TW200522966A

TW200522966A - Dosing schedule for a novel anticancer agent

Info

Publication number: TW200522966A
Application number: TW093124706A
Authority: TW
Inventors: Samit Kumar Bhattacharya; Richard Damian Connell; James Dale Moyer; Jitesh Pranlal Jani; Dennis Alan Noe; Stefanus Johannes Steyn
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2003-08-18
Filing date: 2004-08-17
Publication date: 2005-07-16
Also published as: MXPA06001989A; CN1838959A; WO2005016347A1; NO20061252L; CO5670356A2; AR045268A1; KR20060037447A; KR20080014144A; SG135193A1; CA2536140A1; JP2007502807A; IL173127A0; US20050119288A1; RU2328287C2; AU2004264726A1; EP1658080A1; RU2006102125A; ZA200600517B; BRPI0413745A

Description

200522966 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明大體上係針對藥物投用之方法。更特定+之發明係關於包括erbB2受體抑制劑之抗癌劑之二明亦係關於投用蛋白受體酷胺酸激酶抑制劑之經改良之方法’ s亥等抑制劑適用於治療哺乳動物中反常之细胞生長 (如癌症）。本發明亦係關於適用於在治療喷乳動物（尤u 類)中反常之細胞生長中使用該等抑制劑來投藥之套租。、【先前技術】、吾人已知：細胞可藉由其舰之―部分轉化為致癌基因而變為癌性，其中該致癌基因係當活化時可導致惡性腫瘤細胞之形成的基因。許多致癌基因對作為能引起細胞轉化之異常路胺酸激酶的蛋白進行編碼。或者，正常原致癌取胺酸激酶之過度表現亦可造成增殖性病症，有時造成惡表型。受體酪胺酸激酶為—種橫跨細胞膜之酵素且具有用於姓合生長因子(如表皮生長因子)之細胞外結合功能域；透膜功能域；及細胞内部分’其充當一種激酶來麟酸化蛋白中特異之赂胺酸殘基且因此影響細胞增殖。此外，一些受體酿胺酸激酶係用於;日ΡΊ斗、# ^ , " 用於相同或其它蛋白激酶之基質，此為一種可調節激酶功能之過程。受體路胺酸激酶以族來分類，1 中-族為_族’其包括㈣則心如。吾人已知：諸: 之激酶在4如乳腺癌、胃腸癌(如結腸、直腸或胃〇白血病及印巢、支氣管或膜腺癌之常見人類癌症中 94773.doc 200522966 頻繁異常地表現。#已顯示：具有酷胺酸激酶活性之表皮生長因子受體（erbBl)在諸如腦、肺、鱗狀細胞、膀耽、月、乳腺、頭與頸、食管、婦科與甲狀腺腫瘤之諸多人類癌症中突變及/或過度表現。由&，吾人已認識到受體赂胺酸激酶抑制劑適用於作為哺乳動物癌細胞生長之選擇性抑制劑。反常之細胞生長可與erb受體之細胞表現相關聯。然而，吾人尚未充分瞭解抑制劑之投用方法可影響該抑制劑之效力。【發明内容】本發明大體上係針對抑制反常細胞生長之方法及套組。更特定言之，本發明係關於用於抗癌劑之經改良之劑量程序。本發明係關於一種在需要該治療之哺乳動物中治療 erbB2受體過度表現之方法，該方法包含： (a) 投予邊哺乳動物治療有效量之erbB2受體第一抑制劑；及 (b) 隨後在包含小於24小時之時間間隔後投予該喷乳動物自一至六個治療有效量之erbB2受體第二抑制劑。在本發明之一較佳實施例中，可在該方法之步驟（b)中投用一至四個治療有效量之該erbB2受體第二抑制劑。在一更佳實施例中’在該方法之步驟（b)中投用一至兩個治療有效量之該erbB2受體第二抑制劑。在另一實施例中，在該方法之步驟（b)中投用一個治療有效量之該erbB2受體第 94773.doc 200522966 二抑制劑。在本發明之另-貫施例中，該方法之步驟（b)中之時間間隔小於12小時。在-較佳實施例中，該方法之步驟⑻中之時間間隔小於6小時。在—更佳實施例中，該方法之牛驟⑻中之時間間隔小於3小時。在最佳實施例巾，該方：之步驟（b)中之時間間隔小於丨小時。步驟⑷及⑻中抑制劑之投用可包含經口、經頻、經舌下、經鼻内、經胃内、經十二指腸内、局部地、經眼内、經直腸或經陰道。在本發明之—實施例中，步驟⑷中之第—抑制劑與步驟 (b)中之第二抑制劑相同。在本方法之—實施例中，第一量可不同於P現後之-至六個量。在本發明之另一實施例中，步驟(a)中之抑制劑可有別於步驟⑻中之抑制劑。在—特定實施例中，步驟⑷中之抑制劑與步驟㈨中之抑制劑相同，視情況為相同之立體異構體或相同之鹽形式。在本治 :之々另-實施例中，步驟⑷中之第―抑制劑協同步驟（〔一之第二抑制劑。步驟⑷中之第一抑制劑、步驟⑻中之第二抑制劑或其兩者可為erbB2受體拮抗劑。 :本：明之—實施例中’該—Β2受體第一抑制劑之治右\ 2量不同於該erbB2受體第二抑制劑之-至六個治療刹：！。在本發明之一較佳實施例中，步驟⑷中之第-抑中:1广步驟⑻中之第二抑制劑。在另一較佳實施例乂驟（a)中之第一抑制劑協同步驟（…中之第二抑制 H在本發明之另一較佳實施例中’步驟（a)中之第一抑制 94773.doc 200522966 劑、步驟（b)中之裳一劑。 —中制劑或其兩者為受體拮抗在本發明之—如a _ 步驟（b)中之第只知例中’步驟⑷中之第-抑制劑、 -較佳實施例中，^獨立地選自小分子及單株抗體。在第二抑制劑均/驟⑷令之第—抑制劑及步驟⑻中之實施例中，步ί ^子或翠株抗體。在本發明之另一較佳制劑或其兩者對於h之弟一抑制劑、步驟⑻令之第二抑本發…療 =;受一^ 步驟（b)中之抑制南 7匕3 ·步驟⑷中之抑制劑、之活體内半衰期，、兩者具有介於半小時與八小時之間月之方法可包含投用一種抑制劑，直中牛驟⑴ _卜步驟⑻中之抑制劑或其兩者二;=(:)中之胞之抑制劑。 ’⑴於大體上毒害細 ^去可包合投用一種抑制劑、步驟（b)令之抑 -中乂驟⑷中之抑制裂之抑制劑。 Ί兩者有別於大體上抑制有絲分在本發明之一能接+

放㈣& 1 ‘"、7 ，投藥方式為控制釋放。該控flJ 放调配物可經口、經頰4制釋二指腸内、局部地、經—、經胃内、經十在本發明方法之_實=^直腸或經陰道投用。步驟⑻中之第二抑制劑L、’p步驟⑷中之第一抑制劑及 -較佳實施例巾，步；J 4自小分子及單株抗體。在劑均為小分子或單株抗體。二之制 5亥小刀子可小於4000道爾頓 94773.doc 200522966 (Dalton) 〇步驟（a)中之第一抑制劑、步驟（b)中之第二抑制劑或其兩者可對於erbB2受體係選擇性的。在本治療之另一實施例中，步驟（a)中之第一抑制劑、步驟（b)中之第二抑制劑或其兩者包含式1之化合物： OR3

或其醫藥上可接受之鹽、溶劑化物或前藥。在式1中，m為〇至3之整數； P為0至4之整數；各R1及R2係獨立地選自H&Cl_C6烷基。 R為e(CRlR2)t(4至員雜環），其中t為〇至5之整數，該雜環基視情況稠合至苯環或Cs-C8環烷基，上述…基之-(cr1r2v部分視情況包括碳-碳雙或三鍵，其中t為介於人之門之t數，且包括視情況前述所指之任何稠合環之上述R3基視情況經1至5個118基取代。 R4 為、㈣6Ri7)m«· (CRl6Rl7)rR9 ' (CR16r1 Vc.C-(CR-R>7)kRl3 , _(cr16r1 Vc=c_ (CR;R17)kR13^w^ 之奴原子’各k為1至3之整數’各鴣〇至5之整數，且各m 94773.doc -10- 200522966 為0至3之整數；各R5係獨立地選自下列各基··豳基、羥基、_nr】r2、

Cl-Q烷基、三氟甲基、CVC6烷氧基、三氟甲氧基、 -NI^CCCOR1、-C(0)NR6R7、_s〇2NR6r7、_nr6c(〇)nr7r^ ^NR6C(0)〇R7 ; 各R6、R6a及R7係獨立地選自下列各基·· H、Ci_C6烷基、-(〇&1112)1((^41()芳基）及_((^1义2)1(4至1〇員雜環），其中t為0至5之整數，雜環基之丨或2個環碳原子視情況由氧代（=〇)部分取代，上述…及反7基之烷基、芳基及雜環部分視情況由1至3個獨立地由下列各基中選出之取代基所取代：鹵基、氰基、硝基、_NR1R2、三氟甲基、三氟曱氧基、CVC6烧基、cvc6稀基、c2_c6块基、經基及^心烷氧基；或R6與R7、或R6a與R7,當連接至相同之氮原子時，可總括在一起形成4至1〇員雜環，該雜環可包括除了該R0、 R6a&R7連接於其上之氮以外的1至3個額外之雜部分，雜部分選自N、NO^)、〇及S，其限制條件為兩個〇原子、兩個S原子或一個〇與一個S原子彼此不直接連接；各R8係獨立地選自下列各基··氧代卜〇)、_基、氰基、墙基、二氟甲乳基、二氟甲基、疊氮基、經基、c^c6^氧基、 Ci-C1()烧基、c2_C6 稀基、C2-C6块基、_c(q)r6、 -c(0)0R6、-0C(0)r6、-NR6C(0)r7、_nr6s〇2nr7r1、 -nVchc^nWr7、-NR6C(0)0R7、-C(0)Nr6r7、nr6r7、 -NR6OR7、-S〇2NRv、-S(〇MCrC6 垸基）（其中 j 為〇至 2 之整 94773.doc -11 - 200522966 數）、-(CRJl^MCrC^o芳基）、_(cr1r、（4s 1〇員雜環）、。芳基）、_(CRlR2)qC(⑺ (CR R )t(4 M. 10 ^ ^ }g ) , -(CR1R2)t〇(CR1R2)q(C6-C]0 ^ 基）、-(CR至1〇員雜環卜4Cr1r2、s(〇)j (cWVmcvc^芳基）及 e(CRiR2)qS(〇)j(CRlR2)t(4s i〇員雜環）’其中j為0、1或2，q及t各自獨立地為〇至5之整數，上述R基之雜環。卩为之1或2個環碳原子視情況由氧代（=〇) 邛刀取代且上述义基之烷基、烯基、炔基、芳基及雜環部分視情況由1至3個獨立地由下列各基中選出之取代基所取代·鹵基、氰基、確基、三氟甲基、三氟甲氧基、疊氮基、_0R、-C(0)R6、_c(〇)〇R6、-〇C⑼R6、_nr6c(〇)r7、 _C(〇)nr6r7、_nr6r7、-nr6or7、Cl-C6烷基、（^6烯基 C2 C6 炔基、_(CR R2)t(C6-C1()芳基）及-(CR^R2)# 至 10 員雜環）’其中t為〇至5之整數； r9為非芳族之單環、稠合或橋連雙環或螺環，其中該環含有3至12個碳原子，其中〇至3個碳原子視情況由獨立地自N、〇、S(〇)j(其中J·為0至2之整數）及-NR1-選出之雜部分所置換’其限制條件為兩個〇原子、兩個s(〇)j部分、一個 Ο原子與一個S(〇)j部分、一個N原子與一個s原子、或一個 N原子與一個〇原子在該環中彼此不直接連接，且其中該 J衣之碳原子視情況由i或2個R8基所取代；各R係獨立地選自R8之定義中所提供之取代基，除r11 並非氧代（=0)以外； R124R6 ^ -OR6 > .〇C(〇)R^ . -0C(0)NR6R7 > .〇co2R6 > 94773.doc 200522966 -S(0)jR6、-S(0)jNR6R7、-NR6R7、-NR6C(0)R7、-NR6S02R7、 -NR6C(0)NR6aR7、-NR6S02NR6aR7、-NR6C02R7、CN、-C(〇)R6 或鹵基，其中j為〇至2之整數； R13為-NWR14 或-OR14 ; R14為 Η、R15、-CCCOR15、-S02R15、-C(0)NR15R7、-S02NR15R7 或-co2r15 ; R15 為 R18、-(CRfMCVCw芳基）、-(CRiR2)# 至 10 員雜環）’其中t為〇至5之整數，雜環基之1或2個環碳原子視情況由氧代（=〇)部分所取代，且上述R15基之芳基及雜環部分視情況由1至3個R8取代基所取代；各R16及R17係獨立地選自Η、cvc6烷基及-CH2OH，或將1116與汉17總括在一起成為-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-; 烷基，其中沒有結合至n或〇原子、或S(0)j 之各碳視情況由！^2所取代，其中j為〇至2之整數；且其中任何前述包含CH3(甲基）、CH2(亞曱基）或CH(次甲基）且不連接至鹵代（halogeno)、SO或S02基或至N、Ο或 S原子之取代基視情況由下列各基中選出之基團所取代： ^基' 鹵基、Κ4烷基、CVC4烷氧基及-NWR2。 ’、F力有所指，否則如本文所用之術語"鹵基"包括氟基氯基、漠基或碘基。較佳之鹵基為氟基及氣基。于、非另有所指，否則如本文所用之術語，，烷基，，包括具有直鍵_、環（白υα ^ ^ 、匕栝早或多環部分）或支鏈部分之飽和一價烴 $ ^對於包括環部分之該烷基而言，其應含有至少三個碳原子。 94773.doc 200522966 古：二另有所指，否則如本文所用之術語”環烷基，，包括具衣匕括單或多環）部分之飽和一價烴基。 :非另有所指’否則如本文所用之術語"烯基，，包括具有 > 一個碳碳雙鍵之如上所定義之烷基。除非另有所指，否則如本文又所用之術语絲，，包括具有個^-碳三鍵之如上所定義之烷基。 =另有所指，否則如本文所用之術語,,芳基，，包括自藉 ^多之自芳族烴衍生而來之有機基，諸如苯基和蔡 =另有所指，否則如本文所用之術語，，院氧基"包括· 〇-烷基，其中烷基為如上所定義。除非另有所指，在：目，丨L 4 、H本文所用之術語"4至1〇員雜環" :或多個雜原子之芳族及非芳族雜環基，各雜原、中選出，其中各雜環基在其環系統中具有4

至10個原子。非芳族雜sI ^ , #方知雜％基包括在其環系統中僅具有4個原子之基團’然而芳族雜3F I + 矢雜％基在其環系統中必須具有至少 5個原子。雜環基包括苯幷人一 σ 3展系、、先及經一或多個氧代部分所取代之環系統。4員 _ 貝雜缞基之實例為氮雜環丁烷基 (衍生自氮雜環丁烷）。5員雜四# — 貝雜％基之實例為噻唑基且10員雜 %基之貫例為喹啉基。非芳戶方無雜裱基之實例為吡咯啶基、四氫呋喃基、四氫噻吩其、m〆卜土四氫17比喃基、四氫噻喃基、六虱吡啶基、嗎啉代、硫嗎 ’…啉代（thiomorphonno)、噻噁烷基、六氫吡啫基、氮雜環 ^ 衣丁坑基、氧代環丁烷基、環硫烷基（thietanyl)、高六氫口比啶其、土虱雜裱庚燒基（oxepanyl)、 94773.doc 14 200522966 硫雜環庚烧基（thiepanyl)、氧氮呼基（oxazepinyl)、二氮坪基（diazepinyl)、硫氮呼基（thiazepinyl)、1，2,3,6-四氫。比啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2H_吡喃基、4H-吡喃基、二噁烷基、ι，3-二氧戊環基、吡唑琳基、二嗟烷基、二硫雜環戊烷基（dithiolanyl)、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基（imidazolidinyl)、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、3_氮雜雙環[4·1·0]庚烷基、3H_吲哚基及喹，井基。芳族雜環基團之貫例為吡啶基、咪唑基（imidaz〇lyl)、嘧啶基、呲唑基、噻唑基、吡畊基、四唑基、呋喃基（furyl)、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁唑基、異噻唑基、咄咯基、喹啉基、異喹啉基"引録、苯幷味嗤基、苯幷吱0南基、噌琳基、令坐基…弓卜井基、2,3-二氮雜萘基、噠P井基、三呼基、異巧哚基、嗓口定基…票呤基（purinyl)、σ惡二唾基…塞二唾基、呋咕基、苯幷°夫咕基、苯幷嗟吩基、苯幷嗟唾基、苯幷嗔唑基、啥唾淋基…奎喔琳基、二氮雜蔡基（卿恤加伽州、吱口比咬基（f_Pyridinyl)。自以上列出之化合物衍生而來之上迷基團可為若可能之C-連接和N-連接。例如，自吼洛 =而來之基團可為终卜離連接）和蛛3-基（C_連術語”Me”意謂甲基，，，E ⑼ 基。心5月乙基，且，，Ac”意謂乙醯除非另有所指，否貝丨丨士士、J々本文所用之詞組”醫荜之鹽（類广包括可存在於本發明之/…-条上了接又月之化合物中之酸基或鹼基鹽 94773.doc -15- 200522966 類。性質上為鹼性之本發明化合物能與各種無機及有機酸形成廣泛多種之鹽類。可用於製備該等鹼性化合物之醫藥上可接受之酸加成鹽類之該等酸為彼等形成非毒性酸加成鹽之酸，該等非毒性酸加成鹽亦即含有藥理上可接受陰離子之鹽類，如氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽 (isonicotinate)、醋酸鹽、乳酸鹽、水揚酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽（maleate)、龍膽酸鹽 (gentisinate)、延胡索酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖酸酸鹽、蔗糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽（ethanesulfonate)、苯續酸鹽、ρ-甲苯確酸鹽及雙經萘酸鹽[即，1，Γ-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽）]鹽類。除了以上所提及之酸外，包括如胺基之鹼性部分之本發明化合物可與各種胺基酸形成醫藥上可接受之鹽類。本發明之治療方法可包括投用erbB2受體抑制劑，其中 (a)中之抑制劑、（b)中之抑制劑或其兩者包含選自下列物質組成之群之化合物：吉非替尼（gefitinib)(IRESSA， ZD1839)、搓杜滋美（trastuzumab)、西妥昔單抗 (cetuximab)、埃羅替尼（erlotinib)、IDM-1、ABX-EGF、伽那替尼（canertinib)鹽酸鹽、EGF-P64k疫苗、EKB-569、 EMD-72000、GW-572016、MDX-210、ME-103、YMB-1001、2C4抗體、APC-8024、CP-724714、E75、Her-2/neu 疫苗、Herzyme、TAK-165、ADL-681、B-17、D-69491、 94773.doc -16- 200522966

Dab-720、EGFrvlll、EHT-102、FD-137、HER-1 疫苗、 HuMax-DGFr、ME-104、MR1_1、SC-100、搓杜滋美_ DM1、YMB-1005、AEE-788 (Novartis)、mTOR抑制劑，包括雷帕黴素（Rapamycin)(Rapamune，Siolimus，Wyeth)、 CCI-779 (Wyeth)、AP23573 (ARIAD)及RAD001 (Novartis)。在本發明之一實施例中，使用下列方法來測定以⑽：受體之過度表現：細胞遺傳測試、螢光原位雜交量測、免疫組織化學測試、流式細胞術測試、基於逆轉錄聚合酶鏈反應之測試或其任何組合。在本發明之一實施例中，該哺乳動物為人類且反常之細胞生長為癌。哺乳動物亦可為試驗性動物、家庭寵物、牲畜或任何其它哺乳動物。本發明之治療方法可進一步包含達成（勾中第一抑制劑、中第二抑制劑或其兩者之血漿含量介於10 ng/ml至4000 ng/ml之間。本發明之一實施例中，（a)中第一抑制劑及（b)中第二抑制劑各自獨立地選自下列各物組成之群·· (士H3_甲基-4-(吼啶-3-基氧基）_苯基）_(6_六氫。比啶·3_基乙炔基-喹唑啉_4_基）_胺； (+)-(3-甲基比啶-3_基氧基）_苯基、（…六氫。比啶基乙炔基-喹唑啉·4_基）·胺； ω-(3-甲基4气吡啶_3_基氧基）_苯基Η6•六氫吡啶_3_基乙炔基-喹唑啉·4_基）_胺； 2-甲氧基-Ν-(3-{4_(3-甲基_4_(吼啶_3_基氧基）·笨基胺 94773.doc 200522966 基）_喹ϋ坐啉_6_基卜丙·2·炔基）_乙醯胺； (士 )-(3-曱基-4-(6_甲基比啶-3_基氧基）·苯基）_(6•六氫^比 °定-3-基乙炔基-噎ϋ坐π林基）_胺； (+Μ3-曱基-心(6-甲基-吼啶-3_基氧基）_苯基）_(6_六氫味咬-3-基乙炔基-喹。垒琳基）_胺； (-)-(3-甲基-4-(6-甲基_，比啶_3_基氧基）_苯基）_(6_六氫^比唆-3-基乙炔基-喹。坐琳基）-胺； 2-甲氧基-Ν-(3-{4_(3-曱基-4-(2-甲基-吼啶-3-基氧基）_笨基胺基）-喧嗤啉-6-基卜丙-2-炔基）·乙醯胺； (3 -曱基-4-(2 -甲基- η比咬基氧基）-苯基）-(6-六氫π比。定_4_ 基乙炔基-唾唾琳-4-基）-胺； (3-曱基-‘（6-甲基比啶-3·基氧基）·苯基H6_六氫ιι比啶基乙快基-噎嗤琳-4-基）-胺； 2-甲氧基-N-(3-{4-(3-曱基-4-(6-曱基-吼咬-3-基氧基）_苯基胺基）·喹唑啉-6-基卜丙-2-炔基）-乙醯胺； 2-氟-Ν-(3-{4-(3·甲基_4_(6-甲基_吼啶_3·基氧基）_苯基胺基）-喧唾琳-6-基卜丙_2•炔基）·乙醯胺； Ε-2-曱氧基-Ν_(3_{4_(3-甲基·4_(6_曱基比啶_3_基氧基）_ 苯基胺基）-啥唾啉_6_基卜烯丙基）_乙醯胺； (3-甲基-4-(吧啶_3-基氧基）_苯基）_(6_六氫吨啶_4•基乙炔基-喹唑啉_4_基）_胺；甲氧基-N-d-H-G·曱基-4-(6-甲基-吼啶_3_基氧基）_苯基胺基），麵_6•基乙炔基}·環丙基）_乙醯胺； E-N-(3-{4♦氯_4·(卜甲基_π比咬_3_基氧基笨基胺基）_ 94773.doc 200522966 啥峻琳-6-基卜烯丙基）-2-甲氧基-乙酸胺； N-(3-{4-(3-氯-4-(6-曱基-吼啶-3·基氧基）-苯基胺基）-喹 ϋ坐1#- 6-基}-丙-2-快基）_乙醯胺； N-(3-{4-(3 -曱基-4-(6-曱基- η比啶-3-基氧基）-苯基胺基）- 喹唾淋-6-基}-丙-2_炔基）_乙龜胺； Ε-Ν-(3-{4-(3-氣-4-(6-甲基-吼啶-3-基氧基）-苯基胺基）-喹唑啉-6-基卜烯丙基）-乙醯胺； E-2-乙氧基-N-(3-{4-(3 -甲基-4-(6-甲基-吼啶-3-基氧基）-苯基胺基）-噎嗤琳-6-基}-烯丙基）_乙醯胺； 1-乙基-3-(3-{4-(3-甲基-4-(6-甲基-吼啶_3_基氧基）-苯基胺基）-喹唑琳-6-基卜丙-2-炔基）-脲；六氫吡畊-1-羧酸（3-{4-(3-甲基-4-(6-曱基-吡啶-3-基氧基）-苯基胺基）-啥峻琳-6-基卜丙-2-炔基）-醯胺； (土)-2·羥基甲基-吡咯啶-1-羧酸（3_{4_(3_曱基_4-(6-甲基-吼啶-3-基氧基）_苯基胺基）-喹唑琳_6—基卜丙-2—炔基）_醯胺； (+)-2·羥基甲基-π比咯啶-1-羧酸（3_{4_(3-甲基_4_(6_甲基_ σ比啶-3-基氧基）-苯基胺基）-喹唑琳_6_基卜丙-2-炔基）_醯胺； (-)-2-羥基甲基-吡咯啶-1-羧酸（3j4_(3-甲基_4-(6-甲基-σ比咬-3-基氧基）-苯基胺基）-喧唾琳_6-基}-丙-2-快基）-醯胺； 2 - —曱基胺基-Ν-(3-{4-(3 -甲基-4-(°比唆-3 -基氧基）-笨基月女基）-^圭σ坐。林-6 -基}-丙-2 -快基）·乙酿胺； 94773.doc -19- 200522966 E_N-(3-{4-(3-甲基-4-(6-甲基-吼啶_3_基氧基）-苯基胺基）_啥嗤琳基卜烯丙基甲烷磺醯胺；異噁唑-5-羧酸（3_μ·(3_甲基_4_(6_甲基_吡啶_3_基氧基）_ 苯基胺基）-喹唑啉-6_基卜丙_2_炔基）_醯胺； 1-(1，1-二曱基_3-{4-(3_甲基-4-(6-甲基_吡啶-3-基氧基）- 苯基胺基）·喹唑啉_6_基}-丙_2_炔基）_3_乙基_脲；治療方法包括抑制erbB2受體之單一藥劑之使用及兩種不同藥劑之使用。單一藥劑及兩種藥劑中之至少一種較佳為根據式1之藥劑。因此，在一實施例中，該抑制劑係選自下列各物組成之群：（土 H3-甲基_4气6_甲基_吡啶_3_基氧基）-苯基）-(6-六氫吡啶-3-基乙炔基·喹唑啉_4_基）_胺；及其商藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在另一實施例中’該抑制劑係選自下列各物組成之群：（弘甲基(卜甲基比σ疋-3-基氧基）-苯基）·（6-六氫π比咬_4_基乙炔基_u奎嗤啉-‘基）-胺；及其醫藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在又一實施例中，該抑制劑係選自下列各物組成之群：甲氧基-N-(3-{4-(3-甲基_4_(卜甲基·吡啶_3_基氧土）笨基胺基）-喹唑啉-6-基卜烯丙基）_乙醯胺；及其醫藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在亦另一實施例中，該抑制劑係選自下列各物組成之群·· E-N_(3_{4_(3-氣·4_ (6甲基^比啶_3_基氧基苯基胺基）_喹唑啉_6_基卜烯丙基）_ 甲虱基-乙醯胺；及其醫藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在又另一實施例中，該抑制劑係選自下列各物組成之群· H(3-{4-(3-氯-4-(6-甲基-吡啶基氧基）_苯基胺 94773.doc -20 - 200522966 基）-喹唑啉-6_基}-烯丙基）_乙醯胺；及其醫藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在本發明之一特定實施例中，該抑制劑係選自下列各物組成之群：力氣口比口井小緩酸（3_二 (3_甲基1(6-甲基吼啶I基氧基）_苯基胺基）_啥唑啉冬基l·丙-2-炔基）_醯胺；及其醫藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在本發明之另一特定實施例中，該抑制劑係選自下列各物組成之群：Ε_Ν_(3_μ_(3_甲基_‘（6-甲基比啶_ 3_基氧基）-苯基胺基）-喹唑啉_6_基卜烯丙基）_甲烷磺醯胺；及其醫藥上可接受之鹽類、前藥及溶劑化物。在本發明之另一悲樣中，（a)之第一抑制劑、（b)之第二抑制劑或其兩者均在醫藥上可接受之載劑上。在本發明之一實施例中，erbB2受體之過度表現造成反常之細胞生長。以第一及第二erbB2受體抑制劑來治療之反常之細胞生長可為癌症。該癌症可選自下列各病症組成之群·肢端黑色素瘤、光化性角化病、腺癌、腺樣囊性癌、腺瘤、腺肉瘤、腺鱗狀上皮癌、星形細胞腫瘤、巴氏腺癌（bartholin gland carcinoma)、基底細胞癌、支氣管腺癌、微血管癌、類癌瘤、癌、癌肉瘤、海綿狀癌 (cavernous carcinoma)、膽管癌、軟骨肉瘤、脈絡叢乳頭狀瘤、脈絡叢癌、透明細胞癌、囊腺瘤、内胚層竇狀瘤、子宮内膜增生、子宮内膜基質性肉瘤、類子宮内膜樣腺癌 (endometrioid adenocarcinoma)、室管膜癌、上皮樣癌 (epitheloid carcinoma)、尤因氏肉瘤、纖維板層癌 (fibrolamellar)、局部結節性增生、促胃液素瘤、生殖細胞 94773.doc 21 200522966 腫瘤、膠質母細胞瘤、胰升血糖素瘤、成血管細胞瘤、血管内皮瘤、血管瘤、肝腺瘤、肝腺瘤病、肝細胞癌、胰島腺瘤、上皮内贅瘤、上皮鱗狀細胞内贅瘤（interepithelial squamous cell neoplasia)、侵襲性鱗狀細胞癌、大細胞癌、平滑肌肉瘤、雀斑惡性黑色素癌、惡性黑色素瘤、惡性間皮腫瘤、髓母細胞瘤、室管膜瘤（medulloepithelioma)、黑色素瘤、腦膜癌（meningeal)、間皮癌（mesothelial)、轉移性癌、黏液表皮樣癌、成神經細胞瘤、神經上皮腺癌、結節性黑色素瘤、燕麥細胞癌、少突神經膠質細胞瘤 (oligodendroglial)、骨肉瘤、胰多肽、乳頭狀漿液性腺癌、松果體細胞腫瘤、垂體腫瘤、漿細胞瘤、假肉瘤 (pseudosarcoma)、肺母細胞瘤、腎臟細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、肉瘤、黏液性癌、小細胞癌、軟組織癌、生長抑素分泌腫瘤、鱗狀癌、鱗狀細胞癌、間皮下 (submesothelial)、淺表擴散性黑色素瘤、未分化癌、眼色素層黑色素瘤、疲狀癌、血管活性腸肽瘤、高分化癌、細支氣管肺泡細胞癌（BAC)及威氏腫瘤（Wilm’s tumor)。在一實施例中，反常之細胞生長為由下列各種病症組成之群選出之腫瘤：肺、乳腺、皮膚、胃、腸、食道、胰腺、肝、膀胱、頭、頸、腦、子宮頸及卵巢腫瘤。在一較佳實施例中，反常之細胞生長為由下列各種病症組成之群選出之腫瘤··乳腺、胃、胰腺及卵巢。在一更佳實施例中’反常之細胞生長為乳腺癌。在本發明之另一實施例中，erbB2受體抑制劑可對於 94773.doc -22- 200522966 聊受體係選擇性的。本發明之方法可進—步包含.⑷ 計算抑制劑對erbB2受體之結合親和力與抑制劑對㈣以體之第二結合親和力之比率及⑷使用該比率來評估選擇性。在-實施例中，該抑制劑對於咖2受體係至少兩倍選擇性的。在另—實施例中，該抑制劑對於erbB2受體係至少十倍選擇性的。在另-實施例中’本發明係關於—種治療具有反常細胞生長之主體之方法，其包含經口、經頰、經舌下、經魯内、經眼内、經胃内、經十二指勝内、局部地、經直腸: 經陰道在24小時期間内投予需要治療反常細胞生長之該主體：第一量之erbB2受體抑制劑、治療上協同之有效第二量之抑制劑、及視情況第三或第四量之抑制劑。該抑制劑為選擇性erbB2受體抑制劑。在本發明之另—實施例中，本發明包含—種治療反常細肊生長之套組，其包含至少兩個劑量之受體抑制劑，該等劑量適於經口、經頰、經舌下、經鼻内、經眼内、經胃内、經十二指腸内、局部地、經直腸或經陰道投予主體，及要求至少每日兩次投予具有該反常細胞生長之主體該等劑量之書面說明。書面說明有利地係在標簽或包裝附頁（package insert)上。在該套組之一實施例中，反常細胞生長為選自下列各病症組成之群之腫瘤··肺、乳腺、皮膚、胃、腸、食道、膀胱、頭、頸、腦、子宮頸及卵巢腫瘤。在本發明之另一實施例中，本發明包含一種在需要該治 94773.doc -23- 200522966 療之主體中治療腫瘤（該腫瘤包含erbB2受體）之方法，其包含藉由持續1至8小時輸注至該主體而投予該主體治療有效 S之erbB2受體抑制劑，由此使得該輸注比快速注射更加有效。輪注可為靜脈内、肌肉内、腹膜内或皮下。在一實施例中，該抑制劑可為根據式丨之化合物。在本發明之另-實施例中，本發明包含一種在需要該治療之主體中增強erbB2受體抑制劑效力之方法，其包含： (a)確定erbB2受體抑制劑之參考劑量強效力。該增強之效力為由劃分投藥，及（b)劃分劑量以增而產生之協同形式。

在一實施例中’將該劑量劃分為二至六次每日劑量。在另-實施例中’參考劑量具有副作用而劃分之劑量具有減少之副作用。相對於了於erbBl文體而言，該抑制劑可對於erbB2受體係至少約兩乂 jL選擇性的。在又另一實施例中’相對於erbB 1受體而& 口该抑制劑可對於erbB2受體係至少約十倍選擇性的。竹

對=力，方法可進一步包含下列步驟：⑷計算抑制 'et X體之結合親和力與抑制劑對於的則受體之二結合親和力之比率及⑷使用該比率來評估選擇性。在本發明之另一實施例中， ^ m 4, jLt 本I月包含一種增加erb] 文體抑制劑效力之方法，且瘆右1ϋ ^ "匕3杈予需要該治療之主體療有效里之抑制劑之每日劑景 *丄自、者、λ # 其中劃分每曰劑量以在· =確立比治療有效量之單—每曰劑量所確立之血漿里更低之血漿含量且該效力得以增加。在另一實施例中，本發明 S 種增強投予需要治療·： 94773.doc -24- 200522966 主體erbB2受體抑制劑之安全性之方法，其包含每日投予该主體二至六個治療有效量之該抑制劑。在另-實施例中’本發明包含__種增強投予需要治療之主體erbB2受體抑制劑之安全性之方法，其包含確定具有安全概況（safety profile)之抑制劑參考每曰劑量及劃分劑量以改良安全概況。在另一貫施例中，本發明包含一種治療主體中反常細胞生長之套組，#包含-個劑量之_Β2受體抑制劑，該劑量適於靜脈内、肌肉内、腹膜内或皮下輸注及持續丨至8小寸輸注β亥劑畺至该主體之書面說明。在該套組之一實施例中，反常之細胞生長可涉及選自下列各病症組成之群之腫瘤·肺、乳腺、纟膚、胃、腸、食道、膀It、騰腺、肝、頭、頸、腦、子宮頸及卵巢腫瘤。在另一實施例中，本發明包含預防性治療處於顯現腫瘤之風險之主體，其包含至少每日兩次投予該主體有量之選擇性erbB2受體抑制劑。在該預防性治療之一實施例中， "亥抑制劑可有別於一種抗體或其片段。在另一貫施例中，本發明包含一種增加erbB2受體抑制背J >文力之方法’其包含投予需要治療之患者治療有效量之才P制劑之每曰劑量，其中劃分該每曰劑量以在該患者中確立比治療有效量之單一每日劑量所確立之血漿含量更低之水έ i且该效力得以增加。在一實施例中，血漿含量表現為Cave °在另一實施例中，血漿含量表現為Cmax。該抑制劑可為選擇性erbB2受體抑制劑。在一實施例中，該抑 94773.doc -25- 200522966 制劑有別於一種抗體或其片段。在又另一實施例中，本發明係關於一種在需要該治療之主體中治療腫瘤（該腫瘤包含erbB2受體）之方法，其包含藉由持續1至8小時輸注至該主體而投予該主體治療有效量之 erbB2受體抑制劑，由此使得該輸注比快速注射更加有效。快速注射意謂一種相對快速之治療性輸注，其與注射部位之特性保持一致。該輸注可為經靜脈内、肌肉内、腹膜内或皮下。纟方法之主冑可為人類但任何哺乳動物係適 S的在實把例中，該腫瘤為一種癌症。在本發明之方法中該輸注之特徵為一種非均勻速率。例如’在輸注期間投用速率可增加或減少。該抑制劑可對於打印2受體係選擇性的。此外，本方法可進—步包含：計算抑制劑對於 erbB2受體之結合親和力與抑制劑對於erbB丨受體之第二結合親和力之比率’及使用該比率來評估選擇性。此項二中已知之其它方法亦適合於評估選擇性。在—實施例中，該抑制劑對於erbB2受體係至少兩倍選擇性的。杏施例中，該抑制劑對於erbB2受 ^ 又篮係至少十倍選擇性的。本發明之治療方法中之主體可為馮人類。該抑制劑可為一種才口抗劑。在一實施例中，該抑制 ^ M有別於一種抗體或其片詨。特定言之，該抑制劑可為小一止A人 j刀子。本發明之方法可進一步包含該抑制劑具有介於15 半衰期。 j日守與8小時之間之活體内本發明之一實施例係關於一躲由 /口療而要該治療之哺乳動物中erbB2受體之過度表現的方』乃凌，该方法包含： 94773.doc -26- 200522966 (a) 使用下列方法來測定erbB2受體之過度表現：細胞遺傳測試、螢光原位雜交、免疫組織化學測試、流式細胞術測試、逆轉錄聚合酶鏈反應或其組合； (b) 基於由步驟（a)所測定之erbB2受體過度表現而投予該哺乳動物治療有效量之erbB2受體第一抑制劑；及 (c) 基於由步驟（a)所測定ierbB2受體過度表現，隨後，在小於24小時之時間間隔後投予該哺乳動物一至六個治療有效量之erbB2受體第二抑制劑。 ”亥方法可包括-種抑制劑之輸注，其中該抑制劑有別於大體上毒害細胞之抑制劑。該方法亦可包括-種抑制劑之輸注，其巾該抑制劑㈣於大體上抑制有絲分裂之抑制锎注抑制劑之治療方法可進决速/主射之效力至少高出20% ::之：療方法可進-步包含每曰輸注兩或三次。 :之冶療方法可進一步包含達成抑於lOng/ml與40〇〇ng/mI之間。水各里" 除：另有所指’否則如本文所轉、緩解、抑制該術語所施用之病症。療’㈣逆病之—或多種症肤之^显. 飞疾病或该病症或疾或疾病之―或展：防止該病症或疾病或該病症 ”治療，，所界定之=另有所指，否則如剛剛前述力疋之如本文所用之術注Ί 為。 ° Μ療處理”係指治療行除非另有所指，否則如本文本文所用之術語”C‘，意謂在投 94773.doc 200522966 用藥劑後血液、血清或血漿常為根據式ke舰受體抑制劑^之最大濃度。該藥劑通除非另有所指，否則如★ 下面積，直為㈣、… 所用之術語"狐，，意謂曲線一為樂劑濃度隨時間積除非另有所妒，丕、里測0 代表在界定時n划„ 斤用之術語"Cave"或"Cave" 守間期間樂劑平均濃度之量測。除非另有所指，否g丨丨‘ 士 ^ 力學或藥劑隨時間之分佈。所用之術語"。K”意謂藥物動 -人及母日兩次投藥。除非另有所指，否則如本讲乂所用之術浯P·0·及，ι·ν·”分 μ明、、生口及經靜脈内之投藥途徑。庳Μ有所指’否則如本文所用之術語"叩”意謂藥效動干，一種對藥物功能性後果之分析。 ,Ύ t另有所指，否則如本文所用之術語，，選擇性，，意謂相 Y ;另種藥劑之效力，且其通常作為抑制常數（IC值， ' 士）IC50)比率而出現。或者，可量測選擇性而作為相、；另種文體（例如erbBl)而言之抑制劑對於erbB2受體之親和力、。可使用此項技術中已知之任何習知方式來量測選擇+生，甘^ t 具包括（但不限於）絕對效能、相對於另一藥劑之 >欠％相對於另一藥劑之效力及非erbB2受體效應之存在或範圍。除非另有所指，否則如本文所用之術語，，抑制ex*bB2受體” 思、明競*爭性或非競爭性阻斷活化劑（其為一種促效劑）之結 94773.doc -28- 200522966 & 、、" 口之/舌化劑、減少活化劑之親和力常數、增加 !化，之分離率、離解多聚體受體(multimede receptor)、聚集單體受體或降低受體活化之細胞内代謝後果。示非另有所指，否則如本文所用之術語"協同作用，，或丨’協同之” | 士田丁总』。明、種抑制劑之組合效應要強於各抑制劑單獨使用時之效應總和。除非另有所指，否則如本文所用之術語"促效劑"意謂結合至生理學上Φ鍊n > & _， ^ ° 體且杈擬内生調節化合物之效應之藥物。除，另有所指’否則如本文所用之術語，，拮抗劑，，意謂結合至^體=不模擬而干擾内生促效劑之結合的藥物。該等藥〆_物自身無内在調節活性然而藉由抑制促效劑作用來產生效應，其在術語上稱為”拮抗劑”。除非另有所指，否則如本文所用之術語，，副作用”意謂有別於所要效應的藥物作用或效應。立除非另有所指，否則如本文所用之術語”減少之副作用，，渭減^有別於所要效應的藥物作用或效應。除非另有所指，否則如本文所用之術語"抑制劑"意謂一種中止酵素或受體之活性的化學物質。 —性質上為酸性之式1之彼等化合物能夠形成具有各種醫藥上可接受陽離子之驗鹽。該等鹽之實例包括驗金屬或鹼土金屬鹽及(特定言之)本發明之化合物之鈣、鎂、鈉及鉀本發明之化合物内含有之某些官能基可由生物電子等排土團所取代，该等官能基亦即具有與親本基團相類似之空 94773.doc 200522966 間或電子要求然而顯性之基團。適合之實二或改良之物理化學或其它特貫例係热悉此項技術者熟知，且包括 (但不限於）Patini等人，Ch Lhem· Rev，1996，96，3147-3176及文所引用之參照案中所描述的部分。，1之化合物可具有不對稱中心且因此以不同對映異構、十映”構之形式存在。本發明係關於本發明之化合物 :所有光學異構體及立體異構體及其混合物之使用，且係 :於所有醫藥組合物及可採用或含有該等醫藥組合物之治〜、方法。式1之化合物亦可以互變異構體存在。本發明係關於所有該等互變異構體及其混合物之使用。本發明亦包括同位素標記化合物及其醫藥上可接受之鹽類、溶劑化物及前藥之使用，其及彼等於U中所描述之 =合物相同1而實際上—或多個原子可由具有不同於通爷在自然中可發現之暂旦兄之原子貝里及質量數之原子質量或質量數之原子置換。可倂人本發明之化合物中之同位素之實例包括同位素氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯，分別為如2h、 Ή 、14c、15ν ο ο 35 一 S、1汴及36C1。含有前述同：素及/或其它原子之其它同位素之本發明之化合物、其W藥及該等化合物或該等前藥之醫藥上可接受之鹽類均在本發明之範，内。本發明之某些同位素標記化合：適用於藥物及/或基質組織分佈檢定中，例如彼等其中倂入有如3H及14c之放射性同位素之同位素標記化合物。氚標記之（即3H)及碳-14(即14C)同位素係尤其較佳的，此係因為其易於製備及谓測。此外’以如氖（即2H)之較重同位素來取 94773.doc -30- 200522966 代可提供某些治療你Μ炎點，此係由於其較〜如增加之活體内主吞代I疋性’ 半农期或降低之劑量要炎況時可為鲂社要衣且因此在一些情 ”、、車乂佺的。通常可藉由進及製備中揭示之方案及鞋… 下私序中及/或貫例 # r g由以非同位素標記試劑取代易於多又付之同位素標記試化合物及其前藥。來I備本發明之式1之同位素標記物有游離胺基、醯胺基、經基或缓基之式1之化合物轉化為前藥。前藥包括胺基酸殘基或兩或兩個以上 ( 一或四個）胺基酸殘基之多肽鏈通過醯胺或酯鍵共價地結合至式1化合物之游離胺基、經基或羧基上之化 t物。胺基酸殘基包括（但不限於）通常由三個字母符號指疋之2〇個在自然中存在之胺基酸m括❻基脯胺酸、 ?工基離私gt、鎖鏈離胺素（demGsine)、異鎖鏈離胺素 (1S〇dem〇Sine)、3·甲基組胺酸、戊胺酸（norvalin)、/5-丙胺酸、γ-胺基丁酸、瓜胺酸、高半胱胺酸、高絲胺酸、鳥胺酸及甲硫胺酸砜。亦涵蓋了額外類型之前藥。例如，可由游離羧基衍生出醯胺或烷基酯。如Advanced以吨 Delivery neviews，1996, 19, 1 15中概括，可由包括（但不限於）半琥珀酸酯、磷酸酯、二甲基胺基醋酸酯及磷醯氧基甲乳基 Ik 基化合物（phosphoryloxymethyloxycarbonyls)中之基團衍生出游離羥基。亦包括含有羥基及胺基之氨基曱酸酉旨前藥，如同亦包括羥基之碳酸酯前藥、羥基之磺酸酯及硫酸酿一樣。亦涵蓋：羥基衍生化成為（醯氧基）曱基及（醯氧基）乙基酯，其中醯基可為視情況由包括（但不限於）醚、 94773.doc 200522966 胺及羧酸官能基之基團取代的烷基酯，或其中醯基為如上所述之胺基酸酯。在j· Med· Chem· 1996，39，10中描述了該類型之前藥。亦可甴游離胺衍生出醯胺、磺醯胺或磷醯胺。所有之該等前藥部分可倂入包括（但不限於）醚、胺及羧酸官能基之基團。【實施方式】本發明之方法可包含投用一種抑制劑，其中（幻中抑制劑、（b)中抑制劑或其兩者有別於大體上毒害細胞之抑制劑。可藉由任何於此項技術中常見之手段來測定細胞毒害 ί*生包括（但不限於）量測細胞〉周亡及如呼吸作用及基質利用之代謝功能。大體上之細胞毒害性意謂··熟悉此項技術者將認識到··在對應於本發明中之藥劑使用之條件及濃度下，在投予測試動物該藥劑時或在活體外檢定中使用該藥劑時大體上發現細胞毒害性。本方法可包含投用一種抑制劑，其中（a)中抑制劑、（b) t抑制劑或其兩者有別於大體上抑制有絲分裂之抑制劑。可藉由任何於此項技術中常見之手段來測定有絲分裂，包括（但不限於）量測有絲分裂指數、DNA内含量及細胞數目。大體上抑制有絲分裂之抑制劑意謂熟悉此項技術者將認識到：在對應於本發明中之藥劑使用之條件及濃度下，投予測試動物該藥劑或在活體外檢定中使用該藥劑時發現減少之有絲分裂。在本發明之方法中，藉由測試化合物相對於對照物進行磷酸化抑制作用之量可測定所使用之活體外化合物之活 94773.doc 200522966 性。重組erbB2(胺基酸殘基675-1255)及EGFR(胺基酸殘基 668-1211)細胞内之功能域在桿狀病毒感染之Sf9細胞中表現作為GST融合蛋白且藉由親合層析法經麩胱甘肽瓊脂糖凝勝珠純化。如 J.D. Moyer，E.G. Barbacci，Κ·Κ· Iwata，L· Arnold, B. Boman, A. Cunningham，等人，Induction of apoptosis and cell cycle arrest by CP-358, 774, an inhibitor of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase, Cancer Res· 57 (1997) 4838-4848 中所述來量測聚（Glu、Tyr)之磷

酸化作用，除激酶反應在含有125 mM氣化納、10 mM氯化鎮、0· 1 mM原飢酸納及1 mM ATP之50 μΐ之50 mM HEPES、pH值7·4下進行之外。可使用如下檢定來量測完整細胞中之酪胺酸磷酸化作用。將經人類 EGFR(B.D. Cohen，D.R. Lowy，J.T· Schiller， transformation-specific interaction of the bovine papillomavirus E5 oncoprotein with the platelet-derived growth factor receptor

transmembrane domain and the epidermal growth factor receptor cytoplasmic domain，J. Virol·，67 (1993) 5303-5311)或具有 EGFR 細胞外功能域及erbB2細胞内功能域之丧合型受體轉染之 NIH3T3細胞播種於96孔組織培養盤DMEM中（F· Fazioli， U.H. Kim? S.G. Rhee, C.J. Molloy? O. Segatto, P.P. DiFiore, The erbB-2 mitogenic signaling pathway: tyrosine phosphorylation of phospholipase C-gamma and GTPase- activating protein does not correlate with erbB-2 mitogenic potency，Mol. Cell. Biol·，11 (1991)2040-2048)。 94773.doc -33- 200522966 塗覆24小時後添加DMSO(或對照組中DMSO媒劑）中之抑制劑且在37°C下與細胞一起培育2小時。室溫下以人類重組EGF(最終濃度50 ng/ml)刺激細胞15分鐘。吸出培養基且以100 μΐ含有200 μΜ Na3V04之冷的1: 1之乙醇及丙酮固定細胞30分鐘。以洗滌缓衝劑（PBS中之0.5% Tween-20)洗滌培養盤且添加100 μΐ阻斷緩衝劑（PBS中3%牛血清白蛋白 + 200 μΜ新鮮原釩酸鈉）。室溫下進一步培育培養盤1小時且以洗滌緩衝劑洗滌兩次。將經辣根過氧化物酶標記之抗磷酸酪胺酸抗體（ΡΥ54)添加至孔中且在室溫下培育1小時。藉由抽吸移除抗體且以洗滌緩衝劑洗滌培養盤4次。藉由每孔添加ΤΜΒ微孔過氧化物酶基質（Kirkegaard and Perry，Gaithersburg，MD)50 μΐ來顯影比色分析訊號且藉由每孔添加0.09 Μ硫酸50 μΐ而中止顯影。借助於量測450 nm 處之吸收率估計磷酸酪胺酸。將不含以EGF刺激之化合物之對照孔訊號扣除來自不含EGF孔之背景訊號後定義為 100%對照。借助於具有抗填酸赂胺酸之西方轉潰分析來檢查來自該等EGF刺激細胞之萃取物表明多數蛋白質磷酸酪胺酸分別代表了自磷酸化之EGFR或EGFR/erbB2嵌合體，然而其它蛋白基質亦顯示出增加之赂胺酸填酸化作用。在各轉染細胞中，EGF通常增加總磷酸酪胺酸含量大約4倍。ICm值表示減少訊號至50%對照之所要化合物之濃度且由100倍濃度範圍之間之滴定以圖表形式來測定其值。在西方轉潰分析之後，藉由免疫沈澱反應對erbB磷酸化進行分析。如所指示以化合物或活化配位子處理SKBr3 94773.doc -34- 200522966 細胞。吸出培養基且添加1 ml/75 cm2燒瓶以冰冷卻之免疫沈澱反應溶解缓衝劑（新近添加100 μΜ PMSF及1 Complete™ 蛋白酶抑制劑鍵劑（Roche Diagnostics，Indianapolis，每 50 ml 緩衝劑）之 1.0% TX100、10 mM Tris、5 mM EDTA、50 mM NaCl、30 mM原釩酸鈉）。經 100 μΐ溶解產物執行免疫沈殿反應，使用Santa Cruz SC-120，2 pg/100 μΐ溶解產物對EGFr進行免疫沈澱反應；使用致癌基因 OP15，1 pg/lOO μΐ溶解產物對erbB2進行免疫沈澱反應且使用 Santa Cruz SC-285, 2 pg/100 μΐ溶解產物對 erbB3進行免疫沈澱反應。在4°C下隔夜及30 μΐ蛋白A小球存在時進行所有之免疫沈澱反應且同時搖動。4°C下以14,000 rpm離心過濾具有經固定之蛋白質之小球10秒。吸出上清液且以含有0.1% Tween 20之PBS洗滌丸粒3次。接著在含有DTT之 40 μΐ Laemmli缓衝劑中重新懸浮該等樣品且煮沸4分鐘。接著將該等樣品裝載於4-12% PAGE上。使用MES缓衝劑將其在150 V下電泳1小時。在10%甲醇存在下將凝膠轉移至 PVDF。使用阻斷缓衝劑（Roche Diagnostics，Indianapolis，IN) 阻斷該膜且使用與辣根過氧化物酶共軛之抗PY54抗體來偵測磷酸酪胺酸並藉由根據製造說明書之增強之化學發光 (ECL™; Amersham, Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ; LumiGLO™; Cell Signaling)來顯影。以 Lumi_imagerTM (Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)對該訊號進行量化。如下檢定亦可用於c-erbB2激酶以測定化合物作為c-erbB2抑制劑時之效能及選擇性。如下檢定類似於前述 94773.doc -35- 200522966

Schranq 等人 Anal· Biochem· 2 11，1993，p233-239 中之檢定。藉由37°C下隔夜以每孔100 mL之於PBS(磷酸鹽緩衝生理食鹽水）中之 0·25 mg/mL 聚（Glu，Tyr) 4:1(PGT) (Sigma Chemical Co.，St· Louis，MO)來培育對 Nunc MaxiSorp 96孑L 培養盤進行塗覆。借助於抽吸移除過量之PGT且以洗滌缓衝劑（PBS中之0.1% Tween 20)洗滌培養盤3次。在50 mL含有125 mM氯化鈉、1〇 mM氯化鎂、0.1 mM原釩酸鈉、1 mM ATP、0.48 mg/mL (24 ng/孔）c-erbB2細胞内功能域之 50 mM HEPES(pH值7.5)中執行激酶反應。erbB2酪胺酸激酶（胺基酸674-1255)之細胞内功能域在桿狀病毒中表現為 GST融合蛋白且藉由結合至及由麩胱甘肽塗覆之小球上溶離而被純化。添加DMSO(二甲亞砜）中之化合物而產生 2.5%之最終DMSO濃度。藉由添加ATP(三磷酸腺苷）引發磷酸化作用且在室溫下繼續進行6分鐘並持續搖動。借助於吸出反應混合物中止激酶反應且隨後以洗滌緩衝劑洗滌 (如上）。以每孔50 mL在阻斷緩衝劑（PBS中之3% BSA及 0.05% Tween 20)中稀釋至 0.2 mg/mL 之 HRP-共輊之 PY54(Oncogene Science Inc. Uniondale，NY)抗磷酸酪胺酸抗體培育25分鐘來對填酸化之PGT進行量測。借助於抽吸移除抗體且以洗滌緩衝劑洗滌培養盤4次。藉由每孔添加 50 mL TMB微孔過氧化物酶基質（Kirkegaard and Perry， Gaithersburg，MD)顯影比色分析訊號且藉由每孔添加50 mL 之0·09 Μ硫酸中止顯影。借助於量測450 nm處之吸收率來估計磷酸酪胺酸。在不含PGT基質之孔中大體上無背景之 94773.doc -36- 200522966 對照組訊號通常為0.6-1.2吸光率單位且及培育時間10分鐘成比例。藉由相對於不含抑制劑之孔之訊號減少來識別抑制劑且測定對應於用於50%抑制之所要化合物濃度之ICw 值。對應於式1之本文所例示之化合物具有對於erbB2激酶之<10 mM之IC5〇值。藉由此項技術已知之任何手段IC50值可用於測定選擇性。例如，可採用erbB 1受體與erbB2受體之IC5〇值之比率（IC5〇 erbBl+IC5〇 erbB2)。有利地，該比率超過2。可藉由相對於對照之測試化合物導致腫瘤生長被抑制之量來測定本發明之方法中所用該等化合物活體内抗腫瘤之活性。根據 Corbett Τ·Η·等人，"Tumor Induction Relationships in Development of Transplantable Cancers of the Colon in Mice for Chemotherapy Assays, with a Note on Carcinogen Structure", Cancer Res.? 35, 2434-2439 (1975) 及 Corbett T.H.等人，nA Mouse Colon-tumor Model for Experimental Therapy’’，Cancer Chemother· Rep. (Part 2)"， 5, 169-186 (1975)(對其做稍微修改）可對各種化合物之抑制腫瘤生長之效應進行量測。藉由皮下（sc)注射懸浮於0.1 ml RPMI 1640培養基中之1-5百萬經對數生長期培養之腫瘤細胞可在小鼠之左肋腹部誘導出腫瘤。在腫瘤充分生長直至可觸及後（尺寸〜100-150 mm3/直徑5-6 mm)，藉由經靜脈内 (iv)或經口（p〇)路徑每日1次或兩次投用測試化合物（在5單硬脂酸甘油酯或0.5%曱基纖維素中10至15 mg/ml濃度下調配）來處理測試動物（無胸腺雌性小鼠）歷經7至29日。為了 94773.doc -37- 200522966 測定抗腫瘤之效應，根據Geran，R.I.等人”Pr〇t〇c〇is f〇r Screening Chemical Agents and Natural Products Against

Animal Tumors and Other Biological Systems"，第三版， Cancer Chemother. Rep·，3, 1-104 (1972)之方法，使用遊標卡尺以毫米計來量測腫瘤之兩條直徑且使用下式計算腫瘤之尺寸（mm3)·•腫瘤尺寸（mm3)=(wxw)/2xL (L=長度且w= 寬度）。根據下式：抑制生長率（％>=[1〇〇一 {(處理組生長率 %/對照組生長率％)x100}]，將結果表達為抑制率％。腫瘤植入之肋腹部位為多種化學治療藥劑提供了可重現之劑量 /反應效應，且在用於分析腫瘤生長率時該量測方法（腫瘤直徑）為可靠之方法。由任何能將化合物傳遞至作用部位之方法實現他2 制劑之投用。該等方法包括經σ路徑、十二指腸内㈣非經腸注射（包括靜脈内、纟下、肌肉内、企管内或注）、局部地及經直腸投藥。

所投用之活性化合物之量將視被處理之主體、病症或: 病之嚴重度、投藥之速率、化合物之配置及主治醫師之: 斷力而定。然而，有效杳丨|盔立啕双Μ里為母日母公斤體重在0 001 2〇〇mg範圍内，較佳為1至35mg/kg/日。對於7〇公斤重_ 人而S ’ ^劑量將相當於G梅7g/日，較佳狀2至25 曰。在某些情況下，低於箭+、从 _ 史…… 圍下限之劑量含量可，任何有害之副作用。使用更大劑置而不㈣本發明之峨2抑制劑可作為唯一治療來施用或可涉j 94773.doc -38- 200522966 一或多個其它抗腫瘤物質，例如彼等選自下列各物之物貝·例如，有絲分裂抑制劑，如長春花鹼；烷化劑，如順鉑、卡波鉑（carboplatin)及環磷醯胺；抗代謝物，如5_氟尿嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷及羥基脲，或例如，一種揭示於歐洲專利申請案第239362號中之較佳之抗代謝物，如， N-(5-[N-(3,4-二氫-2-甲基_4_氧代喹唑啉基甲基）-Ν_甲基胺基]-2-噻吩甲醯）_L_麵胺酸；生長因子抑制劑；細胞週期抑制劑；插入式抗生素，如阿黴素（adriamycin)及博萊黴素（ble〇mycin);酵素，如干擾素；及抗激素，如抗雌激素，諸如NolvadexTM (它莫西芬（tam〇xifen))或，如抗雄激素，諸如CaS〇dexTM(4，·氰基_3-(4_氟代苯基磺醯基）_2_羥基-2·甲基-3’-(三氟甲基）丙醯替苯胺）。藉由將治療之各個組伤同時、依序或單獨劑量可達成該結合治療。，醫藥組合物可（例如）以適於經口投藥之形式，如錠劑、膠囊丸劑、散劑、持續釋放調配物、溶液、懸浮液；非經腸注射之形式，如消毒溶液、懸浮液或乳液；局部投藥形式，如軟膏劑（〇intment)或乳膏劑（cream)或經直腸投某如权劑。醫藥組合物可為適於單一投用精確劑量之單位剑里形式。醫藥組合物將包括習知之醫藥載劑或賦形劑及作為活性成份之根據本發明之化合物。此外，其可包括其它醫學或藥學上之藥劑、載劑、佐劑等。實例之非經腸投藥形式包括活性化合物於消毒水溶液中之溶液或懸浮液，例如，丙二醇或右旋糖水溶液。必要時可對該等劑型進行適當地緩衝。、 94773.doc 200522966 適合之醫藥載劑包括惰性稀釋劑或填充劑、水及各種有機溶劑。必要時該等醫藥組合物含有額外之成份，如調味劑、黏合劑、賦形劑及其類似物。因此對於經口投藥而 & ’含有各種賦形劑（如檸檬酸）之錠劑可與如澱粉、褐藻酉文及某二錯合石夕酸鹽之各種崩解劑且與如蔗糖、凝膠及阿拉伯膠之黏合劑一起使用。此外，如硬脂酸鎂、硫酸月桂酯鈉及滑石之潤滑劑常用於錠劑用途。相似類型之固體組合物亦可用於軟及硬之凝膠填充膠囊中。因此較佳之物質包括乳糖（lactose)或乳糖（miik sugar)及高分子量之聚乙二醇。當對於經口投藥需要含水懸浮液或酒劑時，本文之活性化合物可組合各種甜味劑或調味劑、色素或染料及（若須要）乳化劑或懸浮劑，與如水、乙醇、丙二醇、丙三醇或其組合之稀釋劑一起。對熟悉此項技術者而言，用特定量之活性化合物來製備各種醫藥組合物之方法係已知的，或將變得顯而易見。例如’參閱 Remington、Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easter，Pa·，第 15版（1975)。如下所提供之實例及製備進一步說明及例示了本分明之方法。應瞭解本分明之範疇不以任何方式受到下列實例及製備之範疇之限制。除非另有所指，否則下列實例所用”測試化合物”為選擇性erbB2抑制劑，E-2-甲氧基-Ν·(3_{4-(3_甲基_4_(6_甲基_ °比°疋-3-基氧基）_苯基胺基）_喹唑啉·6_基卜烯丙基）_乙醯胺0 94773.doc -40- 200522966 實例1 FRE模型：曝露持續時間對於測試化合物之抗腫瘤效力之效應臨床前調查之目的係測定測試化合物之cmax或曲線下面積（AUC)對於抗腫瘤效力是否為至關重要的。額外之目標為在FRE/erbB2腫瘤模型中確立藥物動力學/藥效學（pK/pD) 之關係。FRE/erbB2為工程鼠類腫瘤模型，其過度表現具有透膜突變之人類erbB2。測定在無胸腺小鼠中測試化合物曝露於FRE/erbB2腫瘤生長之持續時間之作用。採用尾部靜脈輸注或經口投用測試化合物。在每日輸注過程中維持採用尾部靜脈輸注而計异出之固定之Cmax(1200 ng/mi)濃度而曝露持續期及由此 AUC係纟交化的。表1顯示對治療動物之治療及血漿濃度。以550 μΙ/hr之速度將115 mg/ml測試化合物溶液靜脈傾斜輸注（ramped infusions)歷時2分鐘，之後以5〇 μΐ/ι^進行 15分鐘或4小時之每曰輸注。（投射係基於測試化合物之 CI)°以媒劑、測試化合物經口或測試化合物經靜脈内來處理承受FRE/erbB2腫瘤（尺寸為〜_職3)之無胸腺雖性小鼠。以定期間隔獲取體重改變及腫瘤量測值(第i、3、5 及7曰）。此項研究進行歷時7日。在研究終止時㈣血t 及腫瘤樣品用以PK及PD分折。斟胆Ώ 77 ^對照及測試化合物動物中抗腫瘤效力、腫瘤體積、體重改變、测試化合物之血^ 度及ρ-e備(e趣受體之麟酸化形式）抑制之結果如表= 示。吓 94773.doc -41 - 200522966 表1 治療血漿濃度 (ng/ml;均值士SE) p-erbB2 降低％腫瘤體積（mm3;均值士 SE) 第1曰第7曰 % GI 媒劑，10ml/kgPO， QD 00 00 110 ± 18(23) 801 士 92 (24) 00 測試化合物，25 mg/kg PO，QD 1460 士 170 (0.5 h) 34 113 土 18 (21) 531 ±101 (22) 54* 媒劑，218 μ!7曰 IV，QD 00 00 107 土 22 (21) 1142 ±335 (21) 00 測試化合物，1.4 mg/kg IV5 QD; 15 分鐘/曰 448 士 141 48 121 土 24(23) 749 士 178(24) 34 測試化合物，10.7 mg/kg IV; 4 小時/ 曰 473±141 53 117 士 23(22) 273 士 81 (22) 76 括號中之值為平均體重（g) ;*與媒劑組（IV )相對照 PO，QD研究 N=6 ; IV，QD研究 N=4 %GI=生長抑制％在每日經口投用測試化合物治療之動物中達成大約54% 腫瘤生長抑制。在第7日投藥後0.5 hr血漿濃度為1460 ng/ml。測試化合物之治療為安全的且不會引起任何體重損失或死亡。每曰輸注測試化合物15分鐘造成大約34%生長抑制。相反，4小時/日之等量輸注造成大體上較高之腫瘤生長抑制 (76%)。其喻示在該模型中高於臨限值血漿濃度之覆蓋度之持續時間（duration of coverage)在測試化合物之總體抗腫瘤效力中具有顯著價值。基於該等結果，亦可得出結論：在血漿濃度約為500 ng/ml時之歷經4小時/曰之覆蓋度 94773.doc -42- 200522966 (AUC)足以造成大體上FRE/erbB2腫瘤生長抑制。曝露之持續時間或AUC(覆蓋度）顯著地影響效力：每曰Cmax單獨不能解釋該模型中之效力。在FRE/erbB2腫瘤模型中血漿濃度為〜5〇〇 ng/ml時之覆蓋度持續時間（〜4小時/日）具有優於較短之覆蓋度持續時間 (〜15分鐘/日）之優點。每曰一次經口投用25 mg/kg測試化合物之抗腫瘤效力對於減慢nu/nu小鼠中之FRE腫瘤之體積增長係有效的，其在圖1之條形圖格式上有所顯示。該圖顯示在治療第7日治療小鼠之FRE腫瘤體積約為對照小鼠之一半。圖2以條形圖格式顯示：每日經靜脈投用1〇測試化合物4小時歷時7日之抗腫瘤效力在絕對基礎上及當與每曰輸注約1.4 mg/kg抑制劑歷時約15分鐘/日或輸注媒劑對照時係十分有效的。約1〇 mg/kg之測試化合物減慢腫瘤體積增長為小於媒劑對照組之24%。相反，快速輸注約 mg/kg測試化合物減慢腫瘤體積增長為小於媒劑對照組之 66% 〇實例2 SK-OV-3模型··曝露持續時間對於測試化合物之抗廬瘤效力之效應為了力是否巢腺癌 h)濃度測定測試化合物覆蓋度之持續時間對於其抗腫瘤效至關重要而進行臨床前調查。另—目標係在人類印、SK-OV-3腫瘤模型中確立最小有人 Wmax 及 Caven_4 94773.doc -43- 200522966 作為背f，在實例！中測試化合物（p〇, QD)顯示出有效地對抗FRE erbB2腫瘤、經靜脈投用測試化合物同樣有效地對抗FRE erbB2腫瘤。該等發現證明：在_ erbB2腫瘤拉型中維持〜500 ng/ml_試化合物之血濃度歷時4小時/日優於較短之覆蓋度持續時間（〜15分鐘/日），此優點在於具有相當的p-erbB2降低（48-53%)。藥物動力、藥效及效力資料均顯示於表1中。基於初期研究中所量測之曝露，具有〜2小時覆蓋度之測试化合物之〜1200 ng/mliCmax 或〜985 ng· hr/mi 之 AUC〇.2 h對於〜50% FRE erbB2腫瘤生長抑制係至關重要的。該調查擴展至過度表現erbB2之人類異種移植模型、人類卵巢腺癌模型SK-OV-3。由 ATCC(R〇ckville，MD)獲得之 SK-OV-3 細胞在含有 1〇% 胎牛血清及pen/strepiMcC〇y，s培養基中生長。收穫按指數規律生長之細胞且在雌性無胸腺小鼠中接種Sc(5百萬細胞/動物）。如表2所示將承受SK-OV-3腫瘤（尺寸為〜100 mm3)之無胸腺小鼠隨機地分為7組。在第1、3、6、、13 及1 8日獲得腫瘤量測值及體重改變。以下式來計算腫瘤體積：腫瘤體積（mm3) = (WxW)/2xL (L=長度且寬度）。在第18日投藥後之0·5、！、2、4及8小時分離血樣品（〜5〇 μ1) 用於ΡΚ分析。在第is日投藥後0.5小時分離腫瘤用於進行採用ELISA之PD分析。對照組及以測試化合物治療動物之組中p-erbB2之降低、腫瘤體積及體重改變均顯示於如下表2中。 94773.doc -44 - 200522966 表2 治療 p-erbB2 腫瘤體積（mm3;均值土 SE) 生長抑降低％第1曰第18曰制％媒劑，10ml/kgPO，BID 00 99 + 15(24) 398 + 53 (25) 00 測試化合物，PO, QD 50 mg/kg (總曰均劑量=50 mg/kg) 14 98 ±14(23) 390 ±38 (24) 2 測試化合物，PO，QD 100 mg/kg (總曰均劑量=100 mg/kg) 75 97 土 14 (23) 306 土 36 (25) 23 測試化合物，PO, QD 200 mg/kg (總曰均劑量=200 mg/kg) 90 98 土 14 (23) 254 ±39 (24) 36 測試化合物，PO, BID 25 mg/kg (總曰均劑量=50 mg/kg) 20 93 + 12(24) 281 土 42 (26) 29 測試化合物，PO, BID 50 mg/kg (總日均劑量=100 mg/kg) 24 94+ 13(24) 218 士 38 (25) 45 測試化合物，PO, BID 100 mg/kg (總日均劑量=200 mg/kg) 62 94 士 13(23) 115 士 24 (23) 71 括號中之值為平均體重（g)。表3 :承受SK-OV-3腫瘤小鼠中測試化合物之藥物動力學組 Cmax 0-5 h (ng/ml) AUC〇_4h (ng-hr/ml)* Cave〇.4 h (ng/ml) 50 mg/kg，PO, QD 3640 3410 853 100 mg/kg，PO, QD 12100 16300 4080 200 mg/kg? P05 QD 10200 15100 3780 25 mg/kg，PO, BID 1780 1560 390 50 mg/kg，PO, BID 3880 4180 1050 100 mg/kg，PO, BID 8060 9330 2330 表中之值代表平均值。 94773.doc -45- 200522966 *在AUC〇-tlast& AUCG_4 h之間沒有觀察到顯著之差異。測定口服測試化合物對於過度表現erbB2之人類卵巢腺癌模型SK-OV-3之抗腫瘤效力（QD及BID)。此外，測試化合物之投藥（QD或BID)為有效之且造成SK-OV-3異種移植之劑量依賴抑制（圖3及4)。（動物）良好地耐受測試化合物且沒有體重損失或動物死亡。每曰一次投用測試化合物50 mg/kg歷時1 8日為無效的。當依據每日兩次程序（25 mg/kg，BID)投用總日劑量50 mg/kg/曰則達成約29%之腫瘤生長抑制。第18曰投藥後0.5 小時erbB2受體之自磷酸化在QD及BID治療組（14-20%)中係相當的，然而，在50 mg/kg QD組中測試化合物之Cmax 約 2倍高於25 mg/kg BID劑量動物之Cmax(Cmax，3640 ng/ml 對 1780 ng/ml)。同樣地，在QD組中 AUC〇_4 h(3410 ng.hr/ml 對 1560 ng.hr/ml)及 Cave〇_4h(853 ng/ml vs· 390 ng/ml)約兩倍高於BID劑量組。該等結果證明：較高之Cmax及AUC〇_4 h對於測試化合物之抗腫瘤效力並非至關重要的。雖然兩種方式（QD及BID)均產生相當之erbB2自磷酸化降低，但是每曰兩次（BID)390 ng/ml測試化合物之平均覆蓋度（Cave〇_4 hr)具有優於每日一次（QD)853 ng/ml之平均覆蓋度（Cave〇_4 hr)之益處。在SK-OV-3模型中測試化合物以較高劑量投用時亦可觀察到BID投藥優於QD投藥之益處。與投用50 mg/kg測試化合物（100 mg/kg/日）BID相對照，投用100 mg/kg/日 QD造成erbB2自磷酸化之較大降低（75%對24%)且相關於較高之 94773.doc -46- 200522966

Cmax(12，100 ng/ml 對 3880 ng/ml)、AUC〇_4 h(16,300 ng.hr/ml 對 4180 ng.hr/ml)及 Cave〇_4 h(4080 ng/ml 對 1050 ng/ml)。然而，QD程序效力較小於BID程序（23%對45% 腫瘤生長抑制）。該等結果支持此項解釋；在此腫瘤模型中測試化合物之較高之Cniax或AUC〇_4 h不具有任何顯著益處，然而高於臨限值含量之覆蓋度之頻率（Cave〇-4 ’ BID 對QD)為抗腫瘤效力之決定因素。此外，若在BID投藥時覆蓋度之平均持續時間維持較長時間，則SK-〇v-3腫瘤約 24%p-erbB2之降低可足以產生〜50%生長抑制。在以200 mg/kg QD投予劑量下測試化合物之經口吸收為非線性的。測試化合物之Cmax及Cave〇-4 h值在以200 mg/kg QD及100 mg/kg BID劑量投藥之動物中係相當的。雖然在以100 mg/kg BID劑量投藥動物中之腫瘤erbB2自磷酸化之降低較小（62%對90%)，但是在該組中腫瘤生長抑制兩倍高於以200 mg/kg、QD劑量投藥之動物（71 %對36%)。此等觀察進一步支持了該解釋：具有較長/較頻繁每曰覆蓋度 (BID程序）且在相當之Cmax下之erbB2自磷酸化之較小降低 (62%對90%)具有顯著益處。本發現與承受FRE erbB2腫瘤之無胸腺小鼠中之結果（實例1)係一致的。在彼研究中，對照15分鐘/日，在相當之歷時4小時/曰係具有益處的。因此，在該實例中，SK-0 V-3腫瘤模型之發現喻示：總每曰覆蓋度（即每日劑量之頻率）對測試化合物之抗腫瘤效 94773.doc -47- 200522966 力係至關重要的。換言之，BID程序係具有優於qd投藥之益處。在較短持續時間内erbB2自磷酸化之較大降低具有有限之價值。實例3 曝露持續時間對於測試化合物之抗腫瘤效力之效應為了測定測試化合物覆蓋度之持續時間對於其抗腫瘤效力是否至關重要而進行臨床前調查，且亦為了在人類乳腺癌、BT-474腫瘤模型中確立最小有效（Cmax及CaveG 4 h)濃度。作為背景’在實例1中測試化合物（P〇，qD)顯示出有效地對抗FRE erbB2腫瘤。經靜脈投用測試化合物同樣有效地對抗FRE erbB2腫瘤。該等發現證明：在]^!^ erbB2腫瘤模型中維持〜5 00 ng/ml測試化合物之金濃度歷時4小時/日優於較短之覆蓋度持續時間（〜15分鐘/日），此優點在於具有相當之p-erbB2降低（48-53%)。藥物動力、藥效及效力資料均顯示於表1中。基於FRE erbB2模型之初期研究中所量測之曝露，在實例2中此項調查擴展至過度表現erbB2之人類卵巢腺癌異種移植模型SK-OV-3。測試化合物為有效的且sk-〇V-3腫瘤模型之發現喻示：總每日覆蓋度（即每日投藥頻率）對於測试化合物之抗腫瘤效力係至關重要的。BID投藥程序更有盈於QD投藥程序。在較短持續時間内erbB2自磷酸化之較大降低具有有限之價值。本實例將每日投藥頻率對於測試化合物之抗腫瘤效力之 94773.doc -48- 200522966 意義的評估擴展到過度表現erbB2受體之人類乳腺癌模型 BT-474 中。收獲按指數規律生長之BT-474細胞（含有1〇 HEPES、10% FBS 及 pen/strep [Gibco]之 RPMI 1640)且在雌性無胸腺小鼠中接種SC(5百萬細胞/動物）。接著將以套針取得之BT-474腫瘤碎片植入至動物之右側肋腹部。將 BT-474腫瘤承受小鼠（尺寸為50-320 mm3，N=40)隨機地分成7組，每組包含5-6個動物。以在表4中所述之媒劑（p0, BID)或測試化合物（P〇、QD或BID)來治療動物。在第i、 6、11、15及22日獲得腫瘤量測值及體重改變。藉由下式計算腫瘤體積：腫瘤體積（mm3) = (WxW)/2xL (L=長度且寬度）。在第22曰投藥劑量後之0.5、1、2、4及8小時分離血樣品（〜50 μΐ)用於PK分析。在第22日投藥後0.5小時分離腫瘤用於進行採用ELISA之PD分析。統計學之分析··進行生長百分數資料之ANOVA分析且在類似劑量間進行計晝比較（planned comparison)。為了便於分析對資料進行對數化轉換，此係由於數值之分佈狀態。在多重比較分析中使用Dunnett-Tamahane方案。對照組及測試化合物治療動物組中之p-erbB2之降低、腫瘤體積及體重之改變均顯示於表4中。 94773.doc -49- 200522966 表4 治療 p-erbB2 降低％腫瘤體積(mm3;均值土 SE) 第1曰第22曰生長抑制％媒劑，10 ml/kg PO, BID 00 113 + 16(25) 701 士 144(30) 00 測試化合物，PO，QD, 15 mg/kg(總曰劑量=15 mg/kg) 無可偵測之降低 78 士18 (25) 376 ± 79 (29) 22 測試化合物，PO，QD，30 mg/kg(總日劑量=30 mg/kg) 57 139 士31 (23) 635 ± 189 (27) 33 測試化合物，PO，QD，50 mg/kg(總曰劑量=50 mg/kg) 75 153 士40 (25) 608 士 136(29) 35 測試化合物，PO, BID，15 mg/kg(總曰劑量=30 mg/kg) 無可偵測之降低 114 土47 (24) 520 ± 254 (29) 54 測試化合物，PO, BID，30 mg/kg(總曰劑量=60 mg/kg) 26 161 士44 (26) 530 士 240 (30) 68 測試化合物，PO, BID，50 mg/kg(總曰劑量=100 mg/kg) 74 155 ±42 (24) 413 士 98 (28) 68 括號中之值為平均體重（g)。 BT-474腫瘤承受小鼠中測試化合物之藥物動力學顯示於表5中。表5 組 Cmax 〇·5 h (ng/ml) AUC〇.4h (ng-hr/ml) Cave〇.4 h (ng/ml) 15 mg/kg，PO, QD 250 Nd nd 30 mg/kg? PO? QD 1800 1280* 320* 50 mg/kg，PO, QD 5890 4220* 1060* 15 mg/kg，PO, BIO 616 480 120 30 mg/kg，PO, BID 1570 1440* 360* 50 mg/kg，PO, BID 6170 5280 1320 nd :未測定，此係歸因於總AUC之AUC230%之外推部分表中之值代表平均值。 94773.doc -50- 200522966 *值係估計值，其乃基於來自2小時及8小時曝露情況下於4小時之外推濃度。因此，測定測試化合物（QD及BID)對於過度表現erbB2 之人類乳腺癌模型BT-474所具有的口服抗腫瘤效力。測試化合物之投藥（QD或BID)係有效的且引起BT-474異種移植之生長抑制（圖5a及5b)。動物對測試化合物耐受良好且沒有體重損失或動物死亡。由於初始腫瘤體積之廣泛差異，計算個體腫瘤生長率％且使用各組之平均值來測定相對抗腫瘤效力。 15 mg/kg QD(15 mg/kg/ 曰）及 BID(3 0 mg/kg/ 曰）歷時 22 曰之測試化合物治療係有效的且分別引起22%及 54%(ρ=〇·〇〇7)腫瘤生長抑制。第22曰投藥後0.5小時erbB2 受體自磷酸化之降低係低於QD及BID治療組之偵測界限且在QD投藥動物組中Cave〇_4 h未得到測定，此係歸因於總 AUC之AUC230%之外推部分。15 mg/kg、BID投用動物中測試化合物之有效之Cmax、AUCo-4 h及Cave〇_4 h(540/〇生長抑制）分別為 616 ng/ml、480 ng.hr/ml及 120 ng/ml。在 30 mg/kg QD(30 mg/kg/曰）及 BID(60 mg/kg/曰）治療後亦測定測試化合物之PK、PD及抗腫瘤效力。對於測試化合物而言，於第22曰測定QD或BID投藥劑量後之PK值係相當的，亦即，Cmax (1800 ng/ml對 1570 ng/ml)、AUC〇_4 h (1280 ng.hr/ml對 1440 ng.hr/ml)及 Cave〇_4 h (320 ng/ml對 360 ng/ml，表5)。在QD投藥動物中BT-474腫瘤erbB2自磷酸化之降低比則0投藥之動物更高（5 7%對26%，？=0.06)。 94773.doc 51 200522966 測試化合物之30 mg/kg BID程序比QD投藥更有效（68%對 33%生長抑制，ρ=〇·〇53)。與30 mg/kg QD或BID投用測試化合物（30 mg/kg/曰或60 mg/kg/曰）對比，以 QD或 BID投用 50 mg/kg/曰（50 mg/kg/曰或100 mg/kg/日）造成腫瘤erbB2自磷酸化更大之降低（降低〜75%)。在第22日50 mg/kg QD或BID治療組中測試化合物之PK參數亦係相當的，亦即，Cmax(5890 ng/ml對6170 ng/ml)、AUC〇_4 h(4220 ng.hr/ml對 5280 ng.hr/ml)及 Cave〇_4 h( 1060 ng/ml對1320 ng/ml)。QD程序似乎效力小於BID程序（35%對68%腫瘤生長抑制，p=0.066)。執行比較QD及BID之間類似劑量之集中測試。該測試顯示：總體而言，BID劑量比QD劑量更有效（ρ=0·0346)。此發現喻示測試化合物劑量之多重性對於總治療結果有積極之效應。亦對在 50 mg/kg、QD(50 mg/kg/ 曰）及 30 mg/kg、BID(60 mg/kg/曰）組（兩個在總日劑量上最接近之組）中觀察到之測試化合物PK、PD及抗腫瘤效力之比較進行評估以測定投藥頻率之價值。在50 mg/kg、QD(50 mg/kg/日）投藥組中p-erbB2之降低更高於30 mg/kg、BID(60 mg/kg/日）投藥組 (75%對26%之p-erbB2降低，表4)。同樣地，比較於30 mg/kg、BID投藥組，在50 mg/kg、QD投藥組中觀察到測試化合物之較高之 Cmax(5890 ng/ml 對 1570 ng/ml)、AUC〇_4 h(4220 ng.hr/ml對 1440 ng.hr/ml)及 Cave。、h(1060 ng/ml 對360 ng/ml)(表5)。雖然測試化合物具有較小之p-erbB2 94773.doc -52- 200522966 降低及 PK值（即，Cmax、AUC〇_4 h及 Cave〇_4 h)，但是 30 mg/kg、BID投藥（60 mg/kg/ 日）係更有效於 50 mg/kg、QD 投藥（50 mg/kg/曰）。總體而言，在30 mg/kg、BID及50 mg/kg、QD組中分別觀察到約68%及35%之腫瘤生長抑制 (ρ = 0·063 6)。雖然在該等兩組中測試化合物之總曰劑量稱微不相等，但是可作出如下結論··每日劑量之頻率，亦即 BID劑量具有優於QD每曰一次之投藥頻率之益處。該等結果類似於在上述實例2中SK-OV-3腫瘤模型研究中之發現：每日投藥頻率，亦即，BID投藥之每日兩次 CaveG_4覆蓋度提供相比於QD投藥之每日一次CaveG-4覆蓋度之益處。此外，若覆蓋度（〜360 ng/ml)之平均持續時間在以BID投藥時維持較長之一段時間，則以BID投藥每曰兩次之BT-474腫瘤自磷酸化約26%之降低可足以產生〜50% 生長抑制。本發現亦符合藉由輸注至承受FRE erbB2腫瘤之無胸腺小鼠而經靜脈投用測試化合物之結果。彼項研究證明：維持測試化合物血濃度〜500 ng/ml歷時4小時/日提供相比於快速投藥之益處。因此，來自BT-474腫瘤模型之發現喻示··投藥之多重性及每日投藥之頻率對於測試化合物之抗腫瘤效力係至關重要的。投藥之多重性係指每日至少兩次至六次（可視情況七次）投用一個劑量（X mg/kg)，此係相比於每曰一次投用相同之劑量（X mg/kg)而言。每日投藥頻率係指將每曰劑量劃分投用，例如，相比於每日一次投用X mg/kg，每曰兩次投用半個X mg/kg。 94773.doc -53- 200522966 之較大降低具有有限持續較短之時間之erbB2自磷酸化之價值。實例4 曝露持續時間對於測試化合物之抗腫瘤效力之效應為了測定測試化合物覆蓋度之持續時間對於其抗腫瘤效力是否至關重要而進行臨床前調查且亦為了在人類乳腺癌腫瘤模型、MDA-MB-453中確立最小有效（Cmax及Cave〇 4 h) 濃度。作為背景，在實例1中測試化合物（p〇，QD)顯示出有效地對抗FRE erbB2腫瘤。經靜脈投用測試化合物同樣有效地對抗FRE erbB2腫瘤。該等發現證明··在fre erbB2腫瘤模型中維持〜5 00 ng/ml測試化合物之血濃度歷時4小時/日優於較短之覆蓋度持續時間（〜15分鐘/曰），此優點在於具有相當之p-erbB2降低（48-53%)。藥物動力、藥效及效力資料均顯示於表1中。該調查擴展至過度表現erbB2之人類卵巢腺癌異種移植模型SK-OV-3。測試化合物係有效的且SK-OV-3腫瘤模型中之發現喻示：總每日覆蓋度（即每曰投藥頻率）對於測試化合物之抗腫瘤效力係至關重要的（BID程序具有優於QD 劑量之益處）。亦進行測試化合物之QD對BID經口投藥程序對於過度表現erbB2之BT-474人類乳腺癌模型之抗腫瘤效力之調查。此發現亦喻示投藥多重性及頻率對於測試化合物之抗腫瘤效力係至關重要的。總體而言，SK-OV-3及 BT-474模型中之發現喻示：較短持續時間之erbB2自磷酸 94773.doc -54- 200522966 化之較大降低具有有限之價值。為了測定測試化合物對於過度表現erbB2之額外人類乳腺癌模型、MDA-MB-453之抗腫瘤效力而執行此項調查。該調查之第二目的係為了測定測試化合物投用多重性或頻率對於對抗此模型是否有任何益處。研究設計：收穫按指數規律生長之MDA-MB-453細胞（含有 10% FBS 及 pen/strep [Gibco]之 DMEM/F12)且在雌性無胸腺小鼠中接種SC(5百萬細胞/動物）。將MDA-MB-453腫瘤承受小鼠（尺寸為〜100 mm3，N=64)隨機地分為8組，每組各包括8只動物。以如表6中所述之媒劑（PO、QD或BID)或測試化合物（PO、QD或BID)治療動物。在第1、3、7、10、 14、17、21、24及29日獲得腫瘤量測值且體重改變。藉由下式來計算腫瘤體積：腫瘤體積（mm3) = (WxW)/2xL(L=長度且W=寬度）。在第29日投藥後0.5、1、2、4及8小時分離血樣品（〜50 μΐ)用於PK分析。在第29日投藥後〇·5小時分離腫瘤用於進行採用ELISA之PD分析。統計學分析：進行生長百分數資料之ANOVA分析且在類似劑量間進行計晝比較。為了便於分析對資料進行對數化轉換，此係歸因於數值之分佈狀態。在多重比較分析中使用 Dunnett-Tamahane方案。對照組及測試化合物治療動物組中之p-erbB2之降低、腫瘤體積及體重改變均顯示於表6中。 94773.doc -55- 200522966 表6 治療 p-erbB2 降低％腫瘤體積(mm3;均值±SE) 第1曰第29曰生長抑制％媒劑，10ml/kgPO，QD 00 107 ±5 (22) 284 ± 19(26) 00 測試化合物，PO, QD 50 mg/kg (總曰劑量=50 mg/kg) 78 107 ±4 (23) 213 士 19 (25) 38 測試化合物，PO, QD 100 mg/kg (總曰劑量=100 mg/kg) 88 107 ±4 (23) 175 士 14 (25) 63 測試化合物，PO, QD 200 mg/kg (總曰劑量=200 mg/kg) 92 107 士 4 (22) 108 士 9 (24) 100 媒劑，10 ml/kg，PO, BID 00 107 ±4 (23) 284 ± 20 (25) 00 測試化合物，PO, BID 25 mg/kg (總曰劑量=50 mg/kg) 69 107 士 4 (22) 252 士 24 (23) 19 測試化合物，PO, BID 50 mg/kg (總曰劑量=100 mg/kg) 75 107 士 4 (23) 164 土 13 (24) 66 測試化合物，PO，BID 100 mg/kg (總曰劑量=200 mg/kg) 79 107 士 4 (23) 137 士 6 (25) 83 括號中之值為平均體重（g)。 MDA-MB-453腫瘤承受小鼠中測試化合物之藥物動力學顯示於表7中。 94773.doc -56- 200522966 表7 組 Cmax 〇·5 h (ng/ml) AUC〇.4h (ng-hr/ml) Cave〇.4 h (ng/ml) 50 mg/kg, PO, QD 2760 2360 591 100 mg/kg，PO，QD 9770 12500 3120 200 mg/kg，PO，QD 16700 26100 6510 25 mg/kg，PO, BID 952 857 215 50 mg/kg，PO, BID 2390 2040 509 100 mg/kg，PO，BID 6870 6840 1710 表中之值代表平均值。因此，測定測試化合物對過度表現erbB2之人類乳腺癌模型MDA-MB-453所具有之口服抗腫瘤效力。測試化合物之投用（QD或BID)係有效的且引起MDA-MB-453異種移植之生長抑制（圖6a及6b)。動物對測試化合物耐受良好且沒有體重損失或動物死亡。 50、100 及 200 mg/kg QD(50、100 及 200 mg/kg/曰）之測試化合物治療係有效的且分別造成38%、63%及100%腫瘤生長抑制。在50、100及200 mg/kg組中於第29日投藥後0.5 小時之erbB受體自磷酸化之降低分別為78%、88%及 92%。歷時29日每日兩次投用25、50及100 mg/kg BID之測試化合物對MBA-MB-453腫瘤係有效的且分別引起19%、 66%及83%生長抑制。在該等組中p-erbB2之降低分別為 69%、75%及 79% ° ANOVA係用於對測試化合物之不同劑量之總效力之統計學分析。Dunnett-Tamahane程序係用於與媒劑調整之多重比較。此結果顯示··測試化合物以25 mg/kg BID與50

mg/kg QD (ρ = 0·295)、50 mg/kg BID 與 100 mg/kg QD 94773.doc -57- 200522966 (ρ=0·703)及 100 mg/kg BID與 200 mg/kg QD (ρ=0·117)投梁程序之間沒有顯著差異。同樣地’在如下類似劑量之間沒有顯著差異：即，50 mg/kg BID對50 mg/kg QD(p=〇.i3) 及 100 mg/kg BID對 100 mg/kg QD (ρ=0· 17)。僅使用劑量 / 投藥程序及由不同組中觀察到之抗腫瘤效力所進行之比較統計評估不足以得出任何確定之結論來解決下列問題： BID程序是否具有優於QD投用測試化合物之益處。 QD(50-200 mg/kg)或 BID(25-100 mg/kg)投藥後之 p-erbB2之降低為69-92%且不易利用其作為進一步統計學資料分析之參數。因此，資料分析擴展為使用藥物動力學參數，即，測試化合物之Cmax及Cave〇-4h。 50 mg/kg(50 mg/kg/曰）及 100 mg/kg(100 mg/kg/曰）QD投藥後獲得之591 ng/ml及3120 ng/ml之Cave〇-4 h引起38〇/〇及 63%腫瘤生長抑制。以50 mg/kg BID投藥程序每日兩次而獲得之509 ng/ml Cave〇-4 h造成66%之效力。以BID投藥歷時8 hrs/日而維持Cave〇_4 h在509 ng/ml與歷時4 hrs/日維持 Cave〇_4 h在 591 ng/ml(50 mg/kg QD投藥）或 3120 ng/ml(l〇〇 mg/kg QD投藥）（分別為p=0.13及ρ=0·58)沒有顯著不同。其亦可理解為：與維持591至3 120 ng/ml之平均血漿濃度歷時 4 hrs/曰相比，維持509 ng/ml之平均血漿濃度歷時8 hrs/曰具有相等或更好之益處。在50 mg/kg QD及50 mg/kg BID 組中測試化合物之Cmax係相當的（2760 ng/ml對2390 ng/ml) 而在100 mg/kg QD組中之Cmax約4倍高於上述兩組（9770 ng/ml)。此結果喻示：當p-erbB2之降低相當時，較高之 94773.doc -58- 200522966

Cmax或Cave〇_4 h單獨具有有限之價值。亦執行在100 mg/kg BID及200 mg/kg QD組中所觀察到之測試化合物之Cmax及CaveG_4 h與抗腫瘤效力之比較。在 200 mg/kg QD組中測試化合物之Cmax為2.4倍高於100 mg/kg BID組中之 Cmax(16,700 ng/ml 對 6870 ng/ml)。同樣地，200 mg/kg QD組中之 Cave〇_4 h為 3·8倍高於 100 mg/kg BID組中之 Cave〇_4 h(6510 ng/ml 對 1710 ng/ml)。雖然具有較高之Cmax及Cave〇_4 h，在200 mg/kg QD劑量組中觀察到之測試化合物之總效力相當於100 mg/kg BID劑量組中所觀察到之抗腫瘤效力（100%對83%)。此資料進一步喻示：在投用測試化合物100 mg/kg BID後維持1710 ng/ml(Cmax， 6870 ng/ml)之平均血漿濃度8 hrs/日與在200 mg/kg QD投藥後維持6510 ng/ml(Cmax，16,700 ng/ml)之平均血漿濃度具有相等之益處。因此，本發現喻示··在MDA-MB-453腫瘤模型中，維持測試化合物之血漿濃度〜509 ng/ml歷時8 hrs/日（50 mg/kg， BID劑量）與維持平均血漿濃度591至3120 ng/ml歷時4 hrs/ 曰（50-100 mg/kg，QD劑量）在抑制腫瘤生長中係等效的。因此，在BID程序中所給出之測試化合物之低劑量與QD程序中給出之較高劑量相比具有相等之益處。本發明不受限於本文所述之特定實施例之範疇。實際上，借助於前述描述及附隨之圖式，除本文所述之彼等變化形式以外之本發明各種變化形式對於熟悉此項技術者而言將變得顯而易見。意欲該等變化形式皆落於附加專利申 94773.doc -59- 200522966 請範圍之範®壽内。本文所引用之所有專利案、申請案、公開案、測試方法、文獻及其它材料之全文係以引用之方式併人本文中。【圖式簡單說明】圖1顯不P〇、QD投予具有FRE/erbB2腫瘤之小鼠抑制劑 E-2-甲氧基_ν_(3·{4_(3_甲基_4_(6_甲基」比啶基氧基）_笨基胺基）-喹唑啉_6_基卜烯丙基）_乙醯胺之抗腫瘤效力。縱座標為相對於媒劑對照組之第7曰腫瘤生長之量測。圖2顯不1V、QD投予具有FRE/erbB2腫瘤之小鼠抑制劑甲氧基N-(3-{4-(3-甲基-4-(6-曱基比咬_3_基氧基）-苯基胺基）-喹唑啉_心基卜烯丙基）_乙醯胺之抗腫瘤效力。縱座標為相對於媒劑對照組之第7曰腫瘤生長之量測。圖3,、、、員示p〇及qd投予sk-〇V-3腫瘤承受nu/nu小鼠抑制劑 E-2-甲氧基甲基·4·(6_曱基比啶_3·基氧基）_苯基胺基）-喹唑啉_6_基卜烯丙基乙醯胺之抗腫瘤效力之時私。在圖3中，符號具有下列意義：圓形表示媒劑，BID ; 菱形表不50 mg/kg抑制劑，qd ;三角形表示1〇〇 mg/kg抑制劑’ QD ;及方形表示2〇〇 mg/k·制劑，qD。圖4顯示p〇及bid投予SK-OV-3腫瘤承受nu/nu小鼠抑制劑E-2-甲氧基-N-(3-{4-(3-曱基-4-(6-甲基比啶-3-基氧基）- 苯基胺基）-喧唆啉-6-基卜烯丙基）_乙醯胺之抗腫瘤效力之時程。在圖4中，符號具有下列意義：圓形表示媒劑， BID ;十字形表示25 mg/kg抑制劑，BID ;菱形表示50 mg/kg抑制劑，BID ;及星形表示1〇〇 mg/kg抑制劑，BID。 94773.doc -60 - 200522966 圖5 A顯示投予承受b T-4 7 4腫瘤之小鼠抑制劑e — 2 -甲氧基-N-(3-{4-(3_甲基-4·(6·曱基比u定基氧基）_苯基胺基）_ 啥唾琳-6-基}-稀丙基）-乙醢胺之抗腫瘤效力，說明了劑量多重性之效應。圖5B顯示投予承受BT-474腫瘤之小鼠抑制劑e-2-曱氧基-N-(3-{4-(3 -甲基-4-(6-甲基比啶-3-基氧基）_苯基胺基）_ 喹唑啉-6-基卜烯丙基）-乙醯胺之抗腫瘤效力，說明了劑量頻率之效應。圖6Α顯示QD投予承受MDA-MB-453腫瘤之小鼠抑制劑 Ε-2-曱氧基-Ν-(3-{4-(3-甲基-4-(6-甲基-吼啶-3-基氧基）·苯基胺基）-喹唑啉-6-基}-烯丙基）-乙醯胺之抗腫瘤效力。圖6B顯示BID投予承受MDA-MB-453腫瘤之小鼠抑制劑 E-2·甲氧基-N-(3-{4-(3-甲基-4-(6-甲基-批啶·3-基氧基）-笨基胺基）-喹唑啉-6-基卜烯丙基）-乙醯胺之抗腫瘤效力。 94773.doc -61 -

Claims

200522966 十、申請專利範圍： 1 · 一種用於治療需要治療之哺乳動物中erhR0心 T erbB2跫體之過度表現的組合，其包含： 0)治療有效劑量之該erbB2受體之第一抑制气 (b) —至六個治療有效量之該erbB2# &體之弟二抑制劑，其中在包含小於24小時之時間間隔後依序投予該哺乳動物該erbB2受體之第二抑制劑。人 2 其中(b)中之該時間間隔為小於12 3·如請求項1或2之組合小時。 4·如請求項丨或2之組合小時。 5·如請求項1或2之組合甲之第—抑制劑相同 6.如請求項1或2之組合’其中⑷中於(b)中之該第二抑制劑。《抑.Μ係不同 7♦如凊求項1或2之組合，其中(a)中之嗲第4中之哕坌^ ;甲之0亥第一抑制劑係與亥第二抑制劑協同作用。、ib)8·如請求項！或2之組合，其中之該第-…）中之縯第一抑制劑 —I7制劑或其兩者為該 9·如請求項_之組合，又體之括抗劑之該第二抑制劑係獨立地選自:第-抑制劑 10.如請求項4人 '自小分子及單株抗體。、次2之組合，其令⑷中之該第一抑制劑，其中(b)中之該時間間隔為小於丨 /、中(a)中之該第一抑制劑係與⑻ (b)1 (b) t (b) 94773.doc 200522966 之该弟二抑制劑合物：或其兩者、或其混合，包含式丨之化

或其醫藥上可接受$ gg 之|谷劑化物或前藥，其中

m為0至3之整數； P為0至4之整數；各R及R2係獨立地選自h&Ci_C6烷基； R3為-㈣的以至㈣雜環），其中_至5之整數，該雜環基視情況稠合至苯環或C5_Cs環燒基，上述^基之-(CR!R2)t-部分視情況包括碳·碳雙或三鍵，其中丨為介於2與5之間之整數，且包括視情況前述所指之任何稠合環之上述R3基視情況經1至5個R8基取代；

R4 為-(CR16R17)m-CEC-(CR 丨 6Ri7)tR9、_(CRl6Rl7)m_c = c· (CR16R17)t-R9、-(CR16R17)m-C = C-(CR16RI7)kRi3、 •(CR16Rl7)m-C = c_(CRl6Rl7)kRl3 或-(cr16r17^r9，其中至 r9之連接點係通過R9基之碳原子，各k為1至3之整數，各t為0至5之整數，且各m為0至3之整數；各R5係獨立地選自下列各基··鹵基、經基、_nr]r2、 C1-C6烷基、三氟甲基、C「C6烷氧基、三氟甲氧基、 -NR6C(〇)R] > -C(0)NR6R7 " -S02NR6R7 > -NR6C(0)NR7R1 94773.doc 200522966 及-nr6c(o)or7 ; 各R6、R6a&R7係獨立地選自下列各基：H、Ci_C6烷基、-(CRfMCVCio 芳基）及-(CR^R2)# 至 1〇員雜環），其中t為0至5之整數，雜環基之1或2個環碳原子視情況由氧代（=〇)部分取代’上述R6及R7基之烷基、芳基及雜環部分視情況由1至3個獨立地由下列各基中選出之取代美所取代：鹵基、氰基、硝基、-NWR2、三銳甲基、二氣甲氧基、CVC6烧基、CVQ烯基、CM6炔基、經基及 C6烷氧基；或R6及R7、或R6a及R7，當連接至相同之氮原子時，可總括在一起形成4至1 〇員雜環，該雜環可包括除了該 R6、尺“及R7連接於其上之氮以外的i至3個額外之雜部分，該等雜部分選自，其限制條件為兩個Ο原子、兩個s原子或一個0與一個8原子彼此不直接連接；各R8係獨立地選自下列各基：氧代（=〇)、鹵基、氰基、硝基、三氟甲氧基、三氟甲基、疊氮基、羥基、 c6烧氧基、CVC1()燒基、c2_c6烯基、c2_c6炔基、 -C(0)R6、-C(0)〇R(S、_〇c(〇)r6、nr6c(〇)r7、 -NR6S02NR7R^ , .NR6C(0)NR1R7 ^ -NR6C(0)0R^ . -C(0)NR6R7 > -NR6R7 . -NR6OR7 ^ -so2nr6r7 , -S(〇Xj(CVC6 燒基）（其中 j 為〇至 2 之整數）、_(CRlR2)t(C6_ Cl〇芳基）、_(CRlR2)t(4 至 10 員雜環）、-(CR^qQP) (crWmq-Cw芳基）、-(CRlR2)qC(〇)(CRlR2M^ 1〇員雜 94773.doc 200522966 環）、-(CRDtCXCWR^Cpq。芳基）…(Cr1r2) 〇 (CR R )q(4 至 10 員雜環）、-(crTwomcW^c C10芳基）及-(CR^RbqSCOUCRV)#至l〇員雜環），其中 j為0、1或2，q及t各自獨立地為〇至5之整數，上述R8美之雜環部分之1或2個環碳原子視情況由氧代卜部分取代’且上述R8基之烷基、稀基、炔基、芳基及雜環部分視情況由1至3個獨立地由下列各基中選出之取代基所取代··鹵基、氰基、硝基、三氟曱基、三氟甲氧基、豐氮基、-OR6、_C(0)R6、_C(〇)〇i^6、 -〇C(0)R6、-NR6C(0)R7、-C(0)NR6R7、擺6r7、_nr6〇r7、院基、c2-c6烯基、C2-C6快基、-(CRfMcvCw芳基）及-(CR〗R2)t(4至10員雜環），其中1為〇至5之整數； R9為非芳族之單環、稠合或橋連雙環或螺環，其中該環含有3至12個碳原子，其中〇至3個碳原子視情況由獨立地自N、Ο、S(0)j(其中j為〇至2之整數）&_NRl_選出之雜部分所置換，其限制條件為兩個〇原子、兩個s(〇)j部分、一個Ο原子與一個S(0)j部分、一個N原子與一個§原子、或一個N原子與一個0原子在該環中彼此不直接連接’且其中該環之碳原子視情況由1或2個R8基所取代；各Rn係獨立地選自R8之定義中所提供之取代基，除 R11並非氧代（=〇)以外； R12為 R6、_〇r6、_ocR6、〇c(〇)nr6r7、_〇c〇2r6、 -S(0)jR、_s(0)jNR6R7、_NR6R7、-NR6C(0)R7、 -nr6so2r7、-NR6C(〇)NR6aR7、NR6s〇2NR6aR7、 94773.doc 200522966 -NR6C〇2R7、CN、c(Q)R6或*基，其中j為0至2之整數； R13為或 _〇R"; Rl4為 H、Rl5、_C(〇)R15、-S02R15、-C(〇)NR15R7、 •S02NR15R7或; R15為 R18、-(CRVwcvc〗。芳基)、_(CRlR2)t(4至 10員雜環），其中t為0至5之整數，雜環基之i或2個環碳原子視情況由氧代（=〇)部分所取代，且上述R15基之芳基及雜環部分視情況由1至3個R8取代基所取代；各R16及R17係獨立地選自Η、Ci_C6烷基及-CH2OH，或 R16 及 R17總括在一起成為; R18為CVC6烷基，其中沒有結合至N或〇原子、或 S(〇)j之各碳視情況由所取代，其中」·為〇至2之整數；且其中任何前述包含CH3(甲基）、CH2(亞甲基）或 CH(-人甲基）且不連接至鹵代（hai〇gen〇)、s〇或s〇2基或至 Ν、Ο或S原子之取代基視情況由下列各基中選出之基團所取代：經基、鹵基、C〗-C4烧基、CVC4烷氧基及-NR〗R2。 11 ·如請求項1或2之組合，其中⑷中之該第一抑制劑、（b)中之該第二抑制劑、或其兩者或其組合包含選自下列各物組成之群之化合物：吉非替尼（gefitinib)(iRESSA， ZD1839)、搓杜滋美（trastuzumab)、西妥昔單抗 (cetuximab)、埃羅替尼（eri〇tinib)、IDM-1、ABX-EGF、伽那替尼（canertinib)鹽酸鹽、EGF-P64k疫苗、丑1^-569、EMD-72000、GW-572016、MDX-210、ME-103、 YMB-1001、2C4抗體、APC-8024、CP-724714、E75、 94773.doc 200522966 Her-2/neu疫苗、Herzyme、ΤΑΚ-165、ADL-681、Β·17、 D-69491、Dab-720、EGFrvlll、ΕΗΤ-102、FD-137、 HER-1 疫苗、HuMax-DGFr、ME-104、MR1-1、SC-100、搓杜滋美-DM1、YMB-1005、AEE-788 (Novartis)、 mT〇R抑制劑、雷帕黴素（Rapamycin)(Rapamune，Siolimus)、 CCI-779、AP23573及 RAD001。 12·如請求項1或2之組合，其中（a)中之該第一抑制劑、中之該第二抑制劑或其兩者之血漿含量係介於10 ng/ml與 4000 ng/ml之間。 13 ·如請求項1或2之組合，其中（a)中之該第一抑制劑及（b)中之该第二抑制劑係各自獨立地選自下列各物組成之群： (±)-(3-甲基-4-(吼啶·3-基氧基）·苯基）-(6-六氫啦啶_3_ 基乙炔基-唾。坐淋_4_基）-胺； (+Η3-甲基-4十比啶_3_基氧基）_苯基）-(6_六氫吼啶_3_ 基乙快基-噎唾琳-4-基）-胺； (-)-(3-甲基-4-(吼啶-3_基氧基）_苯基）-(6-六氫π比啶_3一基乙快基-喧η坐琳_4_基）-胺； 2-曱氧基-N-(3-{4-(3-甲基-4-(吼啶-3-基氧基）-苯基胺基）-喹唑琳-6-基卜丙-2-炔基）-乙醯胺； (士)-(3-甲基-4-(6-曱基^比啶-3-基氧基）-苯基）-(6-六氫 °比°定-3-基乙快基-啥ϋ坐琳_4_基）-胺； (+)-(3-甲基-4-(6-甲基』比啶_3_基氧基）_苯基Η6-六氫 °比啶-3-基乙炔基-喹唑啉·4·基）_胺； (-）-(3-曱基-4-(6-曱基-吼啶_3_基氧基）_苯基）·(卜六氫 94773.doc 200522966 0比°定-3-基乙快基-π查唾琳基）_胺； 2-曱氧基-N-(3-{4-(3-甲基_4-(2-曱基-吨啶-3-基氧基）笨基胺基）-喹唑啉-6-基卜丙_2_炔基）-乙醯胺； (3-甲基-4-(2-甲基-吡啶_3_基氧基）_苯基）_(6_六氫吡啶 4-基乙炔基-喧唾琳-4-基）-胺； (3-甲基-4-(6-甲基-吡啶_3_基氧基）_苯基）_(6_六氫吡啶· 4-基乙快基-喹唾琳-4-基）-胺； 2-曱氧基-N-(3-{4_(3_甲基·4·(6_甲基_吡啶_3_基氧基）_ 苯基胺基）-喹唑啉-6-基卜丙_2-炔基）_乙醯胺； 2_氟善(3_ {4-(3_甲基·4-(6-甲基-吼咬-3-基氧基）_苯基胺基）-喹唑啉-6-基}_丙_2_炔基）_乙醯胺；土 Ε-2-甲氧基·Ν-(3-{4·(3-甲基-4-(6-甲基·》比啶_3_基氧基）-苯基胺基）-喹唑啉_6_基}_烯丙基）_乙醯胺； (3-甲基-4-(吼啶·3_基氧基）_苯基K6•六氫吼啶_4基乙快基-喧嗤琳-4-基）_胺； 2曱氧基N-(l_{4-(3-甲基.4-(6-甲基-吼咬·3_基氧基）_ 苯基胺基）4料_6_基乙快基}_環丙基）_乙酿胺； E-N-(3-{4-(3K(6_甲基_0比咬_3·基氧基）_苯基胺基）_ 喹唑啉-6-基卜烯丙基）_2_甲氧基·乙醯胺；氯，6_甲基“比咬_3_基氧基）_苯基胺基）_啥唑啉-6-基}-丙-2-炔基）_乙醯胺； N-(3-{4♦甲基邻·甲基，。定_3_基氧基）_苯基胺基啥唾啉-6-基卜丙_2_炔基）_乙醯胺； E-N-(3-{4-(3-氯·4.(6_甲基“比咬_3_基氧基）_苯基胺基）_ 94773.doc 200522966 喹唑啉-6-基}-烯丙基）_乙醯胺； E-2-乙氧基-N-(3-{4-(3_甲基_4_(6_甲基_β比啶_3_基氧基）-苯基胺基喹唾琳-6_基}_烯丙基）_乙醯胺； 1- 乙基-3-(3-{4-(3-甲基-4-(6-曱基_D比啶_3_基氧基苯基胺基）-喹唑啉-6-基卜丙_2_炔基）_脲；六氫吼畊-1-羧酸（3-{4·(3_曱基_4·(6_甲基_吼啶_3•基氧基）-苯基胺基）-啥唾琳-6-基卜丙_2_炔基）_醯胺； (土)-2-輕基甲基-吡η各啶_卜羧酸（3_{4_(3_甲基_4_(6_甲基比啶-3-基氧基）-苯基胺基）_喹唑啉_6_基卜丙_2_炔基）_ 醯胺； (+)·2-羥基曱基-吡咯啶-卜羧酸（3气4_(3_甲基_4气6•甲基比啶-3_基氧基）·苯基胺基）_喹唑啉·6_基卜丙_2_炔基）_ 醯胺； (-)-2-羥基曱基-吡咯啶_；μ羧酸（3气心（3_甲基_4-(6_甲基-吼啶-3-基氧基）-苯基胺基）_喹唑啉-6_基卜丙_2_炔基）_ 醯胺； 2- 二甲基胺基-Ν-(3-{4-(3-甲基-4-(π比啶_3_基氧基）_苯基胺基）-喹唑啉-6-基卜丙-2-炔基）-乙醯胺； E-N-(3-{4-(3-甲基-4-(6-曱基-啦啶-3-基氧基）-苯基胺基）-喹唑啉_6_基卜烯丙基）_曱磺醯胺；異嗔唾-5-羧酸（3-{4-(3 -甲基-4-(6-甲基-吡啶-3-基氧基）-苯基胺基）-喧唾琳_6-基}-丙-2_快基）_醮胺；二曱基-3-{4-(3-曱基-4-(6-曱基-吡啶-3-基氧基）-苯基胺基）-喹唑啉-6-基卜丙-2-炔基）-3-乙基-脲； 94773.doc 200522966 及前述化合物之醫藥上可接受之鹽、前藥及溶劑化物。 14. 15. 如明求項1或2之組合，其中該抑制劑係選自下列各物組成^群：E-2-甲氧基-n-(3-{4♦甲基_4|甲基m 基氧基）·苯基胺基）_—琳·6_基卜烯丙基）·乙醯胺；及其醫藥上可接受之鹽、前藥及溶劑化物。一種治療具有反常細胞生長之主體之組合，其包含第一篁之erbB2受體抑制劑、治療協同有效量之第二抑制劑、及視情況第三或第四量之該第二抑制劑，其中該等抑制劑係在24小時期間内經口、經頻、經舌下、經鼻内、經眼内、經胃内、經十二指腸内、局部地、經直腸或經陰道投予需要治療反常細胞生長之該主體。 94773.doc 9-