KR20100020971A - 고형 보툴리늄 톡신의 신경독 성분에 기초한 온도-안정한 근육 이완제를 제공하는 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 20℃ 이상의 온도에서 안정한 근육 이완제를 제공하는 방법으로서, 상기 근육 이완제는 복합 단백질이 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형건조 조성물이다.

근육 이완제, 보툴리늄 톡신, 신경독,

Description

고형 보툴리늄 톡신의 신경독 성분에 기초한 온도-안정한 근육 이완제를 제공하는 방법{PROCESS FOR PROVIDING A TEMPERATURE - STABLE MUSCLE RELAXANT ON THE BASIS OF THE NEUROTOXIC COMPONENT OF BOTULINUM TOXIN IN SOLID FORM}

본 발명은 상승된 온도에서 근육 이완제를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 상기 근육 이완제는 복합 단백질이 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형 건조 조성물이다.

보툴리늄 톡신은 클로스트리듐 박테리아에 의해 생산된다. 7개의 항원적으로 구별되는 혈청형의 보툴리늄 톡신이 존재하며, 즉 보툴리늄 톡신 A, B, C, D, E, F 및 G가 존재한다. 보툴리늄 톡신은 일반적으로 용해된 클로스트리늄 배양으로부터 복합체의 형태로, 즉 보툴리늄 톡신의 독성을 나타내는 서브-유닛("신경독 성분"으로 지칭)이 다른 박테리아 단백질과 연합하여 톡신 복합체를 형성하여, 방출된다. 이 복합체의 분자량은 약 300,000 내지 900,000 Da으로 다양하다. 복합 단백질은 예를 들면 다양한 적혈구응집소(hemagglutinins)이다. 이 톡신 복합 단백질은 그 자체로는 독성이 없지만 신경독 성분을 안정화시키고, 보툴리늄 중독시 경구 독성 을 나타내는 것으로 여겨진다. 톡신 복합체와는 달리, 어떠한 복합 클로스트리듐 단백질도 없는, 즉 분리되고 순수한 형태의 신경독 성분은 산에 불안정하며 위장관의 공격적인 환경에 저항성을 나타내지 못한다.

보툴리늄 톡신 복합체의 신경독 성분은 초기에는 단일 폴리펩타이드 사슬로 형성되며, 혈청형 A의 경우에는 약 150 kDa의 분자량를 갖는 단일 폴리펩타이드 사슬로 형성된다. 다른 혈청형에서는 박테리아 공급원에 따라 상기 신경독 성분이 약 145 내지 170 kDa로 다양한 분자량을 갖는 것으로 관찰되었다. 혈청형 A의 경우, 예컨대, 폴리펩타이드의 단백분해 가공으로 이황화 결합에 의해 연결되는 중쇄 및 경쇄로 이루어지는 이쇄 폴리펩타이드 형태로 활성화된 폴리펩타이드가 생성된다. 인간에서, 상기 중쇄는 전-시냅스 콜린성 신경 말단에의 결합 및 톡신의 세포내로의 내재화를 매개한다. 경쇄는 아연-엔도펩티다제로 기능하고 막융합에 관련된 특정 단백질(SNARE 복합체)를 분해함으로써 독성을 나타내는 것으로 보인다 (예를 들어, Montecucco C1 Shiavo G., Rosetto O: The mechanism of action of tetanus and Botulinum neurotoxins. Arch Toxicol. 1996; 18 (Suppl.): 342-354)을 보라).

세포내로의 막 융합 과정을 방해함으로써, 보툴리늄 톡신은 아세틸콜린이 시냅스 간극으로 방출되는 것을 방지한다. 신경-근 이음부에서 보툴리늄 톡신의 전체 효과는 신경-근 전달을 방해하고, 결과적으로 근육을 탈신경화시킨다. 보툴리늄 톡신은 또한 다른 말초 콜린성 시냅스에 활성을 나타내어, 침이나 땀의 감소를 유발한다.

보툴리늄 톡신 복합체의 신경독 서브유닛은 본 명세서에서 "신경독 성분" 또 는 "복합 단백질이 없는 신경독 성분"으로 지칭된다.

"보툴리늄 톡신" 또는 "보툴리늄 톡신들"은 본 명세서에서 다른 클로스트리듐 단백질이 없는 신경독 성분을 지칭하며, 또한 "보툴리늄 톡신 복합체"를 지칭하기도 한다: "보툴리늄 톡신"은 본 명세서에서 톡신 복합체와 신경독 성분간의 구별이 필요하지 않거나 요망되지 않는 경우 사용된다. 복합체는 일반적으로, 부가적인 소위 "비독성" 단백질을 함유하며, 이는 "복합 단백질" 또는 "박테리아 단백질"로 지칭된다.

"BoNT" 또는 "NT"는 복합 단백질이 없는 보툴리늄톡신의 NT 화합물에 관한 약어로서 통상 사용된다.

보툴리늄 톡신 복합체는 그 독성에도 불구하고 수많은 질병에 대한 치료제로서 사용되어왔다. 보툴리늄 톡신 혈청형 A는 미국에서 인간에 대해 1989년 사시, 눈꺼풀연축 및 기타 질병의 치료제로 승인되었다. 이는 상업적으로 보툴리늄 톡신 A 단백질 복합체, 예를 들면 상표명 보톡스^®(알레간사) 또는 상표명 디스포트^® (입센사)로 입수할 수 있다. 상기 복합체는 치료제로서 치료될 근육에 직접 주사된다. 생리적 pH에서 상기 톡신이 단백질 복합체로부터 방출되어 원하는 약학적 효과가 나타난다.

통상 치료될 근육에 직접 근육주사로 환자에게 투여되기 전에, 상기 조성물은 생리학적 식염 용액에 용해된다.

보툴리늄 톡신에 기초한 의약품의 조성 및 용량, 보툴리늄 톡신의 신경독 성 분에 기초한 의약품의 조성, 용량 및 투여빈도에 관해서는 US 60/817756를 참조할 수 있다.

상기 언급한 기능 이외에도 상기 복합 단백질은, 특히 따뜻하거나 더운 기후 또는 여름에서의 보관이나 수송과 같은 단기간의 온도 스트레스가 주어졌을때 분해되거나 불활성화되기 쉬운 보툴리늄 톡신 복합체의 신경독 성분을 거친 환경 조건으로부터 보호하는 것으로 생각된다.

이러한 이유로 과거에는 보툴리늄 톡신 및 특히 보툴리늄 톡신의 신경독 성분에 기초한 의약품이 +4℃ 이상, 즉 20℃ 가까운 온도까지 올라가지 않도록 극도의 주의를 기울였다. 대부분의 경우, 보툴리늄 톡신을 포함하는 고형 건조 조성물을 포함하는 바이알은 약 -20℃에서 동결 하여(동결건조물) 얼음위에서 또는 최소한 냉장고(약 +4℃)에서 보관하였다. 따라서 냉각이 필요하였으며, 이는 의약품 제조에 있어 제조경비의 추가를 초래하였다.

이와 같은 상황에서, 본 발명자는 보툴리늄 톡신 기초 근육 이완제의 온도 안정성에 대해 연구를 수행하였다. 놀랍게도 보툴리늄 톡신의 신경독 성분은 본 기술분야에서 예상된 것 보다 훨씬 온도-안정성을 나타내었다.

본 발명은 20℃ 이상의 상승된 온도, 예를 들면 30 ℃ 이상, 또는 45℃ 이상에서, 근육 이완제를 제공하는 방법에 관한 것으로, 상기 근육 이완제는 복합 단백질이 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형 건조 조성물이며, 바람직하게 상기 방법은 보관 및/또는 수송을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 제공은 상기 근육 이완제의 제조 방법내 단계, 즉 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 단백질을 건조한 후에 수행되는 단계이다.

일 실시형태에서, 상기 근육 이완제는 45℃ 이상의 온도에서 제공되며, 상기 근육이완제는 복합 단백질이 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형 건조 조성물이다.

다른 실시형태에서, 상기 제공은 보관 및/또는 수송 및/또는 상기 근육이완제를 제조하는 방법내 일 단계이다.

다른 실시형태에서, 상기 근육이완제는 90일을 초과하지 않는 기간동안 45℃ 이상, 70℃에 이르는 온도에 놓여진다. 다른 실시형태에서 상기 기간은 10분 내지 90일이다. 또 다른 실시형태에서 상기 온도는 45℃ 내지 60℃이고, 상기 기간은 10분 내지 90일이다. 다른 실시형태에서 상기 기간은 10분 내지 30일이다. 또 다른 실시형태에서 상기 온도는 65℃ 내지 70℃이고, 상기 기간은 10분 내지 10일이다.

다른 실시형태에서 상기 근육 이완제는 어떠한 인위적인 냉각 장비없이 수송 또는 보관된다.

다른 실시형태에서 상기 조성물은 보툴리늄 톡신의 신경독 성분의 동결건조물이다.

다른 실시형태에서 상기 조성물은 슈크로스 및/또는 인간 혈청 알부민을 추가적으로 포함한다.

다른 실시형태에서 상기 조성물은 동결방지제, 안정제, pH 버퍼, 슈크로즈 및 인간 혈청 알부민 이외의 부형제 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성분을 추가적으로 포함한다.

추가적인 실시형태에서 상기 신경독 성분은 보툴리늄 톡신 A형 신경독 성분이다.

본 발명은 20℃ 이상의 온도에서 근육 이완제를 제공하는 방법에 관한 것으로, 상기 근육 이완제는 복합제가 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형 건조 조성물이다. 다른 실시형태에서, 상기 근육이완제는 45℃ 이상의 온도에서 제공되며, 상기 근육 이완제는 복합제가 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형 건조 조성물이다. 본 발명에서 "제공"은 본 명세서에서 정의된 근육 이완제에 대한 모든 종류의 제공, 특히 보관, 수송 및/또는 상기 근육 이완제 제조내 단계를 포함한다. "제공"은 또한 상기 근육이완제가 냉동상태(-20℃) 또는 냉각 상태(+4℃)의 온도에서 20℃ 이상의 온도로의 상승에 놓여지는 단계들을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 근육 이완제는 45℃ 이상의 온도에서 제공되며, 상기 근육 이완제는 복합제가 없는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 고형 건조 조성물이다.

본 발명에서, 모든 형태의 보툴리늄 톡신의 신경독 성분, 특히 다양한 혈청형이 사용된다. 이외에도, 돌연변이, 결실 등을 포함는 변경 또는 재조합 제조된 보툴리늄 톡신의 신경독 성분 또한 본 발명의 범위내에 속한다. 적절한 돌연변이에 대해서는 WO 2006/027207 A1 및 WO 2006/114308 A1, 및 EP 07014785.5을 참조할 수 있으며, 이들은 본 명세서에 참조로 삽입된다. 또한 본 발명 내에서, 다양한 혈청형의 혼합물(신경독 성분 형태 및/또는 이들의 재조합 형태, 예를 들면 보툴리늄 신경독 A형 및 B형의 혼합물)이 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 화학적으로 변경된, 즉 페질화, 글리코실화, 설퍼화(sulfatation), 인산화, 특히 하나 이상의 표면 또는 용매 노출된 아미노산이 다른 방식으로 변경된 신경톡신을 포함한다.

일 실시형태에서 상기 조성물은 보툴리늄톡신 타입 A의 신경독 성분을 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 보툴리늄 톡신은 항원적으로 구별되는 혈청형 A, B, C, D, E, F, 또는 G 보툴리늄 톡신이다. 보툴리늄 톡신 혈청형 A, B, C, D, E, F 또는 G가 언급될때, 상기 혈청형에 대한 기지 변종, 예컨대 혈청형 A1, A2, A3, B1, B2, B3, C1, C2, C3, D1, D2, D3, E1, E2, E3, F1, F2, F3, 또한 G1, G2, G3도 포함된다. 본 발명에 따라 하나의 혈청형 또는 상이한 혈청형의 혼합물이 사용될 수 있다. 일 실시형태에서 상기 보툴리늄 톡신은 보툴리늄 톡신 A이다.

다른 실시형태에서, 보툴리늄 톡신의 이소형, 호몰로그, 오르토로그 및 파라로그도 포함되며, 이들은 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상 또는 100%에 이르는 서열 동등성을 보인다. 이러한 서열 동등성은 신뢰할 만한 결과를 산출하기에 적합한 어떠한 알고리즘으로도 계산될 수 있으며, 예를 들면 FASTA 알고리즘을 사용한다(W.R. Pearson & D.J. Lipman PNAS (1988) 85:2444-2448).

"신경독 성분"은 또한 다른 혈청형 클로스트리듐 보툴리늄에서 발견되는 기능적 호몰로그도 포함한다. 본 발명의 일 실시형태에서, 신경독 성분은 다른 C. 보툴리늄 단백질이 없으며, 다른 실시형태에서는 신경독 성분과 연합해 있을 가능성이 높은 RNA 또한 없다. 신경독 성분은 약 15OkDa의 단쇄 전구체 단백질일 수 있거나 또는 약 5OkDa의 경쇄(Lc) 및 약 10OkDa의 중쇄(Hc)를 포함하며 이들이 하나 이상의 이황화 결합으로 연결되어 있는 단백분해가공된 신경독 성분일 수 있다(리뷰를 위해서 예컨대 Simpson LL, Ann Rev Pharmacol Toxicol. 2004; 44:167-93를 참조하라). 다른 실시형태에서 단쇄 및 가공된 신경독 성분의 혼합물이 사용될 수 있다.

본 발명의 교시에 따라 의약품은 신경독 성분 이외의 보툴리늄 톡신에서 발견되는 어떠한 단백질도 포함하지 않을 수 있다. 신경독 성분의 전구체는 분해되거나 분해되지 않을 수 있으며, 그러나, 일 실시형태에서 상기 전구체는 중쇄 및 경쇄로 분해된다. 지적되는 바와 같이 폴리펩타이드는 야생형 서열이거나 또는 하나 이상의 잔기에서 변경될 수 있다. 변경은 화학적 변경, 예컨대, 페질화, 글리코실화, 아세틸화, 아실화, 아미드화 등을 포함하며, 이들은 폴리펩타이드의 흡수 또는 안정성에 유익할 수 있다. 신경독 성분의 폴리펩타이드 사슬은 그러나 교대로 또는 부가적으로, 하나 이상의 아미노산 잔기의 추가, 치환 또는 결실로 변경될 수 있다.

전술된 신경독 성분은 조성물 또는 약학적 조성물의 일부일 수 있다. 여기에 사용되는 약학적 조성물은 예를 들면 단독 활성 성분으로서 신경독 성분의 형태로 보툴리늄 톡신을 포함하거나 또는 추가적인 약학적 활성 성분, 예를 들면 진통제 및/또는 추가적인 신경독소를 포함할 수 있다.

"약학적 조성물"은 의약품 또는 진단제로서 사용되기 위한 활성 성분이 포함되거나 함유되어 있는 포물레이션이다. 이러한 약학적 조성물은 환자에 진단 또는 치료를 위한 투여에 적합하다(즉 근육 또는 피하주사).

본 발명의 일 실시형태에서, 조성물은 신경독 성분 및 히알루론산 및/또는 폴리비닐피롤리돈 및/또는 폴리에틸렌글리콜을 포함할 수 있으며, 이들 조성물은 적합한 pH 버퍼, 특히 소듐 아세테이트 버퍼로 pH 안정화되며, 및/또는 동결방지제 폴리알콜을 포함할 수 있다.

일 실시형태에서, 신경독 성분은 신경독 성분 1 ng당 마우스 LD₅₀ 어세이에 의해 결정되는 50 내지 250 LD₅₀ 단위의 생물학적 활성을 가진다. 다른 실시형태에서, 신경독 성분은 약 150 LD₅₀ 단위의 생물학적 활성을 가진다. 상기 150 LD₅₀ 단위는 나노그람당 단위를 지칭한다. 일반적으로 본 발명의 약학적 조성물은 약 6 pg 내지 30 ng의 신경독 성분을 포함한다.

분리형 보툴리늄 톡신 타입 A 신경독 성분을 포함하는 약학적 조성물은 독일에서 상표명 제오민^®으로 메르쯔 제약에 의해 시판되고 있다. 보툴리늄 톡신 타입 A 및 B 신경독 성분의 제조는 예를 들면 국제특허출원 WO 00/74703 및 WO 2006/133818에 개시되어 있다.

일 실시형태에서, 상기 조성물은 보툴리늄 톡신 타입 A의 신경독 성분을 포함한다. 상기 조성물은 보툴리늄 톡신의 신경독 성분의 고형 건조 조성물이다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 추가적으로 예를 들면 슈크로스나 인간 혈청 알부민 또는 이들 모두를 포함하며, 또 다른 실시형태에서 슈크로스에 대한 인간 혈청 알부민 비율은 약 1:5이다. 일 실시형태에서 상기 조성물은 제오민^®이다. 다른 실시형태에서, 상기 인간 혈청 알부민은 재조합 인간 혈청 알부민이다. 또는 상기 조성물은 인간 혈청 알부민과 같은 포유류 유래 단백질이 없는 것이다. 이들 용액들은 다른 비단백질성 안정제(infra)로 혈청 알부민을 대체함으로써 충분한 신경독 안정성을 제공할 수 있다.

본 특허출원내에서, 보툴리늄 톡신 타입 A의 신경독 성분에 기초한 의약품을 사용하며, 일 실시형태에서, 메르쯔 제약에 의해 시판되는 제품 제오민^®이 사용될 수 있다. 이는 보툴리늄 톡신 타입 A 복합체에 기초한 의약품을 투여한 경우에 비해, 제오민^®과 같이 보툴리늄 톡신의 신경독 성분에 기초한 약학적 조성물을 적용하였을때, 환자내에서 항체를 생성하는 경향이 더 낮기 때문이다.

보툴리늄 톡신에 기초한 의약품의 조성 및 용량, 및 보툴리늄 톡신의 신경독 성분에 기초한 의약품의 조성, 용량 및 투여빈도는 PCT/EP2007/005754를 참조할 수 있다.

일 실시형태에서, 상기 조성물은 보툴리늄 톡신의 신경독 성분의 동결건조물이고, 상기 조성물은 추가로 슈크로스 및/또는 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다. 상기 후자의 조성물에서, 슈크로스에 대한 인간 혈청 알부민의 비율은 예를 들면 약 1:5이다. 일 실시형태에서 상기 조성물은 제오민^®이다.

상기 조성물은 부가적인 부형제를 포함할 수 있다. "부형제"는 약학적 조성물에 존재하는 활성 약학적 성분을 제외한 나머지 약학적 조성물내 존재하는 물질을 지칭한다. 부형제는 버퍼, 담체, 항부착제, 바인더, 붕해제, 충전제, 희석제, 보존제, 비히클, 사이클로덱스트린 및/또는 알부민, 젤라틴, 콜라겐, 소듐 클로라이드와 같은 벌크제, 보존제, 동결방지제 및/또는 안정제일 수 있다.

"pH 버퍼"는 조성물, 용액 등의 pH 값을 특정 값 또는 특정 pH 범위로 조절할 수 있는 화학물질을 지칭한다. 일 실시형태에서, 이 pH 범위는 pH 5 내지 pH 8, 다른 실시형태에서는 pH 7 내지 pH 8, 또 다른 실시형태에서는 7.2 내지 7.6, 또 다른 실시형태에서는 pH 7.4이다. 다른 실시형태에서는 상기 약학적 조성물은 재조합 또는 주사시 약 4 내지 7.5의 범위의 pH를 가지며, 다른 실시형태에서는 약 pH 6.8 내지 pH 7.6, 또 다른 실시형태에서는 pH 7.4 내지 pH 7.6을 가진다.

일 실시형태에서, 조성물은 1-100 mM의 소듐 아세테이트 버퍼, 다른 실시형태에서는 10 mM의 소듐 아세테이트 버퍼를 포함한다.

전술한 pH 범위는 단지 전형적인 예에 불과하며, 실제 pH는 주어진 값 사이의 어떠한 범위도 포함할 수 있다. 본 발명의 교시에 따른 적합한 버퍼는 예컨대, 소듐-포스페이트 버퍼, 소듐-아세테이트 버퍼, TRIS 버퍼 또는 상기 pH-범위내로 조정하기에 적합한 모든 버퍼이다.

"실온"은 본 명세서에서 +20℃ 내지 +25℃, 더욱 바람직하게는 +20℃, +21℃, +22℃, +23℃, +24℃ 또는 +25℃ 및 상기 범위내 어떤 온도를 지칭한다.

"안정시키는", "안정하는" 또는 "안정화"는 활성 성분, 예컨대 재조합 또는 수성용액 약학적 조성물 내 신경독 성분이, 약학적 조성물내 포함되기 전에 상기 생물학적으로 활성인 신경독 성분이 가졌던 독성의 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상, 약 100% 까지 갖는 것을 지칭한다.

이러한 안정화제의 예로는 젤라틴 또는 알부민이며, 일 실시형태에서는 인간 기원이거나 재조합 공급원에서 유래된다. 비인간 또는 비동물 공급원에서 유래된 단백질도 포함될 수 있다. 안정화제는 화학적으로 또는 재조합 유전학에 의해 변경될 수 있다. 본 발명의 일 실시형태에서, 이노시톨, 만니톨과 같은 알콜을, 동결건조되는 동안 단백질을 안정시키기 위한 동결방지용 부형제로 사용할 수 있다.

본 발명의 다른 실시형태에서, 안정화제는 히알루론산 또는 폴리비닐피롤리돈 또는 폴리에틸렌 글리콜 또는 이들의 조합을 포함하는 비단백성 안정화제일 수 있다. 다른 실시형태에서 상기 폴리비닐피롤리돈은 예를 들면 Kollidon^®이다. 추가적인 안정제는 하이드록시에틸 전분 또는 알지네이트이다. 이 조성물은 임의로 적합한 pH 버퍼, 특히 소듐 아세테이트 버퍼로 pH 안정화되거나 또는 동결방지제를 포함할 수 있으며, 또는 이들 둘다 시행될 수 있다. 본 조성물은 전술한 안정화제 이외에 물 및 하나 이상의 폴리알콜, 예를 들면 만니톨 또는 솔비톨 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 또한 글루코스, 슈크로스 또는 프락토스와 같은 모노-, 디- 또는 고차 폴리사카라이드를 포함할 수 있다. 본 조성물은 현저한 안정성을 갖는 보다 안전한 조성물로 여겨진다.

히알루론산은 일 실시형태에서 상기 신경독 성분과 조합되며, 200 U/ml 보툴리늄 톡신 용액 1 ml 당 0.1 내지 10 mg, 특히 1 mg의 히알루론산의 용량으로 조합된다.

본 조성물에서 폴리비닐피롤리돈은, 존재하는 경우, 상기 신경독 성분과 200 U/ml 보툴리늄 톡신 용액내 신경독 구성성분 1 ml 당 10 내지 500 mg, 특히 100 mg의 폴리비닐피롤리돈을 포함하는 재조합 용액이 제공되는 양으로 조합된다. 다른 실시형태에서 재조합은 8 ml 용액에 까지 수행된다. 이로써 25 U/ml 신경독 성분 용액 1 ml 당 폴리비닐피롤리돈의 농도가 12.5 mg까지 이르도록 할 수 있다. 다른 실시형태에서, 생성되는 용액은 또한 1-100 mM, 특히 10 mM 소듐 아세테이트 버퍼를 함유한다.

본 약학적 조성물내 폴리에틸렌글리콜은 일 실시형태에서, 200 U/ml 보툴리늄 톡신 용액 1 ml 당 10 내지 500 mg, 다른 실시형태에서는 100 mg의 폴리에틸렌글리콜의 양으로 신경독 성분과 조합된다. 다른 실시형태에서 상기 용액은 또한 1-100 mM, 특히 10 mM 소듐 아세테이트 버퍼를 함유한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 일 실시형태에서, 약 +80℃ 내지 -20℃의 온도에서 보관시, 6개월, 1년, 2년, 3년 및/또는 4년동안 실질적으로 그 역가가 변하지 않고 보유된다. 또한 상기 약학적 조성물은 재조합시 약 20% 내지 100%의 역가 또는 퍼센트 회수를 나타낸다.

다른 실시형태에서 상기 안정제는 티오알킬, 메티오닌 또는 트레할로스를 제외한 본 기술분야에 공지된 안정제에서 선택된다.

"동결방지제"는 약학적 조성물내 생물학적으로 활성인 신경독 성분이 동결건조되기 전에 가졌던 독성의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상, 및 약 100%에 이르는 독성을 갖는 재조합 또는 수성 용액 약학적 조성물내 신경독 성분을 결과하는 부형제를 지칭한다.

다른 실시형태에서, 조성물은 폴리알콜을 동결방지제로서 함유할 수 있다. 일 실시형태에서 상기 조성물은 폴리하이드록시 화합물을 함유할 수 있다. 사용가능한 폴리알콜의 예로는 이노시톨, 만니톨 및 기타 비환원성 알콜을 포함한다. 이 조성물의 일부 실시형태에서는 단백성 안정제를 포함하지 않거나, 가끔 동결방지제로서 사용되는 트레할로스 또는 말토트리오스 또는 락토스 또는 슈크로스 또는 관련 당 또는 탄수화물을 포함하지 않는다.

"보존제" 및 "보존제들"은 각각 상기 조성물내 미생물, 곤충, 박테리아 또는 기타 오염성 유기체의 성장 또는 생존을 방지하는 물질 또는 물질 그룹을 지칭한다. 보존제는 또한 상기 조성물이 원하지 않는 화학적 변경이 일어나는 것을 방지한다. 본 발명의 범위내 사용될 수 있는 보존제는 본 기술분야의 당업자에게 알려져 있는 모든 보존제들이다. 보존제들은 또한 상기 조성물이 원하지 않게 화학적으로 변경되는 것을 방지한다. 본 발명의 범위내 사용될 수 있는 보존제는 본 기술분야의 당업자에게 알려져 있는 모든 보존제이다. 사용가능한 보존제의 예로는 그 중에서도 특히, 예컨대 벤질 알콜, 벤조산, 벤잘코늄 클로라이드, 칼슘 프로피오네이트, 소듐 니트레이트, 소듐 니트라이트, 설파이트(설퍼 디옥사이드, 소듐 비설파이트, 포타슘 하이드로겐 설파이트 등), 디소듐 EDTA, 포름알데하이드, 글루타알데하이드, 규조토, 에탄올, 메틸 클로로이소티아졸리논, 부틸레이트 하이드록시아니솔 및/또는 부틸레이트 하이드록시톨루엔을 들 수 있다.

"진통제"는 말초 및 중추신경계에 다양한 방식으로 작용하는 진통제에 관한 것이며, 이중 파라세타몰^®(아세트아미노펜), 살리실레이트와 같은 비소염성 항염증약(NSAIDs), 모르핀과 같은 마약, 트라마돌^®과 같은 마약성을 갖는 합성약 등을 포함한다. 또한 리도카인, 벤질알콜, 벤조산 등과 같은 국소 진통작용을 갖는 화합물을 포함한다.

일 실시형태에서 상기 진통제는 조성물 중 일부이고, 다른 실시형태에서 상기 진통제는 화학적 탈신경화제(chemodenervating agent) 처리 전, 중 또는 후에 투여된다.

통상 상기 언급된 근 이완제의 제공은 보관 및/또는 수송 또는 상기 근육 이완제 제조내 일 단계, 특히 바람직하게는 보툴리늄 톡신의 신경독 성분을 포함하는 단백질이 각각 상승된 온도에서 건조된 후의 단계이다. "상승된 온도"는 20℃ 이상, 예를 들면 25℃ 이상, 또는 30℃ 이상을 의미한다. 예외적인 경우, 즉 보툴리늄 톡신의 신경독 성분에 기초한 근육 이완제가 0℃ 이하에서 보관되는 환경인 경우, "상승된 온도"는 0℃ 이상, 또는 4℃ 이상, 또는 10℃ 이상, 20℃ 이상, 또는 25 또는 3O℃의 상기 언급된 온도 범위의 온도를 말한다.

다른 실시형태에서, 상기 근육 이완제는 30℃ 이상 내지 70℃ 이하의 온도에서 90일 이내의 기간동안 놓여진다. 본 기술분야의 당업자라면 자명하게 인식할 수 있을 터이지만, 근육 이완제가 각 온도에 대해 놓여지는 기간은 수분에서 90일 이내 어떤 시간 간격일 수 있다. 통상, 이러한 근육 이완제의 제공 환경, 특히 보관 또는 수송 또는 이들 양자에 소요되는 시간을 고려하면, 상기 기간은 10분 이상일 것이다. 특히 수송전 및 보관전 이들 근육 이완제가 더운 기후에서, 예컨대 공항이나 거리에서 직사광하에 놓여지는 경우, 이러한 짧은 시간도 매우 중요하다. 본 발명의 전형적인 기간은 따라서, 10분, 30분, 1시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 2주, 3주, 1달, 2달, 3달(90일)까지이다. 그럼에도 불구하고, 상기 언급한 기간은 단지 예시에 불과하며 실제 기간은 더 짧거나 길거나 또는 주어진 값 사이의 어떤 간격도 포함할 수 있다.

본 근 이완제가 겪게 되는 온도는 통상 그 하한이 20℃ 이상이다. 본 명세서에서 전술한 온도 및 온도 범위에 대해, 본 기술분야의 당업자가 이해할 수 있는 바와 같이, 근 이완제/조성물이 겪게 되는 온도의 상한은 바람직하게 70℃를 초과하지 않는다. 즉 본 근육 이완제가 겪게되는 온도는 바람직하게 20℃ 이상, 70℃ 까지의 범위의 온도이다. 따라서 본 발명내에서 본 근육 이완제는 각각 20℃ 이상, 또는 25℃ 이상, 또는 30℃ 이상, 또는 35℃ 이상, 또는 40℃ 이상, 또는 45℃ 이상, 또는 50℃ 이상, 또는 60℃ 이상, 또는 65℃ 이상, 70℃ 까지의 온도에 놓여질 수 있다. 또한 상기 20℃ 이상, 70℃ 까지 및 각 온도 간격내 존재하는 특정 온도는 본 근 이완제가 제공, 바람직하게 수송 또는 보관되거나 양자가 이루어지는 환경의 결과물이며, 본 발명내에 속한다.

하기 온도 및 시간 간격은 본 발명의 바람직한 실시형태이다. 제1 실시형태에 따르면, 근 이완제는 30℃ 이상, 70℃ 까지의 온도에서 90일 이하, 더욱 바람직하게는 30℃ 이상, 70℃ 까지의 온도에서 10분 내지 90일간, 더욱 바람직하게는 40℃ 내지 60℃ 까지의 온도에서 10분 내지 90일 까지의 기간이다.

더욱 바람직한 일 실시형태에서, 상기 기간은 10분 내지 30일이며, 온도는 30℃ 이상 70℃까지, 바람직하게는 40℃ 내지 60℃, 보다 바람직하게는 50℃ 내지 60℃이다.

더욱 바람직한 일 실시형태에서, 가장 극한 조건을 나타내는 실시형태로, 온도는 65℃ 내지 70℃의 범위이고, 상기 온도에 본 근 이완제가 놓여지는 기간은 10분 내지 10일, 또는 10분 내지 3일이다.

본 발명이 기초한 발견 덕분에, 이제는 전술한 근 이완제를 인위적인 냉각 장치를 사용하지 않고도 제공할 수 있게 되었다. 이러한 발견은 이러한 근 이완제의 수송 및/또는 보관하는데 특히 중요하다. 또한 본 발명은 습도 상승과 함께 온도가 상승된 환경에서 특히 의미가 있다.

이하 본 발명을 실시예를 통해 더욱 상세히 설명하며, 하기 실시예는 본 발명을 제한하지 않는다.

도 1은 60℃에서 30일간 보관 후 온도가 재조합 제오민^®의 활성에 미치는 영향을 도시한 것으로, 상기 생물학적 활성은 정해진 시점에 측정되었다.

도 2는 70℃에서 10일간 보관 후 온도가 재조합 제오민^®의 활성에 미치는 영향을 도시한 것으로, 상기 생물학적 활성은 정해진 시점에 측정되었다.

도 3은 80℃에서 10일간 보관 후 온도가 재조합 제오민^®의 활성에 미치는 영향을 도시한 것으로, 상기 생물학적 활성은 정해진 시점에 측정되었다.

하기 실시예들은 상업적으로 시판되는 제품 제오민^®으로 수행하였다. 제오민^®은 활성 성분으로서 보툴리늄 신경독소 타입 A (150 kD)를 포함하는 동결건조된 분말이다. 이 톡신은 홈이 있는 이중쇄 형태로 존재하며, 즉 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 상기 톡신은 클로스트리듐 보툴리늄 배양액(균주 ATCC 3205)에서 수득하였다. 어떠한 복합 단백질도 포함하지 않는 정도로 정제하였다. 제오민^®은 추가적으로 인간 혈청 알부민 및 슈크로즈를 포함한다.

제오민^®샘플(미개봉이며 재조합 되지 않은)을 60℃에서 30일간(실시예 1), 70℃에서 10일간(도 2) 및 80℃에서 10일간(대조실시예 3)에서 각각 보관하였다. 상기 보관은 좁은 온도 내성(±2℃)를 갖는 인증된 인큐베이트를 사용하여 수행되었다. 상기 샘플은 연속적으로 일 간격으로 인큐베이터에서 제거되어 분석될 때까지 5℃에서 보관하였다.

제오민^®의 안정성을 평가하기 위해, 생화학적 활성을 기지의 마우스 LD₅₀ 어 세이로 분석하였다. 신경독 성분의 함량(pg/바이알 × 10), 슈크로스 함량(%), HSA 함량(%)을 각각 측정하였다. 상기 방법은 유럽 약전에 기재된 요건에 따라 수행되었다.

실시예 1

본 실시예에서는 제오민^®을 60℃에서 1달 보관하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 알 수 있는 바와 같이, 제오민^®의 품질은 60℃에서 1달 동안 보관에 의해 영향을 받지 않았다. 생물학적 활성(LD₅₀ 어세이) 및 신경독 농도(ELISA)는 상기 보관 전 기간동안 실질적으로 변화없이 그대로였다. 또한, 인간혈청알부민(HSA) 및 슈크로스 수준은 시간에 따라 어떠한 유의적인 변동도 나타내지 않았다. 60℃에서 1달 보관후, 제오민^®유효기간 사양의 모든 파라미터가 달성되었다. 유사하게, 60℃ 이하의 보관 조건에서 온 모든 안정성 데이타는 제품 품질에 대해 어떠한 유해한 영향도 나타내지 않았다(데이타 미도시).

실시예 2

본 실시예에서는 제오민^®을 70℃에서 10일간 보관하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 제오민^®의 품질은 70℃에서 10일 동안 보관에 의해 영향을 받지 않았다. 또한 생물학적 활성, 신경독 농도 및 HSA와 슈크로스 수준은 시간에 따라 어떠 한 유의적인 변동도 나타내지 않았다. 이를 통해 제오민^®의 품질은 70℃ 10일까지의 보관에 의해 유의적으로 영향받지 않음을 확인할 수 있다.

대조실시예 3

본 대조실시예에서는, 제오민^®을 80℃에서 10일간 보관하였다. 60℃ 및 70℃에서의 안정성 데이터와 대조적으로, 생물학적 활성의 급격한 감소(LD₅₀ 어세이) 가 관찰되었다. 신경독은 보관후 처음 3일동안 활성의 추가적인 감소와 함께, 5일 이내에 완전히 불활성화되었다. 본 대조실시예는 80℃ 이상의 온도는 상대적으로 짧은 기간의 보관후에도 보툴리늄 톡신의 신경독 성분 기초 근육이완제의 안정성에 유해한 영향을 가지는 것을 보여준다.

Claims (12)

1. 20℃ 이상의 온도에서 근육 이완제를 제공하는 방법으로서, 상기 근육 이완제는 복합 단백질이 없는 보툴리늄 톡신의 신경독성분을 포함하는 고형건조 조성물인 방법.
2. 제1항에 있어서,

   상기 제공은 보관 및/또는 수송을 포함하거나 또는 상기 근육 이완제 제조 방법내 일 단계인 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서,

   상기 근육 이완제는 20℃ 이상, 70℃ 까지의 온도에서 제공되는 것인 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,

   10분 내지 90일간 제공되는 것인 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,

   20℃ 내지 60℃의 온도에서 10분 내지 90일 간 제공되는 것인 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,

   상기 근육 이완제는 10분 내지 30일 간 제공되는 것인 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,

   20℃ 내지 70℃의 온도에서 10분 내지 10일 간 제공되는 것인 방법.
8. 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,

   상기 근육 이완제가 인위적인 냉각 장비없이 보관 및/또는 수송되는 것인 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,

   상기 조성물이 보툴리늄 톡신의 신경독 성분의 동결건조물인 방법.
10. 제1항 내지 9항 중 어느 한 항에 있어서,

    상기 조성물이 추가적으로 슈크로스 및/또는 인간혈청알부민을 포함하는 것인 방법.
11. 제1항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서,

    상기 조성물이 동결방지제, 안정제, pH 버퍼, 슈크로즈 및 인간 혈청 알부민 이외의 부형제 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성분을 추가적으로 포함하는 것인 방법.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,

    상기 신경독 성분이 보툴리늄 톡신 타입 A 신경독 성분인 방법.

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