苯并三唑 -1-基）(二曱胺基）亞甲基]-N-甲基錁N-氧化物（HBTU)、六氟磷 酸Ν-[(1Η-6-氣基苯并三唑-1-基）(二曱胺基）亞甲基]-N-曱基錁 N-氧化物（HCTU)、四氟硼酸N-[(1H-苯并三唑-1-基）(二曱胺基） 亞甲基]-N-曱基錁N-氧化物（TBTU)及四氟硼酸Ν-[(1Η-6-氣基 136297 -42- 200930704 苯并三4 ·ΐ4 χ二甲胺基)亞甲基]_Ν•甲基祕氧化物(π价 鱗鹽包括六敗碟酸苯并三唾-1-基-氧基-參-(二甲胺基)-鱗 (BOP)、六說填酸7-氣笨并：r崎1 |好 +开—唆-1·基-N-氧基-參（四氫吡咯基） 鱗（PyAOP)及六氟磷酸苯并=唑 开—！ 1-基-N-氧基-參（四氫吡咯基） 鱗（PyBOP)。 酿胺形成步驟可於極性溶劑中進行，譬如二甲基甲醯胺 _F) ’且亦可包括有機驗，譬如二異丙基乙胺(麵)或二 曱胺基吡啶(DMAP)。 〇 纟製備式11化合物期間’關於羥基之適當保護基之選擇、 併入及移除之方法，係為此項技藝中所習知。以上文反應 圖式為基II化合物係容易地由人員，使用此項技藝 中之般技術製成，其明瞭如何選擇適當起始物質，以提 供所要之產物。 KSP抑制劑係為能夠抑制傳動素紡錘體蛋白質（KSp)之 任何可度量活性之化合物。KSP抑制劑較佳係具有IC50低於 100微莫耳濃度，更佳係低於1〇微莫耳濃度，且經常是低於 11 1微莫耳濃度。 "増生疾病”包括會影響脊椎動物之任何疾病或症狀，其 特徵為過量或不期望之增生細胞。根據本發明，"治療增生 疾病之方法”包括在需要此種治療之病患（例如哺乳動物， s如人類）中’治療（抑制）細胞（包括經轉變之細胞）異常生 長之方法’其方式是同時或相繼地投予有效量之KSP抑制 劑，單獨或併用有效量之化學治療劑及/或放射。細胞之異 常生長係意謂與正常調節機制無關之細胞生長（例如接觸 136297.doc •43- 200930704 抑制之喪失），包括其他择& 3生疾病之腫瘤細胞或良性與惡性 細胞之異常生長。 癌症與癌性’’術語係指或描述哺乳動物中之生理學 症狀，其典型特徵為未經調節之細胞生長。 於本文中使用之腫瘤”係指所有贅瘤細胞生長與增生， 無論是惡性或良性，以及所有癌前與癌細胞及組織。，，固態 腫瘤"-詞係指錢、骨髓及、淋巴樣系統以外之身體組織之 癌症或癌瘤。固態腫瘤之實例可為但不限於肺癌、乳房癌、 ❹_巢癌、皮膚癌、結腸癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、前列腺 癌、胰癌、腎細胞癌、鼻咽癌、鱗狀細胞癌、甲狀腺乳頭 癌、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、頭部與頸部 鱗狀細胞癌及肉瘤。 於本文中使用之”血液學癌症”一詞係指血液之癌症，且 包括其中尤其是白血病與惡性淋巴增生病症。，，白血病，，係 指血液之癌症，其中係製造過多白或紅血球，因此擠出構 • 成血液之其他部份，譬如血小板與正常紅血球。應明瞭的 是，白血病之病例係被分類為急性或慢性。在急性白血病 中之癌細胞係在未成熟階段下被阻斷，然而其係繼續增加。 因此，有非功能性未成熟細胞之大蓄積與功能性細胞之共 同損失。慢性白企病係較慢慢地進展，其中癌細胞會發展 至完全成熟。再者，白血球可為骨髓性或淋巴樣。因此， 白血病之某些形式，舉例言之，可為急性淋巴球（或淋巴胚 細胞）白血病（ALL);急性骨髓性白血病（aml);慢性淋巴球 白血病（CLL);或慢性骨髓性白血病（CML);及脊髓發育不良 136297 200930704 徵候蔟。”惡性淋巴增生病症”可指其中尤其是淋巴瘤，譬 如霍奇金（Hodgkin)氏淋巴瘤與非霍奇金（non-Hodgkin)氏淋巴 瘤’或多發性骨髓瘤。 本文中所述之一，些腫瘤可對各種治療劑具抗藥性。"抗藥 性”係意謂癌症在治療劑之正常投藥速率下，或在病患所容 許之速率下，實質上不受該治療劑所影響。針對多種抗贅 瘤劑之抗藥性之主要形式係涉及一組會擠壓此等細胞毒性 分子之膜蛋白質泵之功能。”多重抗藥性泵"可指ATP結合 © 卡匣（ABC)蛋白質之超族群，存在於從細菌至人類之生物體 中。ABC輸送子泵係位於細胞之漿膜中或於不同細胞器之 薄膜中，且係媒介各種分子之移位橫越此等障壁。大部份 ABC泵係利用ATP水解作用之能量，供此輸送活性用（活性 輸送子），但一些ABC泵係形成特定薄膜通道。 許多臨床研究已發現在腫瘤中之多重抗藥性表現型係與 某些ABC泵之過度現有關聯，稱之為多重抗藥性（MDR)蛋白 質。P-糖蛋白（稱為P-gp、MDR1或ABCB1)所媒介之多重抗藥 性係為第一個被發現者（Juliano, R.L,與 Ung，V.，所所 Acia, 455, 152-162 (1976) ; Chen, D.等人，CeZZ，47, 381-389 (1986); Ueda, Κ·等人，Proc. Natl. Acad· Sci·，84, 3004-3008 (1987))，且可能 仍然是臨床多重抗藥性中最廣泛發現之機制（Endicott, JA與 Ling, v., Annu. Rev. Biochem., 58, 137-171 (1989) ； Higgins, C.E, Ann. Rev. Ce// 历〇/.，8，67-113 (1992) ; Gottesman, MM.與 Pastan, I., Awxw. 7?ev. 历oc/iem·，62, 385-427 (1993); Gottesman, M.M 等人，Mzi. Cimcer ,. 2, 48-58 (2002))。有兩種其他ABC泵，其已被証實會參與腫瘤 136297 -45- 200930704 之多重抗藥性：多重抗藥性蛋白質1 (MRPl、ABCC1)與絲裂 黃酮（mitoxantrone)抗藥性蛋白質（MXR/BCRP 、ABCG2) ((Gottesman，M.M 同前出處，Cole, S.P.c.等人，公^«<^，258，1650-1654 (1992); Borst，P.等人，ΜϊίΖ. Cawcw 加对.，92, 1295-1302 (2000); Deeley, R.G. # Cole, S.P.c., Sem. Cancer Bio /., 8, 193-204 (1997)； Litman, 1 等人，CWZ. Mo/_ Lz/e Sd.，58, 931-959 (2001))。再者，能夠活性 地輸送各種化合物離開細胞之其他人類ABC泵亦可為經選 擇多重抗藥性情況中之參與者。其包括ABCB4 (MDR3)與 © ABCB11 (成對P-gp或BSEP)，兩種泵主要係位在肝臟中，個 別具有涉及磷脂醯膽鹼與膽汁酸類分泌之功能（Lecureur，V. 等人，7b;w’cc»/.，152, 203-219 (2000) ; Paulusma，c.c.等人，Sdewce，271, 1126-1128 (1996) ; Paulusma, c.c.等人，ZiepatoZog}/，25，1539-1542 (1997))。MDR3亦已被証實會輸送某些藥物（Smith, AJ.等人，/. 所m·. CTzem.，275, 23530-23539 (2000))。除了 MRP1 以外，五種同系 物（MRP2-MRP6)已被無性繁殖。MRP2 (亦可擠壓疏水性化合 物之有機陰離子輸送子）之過度表現係明確地顯示會賦予 w 癌症 MDR9 (Kool，Μ 等人，Omc吖沢抓，57，3537-3547 (1997))。 MRP3，有機共軛輸送子泵，與MRP5，核苷輸送子泵，亦為 關於會造成某些抗藥性形式之候選蛋白質（Borst，P等人，同 前出處）。 •'抗體”與”免疫球蛋白”（Igs)為具有相同結構特徵之糖蛋 白。雖然抗體顯示對抗原之結合專一性，但免疫球蛋白包 括抗體及缺少抗原專一性之其他似抗體分子兩者。後述種 類之多肽係例如在低含量下藉由淋巴系統，及在增加含量 136297 -46- 200930704 下藉由骨髓細胞瘤產生。 ”標識物"字詞，當於本文中使用時，係指可偵測之化人 物或組合物，其係直接或間接共軛至抗體，以產生"經標識口” 之抗體。標識物本身可為可偵測（例如放射性同性素^識 或螢光標識物），或在酵素標識物之情況中，可催化可㈣ 之受質化合物或組合物之化學改變。可充作可_標識物 之放射性核素包括例如1-131、1-123、1-125、Y-90、Re_188、 ❹ ❹ RM86、織卜⑽、B咖及獅9。標識物亦可為非放 射性實體’譬如毒素’其可藉由其生物學或生物化學活性 7(貞測。 ’’拮抗劑"一詞係以最寬廣意義使用’且包括會部份或完 全阻斷、抑制或中和本文中所揭示天然標的或其轉錄或轉 澤之生物學活性之任何分子。 於本文中使用之”菊姻"台4 取劑包括樂學上可接受之載劑、賦形 劑或安定劑’其在所採用之劑量與濃度下對被曝露至其上 之細胞或哺乳動物為無毒性。生理學上可接受之載劑係經 常為PH緩衝水溶液。生理學上可接受載劑之實例包括緩衝 劑’譬如填酸鹽、檸檬酸鹽、琥㈣鹽及其他有機酸類； 抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(低於約扣個殘基)多 肽；蛋白質’譬如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水 故^ 口體&如1乙烯基四氫p比Β各酮；胺基酸，譬如甘胺 酸、齡醢胺、天冬素、精胺酸或離胺酸；單酶、雙釀及其 他碳水化合物’包括葡萄糖、甘露糖或糊精；整合劑，譬 如EDTA’糖醇類，譬如甘露醇或花楸醇；可形成鹽之抗衡 136297 -47· 200930704 離子，譬如納；及/或非離子性界 … 譬如TWEEN、 聚乙二醇阔及Pluronics。，，併用，’一或多種其他治療劑一起 投藥係包括以任何順序之同時（共同）與連續投藥。在此種 方法中欲被合併之治療劑較佳係均在治療上有關聯之含量 下，同時存在於經治療病患之身體中。 ❹ 於本文中使用之，，宿主細胞”係指以單細胞實體培養之微 生物或真核細胞或細胞系，其可以或已經作為重組載體或 其他轉移多核甞酸之接受者使用，且包括已被轉染之原始 細胞之後代。應明瞭的是，單細胞之後代在形態學上或在 基因組或總DNA補體上可能未必完全與原始母體㈣，此 係由於天然、意外或故意突變所致。 ”治療”於本文中係被定義為KSP抑制劑對病患之施用或 投樂，或咖抑制劑對得自病患之經單離組織或細胞系之 施用或投藥，其中病患係具有固態踵瘤或血液學癌症、盘 固態腫瘤或企液學癌症有關聯之病徵或朝向固態腫瘤或： 液學癌症發展之㈣，其巾目㈣m㈣、緩和、 減輕、救治、改正、改善或影響固態腫瘤或血液學癌症、 y腫瘤或血液學癌症之任何有關聯病徵或朝向固態腫瘤 或血液學癌症發展之傾向。病患可為哺乳動物，且在一此 i病患為人類。經常情況是，病患為已被診 以μ-種本文中所述症狀之人類，#適合以本發明 m物與方法治療時。在特殊具體實施例中，病患可為 、症纟彡係表現會促進抗藥性之射流泵，譬如㈣， 患可為具有腫瘤者’其已言正實對藥物例如培克里他索 136297 -48· 200930704 (paclitaxel)或 SB-715992 具抗藥性。 所明治療亦意欲為包含KSP抑制劑之醫藥組合物對病 患之施用或投藥，或包含KSP抑制劑之醫藥組合物對得自 病患之經單離組織或細胞系之施用或投藥，該病患係具有 固態腫瘤或血液學癌症、與固態腫瘤或血液學癌症有關聯 之病徵或朝向固態腫瘤或血液學癌症發展之傾向，其中目 的係為治療、治癒、緩和、減輕、改變、救治、改正、改 善或影響固態腫瘤或血液學癌症、固態腫瘤或血液學癌症 〇 之任何有關聯病徵或朝向固態腫瘤或血液學癌症發展之傾 向。 所謂"抗腫瘤活性"係意欲為在惡性細胞增生或蓄積速率 上之降低，及因此是在現有腫瘤或於療法期間出現腫瘤之 生長速率上之下降，及/或現有贅瘤（腫瘤）細胞或新形成贅 瘤細胞之破壞，及因此是於療法期間在腫瘤之整個大小上 之降低。使用至少一種KSP抑制劑之療法會造成針對人類 ❹中固態腫瘤之治療有利之生理回應。使用至少—種Ksp抑 制劑之療法會造成針對人類中血液學腫瘤之治療有利之生 理回應。應明瞭的是，本發明之方法可用於預防療法期間 發生之進一步腫瘤向外生長。 根據本發明之方法，至少一種如本文別處所定義之 抑制劑係用以促進關於固態腫瘤或血液學癌症之正治療回 應。所謂關於癌症治療之”正治療回應”係意欲為在伴隨著 此等抗體或其片段之抗癌活性之疾病上之改善’及/或在與 該疾病有關聯之病徵上之改善。意即，可發現抗增生作用、 136297 -49- 200930704
進-步腫瘤向外生長之預防、腫瘤大小上之降低、癌細胞 數目上之減少及/或在一或多種藉由癌細胞刺激所媒介病 徵上之降低。因此，例如在錢上之改善，其特徵可為士 全回應。所謂，，完全回應，，係意欲為臨床上可偵測疾病之： 存在，伴隨著任何先前異常射線照像研究、骨髓及腦脊髓 液(CSF)之正常化。此種回應在根據本發明方法之治療後必 須持續至少-個月。或者，在疾病上之改善可被分類為部 份回應。所謂"部份回應|，係意欲為於新損傷不存在下，在 所有可度量腫瘤負荷（意即存在於病患中之腫瘤細胞數目） 上之至少約50%降低，且持續至少一個月。此種回應僅可 應用於可度量腫瘤。 腫瘤回應可經評估關於在腫瘤形態學（意即整個腫瘤負 荷、腫瘤大小等）上之改變’使㈣檢技術’譬如磁共振成 像（MRI)掃描、x_射線照像成像、計算之局部χ射線仰掃 描，生物發光成像，例如蟲螢光素酶成像，骨頭掃描成像 及腫瘤生物檢體取樣，包括骨髓吸出（BMA)。除了此等正治 療回應以外，接受以KSP抑制劑之療法之病患，可歷經在 與疾病有關聯病徵上之改善之有利作用。 所謂"治療上有效劑量或量"或，，有效量”係意欲為Ksp抑 制劑之量，當被投予時，其會產生關於治療患有固態腫瘤 或血液學癌症之病患之正治療回應。應明瞭的是，治療方 法可包括抑制劑之治療上有效劑量之單一投藥或治療上有 效劑量之多次投藥。
Bcr-Abl酪胺酸激酶基因會使融合蛋白質編碼，且係藉由 136297 -50- 200930704 BCR與ABL基因之異常接合而產生。此融合物係被發現於因 往復移位作用t (9 : 22)所造成之所謂費城染色體上，該移位 作用會造成Bcr-Abl融合基因之形成，其會造成ABL酪胺酸 激酶之未經調節表現。費城染色體之存在係被認為是在 CML與ALL兩者中成因因子之一（Abraham, (2007)拉昼廑蘑學 4 (1)第11-14頁）。目前，Bcr-Abl酪胺酸激酶為Bcr-Abl抑制性 治療化合物之新穎種類之標的，該化合物譬如愛馬汀尼伯 (imatinib) (Gleevec®，Novartis)、達沙汀尼伯（dasatinib) (Sprycel®， 〇 Bristol-Myers Squibb)及尼洛提尼伯（nilotinib) (AML107 ，
Novartis)。Bcr-Abl齡·胺酸激酶孫充作KSP蛋白質之上游。 在一些較佳具體實施例中，KSP抑制劑係併用至少一種 其他”活性化合物”一起投藥，其可為癌症療法，包括但不 限於手術、放射療法、化學療法、細胞活素療法或欲供使 用於治療吾人感興趣之固態腫瘤之其他單株抗體，其中該 其他癌症療法係在KSP抑制劑療法之前、期間或之後投予， 且兩種治療劑係在治療含量下同時存在於病患中。因此， 響 在合併之療法包括KSP抑制劑之投藥，且併用另一種治療 劑之投藥（譬如使用化學療法、細胞活素療法或其他單株抗 體）之情況下，本發明之方法係涵蓋共同投藥，使用個別配 方或單一醫藥配方，及以任一順序之連續投藥，其中較佳 係有一個時期，其中兩種（或全部）活性劑係同時施加其治 療活性。在本發明方法包括合併之治療服用法之情況下， 此等療法可同時給予，意即KSP抑制劑係同時地，或在與 其他癌症療法相同時間架構内投藥（意即療法係同時地進 136297 -51- 200930704
緩解或復發之可能性。 —種癌症療法相同時間下 卜明之KSP抑制劑亦可在另一種癌症療法 可進行不同癌症療法之相繼投藥，而不 否對療法之第一個過程有回應，以降低 ’本文中所述之KSP抑制
在本發明之一些具體實施例中，本文中 劑係併用化學療法或細胞活素療法一起投 制劑與化學治療劑或細胞活素可以任一 於例如治療結腸直腸癌與非小細胞肺癌；真西塔賓 (gemcitabine)，其可用於例如治療肺癌、乳癌及上皮印巢癌； 及適合治療固態腫瘤之其他化學治療劑。吾人感興趣之細 胞活素包括但不限於α干擾素、γ干擾素、間白血球活素 -2 (IL-2)、IL-12、IL-15及IL-21、粒性細胞巨噬細胞菌落刺激 因子（GM-CSF)、粒性細胞菌落刺激因子（G_CSF)或此等細胞 活素之生物活性變型。 在本發明之其他具體實施例中，本文中所述之KSp抑制 劑係併用欲供治療固態腫瘤之單株抗體一起投藥。因此， 例如在病患正接受關於胃或結腸癌治療之情況下，療法可 包括有效量之本文中所述KSP抑制劑之投藥，且併用有效 量之單株抗體之投藥，譬如Erbitux® (亦稱為些圖西馬伯 (Cetuximab) ; ImClone 系統公司，New York，New York 與 Bristol
Meyers Squibb, Princeton, New Jersey)。同樣地，在病患正接受關 136297 -52· 200930704 於結腸直腸癌治療之情況下，療法可包括有效量之本文中 所述KSP抑制劑之投藥，且併用有效量之人化單株抗體 AvastinT M (亦稱為貝發西馬伯（bevacizuimb) ; Genentech 公司，San Francisco, California)之投藥，後者係結合至且抑制血管内皮生 長因子（VEGF)，其係為一種在腫瘤血管生成上扮演一項重 要角色之蛋白質。或者，在接受關於乳癌治療之病患中， 療法可包括有效量之本文中所述KSP抑制劑之投藥，且併 用有效量之人化單株抗體Herceptin® (亦稱為搓史圖諸馬伯 © (trastuzumab) ; Genentech 公司，San Francisco, California)。可與本發 明KSP抑制劑合併使用之欲供治療固態腫瘤之單株抗體之 其他實例，包括但不限於以表皮生長因子受體為標的之抗 -EGFR 抗體（例如 IMC-C225 (ImClone 系統，New York，New York) (參閱，例如 Mendelsohn 與 Baselga (2000) 19 : 6550-6565， 及 Solbach 等人（2002) /«ί. / Cancer 101 : 390-394);以 IGF-1 受體蛋 白為標的之抗-IGF-1受體抗體（參閱，例如Maloney等人（2003) Omcer 7?從 63 : 5073-5083，與 Hailey 等人（2002) Mo/. w 1 : 1349-1353 ;以腫瘤有關聯抗原MUC1為標的之抗-MUC1抗 體；抗-α5汛、抗-αν万及抗-αν戾，以此等個別整合素為標 的，其係調節細胞黏連與涉及細胞增生與存活之發出訊息 過程（參閱，例如 Laidler 等人（2000) Acia Bioc/w’mica PoZiwiaj 47⑷：1159-1170，與 Cmet-Hennequart 等人（2003) Oncogene 22(11): 1688-1702);抗-P-卡赫林素（cadherin)抗體，以此卡赫林素 (cadherin)族群成員為標的（參閱，例如共待審美國專利申請 案20030194406);及抗-VE-卡赫林素（cadherin)抗體，以此内皮 136297 -53- 200930704 細胞專一黏連分子之企管生成相關功能為標的（參閱，例如 Liao 等人（2002) Cawcer 62 : 2567-2575)。在此等組合之較佳 具體實施例中，KSP抑制劑為式（II)化合物，且其可為式Ila、 lib或lie化合物。 本發明之KSP抑制劑與單株抗體可以任一順序相繼地或 同時地（意即共同地或在相同時間架構内）投藥。在超過一 種類型之單株抗體係被投予之情況下，本發明之方法可進 一步包括曝露至放射及/或化學療法，如對於接受治療之癌 〇 症所保証，及如由管理執業醫師所建議。 【實施方式】 實例 實例1:測定KSP活性之檢測 得自牛腦部之經純化微管係購自細胞骨架公司（Denver， Colorado, USA)。人類KSP之運送功能部位（Eg 5, KNSL1)係經無 性繁殖、表現及純化至大於95%均一性。Biomol GreenTM係購 自親和力研究產物公司（Matford Court, Exeter, Devon, United Kingdom)。使微管與KSP運送蛋白質（意即KSP運送功能部 位）在檢測緩衝液（20 mM Tris-HCl (pH 7.5)，1 mM MgCl2, 10 mM DTT及0.25毫克/毫升BSA)中稀釋至最後濃度為35微克/毫 升微管與45 nM KSP。然後，將微管/KSP混合物在37°C下預 培養10分鐘，以促進KSP之結合至微管。 於含有1.25微升抑制劑或待測化合物在DMSO中（或在對 照組之情況中只有DMSO)之測試板（384-井板）之各井内，添 加25微升ATP溶液（ATP在檢測緩衝液中經稀釋至300 濃 136297 •54· 200930704 度）與25微升上述微管/KSP溶液。使板在室溫下培養1小時。 在培養之後，將65微升之Biomol GreenTM(孔雀綠為基礎之染 料，其係偵測無機磷酸鹽之釋出）添加至各井中。使板再培 養5-10分鐘，然後使用Victor II板讀取器測定630毫微米下之 吸光率。於630毫微米下吸光率之量，係相應於試樣中KSP 活性之量。然後，經由非線性回歸，使用Excel之XLFit或由 GraphPad軟體公司發展之Prism數據分析軟體，在每一濃度 下，以630毫微米下，於吸光率上之降低為基礎，測定各抑 G 制劑或待測化合物之ic5〇。 本發明之較佳化合物，當藉由IC50度量時，具有生物學 活性低於約1 mM，其中較佳具體實施例具有生物學活性低 於約25 /zM，其中特佳具體實施例具有生物學活性低於約 1000 nM，而其中最佳具體實施例具有生物學活性低於約100 nM。式II化合物係在此項檢測中測試，且發現具有IC50值 低於此項檢測之定量極限（經估計為2-4 nM)。 實例2:在以化合物Ila處理之腫瘤細胞系中抑制細胞增生 ^ 所使用之細胞系如下述：HCT-116 (國家癌症研究所之 DCTF 腫瘤貯藏處，目錄 #NCI 502568, Rockville，MD)、HCT-15 (國家癌症研究所之DCTF腫瘤貯藏處，目錄#NCI 502711， Rockville，MD，可得自美國組織類型收集處，目錄#CLL-225)、 KB-3-1 (可得自 DSMZ，Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (德國微生物與細胞培養物收集處-目錄編 號 ACC 158)、KB-V1 (可得自 DSMZ-目錄編號ACC 149)、AGS (可得自美國培養物類型收集處，Manassas VA，目錄編號 136297.doc -55- 200930704 CRL-1739TM)、N87 (可得自美國培養物類型收集處，Manassas VA,目錄編號CRL-5822)、Hel92.1.7 (可得自美國培養物類型 收集處，Manassas VA,目錄編號TIB 180)、K562 (可得自美國培 養物類型收集處，Manassas VA，目錄編號CRL-243TM)、MV4 ; 11 (美國組織培養物收集處，Manassas VA，目錄編號CRL-9591) 及U937 (可得自美國培養物類型收集處，Manassas VA，目錄 編號 CRL-1593.2)。 將細胞覆蓋在96-井板中，於密度為96-井板之每井約500 © 個細胞下，並允許生長24小時。然後，將細胞以不同濃度 之化合物處理72小時。接著，添加100微升CellTiter-Glo®試劑 (Promega公司）。CellTiter-Glo®係用於測定存活細胞數目之均 質方法中，使用單一 CellTiter-Glo®試劑，以偵測ATP (美國專 利 6,602,677 與 7,241，584)(參閱 Promega 產物目錄 #G7570)。在添 加CellTiter-Glo®試劑之後，將細胞於黑暗中培養30分鐘。使 用Walloc Trilux板讀取器，對各井測定發光量，其係與每井 之細胞數有關聯。在僅接受DMSO (0.5%)之井中之存活細胞 數目係充作0%抑制之指標，而未具有細胞之井係充作細胞 生長之100%抑制。會造成50%生長抑制之化合物濃度（GI50) 係以圖形方式測定自72小時連續化合物曝露下，對數轉變 劑量值對細胞計數（對照組之百分比）之S形劑量-回應曲 線。數據係於下表1中提出。寬廣抗增生作用（GI50值0.1-6.5 nM)係在所有經測試之細胞系中被發現。此寬廣活性係與作 為有絲分裂抑制劑之化合物一致。 136297 -56- 200930704 表1 - ^物na之活體外抗增生活性（GIS0值，以nM表示） 腫瘤類型 細胞系 GI50 (nM) #試驗 ^ ^ ) -----—__ 加倍時間 (小時） 結腸 HCT-116 0.1 4 ------- 22 結腸 HCT-15 0.3 9 ' ---- 34 表皮樣 KB3.1 0.6 15 ------ 24 表皮樣 KB8.5 0.5 16 ------ 24 表皮樣 KBV1 6.5 11 29 田 月 AGS 0.2 4 田 月 N87 1.0 2 ~----- 47 白血病 Hel92.1.7 0.5 4 ——. 18 白血病 K562 0.1 4 白血病 MV4-11 0.2 2 36.5 白血病 U937 0.1 4 24 P-糖蛋白（P-gp，亦稱為MDR1)為一種射流泵，其係為會在 表現其之細胞中媒介對數種細胞毒性藥物之多重抗藥性之 ABC輸送子。於此項研究中所使用之一些細胞系（HCT_15 ' KBV1及KB8.5)係表現p-gp，且如可自表】所發現者，此等細 胞系係對式II KSP抑制劑敏感。下文實例12係証實在醯基部 份基團上缺少羥基之類似式I化合物於活體内不具抵抗此 種腫瘤之活性。 實例3:在癌細胞系中KSP抑制劑對於細胞循環形態 之活體外作用 將淋巴瘤細胞系細胞以本發明之KSp抑制劑處理，並藉 由FACs分析法進行分析。採集大約2χΐ〇5個細胞，將細胞九 粒以冷PBS洗滌兩次，並再懸浮於5〇〇微升冷pBS中。將細 136297 -57- 200930704 胞藉由添加8毫升冷80%乙醇而固定，同時慢慢地渦旋。於 15分鐘培養後，將經固定之細胞以PBS洗滌兩次，並使細 胞丸粒再懸浮於1毫升PI/RNASE染色緩衝劑（BD PharmingenTM 目錄#550825)中，且在37°C下培養15分鐘，保護隔離光線。 蛾化普羅匹定（propidium iodide) (PI)為榮光重要染料，其會將 DNA與RNA兩者染色。因此，RNA必須藉由以核糖核酸酶 (RNase)之消化而被移除。在FACS分析之前，係使經染色之 細胞通過細胞粗濾器至FACS管件中，以減少細胞聚集體之 〇 數目（BD Falcon#352235)。經固定與染色細胞之DNA含量係藉 由BD FACSCalibur流動細胞計數器，使用CellQuest軟體分析。 癌細胞以KSP抑制劑之處理會造成有絲分裂遏制，但遏 制程度、其延續時間及遏制後之結果可在細胞系之間改 變。於有絲分裂遏制之後，細胞具有數種選擇，包括脫離 遏制與正常地分裂，直接進行細胞凋零，或離開有絲分裂， 而無胞質分裂（稱為有絲分裂滑移之現象）。若細胞進行有 絲分裂滑移，則其可進入擬G1，然後繼續循環、衰老或進 ® 行細胞凋零。一些此等差異係醒目顯示於淋巴瘤細胞系 SUDHL-4 (B 細胞淋巴瘤細胞系，得自 DSMZ，Deutsche Sammhing von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (德國微生物與細胞培 養物收集處，目錄編號ACC 495)與RL (人類非霍奇金 (Non-Hodgkin)氏淋巴瘤細胞系，美國培養物類型收集處， Manassas VA,目錄編號CRL-2261TM)以KSP抑制劑之處理中。 兩種細胞系均在有絲分裂中被遏制，以回應化合物Ila， 但SUDHL-4細胞係於48小時處理後進行細胞凋零，如藉由具 136297.doc -58· 200930704 有<2N DNA含量之細胞増加所 有絲分裂中仍然保持被遏制， 裂滑移皆未發生。參閱圖2。 顯示，然而RL淋巴瘤細胞在 且細胞凋零之誘發與有絲分 實例4 - KSP抑制劑篩選檢測 對本發明KSP抑制劑最敏感之腫瘤_之確認，可使用 無偏途徑賴，其_用數種細胞為基礎之制。所選擇 之檢測如下述：
CellTiter-Glo .此係為經設計以度量細胞培養物中Ατρ 濃度之檢測，且可與細胞數目產生關聯。簡言之， CellTiter-Glo® (Promega公司）為一種均質方法使用單一 CellTiter-Glo®試劑’以偵測ATp，其中在檢測中之Ατρ會驅 動熱安定蟲螢光素酶之活性，以產生發光信號，然後其 可經度量，且與存活細胞數目產生關聯。簡言之，對於 黏連細胞，係將1,000至5,〇〇〇個細胞/井覆蓋於96井板中 (100微升/井），並在以藥物處理之前，使其黏附24小時。 對於非黏連細胞，係將1，〇〇〇至10,000個細胞/井覆蓋於 井板中（100微升/井）’並立即以藥物處理。藥物稀釋液 係在1000倍最後濃度下，於DMS0中製成。接著，在添加 至細胞中（11微升/井）之前，將此等稀釋液於生長培養基 中稀釋1/100，以達成所要之最後濃度。在48小時後，於 37°C組織培養器中，板係根據製造者之說明書處理，供 CellTiter-Glo®檢測。關於72小時細胞增生檢測之擬案·· 72 小時檢測係以與48小時檢測相同方式進行，惟下述修正 除外：對於黏連細胞，係將500至5,000個細胞/井覆蓋於 136297 •59· 200930704 96-井板中（90微升/井細胞生長培養基），並在以藥物處理 之前，留置黏附24小時。對於非黏連細胞，係將1,000至 10,000個細胞/井覆蓋在96-井板中（90微升/井細胞生長培 養基），並立即以藥物處理。所提出之數據值係表示在 生長上關於50%降低所需要之待測化合物濃度。 LDH釋出. 細胞毒性偵測KitPLUS (LDH)檢測（Roche Diagnostics, Manheim，Germany)係度量在培養基中藉由瀕臨 死亡細胞所釋出之LDH量；LDH會催化乳酸酯之轉化成 〇 丙酮酸鹽。酵素反應係被偶合至化學反應，其係利用四 經鹽，以形成紅色之福嗎簡（formazan)，且可藉由其在490 毫微米下之吸光率偵測。此項檢測係度量藥物處理後之 細胞死亡量。將細胞在10,000個細胞/井下，覆蓋於96-井 板中（100微升/井）。在以藥物處理之前，使黏連細胞黏 附24小時，然而非黏連細胞係立即以藥物處理。藥物稀 釋液係在1000倍最後濃度下，於DMS0中製成。然後，在 添加至細胞中（11微升/井）之前，將此等稀釋液於生長培 養基中稀釋1/100，以達成所要之最後濃度。在48小時後， 於37°C組織培養器中，板係根據製造者之說明書處理， 供細胞毒性偵測KitPLUS (LDH)檢測。在分析之前，將只 有培養基之值自所有數據點扣除。所提出之數據值係相 應於其中LDH輸出係在一半最高含量下之化合物濃度。
Caspase-Glo® 3/7. Caspase-Glo® 3/7 檢測（Promega 公司）係為度 量卡斯蛋白酶-3/7活性之均質發光檢測。此檢測係提供 發光前卡斯蛋白酶-3/7 DEVD-胺基蟲螢光素受質與熱安 136297 -60- 200930704 定蟲螢光素酶，在對卡斯蛋白酶-3/7活性、蟲螢光素酶 活性及細胞溶解達最佳化之試劑中。添加單一 Caspase-Glo® 3/7試劑會造成細胞溶解，接著為受質之卡斯 蛋白酶分裂。這會釋出自由態胺基蟲螢光素，其係被蟲 螢光素酶消耗，產生發光信號。此信號係與卡斯蛋白酶 -3/7活性成正比。所提出之數據值係相應於其中卡斯蛋 白酶3/7活性係在一半最高含量下之化合物濃度。 五種細胞系係經選擇，具有對本發明KSP抑制劑之已知 © 不同敏感性，以努力証實篩選檢測之預測性質。該細胞系 如下： HCT-116與HT29。HCT-116為衍生自人類結腸上皮癌之細胞 系，且已被証實於活體内對本發明之KSP抑制劑敏感。HT29 (可得自美國培養物類型收集處，Manassas VA，目錄編號 HTB-38)亦衍生自人類結腸上皮癌，但對KSP抑制劑較不敏 感。 MV4; 11 (美國組織培養物收集處（目錄#CRL-9591, Rockville, 〇 MD)為急性骨髓性白血病（AML)細胞系。 C〇1〇205 (美國組織培養物收集處（目錄#HB-8307, Rockville, MD)為人類結腸直腸癌細胞系。 T47D (可得自美國組織培養物收集處（目錄#HTB-133, Rockville, MD)為衍生自人類乳房導管癌之細胞系，其顯示在 紡錘體查核點中具有缺陷）。 關於化合物Ila之數據係於下表2中提出。其結果係証實 此等檢測一般而言係彼此良好一致，且可被使用於不同細 136297 -61 · 200930704 胞類型之寬廣篩選中’以篩選KSP抑制劑，及篩選關於敏 感性細胞類型。 表2 -增生/存活篩選檢測 CTG檢測(_ [ LDH檢測(_ 卡斯蛋白梅3/7檢谢in]vr> 細胞系 24小時 48小時 72小時 24小時 48小時 72小時 24小時 48小時 72小時 MV4 ； 11 0.05 0.04 0.04 NS 0.03 NS 0.02 0.03 NS HCT-116 >5 0.11 0.13 0.06 0.10 0.10 0.12 0.09 NS Colo-205 >5 0.18 0.19 NS 0.11 0.16 0.13 0.21 0.19 HT29 >5 >5 0.21 NS 0.35 0.27 NS NS NS T47-D >5 >5 0.45 NS 0.32 0.33 NS 0.39 0.40 CTG檢測-结果為GI50值’其中GI50值係以造成50%存活率之化合物濃度計算而得》LDH檢測-結果為EC50值，其中EC50值係以造成一半最高作用之化合物濃度計算而得。卡斯蛋白酶3/7檢 測-結果為EC50值，其中EC50值係以造成一半最高作用之化合物濃度計算而得。 實例5 - KSP抑制劑抵抗細胞系之NCI60試驗組之活性 NCI-60試驗組為腫瘤細胞系之標準化試驗組，其係經常 用以研究得自不同來源之腫瘤對特定藥劑之敏感性 (Shoemaker 2006 iVai ; 6 : 813-23)。上述 CellTiter-Glo® 檢測係用以度量多種腫瘤衍生之細胞系對KSP抑制劑化合 物之敏感性。關於化合物Ila之數據係於下表3中提出，且 Q 証實許多腫瘤衍生之細胞系係對本發明之KSP抑制劑敏 感。 表3 -關於化合物Ila之CellTiter-Glo數據之摘要 細胞試驗組 細胞系 GI5〇 Log(GI5 〇) 差別 白血·病 CCRF-CEM 0.215 -0.6676 0.999 白血病 HL-60 0.165 -0.7825 1.114 白血病 K-562 0.218 -0.6615 0.993 白企病 MOLT-4 0.331 -0.4802 0.811 白血病 RPMI-8226 0.351 -0.4547 0.786 136297 -62- 200930704 細胞試驗組 細胞系 GIS0 Log(GI5〇) 差別 白血病 SR 0.095 -1.0223 1.353 NSCL A549 10 1.0000 -0.669 NSCL EKVX 10 1.0000 -0.669 NSCL HOP-62 10 1.0000 -0.669 NSCL HOP-92 10 1.0000 -0.669 NSCL NCI-H226 10 1.0000 -0.669 NSCL NCI-H23 0.223 -0.6517 0.983 NSCL NCI-H322M 10 1.0000 -0.669 NSCL NCI-H460 0.378 -0.4225 0.754 NSCL NCI-H522 0.166 -0.7799 1.111 結腸 COLO 205 10 1.0000 -0.669 結腸 HCC-2998 0.608 -0.2161 0.547 結腸 HCT-116 0.138 -0.8601 1.191 結腸 HCT-15 0.378 -0.4225 0.754 結腸 HT29 10 1.0000 -0.669 結腸 KM12 0.423 -0.3737 0.705 結腸 SW-620 0.236 -0.6271 0.958 CNS SF-268 10 1.0000 -0.669 CNS SF-295 0.162 -0.7905 1.122 CNS SF-539 0.387 -0.4123 0.743 CNS SNB-19 10 1.0000 -0.669 CNS SNB-75 10 1.0000 -0.669 CNS U251 0.239 -0.6216 0.953 黑色素瘤 LOX IMVI 10 1.0000 -0.669 黑色素瘤 MALME-3M 10 1.0000 -0.669 黑色素瘤 M14 0.209 -0.6799 1.011 黑色素瘤 SK-MEL-2 2.773 0.4429 -0.112 黑色素瘤 SK-MEL-28 10 1.0000 -0.669 黑色素瘤 SK-MEL-5 10 1.0000 -0.669 136297 •63- 200930704 細胞試驗組 細胞系 GIso Log(GI50) 差別 黑色素瘤 UACC-257 10 1.0000 -0.669 黑色素瘤 UACC-62 10 1.0000 -0.669 黑色素瘤 MDA-MB-435 0.152 -0.8182 1.149 卵巢 IGROV1 10 1.0000 -0.669 卵巢 OVCAR-3 10 1.0000 -0.669 卵巢 OVCAR-4 10 1.0000 -0.669 卵巢 OVCAR-5 10 1.0000 -0.669 卵巢 OVCAR-8 0.324 -0.4895 0.821 卵巢 SK-OV-3 0.421 -0.3757 0.707 卵巢 NCI/ADR-RES 4.18 0.6212 -0.290 腎 786-0 10 1.0000 -0.669 腎 A498 10 1.0000 -0.669 腎 ACHN 10 1.0000 -0.669 腎 CAKI-1 10 1.0000 -0.669 腎 RXF 393 10 1.0000 -0.669 腎 SN12C 10 1.0000 -0.669 腎 TK-10 10 1.0000 -0.669 腎 UO-31 10 1.0000 -0.669 前列腺 PC-3 10 1.0000 -0.669 前列腺 DU-145 0.435 -0.3615 0.693 乳房 MCF7 10 1.0000 -0.669 乳房 MDA-MB-231 0.333 -0.4776 0.809 乳房 HS 578T 0.22 -0.6576 0.989 乳房 BT-474 10 1.0000 -0.669 乳房 BT-549 0.809 -0.0921 0.423 乳房 T-47D 10 1.0000 -0.669 平均 2.143 0.331 GI50值係為造成50%存活率之化合物濃度（以nM表示）。 136297 -64· 200930704 差別：在平均Log(GI50) (0.331)與各細胞系之Log(GI50)間之差 異。 平均：關於GI5〇值之幾何平均及關於Log(GI5〇)值之算術平 均。 實例6 - KSP抑制劑抵抗衍生自血液學惡性病症 之細胞系之活性 於表3中所提出之數據係証實白血病細胞系係對本發明 之KSP抑制劑最敏感。因此，衍生自血液學惡性病症之數 種細胞系之試驗組係在上述Ceimter-Glo®檢測中測試，且於 〇 下表4中及於圖1中提出。 表4關於化合物Ila抵抗衍生自血液學惡性病症之細胞系之 GI50 值 疾病 細胞系 目錄編號 GIS0 (nM) Log (gi50) 差別 AML MV4 ； 11 ATCC CRL-9591 0.08 -1.114 0.644 AML MV4 ; llLuc 衍生自MV4 ; 11 0.11 -0.979 0.509 AML AML-193 ATCC CRL-9589 0.11 -0.959 0.489 AML Kasumi-1 ATCC CRL-2724 0.44 -0.357 -0.113 AML SET-2 可得自DSMZ ACC608 0.34 -0.469 -0.001 AML MOLM13-Luc 可得自ATCC 30-2001 0.23 -0.645 0.175 AML HL60 可得自ATCC CCL-240 0.17 -0.783 0.313 AML HL60-Luc 可得自ATCC 30-2001 0.51 -0.297 -0.173 AML HEL92 ATCC TIB-180 0.49 -0.310 -0.160 CML K562 可得自ATCC CCL-243 0.21 -0.680 0.210 136297 -65- 200930704 疾病 細胞系 目錄編號 GIS0 (nM) Log (GIso) 差別 ALL CCRF-CEM ATCC CCL-119 0.16 -0.785 0.315 ALL RS4 ； 11 ATCC CRL-1873 0.10 -1.000 0.530 ALL MOLT-4 可得自ATCC CRL-1582 0.33 -0.480 0.010 ALL SEM-Luc 可得自ATCC 30-2001 0.15 -0.824 0.354 MM KMS11 參閱下文Namba 等人 0.48 -0.316 -0.154 MM KMSll-Luc 衍生自KSM-11 0.29 -0.538 0.068 MM KMS18-Luc 可得自ATCC 30-2001 0.52 -0.286 -0.184 MM OPM2 DSMZ Acc50 0.14 -0.870 0.400 MM KMS26 可得自JCRB JCRB1187 0.24 -0.620 0.150 MM L363 可得自DSMZ ACC49 0.13 -0.886 0.416 MM LP1 可得自DSMZ ACC41 0.21 -0.688 0.218 MM RPMI-8226 可得自ATCC CRL-8658™ 0.26 -0.582 0.112 MM H929 可得自ATCC CRL-9068 0.34 -0.475 0.005 MM H929-Luc 可得自ATCC 30-2001 1.69 0.227 -0.697 NHL RL ATCC CRL-226™ 20.00 1.301 -1.771 NHL SuDHL-4 DSMZ ACC495 0.45 -0.350 -0.120 NHL U937 可得自ATCC CRL-1593.2 0.20 -0.699 0.229 NHL SR 可得自ATCC SLR-2262 0.11 -0.957 0.487 NHL Karpas-299-Lu c 可得自ATCC 30-2001 20.18 1.305 -1.775 136297 •66- 200930704 疾病 細胞系 目錄編號 GIso (nM) Log (GIs〇) 差別 HL L428 DSMZ ACC197 20.00 1.301 -1.771 HL KM-H2 DSMZ ACC 8 0.23 -0.632 0.162 肀均 0.34 -0.470 gi5 〇值係為造成50%存活率之化合物濃度。差別：在平均 Log(GI5〇) (-0.470)與各細胞系之Log(GI50)間之差異。平均：關 於GI5Q值之幾何平均及關於L〇g(GI5〇)值之算術平均 (KMS-11，參閱 Namba 等人（1989) /« Viira CW/ Dev.所〇/. 25 (8)第 723-729 頁） @ 實例7 -初生胚細胞對KSP抑制劑之敏感性 得自表4之數據係証實數種類型之血液學癌細胞系係對 本發明之KSP抑制劑敏感。得自AML病患之初生胚細胞係 經測試關於對如下文所示化合物IIa之敏感性。來自末梢血· 液之冷柬AML胚細胞係得自AllCell LLC· (Emeryville, CA)。購得 含有〜lxlO7個PBMC之三個冷凍小玻瓶。將得自三位新診斷 AML病患之具有高百分比胚細胞（#06-188，80% ; #06-366, 88% ; #06-503, 73%)之末梢血液單核細胞（PBMC)培養數週， Θ 並以ksp抑制劑處理。使小玻瓶快速地解凍，並將細胞在 經補充10% FBS及下列細胞活素之Iscove氏DMEM中培養，該 細胞活素全部在10毫微克/毫升下：GM-CSF、G-CSF、SCF、 IL-3及IL-6 (全部得自R&D系統）。在細胞上進行三種檢測， 如下述：
CellTiter-Glo®檢測，在AML胚細胞上。將含有AML胚細胞 之PBMC接種在96-井板中（5000個/井），並在按上述度量 細胞存活之前，以不同濃度之化合物Ila (10 pM至10 nM) 136297 -67- 200930704 處理48小時。關於細胞系，係計算GI50值（nM)。 細胞循環分析，使用碘化普羅匹定（propidium iodide)染色。 將含有AML胚細胞之PBMC接種在6井板中（0.6至lxlO6個 細胞/井），並以下列之一處理：DMSO (媒劑）、在0.2或2 nM下之化合物Ila或在100 nM下之培克里他索（paclitaxel)。 採集大約2xl05個細胞，將細胞丸粒以冷PBS洗滌兩次， 並再懸浮於500微升冷PBS中。將細胞藉由添加8毫升冷 80%乙醇而被固定，同時慢慢地渦旋。於15分鐘培養後， Ο 將經固定之細胞以PBS洗滌兩次，並使細胞丸粒再懸浮 於 1 毫升 PI/RNASE 染色緩衝劑（BD Biosciences #550825)中， 且在37°C下培養15分鐘，保護隔離光線。碘化普羅匹定 (propidium iodide) (PI)為榮光重要染料，其會將DNA與RNA 兩者染色。因此，RNA必須藉由以核糖核酸酶（RNase)之. 消化而被移除。在FACS分析之前，經染色之細胞係通過 細胞粗濾器至FACS管件中，以減少細胞聚集體之數目 (BD Falcon#352235)。經固定與染色細胞之DNA含量係藉由 ^ BD FACSCalibur流動細胞計數器，使用CellQuest軟體分析。 菌落形成檢測，在含有曱基纖維素之培養基中。含有甲 基纖維素之半固體培養基係購自幹細胞技術公司 (Methocult™GF+ H4435,目錄 #04435)。將胚細胞在 lxlO3 至 lxlO5個細胞/井範圍之密度下，接種於未經組織培養物 處理之6-井板中。將DMSO (媒劑）或化合物Ila (0.1、0.2、 0.5、1及2 nM)在與細胞相同時間下添加至培養基中。於 2週後，菌落係在顯微鏡下計數。將活細胞以1毫克/毫 136297 -68- 200930704 之對-礙基硝基四娃750微升/井（Sigma目錄#I8377)染 色，於37°C下過夜培養後拍攝照片。
結果.雖然此等胚細胞之表觀加倍時間係比大部份AML 、”田胞系較緩慢’ 5〇_7〇小時對3〇 5〇小時，但關於化合物瓜 (〇·12、0.28及〇.34 nM)所獲得之GI5g值係與上文關於aml細胞 系所示者—致。類似結果係使用菌落形成檢測獲得，其中 菌落數目在0.2 njy[下係顯著地減少，且對於試樣#〇6 366，菌 落在0.5 nM及較高之丁係不存在。對於試樣#〇6188與 © #06_503 ’係獲得類似結果，在所有情況中，菌落在〇.5 nM 及較高之下係不存在。細胞循環形態顯示對於試樣#〇6 366， 在24小時下，於有絲分裂中所遏制之細胞數目上有增加（4N 個體群）’接著在48小時下，於瀕臨死亡細胞數目上有增加 (<2N個體群）。此等變化在最高濃度（2心）下係比在較低濃 度（0.2 nM)下更顯著，其係接近高劑量之培克里他索 (Paclitaxel) (1〇〇 nM)係作為強有絲分裂遏制之正對照組使用。 0 對於試樣#06-188與#06-503，係獲得類似結果。對於試樣 #06-503，數據係在48與72小時之時間點下收集。在48小時 下之圖樣係類似關於試樣#06-366所發現者，且在72小時 下’於顏臨死亡細胞數目上之增加（<2N個體群）係更顯著， 尤其是在2nM下。參閱圖2。GI5〇值仍然為極低之事實顯示 進入細胞循環之細胞係極有效地被化合物Ha殺死。 實例8 - KSP抑制劑之活艘内功效測定 細胞系HCT-116已被廣泛地使用於評估有絲分裂抑制劑， 譬如微管瓦解劑、有絲分裂激酶抑制劑及KSP抑制劑。進 136297 -69- 200930704 行每天四次歷經三天（q4d x 3)之服藥時間表下之多劑量功 效研究。實驗係使用大約6-8週大之遠系繁殖無胸腺nu/nu老 鼠（查理士河（Charles River)實驗室，Hollister，CA)進行。於抵達 時，動物係接受皮下微晶片植入物（AVID，Folsom, LA)，在肩 胛下區域中，供個體之識別。於任何實驗程序開始之前， 使動物適應環境1週。老鼠係每籠4-5隻動物收容在透明聚 碳酸酯微隔離器籠子中，使用12-小時亮、12-小時暗循環， 在70-80華氏度數間之溫度及30-70%相對濕度下。食物（Purina 〇 齧齒動物食物丸粒）與水係無限制地提供。老鼠係根據 Novartis ACUC規定與指引及ILAR實驗室動物之照顧與利用 之導引處理。實驗係在ACUC許可之擬案下，於AAALAC特 許設備中進行。 對於所有上述劑量，係將化合物na(自由態鹼）與SB-715992 (意斯平席伯（ispinesib)，由細胞動力學公司發展之KSP抑制 劑，其係在臨床試驗中；以其自由態鹼）調配在20% Captisol® 中，以提供8毫升/公斤之劑量體積。劑量係對每隻動物之 體重作調整。配方係在研究開始時製作一次，並儲存於室 溫下。購得臨床級培克里他索（paclitaxel)，在克雷莫弗 (cremophor)為基礎之媒劑（Mayne Pharma，現在為 Hospira, Lake Forest, IL，目錄#NDC-6170334209)中預混合，並於無菌鹽水中 稀釋，以提供16毫升/公斤之劑量體積，供以腹膜腔内方式 投予之30毫克/公斤劑量用。
人類HCT116結腸癌細胞係得自國家癌症研究所DCTD腫 瘤貯藏處（目錄 #NCI 502568, Rockville，MD)，且在 IMPACT1 PCR 136297 -70- 200930704 檢測試驗組（RADIL，Missouri大學，Columbia, MO)中經測試為不 含黴漿菌與老鼠病毒。使HCT116細胞在經補充10%牛胎兒 血清（JRH Biosciences，目錄 # 12003-1000M)之具有 2 mM L-麩醯胺 (Mediatech公司，目錄#15-040-CV)之RPMI 1640中生長。使此等 細胞以黏連培養物生長，保持在37°C下，於含有5%二氧化 碳之潮濕氣層中。在使用之前，將細胞培養少於10個繼代。 細胞係在95%匯合下採集，並於4X：下，在~800 X克下離心5 分鐘，然後在5千萬個細胞/毫升之濃度下，再懸浮於冷HBSS © (Mediatech公司，目錄#21-021-CV)中，供皮下植入用（注射體 積為0.1毫升）。 將雌性 nu/nu 老鼠（查理士河（Charles River), Hollister, CA)使用 已懸浮於Hank氏平衡鹽溶液（HBSS)中之5百萬個HCT-116腫 瘤細胞，以0.1毫升/老鼠之總體積，以皮下方式注射在右 腰窩中。關於功效研究，於植入後10天，將老鼠隨機分配。 在研究1中之72隻老鼠及在研究2中之81隻老鼠係經記載 具有平均腫瘤體積為大約300立方毫米。於第0天自服藥開 始起，腫瘤異種移植物係以二次元（L與W)，使用數字測徑 器每週度量兩次。腫瘤體積係以（Lx W2)/2計算。體重係每 週度量兩次，且臨床觀察係每日記錄。腫瘤體積與體重係 藉由 StudyDirector 軟體（StudyLog，South San Francisco，CA)捕獲與 儲存。百分比治療/控制（T/C)值係使用下式計算：
%T/C = 100 X ΔΤ/AC 其中： T =在研究之最後一天，藥物-治療組之平均腫瘤體積； 136297 -71- 200930704 △τ =在研究之最後一天藥物-治療組之平均腫瘤體積-在 服藥之最初一天藥物-治療組之平均腫瘤體積； C =在研究之最後一天，對照組之平均腫瘤體積；及 △C =在研究之最後一天對照組之平均腫瘤體積-在服藥 之最初一天對照組之平均腫瘤體積。 所有數據均以平均與SEM表示。關於最後腫瘤度量之組 群間比較係使用單向ANOVA成對方式分析進行。重要性係 使用Kruskal-Wallis單向ANOVA，在Ranks與Dunn氏方法上測 Ο 定，供多重成對方式比較。統計分析係使用SigmaStat (Systat 軟體公司，San Jose, CA)進行。 進行在q4d x 3時間表下之多劑量功效研究，以比較化合 物Ila對SB-715992與培克里他索（paclitaxel)之抗腫瘤活性。其 結果係示於表5中。在此項研究中，於5毫克/公斤化合物Ila 與15毫克/公斤SB-715992之最高劑量下治療之動物僅接受 所計劃q4d X 3時間表之最初兩種劑量，此係由於顯著體重 減輕所致，老鼠係自此恢復。即使僅使用兩種劑量，亦以 ® 類似方式有顯著腫瘤退化（73%退化，對每一種p<0.05)。在q4d X 3下，2.5與1.25毫克/公斤化合物Ila及7.5毫克/公斤 SB-715992之兩種較低劑量亦以類似方式造成HCT116腫瘤異 種移植物之退化（個別為82%、66%、65%退化，ρ<0·05)。整 體而言，培克里他索（paclitaxel)係比化合物Ila較不有效；惟 腫瘤係最初退化，服藥停止後不久即恢復生長。 136297 -72- 200930704 表5 -在HCT116腫瘤異種移植模式中，於q4d x 3劑量時間表 下所投予化合物na之功效 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 T/C, 第17天 (%) Δ 腫瘤體積， 第17天 (立方毫米） 最大％ 退化 (天） 最大△ 體重 (天)（克） 最大△ 體重 (天)（％) 存活 (活著/ 全部） 媒劑 (20% Captisol®) q4d X 3, 靜脈内 100 756+95 — 0.9+0.5 (第11天） 3.4+0.02 (第11天） 9/9 化合物Ila 1.25 毫克/公斤， 靜脈内， q4d X 3 —氺 -173+12 66 (第20天） -0.7+0.3 (第4天） -2.9+0.01 (第4天） 9/9 化合物Ila 2.5 毫克/公斤， 靜脈内， q4d X 3 -208117 82 (第20天） -1.8+0.2 (第11天） -7.0+0.03 (第11天） 9/9 化合物Ila 5 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx3 —氺 -196+11 73 (第20天） -3.0+0.2 (第7天） -11.7+0.02 (第7天） 8/9 (體 重損失） SB-715992 3.5 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx3 5 39+4 10 (第11天） -0.7+0.05 (第4天） -2.7+0.17 (第4天） 9/9 SB-715992 7.5 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx 3 „氺 -177+55 65 (第17天) -0.3+0.05 (第4天） -1.3+0.25 (第4天） 9/9 SB-715992 15 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx 3 ——--- -205+24 73 (第20天） -2.5+0.2 (第7天） -10.6+0.75 (第7天） 9/9 培克里他索 (Paclitaxel) 30 毫克/公斤， 腹膜腔内， q4dx3 —氺 -80+3 31 (第17天） -13+0.1 (第7天） -5.0+0.46 (第7天） 9/9 由於在q4d X 3時間表下低達1.25毫克/公斤之劑量會引致 136297 -73· 200930704 HCT116異種移植物之退化，故以2至0.125毫克/公斤之劑量 範圍重複功效研究，以觀察劑量回應，且測定可給予多低 之劑量以引致腫瘤退化。在表6中之結果顯示，低達1毫克 /公斤發現腫瘤退化（46%退化，p<0.05，第17天），且在服藥 間隔期間低達0.25毫克/公斤之化合物Ila發現腫瘤停滯，但 與媒劑對照組比較，並未達到統計意義。在0.125毫克/公斤 下之化合物Ila之抗腫瘤作用並未顯著地與媒劑對照物不 同。只有7.5毫克/公斤劑量之SB-715992會引致腫瘤退化。此 Ο 外，於最後劑量後72小時，收集血液，以比較組群中之循 環嗜中性白血球含量。嗜中性白血球係以劑量回應方式被 降低，類似腫瘤功效作用。 表6 在HCT116腫瘤異種移植模式中，於q4d X 3劑量時間表 下所投予之低劑量化合物Ila之功效 膣瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 T/C, 第24天 (%) △腫瘤 體積， 第24天 (立方毫米） 最大％ 退化 (天） 嗜中性 白jk球/ 微升服藥後 72小時 +/- S.D. 最大△ 體重 (天）（克） 最大△ 體重 (天）（％) 存活 (活著/ 全部） 媒劑 (20% Captisol®) q4d X 3, 靜脈内 100 1104+262 - 1227 +/- 257 -0.1±0.2(第 3天） -0.4±0.86 (第3天） 9/9 化合物Ila 0.125 毫克/公斤， 靜脈内， q4d X 3 81 809±193 -- 1346+/-427 -0.4±0.16 (第3天） -1.4±0.59 (第3天） 9/9 化合物Ila 0.25 毫克/公斤， 靜脈内， q4d X 3 35 382±120 - 785+/-374 -0.6i0.15 (第3天） -2.3±0.58 (第3天） 9/9 化合物Ila 0.5 亳克/公斤， 靜脈内， q4d X 3 14 155±145 8 (第Μ天） 293 +/- 29 -0.7±0.18 (第3天） -2.7+0.75 (第3天） 9/9 -74- 136297 200930704 踵瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 T/C， 第24天 (%) △腫瘸 體積， 第24天 (立方毫米） 最大％ 退化 (天） 嗜中性 白血球/ 微升服築後 72小時 +/- S.D. 最大△ 通重 (天）（克） 最大△ 艘重 (天）（％) 存活 (活著/ 全部） 化合物Ila 1 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx3 -34+36 46 (第Π天） 343+/-255 -0.7±0.23 (第3天） -2.8±0.83 (第3天） 9/9 化合物Ila 2 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx3 -141148 73 (第21天） 193 +/· 125 -1.35±0·87 (第10天） -4.7±1.17 (第3天） 8/9 (體重 損失） SB-715992 1.75 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx3 36 395±84 - 1026 +/- 229 -0.6+0.58 (第3天） -2.3±0.51 (第3天） 9/9 SB-715992 3.5 毫克/公斤， 靜脈内， q4dx3 15 165±60 13 (第7天） 731 +/-391 -0.5±0.37 (第3天） -2.0±0.44 (第3天） 9/9 SB-715992 7.5 亳克/公斤， 靜脈内， q4dx3 - -145125 65 (第21天） 476+/-112 -0.7±1.1(第 10天） -3.0±2.49 (第10天） 9/9 實例9 -在HCT15腫瘤異種移植模式中KSP抑制劑之功效 HCT15係為亦已知會表現P-gp泵之人類腺癌細胞系。因 此，異種移植腫瘤模式係使用此細胞系進行，以確認得自 Q 實例10之結果。 實驗係使用大約6-8週大.之遠系繁殖無胸腺nu/nu老鼠（查 理士河（Charles River)實驗室）進行》於抵達時’動物係接父 皮下微晶片植入物（AVID, Folsom，LA)，在肩胛下區域中’供 個體之識別。於任何實驗程序開始之前，使動物適應環境1 週。例行動物照顧與福利之綠保係如上述。 人類HCT15結腸癌細胞係得自國家癌症研究所DCTD腫瘤 貯藏處（目錄#NCI 502711, Rockville，MD)。使HCT15細胞在經補 -75- 136297 200930704 充10%牛胎兒血清（JRH Biosciences，目錄#12003-1000M)之具有 2 mM L-麩醯胺（Mediatech 公司，目錄 #15-040-CV)之 RPMI 1640 中生長。細胞係在IMPACT1 PCR檢測試驗組（RADIL，Missouri 大學，Columbia, MO)中經測試為不含黴漿菌與老鼠病毒。 使此等細胞以黏連培養物生長，保持在37°C下，於含有 5%二氧化碳之潮濕氣層中。在使用之前，將細胞培養少於 10個繼代。細胞係在95%匯合下採集，並於4°C下，在〜800 X 克下離心5分鐘，然後在5千萬個細胞/毫升之濃度下，再 Ο 懸浮於1:1比例之HBSS (Mediatech公司，目錄#21-021-CV)加上 MatrigelTM之中，供皮下植入用（注射體積為0.2毫升）。 當腫瘤為大約300立方毫米時，關於功效研究之處理作業 係在腫瘤細胞植入後10夭起始。化合物Ila與SB-715992係在 所指示之劑量下，以8毫升/公斤之體積，經由尾靜脈，以 靜脈内方式（i.v.)投藥。培克里他索（paclitaxel)係在30毫克/公 斤下，以16毫升/公斤之體積，以腹膜腔内方式（i.p.)投藥。 關於功效研究，係於植入後10天，將老鼠隨機分配，並 記載具有平均腫瘤體積為大約300立方毫米。於第0天自服 藥開始起，腫瘤異種移植物係以二次元（L與W)，使用數字 測徑器每週度量兩次。腫瘤體積係以（L X W2)/2計算。體重 係每週度量兩次，且臨床觀察係每日記錄。腫瘤體積與體 重係藉由 StudyDirector 軟體（StudyLog，South San Francisco, CA)捕 獲與儲存。數據係按上述分析。 在表7中所示之結果顯示化合物na係展現比培克里他索 (paclitaxel)較大抗-HCT15腫瘤功效；在4毫克/公斤劑量下， 136297 -76· 200930704 百分比Τ/C為26% (p<0.05對媒劑及類似對培克里他索 (paclitaxel))。雖然數據顯示在4毫克/公斤KSP抑制劑與7.5及 15毫克/公斤SB-715992服藥組間之分離，但並未達成統計意 義，此係由於在此模式中腫瘤體積之變異性所致。於第10 天，在4毫克/公斤化合物Ila與7.5毫克/公斤SB-715992劑量之 間發現統計學上顯著差異（p<0.05)。培克里他索（paclitaxel)， 一種已知之P-gp受質，在此模式中係具有極低抗腫瘤活 性。於任何經治療之老鼠中，未發現顯著體重損失或向外 Ο 毒性跡象。在HCT15模式中增加之抗腫瘤活性係在表現高含 量P-gp之腫瘤異種移植模式中証實化合物Ila之功效。 表7 _在HCT15腫瘤異種移植模式中，於q4d X 3劑量時間表 下所投予化合物Ila之功效 Μ瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 ΔΤ/Δ0, 第15天 (%) 退化 (%) △腫瘤體積， 第15天 (立方毫米） 最大△ 體重 (天）（克） 最大△ 體重 (天）（％) 存活 (活著/ 全部） 媒劑 (20% 卡普提索 (Captisol)) 8 毫升/公斤， q4d X 3, 靜脈内 100 __ 1123+84 0.3±0.2 (第10天） 1.4±0.8 (第10天） 9/9 化合物Ila 1.25 毫克/公斤， q4d X 3， 靜脈内 60 671+172 -0.510.4 (第3天） -2.110.6 (第3天） 9/9 化合物Ila 2.5 毫克/公斤， q4d X 3， 靜脈内 65 — 735+159 0.6±0.2 (第3天） 2.310.8 (第10天） 9/9 化合物Ila 4.0 毫克/公斤， q4d X 3， 靜脈内 26* — 99±78 -0.810.3 (第10天） -3.2±1.4 (第10天） 9/9 136297 -77- 200930704 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途經， 時間表 ΔΤ/Δ〇, 第15天 (%) 退化 (%) △膣瘤體積， 第15天 (立方毫米） 最大△ 體重 (天)(克) 最大△ 體重 (天）（％) 存活 (活著/ 全部） SB-715992 7.5 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 87 — 647+164 0.6+0.2 (第8天） 2.6+1.0 (第8天） 9/9 SB-715992 15 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 67 — 4911109 -1.210.4 (第10天) -4.9+1.4 (第10天） 9/9 培妓他索 (paclitaxel) 30 毫克/公斤， Q4d X 3, 腹膜腔内 104 — 703+198 0.8+0.6 (第8天） 3.3+1.0 (第8天） 9/9 實例10 _在急性骨髓性白血病（aml)異種移植模式中 KSP抑制劑之功效 化合物Ila之功效係在無胸腺老鼠中針對MV4 ; 11腫瘤異 種移植模式（O'Farrell等人2003)進行評估。功效首先係在老鼠 中’於皮下MV4 ; 11腫瘤異種移植模式中測試，且亦因為 骨髓微環境在AML細胞生長與存活上扮演一項重要角色， φ 故功效係在老鼠中，於MV4 ; 11-luc散佈性疾病模式中進一 步評估’其中細胞係回到骨髓與一些軟器官，且於其中生 長。由於藉由腫瘤細胞之蟲螢光素酶表現，故白血病損傷 生長之序列全面性監測係使用生物發光成像測定。 皮下腫瘤功效研究係使用大約6-8週大之遠系繁殖無胸 腺 nu/nu 老氤（查理士河（Charles River)實驗室，Hollister, CA)進 行。在散佈性疾病模式中之功效研究係使用大約7-8週大之 免疫不全N0D-SCID雌性老鼠（Jackson實驗室，Bar Harbor, ME) 進行。於抵達時，動物係接受皮下微晶片植入物（AVID, 136297 •78· 200930704
Folsom，LA)，在肩胛下區域中，供個體之識別。於任何實驗 程序開始之前，使動物適應環境1週。例行動物照顧與福利 之確保係如上述。 人類MV4 ; 11急性骨髓性白血病細胞係得自美國組織培 養物收集處（目錄 #CRL-9591, Rockville, MD)，且在 IMPACT1 PCR 檢測試驗組（RADIL，Missouri大學，Columbia, MO)中經測試為不 含黴漿菌與老鼠病毒。關於散佈性疾病模式，表現蟲螢光 素酶基因之安定MV4 ; 11細胞匯集庫係接受自在San Diego, ❹ California之Novartis研究基金會之基因組研究所之Fangxian Sun (MV4 ; 11-luc)。使MV4 ; 11細胞在經補充10%牛胎兒血清（JRH Biosciences,目錄 # 12003-1000M)、4 mM L-麩醯胺及 5 毫微克 / 毫 升重組人類粒性細胞M-CSF (GM-CSF) (R&D系統，目錄 #215-GM)之Iscove氏變性Dulbecco氏培養基（Mediatech公司，目 錄#15-016-CV)中生長。使MV4 ; 11-luc在相同培養基中生長， 但添加2微克/毫升嘌呤黴素，供蟲螢光素酶表現之選擇用。 使此等細胞以懸浮培養物生長，保持在37°C下，於含有5% 〇 w 二氧化碳之潮濕氣層中。在使用之前，將細胞培養少於10 個繼代。細胞係在大約2百萬個細胞/毫升下採集，並於4 °C下，在~800 X克下離心5分鐘，然後再懸浮於冷HBSS (Mediatech 公司，目錄 #21-021-CV)(含有 50% MatrigelTM，BD Biosciences，目錄#354234)中，在2500萬個細胞/毫升之濃度 下，供皮下植入用（注射體積為0.2毫升），或在1億個細胞/ 毫升之濃度下，供經由尾靜脈以靜脈内方式（i.v.)植入（注射 體積為0.1毫升）。在靜脈内細胞植入前一天，將老鼠以3灰 136297 -79- 200930704 度照射3分鐘。 將化合物Ila (自由態鹼）與SB-715992 (自由態鹼）調配在 20%卡普提索（Captisol)中，以提供8毫升/公斤之劑量體積。 劑量係對每隻動物之體重作調整。配方係在研究開始時製 作一次，並儲存於室溫下。購得臨床級培克里他索（paclitaxel) ，在克雷莫弗（cremophor)為基礎之媒劑（Mayne Pharma，現在為 Hospira, Lake Forest, IL,目錄 #NDC-6170334209)中預混合，並於 無菌鹽水中稀釋，以提供16毫升/公斤之劑量體積，供以腹 Ο 膜腔内方式投予之30毫克/公斤劑量用。 關於皮下腫瘤模式中之兩種功效評估，將已合併於HBSS 與MatrigelTM之1:1混合物中之1千萬個細胞以0.2毫升/老鼠 之總體積，以皮下方式注射在右腰窩中。於植入後17天， 將老鼠隨機分配，且老鼠係經記載具有平均腫瘤體積為大
I 約250立方毫米。於第0天自服藥開始起，腫瘤異種移植物 係以二次元（L與W)，使用數字測徑器每週度量兩次。腫瘤 體積係以（L X W2)/2計算。體重係每週度量兩次，且臨床觀 〇 察係每日記錄。腫瘤體積與體重係藉由StudyDirector軟體 (StudyLog，South San Francisco, CA)捕獲與儲存。 關於散佈性疾病模式中之功效評估，於尾靜脈注射0.1毫 升HBSS中之1千萬個細胞前一天，雌性NOD-SCID老鼠係在3 灰度下接受全身照射。於植入後研究28天，將四十隻老鼠 隨機分配，並記載，具有平均光子計數（背侧視圖+腹面視 圖）為大約5xl07個光子/秒，當藉生物發光成像測定時。在 成像前大約10分鐘，將老鼠使用150毫克/公斤蟲螢光素 136297 -80- 200930704 (Xenogen公司，Alameda, CA)，以腹膜腔内方式注射，接著以 異弗烷(isoflurane)麻醉。光子發射係使用電荷偶合裝置照像 機，在IVIS成像系統（Xenogen公司）中度量。簡言之，捕獲老 鼠之灰度影像，接著為生物發光圖之覆蓋，該圖表示在表 現蟲螢光素酶之癌細胞中自分裂蟲螢光素檢出之光子空間 分佈。信號強度係使用稱為活影像2.50.2版（Xenogen)之IGOR Pro 4.09A 版軟艘（WaveMetrics 公司，Lake Oswego, OR)之定製版 本定量。測得所有得自背側+腹面視圖之經檢出光子計數 〇 之總和。在動物中之癌細胞之生物發光係於指定日藉由成 像度量，直到第一隻老鼠由於疾病負擔而發展出後肢癱瘓 為止，關於何時人道地使老鼠安樂死之主要終點。記錄每 隻老鼠之安樂死日，並將存活老鼠之其餘百分比隨著時間 作圖（Kaplan-Meier存活分析）。P值係使用對數-分級試驗 (GraphPad Prism 4.0軟體）計算，以評估治療與對照組間之差異 (p<0.05係被認為是顯著）。體重係每週度量兩次，且臨床觀 察係每日記錄。體重係藉由StudyDirector軟體（StudyLog，South ◎
San Francisco, CA)捕獲與儲存。數據分析係按上述進行。 結果，皮下腫瘤模式：進行皮下腫瘤模式中之功效研究， 以比較q4d X 3所投予化合物Ila之劑量範圍之活性。在第一 種研究中，評估nu/nu老鼠中之最高容許劑量；4毫克/公斤 化合物Ila、15毫克/公斤SB-715992及30毫克/公斤培克里他 索（paclitaxel)。具有腫瘤之四隻其餘老鼠係在相同時間表下 被投予0.625毫克/公斤之KSP抑制劑。其結果係示於表8中。 腫瘤退化係在服藥間隔期間，於所有治療組中被發現，其 136297 -81- 200930704 中9/9、6/9及7/9隻老鼠具有持續完全腫瘤退化（CR)，歷經超 過100天，在個別以高劑量之化合物Ila、SB-715992及培克里 他索（paclitaxel)治療之組群中。雖然腫瘤係在0.625毫克/公斤 化合物Ila治療組中退化，但其會在最後劑量後大約10天再 一次生長。試劑之劑量一般係良好地被容許，具有<10%最 高平均體重減輕，惟在SB-715992治療組中，兩隻老鼠係失 去>20%體重。 表8 -在皮下MV4 ; 11腫瘤異種移植模式中，於q4d X 3劑量 Ο 時間表下所投予化合物Ha之功效 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 ΔΤ/Δ0, 第24天 (%) % 最大退化 (天） △M瘤體積， 第24天 (立方毫米） CR 最大△ 體重(克） (天） %最大△ 體重(天） 存活 (活著/ 全部） 媒劑 (20% 卡普提索 (Captisol)) q4d X 3, 靜脈内 100 - 9111101 0 0.23±0.3 (第10天） 1 土 1.4 (第10天） 9/9 化合物Ila 0.625 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 - 69 (第10天） -32±172 0 -0.5±L3 (第7天） -1.7±5.0 (第7天） 4/4 化合物Ila 4 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 - 100 (第60天） -176+31 9 -1.5±0.4 (第10天） -5.9±1.6 (第10天） 9/9 SB-715992 15 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 - 98 (第60天） -211+28 6 -1.4±0.3 (第3天） -5.6±L1 (第3天） 7/9 (體重 損失） 培克里他索 (Paclitaxel) 1 毫克/公斤， q4d X 3, 腹膜腔内 - 75 (第46天） -151±63 7 0.4±0.3 (第10天） 0.4±1.1 (第10天） 9/9 進行皮下腫瘤模式中之第二種功效研究，比較q4d X 3所 投予化合物Ila之低劑量範圍之活性。所使用之最高劑量為 2毫克/毫克，其係為無毛老鼠中最高容許劑量之一半。將 -82- 136297 200930704 化合物Ila之活性與7.5毫克/公斤下之SB-715992比較，其係為 其最高容許劑量之一半。其結果係示於表9與圖2中。在0.5、 1及2毫克/公斤劑量之化合物Ila，以及1.75、3.5及7.5毫克/ 公斤SB-715992中，發現腫瘤退化達不同程度。到最後劑量 後5天之時，腫瘤係在以0.5毫克/公斤化合物Ila與1.75毫克/ 公斤SB-715992治療之組群中開始生長。然後，到服藥後30 天之時，腫瘤係在7.5毫克/公斤之SB-715992治療組中開始生 長。1與2毫克/公斤劑量之化合物Ila會造成長期退化，個 Ο 別具有6與5次完全腫瘤退化，歷經超過100天。試劑之劑量 一般係良好地被容許，具有<10%最高平均體重減輕。 表9-研究2:化合物Ila抵抗MV4; 11人類AML皮下異種移植 腫瘤之抗腫瘤功效與耐藥性之摘要 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 ΔΤ/AC, 第21天 (%) % 最大退化 (天） △腫瘤體積， 第21天 (立方毫米） CR 最大△ 體重 (克）（天） %最大 △體重 (天） 存活 (活著/ 全部） 媒劑 (20% 卡普提索 (Captisol)) q4d X 3, 靜脈内 100 -- 574+84 0 0.3±0.24 (第10天） 1.1±0.9， 第10天 9/9 化合物Ila 0.13 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 161 - 921±341 0 -0.6±1.0 (第10天） 2.3±1.7 (第10天） 9/9 化合物Ila 0.25 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 133 - 765±196 0 0.2±0.14 (第10天） 0.64±0.5 (第10天） 9/9 化合物Ila 0.5 亳克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 20 55 (第10天） 114±110 0 -0.6±0.24 (第7天） -2.510.8 (第7天） 9/9 化合物Ila 1 亳克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 - 89 (第63天） -194±27 6 -0·3±0·2 (第7天） -1.1±0.7 (第7天） 9/9 -83· 136297 200930704 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 AT/AC, 第21天 (%) % 最大退化 (天） △腫瘤體積， 第21天 (立方毫米） CR 最大△ 體重 (克）（天） %最大 △體重 (天） 存活 (活著/ 全部） 化合物Ila 2 亳克/公斤， q4d X 3， 靜脈内 - 87 (第63天） -201+23 5 -0.1 土 0.14 (第3天） -0.4+0.6 (第3天） 9/9 SB-715992 1.8 毫克/公斤， Q4d X 3， 靜脈内 59 - 3391218 0 0.510.4, 第10天 2.0±1.0, 第10天 9/9 SB-715992 3.5 毫克/公斤， Q4d X 3， 靜脈内 44 41 (第10天） 251±132 0 0.2+0.3, 第3天 0.7±0.3, 第3天 9/9 SB-715992 7.5 毫克/公斤， Q4d X 3， 靜脈内 ·_* 75 (第31天） -204+20 3 -0.4±0.8, 第10天 -1.4±1.3, 第10天 9/9 結果，散佈性AML疾病模式：化合物Ila之活性係在MV4 ; 11-luc之散佈性AML疾病模式中評估，其中腫瘤細胞係以靜 脈内方式植入。治療投藥係於細胞植入後28天起始，此時 動物係在已進展疾病之階段中，如藉由廣泛生物發光信號 所表示。其結果係示於表10中。於最初成像中，生物發光 信號係在骨頭（顎、頭顱、脊椎及長骨頭）中被發現，但亦 © 散佈在全身中，包括至肺臟與肝臟。因此，接著記錄得自 全身之光子發射（背側+腹面視圖）。此等損傷最後會導致後 肢癱瘓，伴隨著由於腫瘤負荷所致之偶爾顯著體重損失， 此時老鼠係被犧牲。此係被稱為"有條件之存活·’。 進行得自老鼠中MV4; 11-luc之光子發射之序列全身監測， 直到第一隻老鼠死於疾病為止，其係於研究之第12天後發 生。q4d X 3所投予之0.5與1毫克/公斤劑量之化合物Ila係顯 著地降低生物發光信號，與媒劑治療組比較(p<〇.〇5)，此為 -84- 136297 200930704 疾病負擔之一種度量方式，然而0.25毫克/公斤治療之作用 並未顯著與媒劑不同。化合物Ila在此等劑量下係良好地被 容許。化合物Ila係顯著地延遲後肢癱瘓之誘發，且增強老 鼠之存活，其中所有三種劑量均與媒劑處理團隊比較 (ρ<0·05)。在媒劑處理組中之平均存活期為15天，然而0.25、 0.5及1毫克/公斤化合物Ila-治療組個別為27、31及30天。發 生在服藥時期之腫瘤負荷（生物發光）上之早期劑量依賴性 降低並未轉化成存活上之劑量依賴性增加。其顯示一旦化 〇 合物作用消逝，疾病即在所有組群中快速地進展。 表10 -在MV4 ; 11散佈性疾病模式中，於q4d X 3劑量時間表 下所投予化合物Ila之功效 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 ΔΤ/Δ0, 第12天 (%) 退化， 第12天 (%) △腫瘤 生物發光， 第12天 (光子/秒） 平均 存活 天數 最大△ 體重 (克）（天） %最大 △體重 (天） 媒劑 (20% 卡普提索 (Captisol)) q4d X 3， 靜脈内 100 — 9·2χ108土 2.6x10s 15 -0.64i0.16 (第6天） -3.6i0.92 (第6天） 化合物Ila 0.25 毫克/公斤， q4d X 3， 靜脈内 46 — 4.3x108± 2.0xl08 27** 1.1+0.44 (第5天） 5.6±1.3 (第5天） 化合物Ila 0.5 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 — 9* -4.0xl06土 1.3xl07 31** -0.5710.45 (第10天） -2.6±2.3 (第10天） 化合物Ila 1 毫克/公斤， q4d X 3, 靜脈内 — 80* -3.¾7土 1.4xl07 30** -0.77i0.32 (第10天） -4.2+1.7 (第10天） 136297 -85- 200930704 實例11 -在人類多發性骨髓瘤KMS-11-luc踵瘤異種移植物中 KSP抑制劑功效之評估 化合物na之功效係針對人類多發性骨髓瘤KMS-11-luc腫 瘤異種移植物進行評估。功效係首先在具有此細胞系之老 鼠中，於皮下腫瘤異種移植模式中測試，其中化合物Ila會 引致顯著抗腫瘤作用。由於骨髓微環境在骨髓細胞瘤細胞 生長與存活上扮演一項重要角色，故功效係在老鼠中，於 KMS-11-luc散佈性疾病模式中進一步評估，其中細胞係優先 〇 地回到骨髓之局部矯正位置，且於其中生長。在細胞中之 蟲螢光素酶報告子基因之表現，係允許藉由生物發光成像， 序列全面性監測骨頭中之骨髓細胞瘤損傷生長。 實驗係使用大約7-8週大之免疫不全SCID-米黃色雌性老 鼠（查理士河（Charles River)實驗室，Wilmington，MA)進行。於抵 達時，動物係接受皮下微晶片植入物（AVID, Folsom, LA)，在 肩胛下區域中，供個體之識別。於任何實驗程序開始之前， 使動物適應環境1週。例行動物照顧與福利之確保係如上 w 述。
人類KMS-11-luc多發性骨髓瘤細胞係得自Toronto大學 (Ontario，Canada)之 Suzanne Trudel 實驗室，且在 IMPACT 1 PCR 檢 測試驗組（RADIL，Missouri大學，Columbia, MO)中經測試為不含 黴漿菌與老鼠病毒。在吾人接收此細胞系之前，其已經安 定地設計，以藉由pGC-gfp/luc載體之反轉錄酶病毒轉移感染 表現蟲螢光素酶。使KMS-11-luc細胞在經補充2毫莫耳/升L-麩醯胺（Mediatech公司，Herndon, VA)與10%牛胎兒血·清（JRH 136297 -86- 200930704
Biosciences,目錄#12003-1000M)之Iscove氏培養基中生長。使此 等細胞以懸浮培養物生長，保持在37°C下，於含有5%二氧 化碳之潮濕氣層中。在使用之前，將細胞培養少於10個繼 代。細胞係在大約2百萬個細胞/毫升下採集，並於4°C下， 在~800 X克下離心5分鐘，然後在5千萬個細胞/毫升之濃度 下，再懸浮於冷Hank氏平衡鹽溶液(HBSS)與MatrigelTM (個別 為 Mediatech 公司，目錄 #21-021-CV ; BD Biosciences,目錄 #354234)之1:1混合物中，供皮下植入用（注射體積為0.2毫 Ο 升）。或者，對於散佈性疾病模式，細胞係在1億個細胞/ 毫升之濃度下，僅於冷HBSS中製成，供經由尾靜脈之靜脈 内（i.v.)植入（注射體積為0.1毫升）。 將化合物Ila與SB-715992 (自由態鹼）調配在20%卡普提索 (Captisol)中，以提供8毫升/公斤之劑量體積。劑量係對每隻 動物之體重作調整。配方係在研究開始時製作一次，並儲 存於室溫下。賭得臨床級培克里他索（paclitaxel)，在克雷莫 弗（cremophor)為基礎之媒劑（Mayne Pharma,現在為 Hospira, Lake w Forest, IL,目錄#NDC-6170334209)中預混合，並於無菌鹽水中 稀釋，以提供16毫升/公斤之劑量體積，供以腹膜腔内方式 投予之30毫克/公斤劑量用。 關於皮下腫瘤模式中之功效評估，係將已合併於HBSS與 MatrigelTM之1:1混合物中之1千萬個細胞以200毫升/老鼠之 總體積，以皮下方式注射在右腰窩中。於植入後11天，將 老鼠隨機分配，且54隻老鼠係經記載具有平均腫瘤體積為 大約140立方毫米。於第0天自服藥開始起，腫瘤異種移植 136297 •87· 200930704 物係以二次元（L與W)，使用數字測徑器每週度量兩次。腫 瘤體積係以（L X W2)/2計算。體重係每週度量兩次，且臨床 觀察係每日記錄。腫瘤體積與體重係藉由StudyDirector軟體 (StudyLog，South San Francisco, CA)捕獲與儲存。數據分析係如 上述。 關於散佈性疾病模式中之功效評估，在HBSS中之1千萬 個細胞係以100毫升/老鼠之總體積，經由尾靜脈，以靜脈 内方式注射。於植入後研究10天，將四十隻老鼠隨機分配， © 並記載，在腿骨（右邊+左邊）中具有平均光子計數為大約 9xl05個光子/秒，當藉生物發光成像測定時。在成像前大約 10分鐘，將老鼠使用150毫克/公斤蟲螢光素（Xenogen公司， Alameda，CA)，以腹膜腔内方式注射，接著以異弗烷（isoflurane) 麻醉。光子發射係使用電荷偶合裝置照像機，在IVIS成像 系統（Xenogen公司）中度量。簡言之，捕獲老鼠之灰度影像， 接著為生物發光圖之覆蓋，該圖表示在表現蟲螢光素酶之 癌細胞中自分裂蟲螢光素檢出之光子空間分佈。信號強度 〇 係使用稱為活影像2.50.2版（Xenogen)之IGOR Pro 4.09A版軟體 (WaveMetrics公司，Lake Oswego, OR)之定製版本定量。測得所 有得自右+左腿之經檢出光子計數之總和。在動物中之癌 細胞之生物發光係於指定日藉由成像度量，直到第一隻老 鼠由於疾病負擔而發展出後肢癱瘓為止，關於何時人道地 使老鼠安樂死之主要終點。記錄每隻老鼠之安樂死日，並 將存活老鼠之其餘百分比隨著時間作圖（Kaplan-Meier存活分 析）。P值係使用對數·分級試驗（GraphPad Prism 4.0軟體）計 136297 -88 - 200930704 算，以評估治療與對照組間之差異（p<0.05係被認為是顯 著）。體重係每週度量兩次，且臨床觀察係每日記錄。體重 係藉由 StudyDirector 軟體（StudyLog，South San Francisco, CA)捕獲 與儲存。數據分析係如上述。 結果，皮下KMS-11-luc腫瘤異種移植模式：在皮下腫瘤模 式中之功效研究，係評估於q4d X 3時間表下所投予化合物 Ila之劑量範圍之活性，使用1毫克/毫克之高劑量，其係為 SCID-Bg老鼠中其最高容許劑量之大約一半。將化合物Ila活 Ο 性與在其7.5毫克/公斤之最高容許劑量一半下之SB-715992 (意斯平席伯（ispinesib)，由細胞動力學公司發展之KSP抑制 劑，其係在臨床試驗中），及在其30毫克/公斤q4d X 3之最 高容許劑量下之培克里他索（paclitaxel)比較。其結果係示於 表11中。在服藥間隔期間，於所有治療組中發現腫瘤退化 達不同程度；但是，腫瘤生長會在服藥完成後恢復。腫瘤 再生長係於較早期開始，且會在以較低劑量化合物Ila治療 之老鼠中更迅速地進行。到治療結束後8天之時，腫瘤再生 長係在以培克里他索（paclitaxel)與0.25毫克/公斤化合物Ila治 療之組群中被發現。到治療後13天之時，腫瘤再生長係在 以0.5毫克/公斤化合物Ila治療之組群中被發現。1毫克/公 斤化合物Ila舆7.5毫克/公斤SB-715992之劑量會個別造成 KMS-11-luc腫瘤之最大退化達56%與49% (p<0.05)，且腫瘤再 生長係直到治療結束後大約4週才發生。試劑之劑量一般係 良好地被容許，具有<10%最高平均體重減輕，惟1毫克/公 斤劑量之化合物Ila除外，其會於服藥起始後10天造成12% 136297 -89- 200930704 平均體重損失。在此組群中之-隻老鼠係失去20%體重， 並自研究被移除。於最後劑量之後，在該組群中之所有其 他老鼠均恢復任何損失體重。 表11 在皮下KMS-11-1UC腫瘤異種移植模式中，於q4dx3劑 化合物 媒劑 (20% 卡普提索 (Captisol)) ---^ 劑量， 途徑， 時間表 — T/C, 第31天 (%) 一 瘤回應 宿主回應 最大％ 退化 (天） △腫瘤體積， 第31天 (立方毫米） 最大△ 艘重 (天)(克） 最大△ 饉重 (天)（％) 存活 (活著/ 全部） Q4d X 3, 靜脈内 100 — 21501191 0.31+0.33 (第10天） 1.74+1.37 (第10天） 9/9 化合物Ila 0.25 毫克/公斤， Q4d X 3， 靜脈内 25 24 (第7天） 527+152 -1.411.2 10天） -6.68±1·67 (第10天） 9/9 化合物Ila 0.5 毫克/公斤， Q4d X 3， 靜脈内 10 42 (第10天) 221±71 ~0.94±0.3 (第 10天） -4.58±1.67 (第10天） 9/9 化合物Ha 1毫克/公 斤，Q4dx 3,靜脈内 0.1* 56 (第17天) 1.5±26 -2.7610.65 (第10天） -12.69±5.〇 (第10天） 8/9 SB-715992 7.5 毫克/公斤， Q4d X 3, 靜脈内 ---__ 49 (第14天) -46±19 -0.9610.31 (第10天） -4·8±1.93 (第 10天） 9/9 培克里他索 (Paclitaxel) 30 毫克/公斤， Q4d X 3， 腹膜腔内 30 5 (第3天） 640+190 -0.63i0.22 (第3天） -2·95±1·〇(第 10天） 9/9 散佈性KMS-ll-luc腫瘤模式之結果：藥物治療係於細胞植 入後10天起始。生物發光成像在媒劑處理組中係顯示隨著 時間之增加信號，這指出在骨骼外區域中之定位，包括肺 臟、肝臟及脾臟。但是，主要生物發光信號在大部份老鼠 合物Ha之功效 Γ —----------- 136297 -90- 200930704 中係顯現為骨骼，具有信號之多種來源，包括長骨頭、頭 顧、牙齒根部/顎、骨盆及脊椎。收集自使用此模式之以前 研究之股骨組織學分析已確認骨髓細胞瘤細胞浸潤至骨髓 中（Xin 等人 2006 d Omcer to. 8 月 15 日；12(16) : 4908-15)。 疾病進展主要會導致後肢癱瘓，伴隨著由於腫瘤負荷所致 之偶爾顯著體重損失，此時老鼠係被人道地安樂死。此係 被稱為”有條件之存活"。 其結果係示於表12中。q4d X 3所投予之0.5與1毫克/公斤 ^ 劑量之化合物IIa係顯著地降低生物發光信號，整個疾病負 擔之種度量方式，但是，0.25毫克/公斤治療組於統計學 上並未與媒劑處理組不同。以1毫克/公斤劑量治療之老 鼠，其在第13天之信號之47%百分比退化係伴隨著>2〇%體 重損失到第13天時，於此组群之一隻老鼠中。在該組群中 之所有其他動物均容許此劑量。於較低劑量下，化合物恥 係良好地被容許。 Q *藉由生物發光度量時，此疾病負擔之劑量依賴性抑制 會在後肢癱瘓中造成類似延遲，且因此增強老鼠之有條件 存活，與所有組群中之媒劑處理團隊比較。在媒劑處理缸 中之平均存活期為19天，然而0.25、0.5及！毫克/公斤化合 物IIa-治療組之平均存活期個別為29、％及52天。 136297 -91- 200930704 表12 -在KMS-11-luc散佈性疾病模式中，於q4d χ 3劑量時間 表下所投予化合物Ila之功效 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途徑， 時間表 T/C, 第13天 (%) 退化， 第13天 (%) △腫瘤 生物發光， 第13天 (光子/秒） 平均 存活天數 最大△ 體重 (天）（克） 最大△ 體重 (天）（％) 媒劑 (20% 卡普提索 (Captisol)) q4d χ 3， 靜脈内 100 — 1.5xl08士 Ι.δχΙΟ7 19*氺 1.3±0.19 (第14天） 5.9+1.04 (第14天） 化合物Ila 0.25 毫克/公斤， q4d χ 3， 靜脈内 15 — 2.2χ107土 l.lxlO6 29** 2.1±1.23 (第14天） 5.0+2.0 (第14天） 化合物Ila 0.5 毫克/公斤， q4d χ 3, 靜脈内 0.7* — l.lxlO6土 5·8χ105 35** 2.5±0.23 (第14天） 6.7±1.1 (第14天) 化合物Ila 1 毫克/公斤， q4d χ 3, 靜脈内 47 -4·3χ105土 1·7χ105 52** -0.74±0.75 (第13天） -3.3+4.0 (第13天） 實例12:式II化合物係有效抵抗具抗藥性之腫瘤 臨床前活體内實驗已証實式II化合物係令人意外地優於 在醯基部份基團中未具有羥基或羥基前體藥物基團之結構 上類似化合物。表現射流泵（漿膜P-糖蛋白（P-gp))之腫瘤模 式係經測試關於對式II化合物及其他藥物之敏感性，包括 缺乏存在於式II化合物中之羥基（或醯氧基）之結構上類似 化合物。P-gp係為腫瘤抗藥性之一種機制，且可能為射流 抗藥性機制之最被明瞭且最古典實例。在老鼠中之KB8.5人 類子宮頸癌皮下異種移植模式係經選擇，供此等化合物之 藥理學篩檢與後續選擇及評估；其係相應於KB3.1細胞系， 136297 -92- 200930704 且僅不同於具有射流泵。將式II化合物與其他KSP抑制劑以 及已知會受P-gp所影響之培克里他索（paclitaxel)比較。本文中 所述之研究係証實式II化合物（例如化合物Ila與lie)在活體 内係有效抵抗會表現P-gp且對其他藥物具抗藥性之腫瘤， 然而缺乏羥基之類似式I化合物不具抵抗此腫瘤之活性。 物料 __動物特徵_ 物種_品系 賣主·_性別艎重年齡 老鼠(Mus musculus) nu/nu 查理士河(Charles River), Hollister, CA 雌性 25克 6-8週 實驗係使用大約6-8週大之遠系繁殖無胸腺nu/nu老鼠（查 理士河（Charles River)實驗室）進行。於抵達時，動物係接受 皮下微晶片植入物（AVID，Folsom, LA)，在肩胛下區域中，供 個體之識別。於任何實驗程序開始之前，使動物適應環境1 週。 維持條件 將老鼠每籠4-5隻動物收容在透明聚碳酸酯微隔離器籠 子中，使用12-小時亮、12-小時暗循環，在70-80華氏度數間 之溫度及30-70%相對濕度下。食物（Purina齧齒動物食物丸 粒）與水係無限制地提供。 實驗條件 使KB8.5細胞在經補充10%牛胎兒血清（JRH Biosciences，目 錄#12003-1000M)之具有2 mM L-麩醯胺（Mediatech公司，目錄 #10-013-CV)之DMEM中生長。一旦KB8.5細胞展現良好生長 速率，即添加10毫微克/毫升秋水仙素，以維持P-gp表現程 度。 136297 -93- 200930704 使此等細胞以黏連培養物生長，保持在37°C下，於含有 5%二氧化石炭之潮濕氣層中。在使用之前，將細胞培養少於 10個繼代。細胞係在95%匯合下採集，並於4°C下，在~800 X 克下離心5分鐘，然後在KB8.5細胞系之2500萬個細胞/毫升 之濃度下，再懸浮於1:1比例之HBSS (Mediatech公司，目錄 #21-021-CV)加上MatrigelTM之中，供皮下植入用（注射體積為 0.2毫升）。 化合物與配方 Ο 化合物Ila、化合物lie、化合物la (示於下文）及SB-715992 係經調配在Captisol®為基礎之配方中。劑量係以靜脈内方式 (i.v.)投藥，且對每隻動物之體重作調整。配方係在研究開 始時製作一次，並儲存於室溫下。購得臨床級培克里他索 (paclitaxel)，在克雷莫弗（cremophor)為基礎之媒劑（Mayne Pharma, 現在為 Hospira, Lake Forest, IL，目錄 #NDC-6170334209)中預混 合，並於無菌鹽水中稀釋，以提供16毫升/公斤之劑量體積， 供以腹膜腔内方式（i.p.)投予之30毫克/公斤劑量用。
la 化合物la於結構上係類似式II化合物，但具有甲氧基而非 羥基或醯氧基，且其抵抗KSP之活體外活性係極類似化合 136297 -94- 200930704 物Ila與lie之活性。例如，於CellTiter-Glo®檢測中，在HCT-15 細胞上對於化合物la所度量之GI50值為〇3nM，其係相當於 化合物Ila (參閱實例2)。同樣地，關於kb31與仙8 5細胞系 之數值0·4 ηΜ係針對化合物ia度量，然而0.6 ηΜ與〇 5 ηΜ之 數值係在此等相同細胞系上針對化合物IIa度量（參閱實例 2)。但疋，式π化合物在醯基（或醯氧基，其係為自由態經 基之命體藥物）上具有自由態羥基’然而Ia替代地具有曱基 醚。甲基醚係良好地被活性位置所容許，如藉由其活體外 ❹ 活性所証實，且特別是於活體外對P-GP抗藥性細胞系亦極 有效。此外，可預期其在活體内係比式π化合物較不容易 接嗳代謝失活。事實上，如下表中之數據所說明，藥物動 力學參數之比較係顯示化合物la展現如式IIa與IIc化合物之 活體内較高曝露與增加之代謝安定性。令人驚訝的是，雖 然如此，但式II化合物在活體内為有利抵抗表現p_gp之癌 症’相對於先前技藝中已知之化合物，因為p_gp抗藥性異 Ο 種移植物癌症係對式II化合物而非對化合物Ia敏感。 令人感興趣的是，亦已發現式π化合物係顯著地比完全
136297 -95- 200930704 化合物lb在活體外係比式II化合物遠較不具活性，具有 IC-50為22 nm，與化合物Ila及lie比較，其各具有IC-50低於1 nm。化合物lb並未在異種移植模式中測試，因其藥物動力 學及其活體外活性太不利以致不能預期活體内功效。其已 被証實具有遠為較低之活體内有效性，以顯示其展現較高 清除速率與較低AUC ("曲線下方面積”，度量試驗對象對化 合物之活體内曝露之標準方法）之數據為基礎，且其在標的 位置上亦遠較不具活性，如藉由其較高IC-50所証實者。藉 © 由比較，化合物la、Ila及lie各顯示較佳活體内藥物動力學 作用，以及優越活體外活性，且在異種移植物癌症中經測 試。 化合物 活體外活性 (IC-50- nm) 活體内清除速率 (毫升/分鐘/公斤） 活體内半生期 (分鐘） AUC (毫微克分鐘/毫升） la 0.6 29 117 160,000 lb 22 94 90 52,000 Ha 0.8 41 110 116,000 lie 0.9 47 110 102,000 Q 因此，式II化合物係比化合物lb在活體外更有效，及在 活體内更持久，且令人意外地顯示對於表現多重抗藥性 (MDR)射流泵之抗藥性癌症為有效，然而化合物la係無法有 效抵抗相同MDR癌症，儘管其在活體外對於p-GP細胞系之 相等功效及在試驗動物中之較高有效性（較低清除速率與 較高AUC)。 研究方法 關於功效研究，老鼠係經記載具有平均腫瘤體積為大約 136297 -96- 200930704 300立方毫米。於第0天自服藥開始起，腫瘤異種移植物係 以二次元（L與W)，使用數字測徑器每週度量兩次。腫瘤體 積係以（L X W2)/2計算。體重係每週度量兩次，且臨床觀察 係每日記錄。腫瘤體積與體重係藉由StudyDirector軟體 (StudyLog, South San Francisco, CA)捕獲與儲存。 數據分析 關於腫瘤體積之百分比治療/控制（△Τ/ΔΟ值係使用下式 計算：
Ο %AT/Z\c = 100 X △T/AC 其中： T =在研究之最後一天，藥物-治療組之平均腫瘤體積； △T =在研究之最後一天藥物-治療組之平均腫瘤體積-在 服藥之最初一天藥物-治療組之平均腫瘤體積； C =在研究之最後一天，對照組之平均腫瘤體積；及 △C =在研究之最後一天對照組之平均腫瘤體積-在服藥 之最初一天對照組之平均腫瘤體積。 ^ 所有數據均以平均與SEM表示。關於最後腫瘤度量之組 群間比較係使用單向AN0VA成對方式分析進行。重要性係 使用Kruskal-Wallis單向ANOVA，在Ranks上測定，接著為適當 後-hoc試驗(Dunn氏方法或Tukey氏試驗），供多重成對方式比 較。統計分析係使用SigmaStat (Systat軟體公司，San Jose, CA) 進行。 在表現P-gp之異種移植模式中之功效評估 在相同5毫克/公斤劑量下，於q4d X 3時間表下之多劑量 136297 -97- 200930704 功效研究係於此等楔式中進行，比較化合物IIa與化合物Ia 之活性。對於化合物IIc，2 5毫克/公斤並未良好地被容許， 且因此功效比較係達i 25毫克/公斤之劑量程度。在圖3與 表13中之結果顯不化合物瓜於此模式中係展現顯著抗腫瘤 功效’在第11天’於KB8.5異種移植模式中具有百分比ΔΤ/ △C 為 19% (ρ<0.05)。 表13.在ΚΒ8.5趙瘤異種移植模式中，於q4d χ 3劑量時間表下 所投予化合物Ila之功效 腫瘤回應 宿主回應 化合物 劑量， 途摱， 時間表 ----— AT/AC, 第11天(％) %最大 △體重 (天） 存活 (活著/ 全部） 媒劑 靜脈内， q4d X 3 100 6 (第7天） 9/9 化合物Ha 5毫克/公斤， 靜脈内，q4dx 3 19* -2 (第11天） 9/9 SB-715992 15毫克/公斤， 靜脈内，q4d X 3 56 4 (第7天） 9/9 培克里他索 (Paclitaxel) 30毫克/公斤， 腹膜腔内，q4dx 3 78 5 (第11天） 9/9 〇 KB8.5細胞係藉由以0.2毫升1:1比例之HBSS加上Matrigel™，皮下注射5xl06個 細胞至老鼠之右腰窩中，而建立於雌性nu/nu老鼠（查理士河(Charles River)) 中。當腫瘤達到大約300立方毫米時，將老鼠以腫瘤體積為基礎隨機分配 至治療組(n=9)中。化合物係在所指示之劑量程度與時間表下被投予。治療 對於腫瘤體積與體重之作用係以平均±3丑1^1提出。實驗係於治療第11天進 行評估。* p<0.05對媒劑與 SB-715992 (Kruskal-Wallis單向 ANOVA，在 Ranks/Dunn 氏方法上）。 同樣地，在圖4與表14中之結果顯示化合物lie係於此模 式中展現顯著抗腫瘤功效，在第11天具有百分比△T/AC為 39% φ<〇.〇5)。 136297 -98- 200930704 表14-在KB8.5腫瘤異種移植模式中，於q4d χ 3劑量時間表下 所投予化合物lie之功效_ 劑量， 途徑， 時間表 腫瘤回應 宿主回應 ~ 化合物 ΔΤ/AC, 第11天(％) %最大 △體重 (天） 存活 (活著/ 全部） 媒劑 靜脈内，q4dx 3 100 +8 (第11天） 9/9 化合物lie 1.25毫克/公斤， 靜脈内，q4dx 3 39* -5 (第11天） 9/9 化合物He 2.5毫克/公斤， 靜脈内，q4dx^3 不適用 -10(第8天） 於第8天全部均 倒下，此係由於 4/9隻老鼠具有 15%體重減輕或 更多所致 SB-715992 15毫克/公斤， 靜脈内，q4dx3 77 -1(第4天） 9/9 培克里他索 30毫克/公斤， 87 +3 (第11天） 9/9 (Paclitaxel) 腹膜腔内，q4dx3 KB8.5細胞係藉由以0.2毫升ι:1比例之HBSS加上MatrigdTM，皮下注射5χ1〇6個 細胞至老鼠之右腰窩中’而建立於雌性nu/nu老鼠（查理士河(Charles River)) 中。當腫瘤達到平均為339立方毫米時，將老鼠以腫瘤體積為基礎隨機分 配至治療組(n=9)中。化合物係在所指示之劑量程度與時間表下被投予。治 療對於腫瘤體積與體重之作用係以平均土SEM提出。實驗係於治療第11天 進行評估。* ρ<〇·〇5對媒劑（Kruskal-Wallis 單向 ANOVA，在 Ranks/Tukey 氏試驗 上）。 對照上而言，在醯基部份基團上缺乏羥基而替代地具有 曱氧基之類似化合物，化合物la，在KB8.5腫瘤異種移植模 式中不為有效’如圖5與表15中所示。 136297 -99- 200930704 表15.在KB8.5腫瘤異種移植模式中，於q4d χ 3劑量時間表下 所投予化合物la之功效 腫瘤回應 宿主回應 劑量， ΔΤ/AC, %最大 存活 化合物 途徑， 第11天(％) △體重 (活著/ 時間表 (天） 全部） 媒劑 靜脈内，q4d X 3 100 4(第11天） 10/10 化合物la 1.25毫克/公斤， 靜脈内，q4dx3 84 1 (第11天） 10/10 化合物la 2.5毫克/公斤， 61 -0.4 (第 4天） 10/10 靜脈内，q4dx3 化合物la 5毫克/公斤， 靜脈内，q4d X 3 66 -2 (第4天） 10/10 SB-715992 15毫克/公斤， 靜脈内，q4dx 3 60 -3 (第11天） 10/10 培克里他索 30毫克/公斤， 60 -2 (第4天） 10/10 (Paclitaxel) 腹膜腔内,q4dx3
KB8.5細胞係藉由以0.2毫升1:1比例之HBSS加上Matrigel™，皮下注射5xl06個 細胞至老鼠之右腰窩中，而建立於雌性nu/nu老鼠（查理士河（Charles River)) 中。當腫瘤達到平均為285立方毫米時，將老鼠以腫瘤體積為基礎隨機分 配至治療組(n=10)中。化合物係在所指示之劑量程度與時間表下被投予。 治療對於腫瘤體積與體重之作用係以平均±SEM提出。實驗係於治療第11 Q 天進行評估。沒有組群於統計學上與媒劑組不同（Kruskal-Wallis單向 ANOVA，在 Ranks上）。 在任何經治療之老鼠中，未發現顯著體重損失或毒性之 向外跡象，惟在2.5毫克/公斤化合物lie治療組中之顯著體 重減輕除外。在P-gp正KB8.5模式中所見及之增加抗腫瘤活 性係証實式II化合物之令人意外優點，勝過表現出式II化合 物特徵之缺乏經基官能基之類似式I化合物。 實例13 :式II化合物係有效抵抗許多踵瘤移出物 化合物Ila係在軟性瓊脂檢測中，針對細胞系與腫瘤移出 136297 -100- 200930704 物試驗組進行測試，如在Fiebig，H.H., Maier，A.及Burger, A.M. {使用經建立之人類腫瘤異種移植物之無性繁殖源檢測：活 體外對活體内活性之關聯性，作為抗癌藥物發現之基礎，
Eur. J. Cancer初，802-820 (2004))中所述者。表16係列出癌症之 類型、試樣之名稱、其在檢測中之GI5〇(為達成50%生長抑 制所需要之濃度）值、GI5〇之對數（log(GI5())及各試樣之相對 敏感性（差別）。差別係經由將各細胞系之log(GI50)自橫越全 部試驗組之平均log(GI50)(於此情況中為0.236)扣除計算而 〇 得；正值表示比平均較敏感之試樣，然而負值表示比平均 較不敏感之試樣。 大部份指標具有為敏感之試樣。以此項檢測為基礎之最 敏感性癌症為：血液學癌症（白血病與淋巴瘤，5/5)、小細 胞肺癌（SCLC ; 5/5)、乳房（7/10)、膀胱(4/6)及肉瘤（4/7)。 表16.在各種癌細胞系中之化合物Ila之活性
癌症類型 腫瘤試樣 GI50(nM) Iog(Gl5〇) 差別 白血病(ALL) CCRFCEM 0.287 -0.542 0.779 白血病(ALL) JURKAT 0.106 -0.975 1.211 白血病(CML) K562 0.27 -0.569 0.805 白血病(ALL) MOLT4 0.877 -0.057 0.293 淋巴瘤(NHL) U937 0.086 -1.066 1.302 NSCLC 1012 0.926 -0.033 0.270 NSCLC 289 4.899 0.690 -0.454 NSCLC 526 1.265 0.102 0.134 NSCLC 629 10 1.000 -0.764 NSCLC 677 1.162 0.065 0.171 NSCLC 737 3.068 0.487 -0.250 NSCLC 1422 0.728 -0.138 0.374 NSCLC 211 0.216 -0.666 0.902 136297 -101 - 200930704
癌症類型 腫瘤試樣 GIso(nM) l〇g(GIs〇) 差別 NSCLC 1176 3 0.477 -0.241 NSCLC 1647 16.752 1.224 -0.988 SCLC 538 0.339 -0.470 0.706 SCLC 573 0.587 -0.231 0.468 SCLC 615 0.082 -1.086 1.323 SCLC 650 0.376 -0.425 0.661 SCLC H69 0.269 -0.570 0.807 結腸直腸 1034 0.214 -0.670 0.906 結腸直腸 1044 0.612 -0.213 0.450 結腸直腸 1103 1 0.000 0.236 結腸直腸 1299 10 1.000 -0.764 結腸直腸 1297 10 1.000 -0.764 結腸直腸 158 10 1.000 -0.764 結腸直腸 1729 10 1.000 -0.764 結腸直腸 1753 11.279 1.052 -0.816 結腸直腸 1788 2.246 0.351 -0.115 結腸直腸 1783 0.721 -0.142 0.378 結腸直腸 1784 5.969 0.776 -0.539 結腸直腸 233 0.238 -0.623 0.860 結腸直腸 243 10 1.000 -0.764 結腸直腸 260 10 1.000 -0.764 結腸直腸 268 6.24 0.795 -0.559 結腸直腸 280 10 1.000 -0.764 結腸直腸 504 0.273 -0.564 0.800 結腸直腸 533 1.753 0.244 -0.007 結腸直腸 609 10 1.000 -0.764 結腸直腸 647 10 1.000 -0.764 結腸直腸 676 10 1.000 -0.764 結腸直腸 742 1.873 0.273 -0.036 結腸直腸 94LX 19.52 1.290 -1.054 結腸直腸 975 10 1.000 -0.764 136297 -102- 200930704
癌症類型 腫瘤試樣 GI5〇(nM) log(Gl5〇) 差別 黑色素瘤 1341 10 1.000 -0.764 黑色素瘤 462 10 1.000 -0.764 黑色素瘤 989 12.722 1.105 -0.868 卵巢 1353 10 1.000 -0.764 卵巢 899 10.000 1.000 -0.764 前列腺 22RV1 0.537 -0.270 0.506 前列腺 DU145 1 0.000 0.236 前列腺 MRIH1579 10 1.000 -0.764 前列腺 PC3M 0.424 -0.373 0.609 乳房 1162 0.286 -0.544 0.780 乳房 1322 1.402 0.147 0.090 乳房 1384 2.666 0.426 -0.189 乳房 1398 0.239 -0.622 0.858 乳房 401 0.563 -0.249 0.486 乳房 449 0.534 -0.272 0.509 乳房 574 10 1.000 -0.764 乳房 583 0.239 -0.622 0.858 乳房 713 0.244 -0.613 0.849 乳房 857 2.456 0.390 -0.154 膀胱 1036 0.115 -0.939 1.176 膀胱 1218 0.509 -0.293 0.530 膀胱 1228 0.315 -0.502 0.738 膀胱 1258 17.076 1.232 -0.996 膀胱 1352 0.972 -0.012 0.249 膀胱 439 10 1.000 -0.764 胃 1172 10 1.000 -0.764 胃 209 10 1.000 -0.764 胃 214 9 0.954 -0.718 肉瘤 117 0.249 -0.604 0.840 肉瘤 1186 0.327 -0.485 0.722 肉瘤 1301 0.235 -0.629 0.865 136297 -103- 200930704 〇 癌症類型 腫瘤試樣 GIS0(_ Iog(GI5〇) 差別 肉瘤 1410 2.246 0.351 -0.115 肉瘤 417 0.16 -0.796 1.032 肉瘤 463 19.122 1.282 -1.045 肉瘤 627 10 1.000 -0.764 胰臟 1657 26.952 1.431 -1.194 胰臟 1861 0.623 -0.206 0.442 胰臟 1869 10.865 1.036 -0.800 胰臟 1876 0.337 -0.472 0.709 胰臟 1872 0.282 -0.550 0.786 胰臟 1881 2.316 0.365 -0.128 胰臟 1887 10 1.000 -0.764 胰臟 1900 16.933 1.229 -0.992 胰臟 1912 0.112 -0.951 1.187 胰臟 1937 0.185 -0.733 0.969 胰臟 546 2.591 0.413 -0.177 胰臟 736 1.265 0.102 0.134 平均 1.724 0.236 實例14 :式II化合物係有效抵抗許多固態腫瘤細胞系 化合物Ila係針對衍生自固態腫瘤之細胞系試驗組進行 ❹ 測試，如文中所述者，亦參閱McDermott, U., Sharma，S.V.，Dowell, L., Greninger, P., Montagut, C., Lamb, J., Archibald, H., Raudales, R., Tam, A., Lee, D., Rothenberg, S.M., Supko, J.G., Sordella, R., Ulkus, L.E., Iafrate, A.J., Maheswaran, S., Njauw, C.N., Tsao, H., Drew, L., Hanke, J.H., Ma, X.J” Erlander, M.G., Gray, N.S.，Haber, D.A.及 Settleman, J. (2007)， 利用高通過量腫瘤細胞系剖析之對選擇性激酶抑制劑之基 IS ^ Μ 0 ϋ ^ ^ M. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 104, 19936-19941 (2007))。將細胞以化合物處理72小時，且當與未 136297 -104- 200930704 經處理對照物比較時之存活細胞分率係經報告。表17係列 出細胞系之名稱、來源器官、在所測試三種濃度（0.2 nM、 2.0 nM及20 nM)下之存活細胞分率及敏感性評分。敏感性評 分為從5 (最敏感）至1 (最不敏感），且記分如下：5 =存活 分率S 0.2，在0.2 nM下；4 = 0.2〈存活分率$ 0.5，在0.2 nM 下；3 =存活分率> 0.5，在0.2 nM下，與$ 0.5，在2.0 nM下； 2 =存活分率> 0.5，在2.0 nM下，與$ 0.5，在20 nM下；1 = 存活分率>0.5，在20 nM下。 〇 所有指標均具有為敏感之試樣。排列此等癌症對敏感性 之順序之許多可能方法之一，係為計算關於各指標之平均 敏感性評分（敏感性評分之總和/試樣數）。若吾人採取使用 3或較大之平均評分之極嚴厲標準，則以此項檢測為基礎之 最敏感性癌症為：卵巢（3.38)、胃（3.32)、腦部（3.21)、皮膚 (3.02)、子宮頸（3.00)及甲狀腺（3.00)。 表17·在各種固態腫瘤細胞系中之化合物Ila之活性 細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 SCaBER 膀胱 0.6666 0.0383 0.0238 3 1A6 膀胱 0.9359 0.0473 0.0309 3 RT112/84 膀胱 1.0884 0.0457 0.0312 3 5637 膀胱 1.1044 0.0595 0.0423 3 EJ138 膀胱 1.1072 0.0888 0.0712 3 RT-112 膀胱 0.925 0.099 0.0915 3 SW 780 膀胱 0.7289 0.091 0.0981 3 RT4 膀胱 0.5091 0.1175 0.1008 3 T24 膀胱 0.723 0.131 0.102 3 647-V 膀胱 0.721 0.185 0.141 3 VM-CUB1 膀胱 0.8161 0.1594 0.1497 3 136297 -105- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 SW-1710 膀胱 0.7185 0.1353 0.1546 3 KU-19-19 膀胱 0.9247 0.1929 0.1985 3 UM-UC-3 膀胱 0.9804 0.2219 0.2074 3 BFTC-905 膀胱 1.089 0.264 0.223 3 HT 1376 膀胱 1.1586 0.2837 0.233 3 CAL-29 膀胱 0.967 0.282 0.256 3 J82 膀胱 0.7211 0.3475 0.2914 3 639-V 膀胱 0.961 0.37 0.31 3 TCCSUP 膀胱 1.0148 0.5876 0.4752 2 HT-1197 膀胱 1.0133 0.9855 0.8308 1 CSR1 骨頭 0.2156 0.0818 0.0769 4 CS1 骨頭 0.4253 0.1844 0.1903 4 Hs 888.T 骨頭 0.4945 0.4138 0.3803 4 MHH-ES-1 骨頭 0.687 0.032 0.017 3 SK-ES-1 骨頭 0.9862 0.0606 0.0516 3 KHOS-240S 骨頭 0.925 0.071 0.065 3 Saos-2 骨頭 0.6146 0.118 0.1008 3 HOS 骨頭 1.033 0.078 0.118 3 RD-ES 骨頭 0.6036 0.2671 0.1397 3 KHOS-312H 骨頭 1.103 0.284 0.231 3 U-2 0S 骨頭 1.0283 0.241 0.2322 3 NY 骨頭 1.293 0.341 0.3 3 CAL-72 骨頭 0.9276 0.3256 0.3065 3 HuO-3Nl 骨頭 0.9177 0.3533 0.3165 3 MG-63 骨頭 0.815 0.57 0.502 1 H-EMC-SS 骨頭 0.8996 0.604 0.5042 1 MC-IXC 腦部 0.079 0.047 0.033 5 SK-N-SH 腦部 0.1798 0.0495 0.0574 5 NB69 腦部 0.0922 0.0639 0.0662 5 Hs 683 腦部 0.4152 0.0858 0.0278 4 SK-N-AS 腦部 0.357 0.0895 0.0819 4 136297 •106- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 M059J 腦部 0.4307 0.1343 0.0874 4 SH-SY5Y 腦部 0.4428 0.1183 0.0946 4 Daoy 腦部 0.4727 0.0556 0.1088 4 MOG-G-CCM 腦部 0.2092 0.1363 0.1564 4 YKG-1 腦部 0.3102 0.1764 0.1624 4 CCF-STTG1 腦部 0.3804 0.3579 0.2861 4 GOS-3 腦部 0.4488 0.3264 0.2977 4 SK-N-MC 腦部 0.5584 -0.0017 -0.0048 3 U-251 MG 腦部 0.8575 0.0313 0.0321 3 BE(2)-C 腦部 0.757 0.0224 0.033 3 LNZTA3WT4 腦部 0.5274 0.0814 0.052 3 LNZTA3WT11 腦部 0.6268 0.0841 0.0567 3 T98G 腦部 0.6311 0.0972 0.0718 3 LN-229 腦部 0.7177 0.1241 0.0965 3 MOG-G-UVW 腦部 0.7682 0.1238 0.1114 3 H4 腦部 0.5851 0.1689 0.12 3 PFSK-1 腦部 0.5585 0.1428 0.1766 3 SW 1783 腦部 0.7547 0.2518 0.1872 3 SF-295 腦部 ’ 0.5622 0.2393 0.191 3 DK-MG 腦部 0.5941 0.228 0.1916 3 A172 腦部 0.6374 0.22 0.1923 3 GAMG 腦部 1.2891 0.2385 0.1923 3 1321N1 腦部 0.7485 0.2015 0.1977 3 CHP-212 腦部 0.946 0.267 0.216 3 LN-18 腦部 0.9918 0.238 0.2181 3 U-118MG 腦部 0.9433 0.2612 0.2391 3 U373 MG 腦部 0.5474 0.307 0.2442 3 SW 1088 腦部 0.7941 0.242 0.2644 3 DBTRG-05MG 腦部 0.8442 0.387 0.2789 3 KG-l-C 腦部 0.9548 0.3391 0.3367 3 SCCH-26 腦部 0.8806 0.351 0.3398 3 136297 •107- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 42-MG-BA 腦部 0.9486 0.4389 0.3783 3 SNB-19 腦部 1.0241 0.4679 0.4543 3 IPTP/98 腦部 0.8158 0.3799 0.4603 3 GMS-10 腦部 0.9262 0.6735 0.5424 1 U-138 MG 腦部 0.8028 0.4448 0.5689 1 LN-405 腦部 1.046 0.6715 0.7525 1 AU565 乳房 0.1024 0.0539 0.0297 5 HCC1954 乳房 0.2453 0.0742 0.0831 4 Hs 578T 乳房 0.287 0.075 0.085 4 CAL-85-1 乳房 0.2062 0.1707 0.1396 4 EFM-192B 乳房 0.3565 0.2746 0.1884 4 EFM-19 乳房 0.4888 0.2428 0.2227 4 HCC1143 乳房 0.3856 0.2969 0.2799 4 MDA-MB-415 乳房 0.4378 0.2779 0.2826 4 MB 157 乳房 0.919 0.03 0.013 3 MDA-MB-468 乳房 0.826 0.131 0.104 3 MCF7 乳房 0.7312 0.1175 0.106 3 MDA-MB-453 乳房 0.9677 0.1497 0.128 3 HCC1806 乳房 0.63 0.157 0.135 3 HCC38 乳房 0.799 0.198 0.135 3 CAL-148 乳房 0.8879 0.1778 0.1446 3 MDA-MB-436 乳房 0.9257 0.235 0.1588 3 EVSA-T 乳房 0.8101 0.1921 0.1617 3 JIMT-1 乳房 1.0342 0.2107 0.2045 3 CAL-120 乳房 0.7606 0.3094 0.2346 3 CAL-51 乳房 1.0399 0.252 0.2391 3 HCC1569 乳房 0.8118 0.3757 0.2706 3 MDA-MB-435S 乳房 0.736 0.4 0.369 3 KPL-1 乳房 0.8294 0.4721 0.3691 3 HCC70 乳房 1.029 0.4525 0.3868 3 MDA-MB-361 乳房 0.51 0.4185 0.4945 3 136297 •108- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 EFM-192C 乳房 1.1771 0.5303 0.2644 2 MDA-MB-175-νΠ 乳房 0.9252 0.6705 0.4413 2 UACC-893 乳房 0.578 0.635 0.474 2 BT-474 乳房 1.7649 0.4043 0.4842 2 BT-549 乳房 0.7005 0.6093 0.5628 1 T47D 乳房 1.1392 0.657 0.6325 1 ZR-75-30 乳房 0.979 0.7094 0.6879 1 MT-3 乳房 0.8962 0.6827 0.704 1 BT-483 乳房 0.8449 1.114 0.8657 1 C-4I 子宮頸 0.3791 0.0476 0.0328 4 CAL-39 子宮頸 0.3382 0.1481 0.1479 4 C-33A 子宮頸 0.916 0.0127 -0.006 3 SISO 子宮頸 0.7157 0.0163 -0.002 3 HeLa 子宮頸 0.7398 0.048 0.0072 3 MS751 子宮頸 0.6941 0.0256 0.0552 3 BT-B 子宮頸 0.788 0.0821 0.0657 3 ME-180 子宮頸 0.9997 0.1521 0.1564 3 Ca Ski 子宮頸 0.7077 0.2047 0.1791 3 SKG-IIIb 子宮頸 0.718 0.2701 0.2185 3 DoTc2 4510 子宮頸 0.9503 0.2981 0.2597 3 SW756 子宮頸 0.9509 0.371 0.3384 3 SiHa 子宮頸 0.5524 0.3919 0.3415 3 C-4U 子宮頸 0.8416 0.4293 0.4254 3 HT-3 子宮頸 0.8834 0.6888 0.6523 1 KYSE-50 食道 0.183 0.055 0.063 5 KYSE-410 食道 0.244 0.211 0.214 4 T.Tn 食道 0.4246 0.3322 0.2448 4 T.T 食道 0.8253 0.0649 0.0197 3 KYSE-180 食道 0.617 0.085 0.079 3 TE7 食道 0.718 0.113 0.113 3 KYSE-510 食道 0.671 0.223 0.129 3 136297 -109- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 KYSE-70 食道 0.824 0.201 0.158 3 KYSE-150 食道 1.166 0.213 0.163 3 OE21 食道 0.7539 0.2571 0.2117 3 KYSE-520 食道 1.111 0.386 0.356 3 KYSE-30 食道 0.7729 0.5353 0.4066 2 KYSE-270 食道 1.057 0.582 0.453 2 KYSE-140 食道 1.114 0.512 0.461 2 HCE7 食道 0.865 0.488 0.512 1 COLO-680N 食道 0.882 0.535 0.515 1 OE33 食道 1.006 0.5977 0.5259 1 KYSE-220 食道 0.833 0.626 0.661 1 OE19 食道 0.9684 0.8451 0.6916 1 JR 029 頭部與頸部 0.0671 0.0015 0.0021 5 PCI-38 頭部與頸部 0.2035 0.0781 0.0682 4 CAL 27 頭部與頸部 0.449 0.1068 0.069 4 CAL-33 頭部與頸部 0.5807 0.0516 0.0204 3 HSC-2 頭部與頸部 0.7659 0.0902 0.0707 3 PCI-15B 頭部與頸部 0.8113 0.0605 0.0753 3 HO-l-N-1 頭部與頸部 0.9323 0.095 0.096 3 PCI-6A 頭部與頸部 1.1429 0.1568 0.1195 3 H3118 頭部與頸部 0.8217 0.108 0.131 3 ACC2 頭部與頸部 1.1233 0.1636 0.1357 3 ACCS 頭部與頸部 0.7258 0.2017 0.1658 3 ACC3 頭部與頸部 0.887 0.186 0.168 3 BICR 78 頭部與頸部 1.0035 0.1602 0.1694 3 JR 028 頭部與頸部 1.0931 0.2299 0.2027 3 PCI-15 頭部與頸部 1.0668 0.1987 0.2061 3 SCC-9 頭部與頸部 0.5841 0.2727 0.272 3 SAT 頭部與頸部 0.854 0.302 0.307 3 SCC90 頭部與頸部 0.5915 0.3331 0.3358 3 HN 頭部與頸部 0.9124 0.3981 0.3481 3 136297 -110- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 PCI-15A 頭部與頸部 0.8516 0.3844 0.3675 3 JR 013 頭部與頸部 1.0158 0.3829 0.3766 3 PCI-4B 頭部與頸部 1.2078 0.4475 0.3808 3 PCI-30 頭部與頸部 0.8216 0.362 0.4064 3 UDSCC2 頭部與頸部 0.5716 0.4203 0.4394 3 JR 019 頭部與頸部 1.0805 0.4801 0.484 3 RPMI2650 頭部與頸部 1.1239 0.5619 0.4435 2 JR 028EP 頭部與頸部 0.995 0.5386 0.4657 2 BHY 頭部與頸部 1.0468 0.5311 0.4897 2 PCI-4A 頭部與頸部 1.0214 0.6602 0.4984 2 HSC-3 頭部與頸部 1.069 0.3074 0.5475 1 ACC 8-2 頭部與頸部 1.1417 0.7519 0.5967 1 JR 022 頭部與頸部 1.0441 0.7332 0.6409 1 PCI-6B 頭部與頸部 1.1076 0.7016 0.6703 1 ACC112 頭部與頸部 0.9498 0.7645 0.916 1 GP5d 腸 0.185 0.116 0.0711 5 SW 48 腸 0.471 0.028 0.053 4 T84 腸 0.462 0.068 0.058 4 LoVo 腸 0.2792 0.0659 0.0611 4 COLO 205 腸 0.8137 0.0578 0.0376 3 Hs 257.T 腸 0.8128 0.0699 0.0465 3 MDST8 腸 0.7601 0.094 0.0774 3 CL-11 腸 0.9903 0.1858 0.1559 3 SW-948 腸 1.0249 0.2096 0.1757 3 CoCM-1 腸 1.062 0.227 0.191 3 LS174T 腸 0.8916 0.2634 0.2176 3 COLO 201 腸 1.029 0.204 0.24 3 SW620 腸 0.7593 0.2603 0.288 3 WiDr 腸 0.8917 0.3977 0.3243 3 LSI 80 腸 0.9989 0.4556 0.3266 3 SW837 腸 1.0342 0.4365 0.3773 3 136297 -111- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 SK-CO-1 腸 0.93 0.464 0.405 3 CL-14 腸 0.8508 0.6531 0.4248 2 HRT-18 腸 0.744 0.523 0.425 2 Caco-2 腸 0.769 0.538 0.496 2 COLO-206F 腸 1.075 0.651 0.543 1 SW 1417 腸 1.016 0.769 0.607 1 CL-34 腸 1.1299 0.4878 0.6107 1 RCM-1 腸 1.0188 0.8159 0.6594 1 COLO-678 腸 1.06 0.802 0.661 1 OUMS-23 腸 0.7971 0.9316 0.7076 1 SW1116 腸 1.0852 1.0031 0.7353 1 SW 1463 腸 1.164 0.925 0.862 1 G-402 腎臟 0.4146 0.1885 0.1583 4 SW 156 腎臟 0.4381 0.3386 0.2802 4 CAL-54 腎臟 0.4808 0.3592 0.326 4 SW 13 腎臟 0.697 0.014 0.023 3 G-401 腎臟 0.857 0.081 0.073 3 NH-6 腎臟 0.9578 0.1525 0.1175 3 KMRM-M1 腎臟 1.072 0.139 0.126 3 SN-12C 腎臟 0.9117 0.1661 0.1382 3 Caki-1 腎臟 0.6522 0.1373 0.1431 3 786-0 腎臟 1.066 0.205 0.17 3 VMRC-RCW 腎臟 1.081 0.156 0.171 3 UO-31 腎臟 0.8695 0.3772 0.3758 3 769-P 腎臟 0.977 0.478 0.431 3 KMRC-20 腎臟 0.84 0.466 0.459 3 BFTC-909 腎臟 1.076 0.4325 0.4869 3 KMRC-1 腎臟 0.8824 0.6127 0.5558 1 VMRC-RCZ 腎臟 0.9492 0.6125 0.5913 1 ACHN 腎臟 1.005 0.623 0.6277 1 JHH-4 肝臟 0.4019 0.0719 0.0775 4 136297 -112- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 OCUG-1 肝臟 0.4247 0.115 0.0881 4 SNU-182 肝臟 0.3211 0.3009 0.2618 4 SNU-398 肝臟 0.7925 0.0572 0.048 3 JHH-7 肝臟 0.526 0.0621 0.049 3 SNU-475 肝臟 0.9855 0.1516 0.1274 3 JHH-6 肝臟 0.6033 0.1987 0.1906 3 HuCCTl 肝臟 0.731 0.2303 0.1941 3 EGI-1 肝臟 0.8992 0.2121 0.2415 3 huH-1 肝臟 0.637 0.3355 0.2569 3 SK-HEP-1 肝臟 0.7567 0.2521 0.2684 3 PLC/PRF/5 肝臟 0.7758 0.2551 0.3086 3 HepG2 肝臟 0.8333 0.2949 0.311 3 SNU-423 肝臟 0.9714 0.304 0.3364 3 SNU-387 肝臟 0.6457 0.4265 0.3953 3 JHH-1 肝臟 0.6947 0.4443 0.4458 3 SNU-449 肝臟 1.0774 0.486 0.4864 3 C3A 肝臟 0.9439 0.4686 0.5087 1 JHH-2 肝臟 1.0593 0.7702 0.7744 1 A549 肺臟 0.4707 0.0974 0.129 4 H290 肺臟 0.4248 0.4081 0.3961 4 H2691 肺臟 0.468 0.4411 0.4795 4 RERF-LC-MA 肺臟 0.639 0.0854 0.0623 3 NCI-H841 肺臟 0.8459 0.1149 0.1057 3 SBC-3 肺臟 0.9716 0.2057 0.155 3 H2369 肺臟 1.0518 0.172 0.1562 3 ChaGo-K-1 肺臟 1.0137 0.1936 0.1726 3 H2804 肺臟 0.8272 0.2981 0.195 3 NCI-H2286 肺臟 0.8997 0.2979 0.2466 3 UMC-11 肺臟 0.6174 0.2438 0.276 3 H2373 肺臟 0.8795 0.3019 0.2853 3 H2461 肺臟 0.8732 0.3484 0.2912 3 136297 -113 - 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 H2795 肺臟 1.0282 0.3473 0.3436 3 NCI-H196 肺臟 0.8976 0.3922 0.389 3 H2722 肺臟 0.8473 0.4877 0.4089 3 H28 肺臟 0.9309 0.4937 0.4124 3 H2803 肺臟 0.6578 0.4814 0.4939 3 H2731 肺臟 0.9841 0.5147 0.4912 2 H2591 肺臟 1.0024 0.5897 0.5288 1 SW 1271 肺臟 1.054 0.681 0.585 1 H2052 肺臟 0.9018 0.7748 0.6495 1 H513 肺臟 0.8696 0.747 0.7763 1 NCI-H2195 肺臟 1.0695 0.7473 0.7937 1 YMRC-LCD 肺臟：NSCLC 0.1083 0.0165 0.0206 5 NCI-H1703 肺臟：NSCLC 0.0217 0.0234 0.0387 5 DV-90 肺臟：NSCLC 0.1662 0.0939 0.0801 5 NCI-H520 肺臟：NSCLC 0.1553 0.0853 0.0943 5 HCC-44 肺臟：NSCLC 0.4828 0.0622 0.0573 4 LOU-NH91 肺臟：NSCLC 0.2854 0.0649 0.0667 4 NCI-H1792 肺臟：NSCLC 0.4287 0.1012 0.085 4 LU99A 肺臟：NSCLC 0.3858 0.1388 0.1203 4 LU99B 肺臟：NSCLC 0.3259 0.1927 0.1616 4 LCLC-103H 肺臟：NSCLC 0.4592 0.1711 0.163 4 NCI-H2009 肺臟：NSCLC 0.2163 0.1481 0.1764 4 NCI-H2170 肺臟：NSCLC 0.477 0.2033 0.1894 4 CAL-12T 肺臟：NSCLC 0.4345 0.2399 0.2003 4 SK-MES-1 肺臟：NSCLC 0.2868 0.2316 0.2173 4 NCI-H2122 肺臟：NSCLC 0.8339 0.0731 0.0601 3 NCI-H460 肺臟：NSCLC 0.9368 0.0626 0.0624 3 NCI-H1437 肺臟：NSCLC 1.0697 0.11 0.0878 3 ABC-1 肺臟：NSCLC 0.7461 0.1129 0.0899 3 NCI-H1299 肺臟：NSCLC 0.902 0.105 0.094 3 HCC-366 肺臟：NSCLC 1.1043 0.0917 0.1002 3 136297 -114- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 LU65B 肺臟：NSCLC 0.9138 0.1102 0.1013 3 VMRC-LCP 肺臟：NSCLC 0.6195 0.1294 0.1061 3 NCI-H3122 肺臟：NSCLC 0.664 0.1227 0.113 3 LU65A 肺臟：NSCLC 0.5925 0.1313 0.1233 3 201T 肺臟：NSCLC 1.1069 0.1758 0.1239 3 EBC-1 肺臟：NSCLC 0.806 0.155 0.128 3 NCI-H1666 肺臟：NSCLC 1 0.112 0.135 3 RERF-LC-MS 肺臟：NSCLC 0.6674 0.141 0.1425 3 273T 肺臟：NSCLC 0.8467 0.1865 0.159 3 NCI-H2110 肺臟：NSCLC 0.929 0.244 0.194 3 NCI-H2085 肺臟：NSCLC 1.0485 0.2496 0.2008 3 NCI-H358 肺臟：NSCLC 1.1308 0.2687 0.2249 3 LU99C 肺臟：NSCLC 0.5091 0.1845 0.2281 3 EPLC-272H 肺臟：NSCLC 0.7924 0.2789 0.24 3 NCI-H2087 肺臟：NSCLC 0.7317 0.2612 0.2452 3 NCI-H1915 肺臟：NSCLC 1.1651 0.2784 0.25 3 COR-L23 肺臟：NSCLC 1.0115 0.2364 0.2645 3 NCI-H1944 肺臟：NSCLC 0.7625 0.2508 0.2692 3 LU65 肺臟：NSCLC 1.0552 0.3022 0.2768 3 SW 1573 肺臟：NSCLC 0.6665 0.3095 0.2782 3 SK-MES 肺臟：NSCLC 0.7978 0.3101 0.3203 3 NCI-H2172 肺臟：NSCLC 0.9469 0.4313 0.3324 3 NCI-H322 肺臟：NSCLC 0.5775 0.4467 0.3978 3 NCI-H1623 肺臟：NSCLC 0.8983 0.436 0.4131 3 NCI-H2030 肺臟：NSCLC 0.9091 0.4382 0.4146 3 NCI-H1869 肺臟：NSCLC 0.53 0.4401 0.4219 3 NCI-H1793 肺臟：NSCLC 0.8914 0.4837 0.426 3 NCI-H2228 肺臟：NSCLC 1.111 0.419 0.431 3 NCI-H1573 肺臟：NSCLC 0.5795 0.4795 0.4416 3 HCC-15 肺臟：NSCLC 1.081 0.4963 0.4502 3 RERF-LC-Ad2 肺臟：NSCLC 0.5334 0.4658 0.4902 3 136297 -115- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 NCI-H838 肺臟：NSCLC 1.043 0.5099 0.3182 2 NCI-H650 肺臟：NSCLC 1.0045 0.5034 0.502 1 NCI-H2405 肺臟：NSCLC 0.8472 0.497 0.5105 1 NCI-H2444 肺臟：NSCLC 0.9104 0.601 0.5357 1 PC-3 [JPC-3] 肺臟：NSCLC 0.7824 0.5818 0.5439 1 NCI-H1693 肺臟：NSCLC 0.6644 0.6313 0.5467 1 COR-L 105 肺臟：NSCLC 0.7921 0.5136 0.5478 1 SK-LU-1 肺臟：NSCLC 0.8993 0.5272 0.582 1 HCC-78 肺臟：NSCLC 0.865 0.666 0.595 1 H3255 肺臟：NSCLC 0.894 0.686 0.598 1 NCI-H1781 肺臟：NSCLC 0.8353 0.6108 0.6045 1 HCC-827 肺臟：NSCLC 0.8265 0.6909 0.6187 1 HOP92 肺臟：NSCLC 0.9934 0.695 0.6344 1 Calu-1 肺臟：NSCLC 0.8105 0.6374 0.6643 1 NCI-H2342 肺臟：NSCLC 0.8589 0.778 0.7798 1 NCI-H2347 肺臟：NSCLC 0.9848 0.8783 0.845 1 LC-1 sq 肺臟：NSCLC 1.9116 0.996 1.2191 1 LAR 雜項 0.0398 0.0104 0.0015 5 HT 1080 雜項 0.0583 0.0135 0.0141 5 TASK1 雜項 0.8609 0.0456 0.0344 3 GCT 雜項 0.6099 0.097 0.0732 3 STS 0421 肌肉 0.3838 0.1484 0.11 4 A673 肌肉 0.5523 0.0896 0.0731 3 OV-1063 卵巢 0.1051 -0.0465 -0.0045 5 TOV-112D 卵巢 0.059 0.0111 0.0122 5 A2780 卵巢 0.1745 0.0693 0.0442 5 OVMIU 卵巢 0.1776 0.138 0.1443 5 MDA-H2774 卵巢 0.2085 0.0117 0.0207 4 IGROV-1 卵巢 0.4271 0.1121 0.1124 4 RMG-I 卵巢 0.2666 0.2123 0.1716 4 SK-OV-3 卵巢 0.2853 0.2647 0.291 4 136297 -116- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 OAW42 卵巢 0.4569 0.3872 0.3435 4 OVTOKO 卵巢 0.4835 0.42 0.412 4 Caov-3 卵巢 0.5251 -0.0004 -0.0224 3 MCAS 卵巢 1.2885 -0.0085 -0.0142 3 PA-1 卵巢 0.636 0.005 0.005 3 ES-2 卵巢 0.9311 0.0747 0.0623 3 RKN 卵巢 1.0045 0.1482 0.1049 3 OVCAR-8 卵巢 0.7166 0.1442 0.1224 3 A2780ADR 卵巢 0.5276 0.1526 0.1356 3 TYK-nu 卵巢 0.7871 0.245 0.2265 3 NIH ： OVCAR-3 卵巢 1.0723 0.2539 0.2416 3 OAW28 卵巢 0.8974 0.2001 0.2458 3 OVCAR-5 卵巢 0.7739 0.2162 0.2648 3 EFO-27 卵巢 0.8772 0.2627 0.3237 3 SW 626 卵巢 1.0372 0.3903 0.4064 3 OVISE 卵巢 0.6107 0.4587 0.4191 3 OVSAYO 卵巢 0.9829 0.4188 0.4195 3 EFO-21 卵巢 0.8922 0.4971 0.4502 3 OV-90 卵巢 1.175 0.4593 0.4735 3 FU-OV-1 卵巢 0.9593 0.5098 0.495 2 OVKATE 卵巢 1.0241 0.9374 0.8461 1 KP-4 胰臟 0.1844 0.0203 0.0222 5 PANC-1 胰臟 0.3146 0.1726 0.1474 4 KP-3 胰臟 0.378 0.222 0.175 4 KP-1N 胰臟 0.3155 0.1894 0.1894 4 Pane 03.27 胰臟 0.702 0.111 0.117 3 HUP-T4 胰臟 0.952 0.144 0.154 3 A2.1 胰臟 1.339 0.186 0.208 3 HPAC 胰臟 0.939 0.251 0.213 3 KP-1NL 胰臟 0.702 0.287 0.219 3 BxPC-3 胰臟 1.233 0.321 0.236 3 136297 -117- 200930704 細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 A13A 胰臟 1.115 0.28 0.239 3 KP-3L 胰臟 0.875 0.287 0.258 3 Pane 10.05 胰臟 1.204 0.2845 0.267 3 HUP-T3 胰臟 0.7682 0.2841 0.2686 3 HPAF-II 胰臟 1.042 0.423 0.372 3 DAN-G 胰臟 0.6668 0.3759 0.3811 3 KP-2 胰臟 0.8359 0.4032 0.4095 3 YAPC 胰臟 0.76 0.507 0.289 2 Capan-1 胰臟 0.857 0.51 0.368 2 Pane 02.03 胰臟 1.0158 0.5008 0.4159 2 AsPC-l 胰臟 1.292 0.721 0.535 1 SU.86.86 胰臟 1.1289 0.645 0.5435 1 PL4 胰臟 0.929 0.651 0.544 1 SUU-2 胰臟 1.123 0.844 0.57 1 Pane 08.13 胰臟 0.91 0.761 0.703 1 Capan-2 胰臟 1.0128 0.7716 0.7456 1 Pane 04.03 胰臟 0.994 0.798 0.77 1 DU 145 前列腺 0.931 0.049 0.044 3 MGH-BA-1 皮膚 0.15 0.044 -0.013 5 WM1158 皮膚 0.0594 0.0252 0.0321 5 IGR-1 皮膚 0.1978 0.0714 0.0587 5 COLO-849 皮膚 0.4553 -0.0091 0.0093 4 A2058 皮膚 0.2671 0.0255 0.02 4 M-14 皮膚 0.3071 0.0703 0.0561 4 MGH-ST-1 皮膚 0.4152 0.074 0.0578 4 COLO 792 皮膚 0.3273 0.1011 0.0917 4 VMRC-MELG 皮膚 0.4605 0.1462 0.1194 4 MGH-BO-1 皮膚 0.353 0.186 0.151 4 A375.S2 皮膚 0.452 0.1896 0.1536 4 SK-MEL-39 皮膚 0.4542 0.2968 0.2391 4 K19 皮膚 0.323 0.3 0.247 4
136297 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 IPC-298 皮膚 0.4501 0.3059 0.2539 4 MGH-SW-1 皮膚 0.2458 0.2558 0.271 4 A431 皮膚 1.0122 0.022 0.0192 3 BU-ML 皮膚 0.7451 0.0443 0.0244 3 CHL-1 皮膚 0.8801 0.0514 0.0326 3 COLO 857 皮膚 0.7565 0.0666 0.0529 3 SK-MEL-131 皮膚 0.7317 0.0848 0.0599 3 UACC-62 皮膚 0.5483 0.1094 0.124 3 Hs 944.T 皮膚 0.7522 0.1316 0.1388 3 MGH-PO-1 皮膚 0.7752 0.1548 0.1397 3 IGR-37 皮膚 0.5675 0.1714 0.1429 3 UACC903 皮膚 0.555 0.181 0.175 3 SK-MEL-37 皮膚 0.536 0.2181 0.1784 3 MGH-MC-1 皮膚 0.7186 0.1934 0.1994 3 C32 皮膚 0.9511 0.2482 0.2055 3 G-MEL 皮膚 0.6624 0.2227 0.2122 3 MEWO 皮膚 0.991 0.255 0.214 3 IGR-39 皮膚 0.834 0.2702 0.2141 3 MEL-JUSO 皮膚 0.7127 0.1949 0.2211 3 451Lu 皮膚 0.7217 0.2594 0.2265 3 WM35 皮膚 0.8726 0.2125 0.2318 3 COLO 858 皮膚 0.806 0.306 0.234 3 1205Lu 皮膚 0.5617 0.2665 0.2484 3 K4 皮膚 0.919 0.257 0.254 3 K1 皮膚 0.6275 0.2832 0.2662 3 WM793B 皮膚 0.6332 0.3606 0.3015 3 WM 266-4 皮膚 0.7552 0.3436 0.3252 3 MM608 皮膚 0.7646 0.3161 0.3265 3 MGH-TH-1 皮膚 1.114 0.4408 0.3347 3 K2 皮膚 0.97 0.33 0.36 3 Hs 939.T 皮膚 0.7495 0.4148 0.3821 3 136297 -119- 200930704
細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 WM164 皮膚 0.805 0.414 0.399 3 MGH-QU-1 皮膚 0.97 0.46 0.433 3 SK-MEL-28 皮膚 0.841 0.476 0.459 3 Hs 940.T 皮膚 0.899 0.552 0.492 2 MEL-HO 皮膚 0.8835 0.6098 0.5037 1 SK-MEL-119 皮膚 0.8436 0.4805 0.5052 1 HMVII 皮膚 0.7604 0.6097 0.5073 1 K8 皮膚 0.762 0.468 0.509 1 MGH-MCC-1 皮膚 1.03 0.73 0.573 1 WM239A 皮膚 1.447 0.732 0.64 1 MM455 皮膚 1.257 0.718 0.672 1 WM902B 皮膚 1.401 0.99 0.805 1 AGS 田 月 0.1829 0.0811 0.067 5 Takigawa 田 月 0.1891 0.1612 0.1255 5 TMK-l 胃 0.334 0.0293 0.0321 4 AZ-521 胃 0.3819 0.0702 0.0601 4 MKN28 田 月 0.3799 0.1106 0.0748 4 IM-95m 田 月 0.4254 0.1195 0.0834 4 KATOII 胃 0.3873 0.2237 0.2532 4 HGC-27 胃 0.536 0.044 0.057 3 NUGC-3 田 月 1.1004 0.09 0.0967 3 23132/87 胃 1.0523 0.1618 0.1552 3 MKN74 胃 1.0538 0.1651 0.1667 3 ΚΑΤΟΠΙ 田 月 0.6955 0.1991 0.196 3 RERF-GC-1B 胃 0.8254 0.3142 0.2073 3 MKN7 田 月 1.1909 0.2781 0.2612 3 NCI-N87 胃 0.8742 0.3371 0.29 3 IM-95 田 月 0.902 0.311 0.292 3 OCUM-1 田 月 0.8101 0.2168 0.3176 3 NUGC-4 胃 0.5093 0.3328 0.335 3 GTL-16 胃 0.7105 0.4124 0.3635 3 136297 -120- 200930704 細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 MKN45 田 月 0.851 0.326 0.429 3 FU97 田 月 0.7699 0.5171 0.404 2 MKN1 胃 1.024 0.5318 0.4098 2 KMH-2 甲狀腺 0.343 0.017 0.0093 4 fflH-4 曱狀腺 0.3912 0.0328 0.0391 4 FTC-133 甲狀腺 0.3884 0.1596 0.1535 4 8505C 甲狀腺 0.7694 0.1011 0.0742 3 FTC-238 甲狀腺 0.5915 0.0995 0.0877 3 CAL-62 甲狀腺 0.9829 0.1362 0.1365 3 ONCO-DG-1 甲狀腺 1.0952 0.3063 0.1977 3 TCO-1 甲狀腺 0.7356 0.2228 0.1992 3 HTC-C3 甲狀腺 0.7903 0.2916 0.2857 3 TT2609-C02 甲狀腺 0.9862 0.3171 0.3136 3 8305C 甲狀腺 0.7851 0.435 0.3771 3 ML-1 甲狀腺 0.7562 0.4193 0.4005 3 BHT-101 甲狀腺 1.0259 0.4909 0.4394 3 S-117 曱狀腺 0.8908 0.4405 0.4683 3 R082-W-1 甲狀腺 0.7894 0.4013 0.4831 3 B-CPAP 甲狀腺 1.378 0.763 0.49 2 ASH-3 曱狀腺 0.7518 0.6432 0.5762 1 MFE-319 子宮 0.2338 0.0988 0.0843 4 HEC-1 子宮 0.2361 0.0976 0.1034 4 SNG-M 子宮 0.6532 0.0129 0.0117 3 Ishikawa 子宮 0.9421 0.0306 0.0209 3 MFE-296 子宮 0.6434 0.0852 0.0762 3 ESS-1 子宮 0.881 0.1059 0.0827 3 MES-SA 子宮 0.808 0.1341 0.1377 3 SKN 子宮 0.864 0.2716 0.1851 3 AN3CA 子宮 0.9261 0.2145 0.2207 3 Ishikawa (Heraklio) 02 ER- 子宮 0.88 0.242 0.225 3 MFE-280 子宮 0.9711 0.4052 0.3979 3
136297 200930704 細胞系 器官 0.2 nM 2.0 nM 20 nM 敏感性 EFE-184 子宮 0.986 0.5066 0.426 2 EN 子宮 1.0579 0.6322 0.5471 1 實例14 :式II化合物係有效抵抗許多固態腫瘤細胞系 化合物Ila係在48小時後，於化合物存在下，在細胞存活 檢測中針對衍生自血液學惡性病症之細胞系試驗組進行測 試，使用CellTiter-Glo®作為示值讀數。表18係列出血液學惡 性病症之類型、試樣之名稱、其在檢測中之GI5〇(為達成50% 生長抑制所需要之濃度）值、GI5〇之對數(log(GI5〇)及各試樣 之相對敏感性（差別）。差別係經由將各細胞系之log(GI50) 自橫越全部試驗組之平均log(GI5〇)(於此情況中為0.236)扣 除計算而得；正值表示比平均較敏感之試樣，然而負值表 示比平均較不敏感之試樣。 敏感性血液學惡性病症為：急性骨髓性白血病（AML)、慢 性骨髓性白血病（CML)、急性淋巴胚細胞白血病（ALL)、多 發性骨髓瘤（MM)、非霍奇金（non-Hodgkin)氏淋巴瘤（NHL)及 q Hodgkin 氏淋巴瘤（HL)。 表18·在血液學癌細胞系中之化合物Ila之活性 疾病 細胞系 GI5〇(nM) log(GIso) 差別 AML MV4 ； 11 0.08 -1.114 0.747 AML MV4 ； 11 Luc 0.11 -0.979 0.613 AML AML-193 0.11 -0.959 0.593 AML Kasumi-1 0.44 -0.357 -0.010 AML UKE-l 0.18 -0.757 0.391 AML SET-2 0.34 -0.469 0.102 AML MOLM13-Luc 0.23 -0.645 0.279 AML HL60 0.17 -0.783 0.416 136297 -122- 200930704 疾病 細胞系 GIS0(_ l〇g(GI50) 差別 AML HL60-Luc 0.51 -0.294 -0.072 AML HEL92 0.49 -0.310 -0.056 CML K562 0.21 -0.680 0.314 ALL CCRF-CEM 0.16 -0.785 0.419 ALL RS4 ； 11 0.10 -1.000 0.634 ALL MOLT-4 0.33 -0.480 0.114 ALL SEM-Luc 0.15 -0.824 0.458 ALL MOLT-3 0.34 -0.475 0.109 ALL REH 0.18 -0.745 0.379 ALL SUP-B15 0.19 -0.721 0.355 ALL CCRF-HSB-2 0.19 -0.733 0.367 ALL 697 0.11 -0.979 0.613 ALL NALM-6 0.14 -0.870 0.504 ALL NALM-19 0.19 -0.721 0.355 ALL TANOUE 10.00 1.000 -1.366 ALL MHH-CALL-2 0.32 -0.502 0.136 ALL MHH-CALL-3 0.20 -0.699 0.333 ALL MHH-CALL-4 10.00 1.000 -1.366 ALL MUTZ-5 10.00 1.000 -1.366 ALL YT 10.00 1.000 -1.366 MM KMS11 0.48 -0.316 -0.050 MM KMSll-Luc 0.29 -0.538 0.172 MM KMS18-Luc 0.52 -0.286 -0.080 MM OPM2 0.14 -0.870 0.504 MM MM1-S 0.24 -0.620 0.254 MM MMl-S-Luc 0.23 -0.638 0.272 MM KMS26 0.24 -0.620 0.254 MM KMS12 0.29 -0.538 0.172 MM L363 0.13 -0.886 0.520 MM LP1 0.21 -0.688 0.322 MM INA-6 0.12 -0.921 0.555 MM RPMI8226 0.26 -0.582 0.216 MM H929 0.34 -0.475 0.109 MM H929-Luc 1.69 0.227 -0.593 136297 -123- 200930704 疾病 細胞系 GISO(nM) log(GIso) 差別 NHL R1 20.00 1.301 -1.667 NHL SuDHL-1 10.00 1.000 -1.366 NHL SuDHL-4 0.45 -0.350 -0.016 NHL SuDHL-6 0.16 -0.796 0.430 NHL U937 0.20 -0.699 0.333 NHL SR 0.11 -0.957 0.591 NHL Karpas-299-Luc 20.18 1.305 -1.671 NHL Karpas-299 0.20 -0.699 0.333 NHL Karpas-422 5.14 0.711 -1.077 NHL Ramos 0.16 -0.796 0.430 NHL HuT78 0.28 -0.561 0.195 NHL HH 0.22 -0.668 0.301 NHL DEL 0.28 -0.548 0.182 NHL SUP-M2 0.18 -0.745 0.379 NHL DOHH2 0.24 -0.629 0.263 NHL SUP-T1 5.57 0.746 -1.112 HL HDLM-2 0.12 -0.921 0.555 HL L-1236 3.67 0.564 -0.930 HL L428 20.00 1.301 -1.667 HL KM-H2 0.23 -0.632 0.266 平均 0.430 -0.366
【圖式簡單說明】 圖1.關於衍生自血液學惡性病症之細胞系，對化合物Ila 之相對敏感性。在血液學惡性病症試驗組中，以細胞系之 CellTiter Glo®檢測為基礎之相對敏感性，係經由將關於全部 試驗組之Log(GI50) (GI50為在50%抑制作用下之濃度）值之平 均與關於各細胞系Log(GI50)值間之差異作圖而顯示；正值 (棒條朝右）表示比平均較敏感之細胞系，而負值（棒條朝 左）表示比平均較不敏感之細胞系。 圖2.關於以化合物Ila處理之SUDHL-4與RL細胞系，藉由 136297 -124- 200930704 FACS之細胞階段評估：第一爛顯示未經處理之細胞，第二 攔顯示使用化合物Ila於24小時後之細胞，及第三欄顯示以 化合物Ila處理後48小時之細胞。 圖3.數據顯示化合物na係對得自AML病患之胚細胞 為細胞毒性。試驗組A顯示％存活期作為劑量之函數。試 驗組B顯示2週生長時間後之細胞培養物。試驗組c顯示在 <2N、2N或4N階段中之細胞百分比，將化合物IIa之作用與 培克里他索（paclitaxel)之作用比較。 圖4.在MV4; 11皮下腫瘤異種移植模式中，於q4dx3劑量 時間表下所投予化合物Ha之功效。MV4 ; U腫瘤係藉由以 0.2毫升1:1比例之HBSS與MatrigelTM，皮下注射1〇7個細胞至 每隻老鼠之右腰窩中，而建立於雌性無胸腺nu/nu老鼠中。 當腫瘤達到250立方毫米時，於細胞植入後大約24天，將老 鼠根據腫瘤體積隨機分配至治療組(n=9)中。將動物以靜脈 内方式投予媒劑（Captisol®)、化合物iia或SB-715992 (意斯平席 伯（Ispinesib)，一種由細胞動力學公司發展之Ksp抑制劑，其 係在臨床試驗中）。全部均在q4d χ 3時間表下服藥。治療 組之功效/腫瘤體積對隨機化後之天數；（Β)百分比體重改 變相對於在隨機化日之最初體重。 圖5.在ΚΒ8.5腫瘤異種移植模式中，於q4dx3劑量時間表 下所投予化合物Ila之功效。KB8.5腫瘤係藉由以〇·2毫升1:1 比例之HBSS與MatrigdTM，皮下注射5 χ 1〇6個細胞至每隻老 鼠之右腰窩中，而建立於雌性無胸腺nu/mi老鼠（查理士河 (Charles River)實驗室）中。當腫瘤達到大約3〇〇立方毫米時， 136297 -125- 200930704 於細胞植入後大約1〇天，將老鼠根據腫瘤體積隨機分配至 治療組（n=9/)中。將動物以靜脈内方式投予化合物瓜或 SB-715992。培克里他索（paclitaxel)係在3〇毫克/公斤下以腹膜 腔内方式投予。全部均在q4d x 3時間表下服藥。（左邊）治 療組之功效/腫瘤體積對服藥起始後之天數；（右邊）百分Z 體重改變相對於隨機化/服藥起始日之最初體重。* ， 與媒劑及SB-715992比較（ANOVA/Dunn氏方法）。 圖6.在KB8.5腫瘤異種移植模式中，於q4d χ 3劑量時間表 © 下所投予化合物He之功效。KB8.5腫瘤係藉由以〇2毫升1:1 比例之HBSS與MatrigeFM，皮下注射5 χ 1〇6個細胞至每隻老 鼠之右腰窩中，而建立於雌性無胸腺nu/nu老鼠（查理士河 (Charles River)實驗室）中。當腫瘤達到平均為339立方毫米 時，將老鼠以腫瘤體積為基礎隨機分配至治療組（n=9)中。 將動物以靜脈内方式投予化合物IXc或SB-715992。培克里他 索（paclitaxel)係在30毫克/公斤下以腹膜腔内方式投予。全部 均在q4d χ 3時間表下服藥。（左邊）治療組之功效/腫瘤體積 ® 對服藥起始後之天數·’（右邊）百分比體重改變相對於隨機 化/服藥起始日之最初體重。於1.25毫克/公斤下之化合物nc 在第11天’於統計學上係與媒劑組不同（*p<〇 〇5，AN〇VA/ Tukey氏試驗）。 圖7.在KB8.5腫瘤異種移植模式中，於q4d χ 3劑量時間表 下所投予化合物la之功效。KB8.5腫瘤係藉由以0.2毫升1··1 比例之HBSS與MatrigelTM，皮下注射5 χ 106個細胞至每隻老 鼠之右腰窩中’而建立於雌性無胸腺nu/nu老鼠（查理士河 136297 •126- 200930704 (Charles River)實驗室）中。當腫瘤達到平均為285立方毫米時， 將老鼠以腫瘤體積為基礎隨機分配至治療組（n=10)中。將動 物以靜脈内方式投予化合物la或SB-715992。培克里他索 (paclitaxel)係在30毫克/公斤下以腹膜腔内方式投予。全部均 在q4d X 3時間表下服藥。（左邊）治療組之功效/腫瘤體積對 服藥起始後之天數；（右邊）百分比體重改變相對於隨機化/ 服藥起始日之最初體重。沒有組群於統計學上與媒劑組不 同（ANOVA，在 Ranks 上）。 〇 ❹ 136297 127-

Claims (1)

  1. 200930704 十、申請專利範圍： 1. 一種式I化合物、該化合物之互變異構物、該化合物之藥 學上可接受鹽、該互變異構物之藥學上可接受鹽或其混合 物於藥劑製備上之用途，該藥劑係在哺乳動物中治療增生 疾病，選自固態腫瘤或血液學癌症，其中式1化合物為 Ra LJ / hv-n r1 X/M-r2 R6 N /N—Rb R〇/① 其中： R1係選自下列組成之組群：胺醯基、醯基胺基、㈣、缓 基酯、芳基及視情況被羥基或函基取代之烷基； R2係選自下列組成之組群：氫、烷基及芳基；土 Ra 為 L-A1 ; L係選自下列組成之組群：’其中q為一或二，與視 情況被經基、i基或ϋ基胺基取代之^至以烧美，. A1係選自下列組成之組群:芳基、經取代之芳基、雜二 〇 經取代之雜芳基、雜環族、經取代之雜環族、環烧土基 及經取代之環烷基； ，其全 ’且m R6係選自下列組成之組群：雜環族、芳基及美 部可視情況被我取代，其中R8係如本文定二 為1至3之整數； 、烯基、炔基、-CF3、 當m為2或3時，各 R8係選自下列組成之組群：氰基、烧美 炫氧基、南基及羥基；其條件是， R8可為相同或不同； 136297 200930704 妒為圮或R5 ; R4係選自下列組成之組群：氫、線性烷基、-伸烷基_胺酿 基、-伸烷基-氧基醯基、-伸烷基-酿氧基、·伸院基_經基、 -[伸烷基]p-含氮雜環族、-[伸烷基]ρ·含氮經取代之雜環 族、-[伸烧基]ρ-含氮雜芳基、-[伸烷基]ρ_含氮經取代之 雜芳基及-[伸烷基]P-NRMR11，其中ρ為〇或1，且R4伸烷 基為直鏈伸烧基’視情況被前述取代基之一單_或二取 代’取代基選自下列組成之組群：胺基、經取代之胺 © 基、羥基、烷基、經取代之烷基、羧基、羧基酯、嗣 基、螺環烷基及鹵基； R10與R11係獨立選自下列組成之組群：氫、烷基、經取代 之院基、-S(O)-院基、-S(O)-經取代之燒基、_s(〇)2 _燒基、 -s(o)2_經取代之烷基、雜環族、經取代之雜環族、醯基、 务基、經取代之♦基、雜芳基、經取代之雜芳基、環 烧基及經取代之環烧基’或當Rio為氫時，R11為經基、 烧氧基或經取代之烧氧基； R5係選自下列組成之組群··氫、烷基、經取代之烷基、烯 基、經取代之烯基、炔基、經取代之炔基、環烷基、 經取代之環燒基、雜環族、經取代之雜環族、芳基、 經取代之芳基、雜芳基及經取代之雜芳基； Rc係選自下列組成之組群：R3與_c(0)_N(Rl 3 )(R14); R係選自下列組成之組群：氫與_χ_Α ,其中X係選自下列 組成之組群：-C(o)-、-C(S)·、-S(o)—s(o)2-及-s(o)2-n(r)-， 其中R為氫或烷基； 136297.doc -2 - 200930704 A係選自下列組成之組群：氫、視情況經取代之烷基、視 情況經取代之烷氧基、視情況經取代之芳基、羧基、 羧基酯、胺醯基、視情況經取代之雜芳基、視情況經 取代之雜環族及視情況經取代之環烷基，其中視情況 經取代之基團係被丨至4個取代基取代，取代基選自下 列組成之組群：烷基、經取代之烷基、烷氧基、經取 代之烷氧基、胺基、經取代之胺基、芳氧基、經取代 之芳氧基、氰基、芳基、經取代之芳基、雜芳基、經 取代之雜芳基、雜環族、經取代之雜環族、雜環基氧 基；取代之雜環基氧基、醯基、缓基 '幾基酯、明 基（惟當A為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜 芳基時除外）、鹵基、羥基、_s(〇)2_R9，其中r9為烷基、 經取代之烷基、芳基、經取代之芳基、雜芳基或經取 代之雜芳基及硝基；且 R13與R14係獨立選自下列組成之組群：氫、羥基、烷基、 經取代之烷基、環烷基、經取代之環烷基 '芳基、經 取代之芳基、雜芳基、經取代之雜芳基、雜環族及經 取代之雜環族，其條件是R1 3或R1 4中只有丨個為羥基； 或尺3與]^1 4和懸垂至其上之氮原子一起接合，以形成雜 環族或經取代之雜環族。 2.如5月求項1之用途，其中該增生疾病為固態腫瘤，選自下 列組成之組群：肺癌、乳房癌、卵巢癌、皮膚癌、結腸癌、 膀胱癌肝癌、胃癌、前列腺癌、腎細胞癌、鼻咽癌、鱗 狀細胞癌、甲狀腺乳頭癌、子宮頸癌、小細胞肺癌（SCLC)、 136297 200930704 非i、’·田胞肺癌、騰癌、頭部與頸部鱗狀細胞癌及肉瘤。 3. 如請求項2之用途，其中固態腫瘤為乳房癌。 4. 如請求項3之用途，其中乳房癌為轉移性乳房癌。 5. 如請求項2之用途，其中固態腫瘤為胃癌。 6. 如請求項2之用途，其中固態腫瘤為前列腺癌。 7. 如請求項2-6中任一項之用途，其中腫瘤為’多重抗藥性腫 瘤。 8. 如請求項7之用途，其中腫瘤係表現高含量之p_糖蛋白。 © 9.如請求項中任—項之用途，其中在式①化合物中： R1為C1-C6烷基或環烷基；及/或 R2為Η或C1-C4烷基·，及/或 R6為視情況經取代之芳基；及/或 Rag視情況經取代之芊基或芳基甲基；及/或 Rb為胺基取代之C2-C6伸烧基，其可進一步被經基、 C1-C4烧基、C1-C4鹵烧基、C1-C4羥烧基、酮基或鹵基取代； 及/或 ® Re為-X-A，其中-X為-C(O)-，且A為烷基，其可被至高 四個基團取代，取代基選自胺基、鹵基、羥基、烷氧基、 氰基、經取代之胺基或S(0)2R9，其中R9為C1-C4烷基。 10.如請求項1之用途，其中該增生疾病為血液學癌症，選自 下列組成之組群：霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤（HL)、非霍奇 金（non-Hodgkin)氏淋巴瘤（NHL)、白血病、骨髓性白企病、 淋巴球白血病、急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白 血病（CML)、急性淋巴球白血病（ALL)、慢性淋巴球白血病 136297 200930704 有毛細胞白血病及多 (CLL)、脊髓發育*良徵候镇峰s)、 發性骨髓瘤。 11.如請求項10之用途，苴中兮 疋/、甲《亥血液學癌症為急性骨髓性白血 病0
    求項10之用途，其中該血液學癌症為多發性骨髓瘤。 13,種式Π化合4勿、該化合物之互變異構物、該化合物之藥 學上可接受鹽、該互變異構物之藥學上可接受鹽或其混合 物於藥劑製備上之用途’該藥劑係在哺乳動物中治療增生 疾病，選自固態^廇或血液學癌症，其中式订化合物為
    (II) 其中： 尺1£:係選自下列組成之組群：乙基、異丙基、第三_丁基、 苯基' -CH(CH2)2〇(環氧丙烧-3-基）及-CCH3(CH2)2〇(3-甲基環 氧丙燒-3-基）； R2 e為氫或曱基； R15，R16，R17及R18各獨立選自Η、鹵基、C1_4烷基、α·4 鹵烷基及CN ; R19，R2G及R21各獨立為Η或視情況經取代之ci-CIO醯 136297 200930704 基； R22為C1-C4鹵烷基； P為等於1至3之整數；且 q為等於1-3之整數； 或其藥學上可接受之鹽。 14. 如凊求項13之用途，其中該增生疾病為固態踵瘤，選自下 列組成之組群：肺癌、乳房癌、卵巢癌、皮膚癌、結腸癌、 膀胱癌、肝癌、月癌、前列腺癌、腎細胞癌、鼻咽癌、鱗 〇 狀細胞癌' 甲狀腺乳頭癌、子宮頸癌、小細胞肺癌(SCLC)、 非小細胞肺癌、胰癌、頭部與頸部鱗狀細胞癌及肉瘤。 15. 如請求項14之用途，其中固態腫瘤為乳房癌。 16·如請求項15之用途’其中乳房癌為轉移性乳房癌。 17. 如請求項14之用途，其中固態腫瘤為胃癌。 18. 如請求項14之用途，其中固態腫瘤為前列腺癌。 19. 如請求項14-18中任一 jS夕田、各廿— t 項之用途，其中腫瘤為多重抗藥性腫 瘤。 0 20.如請求項19之用途，其中腫瘤係表現高含量之p糖蛋白。 21.如請求項13之用途，其中該增生疾病為錢學癌症，選自 下列組成之組群：霍奇金（Hodgkin)氏淋巴瘤（HL)、非霍奇 金（non-Hodgkin)氏淋巴瘤_L)、白血病、骨髓性白血病、 淋巴球白血病、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白 血病(CML)、急性淋巴球白金病(ALL)、慢性淋巴球白企病 (CLL)、脊髓發育不良徵㈣_)、有毛細胞白血病及多 發性骨髓瘤。 136297 200930704 22.如請求項21之用途’其中該血液學癌症為急性骨髓性白血 病。 23. 如請求項21之用途’其中該血液學癌症為多發性骨髓瘤。 24. —種式（II)化合物：
    ❹ Rlc係選自下列組成之組群：乙基、異丙基、第三_丁基、 苯基、-CH(CH2 )2 0(環氧丙烷-3-基）及_CCH3 (CH2 )2 0(3-甲基環 氧丙烷-3-基）； R2e為氫或曱基； R15, R16, R17及R18各獨立選自Η、鹵基、C1_4烷基、C1-4 鹵烷基及CN ; R 9 ’ R20及R21各獨立為Η或視情況經取代之C1_C10醯 基； R22為C1-C4鹵烷基； P為等於1至3之整數；且 q為等於1-3之整數； 或其藥學上可接受之鹽。 136297 200930704 25. 如請求項24之化合物，其中r22為氟基曱基。 26. 如5青求項24或25之化合物，其中p為2。 27.如請求項24-26中任一項之化合物，其中q為1。 28. 如請求項24_26中任一項之化合物，其中尺^與^5各為η 29. 如請求項28之化合物，其中各為鹵基。 30. 如請求項28之化合物，其中Ri9，R2〇及R2】各為Η。 31. 如請求項24-26中任一項之化合物，其中為Η。
    32.如請求項24-26中任 代之C1-C10醯基。 一項之化合物，其中為視情況經取 33.—種式nb化合物：
    lib 或其藥學上可接受之鹽。
    136297 Ha 200930704 或其藥學上可接受之鹽。 35, 一種式nc化合物：
    (S)-N-((S)-3-胺基-4-氟基 丁基)-N-((R)-1-(1-爷基-4·(2,5-二氟苯基)_1Η-咪唑-2-基)- e 22 二 甲基丙基>2-羥基丙醯胺 nc 或其藥學上可接受之鹽。 36. —種如請求項33、34或35中任一項之化合物、任一種此等 化合物之互變異構物、任一種此等化合物之藥學上可接受 鹽、該互變異構物之藥學上可接受鹽或其混合物於藥劑製 備上之用途，該藥劑係在哺乳動物中治療增生疾病，選自 «月束貝36之用途，其中該增生疾病為固態腫瘤，選隹
    列組成之組群：肺癌、乳房癌、即巢癌、皮膚癌、結腸; 膀腕癌、肝癌、胃癌 '箭别始、步 墙刖列腺癌、腎細胞癌、鼻咽癌、 狀細胞癌、甲狀腺乳頭癌、子 于呂頒癌、小細胞肺癌（SCLC 非小細胞肺癌：胰癌、頭部 只貝σ丨鱗狀細胞癌及肉瘤 38. 如請求項37之用途，盆中 再肀固態腫瘤為乳房癌。 39. 如請求項38之用途，其φ ^ 其令礼房癌為轉移性乳房癌。 40. 如請求項37之用途，其中 丹Τ固態腫瘤為胃癌。 41. 如請求項37之用途，其^+ 4 具中固態腫瘤為前列腺癌。 136297 200930704 42. 如請求項37-41中任一項之用途，其中腫瘤為多重抗藥性腫 瘤。 43. 如請求項42之用途，其中腫瘤係表現高含量之P-糖蛋白。 44. 如請求項36之用途，其中該增生疾病為血液學癌症，選自 下列組成之組群：霍奇金（Hodgkin)氏淋巴瘤（HL)、非霍奇 金（non-Hodgkin)氏淋巴瘤（NHL)、白血病、骨髓性白血病、 淋巴球白血病、急性骨髓性白血病（AML)、慢性骨髓性白 血病（CML)、急性淋巴球白血病（ALL)、慢性淋巴球白jk病 O (CLL)、脊髓發育不良徵候簇（MDS)、有毛細胞白血病及多 發性骨髓瘤。 45. 如請求項44之用途，其中該血液學癌症為急性骨髓性白血 病0 46·如請求項44之用途，其中該血液學癌.症為多發性骨髓瘤。 136297 -10-
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