TW200407114A - Therapeutic agents - Google Patents

Description

200407114 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關某些新穎之芊酸衍生物、製備此類化合物 之方法、其治療與胰島素抗性相關的臨床病情之用途，其 治療用途之方法與包含其之醫藥組合物。 【先前技術】 胰島素抗性徵候群（IRS)包括第2型糖尿病，其意指—群 表徵，包括伴隨高胰島素血之胰島素抗性、可能之第2型 :尿病、動脈尚血壓、中央(内臟的)肥胖症、經觀測為具 渑亂之脂蛋白量的典型特徵為高量VLDL(極低密度脂蛋 白）、小的濃稠LDL顆粒盥栖吾夕Μητ ,古—― 不只孤/、低里之HDL(咼密度脂蛋白）濃度 之不良脂血症與減低之纖維蛋白分解。 最近的流行病學研突右途· > +趣 ρ „ 予所九有建立文獻，即具胰島素抗性之個 體’其心血管疾病之致病率盥 干/、双死手大大增加，更明顯地 糸惟患心肌梗塞與中風。在第_ 仕弟一孓糖尿病情形，動脈粥狀 化相關之病情造成所有死亡之8〇%。 在臨床醫學上，我們稂、、主姑女 而 我们很α楚有增加惟患IRS病人胰島素 感性’並因此修正經句、令总、皮 >、紅γ 、、心疋係k成動脈粥狀硬化進程加速 A不良脂血症的需求。麸而 α ; lL、， …、而，目刖此亚非舉世良好定義之 疾病。 下述之式c化合物之8_對掌體

200407114 乙氧基-3-〔4- (2- {4-甲烷磺醯氧苯基}乙氧基）苯 基〕丙酸揭示於PCT公告號碼W099/62872。據報導，此化 e物係過氧化物酶體增生劑_活化受體調節劑（ppAR，對 PPAR之回顧請參照 T M WiUs〇n等人，了 Med chern 2000, 第43卷，527頁）並具合併之ppar a /ppar 7激動劑活性 (結構（Structure)，2001，第 9卷，699 頁，P.Cronet 等人）。此 化合物可有效治療與胰島素抗性相關之病情。 驚人地’頃發現有一系列化合物係選擇性之PPAR α調 節劑。 【發明内容】 本發明提供式I化合物：

其中η為0、1或2， R1代表鹵基、視情形經一或多個氟取代之Ci_4烷基、視 情形經一或多個氟取代之Cl_4烷氧基，而且，當其中n為2 時’則取代基R1可以為相同或不同， R2代表未分枝之C2_7烷基，

R3代表Η或〇CH3，而 W代表0或S 及其醫藥可接受之鹽與前藥。 85777 200407114 式I化合物之R1、R2、R3與w之進一步詞意如下。應了 解此類詞意在此處前後之任一種定義、申請專利範圍或具 體實施例皆適用。 ' 在第一方面，R1為i基、Gw烷基或Cl_4烷氧基，而 0、1或2。特別是，當i時，Rl為氟、氣或三氟甲基。 特別是，當η為2時，R1為氟。 在第二方面，R2代表乙基或己基。 在第三方面，R3代表Η。 在第四方面，R3代表0Me。 在第五方面，W代表〇。 在第六方面，W代表S。 未分枝之CM烷基之用語，表示具有2至7個碳原子之直 鏈、飽和脂肪烴。該烷基之實例包括乙基、正丙基、正丁 基、正戊基、正己基與正庚基。 熟諳此藝者會了解，上述所用之阻斷的用語意指氧原子 係位於烷基鏈中，而且非為終端原子。當使用於專利申請 書時，“前藥，，之用語包括在哺乳類，尤其是人類會轉化： 羧酸基或其鹽或共輛體之羧酸基衍生物。應了解，儘管不 受：：所束缚’據相信，舆前藥相關之大部分活性係起源 於前藥將轉化成之式I化合物的活性。對熟諳此蓺者而 :’利用例行性方法製造前藥，就其能力範圍係易如反 掌。不同缓基之W藥係此藝所熟知。此類前藥之衍 實例請參照： '

Bundgaard，編者 a)前藥之設計（Design of pr〇drugs)，Η 85777 -9 - 200407114 (Elsevier，1985)與酶之方法（Methods in Enzymology) 42:309-396，Κ· Widder 等人編輯（Academic Press, 1985)， b) 樂物没什與發展教材（a Textbook of Drug Design and Development) Krogsgaard-Larsen與 H. Bundgaard，編 輯’第5章“前藥之設計與應用（Design and Application of Prodrugs)”，H. Bundgaard所編，113-191 頁（1991)， c) Η· Bundgaard，高級藥物傳送回顧（Advanced Drug Delivery Reviews)，8:1-38(1992)， d) Η· Bundgaard 等人，藥物科學雜誌、（Journal of Pharmaceutical Sciences)，77:285(1988)，與 e) N. Kakeya 等人，化學藥物公告（Chem Pharm Bull)， 32:692(1984) 〇 上述文獻a至e亦並列於本文供參考。 活體内可切斷之酯只是親代分子之前藥的一律型態。 式I化合物具有藥物活性，特別是，式I化合物係PPAR α之選擇性激動劑；亦即，其對於ppar α之EC5G比其對 於對應之PPAR r之EC5〇至少低4倍，較佳者係至少低1〇或 5 〇倍，其中該E C 5 g係如本文獻之稍後分析所述般加以測定 與計算。式I化合物具有強效性與選擇性。 本發明之特定化合物如下： 2-〔 2-(4- { 2-〔乙基（2-氟苄基）胺基〕-2-氧乙氧基}苯 基）乙氧基〕苯甲酸， 2-〔 2-(4- { 2-〔（2,4-二氟芊基）（庚基）胺基〕-2-氧乙氧 85777 -10- 200407114 基} -3 -曱氧苯基）乙氧基〕笨甲酸， 2-〔 2-(4- {2-〔（4_氣苄基）（乙基）胺基〕—2-氧乙氧義} 苯基）乙氧基〕苯甲酸， 2-〔 2-(4- { 2-〔乙基（4-三氟甲基芊基）胺基〕_2_氧乙气 基}苯基）乙氧基〕笨甲酸， + 2-〔 2-(4_ { 2-〔乙基（4-三氟甲基苄基）胺基〕_2 基}苯基）乙基硫基〕苯甲酸，與 2-〔 2-(4- { 2-〔（4-氯芊基）（乙基）胺基〕·2_氧乙氧基 本基）乙基硫基〕苯甲酸， 及其醫樂可接受之鹽類、溶劑合物與結晶型式。 在本專利申請書中，“醫藥可接受之鹽類，，的表示法係邦 要定義但並不限於諸如鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、銨鹽’、、想 性胺基酸之鹽與有基胺之鹽。 J"、驗

水合之溶 合型式。 本發明之某些化合物可能存在互變 本發明包括所有此類溶劑 能存在互變異構物。必箱

例如藉分段結晶、 、解旋或HPLC。 立體異購物可以藉分開 85777 -11 - 200407114 異構物混合物，例“坊、 能 3刀段結晶、HPLC或急驟層析而八 離。替代地，該活性#堂#〜 T而分 對旱體侍於不會造成消旋或異構化# 件下，由對掌性起妒铋袓 # G條 。材枓，糟對掌合成製造，或藉對掌性 試劑之衍生而盤：^ + ri 内。 衣乂。所有立體異構物皆包括在本發明範疇 【實施方式】 製備方t 亡’X月化口物可採如下概述製備。然而，本發明並不限 於适些方法’該化合物亦得如先前技藝所述之結構相關化 口物的衣去加以製傷。該反應可根據標準方法或如實驗部 分所述來進行。 二製備化合物可以令其Rl、r2、r3、·係如先前 之定義，而PG代表如標準課本“有機合成保護基 (Pr〇teCtiVe Groups in 〇rganic 4加1^仏），，，第2版（1991) Greene與Wuts編輯所述之羧基羥基保護基之式H化合物

與去保覆劑反應。该保護基亦得為諸如Wang樹脂或2 -氯三 笨甲基氯樹脂之樹脂。保護基可根據熟諳此藝者熟知之技 術加以去除。此類保護基之一係其PG代表c1-6烷氧基，或 例如苄基之芳烧氧基’使COPG可以代表酯。此類酯可以 85777 -12- 200407114 在例如THF與水之混合物的溶劑條件下與例如氫氧化鐘 之水解劑，或存在例如甲醇之Ci.3醇條件與氫氧化卸，於 〇_2〇0°C溫度範圍或微波爐輻射下反應，以生成式j化合 物。 欲製備式Π化合物可以令其R1、尺2與11係如先前定義之 式ΠΙ化合物或其例如鹽酸鹽之鹽類 (r'~CX_h

R

III 與其R、W與PG係如先前定義之式w化合物或其酸氯化物

於例如二氣甲、除+ & μ _ “ 70之h性溶劑、-25°C至15(TC範圍中反應， 並視情形含例如心二甲基胺基吡啶或1-乙基-3-(3-二甲基 胺基丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽。 欲製備式Π化人％ + 1 . G 口物亦可以令其PG係如先前定義之式v 化合物 85777 -13- 200407114

COPG V

HO 與其R1、R2、R3、W與n係如先前定義、而L代表甲基磺醯 氧基或例如溴之鹵素的離去基之式VI化合物

於0至1 50°C範圍中反應，並視情形於例如乙腈之溶劑中、 而且視情形於含例如碳酸鉀之鹼的條件。 .式ΙΠ、IV與V化合物可藉實例所述方法或根據熟諳此 藝者已知之方法加以製備。 式π、冚、XV與v化合物係製備式〗化合物之有用中 ]體據七這些化合物之某些係新穎的。新穎的式π或 式皿或式IV或式ν化合物在本文係做為本發明之進一步 方面提出專利申請。 本=明化合物可藉慣用技術由其反應混合物分離出 •、“此Α者會了解’爲以替代方法或在某些情形為 更方去取传本發明化合物，前此提及之個別反應步 85777 -14- 200407114 採不同次序進行；與/或該個別反應可以在整個路徑之不 同階段進行（亦即，可對與前此所述之特定反應相關聯的 不同中間體進行化學轉型）。 在任何前述製法中’必要時’經基、胺基或其他反應基 皆得利用如標準課本“有機合成保護基，，第2版（1991) 與Wuts編輯所述之保護基RP加以保護。該保護基亦 得為，諸如Wang樹腊或2•氯三苯甲基氯樹脂之樹脂。官能 土之保„蒦與去保濩可在本文前述之反應步驟前或後發 生。保護基可根據熟諳此藝者熟知之技術加以去除。 “惰性溶劑，，之表示法意指不會與起始材料、試劑、中間 體或產物’以會負面影響所需產物之產率的方式進行反應 之溶劑。 一 醫藥劑 本發明化合物正常地係以醫藥製劑型式，經由口服、非 内、肌内、皮下或其他可注射方式、頻、直腸、 二-皮與/或鼻腔路徑與/或經攝入，包括 由恶酸，即是醫藥可接受有 接又之有機或热機鹼加成鹽之活性成 刀的商樂可接受劑量型式。視 玖你a— . ，、奴冶療之病人與施用 卫疋，可以採不同劑量施用組合物。 本發明在料^時之適#日料為，㈣嶋」 克/么斤體重’以0.00HG毫克/公斤體重較佳。 二：調配物以鍵基或膠囊特佳，可利用熟諳此藝者孰知

之方法§周配，以提供活性化合物之 1 J 克範圍，例如1毫克、3毫克 一毛克-50〇耄 兄3先克5笔克、1〇毫克、25毫克、5〇 85777 -15- 200407114 毫克、100毫克與250毫克。 根據本發明之進一步方面，因此， 明化人你十甘『^ ，、知供包括任何本發 稀釋:,： 樂可接受衍生物，混合醫藥可接受佐劑、 稀釋劑與/或載體之醫藥調配物。 本式⑴化合物可用以預防與/或治療與先天性 :而編"夷島素之敏感性(胰島素抗性)相關之臨床病 =契相關之代謝病症（亦名為代謝徵候群）。這些臨床病 匕包括但不限於’一般性肥胖、腹部肥胖、動脈高血屋、 间胰島素企症、高血糖症、第2型糖尿病與胰島素抗性特 :會出現之不良脂血症。此不良脂血症，亦名為至粥瘤性 曰虫白It形其特徵為中等增高之非酯化脂肪酸、增高之

:含三苷油酯之極低密度脂蛋白(VLDL)顆粒、高Ap〇 B 里、與低apoAI顆粒量相關之低高密度脂蛋白量與 含小的、濃稠、低密度脂蛋白（LDL)顆粒表現型B時，出' 現之面Αρο B量。 經預期，本發明化合物可用以治療具有結合或混合高脂 血症或不同程度之高三苷油血症與飯後不良脂血症，有或 無其他代謝症候群之表徵。 據預期，因本化合物之抗不良脂血症與抗發炎性質，_ 其治療可降低與動脈粥狀硬化相關之心血管的致病率與 致死率。該心血管疾病病情包括造成心肌梗塞之不同内在 态g之巨觀血管病變、先天性心臟病、腦血管疾病與下肢 之週邊動脈不足。因其胰島素敏感化效果，我們亦預期式 85777 -16 - 200407114 !化合物可預防或延遲因代謝症候群 之繁-划播尽w 娘糖尿病所致 之弟…尿病的發展。因而， 造成之腎疾、視網膜損害虚下肢…f如微硯血官病變 之,ί®性古血播λ 4 、肢达血官疾病等與糖尿病 化合物可能具有治療心也管=卜之…遲。甚且，該 抗性相關的不同病情之用途H夕=不論是否與姨島素 胖症、癌症與包括諸如、、w = 4 d生即巢症候群、肥 全森氏症盍夕^ 認知傷害、阿兹海默症、巴 t秫氏症與夕發性硬化症之 狀態。 f、、二、化性疾病的發炎疾病 據預期，本發明务人‘ -Γ m 糖量。 月化“勿可用以控制第二型糖尿病患之血 本發明提供治療或子g JJ方 ^ ^ ^ , 一 、 良月日血症、胰島素抗性徵候群 與/或诸如上述之代謝病症 ^ Φ ^ ^ )之方法，包括施予 而要之#礼類（特別係人類）式I化合物。 本發明提供治療或預防第- 兩搪尿病之方法，包括施予 而要之南礼類(特別係人類)_有效量之式!化合物。 途在進—步方面，本發明提供式1化合物做為醫藥之用 島本發明提供式1化合物做為製造治療騰 山素抗性與/或代謝病症的醫藥之用途。 t _併療法 本發明化合物可纟士人苴仙 j…其他可用以治療與諸如高血壓、高 “：：：良脂血症、糖尿病與肥胖症等動脈粥狀硬化發 、程相關之疾病的治療藥劑。本發明化合物可組合直 85777 -17- 200407114

一為醣祿（acarbose)或福利波（v〇 ▽ 空分成飯珂血糖調節劑 匍萄糖苷酶抑制劑的實例之 』波（voglibose)或米立拢 (miglitol)。飯前血糖調節劑之實例為諾和隆錠 (repaglinide)或那塔利乃（nateglinide)。 在本發明之另一方面，式I化合物或其醫藥可接受之 鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥，可合併另外之 PPAR調節劑施用。PPAR調節劑包括但不限於，ppARa與

/或7激動劑’或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽 之溶劑合物或前藥。適當之PPAR α與/或r激動劑，或其 醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥係 此藝所熟知者。這些包括下列所述之化合物，WO 01/12187、WO 01/12612、WO 99/62870、WO 99/62872、 WO 99/62871、WO 98/57941、WO 01/40170、J Med Chem， 1996，39，665、對治療專利的專家意見（Expert Opinion on Therapeutic Patents)，10(5)，623-634(特別是專利申請書 第634頁所列的化合物）與J Med Chem，2000，43，527，其 -18 - 85777 200407114 並列於本文供參考。特別是針對NN622/拉格利沙 (Ragaglitazar)、BMS 298585、WY-14643、氯貝特 (clofibrate)、非諾貝特（fenofibrate)、杯沙貝特 (bezafibrate)、吉非貝齊（gemfibrozil)與環丙貝特 (ciprofibrate)、GW95 78、西格利容（ciglitazone)、搓格利 容（troglitazone)、拍格利容（pioglitazone)、梵帝雅 (rosiglitazone)、伊格利容（eglitazone)、坡格利容 (proglitazone)、BRL-49634、KRP-297、JTT_501、SB 213068、GW 1929、GW 7845、GW 0207、L-796449、 L-165041與GW 243 3之PPAR α與/或γ激動劑。特別是針 對（S)-2-乙氧基-3-〔 4-(2- { 4-甲烷磺醯氧基苯基}乙氧 基）-苯基〕丙酸及其醫藥可接受之鹽的PPARa與/或γ激 動劑。 此外，本發明之合併可與磺醯基尿素聯合使用，例如： 瑪爾胰（glimepiride)、糖必鎮（glibenclamide(glyburide))、 克糖寧（gliclazide)、泌樂得（glipizide)、糖瑞平 (gliquidone)、氣坡胺（chloropropamide)、曱糖宜 (tolbutamide)、戴美樂（acetohexamide)、糖派麥 (glycopyramide)、卡布麥（carbutamide)、格伯奴來 (glibonuride)、格利縮色（glisoxepid)、格布賽挫 (glybuthiazole)、格里布挫（glibuzole)、袼來賽麥 (glyhexamide)、格來嘧咬（glymidine)、格來必麥 (glypinamide)、芬布特麥（phenbutamide)、妥賽、萬 (tolcylamide)與妥拉邁（tolazamide)。該磺酿基尿素以碼爾 85777 -19- 200407114 胰或糖必鎮較佳。該石黃酸基尿素以瑪爾騰更佳。因而，本 發明包括施用本發明化合物聯合一、二或多種之此段所述 之’口療。其他存纟之治療第二型_尿病的劑量及其相關之 併發症的劑量係此技藝所熟知，且係如fda之主管單位批 准其用途，並可能在FDA出版之橘皮書發現者。因為此組 合衍生之利益，故可能使用替代之較少的劑量。本發明亦 包括本發明化合物加上降膽固醇藥。本專利申請所參考之 降膽固醇藥包括但不限於，HMG{gA還原酶抑制劑（3 一幾 基-3-甲基戊二醯基-輔酶A還原酶）。適當2Hmg_c〇a還原 酶抑制劑係選自由下列之群所組成之抑制素：阿托發司他 /1 (atorvastatin)、倍發司他、;丁（bervastatin)、西利發司他汀 (cerivastatin)、阿托發司他汀（daivastatin)、益脂可 (fluVastatin)、依他發司他汀（itavastatin)、洛發司他汀 (lovastatin)、昧發司他、;丁（mevastaun)、尼科司他汀 (niC〇Statln)、尼發司他汀（nivastatin)、普發司他汀 (pravastatin)與默沙東（simvastatin)或其醫藥可接受之 鹽，尤其是鈉鹽或鈣鹽，或其溶劑合物，或此類鹽之溶劑 合物。有一種特別之抑制素係阿托發司他汀，或其醫藥可 接叉之鹽，溶劑合物，此類鹽之溶劑合物或前藥。有一種 更特別之抑制素係阿托發司他汀之鈣鹽。然而，有一種特 佳之抑制素係具下列化學名稱之化合物：（E)-7-〔 4-(4-氣 笨基）_6-異丙基-2-〔甲基（甲基石黃it基）-胺基〕^密唆-5 -基〕 (3R，5S)-3,5-二羥基庚-6-烯酸〔亦名為（e)_7-〔 4-(4-氟笨 基）-6-異丙基_2_〔，甲基甲基磺醯基）_胺基〕-嘧啶_5_ 85777 -20- 200407114 基〕（3R，5S)-3,5-二羥基庚-6-烯酸〕或其醫藥可接受之 鹽’或其溶劑合物，或此類鹽之溶劑合物。化合物（Ε)-Τ-ΐ； 4-(4-氟苯基>6_異丙基 _2- 〔甲基（ 甲基磺醯基胺基〕 _ 嘧啶-5-基〕（3R，5S)-3,5-二羥基庚-6-烯酸及其鈣與鈉鹽揭 示於歐洲專利申請公告號碼EP-A-052 1471，以及生物有機 與醫樂化學（Bioorganic and Medicinal Chemistry)，（1997), 5(2), 437-444。此後面的抑制素現在以一般名稱雷蘇發司 他>丁（rosuvastatin)為人所熟知。 在本申請中，“降膽固醇藥”亦包括不論活性或不活性之 HMG-C〇A還原酶抑制劑之化學修飾，諸如酯、前藥與代 謝物。 本發明亦包括本發明化合物加上例如克雷地坡 (colestipol)或消膽胺（cholestyramine)或克雷塔結 (cholestagel)之膽酸分離劑。 本發明亦包括本發明化合物合併一種迴腸之膽酸輸送 系統抑制劑（IB AT抑制劑）。 具IBAT抑制活性之適當化合物的說明請參照例如下列 所述之化合物：WO 93/16055、WO 94/18183、WO 94/18184、 WO 96/05188、WO 96/08484、WO 96/16051、WO 97/33882、 WO 98/07449、WO 98/03818、WO 98/38182、WO 99/32478、 WO 99/35135、WO 98/40375、WO 99/35153、WO 99/64409、 WO 99/64410、WO 00/01687、WO 00/47568、WO 00/61568、 WO 00/62810、WO 01/68906、DE 19825804、W0 00/38725、 WO 00/38726、WO 00/38727、WO 00/38728、WO 00/38729、 85777 -21 - 200407114 WO 01/68906、WO 01/66533、WO 02/32428、WO 02/50051、 EP 864 582、EP 489423、EP 549967、EP 573848、EP 624593、 EP 624594、EP 624595與EP 624596，而且這些專利申請之 内容並列於本文供參考。 適用於本發明之特別類的IBAT抑制劑為苯畊硫呼，而 申明專利範圍，特別是WO 00/01687、WO 96/08484及WO 97/33882申請專利範圍第一項所述之化合物亦並列於本 文供參考。其他適當類之比…抑制劑為丨，2_苯畊硫雜氮 呼、丨，4—苯畊硫雜氮呼與丨，5_苯畊硫雜氮呼。進一步之適 當類的IBAT抑制劑為丨，2,5_苯畊硫雜二氮呼。 有種八有1BAT抑制活性之適當的化合物為 ㈣，叫^丁基」·乙基_la_二氧離子基_5_苯基^3 a 四氫1，4苯井硫雜氮呼_8_基冷_d_哌喃葡萄糖苷醛酸（Ep 864 582)。其他適當之IBAT抑制包括下列之一： 丄，卜 ^ -3,3 ,— :丁基巧-苯基_7_曱基硫基-8-d 广 ^ 〔 # -(羧甲基）胺甲醯基〕甲基丨胺甲醯 土甲氧基:）2,3,4,5_四氫_i，5_笨口井硫雜氮呼， 1，1_二氧 _3,3-二丁基 _5_ 苯基 _7_ 甲基硫基 _8_(k (r) + 〔AT-(叛曱基）胺甲醯基〕甲酿基甲氧 基:^口/^-四氫-丨乃-苯畊硫雜氮呼， 1 ’ 1- '一 氧-3 3- - 丁 装 ^ ^ —丁基-5-本基-7-甲基硫基_8_(尽 { (R)-1’-苯基十·〔K2-續酸基乙基）胺甲醯基〕曱基} 胺甲醯基：氧基卜2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1-一氧丁基_3_乙基_5_笨基曱基硫基 85777 -22- 200407114 { (R)-l’ -苯基- l’-〔 A^'-(2 -石黃酸基乙基）胺甲驢基〕甲基} 胺甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8-(7V- { (R)-a -〔Υ ’ - ( 2 -石黃酸基乙基）胺甲酸基〕-4 -經卞基}胺甲酿基甲 氧基）-2,3,4,5_四鼠-1，5-苯。井硫雜氮呼， 1，1-二氧-3 - 丁基-3-乙基-5 -苯基-7-甲基硫基-8-(#-{ (R)-a -〔 7V\(2-磺酸基乙基）胺甲醯基〕-4-羥苄基}胺 甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1,1--一氧-3 - 丁基-3 -乙基-5 -笨基-7 -甲基硫基-8-(7\^_ { (R)-a -〔 ΑΤ-(2-羧乙基）胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基甲氧 基）-2,3,4,5_四氫-1，5_苯畊硫雜氮呼， 1，1 --一 氧-3，3 -二丁基-5 -苯基-7 -甲基硫基· 8 - (iV- { (R) - ci! -〔7V’-(2-羧乙基）胺甲醯基〕4-羧苄基}胺甲醯基甲氧 基）-2,3,4,5-四氫-1,5-苯畊硫雜氮呼， 1，1-二氧-3-丁基-3-乙基-5-苯基-7-甲基硫基-8-(7\^_ { (R)-a -〔 ΛΤ-(5-羧戊基）胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基甲氧 基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8-(7V- { (R)-a -〔羧乙基）胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基甲氧 基）_2,3,4,5_四氫-丨^^-苯"7井硫雜氮呼， 151"-一 乳-3，3 - -一丁基-5 -苯基-7 -甲基硫基-8 - (7V- { (2 _ 〔ΑΤ-(2-磺酸基乙基）胺曱醯基〕-2-氟芊基}胺甲醯基甲 氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1-二氧-3 - 丁基-3-乙基-5 -苯基-7-甲基硫基-8-(TV- -23 - 85777 200407114 { (R)-a -〔 AT-(R)-(2-羥基-1-羧乙基）胺甲醯基〕苄基}胺 甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1,1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7 -甲基硫基- { (R)· α -〔A^-(R)-(2-羥基-1-羧乙基）胺甲醯基〕芊基}胺甲醯基 甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-曱基硫基-8-{#-〔（1〇_ a -(TV、{ (R)-l-〔 N”_(R)-(2-羥基-1-羧乙基）胺甲醯基〕-2-羥乙基}胺甲醯基）芊基〕胺甲醯基甲氧基} -2,3,4,5-四氫 -1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1 --一氧-3 - 丁基-3 -乙基-5 -苯基-7 -甲基硫基-8 - (TV- { ck -〔(羧曱基）胺甲醯基〕芊基}胺甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5 -苯呼硫雜氮坪， 1,1 ~ 氧-3 - 丁基-3 -乙基-5 -苯基-7 -甲基硫基-8 - (iV- { ck -〔ΛΤ-((乙氧基）（甲基）磷醯基-甲基）胺甲醯基〕苄基}胺 甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 151 ~ -一氧-3 - 丁基-3 -乙基-5 -苯基· 7 -甲基硫基-8-{7\^ 〔（R)- α -(ΛΤ- { 2-〔（羥基）（甲基）磷醯基〕乙基}胺甲醯 基）苄基〕胺甲醯基甲氧基} -2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮 口平 ， 1，1 --—氧-3，3 -二丁基-5 -苯基-7 -甲基硫基-8 - (iV- { (R) --〔TV ’- (2-甲基硫基-1-魏乙基）胺甲酿基〕爷基}胺甲酿基 甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1 --—氧-3，3 -二丁基-5 -苯基-7 -甲基硫基-8 - { iV-〔（ R)-α -(#’- { 2- 〔 （ 曱基 ）（ 乙基）磷 醯基〕 乙基 } 胺 曱醯基 ）-4_ 85777 -24- 200407114 羥苄基〕胺甲醯基甲氧基} -2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮 呼 ， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8-{#-〔（幻-α -(Λ^- { 2-〔（曱基）（羥基）磷醯基〕乙基}胺甲醯基）-4-羥苄基〕胺甲醯基甲氧基} -2,3,4,5-四氫-1,5-苯畊硫雜氮 呼 ， 1，1 -二乳-3，3 -二丁基-5 -苯基-7 -甲基硫基 _ 8 · (TV- { (R) - 〇! -〔甲基亞石黃基-1 -竣乙基）胺甲驢基〕卞基} 胺甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1 -二氧-3，3 -二丁基-5 -苯基-7 -甲氧基-8 -〔 TV- { ( R) - (2 _ 〔ΑΤ-(2-磺酸基乙基）胺甲醯基〕4-羥苄基}胺曱醯基曱氧 基〕-2,3,4,5-四氫-1，5-苯畊硫雜氮呼， 1，1 --一 氧-3，3 -二丁基-5 -苯基-7-曱基硫基- { (R)-ck -〔AK(R)-1-羧基-2-甲基硫基-乙基）胺甲醯基〕-4-羥苄基} 胺甲醯基甲氧基）-2,3,4,5·四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基_5_ 苯基-7-甲基硫基-8-(7V- { (R)-a -〔7V-((S)-1-魏基- 2- (R)-經丙基）胺甲酿基〕4-經爷基}胺 甲醯基曱氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1 - ^—氧 _ 3，3 -二丁基-5 -苯基-7 -甲基硫基 _ 8 - (TV- { (R) - 6K -〔TV- ((S)-l -魏基-2-曱基丙基）胺甲酿基〕-4-¾字基}胺曱 醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8_(7V- { (R)-a -〔7V-((S)-1-羧丁基）胺甲醯基〕-4-羥苄基}胺甲醯基曱氧 基）_2,3,4,5-四氳-1，2,5-苯"?井硫雜二氮呼， 85777 -25- 200407114 1，1 -二氧-3，3 -二丁基-5-苯基-7-甲基硫基- { (R)-ck -〔7V-((S)-1-羧丙基）胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基曱氧 基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯_硫雜二氮呼， 1，1 -二氧·3，3-二丁基-5苯基-7-甲基硫基- { (R)-ck -〔7V-((S)-1-羧乙基）胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基甲氧 基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1 - 一 氧-3，3 -二丁基-5 -笨基-7 -甲基硫基-8 - (TV- { (R) - ci! -〔7V-((S)-1-羧基-2-(R)-羥丙基）胺甲醯基〕芊基}胺甲醯 基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1·二氧 _3,3_二丁基-5-苯基 甲基硫基-8-(7V- { (R)-a -〔7V-(2-磺酸基乙基）胺甲醯基〕-4-羥苄基}胺曱醯基甲 氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3，3 -二丁基-5-苯基-7-曱基硫基- 8- (7V- { (R)-ck -〔7V-((S)-1-羧乙基）胺甲醯基〕-4-羥苄基}胺甲醯基曱氧 基）_2,3,4,5_四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 151 ~ -乳-3，3 -二丁基-5 -本基-7 -甲基硫基-8 - (TV- { (R) - ck -〔iV-((R)-1-魏基-2-曱基硫基乙基）胺甲酿基〕节基}胺甲 醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8-(，{(11)-« -〔〔 #((S)-2-羥基-1-羧乙基）胺曱醯基〕丙基} 胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基曱氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8_(，{(1〇-« -〔7V-((S)-1-羧基-2-曱基丙基）胺甲醯基〕苄基}胺甲醯基 85777 -26- 200407114 曱氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯嗜硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7_甲基硫基-8-(#-{(11)-〇: -〔AK(S)-1-羧丙基）胺甲醯基〕-4-羥苄基}胺甲醯基甲氧 基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8-[#-((11/8)-α - {AKl-(R)-2-(S)-l-羥基-l-(3,4-二羥苯基）丙-2-基]胺甲 醯基}-4-羥苄基）胺曱醯基甲氧基〕-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯 畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲基硫基-8-(TV- { (R)-a -〔7V-(2-(S)-3-(R)-4-(R)-5-(R)-2,3,4,5,6-五羥基己基）胺甲 醯基〕-4-羥苄基}胺甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫雜二氮呼， 1，1-二氧-3,3-二丁基·5-苯基-7-甲基硫基-8-(7V- { (R)-a -〔iV_(2-(S)-3-(R)-4-(R)_5-(R)-2,3,4,5,6-五羥基己基）胺甲 醯基〕苄基}胺甲醯基甲氧基）-2,3,4,5-四氫-1，2,5-苯畊硫 雜二氮呼， 或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前 藥。 根據本發明之另外一個方面，其提供一種合併療法，包 括施予有效量之式I化合物，或其醫藥可接受之鹽、溶劑 合物、此類鹽之溶劑合物或前藥；視情形加上醫藥可接受 之稀釋劑或載體，同時、依序或分開地施予選自下列之一 或多種藥劑： CETP(膽固醇酯轉移蛋白）抑制劑，例如比於 85777 -27- 200407114 WO 00/38725第7頁22行_第1〇頁第17行所參考與說明者， 其並列於本文供參考， 膽固醇吸收拮抗劑，例如氮咀酮諸如SCH 5 8235與彼於美 國專利號碼5,767，115所說明者，其並列於本文供參考， MTP(微粒體轉移蛋白）抑制劑，例如彼於科學 (Science)，282，75 1-54，1998所說明者，其並列於本文供 參考， 菸鹼酸衍生物，包括緩慢釋放與組合產物，例如菸鹼酸 (niacin)、脂倍坦（acipimox)與奈西瑞妥（niceritr〇1)， 植物固醇化合物，例如植物酯（stan〇ls)， 匹洛布克（probucol)， 抗肥胖症化合物，例如羅氏鮮（〇rlistat)(Ep 129,748)與諾 美婷（sibutramineKGB 2,1 84,1 22與美國專利號碼 4,929,629)， 抗高血壓化合物，例如血管收縮素轉化酶（八(：]£)抑制劑、 血管收縮素Π受體拮抗劑、腎上腺素阻斷劑、α -腎上腺 素阻斷劑、/3 -腎上腺素阻斷劑、混合之α /沒腎上腺素阻 斷劑 '腎上腺素刺激劑、飼通道阻斷劑、AT-1阻斷劑、利 尿鹽劑、利尿劑或血管擴張劑， CB1拮抗劑或逆激動劑，例如w〇 01/70700與EP 65635所 述者， 阿斯匹靈， 黑色素濃縮激素（MCH)拮抗劑， PDK抑制劑，或 85777 -28- 200407114 細胞核受體調節劑，例 釗例如 LXR、FXR、RXR與 ROR α， 或其醫藥可接受之鹽、溶添 _ Μ合物、此類鹽之溶劑合物或前 藥，加上對諸如人類之需卜 而此類治療的溫血動物之醫藥可接 受之稀釋劑或載體。 特別之ACE抑制劑或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物此 類鹽之溶劑合物或前藥’包括可合併式I化合物-起使用 之活性代謝物但不限於下列化合物： 阿樂賽普（alacepril)、阿樂催普（alatri〇prU)、阿提普 (altiopril)約、女可凡尼（抓⑶πηίη)、斑那赛普 (benazepril)、斑那赛普鹽酸鹽、斑那賽普勒 (benazeprilat)、苄醯基酼曱丙脯酸（benz〇ylcapt〇prii)、巯 曱丙脯酸（captopril)、酼甲丙脯酸_半胱胺酸、巯甲丙脯酸 -榖胱苷肽、西拉諾普（ceranopril)、西洛那普（cer〇napril)、 西樂扎普（cilazapril)、西樂扎普勒（cilazaprilat)、地勒普 (delapril)、地勒普_二酸、伊那拉普利（enalapH1)、伊那拉 普利勒（enalaprilat)、易諾利（enapril)、外魏曱丙脯酸 (epicaptopril)、氣若西麥新（foroxymithine)、福絲非語普 (fosfenopril)、福色那普（fosenopril)、（fosenopril納）、福 辛諾普（fosinopril)、福辛諾普鈉鹽、福辛諾普勒、福辛諾 普酸、格來科普（glycopril)、西莫芬（hemorphin-4)、依德 拉普（idrapril)、依米達普（imidapril)、因朵勒普 (indolapril)、因朵勒普勒（indolaprilat)、利本札普 (libenzapril)、利辛諾普（lisinopril)、來修敏（ly ciumin)A、 來修敏B、蜜山普（mixanpril)、膜西普（moexipril)、膜西 85777 -29- 200407114 普勒（moexiprilat)、膜非第普（moveltipril)、木拉辛 (muracein)A、木拉辛B、木拉辛C、喷拢普（pentopril)、陪 琳多普（perindopril)、陪琳多普勒（perindoprilat)、匹伐洛 普（pivalopril)、匹佛普（pivoprii)、奎那普（quinaprii)、查 那普鹽酸鹽、奎那普勒（quinaprilat)、拉米普（ramipril)、 拉米普勒（ramiprilat)、斯匹拉普（spirapril)、斯匹拉普鹽 酉夂鹽、斯匹拉普勒（spiraprilat)、斯匹若普（spiropril)、斯 匹若普鹽酸鹽、特莫卡普（temocapril)、特莫卡普鹽酸鹽、 特普洛太（teprotide)、川多拉普（trandolaprU)、川多拉普 勒（trandolaprilat)、屋提八普（utibapril)、扎比西普 (zabicipril)、扎比西普勒（zabicipriiat)、舟芬諾普 (zofenopril)與舟芬語普勒（zofen〇priiat)。本發明所用之較 t ACE抑制劑為拉米晋、拉米普勒、利辛諾普、伊那拉普 利與伊那拉普利勒。本發明所用之更佳ace抑制劑為拉米 普與拉米普勒。 合併式I化合物使用之較佳的血管收縮素π拮抗劑、其 醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥， 包括但不限於下列化合物：坎得沙坦（candesartan)、坎得 沙坦西勒斯帝（candesartan cilexetil)、可悅您（i〇sartan)、 得安穩（Vaisartan)、厄貝沙坦（irbesartan) '他索沙坦 (tasosartan)、泰米沙坦（teimisartan)與伊普沙扭 (eprosartan)。本發明所用之特佳的血管收縮素n拮抗劑或 其醫藥可接受之衍生物為坎得沙坦與坎得沙坦西勒斯β帝/。 因而，在纟發明之另夕卜的特徵，其$供需㈣療第二$ 85777 -30- 200407114

糖尿病及其相關併發症之諸如人類的溫血動物此類治療 方法，包括施予該動物有效量之式I化合物或其醫藥可接 受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥·，同時、依 序或分別施予有效量之一種在此合併部分所述之其他化 合物，或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合 物或前藥。 因而，在本發明之另外的特徵，其提供需要治療高脂血 症之諸如人類的溫血動物此類治療方法，包括施予該動物 有效量之式I化合物或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此 類鹽之溶劑合物或前藥；同時、依序或分別施予有效量之 一種在此合併部分所述之其他化合物，或其醫藥可接受之 鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥。 根據本發明之進一步方面，其提供醫藥組合物，包括式 I化合物或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑 合物或前藥，與一種在此合併部分所述之其他化合物，或 其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前 藥，加上醫藥可接受之稀釋劑或載體。 根據本發明之進一步方面，其提供套組，包括式I化合 物或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或 前藥，與一種在此合併部分所述之其他化合物，或其醫藥 可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥。 根據本發明之進一步方面，其提供套組，包括： a)第一種單位劑量型式之式I化合物，或其醫藥可接受 之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥， -31 - 85777 200407114 b) 第二種單位劑量型式之在此合併部分所述之一種其 他化合物，或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽 之溶劑合物或前藥，與 c) 包含該第一或第二種劑量型式之容器裝置。 根據本發明之進一步方面，其提供套組，包括： a) 第一種單位劑量型式之式I化合物，或其醫藥可接受 之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥，加上醫 藥可接受之稀釋劑或載體， b) 第二種單位劑量型式之在此合併部分所述之一種其 他化合物，或其醫藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽 之溶劑合物或前藥，與 c) 包含該第一或第二種劑量型式之容器裝置。 根據本發明之另一個特徵，其提供式I化合物、或其醫 藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥，與 一種在此合併部分所述之其他化合物，或其醫藥可接受之 鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥於製造用於治療 諸如人類之溫血動物的代謝症候群或第二型糖尿病及其 相關併發症之醫藥的用途。 根據本發明之另一個特徵，其提供式I化合物、或其醫 藥可接受之鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥，與 一種在此合併部分所述之其他化合物，或其醫藥可接受之 鹽、溶劑合物、此類鹽之溶劑合物或前藥於製造用於治療 諸如人類之溫血動物的高血脂症之醫藥的用途。 根據本發明之進一步方面，其提供合併療法，包括··施 85777 -32- 200407114 予有效量之式I化合物，或其醫藥可接受之鹽、溶劑合 物、此類鹽之溶劑合物或前藥，視情形加上醫藥可接受之 稀釋劑或載體；同時、依序或分別施予有效量之一種在此 合併部分所述之其他化合物，或其醫藥可接受之鹽、溶劑 合物、此類鹽之溶劑合物或前藥，視情形加上需要此類治 療之諸如人的溫血動物之醫藥可接受之稀釋劑或載體。 操作實例 1H NMR 與 13C NMR 測定係在 Varian Mercury 300 或 VarianUNITYplus 400、500或600分光光譜儀中進行，分 別於1Η頻率300、400、500與600 MHz，與分別於13C頻率 75、100、125及150 MHz中操作。測定係以得爾他（5 )規 格進行。 除非有其他說明，化學轉移係以ppm表示，並以溶劑為 内在標準。 縮寫 IRS 胰島素抗性徵候群 TLC 薄層色層分析法 HOBT 1-羧基苯并三唑-水合物 DIBAH 氫化二異丁基鋁 DMSO 二甲亞颯 EtO Ac 乙酸乙酯 DMF 尾，二甲基甲醯胺 THF 四氫吹喃 HPLC 高效液相層析 85777 -33 - 200407114

MeCN TFA Pd/C HATU DCM TBTU DIPEA DMAP Trisamine ISOLUTE®FLASH LC-MS RT t s d q qvint m br 85777 乙腈 三氟乙酸 於活性碳中之鈀 0-(7-氣雜-苯弁二挫-1-基） -N，N，N’，N’-四曱基銖六氟磷酸塩 二氯甲烷 0-(苯并三唑-1-基）_N，N，N’，N’_ 四甲基錁四氟硼酸迄 iV，JV-二異丙基乙胺 4-二甲基胺基吡啶 參（羥甲基）胺基甲烷

Si係適於層析之矽管柱聚合物支持上之 氫侧化物係購自Aldrich之Amberlite IRA-400上之氫硼化物 液相層析-質譜儀 室溫 三峰 單峰 四峰 五峰 多峰 寬 -34- 200407114 bs 寬單峰 dm 雙重多峰 bt 寬三峰 dd 雙重雙峰 實例1 a) 兔三丁基-丄M2·經乙羞）笨氣篡1 λ醢蜎 令溶於乙腈（25毫升）之4_(2-羥乙基）紛（3 ·8毫升，25.834 毫莫耳）、碳酸斜（7_085克，51.267毫莫耳）與溴乙酸第三 丁醋（5.000克，25_834毫莫耳）之混合物迴流煮沸16小時。 減壓蒸發溶劑。溶殘渣於EtOAc，並以鹽液與水洗、經

MgSCU脫水並減壓蒸發以生成所需產物（6 〇〇克、產率 92.8%) 〇 1H-NMR(400MHz, CDC13)： 1.52(s, 9H)? 2.98(t? 2H)? 3.46(t? 2H)，4.92(s, 2H)，6·89_6·97(ιη，4H)。 b) 差...三丁基（4- { 2-〔（甲基碏醯某）氧基]乙基}笨氧基） 乙酸酯 溶第三-丁基〔4-(2·羥乙基）苯氧基〕乙酸酯（6.000克， 23.781毫莫耳）與三乙胺（9.9毫升，71.341毫莫耳）於DCM。 令混合物冷卻至-1 〇°C，並逐滴添加甲烷磺醯氣（2 _ 8毫升， 3 5.671毫莫耳）入該混合物。令反應混合物達室溫，並授 拌16小時。以DCM稀釋該混合物。令有機層經水、鹽液與 〇·3莫耳濃度KHSO4洗過，經MgSCU脫水並減壓蒸發。取得 7·5克淡黃色結晶（產率95.5%)。 lU NMR(400MHz? CDCI3)： 1.52(s9 9H)? 2.98(t, 2H)? 3.1〇(s? 85777 -35- 200407114 3H)，3.46(t，2H)，4.92(s，2H)，6.89_6.97(m，4H)。 c) 甲基2-〔 4-(2-第三丁氡基-2-氣乙氯基）笨某〕乙I 革}笨甲酸 令柳酸甲酯（2.7毫升，21.187毫莫耳）溶於乙腈，並添加 石炭酸鉀（5.856克，42·3 73毫莫耳）。令混合物冷卻至- i〇°c， 然後添加第三丁基-(4- { 2-〔（甲基磺醯基）氧基〕乙基} 苯氧基）乙酸酯。令該混合物迴流煮沸1 6小時，然後，減 壓蒸發溶劑。溶殘渣於EtOAc，並以水與鹽液洗，然後， 令有機層經MgSCU脫水並蒸發去除溶劑。令粗材料經急驟 層析（矽膠60 0.0 04-0_063mm)純化，以EtOAc:甲苯50:5 0為 溶離液。收集含所需產物部分，並蒸發溶劑。此生成5.〇 克純的產物（產率61.1%)。 !H NMR(400MHz? CDC13)· 1.48(s? 9H)? 3.08(s5 3H)? 3.87(t? 2H)，4.18(t，2H)，4.49(s，2H)，6.84(d，2H)，6.90_6.98(m， 2H)，7·20-7·26(πι，2H)，7.38-7.43(m，1H)，7.7(dd，1H)。 d) (4- { 2-〔 2-(甲氧羰基）苯氧基1乙基}茉氧基）乙酸 溶甲基2-{2-〔 4-(2 -第三丁氧基-2-氧乙氧基）苯基〕乙 氧基}苯甲酸酯（0_400克，1.035 1毫莫耳）於DCM，並添加 三氟乙酸（0.8毫升，8.281毫莫耳）。令混合物於室溫攪拌3 小時。蒸發溶劑，生成3 2 5毫克白色粉末。 ^ NMR(600MHz? CDC13)： 3.08(t5 2H)? 3.86(s? 3H)9 4.18(t? 2H)，4.64(s，2H)，6.84-6.96(m，4H)，7.23(d，2H)，7.37-7.42 (m，1H)，7.75(dd，1H)。 e) 1基2-〔2二(4-{2-〔乙基丄2_氟芊基）胺基1-2_氡乙氣^ 85777 -36- 200407114 笨基）乙氯某〕-笨曱醢酯 溶（4- { 2-〔 2-(甲氧羰基）苯氧基〕乙基}苯氧基）乙酸 (0.200毫克，0.605毫莫耳）於DMF，並於冰浴冷卻。添加 ’（2 -氟爷基）乙胺（〇·1〇2 克，〇·666 毫莫耳）、TBTU(0.2 14 克，0.666¾莫耳）與DIPEA(0.22毫升，1.271毫莫耳）。令 反應混合物於室溫攪拌1 6小時。添加Et〇Ac，並以兩份之 20¾升NaC〇3(飽和）洗有機相。令有機層經MgS〇4脫水， 並蒸發去除溶劑。令粗產物經製備HPLC純化（由乙腈/緩衝 液60/40開始’然後於25分鐘内增加乙腈濃度至1〇〇%，緩 衝液為乙腈/水10/90與乙酸銨（〇」莫耳濃度）混合物、 KR_l〇〇-7-C8管柱、50* 500、流速80毫升/分鐘）。冷凍乾 燥後’可得M5毫克所需產物（產率711%)。 H NMR(400MHz，CD3CO)(旋轉異構體）：1 〇8，i 17(t，t， 3H)，2.96(s5 3H)，3.07( m，2H)，3.31，3.36(m，2H)，4.21(m， 2H)，4.85(s，2H)，4.56-4.82(m，2H)，6.18(d，lH)，6.88-7.06(m，3H)，7.18-7.35(m，6H)，7.42(m，1H)，7.70(d，1H)。 f) L-〔 2_(4-{?-·〔乙基（2_氟苄基一）胺基1 _2_氳乙氣篡}苯某、 氧基〕苯甲酸 將甲基2-〔 2-(4-{2-〔乙基（2-氟苄基）胺基〕_2_氧乙氧 基}苯基）乙氧基〕苯曱酸酯（〇·2〇〇克，〇·ιΐ5毫莫耳）溶於 放在Smith synthesiser的小瓶中之3毫升THF，然後，將1·5 毫升水與氫氧化鋰（0.032克，1.335毫莫耳）加至該小瓶。 將該小瓶蓋上蓋子，並放在微波爐（Smith synthesiser)。 然後’將該反應加熱至150°C經6分鐘。根據LC-MS顯示該 85777 -37- 200407114 反應已完成。蒸發溶劑。溶殘渣於乙醚（3 0毫升），並以 NaHC03(飽和）（2><20毫升）洗。以2莫耳濃度HC1將鹼性水層 酸化至pHl。令水層經三份20毫升之DCM萃取、合併，脫 水並蒸發，生成1 60毫克純的所需產物。 iH-NMRGOOMHz，CD3C0)(旋轉異構體）·· 1.07，1.15(t，t， 3H)，3.10(m，2H)，3.30，3.36(m，m，2H)，4.21(m，2H)， 4.55-4.67(m，2H)，4.90(s，2H)，6.20(d，1H)，6.87-7.06(m， 3H)，7·18-7·35(ιη5 6H), 7.40(m，1H)，7.70(d, 1H)。 實例2 a) ϋ. -#-(2,4-二氟芊某W-庵篡匕醯脸 溶7V-(2,4-二氟苄基庚胺（2〇〇4克，8.304毫莫耳）於 DCM(30毫升）。然後，於冰浴冷卻。添加三乙胺（1〇92克， 10.796毫莫耳），然後為氣化溴乙醯（1438克，9135毫莫 耳）°令混合物攪拌2小時（冰浴）。然後經水（額外加上1% 氫氯酸、pH〜3)水與鹽液洗過，並經脫水（硫酸鎂）與蒸發。 溶粗產物於DCM，然後負載於管柱（ISOLUTE® SI，5克/25 *升）’並經更多DCM溶離。取得2.412克油產物，產率 80% 〇 lji NMR(旋轉異構物，500MHz，CDC13): (5 0.88-〇.93(m， 3H)，L27_1.34(m，8H)，1.52-1.68(m，2H)，3.28-3.35(m， 2H)，3.90-4.15(m，2H)，4.61，4.63(s，s，2H)，6.81-6.94(m， 2H)與 7·15-7·20, 7.34-7.39(m，1H)。 b) 基庵1-2- Γ 4-(2-羥乙基）-2_甲盖苯氣 基〕乙脸 85777 -38- 200407114 將2-溴_#-(2,4-二氟苄基庚基乙醯胺（13s毫克， 0.3 73笔莫耳）、同香草醯基醇（63毫克，〇·373毫莫耳）與益 水碳酸鉀（77毫克，0.559毫莫耳）於乙腈（1〇毫升）中混人。 令混合物迴流加熱4小時，然後蒸乾。令殘渣（加額外之 DCM、1毫升χ 2)負載於管柱（IS〇LUTE⑧SI，1克/6毫升）。 經DCM、然後為MeOH/DCM(0 5:99 5，然後為1 99)溶離。 合併產物部分並蒸發。可得油產物132毫克，產率79%。 lH NMR(旋轉異構物，400MHz，CDC13) : (5 〇 82_〇 87(m 3H)5 1.17.1.28(m? 8H)5 1.43-1.68(m? 2H)? 2.75-2.80(m? 2H)，3.24-3.32(m，2H)，3.73-3.84(m，5H)，4.58, 4.66(s，s， 2H)，4.74，4.76(s，s，2H)，6.67_6.86(m5 5H)與 7·08-7·14, 7·23_7·29(χη，1H)。 C) 〔（2,4-二氟苄基）（庚基）胺某Ί二^_氧乙氣某} ilzXA苯基）乙基甲烷碏醢西旨 /谷^^(2’4-一氟+基）-iV-庚基-2-〔 4-(2-經乙基）_2_甲氧苯 氧基〕乙醯胺（八）（132宅克，0.294毫莫耳）於DCM(10毫 升）。令其於冰浴冷卻。添加三乙胺（〇·〇5毫升，0.352毫莫 耳）’然後滴入甲烧磺醯氯（37毫克，0.323毫莫耳）。30分 鐘後，移除冷卻浴。令混合物於室溫隔夜攪拌。經lc_ms 顯示約5 0 %的A並未反應。令該混合物於冰浴中冷卻，並 添加0.05毫升三乙胺，隨之加0.025毫升甲烷磺醯氯。加完 後’移除冷卻浴並再攪拌混合物5小時。然後經水（x 2)與 鹽液洗過、脫水（硫酸鎮）並蒸發。留存1 3 8毫克油產物， 其不需純化即直接用於下一步驟。 85777 -39- 200407114 d) 〔_(2,4-二氟芊某H廢基）胺某〕 笨基）乙氣某Ί茉甲酸酯 將2-(4- { 2-〔（2,4-二氟芊基）（庚基）胺基〕-2-氧乙氧基} _3_甲氧笨基）乙基甲烷磺酸酯（138毫克，0.262毫莫耳）溶 於乙腊（1〇毫升）。添加2-羥基苯甲酸甲酯（40毫克，0.262 笔莫耳）’然後添加無水碳酸鉀（54毫克，〇·392毫莫耳）。 令该混合物隔夜迴流加熱，然後蒸乾。加水（丨〇毫升）與乙 酸乙醋（1 0毫升），並令兩相分開。令有機相經水與鹽液洗 過、脫水（硫酸鎂）並蒸發。令殘渣經管柱（IS〇LUTE(g)SI，2 克/6毫升）層析，利用dcm、然後為MeOH/DCM(l:99)為溶 離液’生成78毫克所需產物，產率45%(兩步驟）。 NMR(旋轉異構物，500MHz，CDC13): (5〇.87-0.91(m， 3Η)，1.22_1.32(m，8Η)，1·48-1·63(πι，2Η)，3.09-3.14(m， 2Η)，3.28_3.35(m，2Η)，3.80，3.89(s，s，3Η)，3.89(s，3Η)， 4·21-4·25(ηι，2H)，4.62，4.71(s，s，2H)，4·79，4.81(s，s， 2H)，6.77-7.0 l(m，7H)，7.28-7.3 3(m，1H)，7.13-7.18, 7.28-7.33(m，m，1H)，7.45(t，1H)與 7.81(d，1H)。 e) 2二〔2_(4- { 2- ί (2·4-二氟芊基H庚某）胺基〕-2-氧乙氣 基丄-3_甲氣茉篡、乙氣基〕笨曱酸 令溶於THF(2毫升）之甲基2-〔 2-(4- { 2-〔（2,4-二氟芊 基）（庚基）胺基〕-2-氧乙氧基} -3-甲氧苯基）乙氧基〕苯曱 酸酯（74毫克，0.127毫莫耳）與溶於水（1毫升）之氫氧化鋰 (6.1毫克，0.254毫莫耳）混合。令該混合物於微波爐（Smith Synthesizer)中接受1 5 0經8分鐘之韓射。根據LC-MS顯 -40- 85777 200407114 不反應未完成。令其於微波爐經另外1〇分鐘，根據lC-MS 顯示幾乎未改變。多添加3毫克氫氧化鋰，並於其後令其 於微波爐中接受150 °C經8分鐘。根據LC-MS顯示仍與先前 相同。多添加3毫克氫氧化鋰與丨毫升水。令該生成之混合 物於微波爐中接受15〇它經1〇分鐘，根據LC-MS顯示反應 已元成。蒸發之以去除THF。令殘渣經丨％氫氯酸酸化至 pH〜5 ’並經乙酸乙酯（1〇毫升）萃取。令萃取物脫水（硫酸 鎂）並蒸發。令殘渣經管柱（IS〇LUTE⑧SI，1克/6毫升）層 析’利用DCM、然後為MeOH/DCM(l:99)為溶離液，生成 60毫克所需產物，產率83%。 lfl NMR(旋轉異構物，400 MHz，CDC13) : 6 0.82-0·87(ηι， 3Η)，1.18_1.2 8(m，8Η)，1.43_1.61(m，2Η)，3.10-3.15(m， 2H)，3.24-3.31(m，2H)，3.77，3.85(s，s5 3H)，4.39-4.44(m, 2H)，4.59，4.66(s，s，2H)，4.77，4.78(s，s，2H), 6.72-6.91 (m，5H)，7.01(d, 1H), 7.09(t，1H)，7.10-7.17, 7.26-7.32(m， m，1H)，7.51(t，1H)與 8.13(d，1H)。 13C NMR(旋轉異構物，75 MHz，CDC13) : δ14·07，22·55, 26·79，27.02，28.57，28.93，31.70，35.18，41.30，41.34, 44.02，45·89，46.99，55.71，55.82，68.19，68.94，70.66, 103.38⑴，l〇3.88(t)，111.35(d)，111.39(d), 112.32, 112.41， 112.46，114.76，1 17.64 1 19.60(dd)，120.07(dd)，120.53, 122.06，129.50(dd)，130.54，130.59，131.55(dd)，133.60, 13 4.78， 146.26， 146.39， 149.67， 157.10， 161.60(dd)， 160.68(dd)，161.97(dd)，162.24(dd)，165.12，167.75 與 85777 -41 - 200407114 167.93 〇 實例

a) 氯苄基）（乙基）胺基1 -2-氧乙氣I —--―1 _" -—. 基硫基〕笨甲酸 洛乙酸（1.321克，22.000毫莫耳）於DMF(10毫升），添加 iJ4-氯苯基）甲胺（2.804克，19.800毫莫耳）並令混合物冷 卻至〇<t。添加#_〔（1仏1，2,3-笨并三唑_1_基氧）（二甲基胺 基）亞甲基〕-甲基methanaminium四I删酸醋（7·77〇 克’24.200毫莫耳）與f乙基二異丙胺（5 971克，46 2〇〇 宅莫耳）。令溶液於室溫攪拌2小時。添加Et〇Ac(20毫升）， 並令有機相經Na2C〇3(3x 20毫升，水溶液）與HC1(0.5莫耳 濃度’ 2χ ，1〇毫升）。令有機層脫水（MgS〇4)，並蒸發去 除溶劑。令殘渣經製備HPLC純化（起始移動相為等梯度乙 腈/緩衝液60/40，然後令乙腈濃度增加至100%，緩衝液為 乙腈/水10/90與乙酸銨（〇·ΐ莫耳濃度）混合物、 KR-1 00-7-C8 管柱、50mmx 250mm、流速 40 毫升 / 分鐘）。 收集含產物部分，並蒸發去除乙腈。添加Et〇Ac( 1 0毫升）， 然後以兩份鹽液洗有機相並脫水（MgS〇4)，然後，蒸發去 除溶劑並生成2.337克7V-(4-氯芊基）乙醯胺（產率57·8%)。 ln NMR(500MHz? CDC13) ： δ 1.96(s? 3H)5 4.31(d? 2H) 6.46(bs，1H)，7.16(d，2H)，7.25(d，2H)。 b) 氣芊基w-乙脸 將’（4-氯芊基）乙醯胺（2.337克，12.726毫莫耳）溶於 THF(100毫升），並於氬氣壓下冷卻至〇°c。添加（甲基硫基） 85777 -42- 200407114 甲烷化合物與硼烷（1:1)(2.4 17克，31 ·815毫莫耳），並令混 合物於室溫隔夜迴流。溫和添加HC1(15毫升，10%)，並隔 夜攪拌。蒸發去除溶劑。加乙醚（20毫升），並令產物經 K2C03(3 X 15毫升）萃取至水相。令水相經HC1酸化（1〇毫 升，10%)，並令產物經EtOAc(3 X 15毫升）萃取至有機 相。令有機相脫水（MgS04)，並蒸發去除溶劑以生成0.938 克#-(4-氯芊基乙胺（產率43·4°/〇)。 'H NMR(500 MHz? CDC13) ： δ\ΛΙ(Χ, 3Η)? 2.65(q? 2Η)? 3.74(s，2Η)，7·23-7·28(ηι，4Η)。 c) Ιζί{2-〔 4-(2-第—三丁氧基-2-氧乙氧基）茉某]λ其H 基）笨曱酸甲酯 令第三-丁基-(4- {2_〔（甲基磺醯基）氧基〕乙基丨苯氧 基）乙酸酯（5.454克，17.347毫莫耳）溶於乙腈（1〇〇毫升）， 並添加2-魏基苯甲酸曱酯（3.502克，20.816毫莫耳）與碳酸 钟（4_795克’ 34.694毫莫耳）。令該溶液於6〇。〇攪拌1〇小 時。添加EtOAc(40毫升），並令有機層經兩份鹽液（2χ4〇毫 升，水溶液）洗過。令有機層脫水（MgS〇4)，蒸發去除溶劑， 生成6.931克2-({2-〔 4_(2•第三丁氧基-2 -氧乙氧基）苯 基〕乙基}硫基）苯甲酸甲酯。此材料不經進一步純化即用 於下一步驟。 d) 〔 4-(u^基）笨基〕-硫基苯氧苺〕^ 酸 溶2-({2-〔 4-(2-第三丁氧基_2_氧乙氧基）苯基〕乙基} 硫基）苯曱酸甲醋（4·63〇克，η·5〇2毫莫耳）於dcm(5〇毫 85777 -43 - 200407114 升），.亚經三氟乙酸（44.40克，389·4〇5毫莫耳）於室溫處理 4小時。令混合物蒸發，並經甲苯共沸。令粗產物經製備 HPLC純化（起始移動相為等梯度乙腈/緩衝液6〇/4〇，然後 令乙腈濃度增加至1〇〇%，緩衝液為乙腈/水1〇/9〇與乙酸銨 (0.1莫耳濃度）混合物、KR_100_7_C8管柱、50mmx250mm、 流速40毫升/分鐘）。收集含產物部分，並蒸發去除乙腈。 添加EtOAc(l〇毫升），然後以兩份鹽液洗有機相並脫水 (MgS04)。蒸發去除溶劑並生成3.825克〔4-(2_ { 〔 2-(甲 氧羰基）苯基〕硫基}乙基）_苯氧基〕乙酸（兩個步驟總產 率 63.9%) 〇 H NMR(5 0 0 MHz9 CDC13) ： 5 2.93-2.98(m? 2H)? 3.12-3.17 (m，2H)，3.92(s，3H)，4.67(s，2H)，6.88(d，2H)，7.13_7·21 (m，3H)，7.33(d，1H)，7.41-7_46(m，1H)，7.96(dd，1H)。 e) L〔 2_-_(土- { 2_〔（4-氣苄基基）胺基 Ί _2_孝 Λ y 芊！ 苯基）乙基]硫基}笨甲酸甲酷 溶〔4-(2- {〔 2-(甲氧羰基）苯基〕硫基丨乙基）笨氧基〕 乙酸（0_200克，0.577毫莫耳）於DMF(10毫升），添加#_(4_ 氯苄基乙胺（〇·1〇8克，0.635毫莫耳），並令混合物冷卻 至0°(：。添加#-〔（1//-1,2,3-苯并三唑_1_基氧）（二曱基胺 基）亞甲基〕甲基methanaminium四氟獨酸酯（〇·2〇4 克，0·635毫莫耳）與，乙基二異丙胺（〇157克，ι·212 毫莫耳）。令溶液於室溫隔夜攪拌。添加水（1〇〇毫升），並 以乙醚（3 X 2〇耄升）萃取水相。令有機相經Na2c〇3(3 χ 20毫升，水溶液）與HC1(0.5莫耳濃度，2χ，1〇毫升）洗過。 85777 -44- 200407114 令有機層脫水（MgS04)，並蒸發去除溶劑。令殘渣經急驟 層析純化（由等梯度庚烷/ EtOAc 30/70開始，然後令EtOAc 濃度增加至100%’（石夕膠60 0.004-0.063mm)。收集含產物 部分，並蒸發去除溶劑，生成〇·〇85克曱基2-〔 2-(4- { 2-〔（4-氯苄基）（乙基）胺基〕-2-氧乙氧基}苯基）乙基〕硫基） 苯甲酸甲酯（產率29.6%)。 4 NMR(旋轉異構物，300 MHz，CDC13) : (5 1.09-1.21(m， 3H)，2.91_2.99(m，2H)，3.11-3.18(m，2H)，3.32-3.43(m， 2Η)，3.92(s，3Η)，4.57-4.75(m，4Η)，6.78, 6.92(d，d，2Η)， 7.12-7.46(m，9H)，7.96(d，1H)。 f) 2m(4_ { 2-〔（4-氯苄基）（乙基）胺基]-2-氳乙氣某} 笨基）乙基Ί石奋篡丨1甲醅 令2-{〔 2-(4- { 2-〔（4-氯苄基）（乙基）胺基>2-氧乙氧基} 苯基）乙基〕硫基}苯甲酸甲酉旨（0.085克，0.170毫莫耳）溶 於乙腈/水（1/1，4毫升）混合物，並添加氫氧化鋰（〇 〇〇8克， 0.341毫莫耳）。令反應於單節微波爐中進行（5分鐘，ι5〇 °C )。蒸發去除溶劑，然後，添加HC1(2毫升，！莫耳濃度）。 以兩份EtOAc(20毫升）萃取水相，令合併之有機相脫水 (MgS〇4)，並蒸發去除溶劑，生成0.073克2-{〔 2-(4- { 2-〔（4-氯爷基）（乙基）胺基〕-2-氧乙氧基丨苯基）乙基〕硫基} 笨曱酸（產率88.4%)。 lH NMR(旋轉異構體，400 MHz，CDC13) : 5 Lo^lJOCm， 3H)9 2.91-2.98(m? 2H)? 3.11-3.17(m? 2H)? 3.33-3.42(m9 2H)，4.58-4.77(m，4H)，6.79, 6.92(d，d，2H)，7.11-7.49(m， 85777 -45- 200407114 9H)，8.1〇(d，1H)。 13C NMR(旋轉異構物，100MHz，CDC13) : 5 12.23，13 77 33.70，33.82，41.09，41.30，47.42，49.64，67,37，67 91 114·69, 114·81，123·97- 135 58(複雜多峰），142 22, i 56 45, 1 56.57, 168.20，170.63。 下列實例係採類似方式製成·· 實例4 2-〔 2-(4-{2-〔（4_氯芊基）（乙基）胺基〕_2_氧乙氧基}苯 基）乙氧基〕苯甲酸 實例5 2-〔 2-(4_{2_〔乙基（仁三氟曱基苄基）胺基〕氧乙氧 基}苯基）乙氧基〕苯甲酸 實例6 h〔 2-(4-{2-〔乙基（4_三氟甲基苄基）胺基〕_2•氧乙氧 基}苯基）乙基硫基〕苯曱酸 生物活性 調配物 溶化合物於DMSO製成16毫莫耳濃度貯存液。分析前， 進一步以DMSO與培養液稀釋貯存溶液。 一般化學藥品與試劑 蟲螢光素酶分析試劑係購自packard，USA。限制酶係購 自 Boehringer 而 Vent 聚合酶係購自 New England Bi〇labs。 細胞株與細胞培養條件 U2-OS(人類骨肉瘤）係購自ATCC, USA。擴展細胞並由 85777 -46 - 200407114 第6次繼代整批冰凍。培養細胞於Dulbecco之修飾Eagle培 養液（DMEM)加上25毫莫耳濃度葡萄糖、2毫莫耳濃度麩胺 醯胺或4毫莫耳濃度L-丙胺醯基-L-麩胺醯胺、10%胎牛血 清與5%C02。使用未加鈣或鎂之磷酸緩衝鹽液（PBS)。所 有細胞培養試劑皆購自Gibco(USA)而96槽培養盤係購自 Wallach。 供異源表現之質體建構物 如Ausubel(7)所述進行標準重組DNA技術。將蟲螢光素 酶報告者載體PGL5UAS(其純種系含5個複製數GAL4DNA 結合序歹U )，5’-CGACGGAGTACTGTCCTCCGAGCT-3，，選 殖入pGL3-啟動子（Promega)之Sacl/Xhol位置。該帶UAS 之Sacl/Xhol片段之建構係利用黏合重複性寡核苷酸。 所用載體係根據pSG5(Stratagene)。所有載體包含編碼 GAL4之DNA結合區域（編碼資料庫認證號碼P04386之胺 基酸位置l-145)EcoRI/NheI片段，接一個正對骨架融合片 段、編碼多瘤病毒T抗源之細胞核定位序列。該細胞核定 位序列之建構係利用黏合重複性寡核苷酸以創造 Nhel/Kpnl 黏合端 (5，-CTAGCGCTCCTAGAAGAAACGCAAGGTTGGTAC-3，） 。來自人類之配位體結合區域與小鼠PPAR α以及人類與 小鼠PPAR τ 、皆PCR放大成KpnI/BamHI片段並選殖入 GAL4 DNA之結合區域與細胞核定位序列之骨架。所有使 用的質體建構物之序列皆經定序確認。 下列表現載體係用於暫時性之轉感染： 85777 -47- 200407114 載體 編碼之PPAR亞型 ^ 序列參考1 pSGGALhPPa 人類PPARa 〜^ S74349，核苷酸序列 625-1530 PSGGALmPPa 鼠類PPAR α ^^ Χ5763 8，核苷酸序列 668-1573 PSGGALhPPg 人類PPAR τ ^--_ U63415，核苷酸序列 613-1518 pSGGALmPPg 鼠類PPAR τ U 0 9 1 3 8，核苷酸序列 652-1577 意指用以表現配位體結合功能部位之資料庫入口的核芽 酸位置。 暫時性轉感染 將得自第6次繼代之細胞冷凍貯存液加以解凍，並於轉 感染前擴展至繼代8。令群集細胞經胰蛋白酶處理、洗過 並於270xg離心2分鐘收取凝塊。將細胞凝塊再懸浮於冷的 PBS至細胞濃度約18xl〇6細胞/毫升。添加DNA後，於利用 Biorad’s Gene PulserTM以 23〇v、96〇奸、每批 〇 5毫升細胞 之電孔動化前，將細胞懸浮液保溫於冰中約5分鐘。將麴 量50微克DNA加至每批〇·5毫升之細胞中，包括2·5微克表 現載體、25微克報導者載體與22·5微克非特^ DNA(pBluescript，Stratagene)。 電孔洞化後，將細胞稀釋成DMEM之320,000細胞/毫升 濃度但不加酚紅，並約接種25,000細胞/槽至96槽培養盤。 為使細胞回復，添加測試化合物前，先將接種盤保温 85777 -48- 200407114 C、3 -4小時。有關PPAr α分析，令細胞培養基補充樹脂 /舌〖生％ι去除之胎牛血清（FCs)，避免背景受ρcs之脂肪酸 成分活化。樹脂-活性碳去除之FCS係依下述製備：對5〇〇 笔升之熱抑制FCS，添加10克活性碳及25克之2〇〇-4⑽篩目

Bio-Rad分析級陰離子交換樹脂，並將該溶液保溫於室溫 之磁丨生授拌态隔仪。隔天，離心該F c s，重複該去除步驟 4-6小時。第二次處理後，離心該fcs並過濾除菌去除殘餘 活性碳與樹脂。 分析步驟 於母盤以適當濃度稀釋化合物之DMSO貯存液。將取自 母盤之化合物於培養液中稀釋以取得終劑量之測試化合 物0 凋正每槽之細胞培養液的量至7〇微升後，添加微升測 式化a物之’合液進行蟲螢光素酶偵測分析前，令暫時轉 感染細胞暴露於化合物約24小時。有關蟲螢光素酶分析， 以手動將100微升分挤q w ^ 刀析4劑加至母槽，並令培養盤靜置約 20分鐘’以使細胞溶解。溶解後，以憾ach之心㈣ 1420 Multiwe11計數器测定蟲螢光素酶活性。 參考化合物 鼠類ΡΡΑΙΙγ之參考物 acid(ETYA)做為人類 利用TZD拍格利容做為活化人類與 質。利用 5,8，ll，l4_Eic〇satetray〇_ PPAR α之參考物質。 計算與分析 為計算ec5〇之值 建立濃度效應曲線。所用值係衍生自 85777 -49- 200407114 二或三次獨立測量（減掉背景平均值後）之平均值，並表广、 為藉參考化合物所得最大活化度之百分比。將值相對於= 試化合物濃度之對數值描點。EC5g之值係藉線性插入於^ 料點與計算達到藉參考化合物所得之5〇%最大活化度戶^ 需濃度來評估。 & 對PPARa而g ’式I化合物之此⑼小於5〇微莫耳/升， 而且較佳化合物之EGH、於5微莫耳/升。例如，某些實例 對人類PPARa之EC5〇如下： 、 實例3 0.499微莫耳/升，# 實例5 〇·〇48微莫耳/升 85777 -50-

Claims (1)

1. 2〇〇4〇7li4 拾、申請專利範圍·· 種式I化合物··

   其中η為〇、1或2， Rl代表鹵基、視情形經一或多個氟取代之C1-4烷基、 視情形經一或多個氟取代之C1-4烷氧基，而且，當 η為2時，則取代基r1可以為相同或不同， R2代表未分枝之C2_7烧基， R3代表Η或OCH3，而 w代表Ο或S， 及其醫藥可接受之鹽與前藥。 2· 一種選自下列之化合物·· 2-〔 2_(心{ 2-〔乙基（2_氟苄基）胺基〕_2_氧乙氧基} 苯基）乙氧基〕苯曱酸， 2-〔 2·(4_ { 2-〔（2,4-二氟苄基）（庚基）胺基〕_2_氧乙 氧基} -3 -曱氧苯基）乙氧基〕苯甲酸， 2-〔 2-(4-{ 2-〔（4-氯苄基）（乙基）胺基〕氧乙氧基} 苯基）乙氧基〕苯甲酸， 2_〔 2-(4_ { 2-〔乙基（4_三氟甲基芊基）胺基〕_2_氧乙 氧基}本基）乙氣基〕苯甲酸， 85777 200407114 2-〔 2-(4- { 2-〔乙基（4_三氟甲基苄基）胺基〕-2_氧乙 氧基}苯基）乙基硫基〕笨甲酸，與 2-〔 2-(4_ { 2-〔（4-氟苄基）（乙基）胺基〕_2_氧乙氧基} 本基）乙基硫基〕苯甲酸， 及其醫藥可接受之鹽類、溶劑合物與結晶型式。 3 · —種醫藥調配物，包括根據申請專利範圍第i至2項中 任一項之化合物，混合醫藥可接受之佐劑、稀釋劑與/ 或載體。 4 ·〆種用以治療或預防胰島素抗性之醫藥組合物，包括 根據申請專利範圍第1至2項中任一項之化合物。 $ 穆根據申請專利範圍第1至2項中任一項之化合物於 製造治療胰島素抗性之醫藥的用途。 6· / #製備式I化合物之方法，包括令其、R2、R3、w 與η係如先前之定義，而PG代表羧基羥基保護基之式π 牝合物

   COPG 與表保護劑反應。 /禮式Π化合物。 〆穆合併療法’包括根據申請專利範圍第1至2項中任 /項之化合物，合併另一種用以治療諸如高血壓、高 200407114 脂血症、不良脂血症、糖尿病與肥胖症等與粥狀動脈 硬化之發展與進程相關的病症之治療藥劑。 85777 200407114 柒、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：第（ ）圖。 (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明： 捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   COPG 85777 -6 -