TW200914039A - Process for providing a temperature-stable muscle relaxant on the basis of the neurotoxic component of botulinum toxin in solid form - Google Patents

Description

200914039 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係提供高溫之肌肉型鬆弛劑之方法，其中該肌肉 型鬆弛劑為包括不含配位蛋白質之肉毒桿菌毒素之神經毒 素成份之固態乾燥型組合物。 【先前技術】 肉毒桿菌毒素係由梭菌產生。抗原上不同企清型之肉毒 桿菌毒素有7種，即肉毒桿菌毒素A、B、c、D、e、F和

G°肉毒桿菌毒素通常以複合體型式從溶解的梭菌培養液 中釋放’即賦予肉毒桿菌毒素之毒性（所謂"神經毒素成份”） 人人單位與其他細菌蛋白質結合而一起形成毒素複合 體。該複合體之分子量可於約3〇〇 〇〇() Da與9〇〇 〇〇〇 1變化複合體蛋白質為如不同的紅血球凝集素。該毒素 複：體之蛋白質自身為無毒的，但據信其可為神經毒素成 伤提供穩定性並為肉毒桿菌中毒中經口毒性之主要原因。 2毒素2合體不同’呈分離和純组式，即不含任何配位梭 ο蛋白貝之神經毒素成份係酸*穩定且無法抵抗胃腸道中 具攻擊性的環境。 ;肉毒桿菌毒素複合體之神經毒素成份最初以單一多肽鏈 形式I成’其在血清型人之情況下具有約150 kDa之分子 主在八他血清型中’已觀察到：取決於細菌來源，神經 f素成份之分早蚕仏 于置於約145與約170 kDa之間變化。比如， 在血清^之情況中’多肽之蛋白水解處理產生呈由經由 -硫鍵連接之重鏈和輕鏈組成之雙鏈多肽型式之活性多 131807.doc 200914039

狀。在人體中’重鍵調節虚穿網Η备J：入1 I，L β即兴哭觸則膽鹼性神經端之結合和 毋素内化至細胞。咸相信，柄赫在 孪工鏈係賦予毒性效應，作為 辞"狀鍵内切酶並分解負責膜點人 貝貝膜嘁合之特異蛋白質（SNARE複 合體）（參見’如 Montecucco Γ1 〇u： ^ ucco u，Shlav〇 〇.，R〇sett〇 〇 :破傷

風和肉毒桿函神經毒素之作用播生丨A 下用機制 Arch Toxicol. 1996; 18 (Suppl.): 342-354)。 藉由干擾細胞内膜溶合過程，向表 、狂岡母柃菌毒素阻止乙醯膽 鹼釋放入突觸間隙。肉喜捏鈷主I ° n毋枰菌毋素在神經肌肉結合處之總 ( ㈣為干擾神經肌肉傳輸且實際上為去神經支配肌肉。: 毒桿菌毒素亦在其他外周類膽驗突觸處具有活性而使唾液 分泌或出汗減少。 肉毒桿菌毒素複合體之神經毒素次單位於本文係指"神 經毒素成份，，或”不含配位蛋白質之神經毒素成份"。 整個本發明申請案中所用之術語”肉毒桿菌毒素” (botulinum toxin"、"botulinum toxins")不僅係指不含其他 任何梭菌蛋白質之神經毒素成份，亦指"肉毒桿菌毒素複 合體"：本文中術語"肉毒桿菌毒素"係用於複合體與神經 毒素成份之間不必或不需要區別之情況。複合體通常包含 額外所謂的，，無毒"蛋白質，吾人亦將其稱為，，配位蛋白質" 或”細菌蛋白質"。 "BoNT"或”NT”為有關不含配位蛋白質之肉毒桿菌毒素 之NT化合物的常用簡寫。 儘管肉毒桿菌毒素複合體具有毒性效應，其已用於大量 疾病中作為治療劑。1989年，美國批准將肉毒桿菌毒素灰 131807.doc 200914039 清型A用於人體中以治療斜視、臉痙攣和其他疾病。其以 肉母桿函毒素A蛋白質複合體形式，比如以商品名稱 BOTOX (Allergan Inc)或 DYSPORT (Ipsen Ltd)經由商業途 徑獲得。對於治療應用，將複合體直接注入至待治療之肌 肉中。在生理pH下，毒素係自蛋白質複合體釋放並產生所 需藥理學作用。 對病人投藥’典型地經肌内直接投入感染肌肉之前，該 組合物係先溶於生理鹽水中。 有關基於肉毒桿菌毒素之藥劑之組成和劑量及有關基於 肉毒桿菌毒素之神經毒素成份之藥劑的组成、劑量和投與 次數可參考US 60/817 756。 除了上述配位蛋白質之功能外，已預測：其亦可保護毒 桿菌毒素複合體之神經毒素成份免受嚴格環境條件影響， 而且神經毋素成份本身係極易降解及/或去活性，尤其處

間餘存及/或運輸。 基於該原因’過去一般極小心 心地防止基於肉毒桿菌毒素

冷卻裝置增加提供藥劑的成本。

131807.doc 200914039 上，肉毒桿菌毒素之神經毒素成份明顯比工藝中預料者 穩定》 【發明内容】 本發明關於一種在高於20°c之較高溫度，如高於3(rc或 45:C下提供肌肉型鬆弛劑之方法，其中該肌肉型鬆弛劑為 固態乾燥型組合物，其包括不含配位蛋白質之肉毒桿菌毒 素之神經毒素成份；更佳地，該方法涉及儲存及/或運 輸。在另-個實施例中，該準備為製備肌肉型鬆他劑之方 法之-個步驟’比如，纟已經乾燥包含肉毒桿菌毒素之神 經毒素成份之蛋白質後實施之一個步驟。 在個實知例中，提供溫度高於45〇c之肌肉型鬆他劑， 其中該肌肉型鬆他劑為不含配位蛋白質之肉毒桿菌毒素之 神經毒素成份之固態乾燥型組合物。 在另一個實施例中’該準備涉及儲存及/或運輸及/或為 製備該肌肉型鬆弛劑之方法之一個步驟。 在另一個實施例中，令該肌肉型鬆他劑處於高於45。〇和 高達m：之溫度達一段不超過90天之期間。在另一實施例 :’該段期間範圍可從1(3分鐘至9()天。在另—實施例中， 度係於45 c與6G°C之間且該段期間範圍係從1〇分鐘至 9〇天。在另-實施例中’該段期間範圍係從10分鐘至30 天°在另―實施例中’溫度係介於阶與抓之間且該段 期間範圍係從10分鐘至10天。 在另-個實施例中，該肌肉型鬆他劑係經運輸及/或儲 存而無須任何人工冷卻裝置。 131807.doc 200914039 在另一個實施例中 素成份之凍乾粉。 在另一個實施例中 類血清蛋白。 該組合物為肉毒桿菌毒素之神經毒 ，該組合物進一步包括蔗糖及/或人 在另一個實施例中 由分別不同於蔗糖和 1該組合物進一步包括至少一種選自 人類jk清蛋白之低溫保護劑、穩定 劑、PH緩衝液、賦形劑及其混合組成之群之成份。 在另一個實施例中，該神經毒素成份是肉毒桿菌毒素A 型之神經毒素成份。 【實施方式】

本發月關於一種提供溫度高於2〇。。之肌肉型鬆弛劑之方 法其中該肌肉型象、他劑為包括不含配位劑之肉毒桿菌毒 素之神經毒素成份之固態乾燥型組合物。在另-個實施例 中’該肌肉型鬆弛劑係在价及/或以上之溫度下提供，其 中該肌肉型鬆弛密)]為句文* 一 、㈣包括不含配位劑之肉毒桿菌毒素之神 經毒素成份之固態乾择B人, 〜乾岛型組合物。本發明範圍内，術語 ”提供”包括本文所定義之肌肉型鬆弛劑之任何類型的提 供’特別係储存、運輸或製備肌肉型鬆㈣之—個步驟。 術語”提供"亦包括肌肉型麩卧劍步 仿肌丨!各弛劑處於—從冰凍狀態（_2〇。 或冷卻狀態（+4°C )至高於2〇。〇之、、®+、ra — ^之/皿度之溫度上升的步驟。 在另-個實施财，該肌肉型鬆弛劑係在价及/或以上之 溫度下提供，#中該肌肉型鬆弛劑為不含配位劑之肉毒桿 菌毒素之神經毒素成份之固態乾燥型組合物。 本發明範圍内 將應用所有型式之肉毒桿 菌毒素之神經 131807.doc -10- 200914039 毒素成份’特別是不同血清型。此外，經修飾及/或重組 產生之肉毒桿菌毒素之神經毒素成份，包括個別突變和缺 少者等亦在本發明範圍内。關於合適之突變可參考w〇 2006/027207 A1、WO 2006/114308 A1 和 EP07014785.5，將 /·

其以引用方式完全併入本文中。另外，在本發明範圍内， 可使用不同血清型之混合物（以神經毒素成份及/或其重組 型之型式，如肉毒桿菌神經毒素A型和b型之混合物）。然 而，本發明亦關於經化學修飾之神經毒素，如特別是一種 或多種表面或溶劑暴露之胺基酸藉由聚乙二醇化、醣化、 硫酸酯化、磷酸化或任何其他修飾法進行者。 在一個實施例中，該組合物包括肉毒桿菌毒素A型之神 經毒素成份。在另—個實施例中’肉毒桿菌毒素為抗原上 不同之血清型A、B、C、D、E、F或G之肉毒桿菌毒素。 不論何處提及肉毒桿菌毒素血清型A、B、C、D、E、F4 G，亦涵蓋該等血清型之已知變體，如血清型ai、a2、 A3 、 Bl 、 B2 、 B3 、 〇 、 〇2 、 。 、 di 、 D2 D3 、 ei 、 E2、E3、FI、F2、们或⑴、G2、⑴。根據本發明，可使 用種血/月型或不同血清型之混合物。在一個實施例中， 肉毒桿菌毒素為肉毒桿菌毒素A。 在另個實鉍例中’亦涵蓋肉毒桿菌毒素之異構型、同 系物直系同源體和旁系同源體’其顯示至少、至少 至夕7〇/〇、至少80%、至少90。/〇或高達1〇〇。/。之序列 致性可藉由任何適宜產生可靠結果之運算法算得序列 一致性’比如藉由使用FASTA運算法（W.R. Pearson & D.j. 131807.doc 200914039

Lipman PNAS (1988) 85:2444-2448)算得。

術語"神經毒素成份"亦包括發現於肉毒芽孢梭菌之其他 血清型中之功能性同系物。在本發明之一個實施例中，神 經毒素成份不含任何其他肉毒芽孢梭菌蛋白質，在一個實 施例中，神經毒素成份亦不含潛在可能與其結合2Rna ^ 神經毒素成份可為具有約150 kDa之單鏈前驅蛋白質或經 蛋白水解處理之神經毒素成份’其包括可藉由一或多個二 硫鍵連接之約50 kDa之輕鏈（Le)和約1〇〇 kDa之重鏈(對 於評論’參見如 Simpson LL，Ann Rev Pharmae〇1 T〇xic〇l 4; 44:丨67_93) 4另—個實施例中，可使用單鏈和經處 理之神經毒素成份之混合物。 根據本發明之教^ ’藥劑可能不含任何肉毒㈣毒素複 合體中所發現異於神經毒素成份之蛋白f。神經毒素成份 之前驅蛋白質可為已分解或未分解 '然而，在—個實施例 前驅物已分解成重鏈和輕鏈。如本文他處所指出 ^夕肽可為野生型序列或其-❹個殘基可經修飾。修 7包括可料纽之攝取或敎料益之化學_，如糖 、乙醯化、醯化、醯胺化或類似修飾。然 成份之多肽鏈可交替地或額外地藉由増加、替二素 或多個胺基酸殘基進行修飾。 、s y 上文所指之神經毒素成份可為組合物之 藥組合物。此本文所用之醫藥組合物 以為一醫 成份型式作為唯一活性成份之肉毒桿 ，：神經毒素 他醫藥活性成份如止痛劑及/或其他神經毒素。5可含有其 131807.doc 12 200914039 本文所用之"醫藥組合物”是-種調配物，其甲含有或包 括可用作_或賴之蹄成份1㈣組合物可能適宜 用於對病人之”或治療性投藥（比如，#由肌内注射或 皮下注射方式）。 本發明之-個實施例中，該組合物可包括神經毒素成份 及玻尿酸及/或聚乙料略㈣及/或聚乙二醇，該組合物 係視情況藉由合適之pH緩衝液，特别是藉由乙酸納緩衝液 及/或低溫保護劑多元醇穩定pH。 在-個實施例中，神經毒素成份之生物活性如在小鼠 LDS0分析中所測得為每叫神經毒素成份中含5〇至㈣叫〇 單位。在另,個實施例中，神經毒素成份之生物活性為約 5〇單位該15〇 LDsg單位係指每毫微克所含之單 位。-般地，本發明之醫藥組合物包括量為約”g至約 30 ng之神經毒素成份。 包括呈分離型式之肉毒桿菌毒素A型之神經毒素成份之 醫藥組合物可經由商業途徑由德國ph随⑽ 以商標獲得。肉毒桿菌毒素A型和B型之神 經毒素成份之生產隸述於如國際專财㈣㈣衝侧 和 WO 2006/133818 中。 在-個實施例中’該組合物包括肉毒桿菌毒素a型之神 經毒素成份。該組合物為肉毒桿菌毒素之神經毒素成份之 固態乾燥型組合物。在另一個實施例中，該組合物進一步 包括如麓糖或人類也清蛋白或兩者；在另一個實施例中， 人類血清蛋白錢糖之比例為約仏在—個實施例中， 131807.doc -13· 200914039 該組合物是Xeomin®。在另一個實施例中，該人類血清蛋 白為重組人類血清蛋白。或者，該組合物不含源自哺乳動 物之蛋白質如人類血清蛋白。任何此溶液可藉由以其他非 蛋白質穩定劑（如下）替換血清蛋白提供足夠神經毒素穩定 性。 在本發明專射請案範圍内，可使用基於肉#桿菌毒素 A型之神經毒素成份之藥劑，在另一個實施例中，可以使 用經由Merz Pharmaceutical以商標Xe〇min®分銷之產品。 這是因為當應用基於肉毒桿菌毒素之神經毒素成份之醫藥 組合物’如—時’發現病人體内產生抗體之趨勢低 於投與基於肉毒桿詩Μ型複合體之錢。不受任何理 娜限制’咸信：肉毒桿g毒素複合體巾之紅血球凝集素對 免疫系統具有活化能力。 有關基於肉毒桿菌毒素之藥劑的組成和劑量及關於基於 肉毒桿菌毒素之神經毒素成份之藥劑之組成、劑量和投與 次數可參考PCT/EP2007/005754。 、在個實施例中，該組合物為肉毒桿菌#素之神經毒素 成份之&乾粉’該組合物可進—步包括f、糖及/或人類血 =白。在該後-組合物中’人類A清蛋白與絲之比例 約1.5。在一個實施例中，該組合物為Xeomin®。 ，、”且„物可包含其他賦形劑。術語”賦形劑"係、指存在於 物^ 物中異於醫藥組合物中所存在之活性醫藥成份之 劑、山:形劑可為緩衝液、載體、抗黏劑、止痛劑、黏合 朋劑、填充劑、稀釋劑、防腐劑、媒介物、環糊精 131807.doc •14· 200914039 及/或體積膨脹劑比如清蛋白、凝膠、膠原蛋白、氣化 鈉、防腐劑、低溫保護劑及/或穩定劑。 "pH緩衝液"係指可將組合物、溶液及類似物之pH值調整 至一特定值或一特定pH範圍之化學物質。在一個實施例 中，該pH範圍可於pH 5與pH 8之間；在另一個實施例中， 該pH範圍可於PH 7與pH 8之間；在另一個實施例中，該 pH範圍可於pH 7.2與pH 7.6之間；在另一實施例中，該pH 值為7.4。在另一個實施例中，當該醫藥組合物在重組時 或注射後，其pH係在PH 4與pH 7.5之間；在另一個實施例 中，其pH係在pH 6.8與pH 7.6之間；在另一實施例中，其 pH係在pH 7.4與pH 7.6之間。 在一個實施例甲’該組合物亦包含1-100 mM乙酸鈉緩衝 液；在另一個實施例中，其包含丨0 mM乙酸鈉緩衝液。 所指pH範圍僅為典型實例且實際pH可包含任何介於上 列數值間之區間。根據本發明教示之合適缓衝液為如構酸 鈉緩衝液、乙酸鈉緩衝液、TRIS緩衝液或在上列pH範圍 内適宜緩衝之任何緩衝液。 本文中之術語"室溫"係指任何於+2〇°C與+25。(：之間之溫 度，極佳者為任何下列溫度：+2〇。(：、+21。(：、+22。(：、 +23°C、+24°C或+25°C，和其間之任何值。 ”穩定"（"Stabilizing"、"stabilizes"或"stabilization”）音指 該活性成份，即在併入醫藥組合物之前，重組或水溶液醫 藥組合物中之神經毒素成份具有大於約2〇%、3〇%、 40%、50%、60%、70%、80%、90%和高達約 100%生物活 131807.doc •15· 200914039 性神經毒素成份具有之毒性。 :類穩定劑之實例為凝膠或清蛋白，在—個實施例中， 其為人體來源或從重組源獲得。亦包括源自非人類或非動 物來源之蛋白質。該穩定劑可藉純學方式或重植笑因= 飾。在本發明之-個實施例中’想像使用醇類，如料: :露酵作為低溫保護劑賦形劑以在東乾過 質。

在本發明之另一個實施例中，該穩定劑可為包括玻尿 酸：聚乙烯吡洛㈣、聚乙二醇或其任何組合物之非蛋白 質穩定劑。在另一個實施例中’該聚乙烯吡咯啶酮例如可 為（Κο腕。nV其他㈣劑可為經乙該粉或藻酸鹽。該 等組合物可視情況藉由合適之阳緩衝液，特別是藉由乙酸 納緩衝液或低溫保護劑或兩者穩定pH。除了所提及之穩定 劑外，該組合物可包含水和至少—種多元醇，比如甘露醇 或山梨醇或其混合物。其亦可包含單醣、二醣或更高碳數 之夕聽t匕如葡萄糖、嚴糖或果糖。該類組合物被視為具 有顯著穩定性之安全組合物。 在一個實施例中，本發明醫藥組合物中之玻尿酸係以每 ml之200 U/ml神經毒素溶液♦ 〇丨至1〇 mg，特別係工玻 尿質酸之量與本發明神經毒素成份結合。 當存在於本發明組合物中時，該聚乙烯吡咯啶酮以一提 供重組洛液之量與本發明神經毒素成份結合，其中該重 組溶液在每ml之200 U/ml肉毒桿菌毒素之神經毒素成份溶 液中含有10至500 mg ’特別係1〇〇 mg之聚乙烯吡咯啶酮。 131807.doc -16- 200914039 在另一實靶例中，重組係在咼達8 mi之溶液中進行。此使 濃度下降至每ml之25 U/ml神經毒素成份溶液中含有12 5 mg之聚乙烯吡咯啶酮。在另一實施例中，目標溶液亦包含 1-100 mM乙酸鈉緩衝液；在另—實施例中，目標溶液包含 1 0 mM乙酸納緩衝液。 在一個實施例中，本發明醫藥組合物中之聚乙二醇係以 一提供一重組溶液之量與本發明神經毒素成份結合，其中 該重組溶液在每ml之200 U/ml肉毒桿菌毒素溶液中含有1〇 至500 mg之聚乙烯吡咯啶酮，在另一實施例中，含有1〇〇 mg之聚乙烯吡咯啶酮。在另一實施例中，目標溶液亦包含 1 -100 mM乙酸鈉緩衝液；在另—實施例中，目標溶液包含 1 0 mM乙酸鈉緩衝液。 在一個實施例中，當儲存在約+8〇〇c與約_2(rc之間之溫 度下時，根據本發明之該醫藥組合物保持其效力實質上不 變達6個月、1年、2年、3年及/或4年之時間。此外，所指 醫藥組合物在重組後具有約20%與約100%之間之效力或恢 復率。 在另一實施例中，該穩定劑係選自工藝上熟知之非硫 烧、甲硫胺酸或海藻糖之穩定劑。 "低溫保護劑"係指賦形劑，其使重組或水溶液醫藥組合 物中之神經毒素成份在該醫藥組合物中被冷凍乾燥之前具 有大於約 20。/〇、30%、40%、50%、60°/。、70%、80%、90% 和高達100%生物活性神經毒素成份具有之毒性。該"低溫 保護劑"係指可產生活性成份之賦形劑。 131807.doc -17- 200914039 在另-實施例中’該組合物可包含多元醇以作為低溫保 護劑。在一個實施例中，該組合物可包含多羥基化合物。 可使用之多7L醇實例包括如肌醇、甘露醇和其他非還原性 醇類。該組合物之一些實施例不包括蛋白質穩定劑，或不 含海藻糖或麥芽三糖或乳糖或蔗糖或相關糖，或有時用作 低溫保護劑之碳水化合物。 術語"防腐劑"係分別指可以預防該組合物内微生物、昆 蟲、細菌或其他污染生物生長或存活之一種或一群物質。 防腐劑亦防止該組合物產生非所需之化學變化。本專利範 圍内可使用之防腐劑為技術熟練者知曉之最新技術之所有 防腐劑。可使用之防腐劑實例尤其包括如苄醇、苯甲酸、 殺藻胺、丙酸鈣、硝酸鈉、亞硝酸鈉、亞硫酸鹽（二氧化 硫、亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀等）、乙二胺四乙酸二鈉、 甲醛、戊二醛、矽藻土、乙醇、甲基氣代異噻唑啉_、丁 基化羥基菌香醚及/或丁基化羥基曱苯。 術D。止痛劑"係指以不同方式對外周神經系統和中樞神 經系統起作用之止痛藥物，尤其包括paracetamol'醋氨 酚），非類固醇消炎藥物（NSAIDS)如水楊酸鹽，麻醉藥如 嗎啡，具有麻醉性能之合成藥物如Tramadol®及其他多種 藥物。亦包含任何具有局部麻醉效果之化合物，如利多卡 因（Iidocaine)、苄醇、苯甲酸及其他物。 在一個實施例中，止痛劑為組合物之一部分；在另—實 施例中，止痛劑係在以化學性去神經化劑處理之前、期間 或之後投與。 θ 131807.doc 200914039 、 以上所引用之肌肉型鬆弛劑之準備分別涉及該 等物之儲存及/或運輸，或者為製備該肌肉型鬆弛劑方法 中之個步驟’更為適宜地為包含肉毒桿菌毒素之神經毒 素成份之蛋白質乾燥後於高溫下所實施之—個步驟。"高 溫，|意指高於2(TC，如高於饥或高於坑之溫度。在例外 =况下’即在基於肉毒桿g毒素之神經毒㈣份儲存在 _ 、下之％ i兄中，術語"高溫"分別指高於〇。〇或高於4。〇或 回於10C、高於2〇°C或25。〇或3(rc之溫度。 在另一實施例中，令該肌肉型鬆弛劑處於一位於3(TC以 至兩達70。<〇之範圍内之溫度達一段不超過9〇天之期間。 如=長該項技術者較佳係了解該段該肌肉型鬆弛劑處於個 別咖度之期間可為介於數分鐘與9〇天之間的任何時間間 &。典^地，考慮到提供該肌肉型鬏、弛劑之環境，特別是 涉及儲存及/或運輪之情形，該段期間將不少於1〇分鐘。

這，短期間在下列情況下係尤其重要：在運輸後及儲存前 ;k ’、^氣候下，令該肌肉型鬆弛劑受太陽光直射，如在飛 :%或街道上。因此’本發明範圍内之典型期間為W分 釦、30分鐘、i小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小 時、8小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8 天、9天、10天、2週、3週、i個月、2個月和3個月⑼ ^)。明顯地，以上所提之期間僅為典型實例，實際期間 可以更長或更短並包含介於上列數值間之任何間隔。 ，關於該肌肉型鬆弛劑所處之溫度，典型地，擅長該項技 術者可預見高於20。。之溫度下限。有關本文所指定之溫度 1807.doc -19- 200914039 和溫度範圍，擅長該項技術者理解該肌肉型鬆弛劑/組合 物所處之溫度上限較佳不高於70t。亦即，該肌肉型鬆弛 劑所處之溫度較佳係位於2〇。〇以上至高達7〇。(：之範圍内。 因此，在本發明範圍内，令該肌肉型鬆弛劑分別處於一高 於2〇°C或高於25°C或高於3(TC或高於35。(：或高於40。〇或高 於45°C或高於5〇t：或高於60。(：或高於65°C至高達70。〇之溫 度。提供、較佳係運輸及/或儲存該肌肉型鬆弛劑之環境 可能產生之任何介於既定值2〇它以上至高達7〇°c之間之特 疋皿度以及個別溫度間隔皆再次位於本發明範圍内。 下列溫度和時間間隔代表本發明之實施例。根據第一個 實施例，令該肌肉型鬆弛劑處於一 3(rc以上並高達7〇它之 溫度達一段不超過90天之期間，更佳係處於一 3〇<t以上並 问達70 C之溫度達一段範圍從10分鐘至9〇天之期間，更佳 係在一介於4(TC與6(TC之間之溫度下達一段範圍從1〇分鐘 至90天之期間。 在另一實施例中，期間係從10分鐘至30天，而溫度範圍 係從30。(：以上至高達7(rc或從4〇t：至6〇<t或從5〇它至 60。(：。 在另一實施例中，代表極端條件之溫度係位於65。〇與 7〇°C之間之範圍内且該肌肉型鬆弛劑處於該溫度之期間係 位於10分鐘至1〇天之範圍内或從1〇分鐘至3天。 由於本發明作為基礎之發現，如今，可提供如上概述之 肌肉型鬆弛劑而不需使用人工冷卻裝置。此發現對於運輸 及/或儲存該肌肉型鬆弛劑係尤其重要。而且，本發明在 131807.doc -20· 200914039 高溫、可能結合較高濕戶 本發明現進-步以如;u下係特別有意義的。 明。 文所敍述之非限制性實例方式證 實例 本實例已利用可經由商 施。—⑧為包含肉二業途…之產品實 性成份之凌乾粉/毒^；；^____作為活 -重鏈和一輕鏈。毒素毒鏈!式存在’即’其包含 Γ5菌株)獲得。其已經純化至不含任何配位蛋白質之程 度。—η⑧進-步包括人類血清蛋白和嚴糖。蛋㈠之知 將Xeomin®樣本（未開封 -^ -F ^ ,π j、瓶、未經重組）分別在6(TC之 “ 例）7〇C下儲存10天（圖2)和80。(：下 儲存10天（對比實例3)。館存 仔你和用具有狹窄溫度容差（土 之合格培養器實施。逐曰連續從培養器中取出樣本並 將其儲存在5 C下直到分析。 為評估Xe〇min⑥之穩定性，分別測得利用已知之小鼠 ^分析之生，活性 '以pg/viaIxl〇表示之神經毒素成份 3里、蔗糖含S(以。/。表示）和HSA含量（以％表示）。以上所 提之方法係根據歐洲藥典中制定之要求實施。 實例1 根據此實例，：^〇1^，在60。〇之溫度下儲存高達1個月。 結果顯示於圖1。 從該圖明顯可見Xeomin®品質未受在6(rc下错存高達ι個 月所影響。事實上，生物活性（LD^分析）和神經^毒"素濃^ 131807.doc 21 200914039 (ELISA)在整個儲存時期保持不變。此外，人類血清蛋白 (HSA)和蔗糖之量顯示隨著時間無顯著變化。總言之， Xeomin®之儲存壽命規格之所有參數在⑼它下儲存i個月後 達到。同樣地，低於60 C之儲存條件的所有穩定性資料顯 示對產品品質無有害影響（未顯示出資料）。 實例2 根據該實例，Xeomin®在70°C之溫度下儲存高達1〇天之 時間。結果顯示於圖2。

Xeomin®之品質未受在川它下儲存高達丨〇天之時間而有 顯著影響。生物活性、神經毒素濃度以及HSA和蔗糖含量 再次隨時間未顯示顯著變化。總言之，該實例證明：

Xeomin®之品質未受在70。〇下儲存高達丨〇天而有顯著影 響。 / 實例3(對比） 在此（對比）示例中，令Xe〇min®在8(rc下儲存高達1〇天 之時間。相較於60。〇和7(TC下之穩定性資料，。〇可觀察到 生物活性（LDw分析）急劇降低。神經毒素在儲存前3天期間 活性進一步降低並在5天内完全去活性，該實例顯示：^ 一相對較短之期間後，至少80。〇之溫度對基於肉毒桿菌毒 素之神經毒素成份之肌肉型鬆弛劑的穩定性已具有有害影 響。 。的 【圖式簡單說明】 圖1顯示在60°C下儲存一段高達30天之時間後，溫度對 Xeomin®之生物活性的影響；該生物活性係在所指時間點 131807.doc -22- 200914039 測得， 圖2顯示在70°C下儲存—段高達1〇天之時間後，温度對

Xeomin®之生物㊉性的影響；肖生物活性係在所指時間點 測得； 圖3顯示在80°C下儲存— Xeomin®之生物活性的影響 測得。 段高達10天之時間後，溫度對 ;該生物活性係在所指時間點 έ 131807.doc -23-

Claims (1)

1. 200914039 十、申請專利範圍： 1 · 一種於溫度高於2(TC下提供肌肉型鬆弛劑之方法，其中 該肌肉型鬆弛劑為固態乾燥型組合物，其包括不含配位 蛋白質之肉毒桿菌毒素之神經毒素成份。 2. 如請求項1之方法，其中該提供涉及儲存及/或運輸及/或 為製備該肌肉型鬆他劑之製程中之一個步驟。 3. 如請求項〗或2之方法，其中令該肌肉型鬆弛劑處於一 2〇°C以上至高達70。〇之溫度達一段不超過％天之期間。 4. 如前述請求項中任一項之方法，其中該期間範圍係㈣ 分鐘至90天。 5 · 如前述請求項中任—jg $古、、土 . ^ 1項之方法，其中該溫度係介於2(TC 和6〇°C之間，且該期間範圍係從10分鐘至90天。 項甲任項之方去，其中該期間範圍係從1〇 分鐘至30天。

   如前述請求項中任—項之方法，其中該溫度係介於机 和70 C之間，且该期間範圍係從1 〇分鐘至1 〇天。

   9. 如請求項2至7中任一 jf夕古、、上 ^ , 去，其中該肌肉型鬆弛劑係 經運輸及/或儲存而無需任何人工冷卻裝置。 如前述請求項中任一項之方法， 菌毒素之神經毒素成份之凍乾粉 其中該組合物為肉毒桿 10. 如前述請求項中任一項之方法 括蔗糖及/或人類血清蛋白。 其中該組合物進一步包 11. 如前述請求項中任一項之方法 括至少一種選自由分別不同於 ’其中該組合物進—步包 蔗糖及人類血清蛋白之低 131807.doc 200914039 溫保護劑、穩定劑、pH緩衝液、賦形劑、及其混合物所 組成之群之成份。 12.如前述請求項中任一項之方法，其中該神經毒素成份是 肉毒桿菌毒素A型之神經毒素成份。

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