SU904536A3 - Предметное стекло дл исследовани крови - Google Patents

Description

(5)ПРЕДМЕТНОЕ СТЕКЛО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ Изобретение относитс  к медицине а именно к гематологии. Известно предметное стекло дл  и следовани  крови с нанесенным на него слоем красител , состо щего из метиленового синего и ацетата кр золфиолетового при соотношении 9:1 tn. Однаког красители, нанесенные на предметное стекло, не обеспечивают высокой контрастности окрашивани  (окраска тускла ), формы зернистых лейкоцитов (эозинофилы, нейтрофилы и базофилы) различаютс  с большим трудом. Цель изобретени  - повышение контрастности окрашивани . Указанна  цель достигаетс  тем, что в предметном стекле дл  исследовани  крови с нанесенным на него слоем красителей метиленового сине го и ацетата крезолфиолетового сло красител  содержит красители в coo КРОВИ ношении 1:1,5 - 1:5. При этом мети леновый синий использован в виде моногидрохлорида. Метиленоьый скн,1Й очищают путем растворени  в воде, выделнют гидрохлорид с помощью сол ной кислоты. Получают хроматографически чистый продукт, который содержит только около 0,5 хлорида цинка и представлен в виде моногидрохлорида. Ацетат крезолфиолетовый очищают путем осторожного отстаивани  в воде , удал   ацетат натри , затем раствор ют в метаноле и выдел ют с помощью эфира. Повторение этого процесса дает хроматографически чистый продукт. Очищенные таким образом крас щие вещества раствор ют Б метаноле и нанос т на предметное стекло. Они могут быть также растворень в воде .и нанесены вместе с полиоксиэтиленсорбитанмонопальмитатом . Соотношение этих крас щих веществ 1:1,5 1:5390 Краситель нанос т на предметное стекло от 0,5 до . На пред метное стекло нанос т слой красител затем добавл ют каплю крови, накрывают покровным стеклом и через 3-5 мин микроскопируют с помощью иммерсионного объектива. Получаетс   рка  контрастна  окраска , воспроизведение хорошее. Гранулы эозинофилов окрашены в  ркий желтый цвет, гранулы базофилов - в оранжевый цвет. Контуры  дер распознаютс  отчетливо , что существенно облегчает различение лимфоцитов, моноцитов и различных зрелых стадий гранулоцитов Пример 1. Очистка ацетата крезолфиолетового. 50 г ацетата крезолфиолетового су пендируют в 100 мл воды и сильно раз мешивают в течение 15 ми.н. Затем кра с щее вещество отсасывают и дважды промывают 100 мл охлажденной на льду воды. Отфильтрованный осадок раствор ют в 1,6 л метанола при нагревании и при 30°С отсасывают от нерастворимых частиц. Фильтрат медленно пр помешивании смешивают с 3,5 л эфира и затем перемешивают в течение 30 ми при охлаждении на льду. Образовавшиес  кристаллы отсасывают, рдаствор ют при нагревании в 620 мл меТанола , затем раствор охлаждают до 30°С и выдел ют крас щее вещество добавле нием 1,85 л эфира при помешивании и охлаждении на льду. После отсасывани  и трехфазовой промывки 120 мл эфир-метанола С3.1) после просушки получают сверх дифосфорпентоксида г ацетата крезолфиолетового в фо 22 ме темно-зеленых кристаллов. Состав: примерно 821 ацетата крезолфиолетового , 8 хлорида крезолфиолетового и 10 воды. При нагревании до 150°С возникает разложение Вещество по данным хроматографичес кого исследовани   вл етс  практически чистым. Значение Rл 0,6. Пример 2„ Очистка метилено вого синего. В четырехлитровой трехгорлой колбе раствор ют при помешивании 100 г метиленового синего в 1 л вод и перемешивают с 1 л концентрирован . ной сол ной кислоты, 1,18. Посл четырехчасового перемешивани  при охлаждении на льду и восьмичасового нахождени  в холодильном шкафу при +5°с отсасывают образовавшиес  кристаллы , промывают 00 мл охлажденной на льду 6 н. сол ной кислоты и 500 мл эфира. Получают 36,5 г черных с металлическим блеском кристаллов. Очищенное крас щее вещество состо-. ит из метиленового синего хлорид-гидрохлорида и содержит ЗЗ воды. Имеютс  лишь только следы цин- . ка Крас щее вещество по данным хроматографического исследовани   вл етс  практически чистым. Значение Rf 0,5. Пример 3. Использу  крас щие вещества, очищенные согласно примерам 1 и 2, приготавливают раствор cлeдyюu eгo состзва: Метиленовый синий гидрохлорид, мг 130 Ацетат крезолфиолетовый , мг270 Метанол, мл (Эколо 100 Этот раствор ватным тампоном нанос т или напыл ют на предметное стекло и высушивают. При средней величине капли примерно 20 Ч нанесенное количество крас щего вещества составл ет около 3 . На предметное стекло нанос т каплю крови примерно 5 10jM- и накрывают покровным стеклом. Через мин окраску оценивают под микроскопом при 800-кратном увеличении с использованием иммерсионного объектива. Отдельные частицы крови представлены в следующей окраске. Ретикулоциты: сетка пурпурного 4вета внутри едва окрашенных эритроцитов . Нейтрофилы:  дро пурпурного цвета внутри тонкозернистой почти бесцветной плазмы. Эозинофилы:  дро пурпурного цвета внутри грубозернистой желтой плазмы. Базофилы:  дро темно-пурпурного цвета внутри средней величины компактно-зернистой плазмы оранжево-красного цвета. Лимфоциты:  дро пурпурного цвета с плазмой светло-пурпурного цвета. Моноциты: как лимфоциты, только крупнее и больщим количеством плазйы.

Тромбоциты: маленькие частицы пурпурного цвета.

Предлагаемый краситель позвол ет повысить контрастность окрашивани  так, при сравнивании окрашенных предметных стекол при соотношении 1:1,5 1:3 и 1:5 с окрашенными предметными стеклами с соотношением красителей

9:1 наблюдавтс  различна  окраска отдельных форменных элементов крови.

В таблице приведена окраска отдельных элементов крови в зависимости от соотношени  метилового синего N-гидрохлорида:ацетат крезилфиолетового .

Как видно-из таблицы, применение предметных стекол, содержащих метиленовый синий и ацетат крезолфиолетовый или метиленовый синий в виде миногидрохлорида в соотношении 1:1,5 -5, позвол ет получить лучшее окрашивание различных элементов крови по сравнению с известным красителем в соотношении 9:1

Claims (1)

1. Предметное стекло дл  исследовани  крови с нанесенным на него споем красител , состо щего из метиленового синего и ацетата крезолфиолетового , отли тем, что, с целью повышени  контрастности окрашивани , слой красител  содержит компоненты при следующем соотношении 1:1,5 1:5.

2, Стекло по п,1, отли чающее с   тем, что метиленовый синий используют в виде моногидрохларидао

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 379659, кл. 117-12, 1972.