JPWO2015182625A1 - Ｒａｓ活性阻害薬及びその用途 - Google Patents

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Abstract

本発明は、がんやＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群等の治療に有効かつ安全なＲａｓ活性阻害薬を提供する。具体的には、式（Ｉ）：（式中、−Ｘ−は、で表される基又は単結合を示し；ｎは、０、１又は２を示し；Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアルコキシ基を示し；Ｒ１が複数存在する場合には同一であっても異なっていてもよく；−Ｙは、又は−ＮＨ−Ｒ２で表される基を示し；Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基を示す。）で表される化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグを含有してなる、Ｒａｓ活性阻害剤を提供する。

Description

本発明は、ダントロレン及び類似の構造を有する化合物を含有してなるＲａｓ活性阻害剤、細胞増殖阻害剤、がん及びＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群等の予防及び／又は治療剤に関する。
上皮細胞増殖因子受容体からＳｏｓ、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫを介してＥＲＫ ＭＡＰキナーゼを活性化する経路は、がん遺伝子情報伝達系として知られており、多くのヒトがんで異常が認められる。それぞれの分子を標的とする化合物が多く開発されており、上皮細胞増殖因子受容体（例、トラスツズマブ、ベルツズマブ、バニツムマブ、ゲフィニチブ、エルロチニブ、ラパチニブ）、Ｒａｆ（例、ソラフェニブ）、ＭＥＫ（例、トラメチニブ）に対するものは、すでにヒト臨床に用いられている（図１）。
一方、Ｒａｓはヒトがんの約３０％で変異が認められるがん遺伝子である。そのため、１９８０年代から多くの製薬企業がＲａｓタンパク質の活性を阻害する化合物の探索を行ってきたが（例えば、特許文献１−３参照）、いまだ臨床に用いられているものはない。また、Ｒａｓの局在を変える薬剤も多く試みられたが、ほとんど特異性がなく、副作用のため、医薬品として認可されるには至っていない。２０１３年になってＲａｓと標的分子との結合を阻害する薬剤が初めて報告されたが（非特許文献１）、医薬品として使用できるかは全く未知数である。
また、上記のがん遺伝子情報伝達系に変異がある遺伝病としてＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群が知られている（図１）。アメリカでは最も頻度の多い遺伝病として知られているものの、有効な治療法はまだ見つかっていない。
ところで、本発明者らは、Ｒａｓの活性化を測定するＦＲＥＴバイオセンサーを世界で初めて発明した（図２）（特許文献４）。さらに、ＦＲＥＴバイオセンサーの感度を上昇させ、培養細胞を用いた薬剤スクリーニング系を作る技術も考案している（特許文献５）。
特開平１１−０１２２７９号公報 特表２００９−５１７４０１号公報 再表００／００４０１４号公報 国際公開第２００２／０１４３７３号パンフレット 国際公開第２０１２／０４３４７７号パンフレット
Shima, F., Y. Yoshikawa, M. Ye, M. Araki, S. Matsumoto, J. Liao, L. Hu, T. Sugimoto, Y. Ijiri, A. Takeda, Y. Nishiyama, C. Sato, S. Muraoka,A. Tamura, T. Osoda, K. Tsuda, T. Miyakawa, H. Fukunishi, J. Shimada, T. Kumasaka, M. Yamamoto, and T. Kataoka. 2013. In silico discovery of small-molecule Rasinhibitors that display antitumor activity by blocking the Ras-effector interaction. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110:8182-8187.
上述のように、Ｒａｓはヒトがんで最も多く変異が認められるがん遺伝子であり、細胞のがん化にきわめて重要な役割を果たすことが示されている。そのため、がん細胞のＲａｓ活性を不活化させることができれば、がん細胞の増殖を抑制することができ、抗がん剤の標的分子として最も有望なものの１つと考えられている（図１）。また、これまで有効な治療法が見つかっていないＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群の創薬標的にもなり得ると考えられる。しかし、３０年以上前から多くの製薬企業がＲａｓ活性阻害薬の探索を試みてきたにも拘わらず、未だ有効な薬剤は見出されていないのが現状である。
したがって、本発明の目的は、がんやＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群等の治療に有効なＲａｓ活性阻害薬を提供することである（図１）。
本発明者らは、上記の目的を達成すべく、ＲａｓのＦＲＥＴバイオセンサーを発現させた培養細胞を用いた薬剤スクリーニング系を構築し、これを用いてＲａｓ活性を阻害する化合物をスクリーニングした。その結果、筋弛緩作用を有し、痙性麻痺緩解剤、悪性症候群治療剤として使用されているダントロレン及びそれと類似の構造を有する化合物が、Ｒａｓの活性を阻害することを見出した。ダントロレンの抗けいれん作用を保持しつつ水溶性を向上させたアズモレンは、Ｒａｓ活性阻害作用を示さなかったことから、ダントロレンは、リアノジン受容体を介した筋弛緩作用とは別の機序でＲａｓを阻害することが明らかとなった。さらに、種々のダントロレン類縁体についてＲａｓ活性阻害活性を検証した結果、Ｒａｓ活性阻害作用に重要な共通の基本骨格を同定することに成功した。
本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は以下のとおりである。
［１］式（Ｉ）：
（式中、−Ｘ−は、
で表される基又は単結合を示し；
ｎは、０、１又は２を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアルコキシ基を示し；
Ｒ１が複数存在する場合には同一であっても異なっていてもよく；
−Ｙは、
又は−ＮＨ−Ｒ２で表される基を示し；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基を示す。）
で表される化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグを含有してなる、Ｒａｓ活性阻害剤。
［２］式（Ｉ）において、−Ｘ−が
（式中、ｎは、０又は１を示し；
Ｒ１はハロゲン原子を示す。）
で表される基である、［１］記載の剤。
［３］式（Ｉ）において、−Ｘ−が単結合であり、
−Ｙが、−ＮＨ−Ｒ２で表される基であり；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基である、［１］記載の剤。
［４］式（Ｉ）において、Ｙが−ＮＨ−Ｒ２で表される基である場合、Ｒ２が置換基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基、それぞれ置換基を有していてもよい、１，３，５−トリアジニル、フタラジニル、ピリジル、キノリニル、チアゾリル及びチエノピリミジニルから選ばれる複素環基、置換基を有していてもよいベンゾイル基、置換基を有していてもよいフェニル基、又はアミノチオカルボニル基である、［２］又は［３］記載の剤。
［５］式（Ｉ）で表わされる化合物が、ダントロレン又は下記のいずれかの構造式：
で表される化合物である、［１］記載の剤。
［６］Ｒａｓを介するシグナル伝達による細胞増殖の阻害剤である、［１］〜［５］のいずれかに記載の剤。
［７］がん細胞増殖阻害剤である、［６］記載の剤。
［８］Ｒａｓを介するシグナル伝達経路の異常亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療剤である、［１］〜［５］のいずれかに記載の剤。
［９］前記疾患ががん又はＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群である、［８］記載の剤。
［１０］式（Ｉ）：
（式中、−Ｘ−は、
で表される基又は単結合を示し；
ｎは、０、１又は２を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアルコキシ基を示し；
Ｒ１が複数存在する場合には同一であっても異なっていてもよく；
−Ｙは、
又は−ＮＨ−Ｒ２で表される基を示し；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基を示す。）
で表される化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグを被験体に投与することを含む、被験体におけるＲａｓ活性を阻害する方法。
［１１］式（Ｉ）において、−Ｘ−が
（式中、ｎは、０又は１を示し；
Ｒ１はハロゲン原子を示す。）
で表される基である、［１０］記載の方法。
［１２］式（Ｉ）において、−Ｘ−が単結合であり、
−Ｙが、−ＮＨ−Ｒ２で表される基であり；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基である、［１０］記載の方法。
［１３］式（Ｉ）において、Ｙが−ＮＨ−Ｒ２で表される基である場合、Ｒ２が置換基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基、それぞれ置換基を有していてもよい、１，３，５−トリアジニル、フタラジニル、ピリジル、キノリニル、チアゾリル及びチエノピリミジニルから選ばれる複素環基、置換基を有していてもよいベンゾイル基、置換基を有していてもよいフェニル基、又はアミノチオカルボニル基である、［１１］又は［１２］記載の方法。
［１４］式（Ｉ）で表わされる化合物が、ダントロレン又は下記のいずれかの構造式：
で表される化合物である、［１０］記載の方法。
［１５］Ｒａｓを介するシグナル伝達による細胞増殖を阻害する方法である、［１０］〜［１４］のいずれかに記載の方法。
［１６］がん細胞増殖を阻害する方法である、［１５］記載の方法。
［１７］Ｒａｓを介するシグナル伝達経路の異常亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療方法である、［１０］〜［１４］のいずれかに記載の方法。
［１８］前記疾患ががん又はＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群である、［１７］記載の方法。
［１９］ＲＡＳ活性の阻害において使用するための、式（Ｉ）：
（式中、−Ｘ−は、
で表される基又は単結合を示し；
ｎは、０、１又は２を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアルコキシ基を示し；
Ｒ１が複数存在する場合には同一であっても異なっていてもよく；
−Ｙは、
又は−ＮＨ−Ｒ２で表される基を示し；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基を示す。）
で表される化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２０］式（Ｉ）において、−Ｘ−が
（式中、ｎは、０又は１を示し；
Ｒ１はハロゲン原子を示す。）
で表される基である、［１９］記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２１］式（Ｉ）において、−Ｘ−が単結合であり、
−Ｙが、−ＮＨ−Ｒ２で表される基であり；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基である、［１９］記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２２］式（Ｉ）において、Ｙが−ＮＨ−Ｒ２で表される基である場合、Ｒ２が置換基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基、それぞれ置換基を有していてもよい、１，３，５−トリアジニル、フタラジニル、ピリジル、キノリニル、チアゾリル及びチエノピリミジニルから選ばれる複素環基、置換基を有していてもよいベンゾイル基、置換基を有していてもよいフェニル基、又はアミノチオカルボニル基である、［２０］又は［２１］記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２３］式（Ｉ）で表わされる化合物が、ダントロレン又は下記のいずれかの構造式：
で表される化合物である、［１９］記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２４］Ｒａｓを介するシグナル伝達による細胞増殖の阻害において使用するための、［１９］〜［２３］のいずれかに記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２５］がん細胞増殖の阻害において使用するための、［２４］記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２６］Ｒａｓを介するシグナル伝達経路の異常亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療において使用するための、［１９］〜［２３］のいずれかに記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
［２７］前記疾患ががん又はＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群である、［２６］記載の化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
本発明により見出されたＲａｓ活性阻害薬は、Ｒａｓとその標的分子であるＲａｆとの結合を阻害することにより、Ｒａｓ／Ｒａｆを介したシグナル伝達を遮断することができるので、Ｒａｓ活性が亢進しているがんや、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ情報伝達系の構成分子に遺伝子異常をもつＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群の治療及び予防薬として有用である。ダントロレンは筋弛緩作用を有し、痙性麻痺緩解薬、悪性症候群治療薬として広く使用されており、長期投与等での安全性についても多くの蓄積がある。ダントロレンのＲａｓ活性阻害作用は、臨床で使用されている濃度以下で発揮されるので、有効かつ安全な薬剤として大いに期待される。
がん遺伝子情報伝達系及び既存の抗がん剤の作用点を示す図である。上皮細胞増殖因子がＲａｓグアニンヌクレオチド交換因子Ｓｏｓを介して不活性化型であるＧＤＰ結合型Ｒａｓを活性化型であるＧＴＰ結合型Ｒａｓに変換する。ＧＴＰ結合型Ｒａｓはセリンスレオニンリン酸化酵素Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＥＲＫを活性化し、細胞増殖およびがん化を誘導する。 実施例で用いたＦＲＥＴバイオセンサーを用いたＲａｓ活性阻害薬のスクリーニング系を示す図である。 ダントロレンナトリウム塩（ＤＳＳ）及びその類縁体のＲａｓ活性阻害活性を示す図である。 生理的な環境下におけるＲａｓ活性化の阻害を確認するためのラパマイシン誘導性Ｒａｓ活性化システムの模式図である。 ダントロレンによるラパマイシン誘導性Ｒａｓ活性化の阻害を示す図である。 ダントロレン類縁体の構造活性相関を示す図である。 ダントロレンによるＥＧＦ依存性Ｒａｓ活性化の阻害を示す図である。 ダントロレンによるＲａｓ活性阻害がＲａｓグアニンヌクレオチド交換因子非特異的であることを示す図である。 ダントロレンの種々のヒトがん由来細胞株に対する増殖抑制効果を示す図である。 ダントロレンのＸｅｎｏｇｒａｆｔモデルにおける腫瘍増大抑制効果を示す図である。 ダントロレン及びＣＸ１０３の試験管内でのＲａｓ活性化阻害効果を示す図である。 ＣＸ１０３の細胞増殖抑制効果を示す図である。 Ｒａｃ１活性に対するダントロレン（ＣＸ００１）及びＣＸ１０３の影響を示す図である。
本発明は、ダントロレン又はその類縁体を含有してなるＲａｓ活性阻害剤を提供する。ここで「Ｒａｓ活性」とは、Ｒａｓグアニンヌクレオチド交換因子が触媒する反応によりＲａｓタンパク質がＧＴＰ結合型へ転換する作用を意味する。ＧＴＰ結合型Ｒａｓタンパク質がＲａｆタンパク質を始めとする標的分子群と結合する。Ｒａｓグアニンヌクレオチド交換因子は、Ｓｏｓ、ＲａｓＧＲＰ１／ＣａｌＤＡＧＩＩ、ＲａｓＧＲＦなど、ＣＤＣ２５相同領域を有するグアニンヌクレオチド交換因子のいずれであってもよい。
本発明において「ダントロレン又はその類縁体」とは、式（Ｉ）：
（式中、−Ｘ−は、
で表される基又は単結合を示し；
ｎは、０、１又は２を示し；
Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアルコキシ基を示し；
Ｒ１が複数存在する場合には同一であっても異なっていてもよく；
−Ｙは、
又は−ＮＨ−Ｒ２で表される基を示し；
Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基を示す。）
で表される化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグを意味する。尚、式（Ｉ）において、−Ｘ−が
であり、ｎが０であり、Ｙが下記式
で表される基の場合、式（Ｉ）で表される化合物はダントロレンである。
以下、本発明を説明する。本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味を有する。
本明細書において使用する用語を以下に定義する。
「ハロゲン原子」としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。好ましくは臭素原子である。
「アルキル基」とは、直鎖状或いは分岐状の炭素数１〜１０のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、２，２−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、ヘプチル、オクチル等が挙げられ、なかでも炭素数１〜６のアルキル基が好ましく、メチル基がより好ましい。
「アルキルカルボニル基」とは、アルキル基（上述）で置換されたカルボニル基を意味し、アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリルオキシ等が挙げられる。
「アルコキシ基」とは、炭素数１〜６の直鎖又は分岐状のアルコキシ基を意味し、具体的には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、２−ペンチルオキシ、３−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、２−ヘキシルオキシ等が挙げられる。
「アルコキシカルボニル基」とは、アルコキシ基（上述）で置換されたカルボニル基を意味し、具体的には、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
「アリール基」とは、炭素数６〜１０のアリール基を意味し、具体的には、フェニル、ナフチル等が挙げられ、なかでもフェニル基が好ましい。
「アリールカルボニル基」とは、アリール基（上述）で置換されたカルボニル基を意味し、具体的には、ベンゾイル、ナフトイル等が挙げられる。
「複素環基」は、特に断りのない限り、芳香族複素環基および非芳香族複素環基が挙げられる。
芳香族複素環基としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に酸素原子、硫黄原子および窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１から４個含有する４から７員（好ましくは５又は６員）の単環式芳香族複素環基および縮合芳香族複素環基が挙げられる。該縮合芳香族複素環基としては、例えば、これら４から７員の単環式芳香族複素環基に対応する環と、１又は２個の窒素原子を含む５又は６員の芳香族複素環（例、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピラジン、ピリジン、ピリミジン）、１個の硫黄原子を含む５員の芳香族複素環（例、チオフェン）およびベンゼン環から選ばれる１又は２個が縮合した環から誘導される基等が挙げられる。
「芳香族複素環基」としては、例えば、
フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、フラザニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、１，２，３−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル等の単環式芳香族複素環基；
ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾ［ｂ］チエニル、インドリル、イソインドリル、１Ｈ−インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾ［ｄ］イソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾ［ｄ］イソチアゾリル、１Ｈ−ベンゾトリアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、α−カルボリニル、β−カルボリニル、γ−カルボリニル、アクリジニル、フェノキサジニル、フェノチアジニル、フェナジニル、フェノキサチイニル、チアントレニル、フェナトリジニル、フェナトリジニル、フェナントロリニル、インドリジニル、ピロロ［１，２−ｂ］ピリダジニル、チエノピリミジニル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリダジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジニル、１，２，４−トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジル、１，２，４−トリアゾロ［４，３−ｂ］ピリダジニル等の縮合芳香族複素環基；
が挙げられる。
非芳香族複素環基としては、例えば、環構成原子として炭素原子以外に酸素原子、硫黄原子および窒素原子から選ばれるヘテロ原子を１から４個含有する４から７員（好ましくは５又は６員）の単環式非芳香族複素環基および縮合非芳香族複素環基が挙げられる。該縮合非芳香族複素環基としては、例えば、これら４から７員の単環式非芳香族複素環基に対応する環と、１又は２個の窒素原子を含む５又は６員の芳香族複素環（例、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピラジン、ピリジン、ピリミジン）、１個の硫黄原子を含む５員の芳香族複素環（例、チオフェン）およびベンゼン環から選ばれる１又は２個の環が縮合した環から誘導される基、ならびに該基の部分飽和により得られる基等が挙げられる。
「非芳香族複素環基」としては、例えば、
アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフリル、チオラニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピペリジル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリミジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル等の単環式非芳香族複素環基；および
イソクロマニル、ジヒドロベンゾピラニル、ジヒドロキノリル、イソクロメニル、クロメニル（２Ｈ−クロメニル、４Ｈ−クロメニル）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリル、１，２，３，４−テトラヒドロキノリル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ［１，３］ジオキソリル等の縮合非芳香族複素環基；
が挙げられる。
「複素環−カルボニル基」とは、複素環基（上述）で置換されたカルボニル基を意味する。
上記「アルキル基」、「アルコキシ基」、「アリール基」、「アリールカルボニル基」、「アルコキシカルボニル基」、「アルキルカルボニル基」、「複素環基」、「複素環−カルボニル基」及び「チオカルボニル基」が有していてもよい置換基としては、
（１）ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素；好ましくは塩素）、
（２）低級アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどのＣ１−６アルキル基など）、
（３）シクロアルキル基（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−６シクロアルキル基など）、
（４）低級アルキニル基（例えば、エチニル、１−プロピニル、プロパルギルなどのＣ２−６アルキニル基など）、
（５）低級アルケニル基（例えば、ビニル、アリル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニルなどのＣ２−６アルケニル基など）、
（６）アラルキル基（例えば、ベンジル、α−メチルベンジル、フェネチルなどのＣ７−１２アラルキル基など）、
（７）アリール基（例えば、フェニル、ナフチルなどのＣ６−１０アリール基など、好ましくはフェニル基）、
（８）低級アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどのＣ１−６アルコキシ基など）、
（９）アリールオキシ基（例えば、フェノキシなどのＣ６−１０アリールオキシ基など）、
（１０）ホルミル基または低級アルカノイル基（例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリルなどのＣ１−６アルキル−カルボニル基など）、
（１１）アリールカルボニル基（例えば、ベンゾイル、ナフトイルなどのＣ６−１０アリール−カルボニル基など）、
（１２）ホルミルオキシ基または低級アルカノイルオキシ基（例えば、アセチルオキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリルオキシなどのＣ１−６アルキル−カルボニルオキシ基など）、
（１３）アリールカルボニルオキシ基（例えば、ベンゾイルオキシ、ナフトイルオキシなどのＣ６−１０アリール−カルボニルオキシ基など）、
（１４）カルボキシル基、
（１５）低級アルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルなどのＣ１−６アルコキシ−カルボニル基など）、
（１６）アラルキルオキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニルなどのＣ７−１２アラルキルオキシ−カルボニル基など）、
（１７）カルバモイル基、
（１８）モノ−、ジ−またはトリ−ハロゲノ−低級アルキル基（例えば、クロロメチル、ジクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチルなどのモノ−、ジ−またはトリ−ハロゲノ−Ｃ１−６アルキル基など）、
（１９）オキソ基、
（２０）アミジノ基、
（２１）イミノ基、
（２２）アミノ基、
（２３）モノ−低級アルキルアミノ基（例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノなどのモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基など）、
（２４）ジ−低級アルキルアミノ基（例えば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノなどのジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基など）、
（２５）置換基を有していてもよい、炭素原子と１個の窒素原子に加えて窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれたヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい３〜８員の含窒素複素環基（例えば、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、ハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルキル基、ハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルコキシ基、アミノ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、カルボキシル基、Ｃ１−６アルキル−カルボニル基、Ｃ１−６アルコキシ−カルボニル基、カルバモイル基、モノ−Ｃ１−６アルキル−カルバモイル基、ジ−Ｃ１−６アルキル−カルバモイル基、Ｃ６−１０アリール−カルバモイル基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールオキシ基、およびハロゲン化されていてもよいＣ１−６アルキル−カルボニルアミノ基、オキソ基などから選ばれる１〜５個の置換基を有していてもよい、炭素原子と１個の窒素原子に加えて窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれたヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい３〜８員の含窒素複素環基；例えば、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピリジル、ピロリニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、オキサジアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル、ピペラジニル、Ｎ−メチルピペラジニル、Ｎ−エチルピペラジニルなど）、
（２６）アルキレンジオキシ基（例えば、メチレンジオキシ、エチレンジオキシなどのＣ１−３アルキレンジオキシ基など）、
（２７）ヒドロキシ基、
（２８）ニトロ基、
（２９）シアノ基、
（３０）メルカプト基、
（３１）スルホ基、
（３２）スルフィノ基、
（３３）ホスホノ基、
（３４）スルファモイル基、
（３５）スルホニル基、
（３６）モノ−低級アルキルスルファモイル基（例えば、Ｎ−メチルスルファモイル、Ｎ−エチルスルファモイル、Ｎ−プロピルスルファモイル、Ｎ−イソプロピルスルファモイル、Ｎ−ブチルスルファモイルなどのモノ−Ｃ１−６アルキルスルファモイル基など）、
（３７）ジ−低級アルキルスルファモイル基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジエチルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジプロピルスルファモイル、Ｎ，Ｎ−ジブチルスルファモイルなどのジ−Ｃ１−６アルキルスルファモイル基など）、
（３８）低級アルキルチオ基（例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオなどのＣ１−６アルキルチオ基など）、
（３９）アリールチオ基（例えば、フェニルチオ、ナフチルチオなどのＣ６−１０アリールチオ基など）、
（４０）低級アルキルスルフィニル基（例えば、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、プロピルスルフィニル、ブチルスルフィニルなどのＣ１−６アルキルスルフィニル基など）、
（４１）アリールスルフィニル基（例えば、フェニルスルフィニル、ナフチルスルフィニルなどのＣ６−１０アリールスルフィニル基など）、
（４２）低級アルキルスルホニル基（例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、ブチルスルホニルなどのＣ１−６アルキルスルホニル基など）、
（４３）アリールスルホニル基（例えば、フェニルスルホニル、ナフチルスルホニルなどのＣ６−１０アリールスルホニル基など）、
（４４）低級アルキルカルボニルアミノ基（例えば、メチルカルボニルアミノなどのＣ１−６アルキルカルボニルアミノ基など）、
（４５）ハロゲン原子（例、塩素）及び／又は低級アルキル基（例、メチル）で置換されていてもよいアリールアミノ基（例えば、フェニルアミノ、ナフチルアミノなどのＣ６−１０アリールアミノ基など）、
（４６）置換基を有していてもよい、炭素原子と１個の窒素原子に加えて窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選ばれたヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい３〜８員の含窒素複素環基（上記（２５）と同義）で置換されたアミノ基（例えば、フェニルチアゾリルアミノ）
などからなる群（本明細書中、置換基群Ａという）から選択される置換基が挙げられる。
これらの置換基は、結合可能な位置に１乃至数個、好ましくは１〜２個、より好ましくは１個、各基に結合している。置換基の数が２個以上の場合は同一または異なっていてもよい。さらにこれらの置換基は、置換基群Ａから選ばれる任意の置換基（例、ハロゲン原子）で置換されていてもよい。
本明細書中では、新規化合物及び公知化合物を含め、一般式（Ｉ）で表される化合物を化合物（Ｉ）あるいは本発明化合物とも称する場合がある。
一般式（Ｉ）において、
−Ｘ−は、好ましくは
（式中、各記号の定義は上述の通りである）で表される基である；
ｎは、好ましくは０又は１であり、より好ましくは０である；
Ｒ１は、好ましくはハロゲン原子（例、臭素）である；
−Ｙは、好ましくは下記式
で表される基又は−ＮＨ−Ｒ２である；
Ｒ２は、好ましくは置換基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基（例、メチル）、置換基を有していてもよい複素環基（例、１，３，５−トリアジニル、フタラジニル、ピリジル、キノリニル、チアゾリル、チエノピリミジニル）、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基（例、ベンゾイル）、置換基を有していてもよいアリール基（例、フェニル）及びアミノチオカルボニルである。
一般式（Ｉ）において、−Ｘ−が単結合であり、
−Ｙが、−ＮＨ−Ｒ２で表される基であり、
Ｒ２が置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基である態様もまた好ましい態様である。
より具体的には、好ましい本発明化合物は後述の各実施例化合物であり、より好ましくは、ダントロレン（化合物番号：ＣＸ００１）、化合物番号ＣＸ００３〜００７、ＣＸ１０１〜１０５、ＣＸ１０８、ＣＸ１１２〜１１４、ＣＸ１１６〜１１８、ＣＸ１２１、ＣＸ１２２、ＣＸ１２５、ＣＸ１２６、ＣＸ１２９、ＣＸ１３０、ＣＸ１３４及びＣＸ１３５であり、いっそう好ましくは下記化合物である。
一態様において、上記化合物のうち、最も好ましい化合物はＣＸ１０３である。
化合物番号ＣＸ１０３
式（Ｉ）で表される化合物の塩としては、薬理学的に許容しうる塩等が挙げられ、例えば、トリフルオロ酢酸、酢酸、乳酸、コハク酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ケイ皮酸、フマル酸、ホスホン酸、塩酸、硝酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、スルファミン酸、硫酸等の酸との酸付加塩；例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等の金属塩；例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン等の有機塩基との塩等が挙げられる。
化合物（Ｉ）が、光学異性体、立体異性体、位置異性体、回転異性体等の異性体を有する場合には、いずれか一方の異性体も、異性体の混合物も化合物（Ｉ）に包含される。例えば、化合物（Ｉ）に光学異性体が存在する場合には、ラセミ体から分割された光学異性体も化合物（Ｉ）に包含される。これらの異性体は、自体公知の合成手法、分離手法（濃縮、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶等）によりそれぞれを単品として得ることができる。
化合物（Ｉ）は、結晶であっても無晶形であってもよい。化合物（Ｉ）が結晶である場合、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても化合物（Ｉ）に包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、結晶化することによって製造することができる。
化合物（Ｉ）は、溶媒和物（例えば、水和物等）であっても、無溶媒和物であってもよく、いずれも化合物（Ｉ）に包含される。
化合物（Ｉ）は、同位元素（例、３Ｈ，１４Ｃ，３５Ｓ，１２５Ｉ等）等で標識されていてもよい。
例えば、化合物（Ｉ）が酸に不安定な場合、経口投与する場合には胃酸による分解を防ぐために、自体公知の方法により酸に安定なプロドラッグの形態で提供され得る。
本発明化合物は、例えば、Snyder HR, Jr, Davis CS, Bickerton RK, Halliday RP. J. Med. Chem. 10, 807 (1967)に記載の製法によって合成され得る。尚、式（Ｉ）中、Ｘがフェニレンの場合も単結合の場合も同様の製造方法が合成されうる。なお、当業者であれば所望により適宜変更及び修飾が可能である。たとえばBaliani A, Bueno GJ, Stewart ML, Yardley V, Brun R, Barrett MP, Gilbert IH. J. Med. Chem. 48, 5570 (2005) らの方法も同様に用いることができる
本発明化合物は、Ｒａｓが標的分子であるＲａｆと結合してこれを活性化するのを阻害することができるので、Ｒａｓを介するシグナル伝達による細胞増殖の抑制、例えば、Ｒａｓの活性が亢進しているがん（例、ＥＧＦ受容体の変異や発現亢進が認められる肺がん、乳がん、悪性膠芽腫、グリオーマなど）におけるがん細胞の増殖抑制、さらには、ＲＡＳ／ＭＡＰＫシグナル情報伝達系の構成分子（例、ＰＴＰＮ１１、ＲＡＦ−１、ＳＯＳ１、ＫＲａｓ）の遺伝子異常によるＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群（例、ヌーナン症候群、ＬＥＯＰＡＲＤ症候群、コステロ症候群、ＣＦＣ症候群等）などの、Ｒａｓを介するシグナル伝達経路の異常亢進が関与する疾患の予防及び／治療に有効である。
ＢＲＡＦ、Ｒａｓ、ＥＧＦＲに変異を有する細胞は上記化合物に対する感受性が高いことから、一態様において、上記化合物は悪性黒色腫、膵がん、大腸がん、肺がん、神経膠芽腫の予防及び／治療に有効である。
本発明の化合物（Ｉ）は毒性が低く、そのままあるいは自体公知の方法に従って、薬理学的に許容される担体を混合した医薬組成物、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、口腔内崩壊錠、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤、貼布剤等の製剤として、ヒト又は他の哺乳動物に対して、経口的または非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。
本発明の医薬組成物中の、化合物（Ｉ）の含有量は、組成物全体の約０．０１重量％〜１００重量％である。該投与量は、化合物の種類、投与対象、投与ルート、疾患等によっても異なるが、例えば、ダントロレンを抗がん剤として、成人（６０ｋｇ）に対し経口的に投与する場合、有効成分として約１０〜約３００ｍｇ／日、好ましくは約５０〜約１５０／日を、１日１回または２〜３回に分けて投与することができる。あるいは静脈内注射の場合、約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ／回、好ましくは約０．５〜約３ｍｇ／ｋｇ／回を、総量約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約７ｍｇ／ｋｇまで投与することができる。他の化合物についても、ダントロレンの投与量を指標に、Ｒａｓ阻害活性と薬物忍容性とを考慮して、適宜好適な投与量を選択することができる。
本発明の医薬組成物の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が挙げられ、例えば、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、水溶性高分子、塩基性無機塩；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等が挙げられる。また、必要に応じて、通常の防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、酸味剤、発泡剤、香料等の添加物を用いることもできる。
該「賦形剤」としては、例えば、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、でんぷん、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、酸化チタン等が挙げられる。
該「滑沢剤」としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、タルク、ステアリン酸等が挙げられる。
該「結合剤」としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム末、ゼラチン、プルラン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
該「崩壊剤」としては、（１）クロスポビドン、（２）クロスカルメロースナトリウム（ＦＭＣ−旭化成）、カルメロースカルシウム（五徳薬品）等スーパー崩壊剤と称される崩壊剤、（３）カルボキシメチルスターチナトリウム（例、松谷化学（株）製）、（４）低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（例、信越化学（株）製）、（５）コーンスターチ等が挙げられる。該「クロスポピドン」としては、ポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）、１−ビニル−２−ピロリジノンホモポリマーと称されているものも含め、１−エテニル−２−ピロリジノンホモポリマーという化学名を有し架橋されている重合物のいずれであってもよく、具体例としては、コリドンＣＬ（ＢＡＳＦ社製）、ポリプラスドンＸＬ（ＩＳＰ社製）、ポリプラスドンＸＬ−１０（ＩＳＰ社製）、ポリプラスドンＩＮＦ−１０（ＩＳＰ社製）等である。
該「水溶性高分子」としては、例えば、エタノール可溶性水溶性高分子〔例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（以下、ＨＰＣと記載することがある）等のセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン等〕、エタノール不溶性水溶性高分子〔例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（以下、ＨＰＭＣと記載することがある）、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース誘導体、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、グアーガム等〕等が挙げられる。
該「塩基性無機塩」としては、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよび／またはカルシウムの塩基性無機塩が挙げられる。好ましくはマグネシウムおよび／またはカルシウムの塩基性無機塩である。さらに好ましくはマグネシウムの塩基性無機塩である。該ナトリウムの塩基性無機塩としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム等が挙げられる。該カリウムの塩基性無機塩としては、例えば、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム等が挙げられる。該マグネシウムの塩基性無機塩としては、例えば、重質炭酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、珪酸マグネシウム、アルミン酸マグネシウム、合成ヒドロタルサイト〔Ｍｇ６Ａｌ２（ＯＨ）１６・ＣＯ３・４Ｈ２Ｏ〕および水酸化アルミナ・マグネシウム、好ましくは、重質炭酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム等が挙げられる。該カルシウムの塩基性無機塩としては、例えば、沈降炭酸カルシウム、水酸化カルシウム等が挙げられる。
該「溶剤」としては、例えば、注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油等が挙げられる。
該「溶解補助剤」としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
該「懸濁化剤」としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられる。
該「等張化剤」としては、例えば、ブドウ糖、 Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。
該「緩衝剤」としては、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。
該「無痛化剤」としては、例えばベンジルアルコール等が挙げられる。
該「防腐剤」としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。
該「抗酸化剤」としては、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロール等が挙げられる。
該「着色剤」としては、例えば、食用黄色５号、食用赤色２号、食用青色２号等の食用色素；食用レーキ色素、ベンガラ等が挙げられる。
該「甘味剤」としては、例えば、サッカリンナトリウム、グリチルリチン二カリウム、アスパルテーム、ステビア、ソーマチン等が挙げられる。
該「酸味剤」としては、例えば、クエン酸（無水クエン酸）、酒石酸、リンゴ酸等が挙げられる。
該「発泡剤」としては、例えば重曹等が挙げられる。
該「香料」としては、合成物および天然物のいずれでもよく、例えば、レモン、ライム、オレンジ、メントール、ストロベリー等が挙げられる。
本発明化合物は、自体公知の方法に従い、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤または滑沢剤等の担体を添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため自体公知の方法でコーティングすることにより経口投与製剤とすることができる。腸溶性製剤とする場合、腸溶層と薬剤含有層との間に両層の分離を目的として、自体公知の方法により中間層を設けることもできる。
本発明化合物を例えば口腔内崩壊錠とする場合、例えば、結晶セルロースおよび乳糖を含有する核を、本発明化合物および必要により塩基性無機塩で被覆し、さらに水溶性高分子含有被覆層で被覆して組成物を得、得られた組成物をポリエチレングリコール含有腸溶性被覆層で被覆し、次にクエン酸トリエチル含有腸溶性被覆層で被覆し、さらにポリエチレングリコール含有腸溶性被覆層で被覆し、最後にマンニトールで被覆して細粒を得、得られた細粒と添加剤とを混合し、成形する方法によって製造することができる。
上記「腸溶性被覆層」としては、例えば、セルロースアセテートフタレート(ＣＡＰ)、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸共重合体〔例えば、オイドラギット(Eudragit) Ｌ３０Ｄ−５５（商品名;レーム社製）、コリコートＭＡＥ３０ＤＰ（商品名;ＢＡＳＦ社製）、ポリキッドＰＡ３０（商品名;三洋化成社製）等〕、カルボキシメチルエチルセルロース、セラック等の水系腸溶性高分子基剤；メタアクリル酸共重合体〔例えば、オイドラギットＮＥ３０Ｄ（商品名）、オイドラギットＲＬ３０Ｄ（商品名）、オイドラギットＲＳ３０Ｄ（商品名）等〕等の徐放性基剤；水溶性高分子；クエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、アセチル化モノグリセリド、トリアセチン、ヒマシ油等の可塑剤等の一種または二種以上混合したもの等からなる層が挙げられる。
上記「添加剤」としては、例えば、水溶性糖アルコール（例、ソルビトール、マンニトール、マルチトール、還元澱粉糖化物、キシリトール、還元パラチノース、エリスリトール等）、結晶セルロース（例、セオラスＫＧ ８０１、アビセルＰＨ １０１、アビセルＰＨ １０２、アビセルＰＨ ３０１、アビセルＰＨ ３０２、アビセルＲＣ−５９１（結晶セルロース・カルメロースナトリウム）等）、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（例、ＬＨ−２２、ＬＨ−３２、ＬＨ−２３、ＬＨ−３３（信越化学（株））およびこれらの混合物等）等が挙げられ、さらに結合剤、酸味料、発泡剤、甘味剤、香料、滑沢剤、着色剤、安定化剤、賦形剤、崩壊剤等も用いられる。
本発明化合物は、さらに他の活性成分と併用してもよい。併用薬剤としては、例えば、本発明化合物を抗がん剤として使用する場合、がんに対して予防及び/又は治療効果を有する種々の化合物を適宜配合することができる。例えば、他の活性成分として、アルキル化薬（例、マスタード類、ニトロソウレア類）、代謝拮抗薬（例、葉酸系、ピリミジン系、プリン系）、抗腫瘍性抗生物質（例、アントラサイクリン）、ホルモン類似薬（例、抗エストロゲン薬、抗アンドロゲン薬、ＬＨ−ＲＨアゴニスト、プロゲステロン、エストラジオール）、白金製剤、トポイソメラーゼ阻害薬（例、トポイソメラーゼＩ阻害薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬）、生物製剤（例、インターフェロン、インターロイキン）、分子標的薬（例、抗体（例、トラスツズマブ、パニツムマブ）、低分子（ゲフィニチブ、エルロチニブ、ソラフェニブ）、レチノイン）などを含有していてもよい。
該「他の活性成分」と本発明化合物とを自体公知の方法に従って混合し、ひとつの医薬組成物（例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、液剤、注射剤、坐剤、徐放剤等）中に製剤化して併用してもよく、それぞれを別々に製剤化し、同一対象に対して同時にまたは時間差を置いて投与してもよい。
以下に本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例になんら限定されるものではない。
参考例１ Ｒａｓ活性阻害薬スクリーニング系の構築
ＨｅＬａ細胞に、細胞膜移行シグナルを欠失したＲａｉｃｈｕ−Ｒａｓ野生型を発現するプラスミドｐＰＢｂｓｒ２−Ｒａｉｃｈｕ３７０６ＮＥＳ（Komatsu, N. et al. (2011) Mol. Biol. Cell 22(23), 4647-4656; Mochizuki, N. et al. (2001) Nature, 411, 1065-1068）ＲａｓのＦＲＥＴバイオセンサーを安定に発現させたＨｅＬａ細胞を樹立した。さらに、マウスグアニンヌクレオチド交換因子Ｓｏｓ１を発現するプラスミドｐＴ２Ａｐｕｒｏ−ｍＳｏｓ１を導入してＳｏｓを発現させ、ＦＲＥＴ効率を上昇させた細胞を作製した（Ｒａｉｃｈｕ−Ｒａｓ野生型／ｍＳｏｓ１／ＨｅＬａ細胞）（図２）。一方、Ｒａｉｃｈｕ−ＲａｓＳ１７Ｎ変異体を発現するＨｅＬａ細胞（Ｒａｉｃｈｕ−ＲａｓＳ１７Ｎ細胞）を同様に作製し、最大阻害効果の指標として用いた。ＦＲＥＴ画像は既報の通り作成した(Komatsu et al., 2011)。
実施例１ Ｒａｓ活性を阻害する薬剤の同定
京都大学ワンストップ創薬拠点のライブラリ化合物数万の中から、参考例１で作製したＲａｉｃｈｕ−Ｒａｓ野生型／ｍＳｏｓ１／ＨｅＬａ細胞において、ＦＲＥＴ効率を低下させる薬剤をスクリーニングした。
Ｒａｉｃｈｕ−Ｒａｓ野生型／ｍＳｏｓ１／ＨｅＬａ細胞に１０μＭの薬剤を投与し、翌日蛍光顕微鏡下に撮影して、ＦＲＥＴ効率を測定した。なお、ＦＲＥＴ効率は４４０ｎｍ励起・５３０ｎｍ蛍光強度／４４０ｎｍ励起・４８０ｎｍ蛍光強度を指標とした(Komatsu et al., 2011)。以下の式で阻害率を決定した。
阻害率＝（薬剤非存在下のＦＲＥＴ効率―薬剤存在下のＦＲＥＴ効率）／（薬剤非存在下のＦＲＥＴ効率―薬剤存在下のＳ１７Ｎ細胞でのＦＲＥＴ効率）
即ち、Ｒａｉｃｈｕ−ＲａｓＳ１７Ｎ細胞のＦＲＥＴ効率まで下がった場合を１００％阻害として薬剤効果を判定した。その結果、ダントロレンナトリウム塩（ＤＳＳ；以下、単にダントロレンともいう）およびその類縁体（ＫＰＴＪ１０４８８（ＣＸ００３と同一化合物）、ＫＰＴＪ１１５２１（ＣＸ００４と同一化合物）、ＫＰＴＪ１９３５２（ＣＸ００５と同一化合物））が、ＦＲＥＴ効率を低下させることを見出した（図３）。
実施例２ 生理的な環境下でのＲａｓ活性阻害の確認
生理的な環境下におけるＲａｓ活性化の阻害を確認するために、ＲａｓのＦＲＥＴバイオセンサーを細胞膜に発現させ、ラパマイシン誘導性のＳｏｓ細胞膜移行系を作製した（図４）。細胞膜移行シグナルを有するＲａｉｃｈｕ−Ｒａｓ野生型を発現するプラスミドｐＰＢｂｓｒ２−Ｒａｉｃｈｕ３７０６Ｘ、ＦＫＢＰタンパク質にマウスＳｏｓ１タンパク質の触媒領域のみを発現させるベクターｐＭＣｓｂｓｒ−ＦＬＡＧ−ＦＫＢＰ−ｍＳｏｓ１−ｌｉｎｋｅｒｃａｔ及び細胞膜移行シグナルを有したラパマイシン結合タンパク質を発現するベクターｐＣＸ４ｐｕｒｏ−ＬＤＲ (Kamioka, Y. et al. (2010) J. Biol. Chem., 285(43), 33540-33548)をＨｅＬａ細胞に導入した（ＦＫＢＰ―ｍＳｏｓ１細胞）。なお、ｐＭＣｓｂｓｒ−ＦＬＡＧ−ＦＫＢＰ−ｍＳｏｓ１−ｌｉｎｋｅｒｃａｔはＳｏｓ１のグアニンヌクレオチド交換因子触媒領域（ＣＤＣ２５相同領域）とＦＫＢＰの融合タンパク質を発現する。この細胞は、ラパマイシン非添加時にはＦＲＥＴ効率は低いが、ラパマイシンを添加するとＳｏｓ１が細胞膜へ移行し、Ｒａｓを活性化する。これに伴いＦＲＥＴ効率の上昇が観察できる。
ＦＫＢＰ―ｍＳｏｓ１細胞に、終濃度１０μＭのダントロレンを投与し、翌日、顕微鏡でタイムラプス観察を行った。１０分後にラパマイシンを終濃度５０ｎＭで添加した。その結果、ダントロレンが細胞膜上でのＲａｓ活性化を阻害することがわかった（図５）。さらに、この反応において、Ｒａｓ依存性に細胞膜のラッフリング（波状化）と葉状突起伸展が起きることが知られているが、ダントロレンはこの反応をも抑制した。これは、ダントロレンが内在性のＲａｓの活性化を阻害したことを示すものである。
実施例３ ダントロレン類縁体の構造活性相関
ダントロレン及び類似の構造を有する以下の化合物について（ＣＸ１０１〜１３５はナミキ商事より購入）、実施例２と同様の実験を行い、ラパマイシン添加から１０分後のＲａｓ活性化を測定した。ＤＭＳＯ処理の細胞を１００％として標準化し、Ｒａｓ活性化阻害活性を３段階で評価した。さらに、効果の高かった薬剤についてＩＣ５０を決定した。また、Ｒａｓ依存性の細胞膜のラッフリングの阻害についても調べ、阻害活性を３段階で評価した。その結果、ダントロレンは、痙性麻痺や全身こむら返り病の治療に従来使用される用量から見積もられる血中濃度よりも低いＩＣ５０を示した。また、ダントロレンより１オーダー以上高いＩＣ５０及び顕著なラッフリング阻害活性を有する化合物も多数同定された（図６）。一方で、ダントロレンと同様に筋弛緩作用を有するアズモレンがＲａｓ活性の阻害には無効であることを見出した。
化合物番号ＣＸ００１（ダントロレンナトリウム塩）
化合物番号ＣＸ００２（アズモレン）
化合物番号ＣＸ００３
化合物番号ＣＸ００４
化合物番号ＣＸ００５
化合物番号ＣＸ００６
化合物番号ＣＸ００７
化合物番号ＣＸ００９
化合物番号ＣＸ０１０
化合物番号ＣＸ０１１
化合物番号ＣＸ０１２
化合物番号ＣＸ０１３
化合物番号ＣＸ１０１
化合物番号ＣＸ１０２
化合物番号ＣＸ１０３
化合物番号ＣＸ１０４
化合物番号ＣＸ１０５
化合物番号ＣＸ１０６
化合物番号ＣＸ１０７
化合物番号ＣＸ１０８
化合物番号ＣＸ１０９
化合物番号ＣＸ１１０
化合物番号ＣＸ１１１
化合物番号ＣＸ１１２
化合物番号ＣＸ１１３
化合物番号ＣＸ１１４
化合物番号ＣＸ１１５
化合物番号ＣＸ１１６
化合物番号ＣＸ１１７
化合物番号ＣＸ１１８
化合物番号ＣＸ１１９
化合物番号ＣＸ１２０
化合物番号ＣＸ１２１
化合物番号ＣＸ１２２
化合物番号ＣＸ１２５
化合物番号ＣＸ１２６
化合物番号ＣＸ１２７
化合物番号ＣＸ１２８
化合物番号ＣＸ１２９
化合物番号ＣＸ１３０
化合物番号ＣＸ１３１
化合物番号ＣＸ１３２
化合物番号ＣＸ１３３
化合物番号ＣＸ１３４
化合物番号ＣＸ１３５
これにより、式（Ｉ）で表わされるＲａｓ活性阻害作用に重要な共通の基本骨格が明らかとなった。
実施例４ ダントロレンによるＥＧＦ依存性Ｒａｓ活性化の抑制
次に、生理的な刺激である上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）依存性のＲａｓ活性化をダントロレンが抑制できるかを観察した。
細胞膜移行シグナルを有するＲａｉｃｈｕ−Ｒａｓ野生型を発現するプラスミドｐＰＢｂｓｒ２−Ｒａｉｃｈｕ３７０６Ｘを発現するＨｅＬａ細胞（Ｒａｉｃｈｕ−Ｒａｓ細胞）に終濃度１０μＭ、２０μＭ、５０μＭのダントロレンを投与し、１８時間後にタイムラプス観察を行った。ＥＧＦを終濃度１０ｎＭで添加し、ＦＲＥＴ効率を測定した。その結果、図７に示すごとく、ダントロレンはＥＧＦ依存性Ｒａｓ活性化を顕著に抑制した。
実施例５ Ｒａｓグアニンヌクレオチド交換因子の特異性
次に、ダントロレンのＲａｓ活性阻害作用が、Ｓｏｓ特異的であるか否かを調べるため、図４のＳｏｓ部位を、ＲａｓＧＲＰ１／ＣａｌＤＡＧＩＩあるいはＲａｓＧＲＦの触媒領域（ＣＤＣ２５相同領域）に交換した細胞を作製した。これらの細胞をラパマイシンで刺激し、Ｒａｓ活性化を測定した。ＣＸ００１（ダントロレン）１０μＭ存在下でのＲａｓ活性化を検討した結果、Ｓｏｓに対するのとほぼ同等の効果を示した（図８）。すなわち、Ｒａｓ活性化因子に対する特異性はほとんどないことが示された。
実施例６ ダントロレンの細胞増殖抑制効果
ＥＧＦ受容体、ＫＲａｓ、ＰＩ３Ｋ、ＢＲａｆ等の変異を有する細胞を含む種々のヒトがん由来細胞株について、ダントロレンによる増殖阻害効果を調べた。その結果、いずれの細胞も１０μＭでは効果がなく、５０μＭでは効果があった（図９左）。最も効果の強かったＨ２１７０細胞のタイムコースを示す（図９右）。
実施例７ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔモデルでの腫瘍増大抑制効果
ヒト肺扁平上皮癌細胞株ＮＣＩ−Ｈ２１７０（Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ陽性，１０６細胞）をヌードマウスに接種した。腫瘍を触知後（Ｄａｙ０）、２０μＭ（終濃度）のダントロレンを毎日、腹腔投与した（Ｎ＝１２）。腫瘍サイズを盲検にて測定した。結果を図１０に示す（平均±標準誤差で表示）。ダントロレン投与群では、コントロール（ＰＢＳ投与）群に比べて、顕著に腫瘍の増大が抑制された。
実施例８ 試験管内でのＲａｓ活性化阻害効果
精製した１μＭ ＨＲａｓタンパク質、０．５μＭ Ｓｏｓタンパク質、およびｍａｎｔ−ＧＴＰを１００μｌの緩衝液中で反応させた。緩衝液の組成は次の通りである。２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ７．５、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ、５％ Ｇｌｙｃｅｒｏｌ、各種濃度の阻害剤（ダントロレン、ＣＸ１０３）。コントロールにはＤＭＳＯを用いた。反応は２０℃にて行い、ｍａｎｔ−ＧＴＰに結合したＲａｓの量は、蛍光分光度計にて励起光３５５ｎｍ、蛍光４４８ｎｍにて測定した。結果を図１１に示す。３回の結果を重ねて記載している。ダントロレンおよびＣＸ１０３のいずれもＳｏｓ依存性のＧＴＰ交換反応を抑制していることがわかる。
実施例９ ＣＸ１０３の細胞増殖抑制効果
ＥＧＦ受容体、ＫＲａｓ、ＰＩ３Ｋ、ＢＲａｆ等の変異を有する細胞を含む種々のヒトがん由来細胞株について、ＣＸ１０３による増殖阻害効果を調べた。各種細胞は商業的に入手可能なものを用いた。その結果、正常細胞（ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＶ−１、Ｃｏｓ−１）などと比較すると、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、Ｒａｓに変異のある細胞（ＨＴ２９、Ｃｏｌｏ２０５、Ａ３７５といったＢＲＡＦに変異のある細胞；Ｈ４００６、Ｈ１９７５といったＥＧＦＲに変異のある細胞；Ａｓｐｃ−１、Ｈ３５８、ＨＣＴ１１６といったＲａｓに変異のある細胞）の方がＩＣ５０が低く（図１２）、これらの細胞により強い効果を示すことが分かった。
実施例１０ Ｒａｃ１抑制効果
Ｓｏｓによる細胞膜のラッフリングはＲａｃ１に依存することが知られている。そこで、図４に記載のＳｏｓ活性化系を用いてＲａｃ１活性に対するＤＭＳＯ、ダントロレン（ＣＸ００１）およびＣＸ１０３の影響を解析した。Ｒａｃ１活性はプルダウン法にて解析した。ＦＫＢＰ−ｍＳｏｓ１細胞に、ダントロレン（ＣＸ００１）あるいはＣＸ１０３を投与し、３０分後に、ラパマイシンを投与した。１０分後に細胞を可溶化し、定法に従いプルダウン法でＧＴＰ結合Ｒａｃ１を定量した。図１３に示すように、ＣＸ１０３が有意にＲａｃ１の活性化を抑制していた。
本発明化合物は、Ｒａｓ活性阻害作用を有するので、Ｒａｓを介したシグナル伝達による細胞増殖抑制、特にＲａｓ活性が亢進したがん細胞の増殖抑制に有用である。特にダントロレンは、既に筋拘縮緩解剤として広く使われており、長期投与等での安全性が確認されているので、他の抗がん剤との併用療法を含めて、臨床応用の可能性が極めて高い。
また、本発明の化合物は、これまで有効な治療法が見出されていないＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群の治療薬としても有望である。
本出願は、２０１４年５月２６日出願の日本国特許出願、特願２０１４-１０８５７２を基礎としており、その内容は全て本明細書に包含される。

Claims (9)

  1. 式（Ｉ）：

    （式中、−Ｘ−は、

    で表される基又は単結合を示し；
    ｎは、０、１又は２を示し；
    Ｒ１はハロゲン原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよいアルコキシ基を示し；
    Ｒ１が複数存在する場合には同一であっても異なっていてもよく；
    −Ｙは、

    又は−ＮＨ−Ｒ２で表される基を示し；
    Ｒ２は置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基を示す。）
    で表される化合物、又はその薬学上許容される塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグを含有してなる、Ｒａｓ活性阻害剤。
  2. 式（Ｉ）において、−Ｘ−が

    （式中、ｎは、０又は１を示し；
    Ｒ１はハロゲン原子を示す。）
    で表される基である、請求項１記載の剤。
  3. 式（Ｉ）において、−Ｘ−が単結合であり、
    −Ｙが、−ＮＨ−Ｒ２で表される基であり、
    Ｒ２が置換基を有していてもよいアルキル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリールカルボニル基、置換基を有していてもよいアルコキシカルボニル基、置換基を有していてもよいアルキルカルボニル基、置換基を有していてもよい複素環基、置換基を有していてもよい複素環−カルボニル基又は置換基を有していてもよいチオカルボニル基である、請求項１記載の剤。
  4. 式（Ｉ）において、Ｙが−ＮＨ−Ｒ２で表される基である場合、Ｒ２が置換基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基、それぞれ置換基を有していてもよい、１，３，５−トリアジニル、フタラジニル、ピリジル、キノリニル、チアゾリル及びチエノピリミジニルから選ばれる複素環基、置換基を有していてもよいベンゾイル基、置換基を有していてもよいフェニル基、又はアミノチオカルボニル基である、請求項２又は３記載の剤。
  5. 式（Ｉ）で表わされる化合物が、ダントロレン又は下記のいずれかの構造式：



    で表される化合物である、請求項１記載の剤。
  6. Ｒａｓを介するシグナル伝達による細胞増殖の阻害剤である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
  7. がん細胞増殖阻害剤である、請求項６記載の剤。
  8. Ｒａｓを介するシグナル伝達経路の異常亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療剤である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の剤。
  9. 前記疾患ががん又はＲＡＳ／ＭＡＰＫ症候群である、請求項８記載の剤。
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