TW200918542A - Sirtuin modulating compounds - Google Patents

Description

200918542 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於新穎之瑟土因（sirtuin)_調節性化合物及 其利用方法。本發明亦關於包含瑟土因-調節性化合物與其 他治療劑組合之組成物。 發明背景 【先前技術】

緘默訊息調節劑（SIR)基因家族代表一群存在於範圍從 古細菌至各種真核生物之生物體的基因組中之高度保守性 基因（弗來爾，2000)。所編碼之SIR蛋白質涉及從基因 緘默之調節至DNA修復的各種不同程序。由許多SIR基因 家族編碼之蛋白質顯示在一種25〇胺基酸核心功能域中有 高度序列保守。此家族中已相當特徵化之基因為釀酒酵母 SIR2，其涉及緘默含有指定酵母交配型、端粒位置效應及 細胞老化之訊息的HM基因座（瓜倫提，1999;卡柏來恩 等人，1999;修瑞，2000 )。酵母仏2蛋白質屬於組蛋白 脫乙醯基酶之家族（回顧於瓜倫提，2〇〇〇;修瑞，2〇〇〇)。 於鼠傷寒沙門氏菌…ir2同系物（c〇bB)，功能是作為 一種NAD (煙醯胺腺嗓呤二核普酸）_依賴性ADp_核糖基 轉移酶（常與艾斯卡藍提_席莫瑞那，1998 )。

Sir2蛋白質為使用NAD 作為共受質之第ΠΙ類脫乙醯 基姆（今井等人，2000 ;中穷划·梦/ * _ 文在斯荨人，2000 ;塔内爾等人， 2_;塔尼與莫萃得，讀）。不同於其他乙酿基酶，彼 等有許多係涉及基因緘默，Sir2對第！及_組蛋白脫乙 200918542 醯基酶抑制劑，例如曲古抑菌素（trieh〇statin) A (TSA)不具 敏感性（今井等人，2000 ;藍得利等人，2〇〇〇a ;史密斯等 人，2000) 〇 藉由Sir2進行之乙醯基-賴胺酸的脫乙醯基化，係與 NAD水解作用緊密結合，產生煙醯胺與新穎乙醯基_ADp核 糖化合物（塔内爾等人，2000;藍得利等人，2〇〇〇b;塔尼 與莫萃彳于，2001 )。Sir2之NAD-依賴性脫乙醯基酶活性為 其功能所必須，其可能將其生物學角色與酵母之細胞代謝 作用結合（瓜倫提，2000;今井等人，2〇〇〇;林等人，2〇〇〇 ; 史密斯等人，2000 )。哺乳動物Sir2同系物具有NAD•依賴 性組蛋白脫乙酿基酶活性（今井等人，2〇〇〇 ;史密斯等人， 2〇〇〇)。關於Sir2所介導之功能的大部分資訊係得自在酵 母中進行之研究（賈頓柏格，2〇〇〇;古許林，2〇〇〇)。 生物化學之研究已顯示，Sir2可容易地將組蛋白H3與 H4之胺基末端尾部脫乙醯基化，導致形成bo·乙醯基 核糖與煙醯胺。具有額外SIR2副本之菌株顯現其rDNA緘 默增加且壽命增長3〇%。最近已顯示，秀麗隱桿線蟲隨 同系物（sir-2.1)及果蠅dSir2基因之額外副本會大大延長 該等生物體之壽命。此暗示針對老化之SIR2_依賴性調節途 徑’在廣化早期已出現且已經被相當保守。現今，Sir2基 因據相信已經演化以改善生物體之健康與抗壓性，來增加 其渡過存活逆境的機會。 為SIRT1之同系物，其在原核生物與真核生物 中具保寸性（P.翁揚哥等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 200918542

1365343658(2002))。SIRT3蛋白藉由位於冰末端之獨特 功能域靶定至粒線體的脊（cristae)。SIRT3具有Nad+_依賴 性蛋白質脫乙醯基酶活性，且被遍在地表現於（特別是） 具代謝活性之組織中。在轉移至粒線體時，SIRT3據相信係 被粒線體基質加工肽酶（MPP)裂解成較小、活性的形式（B 許威爾等人，J. Cell Biol. 158: 647-657 (2002))。 卡路里限制已用於70歲以上，以增進徤康並延長哺乳 動物之壽命（馬索羅，2〇〇〇)。酵母（如同後生動物）之 壽命亦藉由類似卡路里限制（例如低葡萄糖）之調停來增 ,。發現到缺乏SIR2基因之酵母與蠅類，當經卡路里限^ 守I7不再存活，此提供SIR2基因介導此類飲食之有益健康 功效的證據（安得遜等人，2〇〇3;赫芳得與羅吉那，2〇〇4)。 而且’減低酵母葡萄糖·反應性cAMp (腺苷3，，51_單磷酸） -依賴性（PKA)途徑之活性的突變，會延長野生型細胞之壽 命但在突變型sir2菌株則否，證明siR2似乎是卡路里限制 途捏之關鍵下游組成分（林等人，2〇〇1)。 【發明内容】 概要 本發明提供新穎的瑟土因（sirtuin)_調節性化合物及其 利用方法。 〃 於一方面，本發明提供如下所詳細描述之式〗至IV的 瑟土因-調節性化合物。 於另一方面，本發明提供使用瑟土因-調節性化合物之 方去，或包含瑟土因·調節性化合物之組成物。於某些具體 200918542 態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性 化合物可用於各種治, w , 、 合禋/σ療應用，包括（例如）增加細胞壽命， 及治療與/或預防許多I錄.左、Λ ή止 才夕谷種疾病與失调症，包括（例如）與 老化或壓力有關之疾病或失調症、糖尿病、肥胖、神經退 化性疾病、化學療法所誘發之神經病、與絕血事件相關之 神經病、眼部疾病與/或失調症、心血管疾病、錢凝結失 調症、發炎、癌症與/或潮紅等。增加瑟土因蛋白質之水平 及/或活性的瑟土因-調節性化合物亦可用於治療個體中會 因增加粒線體活性而獲助益之疾病或失調症，用於增進肌 肉機能’詩增加肌肉ΑΤΡ水平，或用㈣療或預防與缺 乳或絕血相關之肌肉組織損傷。於其他具體態樣，減低瑟 土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_調節性化合物可用 於各種治療應用，包括（例如）增加細胞對壓力之敏感性， 增加細胞凋亡，治療癌症，刺激食慾及/或刺激體重增加等。 如下文進-步敘述，該等方法包含對有其需要之個體投藥 醫藥上有效量的瑟土因-調節性化合物。 於某些方面，瑟土因-調節性化合物可單獨，或與其他 化合物包括其他瑟土因-調節性化合物，或其他治療劑組合 進行投藥。 【實施方式】 詳述 1.定義 定義 如用於本文，下列術語及片語應具有於下文所敘述之 。除非另行定義’所有於本文中所使用之技術與科學 200918542 術語，具有和習於 於4項技藝人士一般了解者相同的定蠤 單數形式“一，， “ 我

Λ 、 一種”及“該”包括複數參考 圍’除非内文有另外清楚地指示。 術語“試劍”田士人丄 ^ β m 用於本文係指化學化合物、化學化合 之〜物、生物巨分子（例如核酸、抗體、蛋白質或其部 刀例如肽類）或從生物材料例如細菌、植物、冑菌或動物 (特別疋哺乳動物）細胞或組織製得之萃取物。此類 之活性可使其適用做為一種在生物學上、生理學上或藥學 上具活性之於個體内局部或全身性執行其作用的“治療 術°°生物可利用的”當引述一化合物時為該項技藝 所'^知者’且意指化合物之使其（或所投予化合物之—部 份置）能被其所投藥之個體或患者吸收、併入或不然在生 理學上可利用的形式。 “瑟土因之生物學上具活性的部分”意指具有生物活 性，例如可進行脫乙醯基化之能力的部份瑟土因蛋白。瑟 土因之生物學上具活性的部分可包含瑟土因之核心功能 域。具有GenBank登錄編號NP—036370之SIRT1，其含括 NAD+結合功能域與受質結合功能域，的生物學上具活性部 为（例如）可包括但不限定於GenBank登錄編號NP_〇36370 之月女基酸62-293，其係由GenBank登錄編號NM_〇 1223 8之 核苷酸237至932所編碼。因此，此區域有時被稱作核心 功此域。SIRT1之其他生物學上具活性部分（亦有時被稱作 核心功能域）包括GenBank登錄編號NP_0363 70之胺基酸 10 200918542 261至447，其係由GenBank登錄編號NM_012238之核苷 酸834至1394所編碼；GenBank登錄編號Np_〇3637〇之胺 基酸242至493，其係由GenBank登錄編號NM—〇12238之 核苷酸777至1532所編碼；或GenBank登錄編號Np_〇3637〇 之胺基酸254至495’其係由GenBank登錄編號nm_〇12238 之核苷酸8 1 3至1 5 3 8所編碼。 術語“陪伴動物，，係指貓與狗。如用於本文，術語 狗意指犬科物種之任一成員，其中有許多不同品種。 術語“貓”意指貓科動物，包括豢養貓及貓科貓屬之其他 成員。 術浯包含及“其包含”係用於總括性、開放的定 義，意指可能包括額外元件。 糖尿病意指高血糖或酮酸中毒，以及因長期高血 糖狀悲或葡萄糖耐受性減低所引起的慢性、一般代謝異 常。“糖尿病，，包含該疾病之第！與„型（非胰島素依賴 性糖尿病或NIDDM )形式。對於糖尿病之危險因子包括下 列因子：男子腰圍超過40英吋或女子腰圍超過乃英吋， 血壓為130/85 mmHg或以上，三酸甘油酯高於i5〇mg/di， 斷食血糖大於100 mg/dl，或男子中高密度脂蛋白少於4〇 mg/dl或於女子少於50 mg/dl。 為一種藉由與其結合而使瑟 直接抑制劑”為一種藉由與 瑟土因之“直接活化劑 土因活化之分子。瑟土因之 其結合而抑制瑟土因之分子 術語“ EDsg”為該項技藝所認知者。於某些具體態 200918542 指藥物使50%測試個體達致死之劑量 樣，ed5。意指藥物產生5〇%其最大反應或功效之劑量，或 者在5嶋或製財產生預定反應之劑量。術語 LD50為忒項技藝所認知者。於某些具體態樣，[〇5〇音 術語“洛 療指數” 、 r u 為該項技藝所認知術語，其係指藥物之治療指數 ld50/ed50。 疋義為 術語“高騰島素血症，，意指個體中血液騰 於正常值之狀況。 ，、水十问

”術語“包括，，係用於意指“包括但不限定於，，。“包 括”與“包括但不限定於，，可相互交換使用。 L 術語“胰島素抗性，，意指，其中正常量騰島素產生相 較於在不具有胰島素抗性之個體中的生物反應，為次正A 生物反應之狀態。 * “騰島素抗性失調症，，（如本文所討論）意指由或導 因於胰島素抗性所造成之任何疾病或病況。實例包括糖 尿病、肥胖、代謝症候群、胰島素抗性症候群、症候群χ、 胰島^抗性、高血壓、血屢過高、高血膽固醇、異常血脂 症、鬲血脂症、異常血脂症、動脈粥樣硬化疾病包括中風、 ，狀動脈疾病或心肌梗塞、高血糖症、高血騰島素症與/或 N血原胰島素症、葡萄糖耐受性減弱、延遲胰島素釋出、 糖尿病併發症包括冠狀心臟疾病、心絞痛、充血性心臟衰 :、癡呆之識別功能、視網媒病、周邊神經病、神經病农 腎小球腎炎、腎小球硬化症、腎病變症候群、高血壓性腎 硬化、某些類型癌症（例如子宮内膜癌、乳癌、前列腺癌 12 200918542 與結腸癌）、姓娠併發症、雌性生瘦健康變差（例如月經 不規則、不孕、不規則排卵、多囊卵巢性症候群（PCOS))、 脂肪代謝障礙、膽固醇相關失調，症（例如膽石、膽囊炎與 膽石病）、錢、障礙性睡眠呼吸暫停與呼吸問題、骨關 節炎，及預防與治療骨質流失例如骨質疏鬆症。 術語“家畜動物”係、指經剔養之四足動物，其包括該 等為肉品與各類副產品而飼養者，例如牛類動物包括牛與 其他牛屬之成員，豬類動物包括豢養豬與其他豬屬之成 員，羊類動物包括料與其他羊屬之成貢，豢養山羊與其 他山羊屬之成員；為特定任務例如用做為負重之獸而飼養 的經馴養之四足動物，例如馬類動物包括馬與其他馬科 屬之成員。 術語“哺乳動物”為該項技藝已知，且例舉性哺乳動 :包括人類、靈長類、家畜動物（包括牛類、豬類等）、 :伴動物（例如犬類、貓類等）A噶齒類（例如小鼠與大 昧、）。 j肥胖”㈤體或承受肥胖之苦的個體，_般係具有身 *量♦曰數（BMI)為至少25《以上之個體。肥胖可能或可 月匕不和胰島素抗性相關。 該術語“非經腸道投藥”及“非經腸道地進行投藥，，為 =技藝所認知，且係指除了内服與局部投藥以外之投藥 m L ’―般係經由注射，且包括（但不限定於）靜脈内、 、動脈内、勒内、囊内、眼眶内、心、内、真皮内、 膜内、氣管、皮下、表皮下、關節内、囊下、蛛網膜 13 200918542 下、脊柱内與胸骨内注射及灌流。 “患者，，、“實體，，、“個體，，或“宿 或非人類動物。 你&人類 術語“醫藥上可接受之載劑，，為該項技藝。 係指涉及攜帶或運送任何主體組成物或其組成之醫藥0上二 =的：料、組成物或媒液，例如液體或固體充填劑、稀 物或其組成相衮之音羞品^ ^ 、主體組成 … 義§必須為“可接受，，，且對該来 …、。。可供做為醫藥上可接受載 一 括.m擁粕 又戰^之材科的一些實例包 .()糖類，例如乳糖、葡萄糖與薦糖；⑺殿粉 ::殿粉與馬铃著殿粉；(3)纖維素與其衍生物，例如心 :::納：基纖維素纖維素醋酸醋;(4)成粉末之黃耆二 之蝶二:膠：石形劑，例如可可脂㈣ 撖欖油、玉“：大二生VM麻油、葵花油 '芝麻油、 多… （10)二醇類，例如丙二醇；⑴） 西旨類如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇與聚乙二醇；（12) 二"歹1如油酸乙酯與月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑， :::氧化鑛與氣氧化K丨塊™熱原水二 溶液』水，（18)林格氏溶液；（19)乙醇；（2〇)鱗酸鹽緩衝 72GO其他用於醫藥調合物之無毒性可相容物質。 知，衧:預防性或“治療性，，治療為該項技藝所認 況：指宿主。若其係於臨床顯現不希望病 投藥，，^動物之疾病或其他不希望狀態）之前進行 5、 *該項治療為預防性，亦即其保護宿主不會發展成 200918542 該不希望病況’而若於臨床顯現不希望病況之後進行投 ‘ 藥，則該項治療為治療性（亦即欲縮減、改善或維持現存 之不希望病況或從其產生之副作用）。 術語“無熱原’，（關於組成物）意指不含有其量會在 该組成物已投藥予之個體中導致有害作用（例如，刺激、 發熱、發炎、腹瀉、呼吸困擾、内毒性休克等）的熱原的 組成物。例如，該術語意欲包含其不含（或實質上不含） ，諸如（例如）脂多糖（LPS)等内毒素之組成物。 細胞之‘‘複製壽命，，意指由個別“母本細胞，，所產生 之子細胞數目。另一方面，“時間性老化”或“時間性壽 命意指一群非分裂中細胞當被剝奪養分時仍保持存活的 時間長度。“增加細胞壽命”或“延長細胞壽命，，當應用 於、’、田胞或生物體時，意指增加由單一細胞所產生之子細胞 數目，增加細胞或生物體對抗壓力及和損傷（例如對、 蛋白質之損傷）戰鬥之能力；及/或增加細胞或生物體可於 特別條件，例如壓力（如熱休克、滲透壓力、高能量照射、 化學誘導之壓力、DNA損傷、不適當的鹽水平、不適當的 氮水平或不充足的營養物水平）下存活或已活的狀態存在 達較長時間之能力。使用本文中所述之方法，壽命可增加 至少約 20%、30%、40%、50%、60%，或介於 2〇%至 7〇%、 30%至60%、40%至60%或以上。 瑟土因-活化性化合物，，意指使瑟土因蛋白質水平增 加，且/或增加瑟土因蛋白質之至少一種活性的化合物。^ 例舉性具體態樣中，瑟土因_活化性化合物可使瑟土因蛋白 15 200918542 質之至少一錄；^η 生物/舌性，增加至少約10%、25%、50%、75%、 100%或以上。瑟土 ^ , 因蛋白質之例舉性生物活性包括（例如） — 、ρ53之脫乙醯基化；延長壽命；增加基因組之穩 :性’緘默轉錄作用；及調控母本細胞與子代細胞間之經 氧化蛋白質的分離。 I 瑟土因-活化性化合物”意指使瑟土因蛋白質水平減 y且/或減低瑟土因蛋白質之至少一種活性的化合物。於 例舉性具體態樣中’瑟土因-活化性化合物可使瑟土因蛋白 質之至少—種生物活性減低至少約10%、25。/。、50%、75%、 100%或以上。瑟土因蛋白質之例舉性生物活性包括（例如） 組蛋白與P53之脫乙醯基化；延長壽命；增加基因組之穩 定性，緘默轉錄作用；及調控母本細胞與子代細胞間之經 氧化蛋白質的分離。 瑟土因-調節性化合物，’意指如本文中所述之式 (I)-(IV)化合物。於例舉性具體態樣中，瑟土因·調節性化合 物可增量調節（例如活化或刺激）、減量調節（例如抑制 或壓制）或不然改變瑟土因蛋白質之功能特性或生物活 性。瑟土因-調節性化合物可作用於直接或間接調節瑟土因 蛋白質。於某些具體態樣，瑟土因-調節性化合物可為瑟土 因-活化性化合物或瑟土因-抑制性化合物。 “瑟土因蛋白質”意指瑟土因脫乙醯基酶蛋白家族 (或較佳地係指sir2家族）之成員，其包括酵母Sir2 (GenBank登錄編號P53685)、秀麗隱桿線蟲sir-2.1 (GenBank 登錄編號 NP—501912)及人類 SIRT1 (GenBank 登 16 200918542 錄編號 NM_012238 與 Νϊ>—〇36370 (或 AF083 106))與 SIRT2 .(GenBank 登錄編號 NM—012237、NM—030593、NP_036369、 NP_085 096與AF083 107)蛋白質。其他家族成員包括四種稱 作基因” （Sir2之同系物）之額外酵母類-Sir2基因 HST1、HST2、HST3與HST4，及五種其他人類同系物 hSIRT3、hSIRT4、hSIRT5、hSIRT6 與 hSIRT7 (布拉赫曼 等人（1995) Genes Dev. 9:2888 及弗瑞伊等人（1999) BBRC 260:273 )。較佳之瑟土因為該等相較於與SIRT2,係和SIRT1 / (亦即hSIRTl及/或Sir2 )共有較多相似性者，例如該等具 有至少一部份存在於SIRT1而不存在於SIRT2,例如SIRT3 所具有之N-末端序列。 “ SIRT1蛋白質”意指瑟土因脫乙醯基酶之Sir2家族 的之成員。於一項具體態樣，SIRT1蛋白質包括酵母Sir2 (GenBank登錄編號P53685)、秀麗隱桿線蟲 Sir-2.1 (GenBank 登錄編號 NP—501912)、人類 SIRT1 ( GenBank 登 錄編號 NM_012238 或 NP_036370 (或 AF083 106))與人類 SIRT2 ( GenBank 登錄編號 NM_012237、NM—030593、 NP_03 63 69、NP_085 096 或 AF083 107 )蛋白質，及其同等 物與片段。於另一項具體態樣，SIRT1蛋白質包括其包含一 段由（或實質上由）列示於GenBank登錄編號NP_〇36370、 NP_501912、NP_085096、NP_036369 或 P53685 之胺基酸序 列所組成的序列之多肽。SIRT1蛋白質包括其包含全長或一 部份列示於GenBank登錄編號NP_036370、NP_501912、 NP_085096、NP_036369或P53685之胺基酸序列；列示於 17 200918542

GenBank 登錄編號 NP—036370、NP—501912、NP—085096、 NP—03 63 69 或 P53685 而具有 1 至約 2、3、5、7、10、15、 20、30、50、75或更多保守性胺基酸取代之胺基酸序列； 與 GenBank 登錄編號 NP_036370、NP_501912、NP_085096、 NP_036369 或 P53685 具有至少 60〇/〇、70〇/〇、80%、90%'95%、 96%、97%、98%或99%同一性之胺基酸序列的多肽，及其 功能性片段。本發明之多肽亦包括GenBank登錄編號 NP 036370 ' NP 501912 > NP 085096 ' NP 036369 或 P53685 _ — — — 之同系物（直系同源與旁系同源）、變體或片段。 “ SIRT3蛋白質”意指瑟土因脫乙醯基酶蛋白家族之 成員，及/或指SIRT1蛋白質之同系物。於一項具體態樣， SIRT3 蛋白質包括人類 SIRT3 ( GenBank登錄編號 AAH01042、NP_036371 或 NP_001017524)與小鼠 SIRT3 (GenBank登錄編號NP_071878 )蛋白質，及其同等物與片 段。於另一項具體態樣，SIRT3蛋白質包括其包含一段由（或 實質上由）列示於 GenBank 登錄編號 ΑΑΗ01042、 NP_036371、NP_001017524 或 NP_071878 之胺基酸序列所 組成的序列之多肽。SIRT3蛋白質包括其包含全長或一部份 列示於 GenBank 登錄編號 ΑΑΗ01042、NP_036371、 NP__001017524或NP_071878之胺基酸序列；列示於

GenBank 登錄編號 AAH01042、NP_036371、NP_001017524 或 NP_071878 而具有 1 至約 2、3、5、7、10、15、20、30、 50、75或更多保守性胺基酸取代之胺基酸序列；與GenBank 登錄編號 AAH01042、NP—036371、NP_001017524 或 18 200918542 NP—071878 具有至少 60%、70%、80%、90%、95%、96%、 97%、98%或99%同一性之胺基酸序列的多肽，及其功能性 片段。本發明之多肽亦包括GenBank登錄編號AAH01 042、 NP_036371、NP_001017524 或 NP—071878 之同系物（直系 同源與旁系同源）、變體或片段。於另一項具體態樣，SIRT3 蛋白質包括其係藉由將SIRT3蛋白質以粒線體基質加工肽 酶（MPP)及/或粒線體中間物加工肽酶（Mip)裂解而產生之片 段。 術語“全身性投藥，，、“全身地投藥”、“周邊性投 藥”及“周邊地投藥”為該項技藝所認知，且係指主體組 成物、治療劑或其他物質之除了直接進入中樞神經系統以 外的投藥方式，以使其能進入患者之全身，而因此進行代 謝作用及其他類似過程。 術》。治療劑為該項技藝所認知，且係指任何其為 生物學上、生理上或藥理學上具活性，可於個體内局部或 全身性作用之化學部份。該術語亦意指任何欲用於診斷、 治癒、減輕、治療或預防疾病，或用於增進動物或人體中 之可希望身體或精神發展及/或狀況的物質。 術"吾治療功效為該項技藝所認知，且係指動物（特 別是哺乳動物，且更特別地為人類）冑中由藥理學上具活 性之物質產生的局部或全身性功效。片肖“治療上有效 量”意指’使物質能於可應用至任何治療之合理助益/危險 比例下，產生某種所希望的局部或全身功效之量。此類物 質m有效4將隨欲受治療個體與疾病狀況、個體之 19 200918542 體重與年齡、疾病狀況之嚴重度 其可由習於哕樂方式等而有所變化， 八j由s於β亥項技藝人士決定。 Λ, . j ^ ’本文所述之草此组 成物可以在可應用至此類治療 《之某一且 鉍备饮丄t 理助益/危險比例下產生 所希望功效之足夠量進行投藥。 r座玍 治療”某一病況或疾病你 U m n卜絲 s，>D癒以及改善該病況 取疾病之至少一種症狀。 術語“視力損傷，，意指視力 如手術）往往僅部份可回復或 復、進订治療時(例 .& 』口復。特別麗曹之if 損傷稱為眼盲”或“視力喪央” . 長失 ’其意指視力完全黍 失、視力變差大於2〇/2〇〇 1法 …、次經由矯正鏡片改盖，戎 減少大於20度直徑（1()度半徑）Q 文。次視野 2.瑟土因調節刻 於一方面’本發明提供用於治療或預 與失調症，包括（例如）與老 疾病 堅力有關之疾病或失調 症、糖尿病、肥胖、神經退化性 ,^ 、病眼部疾病與失調症、 心血管疾病、血液凝結失調症、 赞尺、癌症及/或潮紅等之 新穎瑟土因·調節性化合物。增加 土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因_調節性化合物， 力J用於治療個體中會因 增加粒線體活性而獲助益之疾病或 内兄天調症，用於增進肌肉 機能，用於增加肌肉ATP水平，或用认1 α Α用於治療或預防與缺氧 或絕金相關之肌肉組織損傷。本文中所揭示之直他化合物 可適用於醫藥組成物，及/或-或多種本文中所揭示之方法。 於一項具體態樣’本發明之亭土田 5 瑟土因·調節性化合物係由 結構式⑴表示： 20 200918542 η ν

或其鹽類，其中： X為Ν或S ; 當X為Ν時Υ為S，或者當X為S時Υ為Ν; R為-Η或經取代或未經取代之烷基基團； R1為增溶基； R2為-Η或經取代或未經取代之烷基基團； R3為經取代或未經取代之單環芳基基團； R4為-Η、鹵素或經取代或未經取代之烷基基團。 於某些具體態樣，R為-Η或-CH3。 於某些具體態樣，R2為-H或-CH3。 於某些具體態樣，R4為-H、幽素或-CH3。 於某些具體態樣，結構式（I)之化合物係由結構式（II)表

21 200918542 於某些具體態樣，MR2各別獨立地為·Η或-CH3。 於某些具體態樣’ R3為經取代或未經取代之雜芳基基 團，例如經取代或未經取代之含氮雜芳基縫，特別是經 取代或未經取代之吡啶基基團（例如，未經取代之吡啶基）。 於某些具體態樣，W為經取代或未經取代之苯基基 團’例如甲基苯基、_苯基或未經取代之苯基基團。 於某些具體態樣，Ri為經取代或未經取代之雜環烧基 基團，代表性地其中該雜環基部份係經由雜原子接附至烷 基騎°於某些此類具體態樣，Rl為經取代或未經取代之 基基團，例如經取代或未經取代之含氮雜環基甲 ^團，其（例如）包括含有氮原子與視需要地_個選自 2及氧之第二雜原子的雜環基甲基基團。對於Ri中雜邻 =舉性取代基包括一或多個經基、南基或甲基基雜;： 或構式（1)之化合物係由結構式⑽

22 (III) 200918542 Μ

R及R^-R3之適宜值係如前所述。 由結構式⑴代表之化合物包括該等由結構式（V)及（VI) 表示者： Μ

23 200918542 Μ

(VI)。 本發明之化合物（包紅太1。。 ， ^月之新穎化合物）亦可用 於本文所述之方法。 本發明之瑟土因-調節性化合物有利地調節瑟土因蛋白 質之水平及/或活性，特別是瑟土因蛋白質之脫乙醯基酶活 性。 分別地或除了前述性質以外，本發明之某些瑟土因-調 節性化合物於該化合物有效調節瑟土因蛋白質（例如， SIRT1及/或SIRT3蛋白質）之脫乙醯基酶活性的濃度下， 實質上不具有下列一或多種活性：抑制ΡΙ·3_激酶、抑制醛 還原酶、抑制酪胺酸激酶、轉活化（transactivate ) EGFr 酪胺酸激酶、冠狀動脈擴張、或解痙攣活性。 烧基為完全飽和之直鍵、支鍵或環狀非芳族烴。代表 性地，直鏈或支鏈烷基基團具有1至約20個碳原子（較佳 地為1至約10個），而環狀烷基基團具有3至約i 〇個碳 原子（較佳地為3至約8個）。直鏈與支鏈烷基基團之實 24 200918542 ::!包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二_丁基、 二A且丁基戊基、己基、庚基及辛基。C1_C4直鏈或支鏈 烷基基團亦稱之為“低碳數，，烷基基團。 芳族基團（芳基）包括碳環類芳族基團例如苯基、# 基與,i基’及雜芳基基團例如㈣基、噻吩基"夫喃其、 η比咬基、哺咬基、娘喃基…基、料基…比畊二 11坐基、聘唾基與四D坐基。 „芳族基團亦包括稠合多環芳族環系，其中碳環類芳族 環或雜芳基環倍短< ^^ 、稠σ至一或多個其他雜芳基環。實例包 括本:^吩基、苯并Μ基、1Ή基、㈣基、苯并嘆唾 土本并聘坐基、苯并味口坐基、喹琳基、異㈣基及異 哚基。 非芳族雜環類環為其環中包括-或多個雜原子，例如 ^m之非芳族碳環類環。該環可為五、六、七或八. 員Θ例G括四氫咬_基、四氫嘆吩基、嗎福琳基、硫代 嗎福琳基L定基、六氫，基、六氫〇比〇定基與嘆吐咬 基，及糖類之環狀形式。 經稠合至第二環之環共有至少—個共同的鍵結。 位於烷基、非芳族雜環或芳基基團（碳環類與雜芳基） 上之適宜取代基為’該等實質上不會干擾所揭示化合物可 具有一或多種本文中所招 又甲所揭不特性之能力者。當具有某一取 代基之化合物相較於不具有該取代基之化合物，其特性規 模減小超過約50%時，則該取代基實質上干擾化合物之特 性。適宜取代基之實例包括姻、i素（如.C1、-HF)、 25 200918542 -ORa、-〇-CORa、-CORa、-C(0)Ra、-CN、-NO2、-COOH、 -COORa、-0C02Ra、-C(0)NRaRb、-0C(0)NRaRb、-S03H、 -NH2、-NHRa、-N(RaRb)、-COORa、-CHO、-CONH2、 -CONHRa、-CON(RaRb)、-NHCORa、-NRCORa、-NHCONH2、 -NHCONRaH、-NHCON(RaRb)、-NRcCONH2、-NRcCONRaH、 -NRcCON(RaRb) 、 -C(=NH)-NH2 、 -C(=NH)-NHRa 、 -C(=NH)-N(RaRb) 、 -C(=NRc)-NH2 、 -C(=NRc)-NHRa 、 -C(=NRc)-N(RaRb)、-NH-C(=NH)-NH2、-NH-C(=NH)-NHRa、 -NH-C(=NH)-N(RaRb) -NH-C(=NRc)-NHRa -NRdH-C(=NH)-NH2 -NRd-C(=NH)-N(RaRb) -NRd-C(=NRc)-NHRa、 、 -NH-C(=NRc)-NH2 、 、 -NH-C(=NRc)-N(RaRb) 、 、 -NRd-C(=NH)-NHRa 、 、 -NRd-C(=NRc)-NH2 、 #» v. NRd-C(=NRc)-N(RaRb)、-NHNH2、 -NHNHRa、-NHRaRb、-S02NH2、-S02NHRa、-S02NRaRb、 -CH=CHRa、-CH=CRaRb、-CRc=CRaRb、CRc=CHRa、 -CRc=CRaRb、-CCRa、-SH、-SOkRa( k 為 0、1 或 2)、-S(0)k0Ra (k為0、1或2 )及-NH-C(=NH)-NH2。Ra-Rd各別獨立地係 選自脂族、苯甲基或芳族基團，較佳地為烷基、苯甲基或 芳基基團。位於Ra-Rd上之視需要取代基係選自 NH2、 NHCC"脂族）、N(C"脂族）2、鹵素、Cw 脂族、OH、CKCw 月旨族）、no2、cn、co2h、code!·*脂族）、0(鹵基C卜4脂 族）或鹵基Ci-4脂族，其中各前述之Cb4脂族基團為未經取 代。此外，-NRaRb (—起）亦可形成經取代或未經取代之 非芳族雜環基團。非芳族雜環基團（苯曱基或芳基基團） 26 200918542 亦可具有脂族或經取代脂族基團做為取代基。經取代脂族 基團亦可具有非芳族雜環、經取代之非芳族雜環、苯甲基、 經取代之苯甲纟、芳基或經取代之芳基基團做為取代基。 經取代㈣、非㈣雜環錢、經取代之芳基或經取代之 苯曱基基團可具有一個以上取代基。 位於芳基環上之代表性取代基係選自增溶基，函素； -R° * -OR0 > -SR° J 1,2-55 Ψ ^ Si Μ, * λ Ο ατ. ^ 片 W亞甲一乳基，1，2-亞乙二氧基；視需

要經R°取代之苯基（Ph);視需要經R。取代之_〇(抑）； -(CHAjPh)，視需要經R。取代；_CH=CH(ph)，視需要經 R°取代之 _C(0)C(0)R0 ; -N〇2 ; _CN ； -N(R°)2 -C(0)CH2C(0)R° ； -co2R〇; -C(〇)R〇 ； -s(〇)2r° ; -S02N(R°)2 ; -s(o)R。； -nr〇so2n(r〇)2 ; _NR〇s〇2R。； _c(=s)N(RO)2 ;或 -CeNH)-N(R。）2;或其中R。之各獨立事件係選自氫、視需 要經取代之c]_6脂族、未經取代之5_6員雜芳基或雜環、苯 基、-O(Ph)或-CH2(Ph)，或者（儘管如前述之定義）R。之兩 獨立事件（位於相同取代基或不同取代基上）與各R。基團 所鍵結之原子一起形成具有〇_3個獨立選自氮、氧或硫之 3-8-員環烷基、雜環基、芳基或雜芳基環。位於r。之脂族 基團上的視需要取代基係選自，其中NH2、NHdd脂族）、 脂族）2、鹵素、Cl_4 脂族、〇H、〇(Ci 4 脂族）、N〇2、 CN C02H、c〇2(Ci-4脂族）、〇(鹵基Cu脂族）或鹵基Cu 脂族，其中各前述之R。之Ci 4脂族基團為未經取代。 由本發明假想之取代基與變數的組合，僅為該等導致 形成適宜化合物者。如用於本文，術語“穩定的，，意指化 27 200918542 口物擁有足以令其製造之穩定性，且可使該化合物之完整 性維持-段，可用於本文中所詳述的目的之足夠時間。 如用於本文，“增溶基”為具有足以促進或增加其中 有包括該基團之化合物之水溶解度（當相較於不包括該基 團之類似化合物時）的親水性特徵之部份。親水㈣= /. ί. 藉由任何方式，例如藉由包括可於用以形成帶電荷部份之 條件下（例如，緩酸、硫酸、填酸、胺類等）離子化的官 月匕土八匕括永久性電荷之基團（例如四級錢基）；及/哎 雜原子或雜原子基團（例如〇、S、N、NH、N_(CH2)y-Rr、 N-(CH2VC(0)Ra、N_(CH2)y C⑼〇Ra、N_(cH^_s⑼必、 N-(^CH2)y-S(0)2〇Ra、N (CH2)y C(〇)NRaRa等其中舻係選 自虱、低碳數烷基、低碳數環烷基、（C6-C14)芳基、苯基、 萘基、（C7-C2G)芳基貌基及苯甲基，其中Ra為視需要經取 代且y為；|於〇至6之整數）、視需要取代之雜環基團 (例如-(CH2)n-Rb、_(CH2)n_c(〇)_Rb、_(CH2)n 〇 (CH丄^， 其中R係選自視需要經取代之飽和單環雜環、視需要經取 代之飽和雙環_合雜環、視需要經取代之飽和雙環螺雜 環、視需要經取代之雜芳基及視需要經取代之部份經取代 非芳基料；h為介於0至2之整數）。應了解，存在 於Ra或Rb上之取代基並不需要較其欲包含於本發明範圍内 之未經取代相對部份促進或增加水溶解度。所需要的是使 此類取代基不會顯著逆轉由未經取代之Ra或Rb部份所致力 的水溶解度增加。 於一項具體態樣，增溶基使缺乏該增溶基之相對應化 28 200918542 合物之水溶解度增加至少5_ s . 倍，較佳地至少1 〇-倍，更佳岫 至少20-倍且最佳地至少5(κ倍。 更佳地 於一項較佳具體能t 瑕態樣，增溶基為且4 . -(CH2)n-Ri〇〇_N(Ri〇i)(Rl〇1 今具式. 八）之部份，其中： η係選自〇、i或2 ; R100係選自鍵結、-C(0)·或傅灿：且 各r1Q1係獨立地選自： a.氫； b· C^-C：4直鏈或支鏈烷基，其中該烷基係視需要地經鹵 OH 〇-((^_(24 直鏈或支鏈烧基）、n(Ri，）(Ri，）戍 取代； C. d· ^25I ^26 24 、/乙28 乙27 22、

Z

'^23 > e. R广

或

Z35I W共同與其所 Μ 2 30 38 ζ •37 .32、 Η 鍵結之氮原子一起形成結構 t 33 或 :或 g·二RlG1部份共同與其所鍵結之氮原子一起形成含有 1二3個額外N原子之5_員雜芳基環，其中該雜芳基環係 視玲要地經R1 ’取代· 29 200918542 其中： 糸獨立地選自_〇_、_s_、_NR〆·或-r5〇)(r5〇)·，其 中： z2〇 z21、z22 及 z23 中至少三者為 _c(r5〇)(r5〇)_ ; Z24、Z25、7、、7 TX 1 26 Z27 及 Z28 中至少三者為·€(κ50)(κ50)-; 3〇 31 Ζ32及Ζ”中至少四者為-C(R5〇)(R50)·;且 34 Z35 Z36、Z37 及 Z38 中至少四者為 _C(R50)(R50)_; 各Rl，係獨立地選自^ ^3直鏈或支鏈烧基，視需 要地經一或多個獨立地選自_基、·CN、_〇H、_〇cH3、_NH2、 -nh(ch3= -N(CH3)2或=〇之取代基取代； 各R係獨立地選自Rii、鹵基、CN、〇H、〇_(Cl_C4 或=0 ; 任何一適且之非環狀R5〇係視需要地值節或經由C 1至 C2伸烧基伸稀基或烧二亞基橋彼此鍵結，而產生雙環稍 合或螺環；且

結構，係視需要地經苯并稠合或稠合至單環雜芳基而產生 雙環。 為求清楚，術語“ c〗至C2伸烷基、伸烯基或烷二亞基 橋思 士曰 ^ Y貝多口構-CH2-、-CH2-CH2·、-CH=，、ΤΗ=(ΓΗ-或=CH-CH=。視需要地彼此鍵結之二R5〇部份，可位於相同 碳原子或不同碳原子上。前者產生螺雙環，而後者產生稠 30 200918542 合雙環。習於該項技藝人士顯而易知，當二 形成環（直接或經由前述其中-種橋連而 於各π上之-或多個末端氫原子。於是，可用於會失去位 “適宜之非環R5G”部份，為 ；形成環之 非環R5。。 為-包含至少-個末端氫原子之 之部份，其中n及R丨01 #+句/、叭.-(CH2)n_〇_Rl 六fn及R 係如前述所定義。 ;另較佳具體態樣，增溶基炎目斗、 之部份，合基為具式：·ΚΗ2)η_〇_Β 於另 丨伤其中η及，係如前述所定義。 項更佳之具體態嫌 描V? «· L樣，增溶基係選

31 200918542

/ \ I N YR^ N-N 、 ,N、 ,0 N-

isr、、n W / N-N \ R HO,

OH 、、R1从

〇RV八O 、或Rl_ 0，其中R!'係如前述所定義。 於一項甚至更佳之具體態樣，增溶基係選自2-二甲基 胺基乙基胺甲醯基、六氫吡啡-1-基羰基、六氫吡啡基甲基、 二甲基胺基曱基、4-甲基六氫吡畊-1-基甲基、4·胺基六氫吡 啡-1-基甲基、4·-氣六鼠°比啡-1-基甲基、嗎福琳基曱基、0比 32 200918542 咯啶-1-基甲基、2-氧-4-苯曱基六氫吡畊-i_基甲基、4-苯甲 基六氫。比啡-1-基甲基、3 -氧六氫n比啡-1-基甲•基、六氫β比啡 -1-基甲基、六氫吡啡-1-基乙基、2,3-二氧丙基胺基曱基、 噻唑啶-3-基曱基、4-乙醯基六氫吡啡_1_基曱基、4_乙醯基 六氫吡啡-1-基、嗎福啉基、3，3-二氟氮雜環丁烷-ΐ_基甲基、 2//-四唾-5-基甲基、硫代嗎福琳_4_基甲基、1 _氧硫代嗎福淋 -4-基甲基、1,1-·—氧硫代嗎福琳-4-基曱基、1 // π米唾_ 1 _基甲 基、二甲基六氫°比明基、4_經基六氫β比啡小基、#_ 曱基（1-乙醯基六氫比啡-1-基）-胺基曱基、曱基奎寧環_3_ 基-胺基甲基、1//-1，2,4-三唑-1-基曱基、^甲基六氫吡啡_3_ 基-氧基甲基或4_敗六氫0比啡-1-基。 至無包括於前述所列任何定義之程度，術語“增溶 基”亦包括所揭示接附至1-環丙基-心氟-丨，‘二氫_4_氧喹 啉-3-羧酸（環丙氟哌酸）及其衍生物之7_位置的部份，如 揭示於 PCT 公開案 WO 2005026165、WO 2005049602 與 WO 2005033108，及歐洲專利公開案 Ep 〇343524、Ep 0688772、EP 〇1 53 163、EP 〇159m;以及於美國專利公開 案2006/0035891中所描述之“水_增溶基，，。各此等專利公 開案之揭示係以引用方式納入本文。 本文中所揭示之化合物亦包括經部份及完全氘化之變 體。於某些具體態樣，存在有一或多個氘原子以供進行動 力學研究。習於該項技藝人士可選擇有此㈣原子存在之 部位。 本發明亦包括本文所述瑟土因_調節性化合物之鹽類， 33 200918542 、一疋=上可接受之鹽類。擁有充分酸性、充分鹼性或 該一性之g能基的本發明化合物，可和任何許多的無 類、及無機與有機酸類形成鹽類。或者，固有帶電荷之 合物（例如具有四級氮者）可和適當反荷離子（例如，^ 化物如溴化物、氣化物或氟化物，特別是溴化物 類。 〜风 本文中所描述之化合物及其鹽類亦包括化合物及其鹽 類之水合物（例如，半水合物、單水合物、二水合物、二 水合物、四水合物）與溶劑合物。適用於製備溶劑合_ 水合物之溶劑’-般可由習於該項技藝人士選用。 化合物及其鹽類可以非晶形，或結晶（包括共結晶及 多晶形）形式存在。 -般用於形成酸加成鹽之酸類為無機酸類，例如氫氣 酸、氫溴酸' 氫碘酸、轳舻淡缺够加 7IL酉夂、磷酸專類’及有機酸類例如 P-甲笨磺酸、甲磺酸、簟 ^ 早I、P-溴本基-確酸、碳酸、琥珀 酸、檸檬酸、苯甲酸、_ @ 赌酸4類。此類鹽類之實例包括硫 酸鹽、焦硫酸鹽、酸式炉确 _ . . ^ 硬酸鹽、亞硫酸鹽、酸式亞硫酸鹽、 磷酸鹽、單氫磷酸鹽、-急读祕路^ 一虱磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、 氣化物、澳化物、碘化物、醋酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛 酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸晻、 、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、 丙炔S夂鹽草酉夂鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸 二酸鹽、反丁婦二酸睡、 风順丁烯二酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、 己炔-1，6_二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、 二確基苯甲酸鹽、經基笨甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、欧酸 34 200918542 鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、 苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、加瑪_經基丁酸鹽、乙醇 酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘_丨_磺酸鹽、萘 -2 -續酸鹽、扁桃酸鹽等類。 驗加成鹽包括該等衍生自無機驗類，例如錢或驗金屬 或驗土金屬氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等類者。此類可 用於製備本發明鹽類之驗類因此包括氫氧化鈉、氫氧化 鉀、氫氧化銨、碳酸鉀等類。 根據另-項具體態樣，本發明提供製造前述所定義之 瑟土因-調節性化合物的方法。該等化合物可使用習知技術 合成得。有利地匕等化合物係從已可利用之 便地合成得。 於-項具體態樣，本發明之某些化合物係根據下列方 法製備得。首先，將具下式之化合物：

S\^^nh2

V r100 ， 其中R1GG為可經轉變成經脫離基，例如烷氧 如乙氧基幾基）取代之燒基（例如甲基）的基圏，:（_例 離基，2，-石肖基苯乙酮（例如2_卣基，2,_石肖*苯乙綱，其、^脫 代表性地3為溴基或氣基）反應而形成下列化合、基 \ o2n '

：N 1 R100 35 200918542 然後將此化合物反應而使-R__轉化成_Rl。於其中_尺10£ 為烧氧基㈣之具體態樣，則代表性地首先將基團轉化成 竣酸（例如使用驗類，例如像仏⑽或職之驗金屬氨氧

如soci2)存在下、# y 。州、例 仕下進行反應而形成產物化合物。 可用於合成本文所述瑟土因調節性化合物之合 轉化作用與方、、支A & 取1匕學 興方去為該項技藝已知，且包括（例如）該等 36 200918542 描述於R·拉洛克，嫁合才邊#允作摩（1989) ; T w·格林能與 Ρ· G· M.伍斯，才譏合戒之获護差，2乂五4 (1991) ; L.費 瑟與M.費瑟，席淤才磯合竑之#瑟典費荔戌轼痧〇994)，· 及L•派奎特，編著，方磯合竑試，齋之r存全,（1995)中者。 於一項例舉性具體態樣，瑟土因_調節性化合物可能橫 跨細胞之胞質膜。例如，化合物可具有至少約2〇%、5〇%、 75%、80%、90%或95%之細胞_可穿透性。

本文所述之瑟土因·調節性化合物亦可具有一或多種下 列特徵：化合物可實質上對細胞或個體為無毒性；化合物 可為具2000 amu或以下、i _ _或以下之有機分子或小 刀子，化合物可於正常大氣條件下具有至少為約3〇天、6〇 天、120天、6個月或1年之半衰期；化合物可於溶液甲具 有至少為約30天、60天、12〇天、6個月或（年之半衰期； 瑟土因-調節性化合物可於溶液中，較白蔡董醇(W㈣ 穩定至少約5〇%、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍或100 倍；瑟土因-調節性化合物可促進職修復因？ Μ。之脫 乙醯基化作用；瑟土因_調節性化合物可促進祕⑽之脫 乙醯基化作用；化合物可增加-般轉換速率，及增強細胞 對TNF-所誘發細胞凋亡之敏感性。 於某些具體態樣’瑟土因-調節性化合物於（例如活體 内）有效調節瑟土因之脫乙醢基酶活性的濃度下，不具有 =何抑制第㈣組蛋白脫乙醯基酶⑽ACs)in_DAc 或HDACs I盘II之實皙台t 士 .,, + n伙 貝月^。例如，於較佳具體態樣中瑟 土因-調節性化合物為瑟土因-活化性化合物，且係選擇具有 37 200918542 對於活化瑟土因脫乙醢基酶活性之EC5〇值，較對於抑制 HDAC I及/或HDAC II之EC50值少至少5倍，且甚至較佳 地少至少10倍、1〇〇倍或甚至1〇〇〇倍用於分析肋从I 及/或HDAC II活性之方法為該項技藝所熟知，且進行此類 分7之套組可於商業上購得。參見例如，Bi〇visi〇n股份有 限公司（山景，CA;網際網路網站bi〇visi〇n⑶扪）及湯瑪 斯科學（史威波羅，NJ ;網際網路網站t〇massci, c〇m)。 於某二具體態樣，瑟土因_調節性化合物不具有任何調 節瑟土因同系物之實質能力。於一項具體態樣，人類瑟土 因蛋白邊之活化劑，於（例如活體内）有效活化人類瑟土 因，脫乙醯基酶活性的濃度下，可能不具有任何活化得自 低等真核生物，特別是酵母或人類病原菌之瑟土因蛋白質 的實貝此力。例如，瑟土因活化性化合物可選擇具有對於 活化人類瑟土因（例如SIRT1及/或SIRT3)脫乙酿基酶活 性之EC5Q值，較對於活化酵母瑟土因（例如Sir2 (如令珠 =屬、、釀酒酵料））之心值少至少5倍，且甚至較:地 ^至少1〇倍、1〇0倍或甚至1000倍。於另一項具體態樣， 传自低等真核生物（特別是酵母或人類病原菌）之瑟土因 蛋白質的抑制劑’於（例如活體内）有效抑制得自低等真 核生物之瑟土因蛋白質之脫乙醯基酶活性的濃度下，不具 有任何抑制得自人類之瑟土因蛋白質的實質能力。例如， 瑟土因·抑制性化合物可選擇具有對於抑制人_瑟土 ，siRTi及/或sirT3)脫乙酿基酶活性之％。值，較對於 印制酵母瑟土因（例如Sk2 (如念珠菌屬、壤酒酵母等）)、 38 200918542 之ic50值少至少5倍，且甚至較佳地少至少10倍、100倍 或甚至1000倍。 於某些具體態樣，瑟土因-調節性化合物可具有調節一 或多種人類瑟土因同系物，諸如（例如）一或多種人類 SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6 或 SIRT7之能力。於一項具體態樣，瑟土因-調節性化合物具 有調節SIRT1及SIRT3蛋白質之能力。 於其他具體態樣，SIRT1調節劑於（例如活體内）有效 調節人類SIRT1之脫乙醯基酶活性的濃度下，不具有調節 其他瑟土因蛋白質同系物，諸如（例如）一或多種人類 SIRT2、SIRT3、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6 或 SIRT7 之實質能力。例如，瑟土因-調節性化合物可選擇具有對於 調節人類SIRT1脫乙醯基酶活性之ED5〇值，較對於調節一 或多種人類 SIRT2、SIRT3、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6 或SIRT7之ED5〇值少至少5倍，且甚至較佳地少至少10 倍、100倍或甚至1000倍。於一項具體態樣，SIRT1調節 劑不具有任何調節SIRT3蛋白質之實質能力。 於其他具體態樣，SIRT3調節劑於（例如活體内）有效 調節人類SIRT3之脫乙醯基酶活性的濃度下，不具有調節 其他瑟土因蛋白質同系物，諸如（例如）一或多種人類 SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6 或 SIRT7 之實質能力。例如，瑟土因·調節性化合物可選擇具有對於 調節人類SIRT3脫乙醯基酶活性之ED5〇值，較對於調節一 或多種人類 SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6 39 200918542 或SIRT7之ED5G值少至少5倍，且甚至較佳地少至少⑺ 倍、1〇〇倍或甚至1000倍。於一項具體態樣，sirt3調節 劑不具有任何調節SIRT1蛋白質之實質能力。 卩

於某二具體態樣，瑟土因_調節性化合物可具有對於瑟 土因蛋白質之結合親和力為約1〇-9Μ、1〇·1〇μ、MW 或以下。瑟土因-調節性化合物可減少（活化劑）或增加（抑 制劑）瑟土因蛋白質對於其受質或财〇+ (或其他輔因子） 之表觀Km值達至少約2、3、4、5、1〇 2〇 3〇 5〇或_ 倍。於某些具體態樣’Km值係使用本文所述之質譜分析測 定得。較佳之活化性化合物減少瑟土因對於其受質或辅因 子之Km值，至較由藥蘆醇於相似濃度下所造成之更大程 度，或減少瑟土因對於其受質或輔因子之Km值，使其相似 於由藥蘆醇於較低濃度下所造成之程度。瑟土因_調節性化 合物可增加瑟土因蛋白質之Vmax值至少約2、3、4、5、 1 0 20 30、50《1 〇〇倍。瑟土因·調節性化合物可具有對 於調節SIim及/或SIRT3蛋白質之脫乙醯基酶活性的ed5〇 值為少於約1 nM，少於約1〇nM’少於約1〇〇nM，少於約 1 μΜ，少於約10 μΜ，少於約1〇〇 μΜ，或從約卜1〇 nM， 從約 10-100 nM’ 約 ο.υ μΜ，約 11〇 _ 或約 ι〇 ι〇〇 瑟土因-調節性化合物可調節^尺丁丨及/或SIRT3蛋白質之脫 乙醯基酶活性達至少約5、10、20、30、50《100倍，當 於細胞分析或於細胞為底之分析中進行測量。瑟土因-活化 性化合物可促使誘導瑟土因蛋白質之脫乙醯基酶活性，相 對於相同浪度之藥蘆醇大至少約丨〇%、3〇%、5〇%、8〇%、2 40 200918542 、5 I 。 10倍、50倍或100倍。瑟土因-調節性化合物可 °周節SIRT5之ΕΕ>50值，較對於調節SIRT1及/或 Τ3蛋白質之ED5。值大至少約1〇倍、2〇倍、3〇倍、5〇 3·例舉性用途 、，二方面，本發明提供用於調節瑟土因蛋白質之水 平及/或活性之方法，及其使用方法。 於某些具體態樣’本發明提供使用瑟土因_調節性化合 物方法’其中瑟土因_調節性化合物活化瑟土因蛋白質，例 如1加瑟土因蛋白質之水平及/或活性。增加瑟土因蛋白質 ::平及/或活性的瑟土因-調節性化合物可用於各種治療 ^ ’包括（例如）增加細胞壽命，及治療與/或預防許多 :病與失調症，包# (例如）與老化或壓力有關之疾 錢失㈣、糖尿病、肥胖、神經退化性疾病、心血管疾 :::凝結失調症、發炎、癌症與/或潮紅等。該方法包 i 活化性化合物投荜二=調_匕合物’例如瑟土因· 口切仅樂于有其需要之個體。 了於：’!！：人無意受限於理論，據相信本發明之活化劑 :=置因蛋白質内之相同部位（例ι活性位置或影響 1=或Vmax的位置)與瑟土因相互作用。據 相#，此即某些類瑟土因活化劑與抑 結構相似性的原因。 』月匕八有κ質 於某些具體態樣，本文中所述 可單獨適用或與其他化合物二，調節性化合物 口於一項具體態樣，可將 41 200918542 含二或多種瑟土因-調節性化合物之混合物投藥予有其需要 之個體。於另一項具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物可與一或多種下列化合物進 行投藥：蔡蘆醇、紫鉚花素、非瑟素（fisetin)、白皮杉酵 (piceatannol)或槲皮黃素。於一項例舉性具體態樣，可將增 加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因調節性化合物 與煙鹼酸組合進行投藥。於另一項具體態樣，增加瑟土因 蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_調節性化合物可與一或 多種下列化合物進行投藥：煙醯胺（NAM)、舒拉寧 (suranim) ; NF023 ( 一種 G_蛋白質拮抗劑）；NUN (一種 μ能受體拮抗劑m索（Trolox) (6_經基_2,5,7,8，四甲 基苯并二氫吡喃_2_羧酸）；(_)_表掊兒茶素（羥基位於位置 3,5,7,3’，4|，5’）；（_)_表掊兒茶素掊酸酯（羥基位於位置 5,7,3’，^，且掊酸醋位於3 );氣化矢車菊素（氣化 ’’，，五羥基2-笨基小苯并二氫吼味鏽）；氯化翠雀色 素（氣化3,5,7,3’，4,，5._六經基2_苯基小苯并二氯吼味錯广 揚梅㈣大麻雙_;3’5,7,31’41，51_六經基黃酮）；3,7,3，，4，，5|_ 五經基黃酮；棉黃素（3,5,7，μ，，4，_六經基黃酮）、瑟汀謹 (S1_i)，，斯托米辛（splitQmie岭於又另—項具體態樣， 瑟土因·調節性卜人私 ^ ^^, 5物可與一或多種用於治療或預防各種疾 ^ ^ ^ 症糖尿病、神經退化性疾病、心血 f疾病、血液凝社 ^ 、、D發人、潮紅、肥胖、老化、壓力等之 治療劑進仃投藥。β ;種/、體態樣，包含瑟土因-調節性化 合物之組合療法 )/、匕3 —或多種瑟土因-調節性化 42 200918542 合物與-或多種治療劑（例如，-或多種於本文中所描述 之治療劑）的醫藥組成物；及⑺一或多種瑟土因_調節性化 σ物與或多種治療劑之共同投藥，其中瑟土因_調節性化 合物與治療劑尚未經調配於同一組成物中（但是可存在於 相同套組或包裝，例如發泡包裝或其他多室包裝；可由使 用者自行分開之相連結' 分別㈣的容器（例如錫络小 袋）；或其中瑟土因-調節性化合物與其他治療劑係存在分 =容器中之套組内）。當使用分開的調配物時，瑟土因-調 卽性化合物可與另一治療劑之投藥同時、間歇、交錯、在 其之前、接續其之後（或彼等之組合）進行投藥。 於某二具體態樣，使用瑟土因_調節性化合物以減少、 預防或治療疾病或失調症之方法，亦可包含增加瑟土因（例 如人類SIRT1、SIRT2及/或SIRT3，或其同系物）之蛋白質 水平。增加蛋白質水平可藉由將編碼瑟土因之一或多個核 酸副本導入細胞中而達成。例如，可藉由將編碼瑟土因之 核酸導人哺乳動物細胞中，而增加嗔乳動物細胞中瑟土因 之水平，例如藉由將編碼列示於GenBank登錄編號 NP一036370之胺基酸序列的核酸導入，而增加sirti之水 平二及/或藉由將編碼列示於GenBank登錄編號aah〇丨Ο” 之胺基酸序列的核酸導入，而增加SIRT3之水平。 經導入細胞中以增加瑟土因蛋白質水平之核酸，可編 碼與瑟土因（例如SIRT1&/4 SIRT3蛋白質）之序列具有 至少約80%、85%、90%、95%、98%或99%同一性的蛋白 質。例如，編碼該蛋白質之核酸可與編碼與sirti (例如 43 200918542

GenBank 登錄編號 NM_012238 )及/或 SIRT3(例如 GenBank 登錄編號BC00 1042)蛋白質之核酸具有至少約80%、85%、 . 90%、95%、98%或99%同一性。核酸亦可為（較佳地於嚴 苛雜交條件下）與編碼野生型瑟土因（例如SIRT1及/或 SIRT3蛋白質）之核酸雜交的核酸。嚴苛雜交條件可包括雜 交及於0.2 X SSC中於65°C下進行漂洗。當使用編碼與野生 型瑟土因蛋白質不同之蛋白質（例如其為野生型瑟土因之 片段）的核酸時，該蛋白質較佳地於生物學上具活性，例 〆_ 如能夠進行脫乙醯基化作用。僅需要在細胞中表現其於生 物學上具活性之瑟土因部份。例如，與具有GenBank登錄 編號NP_03 6370之野生型SIRT1不同的蛋白質，較佳地含 有其核心結構。核心結構有時係指 GenBank登錄編號 NP_036370之胺基酸62-293，其係由 GenBank登錄編號 ΝΜ_0 12238之核苷酸237至932所編碼，其含括NAD結合 以及受質結合功能域。SIRT1之核心功能域亦可指GenBank 登錄編號NP_036370之胺基酸261至447,其係由GenBank 、 登錄編號NM_012238之核苷酸834至1394所編碼；係指 GenBank登錄編號NP_036370之胺基酸242至493,其係由 GenBank登錄編號ΝΜ_012238之核苷酸777至1532所編 碼；或係指GenBank登錄編號NP_03 63 70之胺基酸254至 495，其係由GenBank登錄編號NM_012238之核苷酸813 至1 538所編碼。可根據該項技藝已知之方法測定蛋白質是 否保留生物功能，例如脫乙醯基化能力。 於某些具體態樣，使用瑟土因-調節性化合物以減少、 44 200918542 預防或治療疾病或失調症之方法，亦可包含減低瑟土因（例 如人類smT1、SIRT2及/或SIRT3，或其同系物）之蛋白質 水平1低瑟i因蛋白質水平可根據該項技#已知之方法 達成。例如，可於細胞中表現靶定瑟土因之siRNA( 一種反 義核酸）或核酶。亦可使用功能域陰性之瑟土因突變體， 例如不能進行脫乙醯基化之突變體。例如，可使用經描述 於（例如）羅等人（则）細胞107:137之sirti突變體 H363Y。或者，可使用抑制轉錄作用之試劑。 η用於調節瑟土因蛋白質水平之方法亦包括，調節編碼 必、土因之基因轉錄作用的方法，安定 化/去安定化相對應 mRNA之方法，及其他該項技藝已知之方法。 老化/m力 於-項具體態樣’本發明提供抑制藉由將細胞盘本發 :增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化 ::接觸，而延長細胞壽命、增加細胞增生能力、減緩細 :老化、促進細胞存活、延遲細胞衰老、模擬卡路里限制 工力效、增加細胞對壓力 塋刀之抗性或防止細胞凋亡的方法。 —項例舉性具體態樣， 、 w方法已3將細胞與瑟土因·活化性 化合物接觸。 本文所述之方法可用 即得自生物體，例如人類=胞，特別是初生細胞(亦 . 類之細胞），於細胞培養物中可保 持存活的時間量。胚胪鉍

L幹細胞（ES)與多潛能細胞及從其分化 之細胞，亦可以增加狂+ m说 、刀1G 因m入J 蛋白質之水平及/或活性的瑟土 u -調即性化合物處理 以使細胞（或其子代）在培養物中 45 200918542 (例如）在進行來自 保持較長的時間。此類細胞亦可用於 活體修飾後移植入個體中。 於一項具體態樣，可將欲被長時間保存之細胞以增加 4因蛋白質之水平及’或活性的瑟土因-調節性化合物處 理。細胞可存在懸浮液（例如血球、血清、生物學生長培 養基等）’或存在組織或器官中。例如，可將收集自個體 供輸血目的之血液，以增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性 的瑟土因調節性化合物處理，使血球可保存較長的時間。 此外，用於法庭目的之血液亦可使用增加瑟土因蛋白質之 水平及/或活性的瑟土因_調節性化合物做保存 理以延長其壽命或保護其對抗凋亡之細胞， 。其他可經處 包括供消費之 細胞例如得自非人類哺乳動物（例如肉類）之細胞，或植 物細胞（例如蔬菜）。 亦可於哺乳動物、植物、昆蟲或微生物之發育及生長 期施用增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節 性化合物，以（例如）改變、減緩或加速發育及/或生長過 程。 於另一項具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 性的瑟土因-調節性化合物可用於，處理有用於供移植或細 胞療法之細胞，包括（例如）固體組織移植物、器官移植 物、細胞懸浮液、幹細胞、骨髓細胞等。細胞或組織可為 自體移植、同種異體移植、同種同基因移植或異種移植。 可將細胞或組織於投藥/植入之前，於投藥/植入同時，及於 投藥/植入個體之後以瑟土因-調節性化合物進行處理。可將 46 200918542 細，或組織於從供給者個體取出之前，於從供給者個體取 後柃自活體地，或於植入接受者之後進行處理。例如口 將供給者或接受者個體以瑟土因_調節性化合物進行全身Ζ 處理，或使次組之細胞/組織以增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物進行局部性處理。於某此具 體態樣，可額外地將細胞或組織以另一種有用於延長=植 物存活之治療劑，例如免疫壓制劑、細胞因子、血总 因子等進行處理。 s 成 於又其他具體態樣，可將細胞於活體外以增加瑟土因 蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_調節性化合物處理，以增 加其壽命或防止細胞瑪亡。例如，可藉由將皮膚或表皮: 胞以增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性 化合物處理，而保護皮膚不會老化（例如，發展出敏紋、 喪失彈性等）。於一項例舉性具體態樣，係將皮膚與包含 增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因.調節性化合 物的醫藥或化妝品組成物接觸。可根據本文所述方法處理 之例舉性皮膚困擾或皮膚病況，包括與發炎、曬傷或自然 老化相關或尤其引起之失調症或疾病。例如，組成物可利 用於預防或治療接觸性皮膚炎（包括刺激性接觸性皮膚炎 與過敏性接觸性皮膚炎）、異位性皮膚炎（亦稱作過敏性 座殄）、光化性角化病、角質化失調症（包括澄療）、大 癌性表皮鬆解病（包括天癌瘡）、表皮脫落性皮膚炎、脂 溢性皮膚炎、紅斑（包括多形紅斑與結節性紅斑）、由日 曬或其他光源造成之損傷、盤狀紅斑性狼瘡、皮肌炎、牛 47 200918542 皮癖、皮膚癌及自然老化作用。力另—項具體態樣，增加 瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合物可 用於治療創傷及/或燒傷以促進癒合，包括（例如）第一度、 二度或三度燒傷及/或熱、化學或電燒傷。可將調配物局部 地投藥至皮膚或黏膜組織。 包含一或多種增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物之局部調配物，亦可用作為預防性（例 如化學預防性）組成物。當使用於化學預防性方法時，係 於特定個體出現可目視病況之前’即處理容易罹患的皮膚。 可將瑟土因-調知性化合物局部或全身性地遞送至個 體。於一項具體態樣，係藉由注射、局部調配物等，將瑟 土因-調節性化合物局部地投藥至個體的組織或器官。 於另一項具體態樣’增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 性的瑟土因-調節性化合物可用於，治療或預防因個體中細 胞衰老所誘發或加重之疾病或病況；用以減低個體衰老速 度（例如在開始衰老之後）之方法；用以延長個體壽命之 方法，用以治療或預防與壽命有關之疾病或病況的方法； 用以治療或預防與細胞增生能力有關之疾病或病況的方 法，及用以治療或預防由細胞損傷或死亡所導致之疾病或 病況的方法。於某些具體態樣，該方法並非作用於，藉由 減低其縮短個體哥命之疾病的發生率。於某此且體,熊樣， 該方法並非作用於’藉由減低因疾病（例如癌症）所造成 之致死率。 於又另一項具體態樣’可為一般性增加其細胞壽命， 48 200918542 及為保護其細胞對抗壓力與/或對抗凋亡之目的，將增加瑟 土因蛋白處之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合物投藥 予個體。據相信，以本文所述之化合物治療個體，係類似 於將個體施予毒物興奮效應（hGmesis)(亦即，對生物體有 益且可言長其壽命之溫和壓力）。 ^可將增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調 節性化合物投藥予個體，以預防老化及與老化有關的結果 或疾病命!如中風、心臟疾病、心臟衰竭、關節炎、高血 壓及艾滋海默氏症。其他可被治療之病況包括（例如）盘 老化關連之眼部失調症，例如白内障、青光眼及黃斑變性。 亦可將增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節 性化合物投藥予個體，用以為保護細胞不死亡之目的而治 療與細胞死亡關連之疾病’例如慢性疾病。例舉性疾病包 括該等與神經細胞死亡'神經元功能障礙、或肌肉細胞死 亡或功能障礙關連者，例如巴金森氏症、艾滋海默氏症、 多發性硬化、财硬化與肌肉營養*良；Ams ;猛暴 炎；與腦退化結合之疾病，例如克羅伊茲費爾特-雅各布病、 色素性視網膜炎與小腦退化；脊髓發育不良例如再生障礙 性貧血，絕血性急病例如心肌. 中毒性肝炎、B型肝炎…肝肝病例如酒精 ^ 肝火，關卽疾病例如骨關

炎，粥樣動脈硬化，·充頭·由uv # P 古，m 一，由…造成之曬傷；扁平苔蘚； f膚委細，白内障；及移植物排斥。細胞死亡亦可由 樂物治療、化學暴露或放射暴露所造成。 1 亦可將增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因· 49 200918542 調節性化合物投藥予罹患急性疾 傷害的個體，例如羅患中 ^吕或組織之 ^ 肌梗塞之個 髓損傷之個體。增加瑟土因 固體或罹患舍 闵$狄W·儿人炱之水千及/或活性的瑟土 因-调即性化合物亦可用於修復酒精中毒性肝。的乂土 心▲ f疾痛 於另一項具體態樣，本發明提供一 ,^ . 丄 促/ 口原及/或預防心 S疾病之方法，其係藉由將增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物投藥予有其需要之個體。 Μ可使用增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_ 調喊性化合物治療或預防之心血管疾 Β戾局包括心肌病或心 肌炎；例如自發性錄病、代謝性心肌病、酒精中毒性心 肌病、藥物引發之心肌病、絕血性心肌病及高血壓性二 病。亦可使用本文所述化合物與方法治療或預防者，為主 要血管例如主動脈、冠狀動脈、頸動脈、大腦動脈、腎動 脈、髂動脈、股動脈及胭動脈之粥樣硬化失調症（大血管 疾病）。其他可被治療或預防之血管疾病，包括該等與灰 小板聚集、視網膜小動脈、腎小球小動脈、神經勒靜脈、 心小動脈，及眼部、腎臟、心臟與中樞及周邊神經系統關 連之微血管網。增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土 因-調節性化合物亦可用於增加個體血漿内之HDL水平。 又其他可以增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土 因-調節性化合物治療之失調症，包括再狹窄（例如於於冠 狀介入後），及與異常高密度及低密度膽固醇水平有關之 失調症。 50 200918542 於一項具體態樣，增加狂+田疋&断 μ择+ 日加必土因蛋白質之水平及/或活性 的必土因-調節性化合物， 扳氺沾一加、 了呈與另一種心血管藥劑之組合 白1,之二伤進行投藥。於一項具體態樣’增加瑟土因蛋 或Γ的瑟土因-調節性化合物，可呈與抗- h 、、且合療法的一部份進行投藥。於 態樣，增加瑟土因蛋白哲+ u τ 、 項、體 質之水平及/或活性的瑟土因-調節性 化合物，可呈盘另—^ ^ ^ 心血g藥劑之組合療法的一部份進 行投藥。 丨W m ♦ 无亡/痛產 可將增加瑟土因蛋白質 π曰貞之水+及/或活性的瑟土因-調 節性化合物投藥予，复畀 t丁 其最近已接受或似乎曾接受一定劑量 放射線照射或喜*>彳m “主 蚕素之個體。於-項具體態樣，放射線照射 〆毋，、之劑5係接觉作為工作相關或醫藥程序一部份例 ^經投藥作為預防程度。於另—項具體態樣，係、無意地接 又放射線:射或母素暴露。於此類個案，較佳地係在暴露 後盡快投藥化合物，以知座，丨4…m 以抑制細胞凋亡及後續發展成急性放 射線照射症候群。 必土因-調郎性化合物亦可用於治療及/或預防癌症。於 某些具體態樣，增加狂+田疋a# ， 曰加必土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土 因-調節性化合物可用於,丄 用於治療及/或預防癌症。卡路里限制已 U V包括癌症之年齡相關失調症的發生率相關連。於 是，增加瑟土因蛋白@ 質之水平及/或活性可用於治療及/或預 防年齡相關失調症（例如癌症）的發生率。可使用瑟土因_ 調節性化合物治療之例舉性癌症，為該等腦部與腎臟之癌 51 200918542 症；激素-依賴性癌症包括乳癌、前列腺癌、睪丸癌與印巢 癌，淋巴瘤及白血病。於與固體腫瘤關連之癌症，可將調 即性化合物直接投藥予該腫瘤中。血液細胞之癌症（例如 白血病）可藉由將調節性化合物投藥至血流中或骨髓中而 進行療亦可治療良性細胞生長例如疢。其他可被治療 之疾病包括自體免疫疾病，例如全身紅斑性狼瘡、硬皮病 及關節炎，其中應將自體免疫細胞去除。亦可藉由投藥瑟 土因-調節性化合物，治療與病毒感染（例如疱疹病毒、 HIV、腺病毒及HTLV_n關連之惡性與良性失調症。或者， 可自個體獲取細胞，經得自活體地處理以去除某些不希望 之細胞（例如癌細胞），並再投藥予相同或不同個體。 亦可將化學治療劑與本文所述具有抗癌活性之調節性 化合物，例如誘發細胞凋亡之化合物，減短壽命之化合物， 或使細胞對壓力敏感之化合物共同投藥。化學治療劑可本 身及/或與其他化學治療劑組合，而與本文所述誘發細胞死 亡或減短壽命或增加對壓力之敏感的瑟土因_調節性化合物 使用。除了習知化學治療劑之外，本文所述之瑟土因-調節 性化合物亦可與反義RNA、RNAi，或其他抑制會造成不希 望細胞增生之細胞組成表現的聚核苷酸使用。 包含瑟土因-調節性化合物與習知化學治療劑之組合療 法，可優於該項技藝已知之組合療法，因為該組合可使習 知化學治療劑於較低劑量下發揮更大功效。於較佳具體，熊 樣，對於化學治療劑（或習知化學治療劑之組合）之有效 劑量（ED5〇)，當與瑟土因-調節性化合物組合使用時，係 52 200918542 較對於單獨該化學治療劑之ED”低至少2倍，且甚至更佳 地低5倍、1〇倍或甚至25倍。反之，對於此類化學治療劑 或此類化學治療劑之組合之治療指數（TI)，當與本文所述 瑟土因-調節性化合物組合使用時，可較對於單獨習知化學 治療程序之ΤΪ高至少2倍，且甚至更佳地高5倍' 1〇倍或 甚至25倍。 神經元疾病/失調症 %.〆 於某些，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物可用於治療罹患神經退化性疾病，及對 中枢神經系統（CNS)、脊趙或周邊神經系統（pNs)之創傷或 機械性損傷的患者。神經退化性疾病代表性地包含人類腦 部質量與體積減少，其可能係由於腦細胞萎縮及/或死亡所 致’其較健康人可因老化所造成者更加深遠。神經退化性 疾病可在執行長期正常腦功能後，由於特定腦區域之漸進 =化、(例如神經細胞功能不足及死…逐漸演化成。 ^傷&退化性疾病可具有快速開始發生，例如該等與 素相關連者。腦部退化之確切開始可能較出現臨 於）艾滋海默氏症⑽)、巴金:氏 巴金森氏症（PD)、亨丁頓氏症 維小體：萎Γ生侧索硬化(ALS:羅杰里格氏病）、彌散雷 部疾病（眼神精炎化）、學療法^原Γ 化'眼 發之神經病變it (b<mezomib))、糖尿病誘 佛里德賴希氏共濟失調。增加瑟土因蛋白 53 200918542 質之水平及/或活性的琴I m 瑟土因-調節性化合物可用於治療此 等失調症及其他如下文所描述者。 ， > 為導致憶喪失、異常行為、個性改變及思考能力 衰退，CNS失δ周症。此等喪失係與特定類型腦細胞死亡， 及彼等間之連結與其支撑網路（例如神經黟質細胞）損壞 有關。最早期症狀包括喪失最近的記憶、錯誤判斷及個性 t變D為V致不爻控制身體運動、僵硬、顫抖及運動障 礙之CNS失調症’且係與腦部製造多巴胺（dopamine)之區 域中的腦細胞死亡關連。ALS (運動神經元疾病）為攻擊運 動神、盈元（CNS中將腦與骨路肌連結之組成）@ cns失調 症。 HD為另一種造成不受控制㈣、智力喪失及情緒失調 =神經退化性疾病。泰_薩斯病與桑霍夫病為其中GM2神經 卽糖芽’肖β_胺基己糖苦酶之相關糖脂類受質累積於神經 系統中，並引發極性急性退化的糖脂儲存疾病。 已熟知，細胞洞亡在免疫系統之AIDS病變方面扮演重 要角色。然而，HIV-1亦誘發其可以本發明之瑟土因_調節 性化合物治療的神經學疾病。 神經細胞喪失亦為普恩蛋白（pri〇n)疾病，例如人類之克 羅伊茲費爾特-雅各布病、牛之BSE (狂牛病）、綿羊與山 羊之癢病及貓之貓類海綿狀腦病（FSE)的突出特徵。增加瑟 土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合物可用 於治療或預防由此等普恩蛋白疾病引起之神經細胞喪失。 於另一項具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 54 200918542

(ANS)功能喪失或縮減。 糖尿病性神經病變為盥 Irk Arr. .1

縮，疼痛性多神經病；自律神經病；及胸腹神經病。 周邊神經病變為用於對周邊神經系統之神經損傷的醫 學術語，其可能係由神經疾病，或因全身性疾病之副作用 所造成。周邊神經病變之主要成因包括癲癇發作、營養缺 乏及HIV，雖然糖尿病是最可能的成因。 於一項例舉性具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物可用於治療或預防多發性硬 化（MS)，包括復發性MS與單症狀MS，及其他脫神經髓翹 病況，例如鉻炎性脫神經髓翹多神經病（CIDp)或與其關連之 失調症。 於又另一項具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或 活性的瑟土因-調節性化合物亦可用於治療對神經之創傷， 55 200918542 :疾病、知冑（包括手術介入）或環境創傷（例如 神、〜素、酒精中毒等）所造成的創傷。 增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性 化合㈣W於預防、治療及緩解各#削失調症之症 狀。術語“周邊神缚疰繳，，. 、”病變涵括廣範圍其中位於腦與脊趙 外部之神經-周邊神經_ p 砰已經文損之失調症。周邊神經病變亦 可指周邊神經炎，或去&、止 _ r丄人次者右涉及許多神經時，可使用術語多 神經病或多神經炎。 可以增加瑟土因*白質之水平及/或活性的瑟土因-調 節性化合物治療之PNS疾病包括：糖尿病、錢、進行性 神。病I·生肌萎縮、急性熱病性多神經炎及臂神經叢神經病 (頸與臂神經叢之第—胸根、神經幹、索及周邊神經組成 的疾病）。 於另一項具體態樣，瑟土因活化性化合物可用於治療 或預防夕合胺醯胺疾病。例舉性谷胺醯胺疾病包括脊趙炎 髓肌^萎縮（肯尼迪病）、亨丁頓氏症（hd)、齒狀紅核蒼 白球委縮（郝烏河症候群）、小腦脊髓幹運動失調症候群 第1 ! +㈤脊髓幹運動失調症候群第2型、小腦脊髓幹 運動失調症候群第3型（馬加多·約瑟夫病）、小腦脊趙幹 運動失調症候群第6型、小腦脊髓幹運動失調症候群第7 型及小腦脊髓幹運動失調症候群第17型。 於某些具體態樣’本發明提供一種治療中樞神經系統 細胞’以防止m對於血液流動向細胞減低之反應而造成的 傷害之方法。代表性地可被預防之傷害嚴重度，將大部分 56 200918542 取決於血液流動向細胞之減低程度及減少的持續時間。於 一項具體態樣，可預防凋亡性或壞死性細胞死亡。於又其 他具體態樣，可預防絕血所介導之傷害，例如細胞毒性水 '腫或中樞神經系統組織缺氧血症。於各項具體態樣，中樞 神經系統細胞可為脊髓細胞或腦細胞。 另一方面包含將瑟土因活化性化合物投藥予個體，以 α療中樞神經系統絕血性病況。有許多中樞神經系統絕血 f:丨病况可由本文所述之瑟土因活化性化合物治療。於一項 、具體態樣，絕血性病況為導致任何類型絕血性中樞神經系 統損傷，例如祠亡性或壞死性細胞死亡、細胞毒性水腫或 / 神、、、里系統組織缺氧之中風。中風可能衝擊腦部任何區 域，或由任何—般已知會導致中風發生之病因所造成。於 本具體態樣之另一選擇，中風為腦幹中風。於本具體態樣 之另—選擇，中風為小腦中風。於本具體態樣之又另一選 擇中風為栓塞性中風。於本具體態樣之另一選擇，中風 (為出血性中風。於其他具體態樣，中風為血栓性中風。 方面’可投藥瑟土因活化性化合物’以於中 柾神經系統絕血性病況後減少絕血核心之梗塞大小。而 曰 ， "Λ- _ 、可有誠地投藥瑟土因活化性化合物，以於中樞神經 、先絕血性病況後減少絕血性半影或過渡區帶之大小。 防神纟1項具體態樣，組合藥物療程可包括用於治療或預 物戈k 2化性失調症，或與此等病況關連之次生病況的藥 5 ^"物。因此，組合藥物療程可包括一或多種瑟土因

活化齋丨愈 i A v、 或夕種抗-神經退化劑。 57 200918542 也液凝ΜΛ辦症 於其他方面，增加揉+田；qg，^ 必土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因調節性化合物可用於、A底 用& /α療或預防血液凝結失調症（或 止血失調症）。如可交換妯 J 乂 ？吳地用於本文，術語“止血”、“血 液凝結”及“血液凝塊，，音# 扣控制流血，包括血管收縮與 凝m之生理特性。血液凝姓 * 履凝，、Ό協助維持哺乳動物在受傷、發 火、疾病、先天缺陷、功能陸 障礙或其他瓦解後之循環完整 而且’ jk塊之形成在受傷之彻安士 丄、 又傷之個案中不僅限制血流（止 血）:亦可能在粥樣血管硬化性疾病方面，因阻塞重 脈或靜脈而導致嚴重器官損傷 日车pm机 谓傷及死亡。因此血栓係在錯誤 時間及地點形成血塊。 於是’本發明提供目的在於抑制 户瘗&饬# 牡孓抑制血塊形成，以預防或 产一 肌梗塞、十風、因周邊動脈 疾病之截肢每γ堂& Jju 截敬次肺栓塞的抗凝結與抗血栓治療。 如可交換地用於本文，狂“ 血”包括嘮遙^ ° •。’i止血及“調節止 或減少）止血。 才即抑制（例如減低 於一方面，本發明提供藉由投藥辦 水平及/或活性的瑟土因·調節性化合物蛋白質之 中止血的方法,^ 以減低或抑制個體 町万去。本文所揭示之組成物或 予員防血栓性#、P 一 有用於治療或 怔注疾病。如用於本文，術注‘ 括任何以過量不希梦 、 性失調症”包 狀態為特徵的姿$广+ 或凝固性過高之 黏著與血拴形忐夕、Λ产 >、 、病己括涉及血小板 成之疾病或失調症’且可能一 月b顯不成血检之可 58 200918542 能性增加，例如血栓數量增加、於低年齡期出現血拴、家 族性傾向血栓形成之趨勢及在不平常部位之血栓形成。 於另一項具體態樣，組合藥物療程可包括用於治療或 預防血液凝結失調症，或與此等病況關連之次生病況的藥 物或化合物。因此’組合藥物療程可包括一或多種增加瑟 土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因活化劑，與一或多種 抗-凝結或抗-血栓形成劑。 渡重控制 於另一方面，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物可用於治療或預防個體之體重增加或肥 胖。例如’增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_ 調節性化合物可（例如）用於治療或預防遺傳性肥胖症、 飲食性肥胖症、激素相關之肥胖症、與投藥醫藥品有關之 肥胖症，用於減輕患者體重或防止個體體重增加。有需要 此類治療之個體可為其已經肥胖、有可能變成肥胖、過重 或有可能變成過重之個體。有可能變成肥胖或過重之個 體，可（例如）以家族歷史、遺傳學、飲食、活動程度、 藥物攝取或其各種不同組合來確定。 夂 於又其他具體態樣，可將增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物投藥予，罹患各種其他可藉 由促進個體之體重減輕而加以治療或預防的疾病與病況。 此類疾病包括（例如）高血壓、血壓過冥、古上胳 喝冋间血膽固醇 ^脂異常、第2型糖尿病、騰島素抗性、葡萄糖不耐受性 南胰島素血症、冠狀心臟疾病、心絞痛、夯▲ 用兄血性心臟衰竭 59 200918542 S、’0石、膽囊炎與膽石病、痛風、骨關節炎、阻礙 民呼吸暫停與呼吸問題、某些類型癌症（例如子宮内 、： 乳癌、則列腺癌與結腸炎）' 妊娠併發症、雌性生 ，建康蔓;t (例如月經不規則、不孕、不規則排卵）、膀 胱控制問冑（例如壓力失禁）；尿酸腎石病；精神性失調 ( 飲食失控、體態變形與自尊降低）。最後， =患AUDS之患者會對於Ams之組合療法反應，而發展成 月曰肪代謝障礙或胰島素抗性。 於另 $具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 八的瑟土因_調節性化合物可用於抑制脂肪形成或脂肪細胞 於活體外或活體内）。此類方法可用於治療或預防 肥胖症。 打具他具體態樣，增 ^ a ^ 《肖心水平及/或活性 、必土因-調節性化合物可 成视'J用於減低食慾及/或增加飽食 :個^此造成體重減輕或避免體重增加。有需要此類治療 可為其已經過重、肥胖之個體，或為其有可能變成 過重或肥胖之個體。該方法包含 之艰+、— ι 3將疋劑量（例如呈藥丸 A “ 一週—-人投藥予個體。劑量可 為食慾減低劑量”。 於-項例舉性具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物， ^ π x ^ 用於治療或預防體重 增加或肥胖症之組合療法進行投藥。例 增加瑟土因蛋白質之水平及/或 "多種 或多種抗-肥胖劑組合投藥。 的-土因活化劑，與一 200918542 於另—項具體態樣，可投藥增加瑟土因蛋白質之水平 及/或活性的瑟土因-調節性化合物，以減低由藥物引發之體 重增加。例如，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土 因-調即性化合物，可呈與可刺激食慾或造成體重增加（尤 其是由於除了保留水份以外之因素造成的體重增加）之藥 物的組合療法進行投藥。

於另一方面，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物，可用於治療或預防代謝失調症，例如 胰島素抗性、前-糖尿病狀態、第„型糖尿病、及/或其併發 症。投藥增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_調節 性化合物可於個體增加胰島素敏感性及/或減低胰島素水 平二有需要此類治療之個體可為，其具有胰島素抗性或其 他第π型糖尿病之前職狀，具有第π型糖展病，或有可 能發展任何此等病況之個體。例如，個體可為具有胰島素 二性，例如具有高胰島素循環水平及/或相關連病況，例如 高血脂症、脂肪生成障礙、高膽固醇血症、葡萄糖耐受性 受損、高血糖水平、徵候群χ之其他表徵、高血壓、粥樣 動脈硬化及脂肪代謝障礙之個體。 於—項例舉性具體態樣’增加瑟土因蛋白質之水平及/ 或活性的瑟土因-調節性化合物，可呈用於治療或預防代謝 失調症之組合療法進行投藥。例如，可將一或多種增加瑟 亡因蛋白質之水平及’或活性的瑟土因活化劑，與一或多種 抗-糖尿病劑組合投藥。 61 200918542 #芡#疾滅 於另-方面’增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物可用於’治療或預防與發炎關連之疾病 或失調症。可於引發炎症之開始前、同時或之後投藥於增 加瑟土因蛋白皙之水平；5 / 2。 或/舌性的瑟土因-調節性化合 物。當預防性使用時，化合物係較佳地於任何發炎反應或 症狀之前提供。化合物之投藥可預防或減弱發炎反應或症 狀。 於另-項具體態樣’增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 性的瑟土因-調節性化合物，可用於治療或預防過敏及呼吸 病況，包括氣喘、支氣管炎、肺部纖維化、過敏性鼻炎、 氧氣毒性、氣遽、慢性支氣管炎、急性呼吸箸迫症候群及 t何慢性閉塞性肺疾病（C_)。化合物可用於治療肝炎感 染，包括B型肝炎及c型肝炎。 士 μ此外，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_ 周節除化合物可用於治療自體免疫疾病，及/或與自體免疫 :病關連之發炎’例如器官'组織自體免疫疾病（例如雷諾 付氏症候群）、硬皮病、重症肌無力、移植排斥、内毒素 休克敗盗病、牛皮癖、溼疹、皮膚炎、多發性硬化、自 體免疫甲狀腺炎、葡萄膜炎、全身紅斑性狼瘡、愛迪生氏 病自體免疫多腺疾病（亦已知稱為自體免疫多腺症候群） 及格雷夫斯病。 砰 ,,於某些具體態樣，可單獨採用增加瑟土因蛋白質之水 平及或活性的瑟土因_調節性化合物，或與其他有用於治療 62 200918542 或預防發炎之化合物組合。 期紅 於另一方面，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物可用於’減低其為失調症之病症的潮紅 及/或熱閃的發生率或嚴重度。例如’標的方法包括使用增 加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合物 (單獨或與其他藥劑組合）’以減低癌症患者之潮紅及/或 熱閃之發生率或嚴重度。於其他具體態樣，該方法預備使 用增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化 合物，以減低停經及停經後婦女之潮紅及/或熱閃之發生率 或嚴重度。 於另一方面，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 土因-調節性化合物可使用作為’用以減低其為另一種藥物 療法之副作用之病症的潮紅及/或熱閃（例如，藥物_誘發性 肩紅）之發生率或嚴重度的療法。於某些具體態樣，用於 治療及/或預防藥物-誘發性潮紅之方法包含，將包含至少一 種潮紅-誘發性化合物與至少一種增加瑟土因蛋白質之水平 及/或活性的瑟土因-調節性化合物之調配物，投藥予有其需 要之心者於其他具體態樣，用於治療藥物所誘發之潮紅 之方法包含’㈣投藥誘發潮紅之化合物與一或多種瑟土 因-調節性化合物，（例如）其令瑟土因-調節性化合物與潮 紅誘發劑未經配物於同一組成物中。當使用分開的調配物 時，可將瑟土因-調節性化合物⑴於與潮紅誘發劑之投藥同 時，剛㈣錢紅料劑，⑽對於潮紅料劑之投藥 63 200918542 錯開，（4)於潮紅誘發劑之投藥之前，（5)接續於潮紅誘發劑 之技藥之後’及（6)其各種不同組合進行投藥。例舉性潮紅 誘發劑包括（例如）煙酸、法洛昔芬（fal〇xifene)、抗憂鬱 劑、抗-精神病藥、化學治療劑、鈣通道阻斷劑及抗生素。 於一項具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性 的瑟土因-調節性化合物可用於減少血管擴張劑或抗血脂藥 (包括抗膽固醇血症劑與抗脂肪肝劑）之潮紅副作用。於 一項例舉性具體態樣，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性 的瑟土因·調節性化合物可用於減少與投藥煙酸關連之潮 於另-項具體態樣’本發明提供用於治療及/或預防具 有減低潮紅副作用之高血脂症的方法。於另一項代表性具 體態樣’該方法包含使用增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 性的瑟土因-調節性化合物，以減少雷洛昔芬（⑷⑽心㈣之 潮紅副作用。於另一項代表性具體態樣，該方法包含使用 增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合 物’以減少抗憂鬱劑或抗·精神病藥之潮紅副作用。舉例而 言，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因·調節性化 合物可用於與㈣色胺在吸收抑制劑，或5HT2受者拮抗劑 結合（分開或一起投藥）。 於某些具體態樣’增加夢+阳疋人陆> «刀口瑟土因蛋白質之水平及/或活性 的瑟土因-調節性化合物可伸田从* 使用作為以5-羥色胺再吸收抑制 劑（SRI)之治療的一部份以站| ^ …揭減少潮紅。於又另-項代表性具 體態樣，增加瑟土因蛋白皙 貨之水平及/或活性的瑟土因-調節 64 200918542 例如環磷醯胺及他莫昔 性化合物可用於減少化學治療劑 芬（tamoxifen)之潮紅副作用。 之水平及/或活 阻斷劑，例如 於另一項具體態樣，增加瑟土因蛋白質 性的瑟土因-調節性化合物可用於減少鈣通道 氨氯地平之潮紅副作用。 ^ „ μ其口貝及水平及/或活 性的必土因-調節性化合物可用 奶J用於減少抗生素之潮紅副作 用。例如，增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_ 調節性化合物可與左氟沙星如⑽咖咖）組合使用。 « ^ a mm 轄明之-方面係―㈣於抑制、減低或m療視 貝&之方法’其藉由將治療劑量之選自本文所揭示化合 的乂土因調即劑，或其醫藥上可接受之鹽類、前藥或代 謝衍生物投藥予患者。 於本發明之某些方面’視力損傷係由於對視神經或中 樞神經系統之傷宝# ν ^ # σ所化成。於特別的具體態樣，視神經傷 害係由高眼内愿^7〆(,. 金力（例如由青光眼產生者）所造成。於其 他特別的具體離媒 , 姐^樣’視神經傷害係由於神經腫脹（其往往 與感染或免疫「存丨1 a & 、 I例如自體免疫）反應關連，例如於視神經 k )所造成。 於本發日月> f ^系些方面，視力損傷係由視網膜之傷害所 造成。於特別砧目％ & 1 〃體態樣，視網膜之傷害係由於流向眼睛 之血流障礙（你丨‘ 、1』如’粥樣動脈硬化、血管炎）所造成。於 特別的具體離媒 、 q像’現網膜之傷害係由於黃斑瓦解（例如， 65 200918542 渗出性或非滲出性黃斑退化）所造成。 例舉性視網膜之疾病包括’滲出性年齡相關的黃斑退 化非〇出年齡相關的黃斑退化、視網膜電子假體與 移植年齡相關的黃斑退化、急性多病灶板狀色素上皮病 < t央視網膜動脈堵塞、中央視網膜靜脈堵塞、中央嚴 重脈絡膜視網膜病、伊爾斯病、黃斑上膜、晶格退化、巨 動脈瘤糖尿病性斑水腫、艾爾溫_蓋斯斑水腫、斑空洞、 次視網膜新血營膜、迪也Λ ' 擴散早側亞急性神經視網膜炎、非假 日日狀體囊樣斑水腫、假定之眼組織胞製菌病症候群、渗出 視’周膜釗離、手術後視網膜剝離、增生性視網膜剝離、 孔源性視網膜剝離、傳統性視網膜剝離、色素性視網膜炎、 。。視網膜炎、成視網膜細胞瘤、未熟兒之視網膜病、散 彈狀視網膜病、背景糖尿病性視網膜病、增生性糖尿病性 見周膜病血紅蛋白病性視網膜病、普爾夏視網膜病、瓦 爾薩瓦爾視網膜病、幼年期視網膜病、老年視網膜病、德 桑症候群及白點症候群。 ,、他例舉性疾病包括眼部細菌感染（例如，結膜炎、 角膜X ’ 〇核病、梅毒、淋病）、病毒感染（例如眼部單 純癌疹病毒、水癌帶狀癌疹病毒、巨細胞病毒視網膜炎、 人類免疫缺陷病毒(HIV))以及次生於贈或其他鮮關 連及其他免疫缺陷_關連性眼部疾病的進行性外部視網膜壞 死此外目艮部疾病包括真菌感染（例如念珠菌脈絡膜炎、 組織胞漿菌病）、， 原生動物感朱（例如弓形體病）及苴他 例如弓細蟲病與肉樣瘤病。 ’、 66 200918542 本發明之一古^ 1 面為用於抑制、^ 以化學治療藥物（例 減低或治療個體於進行 藥物例如類固醇）、，神經毒性藥物、升高眼内壓力之 治療劑量之本文所^:療時的視力損傷之方法，其藉由將 需要之個體。 八的瑟土因調節劑投藥予有此類治療 本發明之另一方 、 行手術，包括眼部或：二=:、減低或治療個體於進 髓手術時之視力損傷的方法，執打之手術’例如脊 揭示的瑟土因調節劑 、藉由將治療劑量之本文所 本發明之另—類治療需要之個體。 年齡相關之眼部疾(包括抑制與預防性治療） 黃斑叫Μ症、年齡相關之 量之本文所揭示的瑟土因二之方法，其藉由將治療劑 個體。 ’、土因調即劑投藥予有此類治療需要之 本發明之另一太品达 n®為預防或治療因壓力、化學傷害i 知射所造成對眼晴的指宝 __ , 貝害其藉由將治療劑量之本文所求 示的心土因調節齊彳，# ^ ^ J奴樂予有此類治療需要之個體。對目I 睛之照射或電磁性損害體 UV所造成者。 其由CRT或暴露至陽光或 於一項具體態樣，租入藥ϋ 、，口樂物療程可包括用於治療或預 防眼部失調症，或與此笤，忘 等病況關連之次生病況的藥物或化 合物。因此，組合藥物療程可包括_或多種瑟土因活化劑， 與-或多種用於治療或預防眼部失調症之治療劑。 於-項具體態樣，可將瑟土因調節劑與用以減低眼内 67 200918542 壓力之療法結合進行投藥。於另一項具體態樣，可將瑟土 因調節劑與用於治療及/或預防青光眼之療法結合進行投 藥。於又另一項具體態樣，可將瑟土因調節劑與用於治療 及/或預防眼神經炎之療法結合進行投藥。於一項具體態 樣’可將瑟土因調節劑與用於治療及/或預防cMV視網膜病 之療法結合進行投藥。於另一項具體態樣，可將瑟土因調 節劑與用於治療及/或預防多發性硬化之療法結合進行投 藥。 在41放-贫連之疾滅典关鞸症 於某些具體態樣，本發明提供用於治療會因増加粒線 體活性而獲助益之疾病或失調症的方法。該方法包含將治 療上有效量之瑟土因活化性化合物投藥予有其需要之個 體。增加粒線體活性意指，增加粒線體之活性同時維持粒 線體之總體數量（例如粒線體之質量）、增加粒線體之數 量藉此增加粒線體之活性（例如，藉由刺激粒線體之生物 生成）或其組合。於某些具體態樣，其會因增加粒線體活 性而獲助益之疾病或失調症，包括與粒線體功能障礙關連 之疾病或失調症。 於某些具體態樣，用於治療會因增加粒線體活性而獲 助益之疾病或失調症的方法，可包含鑑定個體罹患粒線體 功能障礙。用於診斷粒線體功能障礙之方法，可包含分子 遺傳學、病理學及/或生物化學分析。與粒線體功能障礙關 連之疾病或失調症包括，其中粒線體之呼吸鏈活性不足係 造成，哺乳動物中此類疾病或失調症之病理生理學發展的 68 200918542 成因之疾病與失調症。會因增加粒線體活性而獲助益之疾 病或失調症一般包括（例如），#中由自由基介導之氧化 抽傷會導致組織退化的疾病，其中細胞*適當地進行〉周亡 之疾病，及其中細胞無法進行凋亡之疾病。 於某些具體態樣，本發明提供用於治療會因增加粒線 體活性而獲助益之疾病或失調症法 種瑟土因活化性化合物與另-種治療劑，例如；:於:: 粒線體功能障礙之藥劑，或可用於減少與涉及粒線體功能 &礙之疾病或失調症關連的症狀之藥劑組合，㈣ 需要之個體。 ’' 、 於—項例舉性具體態樣，本發明提供用於治療會因辦 加粒線體活性而獲助益之疾病或失調症的方法，其係藉: 將…療上有效量之瑟土因活化性化合物投藥予個體。二舉 或失調症包括（例如）肌肉神經失調症（例如佛里 ^賴希氏共濟失調、肌肉營養不良、多發性硬化等厂神 =胞不穩定性失調症（例如癲癇發作、偏頭痛等）、發 月遲緩、神經退化性失調症（例如艾滋海默氏症、巴金森 :症生肌萎縮性側紫硬化等）、局部缺血、腎小管性酸中 :、年齡相關之神經退化與認知衰退、化學療法疲勞、年 則目關或化學療法誘發之更年期或月經週期或排卵不規 肌病、粒線體損害(例如齊累積、興奮毒性、 氧化虱暴露、缺氧等）及粒線體去調節。 之二肉:養不良係指一族涉及神經肌肉結構與功能惡化 之疾病，其往往導致骨路肌萎縮及心肌功能障礙，例如杜 69 200918542 興肌肉營養不良。於某些具體態樣，瑟土因活化性化合物 可用於減低肌肉執行功能能力之衰退速率，及用於增強罹 患肌肉營養不良患者肌肉之功能狀態。 於某些具體態樣’瑟土因調節性化合物可用於治療粒 線體丨生肌病。粒線體性肌病範圍從外眼部肌肉之輕微、缓 k進行〖生衰弱，到嚴重、致命的嬰兒期肌病與多系統腦肌 病有些症候群已經確定，彼等之間有些彼此重疊。影響 f 肌肉之已確A症候群包括進行性外部眼肌麻#、克-塞症候 群（具有眼肌痲痹、視網膜色素病變、心臟傳導缺陷、小 腦共濟失調與感覺神經性耳聾）、MELAS症候群（粒線體 1·生腦肌病、乳酸中毒與類中風事件）、症候群（癲 痛f生肌陣攣、碎片狀紅纖維）、角膜緣帶分配衰弱及嬰兒 期肌病（良性、重度與致死）。 於某些具體態樣，瑟土因活化性化合物可用於治療罹 患對粒線體之毒性損害，例如由於辑累積、興奮毒性、一 (氧化氮暴露、藥物誘導之毒性損害或缺氧造成的毒性損害。 於某些具體態樣，瑟土因活化性化合物可用於治療與 粒線體去調節關連之疾病或失調症。 〃 机肉效艇 於其他具體態樣，本發明提供用於增強肌肉效能之方 法，其係藉由投藥治療上有效量之瑟土因活化性化合物。 例如，瑟土因活化性化合物可用於改善身體耐久力（例如， 執行身體工作例如運動、身體勞役、運動活動等）、抑制 或延遲身體疲勞、增加血液氧水平、增進健康個體之能量、 70 200918542 加強工作能力與持久性、減少肌肉疲勞、減低壓力、增強 ^臟與^血管功能、改善性能力、增加肌肉水平及/或 減少血液中之乳酸。於某些具體態樣，方法包含投藥一定 量其增加粒線體活性、增進粒線體之生物生成及/或增加粒 線體質量之瑟土因活化性化合物。 運動效能意指，運動員之肌肉在參與運動活動時所能 執行的能力。所增強之運動效能、強度、速度及持久力， 係藉由肌肉收縮強度之增加、肌肉收縮幅度之增加、介於 刺激與收縮間之肌肉反應時間的縮短而進行測量得。運動 員係指以任何程度參與運動，及尋求能在其機能上達到增 進強度、速度與耐久力水平之個人，例如健美家、自行車 選手、長程賽跑者、短程賽跑者等。所增強之運動效能係 由能克服肌肉疲勞之能力、可保持較長時間活力之能力及 具有更有效練習之能力顯示。 於運動員肌肉效能之展現範圍，可希望產生允許在對 於長期之更高抗性程度進行比賽或訓練的狀況。 預期本發明之方法亦有效於治療肌肉相關的病理病 況，包括急性肌肉減少症，例如肌肉萎縮及/或與燒傷、臥 床四肢固疋或主要胸部、腹部及/或整形外科手術關連之 惡質病。 於某些具體態樣，本發明提供包含瑟土因調節劑之新 顆節食組成物，其製備方法及使用該組成物以改善運動效 能之方法。於是，本發明提供對於涉及經廣泛定義之運動， 包括需要持久力之運動與需要重複性肌肉運用之勞力的人 71 200918542 改：身體持久力’及/或抑制身體疲勞之作用的治療 食品與飲料。此類節食組成物可額外包含電解質、 咖啡因、維生素、碳水化合物等。 其他用逯 化人:=土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性 ° 治療或預防病毒感染（例如由流感病毒、癌 療f毒或乳頭瘤病毒之感染）或作為抗真g劑。於某歧具 體怨樣’增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟 性化合物，可S彻2 仏 — 種用於治療病毒性疾病之治療劑之 組合藥物療法的—部份進行投藥。於另一項具體態樣，增 加瑟口土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因_調節性化合 物’可呈與另_種抗真菌劑之組合藥物療法的一部份進行 投藥。 1如本文所述進行治療之個體包括真核生物，例如哺 乳動物例如人類、金龆 當類、牛類、馬類、豬類、犬類、貓類、 非人靈長類、小鼠及女θ -上 ^ 乳及大乳。可受處理之細胞包括真核細胞， 例如得自前述個艘去4士 & ^ 體者或植物細胞、酵母細胞及原核細胞例 如細菌細胞。钿丨IΜ 可將調節性化合物投藥予農場動物， 以增強其能更長期刃Α曲^ 贫^心觉辰場狀況之能力。 增加瑟土因|白暂+ ^ τ 货曰賢之水平及/或活性的瑟土因-調節性 化合物亦可用於，择士 ' S加植物哥命、壓力抗性及對於細胞凋 亡之'^几性。於—JS目·§Λ热 項八體態樣，係將化合物（例如以週期性 基礎）施予植物或直鹄 A異痛。於另一項具體態樣，植物係經遺 傳修改以產生草錄彳人k 呆裡化合物。於另一項具體態樣，係將植物 72 200918542 ^實㈣收與運送前先以化合物處理，以增加在運送期 接觸，以（例如）使其防腐物種子與本文所述之化合物 :二他具體態樣’增加瑟土因蛋白質之水平及，或活性 因_調節性化合物可用於調節酵母細胞之壽命。其中 :希：延長酵母細胞壽命之情況包括，任何於其中使用酵 母之t程’例如啤酒、優格與烘培項目（例如麵包）之製 吏用*有延長壽命之酵母，可料，或使酵母具有活 :達較長時間。亦可將用於重組製造蛋白質之酵母或其他 乳動物細胞如本文所述進行處理。 人增加瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性 :物亦可用於增加昆蟲壽命、壓力抗性及對於細胞〉周亡 抗!生於此項具體態樣，化合物將i i❹m 列如蜜蜂及其他涉及植物授粉之昆蟲。於一項特別具體離 :策’化合物將被施用至涉及製造蜂蜜之蜜蜂。一般，本； 直〜方法可應用至任何生物體，例如具有商業重要性之 =核生物。例如，可將彼等應用至於類（水產養殖）及鳥 頬（例如雞與家禽）。 亦可使用較高劑量之增加瑟土因蛋白質之水平及/或活 瑟土因-調節性化合物作為殺蟲劑，其係藉由干擾於發 月=間受緘默基因之調節，及細胞凋亡之調節。於此項具 體態樣，可將化合物使用該項技#已知能確保該化合物對 昆蟲幼蟲（且非對於植物）為生物可利用之方法施用至植 物。 73 200918542 至少就生殖與壽命間之連結的觀點而言，可施用增加 瑟土因蛋白質之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合物，來 影響諸如昆蟲、動物及微生物等生物體之生殖作用。 4.分析 已經有描述各種不同類型用以測定瑟土因活性之分 析。例如，瑟土因活性可使用螢光為底之分析，例如市面 上可購自拜歐莫（Biomol)之分析，例如SIRT1螢光測定藥物 發現套組（AK-555)、SIRT2螢光測定藥物發現套組（AK-556) 或SIRT3螢光測定藥物發現套組（AK-557)(拜歐莫國際， 普里茅斯會議，PA )而測定得。其他適合之瑟土因分析包 括煙醯胺釋出分析（卡柏來恩等人，J. Biol. Chem. 280(17): 1703 8 (2005) ) 、FRET 分析（馬柯特等人，Anal. Biochem. 332: 90 (2〇〇4))及C14 NAD硼樹脂結合分析（麥可唐納等 人，Methods 36: 346 (2005))。又其他適合之瑟土因分析包 括放射免疫分析（RIA)、閃爍近似分析、HPLC為底之分析 及報告者基因分析（例如，用於轉錄因子標靶物）。 一種用於測定瑟土因活性之例舉性分析為螢光極化分 析。螢光極化分析於本文中描述，且亦經描述於PCT公開 案號WO 2006/094239。於其他具體態樣，瑟土因活性可使 用質譜測定法為底之分析測定得。質譜測定法為底之分析 於本文中描述，且亦經描述於 PCT公開案號 WO 2007/064902。亦可使用細胞為底之分析來測定瑟土因活 性。用於測定瑟土因活性之細胞為底的分析，係經描述於 PCT 公開案號 WO 2007/064902 及 WO 2008/060400。 74 200918542 驻又其他於本文中所預期之方法包括，用於鑑定可調節 瑟土因之化合物或藥劑的篩檢方法。藥劑可為核酸，例如 核酸適體（aptame…分析可以細胞為底或不含細胞之格式 行例如刀析可包含將瑟土因與測試劑，於其中可將 瑟土因藉由已知可調節瑟土因之試劑調節，並摘測或測定 瑟土因於該測試劑存在了，相對於無該測試劑存在下之調 節程度的條件下，進行培育（或接觸）。瑟土因之調節程 度可藉由測定其可將受質脫乙醯基化之能力而測定得。例 舉性受質為可購自拜歐莫（#里茅斯會議，pA)之乙酿化 肽類。較佳受質包括p53之肽類，例如該等包含乙酿化咖 者。尤其較佳之受質為Fluor de Lys_SIRTi (bi〇m〇l) ’亦 即乙酿⑽Arg-His-Lys_Lys。其他受質為得自人類組蛋白 H3與H4之肽類或乙醯化胺基酸。受質可為產榮光性。择 土因可為SIRT1、Sir2猶T3或其部份。例如，重組型·^ 可構自拜歐莫。反應可進行約3〇分鐘，並（例如）以煙醯 胺終止。可使肖HDAC螢光活性分析/藥物發現套组 (ΑΚ-500,拜歐莫研究實驗室）測定乙酿化程度。類似的 分析經描述於畢特曼等人（2002) J. Biol. Chem. 277:45099。可將於分析中之瑟土因調節程度，與有一或多 種本文所述化合物（分開或同時）存在下（其可作為陽性 或陰性對照組）之瑟土因調節程度進行比較。用於分析之 瑟土因可為全長瑟土因蛋白質或其部份。 顯示活化性化合物似乎會與SIRT1之N_端用，’ 、 析之蛋白質包括瑟土因之N_端部 於分 鳊部伤，例如SIRT1之約胺基 75 200918542 酸 1-176 或 1-25 5 ; Sir2 之約胺基酸 1-174 或 1-252。 於一項具體態樣，筛檢方法包含⑴將瑟土因與測試劑 及乙醯化受質’於適合瑟土因在無該測試劑存在下 脫乙醢化之條件下接觸；及⑼測定受質之乙醯化程度 中在該測則彳存在下受質之乙醯化程度，相對於無^測試 劑存在下為較低表示，該測試劑刺激由瑟土因進行之脫乙 醯化作用’而在該測試劑存在下受質之乙醯化程度 f 於無該測試劑存在下為較高表示，該測試劑抑制由瑟土因 進行之脫乙醯化作用。 用於鑑定可於活體内調節（例如刺激）瑟土因之方法 可包含（i)將細胞與測試劑及能夠進入細胞之受質，在第I 類與第Π類HDAC存在下，於適合瑟土因在無制試劑存 在下將受質脫乙醯化之條件下接觸；及（ii)測定受質之乙醯 化程度’纟中在該測試劑存在下受質之乙醯化程度，相對 於無該測試劑存在下為較低表示’該測試劑刺激由瑟土因 進行之脫乙醯化作肖，而在該測試劑存纟下受質之乙酿化 程度，相#於無該測試劑存在下為較高表*，該測試劑抑 制由必土因進行之脫乙醯化作用。較佳受質為乙醯化肽 類，其亦杈佳地為產螢光性，如本文中進一步描述者。該 方法可進一步包含將細胞溶解，以測定受質之乙醯化程 度。可將受質以範圍介於約1μΜ至約10mM，較佳地從約 μΜ至lmM ’甚至更佳地從約至，例如約 2〇〇μΜ之濃度加至細胞。較佳受質為乙醯化賴胺酸，例如ε_ 乙醯基賴胺酸（Fluor de Lys，FdL)或 Fiu〇r 心 LysSiRTi。 76 200918542 第ϊ類與第π類HDAC之較佳抑制劑為曲古柳菌素 (TSA)，其可以範圍介於約〇.〇_至1〇_，較佳地從約 (Μ^至例如約1μΜ之漢度❹。細胞與測試化合物 及堂質之培育可進行約1〇分鐘至5小時，較佳地約“ 時。因為TSA抑制所有第！類與第_ hdac，且某些受 質（例如Flu〇rdeLys)對於SIRT2為較差的受質，甚^ 於SHIT3-7為較差，故此類分析可用於鑑定活體内’ 調節劑。 1 5·醫藥組成物 本文所述之瑟土因-調節性化合物可以f知方法，使用 -或多種生理學上可接受之載劑或賦形劑進行調配。例 如’瑟土因-調節性化合物及其生理學上可接受之鹽類盘溶 劑合物可經調配，而用於藉“例如）注射（例如_、 IP)—、吸入或吹入（通過口或鼻部）或口服、口腔、 舌下、經皮、鼻部、非經腸道或直腸投藥之投藥。於 : = 瑟土因-調節性化合物可局部地，位於標心胞 =的:Η立，㈣於特定組織、器官或體液（例如血液、 月®脊题液等）中進行投藥。 :土因-調節性化合物可經調配用於各種投藥型式，包 明；^局部或區域性投藥。技術與調配物-般可見於雷 月頓製藥科學，名迪出 道$ &司，伊斯頓，ΡΑ。對於非經腸 =樂用以注射為較佳，包括肌肉内、靜脈内、腹膜内及 理學上广主射’可將化合物調配成液態溶液，較佳於生 可接受之緩衝液，例如漢克氏溶液或林格氏溶液 77 200918542 中。此外可將化合物調配成固體型式，並於 溶解或懸浮之。亦可包括冷凌乾燥形式。吏用則立即再 對於口服投藥，醫藥組成物可採用 方法，與醫藥上可接受之賦形劑例如黏合二::由習知 經膠化之玉米澱粉、聚乙烯基吼咯啶，或羥丙某預先 素）；填充劑（例如乳糖、微晶纖維素或磷酸心纖： = : = :酸滑;…）；崩解劑(例如二 署殿祕乙酸鈉）；或溼潤(例 鈉）製備得之片劑、菱刻鍵劑或 : 該項技藝已熟知之方法包覆。用於之= 换用（存丨1、 服#又樂之液體製劑可 呈用於在^料、糖裝或懸浮液的形式，或彼等可表現 類：=以水或其他適宜媒液建構之乾燥產物。此 如==藉由習知方法’與醫藥上可接受之添加劑例 用月旨如，山梨糖醇糖浆、纖維素衍生物或氯化食 液（例如i (例如㈣脂或金合歡油I非水性媒 油）.及：腐at_d 〇ϋ)、油性醋類、乙醇或分級植物 ，田^ ’及防腐劑（例如ψ I Λ … 酸）製備得。若適a 羥基苯甲酸酯或山梨 色劑食甜味含有緩衝鹽類、香料、著 予、、舌性^ 於口服投藥之製劑可適宜地調配，以給 予活性化合物之受控釋出。 瑟土因·調H吸人（例如肺部遞送）之投藥，可方便地將 適宜推谁制化口物以從經加壓包震或喷霧器，伴隨使用 ;!進_如二氯二氣甲⑥、三氯氣甲烧、二氣四氣乙 匕敌或其他適合氣體，之氣溶膠噴霧呈現形式遞 78 200918542 送。於經加壓氣溶膠之個案中 遞送已計量之量的閥來決定。 之（例如）明膠膠囊或藥筒， 例如乳糖或;殿粉之粉末混合物 ，劑量單位可藉由提供用於 可調配用於吸入器或吹入器 含有化合物與適宜粉末基底 瑟土因-調節性化合物可經調配用於藉由注射， 由大劑量注射或持續灌流之非經腸道投藥。用於注射之調 位劑量形式呈現，例如’存在安瓶或多劑量容 m(有添加防腐劑）中。組成物可採用諸如存在油性或水 性媒液之懸浮液、溶液或乳液的形式，且可含有 如懸浮劑、安定劑與/或分散劑。或者，活性成份可呈用於 在使用前適宜職，例如滅8無_水建構之粉末形式。、 瑟土因-調節性化合物亦可經調配於直腸組成物，例如 拴劑或保留灌腸劑，例如含有習知的栓劑基底如可可 其他甘油S旨類。 除了先前所述之調配物外’瑟土因-調節性化合物亦可 經調配呈儲存製劑。此類長效型調配物可藉由植入（例如 以皮下或肌肉内），或經由肌肉内注射進行投藥。因此， 例如’可將瑟土因·調節性化合物與適宜之聚合物或厭水性 材料（例如呈存在可接受油類中之乳液）或離子交換樹脂 調配，或呈微溶性衍生物，例如呈微溶性鹽類。受控釋出 形式亦包括貼布。 於某些具體態樣’本文所述之化合物可經調配用於遞 送至中樞神經系統（CNS)(回顧於貝袼利，藥學&治療學104: 29-45 (2004))。用於藥物遞送至⑽之習知途徑包括：神 79 200918542 ^外科策略（例如腦内注射或腦室内灌流）；試劑之分子 刼作（例如製造包含具有對於内皮細胞表面分子之親合性 的轉運肽與其本身能夠穿越BBB之試劑組合的嵌合型融合 蛋白質）目的在於開發其中一種BBB之内源性運送途徑，· 投計用以增加試劑之脂溶度之藥學Μ (例如，將水溶性 咸劑共輛至脂質或膽固醇載劑）；及藉由高滲透力瓦解短 暫破壞ΒΒΒ完整性f由膝;Φ k f 一 Q由將甘路糖醇》谷液灌流入頸動脈，或 使用生物活性劑例如血管緊張肽所導致）。 脂質體為另-種可容易注射之藥物遞送系統。於是， :本發明方法中亦可將活性化合物以脂質體遞送系統之形 式進行投藥。脂質體為習於該項技藝人士已熟知。脂質體 可由各種磷脂質例如膽固醇、鱗醋酿膽驗類之硬脂酿胺植 成。可用於本發明方法之脂質體包含所有類型脂質體，包 括（但不限定於）小單層囊胞、大單層囊胞及多層囊胞。 另-種製造瑟土因調節劑例如白藥蘆醇或其衍生物之 :配物（尤其是溶液）的方法係透過使用環糊精。環糊精 意指α-、β-或γ·環糊精。環糊精係詳細描述於皮薩等人， U.S.Pat.N〇.4’727,064,其以引用方式納入本文。環糊精為 葡萄糖之環狀寡聚物；&等化合物與其分子能配合至環糊 精分子之親脂-搜尋空腔中的任何藥物形成包涵錯合物。 快速崩解或溶解性劑量形式可用於，快速吸收（尤其 是口腔與舌下吸收）醫藥活性劑。快速熔解劑量形式對具 有吞嚷代表性固體劑量形式’例如膠囊與片劑困難之串者 (例如年老及幼兒患者）有益。此外，快速熔解劑量形式 80 200918542 取勝與（例如）可呕嚼劑量形式關連之缺點，其中活性劑 保持存在患者口中之時間，在決定味覺掩蓋量及患者可能 感受到活性劑之喉嚷粗粒感具有重要性。 醫藥組成物（包括化妝品組成物）可包含約〇 〇〇〇〇1至 100°/。，例如〇.〇01至10%或（M至5%重量百分比之一或多 種本文所述的瑟土因-調節性化合物。 於項具體態樣，係將本文所述的瑟土因_調節性化合 且包 可選擇 洗液、 然或合 害地影 之局部 油、礦 苯甲酸 =併入，含有一般適用於局部藥物遞送之局部載劑 3該項技藝已知之任何此類物質的局部調配物中。 ，部載劑以使組成物呈所希望的形式，例如呈軟膏、 孔霜、微乳液、凝膠、油類、溶液等，且其可由天 :來源之材料組成。較佳地，所選擇之載劑不會有 栽局部組成物之其他組成。適宜用於本文 物油…、石油膠、羊毛/Γ 甘 賴類、堪類等。 …、月曰肪酸、植物油 調配物可為無色、 及凝膠。 無味之軟膏、洗液 乳霜、微乳液 瑟土因-調節性化合物可 膏中，其代表性地係以石油❹他=半㈣製劑之幸 用（以及習於該項技藝人2其他石油诉生物為底。戶“ 其可提供最適藥物遞送 ：解）之特別軟膏基底d 特徵以及（例如）柔 （較佳地）可提供其他所希1 媒液共用，則 或類似特徵者。若與其他載劑資 膏基底應為惰性、安定、無刺激性且非至 81 200918542 敏性的。 瑟土因-調節性化合物可併入洗液中，其 於皮膚表面而無溼擦製 為欲施用 m…，、且代表性地為其中固體顆粒 匕/ U)係存在於水或醇類基 製劑。洗液通常為固體之雄浮液…乂‘…液態 體油性乳液。 ，且包含水包油形態之液 Μ 土因調卽性化合物可併入乳霜中 液體或半固態乳液，為水包油或油包水型。乳霜 脂肪醇，例如錄壤二=相。油相一般係“油舆 非必要地…組成:水相通f (雖然並 在乳霜調配物（如於前述 J'般含有座潤劑。存 ••般中所解釋者）中之乳化劑， 般2離子性、陰離子性、陽離子性或㈣ 瑟土因調節性化合物可併入微乳液 二 穩定化之熱動力學上安各：；，劑分子之界面膜 *技術百科辭典(紐約··馬瑟迪克，1992)，卷9)。氣 :土因-調節性化合物可併入凝膠調 :小無機粒子組成之懸浮液（二相系統），或實質上t ::於整個載劑液體之大有機分子所組成的半固體系统： 雖二凝膠一般使用水性 ’、、、‘。 劑液L _亦可使用醇類與油類作為栽 於調配物中亦可自；^甘 鎮痛劑、U… 劑’例如其他消炎劑、 …生物劑、抗真菌劑、抗生素、維生素、抗氣 82 200918542 化劑及一般用於防曬調配物之陽光阻斷劑，包括（但不限 疋於）鄰胺基苯曱酸酯、二苯甲酿I (尤其是二苯甲酮-3)、 樟腦衍生物、肉桂酸鹼（例如曱氧基肉桂酸辛鹼）、二苯 曱醯基曱烷（例如丁基曱氧基二苯甲醯基曱烷）、對-胺基 苯甲酸（PΑΒΑ)及其衍生物，及水揚酸酯（例如水揚酸辛 酯）。 於某些代表性調配物，活性劑係以為該調配物之大約 0.2 5 wt. °/。至75 wt. %，較佳地為該調配物之大約0.25 wt. % 至30 wt_ %，更佳地為該調配物之大約〇 5 wt. %至μ wt. % ’且最佳地為該調配物之大約1 〇 wt. %至1 〇 wt. %的範圍 存在。 眼部病況可藉由（例如）全身性、局部、眼内注射瑟 土因-調節性化合物，或藉由安插可釋出瑟土因-調節性化合 物之持續釋出裝置而治療或預防。可將增加瑟土因蛋白質 之水平及/或活性的瑟土因-調節性化合物於醫藥上可接受 之眼科媒液中進行遞送，以使化合物能保持與眼表面接觸 一段足以讓化合物穿透角膜與眼睛之内部區域，例如前 室、後室、玻璃體、水樣液、玻璃體液、角膜、虹膜/睫狀、 晶狀體、脈絡膜/視網膜及鞏膜的時間。醫藥上可接受之眼 科媒液可（例如）為軟膏、植物油或封膠材料。或者，可 將本發明化合物直接注射入玻璃體液與水樣液中。於另一 選擇，化合物可全身性投藥（例如藉由靜脈内灌流或注射） 用於眼部之治療。 本文所述之瑟土因-調節性化合物可儲存於無氧環境 83 200918542 i如 了將棻蘆醇或其類似物製備於供口服投藥之不 透氣膠囊，例如購自皮茲爾有限公司之中。 可將（例如）得自活體地以瑟土因_調節性化合物處理 之、、田胞，根據用於將移植物投藥予個體之方法進行投藥， 伴隨（例如）投藥免疫抑制藥物例如環孢菌素a。關於 醫藥調配之—般原理’讀者可參考細胞療法：幹細胞移植、 基因療法與細胞免錢法，纟G.冑思坦恩&〜.薛利登編 著劍橋大學出版，1996 ;及造血性幹細胞療法，E. D.波 爾’ J.李斯特& ρ·洛，邱吉爾李賓斯頓，2〇〇〇。 瑟土因-調節性化合物之毒性與治療功效，可藉由在細 胞培養物或實驗動物進行之標準醫藥程序測定得。[η〗❶為 對於50%族群為致死之劑量。叫。為在5()%族群中為治療 上^效之劑量。毒性與治療功效間之劑量比值（LD5G/ED5。） 為…療指數。以呈現高治療指數之瑟土因_調節性化合物為 較佳。雖然可使用呈現有毒副作用之瑟土因-調節性化: 物，但應小心設計將此類化合物靶定至受影響組織之遞送 系統，以使能將對於未受感染細胞之傷害減至最低，並藉 此減少副作用。 仔自細胞培養物及動物研究之數據，可用於調配供使 用在人類之劑量範圍。此類化合物之劑量可落於其包括具 有少或無毒性之ED^值的循環濃度範圍内。劑量可在此範 圍内視所使用之劑量形式及所利用的投藥途#而有所變 化。對於任何化合物，可最初從細胞培養物評估治療上有 效之劑量。可於動物模式調配劑量，以達到其包括如於細 84 200918542 胞培養物所測定得之 狀之半·最大抑 50 亦卩，測試化合物達到對症 調配物可用::準:之濃度）的循環血裝淚度範圍。此類 葬由l更確測定可用於人類之劑量。可（例如） 曰门此液體層析術測量血漿中之水平 &套紐 ° 本發明亦提供套組，例 於調節細胞基令士” 用於❻療目的之套組，或用 k命或調郎細胞渴亡之套組。套組可包 土因-調節性化合物（例如，以預先測量之劑量）。 套組可視雹I 4m ^ M y 用說明書。裝置二 3=細胞與化合物接觸之裝置及使 r M m、I括，射 支架及其他用以將瑟土因-調

Ρ °導入個體（例如個體之血管）中，或# J： & I 於個體皮膚之裝置。 T 4將其塗覆 ::另-項具體態樣，本發明提供一種物質組成物， 广本發明之瑟土因·調節性化合物與另一種治療劑（同 式中，但彼此互相締合。術分別的劑量形 ^ 術彼此互相締合”如用於太 ^意指’將分別的劑量形式包裝在—起，或不然彼此相互 接附’以使能容易明白該等分別的劑量形式欲被販售，且 2藥呈相同療程之一部份。較佳地將藥劑與瑟土因調節 劑-起包裝於發泡包裝或其他多室包裝中，或呈可由使用 者自行分開（例如，藉由在兩容器間之刻劃線處撕開）之 相連結、分開密封的容器（例如錫箔小袋等）。 —於又另—項具體態樣’本發明提供一種包含存在分別 谷益中之a)本發明瑟土因·調節性化合物；及b)另—種治療 85 200918542 劑例如該等描述於說明書者的套組。 風本發明方法之實施將利用（除非另行指定）細胞生物 予、細胞培養、分子生物學、轉殖基因生物學、微生物學、 重組舰及免疫學之習知技術，其為習於該項技藝 知此類技術經完全解釋於文獻中。參見（例如）分子 『驗室手冊，f 2版，由山布魯克、彿利許與馬尼阿提斯 編者（冷泉港研究室出版：1989);職選殖，卷 \ (D.N.葛洛彿編著，1985 );募苦核酸合成（M」·蓋特編 :’胸）；幕里斯等人u.s.專利N〇: 4,683，195 ;核酸雜 父（B.D.漢姆斯&s· j.席金斯編著1984 );轉錄與轉譯（艮 D.漢姆斯& S. j·席金斯編著1984);動物細胞培養（r.[ 弗瑞許尼’艾i R.里斯有限公司，1987 ) m細胞與 酵素（IRL出版，1986) ; B.皮爾波，分子選殖之實施指南 (1984);論文，酵素學方法（學院出版有限公司，Ν.γ ); 哺乳細胞用基因轉移載體（J.H.米勒與M.P.卡羅斯編著， 1987,冷泉港研究室）；酵素學方法，卷154與155(吳等 人編著），細胞與分子生物學之免疫化學方法（麥爾與沃 克編著’學院出版，倫敦，1987 );實驗免疫學手冊，卷 I-IV (D. M.威爾與c c.布雷克威爾編著，1986 );操作小 鼠胚胎（冷泉港研究室出版，冷泉港，Νγ.，1986)。 實施例 本發明現將進行一般描述，其可藉由參照下列僅為說 明本兔明某些方面及具體態樣，而無意於以任何方式限制 本發明之目的所納入之實施例更容易被了解。 86 200918542 實施Η 1 :4_甲基_Ν·(2-α_(η福啉基f基）嗦唾并〖2Λ b] 售哇-6-基）苯基）-2-(吡啶-3-基）噻唑-5-甲m坡（化合物1 ) 之製備 6-(2-硝基-笨基）_咪嗤并[2 ib】噢唑_3羧酸乙酯之製僙

於代表性回合’係將2.1克2-胺基噻唑-4-碳酸乙酯 (Combi-Blocks ’ 0.0123 mol)與 25 mL· 甲基乙基酮一起與 2-溴-2’-硝基苯乙酮（3 〇 g，〇〇123 m〇1)混合。將反應混 合物於迴流下攪拌18小時。然後將其冷卻至室溫，並過濾 以去除有些固體。將濾液濃縮而得3.10克6-(2-硝基-苯基）_ 咪哇并[2，l-b]噻唑-3-羧酸乙酯（MS，M+ + Η = 3 18)。 ^-口-硝基-笨基卜咪唑并^^讣丨嘍唑-^基卜甲酵之製 備：

將6-(2-硝基-苯基）-咪唑并[2，l-b]噻唑-3-碳酸乙醋 (14.50 g ’ 0.0458 mol)與 100 mL THF 及 1〇〇 mL 含有 7 3 克NaOH (4 eq)之水混合。將反應混合物於室溫下授摔18 小時。然後將其濃縮。將水層以CH2Ch萃洗一次，然後以 [ 87 200918542 6N HC1酸化。將固體藉由過濾收集並乾燥，而得7.4克酸 中間物。將此物質（7.4 g，0.0256 mol )與100 mL無水THF 一起與N-甲基嗎福啉（NMM) ( 2.8 mL，0.0256莫耳）混合， 並冷卻至0°C。將氯甲酸異丁酯（3.35 mL，0.0256 mol)加 入’並將反應混合物於冰浴中攪拌3小時。將NaBH4 ( 0.97 g，0.0256 mol)以溶於3〇 mL水之溶液加入。將反應混合 物於0 C下攪拌45分鐘。然後將其加溫至室溫並濃縮。將 水層以CHWh萃取。將組合得之有機層以Na2S〇4乾燥，而 得粗製產物。經由層析術（ISC0，使用戊烷/乙酸乙酯之混 合物）純化得5.20克[6-(2-硝基·苯基）_咪唑并[2,1-b]噻唑-3-基]-甲醇（產率74% )。 2-(3_嗎福啉-4-基甲基-咪唑并[2,1-b]嗜哇-6-基）-笨坡 之製俤：

將[6-(2-硝基-苯基咪唑并噻唑_3基]甲醇(· 435 mg 1·5 8 mmol)溶解於25 mL之CH2Cl2與！叫三乙胺（〇 33 ^L)中。將曱磺醯氣（1 eq，0.12 mL)加入，並將反應混 口物加溫至室溫並攪拌丨5分鐘。然後將其以鹽水猝止並以 =H2C12萃取。將組合得之有機層以Na2S〇4乾燥並濃縮，而 斗于曱兮酸酯中間物。將該物質與6 之CH3CN及一起與 q 2 2 曰mL二乙胺與0.14 mL嗎福啉混合。將反應混合物於室 下攪拌18小時。於次日將其濃縮，並將所成之殘餘物置 88 200918542 於CH2CI2與水之問；隹一 心间進仃分配。將有機層乾燥（Na2S04)並濃 細’而得基本上定番太曰 屋置之產物。將此物質與6 mL甲醇及 1 mL 7jv 一 盘 2 Ο Π 1Λ-» Ar 〜 mg虱硫化鈉水合物混合。將所成之反應 混合物於迴流下播技6 Γ視秤6小時。然後將其冷卻至室溫，以100 f mL、、、邑對乙醇稀釋並濃縮。將所成之殘餘物與2〇 9:1 H2C12/甲醇並過濾。將濾液濃缩而得2_(3·嗎福琳_4_基甲基 •咪唑并[2，l-b]噻唑_6_基）_苯胺。 化合物1之製儀：

w將2·(3_°比咬基）-4_甲基噻唾-5-缓酸（0.61 g，2.8 mmol) 洛解於硫醯氯（2 mL)中，並將混合物伴隨加熱攪拌（82 〇c， 3小時）。於冷卻時，將溶劑去除並將殘餘物於高度真空下 乾燥。然後將酸氣化物懸浮於5 mL吡啶中，並加至充以 2_(3-嗎福啉-4-基甲基_咪唑并[2，！^]噻唑_6_基）_苯胺（〇 87 §，2.8 mmol)之微波小瓶中。將反應進行微波照射（16〇， b分鐘）。將溶液以甲醇倍散，並將所成之固體過濾並以 額外的甲醇沖洗。將固體乾燥而得〇 97克（68%)之4_曱基 -N_(2-(3-(嗎福啉基甲基）咪唑并[2，l-b]噻唑_6_基）苯 基比。定-3-基）嗟嗤-5-甲醯胺。 4-甲基-N-(2-(3-(嗎福啉基甲基）咪唑并噻唑-6_ 基）笨基）-2-(吡啶-3-基）噻唑-5-曱醯胺之HC1鹽類形式，係 89 200918542 藉由將該產物（0·16 g)溶解於10% HC1/CH3CN (4 mL)中 而製備得。然後將溶液冷凍乾燥而得呈黃-橘色固體之鹽類 (〇· 17 g )。以類似方法製備得其他鹽類（硫酸、甲磺酸、 馬來酸、磷酸、L-酒石酸、檸檬酸及蘋果酸）。 實施例2 : N-(2_(3·(六氩蛛拼-1-基甲基）味峻并 癌峻-6-基）苯基）喹喏啉-2-甲鼴胺（化合物2)之合成 6_(2-硝基-苯基）-咪唑并[2，l-b]嗜唑-3-幾酸乙酯之製僙 S 〇

V N Ο

NK

於代表性回合，係將2-胺基噻唑-4-碳酸乙酯（2.1 2， 0.0123 mol)吸收於曱基乙基酮（25 mL)與2_溴_2，_硝基苯 乙酮（3.0 g，〇·(Η23 mol)中。將反應混合物於迴流下攪拌 1 8小時。然後將其冷卻至室溫，並過濾以去除有些固體。 將濾液濃縮而得3.10克6_(2-硝基-苯基）_咪唑并噻唑 -3-羧酸乙酯（對於Cl4Hi2N3〇4S之計算值：318 3，卜 實驗值：319)。 備： [6_(2·硝基_苯基）_咪唑并[^4】嚷唑_3_基卜甲酵之製

HO 一 h2n 將6-(2-確基-苯基）_咪唑并噻唑_3•碳酸乙西旨 200918542 (14.50 g ’ 0.0458 mol)吸收於 10〇 mL THF 及 100 mL 含 有NaOH (7·3 g ’ 4 eq)之水中。將反應混合物於室溫下攪拌 1 8小時。然後將其濃縮。將水層以萃洗一次，然後 以6N HC1酸化。將固體藉由過濾收集並乾燥，而得7 4克 酸中間物。將此物質（7.4 g，0.0256 mol)與100 mL無水 THF —起與N-甲基嗎福啉（NMM) ( 2.8 mL，0.0256莫耳） 混合，並冷卻至0°C。將氣甲酸異丁酯（3.35 mL，0.0256 mol) 加入’並將反應混合物於冰浴中攪拌3小時。將NaBH4( 0.97 g ’ 0.0256 mol )以溶於30 mL水之溶液加入。將反應混合 物於0°C下攪拌45分鐘。然後將其加溫至室溫並濃縮。將 水層以CHzCh萃取。將組合得之有機層以Na2S04乾燥，而 得粗製產物。經由層析術（ISC0，使用戊烷/乙酸乙酯之混 合物）純化得5.2〇克[6-(2-硝基-苯基）_u米β坐并[2，i-b]嗟嗤_3_ 基]-曱醇（產率74%)(對於CuHui^OS之計算值：245.3， [M + H] +實驗值：246)。 4-[6-(2-胺基-苯基）-咪唑并[2，l-b】嘍唑-3-基甲基卜六氩 吡啡-1-铁酸第三丁酯之製儀：

將[6-(2-硝基-苯基）-咪嗤并[2,1-b]售唾-3-基]-甲醇（1.0 g，3_64 mmol)溶解於 CH2C12 (100 mL)與三乙胺（0.51 mL， 3.64 mmol)中。將甲磺醯氣（i eq，〇 28 mL)加入，並將 91 200918542 反應混合物加溫至室溫並搜拌15分鐘。然後將其以鹽水摔 止並以CH2C12萃取。將組合得之有機層以Na2SC^乾燥並濃 縮，而得甲磺酸醋中間物。將此物質以CH3CN(4mL)及三 乙胺（〇,51 mL，3.64 mmol)與 b〇c六氫吡啡（68〇 mg，3 64 mmol)吸收，並於室溫下攪拌丨天。將反應混合物濃縮， 並將所成之殘餘物置於與水之間進行分配。將有機 層以NaeO4乾燥並濃縮，而得基本上定量產量之產物。將 此物質吸收於甲醇（6 mL)及水（1 mL)與氫硫化鈉水合物 (200 mg)中。將所成之反應混合物於迴流下授拌24小時。 然後將其冷卻至室溫，以1 〇〇 mL絕對乙醇稀釋並濃縮。將 所成之殘餘物以水（2 mL)稀釋並以CHzCh萃取。將組合得 之有機層以NasSO4乾燥並濃縮，而得0.90克4-[6-(2-胺基-苯基）-咪唑并[2,1-b]噻唑-3-基甲基]-六氫吡畊_丨·羧酸第三 丁酯（對於C2iH27N5〇2S之計算值：413.5，[M+H] +實驗值： 414)。 化合物2之製備：

將4-[6-(2-胺基-苯基）_咪唾并[^吨]噻唑-3-基甲基]•六 氫吡啡-1-羧酸第三丁酯（〇·25 mm〇l)吸收於1 mL吡啶與 92 200918542 leq (50mg)之2-喹喏醯氯中。將反應混合物於Biotage微波 反應器中加熱（160 °C進行10分鐘）。然後將其冷卻至室 溫並濃縮。將所成之粗製產物經由層析術（Isc〇，梯度溶析， CH2C12至950/〇 CH2C12，4%甲醇與1%三乙胺）純化。然後 將經純化之產物以含有25°/。三氟乙酸（tfa)溶於CH2C12 (2 mL)之溶液處理2小時。然後將其濃縮，並將所成之殘餘物 以乙酸乙酯倍散，而得呈TFA鹽之所希望產物（對於 C25H23N7OS 之計算值：469.5 ’ [M+H] +實驗值：470 )。！HNMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 13.9 (br s, 1 Η), 9.8 (br s, 1 H), 9.6 (br s，1 H) 8.9 - 7.2 (m，11 H)，4.8 (br s，2 H)。於裝備有 3.5 um Eclipse XDB-C18 (4.6 mm x loo mm)管柱之 Agilent 1100系列HPLC上，以下列條件：CH3cN/H2〇 ’經修飾以 o.i %甲酸移動相進行分析性HPLC。梯度溶析：5%維持（2 min) ’ 5。/。至 95%梯度（11 min)，95%至 5%梯度（〇 3 min)，5% 維持（2.7〇1丨11)’15 111丨11總共進行時間。流速：（)8„11/1^11。 保留時間=3.0 4 m i η。 貧施例3:4- ψ基-2-吡啶-3-基-噢唑_5_漩酸【2-(3-[1，2,4】 二唑-1-基甲基-嘑唑并【2J4】噻唑·6_基）苯基卜醮按之製镛 3·氣甲基硝基-苯基咪唑并丨21_b]嘍唑之製備： ϋ2 \ Π Μ

於室溫下將S0C12 (400 mL, 5.5 mol)加至[6-(2-硝基-苯 基）-咪唑并[2，l-b]噻唑_3-基]-甲醇（165 g，〇 6 m〇1)溶於 一氯甲烷（1_5 L)之溶液中。將DMF (〇 3 mL)加入並將反應 93 200918542 混合物於30°C下攪拌（2 h)。將反應混合物冷卻至〇°C，並 將沈澱經由過濾收集且於真空中乾燥，而得呈白色固體之 3-氣甲基- 6- (2 -石肖基-苯基）-υ米β坐并[2,l-b]°塞哇（174 g，99% 產率）。 6-(2-靖基-苯基）-3-[1，2,4]三峻-1-基甲基-咪峻并[2，l-b] 嘍唑之製備：

將3 -風!甲基- 6- (2 -石肖基-苯基）_〇米〇坐并[2,1·1)]0塞唾（64.0 g，0.22 mol)溶解於 DMF (600 mL)中，隨後將 1Η-[1，2,4] 三唑（30.4 g ’ 0·44 mol)、K2C03 (91.0 g，0.66 mol)及 Nal (20 mg)加入。將反應混合物於室溫下攪拌過夜，然後於35〇c 下攪拌（8 h)。將混合物通過矽石凝膠濾墊，並將濾液於真 空中濃縮而得黃色固體。將固體以乙酸乙酯清洗而得黃色 固體（54 g，75%產率）。iH-NMR (DMSO-d6, 400 ΜΗζ): δ 5.75 (s, 2Η), 7.40 (s, 1H), 7.52 (m,lH), 7.68 (m, 1H), 7.79 (m, 2H)，8.05 (s，1H)，8.19 (s，1H)，8.83 (s，1H)。 2-(3-[l，2,4]三唑-1-基甲基-咪唑并[2，l-b】嗜唑-6-基）-笨胺之製備：

將6-(2-硝基-苯基）-3-[1，2,4]三唑-1-基曱基-咪唑并 94 200918542 [2，l-b]噻唑（54 g，165 mmol)溶解於乙醇（2 〇 L)中。將 Pd/C (10%，20 g)加入，並將燒瓶抽真空並回填以η〗。將反 應混合物於Kb下，於室溫攪拌（2天）。然後將反應混合 物通過矽石凝膠濾墊，並將濾液於真空中濃縮而得黃色固 體。將固體以乙醇清洗而得呈黃色固體之三唑 -1-基甲基-咪唑并[2，l-b]噻唑-6-基）-苯胺（46 g，94°/。產率）。 4-甲基-2-吡啶-3-基-嚷唑_5·羧酸【2_(3_[12 4】三唑 基甲基-咪唑并[2，l-b]嗜唑-6-基）-苯基卜醢坡之製俤

將2-(3-[1，2,4]三唑-1-基甲基_咪唑并[2，i_b]噻唑-6-基）-苯胺（60 g，202 mmol) 、4-曱基-2-°比咬-3-基-噻唑-5-1/ 羧酸（54 g，245 mmol)、HATU (154 g，405 mmol)與 DIEA (132 mL，800 mol)存於DMF (850 mL)之混合物，於室溫下 攪拌過夜。TLC指示反應達完全。將沈澱經由過濾收集， 以大量水、丙酮、甲醇及DCM清洗，而得白色固體（79 g， 79 %產率）。將固體從醋酸再結晶，以飽和Na2C03溶液（l.o L X 2)、水（2 L)與乙醇（1.0 L)清洗，並於真空烘箱中於450C 下乾燥過濾，而得呈白色固體之4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唾 -5 -叛酸[2-(3-[1，2,4]三唾-i_基甲基-口米。坐并[2，l-b]嗟唾_6_ 基）-苯基]-醯胺（62 g，62%產率）。1HNMR (DMSO-d6, 400 95 200918542 MHz): δ 2.79 (s，3H)，5.78 (s，2H)，7·22 (m，1H)，7.36 (m， 1H), 7.51 (s，1H), 7.60 (m，1H)，7.79 (d，·7=6.4Ηζ, 1H)，8.04 (s, 1H), 8.38 (m, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.54 (d, 7=8.〇Hz, 1H), 8·75 (m，1H)，8.86 (s，1H)，9.19 (s，1H)，12.78 (s，1H)。 ESI-MS: 499.3(M+1), 521.4(M+23(Na))。 4-曱基-2 -α比咬-3 -基·嘆峻-5 -叛酸[2-(3-[1，2,4]三唾-1-基曱基-咪唑并[2，l-b]噻唑-6-基）-苯基]-醯胺之HC1鹽，係 藉由將5.20 g游離態鹼懸浮於甲醇（350 mL)中而製備得。於 此懸浮液中添加4N HC1 (3 5 mL)，並將混合物加熱直到溶 解。將溶液冷卻至-78 °C，並經由冷凍乾燥法乾燥，而得呈 黃色固體之4-甲基-2-吡啶-3-基-噻唑-5-羧酸[2-(3-[1,2，4]三 °坐-1-基甲基-°米。坐并[2，1-1)]嗔嗤-6-基）-苯基]_醢胺-只(^1鹽 (7.49 g)。 實施例4 ··贏類形成、嶂檢舆特徵化 由化合物1製得八種可接受（調節性與pKa)之鹽類，

亦即與氫氯酸、硫酸、甲磺酸、馬來酸、磷酸、^酒石酸、 檸檬酸及蘋果酸製得。然後於下列項目對所成之鹽類或游 離態驗進行篩檢： 1) 加工、形態、多晶形； 2) 結晶形狀、單一穩定多晶形； 3) 物理穩定性； 及 的差式掃描熱 4)開放光碟加速穩定性（4〇 〇c/75% RH); 5 )生物相關性溶解β 圖1呈現於化合物1之HC1鹽形式所得 96 200918542 量法（DSC)結果，其顯示在u pc與192°C附近有小的吸熱 轉變。熱重量分析（TGA)結果表示在加熱時有一般性重量流 失’可能與失去溶劑（最可能是由於因此類HC1鹽之吸溼 本性造成的水分流失）有關’但是對應於在丨丨丨與192°C 之所確定DSC轉變温度，則無重量流失事件。因此，此二 DSC熱事件似乎與分子階層相改變關連，且將暗示化合物i

在加熱h其多晶形間之轉變。於2〇〇〇c以上，DSC結果指 示化合物1鹽被分解。 化合物1之游離態驗形式在236。C有單 圖2證明 吸熱事件纟與單-、結晶炫點關連。因為於或 結果中未觀察到其他熱轉變，故化合物i 估之熱範圍内僅呈單—相（亦即’無多晶形）在斤 歷經〇· 125。^熱範圍的可能？日日日形相改變（如前述 對於HC1鹽之圖1中所示）可能莫&越& & 導致樂物於一般儲放與加 工條件下發生改變。因為客S泥姑 為夕日日形轉變對於藥物之溶解及生 物可利用性會有顯著影響，實 又X除上選擇可最小化或消除 相轉變潛在性之藥物形式。於是，由圖果丘同 示，藥物，游離態驗形式基於其明顯單一之化合：；、結 日日形式’而較優越做為藥物。 實施例5··活醴内爾试 本實驗目的在於，比齡3路本s t , ,,1 風類與游離態鹼形式之化合 物1，於兩種不同小鼠糖尿 飞 (DIOU Ob/oh I句、a 、式（飲艮所誘發之肥胖模式 (DI0)及Ob/ob小鼠）中的功效。 主要決定因素。 糖為整個功效實驗中之 97 200918542 對於飲食所誘發之肥胖模式，係將六週齡C57BL/6雄 &小鼠（&爾司Μ實驗室）饒以高脂肪飲食（6G%卡路里來 自月曰肪，研究飲食）達大約6週，直到其體重達到約4〇名。 ，測試化合物每日經由口服管飼法，以指定劑量進行投 藥。所使用之媒液為2% HPMC與〇 2% D〇ss。每週兩次測 量各別小鼠體重。於研究進行之每2週，從每組小鼠之尾 部靜脈採血以測定血糖值。使用JMP程式（第6版）完成 統计刀析。數據係藉由使用杜尼特測試（Dunnett，s Test)，具 有與對照組比較之單向AN0VA進行分析。卩值；…^表示 組間具有顯著差異。 〇b/〇b小鼠為缺乏瘦素（為神經學上傳訊飢餓終止之重 要飽足蛋白）之基因上經操作剔除小鼠。痩素突變為同合 子型，並包括異合子型種系作為對照組（〇b/+);此組應不會 顯示增加體重或血糖，姑且不論由高脂肪飲食所產生的正 常影響。 然後將呈游離態鹼形式之化合物1於DI〇模式中進行 測試。對於劑量丨00 mg/kg/天之化合物i游離態鹼的血糖測 試結果，係與劑量1000 mg/kg/天之白藥蘆醇、400 mg/kg/ 天之二曱雙胍（metformin)及劑量1〇〇 mg/kg/天之化合物2 相似’其皆從第2週起呈現血糖顯著降低（圖3-5 )。對於 化合物1之金糖測試結果，與對於白藥蘆醇、二甲雙脈及 化合物2的相似，其皆從第2週起呈現血糖顯著降低（圖 3-5)。對於化合物丨組於第2與3週，p值少於〇1，與媒 液組相較有顯著減低。雖然血糖在第4週餵食葡萄糖測試 98 200918542 仍維持較媒液組低，對於化合物2與白藥蘆酵已喪失顯著 性。

劑量100 mg/kg呈游離態鹼之化合物1在〇b/ob模式中 、頁示具有增進功效，如由圖6_8所證實。於第1週，血糖已 虻較媒液組降低幾乎6〇 mg/dL。於第2週之斷血糖此仍持 續趨勢（圖7)，其中化合物1組具有158.3 mg/dL葡萄糖， 相較於媒液組為285 3 mg/dL葡萄糖。根據測試， =值小於.0001，其證明相較於媒液組有高度顯著減低。雖 ’、、、:血糖值在第3週增加，相對於媒液組有顯著減低（p< 〇 1)。 _進行直接比較呈游離態鹼與HC1鹽之化合物〗，以及化 口物2的第二ob/〇b實驗，所有劑量皆為100 mg/kg。一週 與二週斷食灰糖數據係分別列示於圖9與10。 同等物 妙本發明尤其提供瑟土因_活化性化合物及其使用方法。 雖然已論述本發明之特別具體態樣，前述說明書為例舉說 :而非限制性。本發明之許多變異對習於該項技藝人士在 灸說明書時將成為顯而易知。本發明之完整範圍應由 W範圍’及其同等物之完整範圍，與說明書及 此類變異來決定。 以5丨用方式併入 列之2中所提及之公開案與專利案’包括該等於下文所 或專其完整性以引用方式併入，誠如各公開案 …、夺別且各別地以引用方式併人 况，將管制本申請案（包括本文中之任何定義） 99 200918542 亦以其完整性以引用方式併入者為，任何其參照相關 於進入公開資料庫之登錄編號的聚核苷酸及多肽序列，例 如該等由基因組研究學會（TIGR) ( www.tigr.org )及/或生物 技術資訊中心（NCBI) ( www.ncbi.nlm_nih_gov )所保有者。 亦以引用方式併入者為下列：PCT公開案 WO 2005/002672 ； 2005/002555 與 2004/016726 。 【圖式簡單說明】 圖1列示經由熱重量分析（TGA)及差式掃描熱量法 (DSC)特徵化之化合物1的氯化物鹽形式。 圖2列示經由熱重量分析（TGA)及差式掃描熱量法 (DSC)特徵化之化合物1的游離態鹼形式。 圖3列示於經投藥化合物1之游離態鹼的DIO小鼠模 式之第2週餵食血糖。 圖4列示於經投藥化合物1之游離態鹼的DIO小鼠模 式之第3週斷食血糖。 圖5列示於經投藥化合物1之游離態鹼的DIO小鼠模 式之第4週摄食血糖。 圖6列示於經投藥化合物1之游離態鹼的Ob/ob小鼠 模式之第1週假食企糖。 圖7列示於經投藥化合物1之游離態鹼的Ob/ob小鼠 模式之第2週斷餵食血糖。 圖8列示於經投藥化合物1之游離態鹼的Ob/ob小鼠 模式之第3週顧食血糖。 圖9列示於經投藥化合物1之游離態鹼或氯化物鹽形 100 200918542 式的Ob/ob小鼠模式之第1週餵食血糖。 圖10列示於經投藥化合物1之游離態鹼或氯化物鹽形 式的Ob/ob小鼠模式之第2週斷食血糖。 【主要元件符號說明】 無

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Claims (1)

1. 200918542 、申請專利範圍： 鹽類 1.—種由結構式（in)表示之化合物或其

   R3 ’、 (III) 其中： R 為-H 或-CH3 ; 為經取代或未經取代之含氮雜環甲基基團； R為-H或-CH3 ;且 R為未經取代之n比啶基基團。 ?艮據申請專利範圍第i項之化合物，其中Ri為含有 ^原子與視需要地選自氮及氧之第二雜原子的雜環甲基基 3·根據中請專利範圍第2項之 代或未經取代之非芸婕她其中R為（經取 代之非方族雜環）曱基基團》 (根據申請專利範圍第3項之 啉基甲基基團。 馬馬钿 5 *根據申请專利筋图笛 三…基基團。圍第1項之化合物’其中〜2，心 6·根據申請專利笳 由結構式（IV)表示： 之化合物，其中該化合物係 102

   7·根據申凊專利範圍第6 (IV)。 ^子與視需要地選自氮及氧項:化合物’其中R1為含有 團。 之第二雜原子的雜環甲基基 8.根據申請專利範圍 抑+、土 诉七 項之化合物’其中R1為（經取 代或未經取代之非婪祕〜 H、工取 戸方族雜環）曱基基團。 9 ·根據申請專矛丨丨益阁& 号~範圍第6項之化合物，其中該化合物传 由結構式（VI)表示： ϊ

   (VI) 〇 103 200918542 10.—種由結構式（V)表示之化合物或其鹽類

   11. 根據申請專利範圍第10項之化合物，其中該化合物 為游離態驗。 12. 根據申請專利範圍第10項之化合物，其中該化合物 為鹽類。 13. —種醫藥組成物，其包含根據申請專利範圍第1-12 項中任一項之化合物或醫藥上可接受之鹽類及醫藥上可接 受之載劑。 14. 根據申請專利範圍第13項之組成物，其中該醫藥組 成物為無熱原。 1 5 ·根據申請專利範圍第1 3項之組成物，其進一步包含 額外的活性劑。 16.根據申請專利範圍第13項之組成物，其用於治療或 104 200918542 預防騰島素抗性、代謝症候群、糖尿病、或其併發症、或 用於增加個體胰島素敏感性。 1 7.根據申睛專利範圍第16項之組成物，其中該化合物 增加瑟土因蛋白質之水平或活性中至少一者。 1 8.根據申凊專利範圍第17項之組成物，其中該化合物 增加瑟土因蛋白質之脫乙醢基酶活性。 19. 根據申請專利範圍第丨7項之組成物，其中該瑟土因 蛋白質為哺乳動物蛋白質。 20. 根據申請專利範圍第〗7項之組成物，其中該瑟土因 蛋白質為人類SIRT1。 21 ·根據申請專利範圍第丨7項之組成物，其中該化合物 於該化合物有效增加SIRT1及/或SIRT3蛋白質之脫乙醯基 酶活性的濃度下，實質上不具有下列一或多種活性：抑制 PI3 -激酶、抑制醛還原酶、抑制酪胺酸激酶、轉活化 (transactivate) EGFR酪胺酸激酶、冠狀動脈擴張、或解 痙攣活性。 22. —種根據申請專利範圍第卜12項中任一項的化合物 或其醫藥上可接受之鹽類之用途，其係用於製造用於治療 或預防胰島素抗性、代謝症候群、糖尿病、或其併發症、 或用於增加個體胰島素敏感性之醫藥品。 23. 根據申請專利範圍第22項之用途，其中該化合物增 加瑟土因蛋白質之水平或活性中至少一者。 24. 根據申請專利範圍第23項之用途，其中該化合物增 加瑟土因蛋白質之脫乙醯基酶活性。 105 200918542 25. 根據申請專利範圍第23項之痄途八中該瑟土因蛋 白質為哺乳動物蛋白質。 26. 根據申請專利範圍第23項之讳途/、中該瑟土因蛋 白質為人類SIRT1。 27_根據申請專利範圍第23項之用途’其中該化合物於 該化合物有效增加SIRT1及/或SIRT3蛋白質之脫乙_基酶 /舌）生的/辰度下’貫質上不具有下列一或多種活性：抑制p 13 _ 激酶、抑制醛還原酶、抑制酪胺酸激酶、轉活化EGFR酪胺 酸激酶、冠狀動脈擴張、或解痙攣活性。 Η'一、明式： 如次頁 C [ 106