TW200902050A - Process for providing a temperature-stable muscle relaxant on the basis of the neurotoxic component of botulinum toxin - Google Patents

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200902050 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 其中該肌 之神經毒 尤其所有 本發明提供一種用於提供肌肉鬆弛劑之方法， 肉鬆弛劑為包含不含複合蛋白質之肉毒桿菌毒素 素成份的復水溶液，其具有至少一種以下特I'，、 特徵a)至d): a) 在+2〇C以上之儲存溫度下穩定 b) 在防腐劑及/或止痛劑存在下穩定

c) 對"冷凍及解凍”循環具有抗性 d) 若儲存於不同材料之容器中則穩定 【先前技術】 肉毒桿菌毒素係由細菌穿硿禮苈（c/cmr^·產生。存 在七種抗原性不同之肉毒桿菌毒素血清型，亦即肉毒桿= 毒素八、丑、（：、〇1”及〇。肉毒桿菌毒素係自一般呈 複合物形式之溶解芽孢梭菌培養物中釋放，亦即造成肉 桿菌毒素之毒性的次單位（所謂”神經毒素成份，，）與其他細 菌蛋白質締合，其一起形成毒素複合物。此複合物之分子 里可在約300,000 Da至約900,000 Da範圍内變化。複合蛋 白虞例如為各種血球凝集素。此毒素複合物之蛋白質本身 無母’但咸信其向神經毒素成份提供穩定性且造成肉毒桿 菌中毒中之口服毒性。不同於毒素複合物，呈其分離及純 形式’亦即無任何複合芽孢梭菌蛋白質之神經毒素成份為 酸不穩定的且不抵抗胃腸道中之侵襲性環境。 肉毒桿菌毒素複合物之神經毒素成份最初形成單一多肽 13I808.doc 200902050 鏈，其在血清型A之情況下具有約15〇 kDa之分子量。在其 他血清型中，已觀察到神經毒素成份視細菌源而定在約 145 kDa與約170 kDai間變化。舉例而言，在血清型a之 情況下，多肽之蛋白水解處理產生呈雙鏈多肽形式之活化 多肽，該雙鏈多肽係由重鏈與輕鏈組成，其係藉由二硫鍵 連接。在人類中，重鏈介導與突觸前膽驗能神經末端結合 及毒素内化為細胞。咸信輕鏈造成毒性作用，充當鋅-肽 鏈内切酶且分裂造成臈融合之特異性蛋白質（snare複合 物）（例如，參見M〇ntecucco C,，Shiav〇 G, R〇seU〇 〇: 丁以 neurotoxins. mechanism of action of tetanus and Botulinum AM 7bdco/_ 1996; 18(增刊）：342_354)。 藉由中斷細胞中之臈融合過程，肉毒桿菌毒素防止乙醯 膽驗釋放至突觸間隙中。肉毒桿菌毒素在神經肌肉接合點 處之總體影響為中斷神經肌肉傳輸，且實際上將肌肉去神 經。肉毒桿n毒素在其他周邊膽鹼能突觸處亦具有活性， 導致流涎或出汗減少。 術語”肉毒桿菌毒素，，當在整個本發明之申請案中使用時 係指無任何其他梭菌蛋白質之神經毒素成份，= 肉毒桿因毒素複合物”。當在毒素複合物與神經毒素成份 之間的區別並非必需或所需時之情況下，“中使用術穿 肉毒桿滴毒素”。複合物通常含有額外所謂的"非毒 白質，吾人將其稱作”複合蛋白質"或"細菌蛋白質”。 中==作用，但肉毒桿菌毒素複合物已在大量疾病 中用心療劑。肉毒桿菌毒素血清型八在胸年於美國妹 131808.doc 200902050 批准用於人類用途以治療斜視、瞼痙攣及其他病症。其以 肉毒桿菌毒素A蛋白質複合物形式市售，例如以商標 BOTOX(Allergan Inc.)或以商標 DYSPORT(Ipsen Ltd)市 售。對於治療性應用而言，將複合物直接注射至待治療之 肌肉中。在生理pH值下，神經毒素成份自蛋白質複合物中 釋放且發生所需藥理學作用。 包含A型肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的分離型醫藥組合 物在德國自 Merz Pharmaceuticals GmbH 以商標 Xeomin® 市 售。例如在國際專利申請案WO 00/74703及WO 2006/133818 中描述製造A型及B型肉毒桿菌毒素之神經毒素成份。 關於基於肉毒桿菌毒素之藥物的組合物及給藥，及關於 基於肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的藥物之組合物、給藥 及投與頻率，參考PCT/EP2007/005754。 除上文所述之複合蛋白質之功能外，已推測其亦保護肉 毒桿菌毒素複合物之神經毒素成份不受苛刻環境條件影 響，且神經毒素成份因而極易於降解或失活或兩者，尤其 當進行短期溫度應力時，諸如在溫和至炎熱氣候或一般在 夏季（亦即20°C以上之溫度）儲存或輸送或兩者。 出於該原因，過去一般極其小心以防止基於肉毒桿菌毒 素之藥物及基於肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的彼等者尤 其達到+4°C以上，例如接近於+20°C之溫度。在大多數情 況下，將含有包含肉毒桿菌毒素之固體乾燥凍乾劑或其復 水溶液的小瓶冷凍儲存於僅約-20°C (凍乾劑），於冰上或至 少於冰箱（約+4°C )中。必要之冷卻對提供藥物者造成額外 131808.doc f \

200902050 成本。 另外咸彳5在本發明之前’包含肉毒桿菌毒素之神經毒 素成份的復水溶液就不同儲存或輸送條件而言甚至更不穩 定。另外認為復水溶液之冷凍及解凍將導致蛋白質快速降 解及失活。因此，建議醫師僅在即將投與藥物之前將蛋白 貝-凍乾劑復水且/或如上所概述嚴格將其儲存於低溫下。 鑒於以上情況，發明者關於呈復水溶液形式之基於肉毒 桿菌毒素的肌肉鬆弛劑在不同環境條件下之穩定性進行研 究： a) 在+20°C以上之溫度下儲存 b) 添加防腐劑及/或止痛劑 c) 冷凍及解凍循環 d) 儲存於由不同材料製成之容器中 、令人驚讶地發現包含不含複合蛋白質之肉毒桿g毒素之 神、’工母素成h的復水溶液在此等條件下比在此項技術中所 預期的,4著更穩疋。下文將描述之本發明基於此發現。 【發明内容】 本發明提供一種用於提供 肉鬆弛劑為包含不含複合蛋 素成彳/J的復水溶液，其罝有 特徵a)至d): 肌肉鬆弛劑之方法，其中該肌 白質之肉毒桿菌毒素之神經毒 至少一種以下特徵，更佳所有 a) 在+2〇。(：以上之儲存溫度下穩定 b) 在防腐似/或止—存在下穩定 〇對，，冷;東及m衰具有抗性 131808.doc 200902050 d)若儲存於不同材料之容器中則穩定 在一實施例中，本發明提供在3(TC以上之溫度下提供肌 肉鬆弛劑之方法，其中該肌肉鬆弛劑為包含不含複合蛋白 質之肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的復水溶液。 在另一實施例巾，該提供包括儲存及/或輸送或為製備 該肌肉鬆弛劑之方法中之步驟。在另一實施例中，在3〇它 以上至至多70 C之環境溫度下無任何冷卻裝置之情況下輸 送或儲存（或兩者）肌肉鬆弛劑。 在另一實施例中，使肌肉鬆弛劑進行，，冷凍及解康”循 環。在另一實施例中，，，冷凍及解凍”循環為1至2〇次。 在另一實施例中，肌肉鬆弛劑在防腐劑及/或止痛劑存 在下穩定。 在另一實施例中，將該復水溶液儲存於由塑膠、玻璃或 金屬或其任何組合製成之容器中。 在另一實施例中，溶液進一步包含蔗糖或人血清白蛋白 或兩者。 在另-實施例中，溶液進—步包含至少—種選自由以下 各物組成之群的成份：低溫保護劑、穩定劑、pH緩衝劑、 賦形劑(分別不同於蔗糖及人血清白蛋白)及其混合物。在 另-實施例中，神經毒素成份為A型肉毒桿菌毒素之神經 毒素成份。 【實施方式】 本發明係關於在+4。(：以上，較佳+6〇C以上，更佳+2〇t 以上之溫度下提供肌肉鬆弛劑之方法，其中該肌肉鬆弛劑 13I808.doc 10- 200902050 為包含不含複合劑之肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的復水 浴液。在本發明中，術語，，提供，，包括本文中定義之肌肉鬆 弛劑的任何種類之提供，詳言之儲存、輸送及/或製備該 肌肉鬆弛劑中之步驟。術語，，提供”亦包括使肌肉鬆弛劑進 打自冷滚（例如_20。〇狀態至+4。〇以上，較佳机以上，更 佳+20 C以上之溫度之升溫的步驟。 在本發明中，欲使用所有形式之肉毒桿菌毒素之神經毒 素成伤，詳言之各種血清型，包括血清型A、B、C、D、 E、F及G。在本發明之一較佳實施例中’在8。〇以上之溫度 下提供該血清型B之肉毒桿菌毒素之神經毒素成份。在另 貝把例中’在3 〇 c以上之溫度下提供該企清型b之肉毒桿 菌毒素之神經毒素成份。除此外，經修飾以及重組製得之包 括各別穴變、缺失等之肉毒桿菌毒素之神經毒素成份亦在本 發明之範疇内。關於合適突變體，參考WO 2006/027207 A1 及 WO 2006/114308 A1，及 EP 07014785.5，其以引入的方 式全部併入本文中。另外，在本發明中，可使用各種血清 型之混合物（呈神經毒素成份形式或重組形式或其兩個形 式’例如A型及B型肉毒桿菌神經毒素之混合物）。然而， 本發明亦係指經化學修飾之神經毒素，例如藉由（詳言之） 一或多種表面或溶劑暴露之胺基酸的聚乙二醇化、糖基 化石;IL酸化（sulfatation)、石粦酸化或任何其他修飾。 在—實施例中，該化學去神經劑為禮苈（C/cmn.山·α/)神 經毒素。在另一實施例中，此禮磨神經毒素為肉毒桿菌毒 素在又一實施例中，肉毒桿菌毒素為抗原性不同之血清 131808.doc -11 - 200902050 塑A、B、（：、〇、£、p^G之肉毒桿菌毒素。只要當提及 肉毒桿菌毒素血清型A、B、C、D、E、F或G時，亦涵蓋 血清型之已知變異體，如血清型Al、A2、A3、Bl、B2、 B3 、 Cl 、 C2 、 C3 、 Dl 、 D2 、 D3 、 El 、 E2 、 E3 、 F1 、 F2、F3或Gl、G2、G3。在一實施例中，肉毒桿菌毒素為 肉毒桿菌毒素A。 在另一實施例中，亦涵蓋肉毒桿菌毒素之同功異型物、 同系物、直系同源物（ortholog)及旁系同源物（paralog),其 展示至少50%、至少60%、至少70%、至少80。/。、至少90% 或至多1 00¾之序列一致性。可藉由任何適於產生可靠結 果之演算法來計算序列一致性，例如藉由使用FASTA演算 法（W.R· Pearson 及 D.J. Lipman PNAS (1988) 85:2444- 2448)° 當肉毒桿菌毒素自溶胞之芽孢梭菌培養物中釋放時，— 般與其他細菌蛋白質締合，其一起形成毒素複合物。在另_ 實施例中，該肉毒桿菌毒素不含任何複合蛋白質，例如其為 純神經毒素血清型A。除此外，經修飾以及重組製得之肉毒 桿菌毒素之神經毒素成份（包括各別突變、缺失等）亦在本發 明之範疇内。關於合適突變體，參考WO 2006/027207 A1、 W0 2006/114308 A1 及 EP07014785.5(Merz在 2007年 7月 27 曰申請之專利申請案），其揭示内容已以引用的方式全部 併入本文中。另外，在本發明中’可使用各種血清型之混 合物（呈神經毒素成份形式或重組形式或其兩個形式，例 如A型及B型肉毒桿菌神經毒素之混合物）。然而，本發明 131808.doc 12 200902050 亦係指經化學修錦之神經毒素’例如藉由（詳言之）暴露於 表面或溶劑之一個或多個胺基酸的聚乙二醇化、糖基化、 石μ酸化、磷酸化或任何其他修飾。 ，本文中將肉毒桿菌毒素複合物之神經毒素次單位稱作” •神經毒素成份”或”不含複合蛋白質之神經毒素成份"。術 語”神經毒素成份|，亦包括出現在㈣❹之其他血清型中 之功能性同系物。在本發明之一實施例中，神經毒素成份 無任何其他烤#禮磨（C. ⑹蛋白質，在一實施例 I ’亦無RNA’其可能潛在地與神經毒素成份締合。神經 f素成份可為約1 50 kDa之單鏈前軀體蛋白質或以蛋白分 解方式處理之神經毒素成份，其包含約5〇 kDa之輕鏈A。） 及約100 kDa之重鏈（He)，該等鏈可藉由一或多個二硫鍵連 接（對於評述參見例如57卿>5〇„ J训心v

Toxicol. 2004; 44:167-93)。 在本發明中，欲使用所有形式之肉毒桿菌毒素（詳言之 各種血清型）、肉毒桿菌毒素之神經毒素成份與其複合伴 生蛋白質之各種複合物及此等肉毒桿菌毒素之神經毒素成 份。除此外，經修飾及/或重組製得之包括各別突變、缺 失等之肉毒桿菌毒素或肉毒桿菌毒素之神經毒素成份亦在 本發明之範疇内。關於合適突變體，參考WO 2006/027207 A1 ’其以引入的方式全部併入本文中。另外，在本發明 中，亦i使用各種血清型之混合物（呈複合物形式、神經 毒素成份及/或重組形式），例如A型及B型肉毒桿菌毒素之 混合物或A型及B型肉毒桿菌神經毒素之混合物。 131808.doc •13· 200902050 根據本發明之教示，藥物有可能含 个3有出現在肉毒桿菌 毒素複合物（非神經毒素成份）中之I白暂 , 貝。砷經毒素成份 之前軀體可經分解或未經分解，然而在一 ^ X知例中，前躺

體已經分解為重鏈及輕鏈。如本文中其他處所指出，多狀 可具有野生型序列或可在-或多個殘基處經修錦。修飾包 含化學修飾，例如藉由糖基化、乙醯化、醯化、醯胺化或 其類似方法’其可(例如)對多肽之攝取或穩定性有利。然 而，神經毒素成份之多肽鏈可或者或另外藉由—或多個胺 基酸殘基之添加、取代或缺失來經修倚。 ，* /|、 、、^〇- 口 分。用於本文中之此醫藥組合物可包含例如呈作為唯 上文所提及之神經毒素成份可為組合物或醫藥組合物之 部 活性成份之神經毒素成份形式之肉毒桿菌毒素或可含有額 外醫藥活性成份，例如玻糖醛酸及/或聚乙烯吡咯啶酮及/ 或聚乙二醇，視情況藉由合適pH緩衝劑，詳言之藉由乙酸 鈉緩衝劑及/或低溫保護劑多元醇來使此組合物之pH穩 定。

醫藥組合物”為含有或包含用作藥物或診斷劑之活性成 份（diagnostic)之調配物。此醫藥組合物可適用於向人類患 者#斷性或治療性投與（亦即藉由肌肉内或皮下注射）。 在本發明之一實施例中’組合物可包含神經毒素成份及 玻糖醛酸或聚乙烯吡咯啶酮或聚乙二醇，視情況藉由合適 pH緩衝劑’詳言之藉由乙酸鈉緩衝劑及/或低溫防護劑多 元醇來使此組合物之pH穩定。 該組合物較佳包含A型肉毒桿菌毒素之神經毒素成份。 131808.doc -14· 200902050 該組合物為肉毒桿菌毒素之神經毒素成份之復水溶液。組 σ物車乂佳進一步包含蔗糖或人血清白蛋白或兩者，又佳人 血清白蛋白與蔗糖之比率為約1:5。在一實施例中，組合 物為Xeomi’。該人血清白蛋白更佳為重組人血清白蛋 白。或者，該組合物不含諸如人血清白蛋白之源自哺乳動 物之蛋白質。藉由以其他非蛋白質穩定劑（下文）置換血清 白蛋白，任何此溶液可提供足夠神經毒素穩定性。 組合物可包含額外成份，諸如pH緩衝劑、賦形劑、低溫 保護劑、防腐劑、止痛穩定劑或其任何組合。 因此，在一較佳實施例中，連同玻糖醛酸穩定劑或聚乙 烯吡咯啶酮穩定劑或聚乙二醇穩定劑或其任何組合一起調 配神經毒素成份。另外，組合物可含有乙酸鈉緩衝系統或 醇低溫保護劑或兩者。在另一較佳實施例中，調配物不含 白蛋白，且包含作為穩定劑之玻糖醛酸、聚乙烯吡咯啶酮 (Kolhdon®)及/或羥乙基澱粉及/或褐藻酸鹽及/或此等物質 中兩者及/或兩者以上之混合物。該較佳組合物除所提及 之穩定劑外亦包含水及至少一種多元醇，較佳甘露糖醇或 山梨糖醇或其混合物。 在一實施例中，如在小鼠LD5〇檢定中所測定，神經毒素 成份具有50至250 LDS()單位/ng神經毒素成份之生物活性。 在另一實施例中，神經毒素成份具有約丨5〇 LD5〇單位之生 物活性。其中單位在本文中係指單位/奈克。一般而言， 本發明之醫藥組合物包含呈約6 pg至約3 〇 ng之量的神經毒 素成份。 131808.doc •15· 200902050 包含A型肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的分離型醫藥組 合物在德國自 Merz Pharmaceuticals GmbH以商標 Xeomin® 市售。例如在國際專利申請案WO 00/74703及WO 2006/133818中描述製造A型及B型肉毒桿菌毒素之神經毒 素成份。 在一實施例中，該組合物包含A型肉毒桿菌毒素之神經 毒素成份。該組合物為肉毒桿菌毒素之神經毒素成份之復 / \

水溶液。在另一實施例中’組合物進一步包含蔗糖或人血 清白蛋白或兩者’在又一實施例中，人血清白蛋白與蔗糖 之比率為約1:5。在一實施例中，組合物為Xe〇niin®。在另 一實施例中’該人血清白蛋白為重組人血清白蛋白。或 者，該組合物不含諸如人血清白蛋白之源自哺乳動物之蛋 白質。藉由以其他非蛋白質穩定劑（下文）置換血清白蛋 白’任何此溶液可提供足夠神經毒素穩定性。 關於基於肉毒桿菌毒素之藥物的組合物及給藥，及關於 基於肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的藥物之組合物、給藥 及投與頻率，參考pCT/EP2007/005754。 醫藥組合物可經凍乾或真空乾燥、復水或可遍布 (㈣川）於溶液中。當復水時，在一實施例中，添加無菌 生理鹽水（〇.9% NaCl)來製備復水溶液。 此組合物可包含額外賦形劑。術語”賦形劑”係指存在於 醫藥組合物中之物質而非存在於醫藥組合物中：二二： 成份。賦形劑可為緩衝劑、載劑、抗黏著劑、黏二 解劑、填充劑、稀釋劑、防腐劑、媒劑、環糊精二或: 131808.doc _ 16- 200902050 化劑’諸如白蛋白、明冑、膠原蛋白、氯化鈉。在另—實 她例中，該職形劑亦可為止痛劑、低溫保護劑及/或穩定 劑。 術語”pH緩衝劑"係指能夠將組合物、溶液及其類似物之 pH值調節至特定值或特定pH範圍之化學物質。在一實施 例中’此pH範圍可在pH 5至pH 8之間，例如pH 7至阳8， 或7.2至7.6，或pH 7.4。上述給出之pH範圍僅為典型實例 且實際pH可包括在上文給出之數值之間的任何間隔。根據 本發明之教示的合適緩衝劑例如為磷酸鈉緩衝劑、乙酸鈉 緩衝劑、TRIS緩衝劑或任何適於在上文pH範圍内之緩衝 劑的緩衝劑。 在一實施例中’組合物亦含有1 _ 1 〇〇 mM乙酸鈉緩衝劑， 在另一實施例中10 mM乙酸鈉緩衝劑。 上述給出之pH範圍僅為典型實例且實際pH可包括在上 文給出之數值之間的任何間隔。根據本發明之教示的合適 緩衝劑例如為填酸鈉緩衝劑、乙酸納緩衝劑、TRis緩衝劑 或任何適於在上文pH範圍内之緩衝劑的緩衝劑。 "穩定化（stabilizing、stabilizes、stabilization)，'意謂復水 溶液或水溶液醫藥組合物中之神經毒素成份具有大於生物 活性神經毒素成份在併入醫藥組合物中之前所具有之毒性 的約 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%及至 多約1 00%。在一實施例中’將該神經毒素成份稱為活性 成份。 此寺穩定劑之實例為明膠或白蛋白，在一實施例中其為 131808.doc 17- 200902050 人類來源或自重組來源獲得。亦 來、、择夕疋ώ^ +目非人類或非動物 不 /原之蛋白貝。穩疋劑可由化墨t 4 _>· ** … J藉由化學方法或藉由重組遺傳年 丰又來、，生修飾。在本發明之一無你办丨士 辟 · 之貝她例中，設想使用例如肌 醇、甘露糖醇之醇作；^供、、B仪省*丨n丄 /凰保護劑賦形劑以在凍乾期間使 蛋白質穩定。 尺 在本發明之另一實施例中，穩 〜即』馬非蛋白質穩定 幻’其包含玻糖酸酸或聚乙稀料咬酮或聚乙二醇或其任

何組合。在另—實施例中，敎劑為（KoUid。/)、經乙A 澱粉及’或褐藻酸鹽。視情況藉由合適PH緩衝劑，詳言： 藉：乙酸鈉緩衝劑或低溫保護劑或兩者來使此組合物之阳 穩定。該組合物除所提及之穩定劑外亦可包含水及至少— 種多元#，諸如甘露糖醇或山梨糖醇或其混合&。其亦可 包含單醋、二醣或較高多餹，諸如葡萄糖、蔗糖或果糖。 將此組合物視為具有顯著穩定性之較安全組合物。 在實她例中，使本發明之醫藥組合物中之玻糖醛酸與 本發月之神經毋素成份以〇 J mg至丨〇 mg，尤其i 玻糖 醛酸/ml於200 u/m丨肉毒桿菌毒素溶液中之量組合。 當存在於本發明之組合物中時，聚乙烯吡咯啶酮係與本 發月之神、，二母素成份以提供包含1 〇 mg至5〇〇 mg，尤其1 〇〇 mg聚乙烯吡咯啶酮/ml於2〇〇 u/mi肉毒桿菌毒素之神經毒 素成份溶液中之復水溶液的量組合。在另一實施例_，在 至多8 ml溶液中進行復水。此舉在25 U/ml神經毒素成份溶 液中造成降至12.5 mg聚乙烯吡咯啶酮/ml之濃度。在另一 實施例中’所得溶液亦含有1-100 mM，尤其10 mM乙酸鈉 131808.doc 200902050 緩衝劑。在降至25 U/ml神經毒素成份溶液之較低濃度的 情況下，亦應用成份之此比率。 在一實施例中’使本發明之醫藥組合物中之聚乙二醇與 本發明之神經毒素成份以1〇 mg至5 〇〇 mg，尤其1〇〇 mg聚 乙一醇/ml於200 U/ml肉毒桿菌毒素溶液中之量組合。在另 一實施例中’標的溶液亦含有1-100 mM乙酸鈉緩衝劑，在 又一實施例中含有10 mM乙酸納緩衝劑。. 在一實施例中，根據本發明之醫藥組合物當儲存於約 + 30 C與約-20 C之間的溫度下時保持其效能大體上不變歷 時六個月、一年、兩年、三年及/或四年時期。另外，所 指示之醫藥組合物一旦復水即可具有在約2〇%與約1〇〇%之 間的效能或回收率（percent rec〇very)。 1低溫保護劑”係指賦形劑，其使得復水溶液或水溶液醫 藥組合物中之神經毒素成份具有大於生物活性神經毒素成 伤在於醫藥組合物中冷凍乾燥之前所具有之毒性的約 20%、30%、40%、50%、60〇/〇、70%、80〇/〇、90%及至多約 100%。 在另一實施例中，組合物可含有作為低溫保護劑之聚羥 基化合物，例如多元醇。可用之多元醇之實例包括（例如） 肌醇、甘露糖醇及其他非還原醇。組合物之一些實施例不 包含蛋白質穩^劑’或不含有海藻糖或麥芽三糖或乳糖或 蔗糖或相關糖或有時用作低溫保護劑之碳水化合物。 術語”防腐劑’’分別係指物質或物質群，其防止該組合物 中之微生物、昆蟲、細菌或其他污染性生物體之生長或存 131808.doc 19 200902050 活。防腐劑亦防止該組合物發生不當化學變化。在本專利 範疇内可用之防腐劑為熟習此項技術者已知之技術現狀的 所有防腐劑。可用之防腐劑之實例尤其包括（例如）苯甲基 醇、苯甲酸、氯化苯甲烴銨、丙酸鈣、硝酸鈉、亞硝酸 納亞石;||_ 鹽（一乳化硫、亞硫酸氫納、亞硫酸氫卸等）、 EDTA二鈉、甲醛、戊二醛、矽藻土、乙醇、甲基氣異噻 唑啉酮、丁基化羥基苯甲醚及/或丁基化羥基甲苯。

術浯止痛劑"係指以多種方式對末梢神經系統及中樞神 經系統起作用之止痛藥物且尤其包括撲熱息痛 (paracetamol)(乙醯胺苯酚）、諸如水楊酸鹽之非類固醇消 炎藥物（NSAID)、諸如嗎啡鹼之麻醉藥、具有麻醉特性之 合成藥物，諸如曲馬多（tramad〇l)，及各種其他物質。亦 包括任何具有局部止痛效果之化合物諸如利多卡因 (lid〇caine)、苯曱基醇、苯甲酸及其他物質。 在-實施例中’止痛劑為組合物之部分，在另一實施例 中’在以化學去神經劑治療之前、期間或之後投 劑。 用於本文獻中 .........狂，3名网鲁桿菌毒 素之神經毒素成份的溶液’而將此溶液冷珠且乾燥直至僅 留下組合物之固體成份。此處理之冷;東乾燥產物因此在本 文件中定義為"凍乾劑，，。 ^本文獻中術語”復水”係定義為溶解神經毒素成份之該 冷，東乾燥組合物的過程。例如若所有必要成份均已包含於 康乾劑中，則此可藉由添加適當量之無菌水來執行、 131808.doc 20· 200902050 若情況並非如此，則其可（例如1拉±时 、列如）糟由早獨添加無菌鹽水溶 液或若可適用則添加包含（例如彳 以』如）pH綾衝劑、賦形劑、低溫 保護劑、防腐劑、止痛穩定劑或1 Μ A具任何組合之成份來執 行。之前提及”鹽水溶液”之鹽欠為醆 |水為鹽溶液，更佳為氯化鈉 (NaCl)溶液’又佳為等張氯化叙j、，交、右〆十b 乳化納/合液（亦即ο》％之氯化鈉 濃度）。以使最終"復水物"可直接式 且接或間接（亦即例如在稀釋 之後）投與患者之方式進行溶解。神經毒素較佳在等張介 f中復水。更佳在等張鹽水中。該鹽水更佳為無菌鹽水。 用於本文獻中之命名”冷；套爲站 m r七今凍及解凍循環I，係指復水溶液之 冷凍及解凍之過程。藉此"Α ·φ 7 /東之過程係定義為在0°c以 下，例如較佳在_2(rc以 w r又/皿度（正常冷凍器溫度），更佳 在-80 C (乾冰溫度）或_8〇。〇以下w 卜t /皿度下儲存復水溶液。 且藉此π解凍’’之過程传定羞i 往你疋義為在oc以上，較佳+4t:以上， 更佳:抓以上，最佳至分別心。d增。C以上但 不超過50 ?之溫度範圍儲存。在冷凍及解凍期間及之後的 典型及例示性儲在日洋pq E > 居存時間為至多1分鐘，至多10分鐘，至多 3 0分鐘，至多1小時，至多 主夕2小日年，至多3小時，至多 時’至多5小時，黾容& |。士 至夕6小時，至多7小時，至多8小時至 多1天，至多2天，；5夕，τ 至夕3天，至多4天，至多5天，至多6 天，至多7天，至吝 ，至夕9天，至多10天，至多2週， 至多3週，至多Η固曰 月，至夕2個月，至多3個月（90天）。命 名h ;東及解;東循環"亦勺红、、& a 、匕括以連續方式之後續冷卻及（再） 加熱循環。上述時門 （冉） 、曰11又僅為典型實例且實際時間段可 或較短且包括右L 仅 上文給出之數值之間的任何間隔^ —個" 131808.doc 200902050 冷凍及解凍循環"之定義為在上述條件下之一個冷凍及 個解来步驟。本文獻中所提及複數個"冷;東及解;東猶學” 係指復水溶液在不同以及相同時間間隔及溫度（如其經1 義在上文範圍中）下重複進行一次”冷凍及解凍循環"。2 = 重複可進行至少兩次，更佳至少三次或至少四次，甚至述 佳至少五次、至少六次、至少七次，4至更佳至少八次更 至少九次或至少十次，但不多於2〇次。

術語"容器”係指其中可儲存或輸送（或兩者）該組合物之 如小瓶、注射器、燒瓶或任何其他類型儲集器之器皿。此 器皿之壁與4組合物直接接觸且包含如各種各樣玻璃、塑 膠、金屬、陶瓷或其任何組合之材料，或任何適於密封保 存復水溶液之材料。 y' 在本文獻中之術語”室溫，，係指任何在+2〇t至+25。〇之間 的溫度，甚至更佳+2(TC、+2FC、+22。〇 ' +23t：、+24。^ 或+25 °C及中間任何值之溫度中的任—者。 在本中之術語”賦形劑”係指存在於醫藥組合物中之 物質而非存在於醫藥組合物中之活性醫藥成份。賦形劑可 為緩衝劑 '載齊卜抗黏著劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、 稀釋劑、防腐劑、媒劑、環糊精及/或膨化劑，諸如白蛋 白、明膠、膠原蛋白及/或氯化鈉。 ’’冷卻裝置”係定義為任何能夠將組合物之溫度降至環境 溫度以下之裝置。該”冷卻裝置”較佳達成環境溫度以下之 穩定溫度，通常在6。(：或約6。〇 ’在—些情況下甚至在代以 下。 131808.doc -22- 200902050 肌肉鬆弛劑之上文提及之提供通常包括肌肉鬆弛劑之儲 存或輸送或兩者，或分別為在高溫下製備該肌肉鬆弛劑之 方法中之步驟’更佳為在已使包括肉毒桿菌毒素之神經毒 素成份之蛋白質凍乾且復水之後進行之步驟。"高溫"意謂 + 6°C以上’較佳+20。(：以上，更佳+30〇C以上之溫度。術語 " + 6°C 以上”意謂（例如）+7。〇、+8°c、+9。〇、+1〇。〇、 + ll°c、+12。(：、+13°c、+14°c、+15t、+16°c、+17°C、 + 18°C、+19°C及或更高’但不超過7〇。〇。術語"+2〇ac以上” 意謂（例如）+2TC、+22°C、+23°C、+24°C、+25°C、 +26°C、+27°C、+28°C、+29°C 或+3(TC。術語 ” + 3(TC 以上" 意謂（例如）+31°C、+32°C、+33°C、+34。〇、+35。〇、 + 36 C、+37°C、+38°C、+39°C 或 +40°C。肌肉鬆弛劑較佳 不在+70°C以上儲存。在一些情況下，亦即在其中於〇它以 下儲存基於肉毒桿菌毒素之神經毒素成份的肌肉鬆弛劑之 環境中，術語”高溫”係指以上，較佳+4。〇以上，且最佳

至上文所述分別、+2(TC及+3(rc以上之溫度範圍的溫 度0 在一較佳實施例中，使肌肉鬆弛劑進行處於+6t以上與 至多赠範圍内之溫度歷時不超過14天之時間段。如熟 習此項技術者完全瞭解’肌肉鬆弛劑進行各別溫度之時:; 段可為幾分鐘與14天之間的任何時間間隔。通常考慮:址 此肌肉鬆弛劑之情況且詳言之涉及儲存 "" 于次翰迗或兩者之愔 況’時間段將不少於10分鐘。此等短時 *去* 守期在以下情況下尤 其重要.在炎熱氣候中輸送之後及儲存二 崎仔之月”肌肉鬆弛劑 131808.doc -23- 200902050 例如在機場或在街道上進行陽光直射。在本發 々〒之典型 時間段因此為至多10分鐘，至多30分鐘，至多] 1小時，至 多3小時，至多4小時，至多5小時，至多6小時，$夕” J 主多7小 時，至多8小時，至多1天，至多2天，至多3天至多4 , 天，至多5天，至多6天，至多7天，至多8天，至多9天， 至多10天，至多2週，至多3週，至多丨個月’至多2個月， 至多3月（90天）。不必說，上述時間段僅為典型實例且實際 時間段可較長或較短且包括上文給出之數值之間的任 f 'J 隔。 關於肌肉鬆弛劑所進行之溫度，熟習此項技術者通常預 想20 C以上之溫度下限。關於本文中所規定之溫度及溫度 範圍，热習此項技術者瞭解肌肉鬆弛劑/組合物所進行之 上限溫度較佳不超過70°C。亦即，肌肉鬆弛劑所進行之溫 度較佳處於20。〇以上與至多7〇。〇之範圍内。因此，在本發 明中’使肌肉鬆他劑分別進行2〇。〇以上，或25。〇以上，或 1 3〇 C以上，或35°C以上，或40。(：以上，或45°C以上，或 5〇C以上，或60它以上，或65它以上，至多70°C之溫度。 了由^供’較佳輸送或儲存（或兩者）肌肉鬆他劑所處 . 之％ 土兄引起的在20°C以上之給定值與至多7(TC以及各別溫 • 纟間隔之間的任何特定溫度係在本發明中。 以下溫度及時間間隔代表本發明之較佳實施例。根據第 實此例’使肌肉鬆弛劑進行+3CTC以上及至多+7〇。(：之溫 &天之時間段，更佳+3G°C以上及至多+70°C 之酿度反日守介於1 0分鐘至14天範圍内之時間段’更佳在 131808.doc -24- 200902050 + 40 C與+60 C之間的溫度下及在〗0分鐘至9〇天範圍内之時 間段。 在另一較佳實施例中，時間段在1〇分鐘至3〇天之範圍 内，同時溫度在3(TC以上至至多7(rC，較佳4(rc至6〇t， 更佳50°C至60。(：之範圍内。 在代表極端條件之另一較佳實施例中，溫度處於65t：與 7代之間的範圍内，且肌肉鬆弛劑進行該溫度之時間段處 於10分鐘至90天，較佳10分鐘至3天之範圍内。 實驗結果證明溶液所暴露之表面對本發明之復水神經毒 素的财性不具有影響。因&，可將本發明之復水組合物 保存於各種器皿或容器巾。此等器皿或容器之表面因此可 由任何種類之塑膠、金屬、玻璃等製成。 外 關

由於本發明所基於之發現，因此現在可能在不使用人工 冷卻裝置的情況下提供如上文概述之肌亀劑。此發現 對於此肌肉鬆弛劑之輸送或儲存或兩者而言尤复重要另 ，本發明尤其與可能連同增大之濕度一起的高溫環境相 步例示本發明 現藉由下文所述之非限制性實例來進一 實例

内Γ 品Xe°min來進行實例。X一、含有A 肉母桿®神經毒素（15GkDa)作為活性成份 素係以缺口雙鏈形式存在，亦即“末。 主认^ ^ 、3有重鏈及輕鏈。自 培養物（¾株A取32G5)裝毒素。其已 其不含任何複合蛋白質之程产 工，，，匕 買之私度。Xe〇min®另外包含人血 131808.doc •25· 200902050 白蛋白及蔗糖。 為評估Xeomin®之穩定性’藉由使用小鼠半邊振動膜檢 定（mouse hemidiaphragm assay，HDA)來測定生物活性。 在此檢定中，將包含鼠類膈神經及振動膜肌肉之相應部分 的神經肌肉製劑固定於測力設備中。使完整膈神經穿插 (threaded)通過兩個用以刺激神經且藉此刺激振動膜之電 極。將此組合物浸於含毒素之HDA緩衝溶液中且以電脈衝 (頻率1 Hz，刺激持續時間〇. 1 ms，刺激電流振幅5_5〇 mA) 週期性地刺激神經。 藉助於等長傳感器偵測此經間接刺激之肌肉的收縮反 應。使用市售軟體乂^1'0〇&1\\^113,4在個人電腦上將信號放 大且文件化。當量測肌肉收縮反應之時間過程時，在肉毒 桿菌毒素存在下觀察到收縮力呈指數降低。此降低之特徵 為所謂的麻庳時間。麻庳時間係定義為在兩個時點"毒素 試樣添加"與"最大收縮力一半”之間的時間，且盥3么 之毒素濃度成比例。 /、 合 根據EUropean Pharmac〇peia中對肉毒桿菌毒素活性 之要求進行上述方法。 、 實例1”在室溫下儲存，， 膠t^(+23〇C)T將XE_@之復水鹽水溶液儲存於塑 "裔中至多9天。將試樣之活性與即 = ::)的經復水之參考物相比較。在試-I:: :間未…貞測到蛋白質活性之顯著降低。 實例2”儲存於塑膠容器中，， ni808.doc •26- 200902050 將鹽水溶液中之復水肉毒桿菌神經毒素NT201抽吸入各 種塑膠容器中且自各種塑膠容器應用鹽水溶液中之復水肉 毒桿菌神經毒素NT201 (參看下表1)。另外，將復水毒素分 別儲存於塑膠容器及注射器中歷時至多1 4天之不同時期， 隨後進行活性量測。無一情況中可偵測到蛋白質活性之顯 著降低。 表1 : 塑膠注射材料 移液管尖端 Eppendorf AG #0030 000.854 #0030 000.870 #0030 000.919 #0030 000.978 微量管 Sarstedt AG #72.690 離心管 Sarstedt AG #62.554.001 PP 冷凍管 Nunc #379146 1 ml注射器 B. Braun #9161406V 1 ml注射器 BD(Becton Dickinson) #300013(EU 版） 1 ml注射器 BD(Becton Dickinson) #309602(US 版） 3 ml注射器 BD(Becton Dickinson) #300910 5 ml注射器 B. Braun #4617053V 10 ml注射器 BD(Becton Dickinson) #300912 注射器配接器，雌/雌 B. Braun #5206634 20G針 BD(Becton Dickinson) #301300 21G針 B. Braun #4565503 21G針 BD(Becton Dickinson) #301155 28G針 B. Braun #4657683 30G針 B. Braun #4656300 30G針 BD(Becton Dickinson) #304000 注射器塞 B. Braun #4495101 注射器塞 BD(Becton Dickinson) #394075 131808.doc -27- 200902050 將含有1 00 MLD("半致死劑量，，或LDw單位）毒素之NT2〇 i 的冷凍乾燦粉末於鹽水溶液中復水，隨後應用。 為测》式塑膠材料對肉毒桿菌神經毒素活性之影響，使用 所列針、配接器及塞子（列於上表）將其復水鹽水溶液抽吸 入各種注射器中且自各種注射器來應用，且使用意圖模擬 肌肉内主射之醫學程序的一般注射法將其應用於器官浴 (其中藉由小鼠半邊振動膜檢定進行活性測定之器皿）。 =外’將復水毒素分別儲存於塑膠容器、注射器中歷時 至多14天之不同時期，隨後進行活性量測。 在三個獨立系列中進行實驗以研究不同變數之最大數目 且以獲得可靠結果。以下描述細節。 根據典型醫學實踐（系列2及3)用移液管（系列υ或用hi 庄射益及20 G針⑽咖91()及Bd #則⑼；系列2)或用$

mb^H^2〇 g,+ (b Braun ,4617053V^#4665503 ； ^(J 3)來直接獲得鹽水等分試樣。 、 將：t::試樣體積之精確性’當所需量少於。.5，， ==:離心管中以中間儲存。在此等情況下，稍 後使用移液管來轉移所需體積。 系列1及3 :使用細針小心地為十個小瓶充氣且隨後將其 打開。將鹽水(l 0 _用移液管轉移至第— 小瓶中。藉由小心混合將丸粒完全溶解之 後，將溶液轉移至第二小瓶中。以此方式， =流體自-則、瓶轉移至下—個小 後-個’亦即第十個小瓶。接著，藉由再： 13I808.doc -28- 200902050 加1.0 ml鹽水溶液至第一小瓶中且藉由上文 所述程序連續地洗滌小瓶且最後組合兩個毒 素溶液來收集任何殘餘試樣。 此等組合溶液（2·0 ml)表示具有約10〇 mld/0.2 ml溶液之 肉毒桿菌神經毒素池。當隨後以注射器處理時，將該池之 0.2 ml等分試樣用移液管轉移至微量管中以保證精確體 積。 系列2 : 將精確2·5 ml鹽水溶液抽吸入具有2〇 G針 (BD #300910 及 BD #3013〇〇)之 3 ml 注射器中 且以母份〇·5 ml注射至五個含有肉毒桿菌神 經毒素之小瓶中。小心地混合小瓶直至全部 丸粒均溶解。藉由插入細針來為小瓶充氣之 後’將復水毒素抽吸入具有21 〇針（Bd #300912 及 BD #301 155)之 1〇 ml 注射器中。 接著將空氣抽吸入注射器中至1〇 ml之總體 積且以塞子（#394075)密封注射器。接著小 〜方疋轉’主射器以允許毒素溶液與注射器全部 内表面接觸。 如上所述製得對照試樣池，但五個小瓶之每一者使用 0.5 ml鹽水溶液以代替ο.〗如。 在二個具有三個不同肉毒桿菌毒素池之區中進行實驗。 然而，每相應試樣使用〇·2 ml(系列1及3)或〇 5(系列幻 肉毒桿菌神經毒素池，在各情況下至⑽MLD肉毒桿菌毒 素。將此體積填充於微量管中且接著抽吸入注射器中，或 131808.doc -29- 200902050 直接儲存於冷;東管中。

系列1 :纟第-個實驗中’將肉毒桿菌神經毒素池之 等刀忒樣儲存於冷凍管中或具有26 G針（BD #3096G2 ’ XJS版’及 B. Braun #4657683)之 1 ^ ml /主射器中於冰箱中分別歷時7天及14天。 错由注射且藉由將毒素等分試樣（〇2如=⑽则⑺ 移液管轉移至所製備之含有3·6⑹職緩衝劑（伊格爾 (Eagles)平衡鹽溶液+ 〇 /〇人血清白蛋白）之半邊振動膜器 吕浴中來開始毒素活柯| | 、11罝測。藉由將另外0.2 ml新鮮鹽水 溶液抽吸入注射器中奸& ώ 、 足而自注射器沖洗殘餘毒素溶液且將 其注入器官浴中。使用狡、、永*々士 之用移液官亦以〇.2 ml新鮮鹽水溶液沖 洗微量管。 系列2 .使用若干來自Becton Dickinson之不同注射 材料來進行第二系列。 對照池係經立即借用θ # 便用或在彳放置官中在冰上儲存最多1小 時，隨後進行活性測定。 將上述肉毒#菌神經毒素池儲存在代至π下於封閉 1〇㈤注射器内分別歷時1小日夺、3天及5天。藉由經由雌/雌 配接器（刪3_13找B_#遍叫將丨μ注射器連 接於H) ml儲存注射器來獲狀5⑹試樣。獲得試樣之後， 再次密封儲存注射器^視情況可送回冰箱中。 精由將毒素等分試樣（〇5 mW〇〇 mld)注射或用移液管 轉移至所製備之含有3 5 ml hda緩衝劑（伊格爾平衡鹽溶 液+0.1 °/。人A清白蛋白）之半邊振動膜器官浴中來開始毒 I3I808.doc -30- 200902050

'、 ^ 連同上述1 注射器一起使用30 G針（BD #3〇4000)。藉由將〇 5 半邊振動膜器官浴溶液抽吸入注 射杏中仉而自注射器沖洗殘餘毒素且將其注射回器官浴 中。 " 系列3 . 以來自B. Braun之注射材料進行最終系列。 對照池係經立即使用或在微量管中在冰上儲存最多i小 時’隨後進行毒素活性測定。 將上述0.2 ml肉毒桿菌神經毒素池等分試樣抽吸入配備 有 20 G 針（B. Braun #9161406V 及 #4665503)之 1 ml 注射器 令。接著將空氣抽吸入注射器中至！ ml之總體積且以塞子 (B. Braun #4495 101)密封注射器。接著小心地旋轉注射器 以允許毒素溶液與注射器全部内表面接觸。㈣，將試^ 儲存於4°C至8°C下分別歷時丨小時、3天及9天。 々藉由將毒素等分試樣（0.2 ml叫〇〇 MLD)注射或用移液 管轉移至所製備之含有3.6 ml HDA緩衝劑（伊格爾平衡鹽 溶液+〇，1 %人血清白蛋白)之半邊振動膜器官浴中來開始 毒素活性量測。連同上述1⑽注射器一起使用30 〇針^

Braun#··)。藉由將另外Q 2⑷新鮮鹽水溶液抽吸入 注射器中從而自注射器沖洗殘餘毒素溶液且將其注射回哭 官浴中。 將活性測定之結果列於下表中。 131808.doc 200902050 試樣 麻療 平均值 SD1 系列1 對照物 70 min 70.0 min - 在冷凍管中儲存7天 73 min 70 min 71.5 min 2.1 min 在冷凍管中儲存14天 75 min 77 min 76.0 min 1.4 min 在來自BD(US版）之注射器中儲 存7天 76 min 68 min 70 min 71.3 min 4.2 min 在來自BD(US版）之注射器中儲 存14天 70 min 70.0 min - 系列2 對照物 82 min 70 min 69 min 76 min 74.3 min 6.0 min 在來自BD(EU版)之注射器中儲 存1小時 62 min 68 min 68 min 66.0 min 3.5 min 在來自BD(EU版)之注射器中儲 存3天 67 min 60 min 63.5 min 2.8 min 在來自BD(EU版）之注射器中儲 存5天 64 min 68 min 66.0 min 4.9 min 系列3 對照物 68 min 73 min 70.5 min 3.5 min 在來自B. Braun之注射器中儲存1 小時 68 min 63 min 65.5 min 3.5 min 在來自B. Braun之注射器中儲存1 天 75 min 75.0 min 在來自B. Braun之注射器中儲存3 天 64 min 65 min 64.5 min 0.7 min 在來自B. Braun之注射器中儲存9 天 74 min 64 min 69.0 min 7.1 min dSD-標準差） -32- 131808.doc 200902050 用於本研究中之塑膠材料展示對復水神經毒素調配物之 活性無顯著作用。 個別麻庳時間值對於對照試樣而言在68 min至82 mb之 範圍内（平均值.72.6 mm±5.G min)且對於以塑膠材料處理 之試樣而言在60 min至77 min2範圍内（平均值：68 6 min±4.8 min)。 實例3 "在防腐劑存在下之穩定性，， 使Xeomin®在有或無防腐劑（苯甲基醇）之無菌鹽水溶液 中進行復水且儲存歷史多個時間範圍。在下將該等池 儲存於聚乙烯H皿中歷時至多14天。在苯甲基醇存在下未 能偵測到蛋白質活性之顯著降低。 以1 ·0 ml鹽水（具有〇.9體積％防腐劑或無防腐劑）將各小 瓶之藥品復水至1 〇〇 MLD/ml之最終濃度且將其儲存於聚乙

烯益孤中歷時適當儲存時間。接著根據測試組彙集所有試 樣。 ’、 〇I 由於苯曱基醇對測試系統之半邊振動膜製劑的麻醉作 用’因此在此生物檢定之前需要透析步驟以移除此試劑。 因此，與存在或不存在此防腐劑無關，在4t下針對25〇倍 過量之Ead緩衝鹽溶液（EBSS)將所有測試試樣均透析兩^ 各歷時2小時以上。 在透析步驟之後，以EBSS將試樣稀釋至25 MLD/mi之最 終濃度，在半邊振動膜檢定中以每次量測丨〇〇 之標稱 劑里測疋此專試樣之殘餘活性。 , 將此實例之結果展示於圖1中。 131808.doc -33· 200902050 圖1展示在+4t下在聚乙烯器孤中儲存對在有或無防 劑之鹽水溶液中復水之肉毒桿菌毒素藥品 的影響。 性 圖2展示在+4。〇下在具有橡皮塞之聚乙稀注射器中儲存 對在有或無防腐劑之鹽水中復水之肉毒桿菌藥品知⑽^ 之活性的影響。 圖1所示之結果展*Xeomin®在有或無防腐劑苯曱基醇之 鹽水溶液中復水對肉毒桿菌神經毒素藥品之活 著影響。 韦颂 當在鹽水溶液中復水且在4tT儲存時，藥品穩定至多 14天。存在或^存在防腐劑時，苯甲基醇對此穩定性不且 有影響。 〃 實例4 "冷凍及解凍循環，， 在此實例中，Xe〇min®在無防腐劑之無菌鹽水溶液中復 水且重複料滚及解;東至多五次。未能傾測到對肉毒桿菌 神經毒素藥品之麻痹活性之顯著影響。 出於注射目的’無菌鹽水溶液係由水中之〇·9%氯化鈉 (重量/體積）組成。採用藥品Xe〇min®以製得試樣池。 使用針為在兩組（每組七個小瓶）總共十四個小瓶之 X e 〇 m i η 〇小心地充廒且随％收社± 通後將其打開。確保冷凍乾燥產物 在小瓶底部為充分完整的。 以】.4 d鹽水溶液使七個小瓶χ—η@組之第—個小瓶 復水且使冷凉_乾燥產物^人，+ ^ , 勿70王洛解。將此溶液定量轉移至下 /瓶中其中凌乾劑再次完全溶解。重複此程序直至該 13l808.doc •34· 200902050 、、且之所有七個小瓶的藥品均溶解於^ .4 W無菌鹽水中。接 著彙集兩個組之此等i .4 ml以產生2 8 ml Xe〇mi，池。 將此Xeomin池之等分試樣（〇 2爪丨）用移液管轉移至十二 個H己之聚丙稀f中：兩個參考及1 G個編號1至5(表示 Ή東解/東循環之數目）之冷;東解;東複製試樣。將兩個參考 s儲存在4C下直至在半邊振動膜檢定中經量測，而將其 他管冷束於.2Gt下歷時至少⑶分纟卜使標記2_5之管在室 溫下完全解;東（約3〇分鐘）且隨後冷床於_2(Γ(：下歷時12〇分 鐘。繼續此程序直至標記3之管已冷;東三次，標記4之管冷 凍四次且標記5之管冷凍五次。 7 在半邊振動膜檢定之前，在室溫下使所有試樣均解凍三 十分鐘且在37t：下培育10分鐘。將其混合且離心1〇秒鐘。 將各忒樣轉移至3.6 ml Earl緩衝鹽溶液/0.1% HSA*，使 用名員外〇,2 ml Earl緩衝鹽溶液/〇1% HSA以完成轉移。隨 後在半邊振動膜檢定中量測所得4 〇 ml Xe〇min@之麻痹活 性。 τ / 將此等實例之結果展示於圖3中。 圖3中所示之結果展示復水Xe〇min®之重複冷凍及解凍對 肉毋杯菌神經毒素藥品之麻痹活性不具有顯著影響。當在 鹽水溶液中復水時，Xe〇min@穩定至少多達五個冷凍I解 凍循環。 【圖式簡單說明】 圖1 :用或未用經防腐之鹽水溶液之儲存對在之復 水Xeomin®及Botox®之活性的影響。儲存於聚乙烯器皿 131808.doc -35· 200902050 中 ο 圖2:用或未用經防腐之鹽水溶液之儲存對在+4。 L之復 水Xeomin®及Botox®之活性的影響。儲存於且古換 τ八八,橡皮塞之 聚乙烯注射器中。 圖3 :重複冷凍及解凍對復水Xeomin®之活性的影響。

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Claims (1)

1. 200902050 十、申請專利範圍： 1. 一種在6。(：以上，較佳在25°C以上之溫度下提供肌肉鬆弛 劑方法，其中該肌肉鬆弛劑為包含不含複合蛋白質之肉 母桿菌毒素之神經毒素成份的復水溶液。 2· ^明求項丨之方法，其中該提供方法包括儲存及/或輸送 或為製備該肌肉鬆弛劑之方法中之步驟。 f 3 ·如明求項丨或2之方法，其中在無任何冷卻裝置之情況下 在6(3以上，較佳25艺以上至至多70。(：之環境溫度下輸送 或儲存（或兩者）該肌肉鬆弛劑。 4’如則述請求項中任—項之方法’其中使該肌肉鬆弛劑進 行"冷凍及解凍"循環。 5.項4之方法，其中該等，，冷凍及解凍"循環之次數為 項中任一項之方法，其中該肌肉鬆弛劑在防 過齊1及/或止痛劑存在下穩定。 7_ ==求Γ任一項之方法’其中將該復水溶液儲存 如==破璃或金屬或其任何組合製成之容器中。 .=:!中任一項之方法，其中該溶液進-步包含 庶糖或人血清白蛋白或兩者。 匕3 9. 如前述請求項中任一項 至少-種選自由以下各物έ且成之、中該溶液進-步包含 劑、_定~ ，成之群的成份：低溫保1 _足劑、pH緩衝劑、分 咏'蔓 白之賦形劑，及其混合物。。於蔬糖及人血清白蛋 10. 如前述請求項中任一項之 A型肉毒桿菌毒素之該神經毒=中該神經毒素成份為 131808.doc