FI59677C - Pao foerhand faergade objektglas foer blodundersoekning - Google Patents
Pao foerhand faergade objektglas foer blodundersoekning Download PDFInfo
- Publication number
- FI59677C FI59677C FI760911A FI760911A FI59677C FI 59677 C FI59677 C FI 59677C FI 760911 A FI760911 A FI 760911A FI 760911 A FI760911 A FI 760911A FI 59677 C FI59677 C FI 59677C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- dyes
- dye
- objektglas
- foerhand
- faergade
- Prior art date
Links
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- VHGXRGXCDVQIKS-KRWDZBQOSA-N methyl (2s)-3-(4-methylphenyl)sulfonyloxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)OC)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)OS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 VHGXRGXCDVQIKS-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 8
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical group [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N acetic acid;butan-1-ol;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O.CCCCO MHLMRBVCMNDOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 1
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 1
- -1 N-ethylamino Chemical group 0.000 description 1
- 241001106476 Violaceae Species 0.000 description 1
- RFQSMLBZXQOMKK-UHFFFAOYSA-N [3-[(4,8-diamino-6-bromo-1,5-dioxonaphthalen-2-yl)amino]phenyl]-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C1=CC=CC(NC=2C(C3=C(N)C=C(Br)C(=O)C3=C(N)C=2)=O)=C1 RFQSMLBZXQOMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012932 acetate dye Substances 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000001680 brushing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 125000000853 cresyl group Chemical group C1(=CC=C(C=C1)C)* 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;methanol Chemical compound OC.CCOCC MDKXBBPLEGPIRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQHOAFZGYFNDQX-UHFFFAOYSA-N ethyl-[7-(ethylamino)-2,8-dimethylphenothiazin-3-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].S1C2=CC(=[NH+]CC)C(C)=CC2=NC2=C1C=C(NCC)C(C)=C2 SQHOAFZGYFNDQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
[*3=7] ΓβΊ m^UULUTUSJULKAISU ΓΛ/πη UTLÄGGN I NGSSKRIFT 0*0/ / C Patentti myönnetty iö C) 1 'Ji ^ (51) K».ik^/int.a.3 G 01 N 33/52 SUOMI—FIN LAN D (21) PttwrttlhakMnut — Patantafw&kninf 760911 (22) HrtemtapWvt —Anattknlngadaf 05*0U.76 ' (23) Alkupilvt—GiMgh«ttdag O5.OU.76 (41) Tullut lulklMkal — Bltvtt off«ntlig 12.10.76
Patentti- j* r«kiiterihallitu« ....______________ km.Lhiik.tam och regiitarstyralsan (44) !2ME* och utl^krtfcun pubMcand 29·05·8ΐ (32)(33)(31) Pyydetty •tuoik.u.-e.gird prlorlt* 11. OU. 75
Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) P 2515966.U
(71) Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Dieter Berger, Viemheim, Werner Guthlein, Mannheim-Neckarau,
Wolfgang Werner, Mannheim-Vogelstang, Peter Rieckmann, Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7U) Berggren Oy Ab (5U) Etukäteen värjätyt objektilasit, joita käytetään veritutkimukseen -Pä förhand färgade objektglas for blodundersökning
Niin sanottu differentiaali-verenkuva kuuluu useimmiten suoritettaviin mikroskooppisiin tutkimusmenetelmiin. Tällöin värjätään veren yksittäiset osaset (erytrosyytit, leukosyytit ja trombosyytit jne.) selektiivisesti väriaineilla, jolloin on mahdollista suorittaa mikroskooppinen erotus ja patologisten muutosten toteaminen. Nykyään käytettävät värjäysmenetelmät (esim. Wright'in, May-Griinwald’in tai Fappenheim'in mukaan) käsittävät useita menetelmävaiheita, kuten esim. veren levittämisen sivelemällä, kiinnittämisen, osittain monikertai-sia värjäyksiä, pesuja ja kuivauksia, eivätkä ole sen vuoksi varsin tarkkoja. Lisäksi on värjäyksen laatu suuresti riippuvainen väriaineen laadusta samoin kuin suorittavien henkilöiden taidosta ja kokemuksesta.
Tämän vuoksi on tehty lukuisia yrityksiä näiden menetelmien yksinkertaistamiseksi. Hiljattain on saksalaisessa hakemusjulkaisussa 2.153.673 kuvailtu menetelmää, jossa saadaan ns. etukäteenvärjättyjä objektilaseja, jotka on peitetty Methylenblau-N-väriaineella ja Kresylviolett-asetaatti-väriaineella. Kun näille objektilaseille 2 59677 pannaan pisara verta ja peitetään peitelasilla, niin voidaan n. 5 minuutin kuluttua tutkia mikroskoopilla. Tällöin on mahdollista erilaisten leukosyyttimuotojen ja trombosyyttien ohella tunnistaa lisäksi nuoret erytrosyytit ns. retikulosyytit. Tämä on yksinkertaisen ja varman suoritustavan ohella lisäetu verrattuna tähänastisiin differentiaali-verenkuviin.
Huolimatta siitä kiistattomasta edistysaskeleesta, joka tällä menetelmällä on saavutettu, näyttää sillä kuitenkin olevan muutamia painaviakin epäkohtia.
Niinpä ovat sen värireaktiot yleensä jokseenkin heikot, hajanaiset ja vailla jyrkkyyseroja, edelleen voidaan jyvämäisten leukosyyttien kolme eri muotoa (eosinofiili, neutrofiili ja basofiili) tunnistaa vain vaikeasti.
Nyt on yllättäen todettu, että etukäteenvärjättyjä objektilaseja, jotka antavat hyvän kontrastin omaavia ja loistavia värjäyksiä ja joiden avulla on mahdollista varmasti tunnistaa granulosyytit, saadaan kun käytetään väriaineita Methylenblau N ja Kresyyliviolett-asetaatti kromatografisesti puhtaina painosuhteessa 1:1,5 ja 1:5 välillä. Edullisesti käytetään Methylenblau N:ää monohydrokloridina myynnissä olevan sinkkikaksoissuolan asemasta.
Saksalaisesta hakemusjulkaisusta 2.153-673 ei käy selville millaista laatua käytetyt väriaineet olivat. Se tosiasia, että valmistettaessa on väriaineliuokset suodatettava erilleen liukenemattomista jäännöksistä, viittaa kauppalaatuihin. Työskenneltäessä saksalaisen hakemusjulkaisun mallin mukaan kauppalaatua olevien väriaineiden avulla saatiin todellakin etukäteenvärjättyjä objektilaseja, joiden väriominaisuudet vastaavat niitä, jotka on' esitetty hakemusjulkaisussa (s. 5~6).
Mikroskooppiväriaineiden puhdistaminen ei ole yleensä käytössä. Niinpä käytetään usein kuten jo vuosikymmeniä sitten väriaineita, joilla on epäilyttävä puhtaus ja joita käytetään kankaiden värjäyksessä. Monista väriaineista ei tiedetä josko ja mitkä epäpuhtaudet vaikuttavat värjäystapahtumaan. Niinpä on ihmeellistä se, että amerikkalainen Biological Stain Commision pitää tärkeimpänä kriteriumina väriaineen määrittelyssä sen käyttökelpoisuutta määrätyissä värjäyskokoomuksissa ja esittävät niiden kokoonpanomäärityksinä ainoastaan fotometrisiä 3 59677 ja reduktiometrisiä, mutta ei lainkaan kromatograafisia menetelmiä (vrt. esim. R.D. Lillie "Conn's Biological Stains". 8. painos, Williams Comp. Baltimore 1969* s. 10-14, 416-417).
Nämä fotometriset ja reduktiometriset menetelmät antavat kuitenkin korkeintaan tiedon kokonaisväriainepitoisuudesta eikä mahdollisista värjäävistä epäpuhtauksista.
Methylenblau N (Neumethylenblau, C.I. Basic Blue 24, 3,7-bis-(N-etyyliamino)-2,8-dimetyylifenotiatsoniumkloridi) on saatavissa kaupasta 50-70 $:sena tuotteena ja on sillä meidän tutkimustemme mukaan ohutlevykromatograafisessa analyysissä 3-4 lisätäplää, joiden koko vaihtelee. Loppuosa on sinkkikloridia ja natriumkloridia. Olemme nyt havainneet, että erinomainen puhdistus voidaan suorittaa veteen liuottamalla ja saostamalla hydrokloridi suolahapolla. Tällöin saadaan kromatograafisesti puhdasta tuotetta, joka sisältää enää vain n. 0,5 % sinkkikloridia ja tuote esiintyy monohydrokloridin muodossa.
Kresylviolettasetaatti (Cresylechtviolett, Cresyl Past Violett Acetat, 5,9-diaminobenso(a)fenoksiatsonium-asetaatti) sisältää kauppamuodos-sa suurempia tai pienempiä määriä natriumasetaattia epäpuhtauksina. Myös tässä saadaan ohutlevykromatograafisessa analyysissä 3 lisätäplää, joiden suuruus vaihtelee. Puhdistus voidaan suorittaa seuraavasti:
Ensin poistetaan varovasti uuttamalla vedessä natriumasetaatti. Sitten liuotetaan metanoliin ja saostetaan eetterillä. Toistamalla nämä toimenpiteet saadaan kromatograafisesti puhdasta tuotetta.
Näin puhdistetut väriaineet liukenevat päinvastoin kuin kaupassa olevat tuotteet ilman liukenematonta jäännöstä metanoliin ja voidaan ne saksalaisessa hakemusjulkaisussa 2.153.673 (sivu 4) esitetyllä tavalla levittää objektilasille. Ne voidaan myös saksalaisen hakemus-julkaisun 2.424.955 mukaisesti liuottaa veteen ja levittää yhdessä polyoksietyleeni-sorbitaani-monopalmitaatin (Tween 80) kanssa.
On edelleen hämmästyttävää, että vain silloin saadaan käyttökelpoisia otjektilaseja, joilla on yllättävästi parannetut ominaisuudet, kun kahden väriaineen suhteet valitaan väliltä 1:1,5 ja 1:5. Nijnenomaan DOS 2.153.673:ssa sitä vastoin väitetään ja haetaan suojaa 3ille, että suhdeluku pitää olla 3=1 tai DOS 2.424.955 mukaisesta 2,5:1 ja että huomattavia muutoksia on mahdollisuuksien mukaan vältettävä.
4 59677
Esillä olevan keksinnön mukainen edullisin suoritusmuoto saadaan silloin, kun väriaineliuos suihkutetaan suomalaisen patenttihakemuksen n:o 760910 mukaisesti objektilaaille.
Puhdistetut väriaineet saatetaan tällöin n. 0,5-10 γ/cm^ määrinä objektilasille. Methylenblau N:n ja Kresylviolettacetat-väriaineen suhde pitää tällöin olla arvojen 1:1,5 ja 1:5 välillä.
Keksinnön mukaiset etukäteen värjätyt objektilasit varustetaan, kuten DOS 2.155.673 (siv. 4-5) on esitetty, veripisaralla ja peitetään peitelasilla ja tutkitaan n. 3~5 min. kuluttua mikroskoopilla käyttäen öljyimmersio-objektiivia.
Värjäykset ovat äärimmäisen selviä, kontrastin omaavia ja hyvin reprodusoitavissa. Saksalaisessa hakemusjulkaisussa 2.153.673 (siv. 5- 6) kuvattuihin väriominaisuuksiin verrattuna esiintyy seuraavia erilaisuuksia: a) Eosinofiilien jyväset ovat loistavan keltaisia verrattuna yllämainitussa kuvattuun oranssivärjäytymiseen.
b) Basofiilien jyväset ovat oranssinpunaiset vastakohtana yllä kuvattuun purppuranväriin. Tehokkaaksi identifiointiominaisuudeksi mainittu oranssiväri esiintyy yllämainitussa vain solujen reunaosissa sopivaa polttoväliä käytettäessä.
c) Ytimen ääriviivat ovat erittäin selvästi nähtävissä, mikä suuresti helpottaa lymfosyyttien, monosyyttien ja granulosyyttien eri kypsyysasteiden erottamista.
Eräs keksinnön mukaisen diagnostisen aineen lisäetu on siinä, etteivät värjäykset ole enää riippuvaisia kaupasta saatavien väriaineiden laatuvaihteluista. Valmistettaessa teknisesti suuria määriä vaikuttaa reprodusointikykyyn tärkeimpänä tekijänä väriaineen levittäminen ja sen koostumus.
Objektilasin raaka-aineena voidaan käyttää lasia. Mikäli väriaineet levitetään suihkuttamalla suomalaisen patenttihakemuksen n:o 760910 mukaisesti, voidaan myöskin käyttää muovia, jolloin väriaineet voidaan tietenkin varustaa peitelaseilla, jotka ovat lasia tai muovia.
5 59677
Seuraavissa esimerkeissä kuvataan lähemmin keksintöä rajoittamatta kuitenkaan keksintöä näihin väriaineiden puhdistuksiin ja käyttöihin.
Esimerkki 1
Kresylviolettasetaatin puhdistus 50 g Kresylviolettasetaattia (Matheson Coleman & Bell) suspensoidaan 100 g:aan vettä ja sekoitetaan 15 minuutin ajan voimakkaasti. Sen jälkeen imusuodatetaan väriaine erilleen ja pestään kahdesti käyttäen kulloinkin 100 ml jääkylmää vettä. Suodatusjäännös liuotetaan 1,6 litraan metanolia samalla lämmittäen ja imusuodatetaan erilleen liukenemattomasta osasta lämpötilassa n. 30°C. Suodokseen lisätään hitaasti samalla sekoittaen 3,5 1 eetteriä ja sekoitetaan vielä 30 min samalla jäähdyttäen jäiden avulla. Muodostuneet kiteet imusuodatetaan, liuotetaan samalla lämmittäen 620 ml:aan metanolia, jäähdytetään liuos lämpötilaan 30° ja erotetaan väriaine lisäämällä 1,85 1 eetteriä samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen. Imusuodatuksen ja kolme kertaa suoritetun pesun jälkeen 120 ml:11a eetteri-metanolia (3:1) saadaan difosforipentoksidilla suoritetun kuivauksen jälkeen 22 g Kresylviolettasetaattia tummanvihreiden kiteiden muodossa. Kokoomus: n. 82 % Kresylviolettasetaattia, 8 % Kresylviolettkloridia ja 10 % vettä. Kuumennettaessa lämpötilaan 150° tapahtuu hajoaminen. Aine on kromatograafisen tutkimuksen mukaan (Valmiit DC-piigeelilevyt 60 F 25^ Merck, liuotinaineyhdistelmä butanoli-etikkahappo-vesi *1:1:5) käytönnöllisesti katsoen puhdasta. Rp-arvo: 0,6.
Esimerkki 2
Methylenblau N:n puhdistus M litran kolmikaulakolvissa liuotetaan 100 g Methylenblau N:ää (New Methylene Blue - Matheson Coleman & Bell) 1 litraan vettä samalla sekoittaen ja siihen lisätään 1 litra väkevää suolahappoa, d = 1,18.
*1 tuntia kestäneen sekoittamisen jälkeen samalla jäähdyttäen jäillä ja 8 tuntia kestäneen seisottamisen jälkeen kylmäkaapissa lämpötilassa +5° imusuodatetaan muodostuneet kiteet erilleen, pestään *100 ml:11a jääkylmää 6-n suolahappoa ja 500 ml:11a eetteriä. Saadaan 36,5 g mustia, metallin hohtoisia kiteitä, hajoaminen lämpötilassa 253°C. Puhdistettu väriaine koostuu 95-97 %'sta Methylenblau N-kloridi-hydro-kloridia ja sisältää 3-5 % vettä. Sinkistä on enää vain jälkiä jäljellä. Väriaine on kromatograafisen tutkimuksen mukaan (Valmiit DC-piigeelilevyt 60 F 25^ Merck, liuotinaineyhdistelmä n-butanoli-etik-kahappo-vesi *1:1:5) käytännöllisesti katsoen puhdasta. Rp-arvo: 0,5.
6 59677
Esimerkki 3
Etukäteen värjätyt objektilasit
Valmistetaan liuos, jolla on seuraava kokoonpano käyttäen esimerkkien 1 ja 2 mukaisesti puhdistettuja väriaineita:
Methylenblau N-hydrokloridi 130 mg
Kresylviolettasetaatti 270 mg
Metanoli ad 100 ml Tätä liuosta sivellään pumpulilla objektilasille filmiksi ja kuivataan tai suihkutetaan 0,5 mm:n leveäsädesuuttimesta (SS 60 76228-45 Pa. Spraying Systems) suihkutuskulman ollessa n. 25° ja etäisyyden 20 cm maskin läpi 3 cm:n levyisenä näytteenpitimelle, joka liikkuu nopeudella 1,6 m/min suuttimen ohi.
Suihkutuspaine: 1,2 at; liuoksen läpivirtausmäärä suuttimesta: 10 ml/ min.
Käytettäessä keskimääräistä pisarakokoa n. 20 ,ul painaa levitetty 2 väriamemäärä n. 3 g/cm .
Näin valmistetuille etukäteen värjätyille objektilaseille pannaan n. 5_10 /Ul:n veripisara ja peitetään peitelasilla. Noin 3-5 min. kuluttua tutkitaan värjäystä mikroskoopilla käyttäen n. 800-kertais-ta suurennosta ja öljyimmersio-objektiivia.
Veren yksittäiset osaset värjäytyvät seuraavasti:
Retikulosyytit: purppuranvärinen verkkorakenne tuskin värjäytyneiden erytrosyyttien sisällä.
Neutrofiilit: purppuranvärinen ydin hienojyväisen kiinteän, värit tömän plasman sisällä.
Eosinofiilit: purppuranvärinen ydin karkeajyväisen, keltaisen plas man sisällä.
Basofiilit: tummanpurppuranvärinen ydin keskikokoisesti tiivis- jyväisen oranssinpunaisen plasman sisällä.
Lymfosyytit: purppuranvärinen ydin, jossa on kirkkaanpurppuran- väristä plasmaa.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2515966A DE2515966C3 (de) | 1975-04-11 | 1975-04-11 | Vorgefärbte Objektträger für die Blutunte rsuchung |
| DE2515966 | 1975-04-11 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI760911A FI760911A (fi) | 1976-10-12 |
| FI59677B FI59677B (fi) | 1981-05-29 |
| FI59677C true FI59677C (fi) | 1981-09-10 |
Family
ID=5943661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI760911A FI59677C (fi) | 1975-04-11 | 1976-04-05 | Pao foerhand faergade objektglas foer blodundersoekning |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4070495A (fi) |
| JP (1) | JPS51126893A (fi) |
| AR (1) | AR210757A1 (fi) |
| AT (1) | AT350190B (fi) |
| BE (1) | BE840454A (fi) |
| CA (1) | CA1052675A (fi) |
| CH (1) | CH621629A5 (fi) |
| CS (1) | CS205019B2 (fi) |
| DD (1) | DD123628A5 (fi) |
| DE (1) | DE2515966C3 (fi) |
| DK (1) | DK145318C (fi) |
| ES (1) | ES446836A1 (fi) |
| FI (1) | FI59677C (fi) |
| FR (1) | FR2307271A1 (fi) |
| GB (1) | GB1480576A (fi) |
| HU (1) | HU176928B (fi) |
| IE (1) | IE42552B1 (fi) |
| IT (1) | IT1059617B (fi) |
| LU (1) | LU74738A1 (fi) |
| NL (1) | NL7603628A (fi) |
| PL (1) | PL107576B1 (fi) |
| SE (1) | SE420355B (fi) |
| SU (1) | SU904536A3 (fi) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2651060C3 (de) * | 1976-11-09 | 1980-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Differential-diagnostische Spermauntersuchung |
| US4193980A (en) * | 1978-01-05 | 1980-03-18 | Corning Glass Works | Dry preparation for reticulocyte staining |
| US4248821A (en) * | 1979-07-25 | 1981-02-03 | Dellen Adrian F Van | Method and device for embedding a specimen for microscopic examination |
| US4400370A (en) * | 1980-03-12 | 1983-08-23 | Lawrence Kass | Metachromatic dye sorption means for differential determination of leukocytes |
| US4581223A (en) * | 1980-03-12 | 1986-04-08 | Lawrence Kass | Individual leukocyte determination by means of differential metachromatic dye sorption |
| CA1155041A (en) * | 1980-04-21 | 1983-10-11 | Michael E. Jolley | Fluorescent nucleic acid stains |
| US4500509A (en) * | 1981-03-11 | 1985-02-19 | Lawrence Kass | Metachromatic dye sorption and fluorescent light emmisive means for differential determination of developmental stages of neutrophilic granulocytic cells and other leukocytes |
| US4606950A (en) * | 1984-08-31 | 1986-08-19 | Ellen M. Corbet | Method for assembling a floral arrangement |
| US5106744A (en) * | 1990-11-01 | 1992-04-21 | Cytocolor Inc. | Method of staining monocytes and compositions thereof |
| CA2579169C (en) | 2004-09-23 | 2018-03-06 | Wista Laboratories Ltd. | Methods of chemical synthesis and purification of diaminophenothiazinium compounds including methylthioninium chloride (mtc) |
| DK3121169T3 (da) | 2006-07-11 | 2022-02-28 | Wista Lab Ltd | Fremgangsmåder til syntese og/eller oprensning af diaminophenothiaziniumforbindelser |
| CN111970970A (zh) * | 2017-10-26 | 2020-11-20 | Essenlix公司 | 血小板的快速测量 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3906120A (en) * | 1970-10-30 | 1975-09-16 | Gen Electric | Method for preparing slides for blood evaluation |
| US3796594A (en) * | 1970-10-30 | 1974-03-12 | Gen Electric | Stain coated slides for differentially staining blood |
| IT966513B (it) * | 1970-10-30 | 1974-02-20 | Gen Electric | Vetrini precolorati per esami del sangue |
| GB1473945A (en) * | 1973-05-24 | 1977-05-18 | Gen Electric | Method for preparing slides for blood evaluation |
-
1975
- 1975-04-11 DE DE2515966A patent/DE2515966C3/de not_active Expired
-
1976
- 1976-02-27 SE SE7602728A patent/SE420355B/xx unknown
- 1976-03-31 US US05/672,572 patent/US4070495A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-03-31 DK DK149876A patent/DK145318C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-04-01 CA CA249,401A patent/CA1052675A/en not_active Expired
- 1976-04-05 HU HU76BO1607A patent/HU176928B/hu unknown
- 1976-04-05 FI FI760911A patent/FI59677C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-04-05 AR AR262783A patent/AR210757A1/es active
- 1976-04-06 GB GB13853/76A patent/GB1480576A/en not_active Expired
- 1976-04-06 DD DD192223A patent/DD123628A5/xx unknown
- 1976-04-07 CS CS762302A patent/CS205019B2/cs unknown
- 1976-04-07 BE BE165900A patent/BE840454A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-04-07 IT IT22060/76A patent/IT1059617B/it active
- 1976-04-07 CH CH439376A patent/CH621629A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-04-07 NL NL7603628A patent/NL7603628A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-04-08 SU SU762346753A patent/SU904536A3/ru active
- 1976-04-09 FR FR7610487A patent/FR2307271A1/fr active Granted
- 1976-04-09 IE IE752/76A patent/IE42552B1/en unknown
- 1976-04-09 LU LU74738A patent/LU74738A1/xx unknown
- 1976-04-09 ES ES446836A patent/ES446836A1/es not_active Expired
- 1976-04-09 AT AT262076A patent/AT350190B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-04-10 PL PL1976188674A patent/PL107576B1/pl unknown
- 1976-04-12 JP JP51041173A patent/JPS51126893A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE840454A (fr) | 1976-10-07 |
| AU1267776A (en) | 1977-10-13 |
| PL107576B1 (pl) | 1980-02-29 |
| FI59677B (fi) | 1981-05-29 |
| IE42552B1 (en) | 1980-08-27 |
| DK145318B (da) | 1982-10-25 |
| FR2307271B1 (fi) | 1980-03-28 |
| AT350190B (de) | 1979-05-10 |
| IT1059617B (it) | 1982-06-21 |
| GB1480576A (en) | 1977-07-20 |
| ATA262076A (de) | 1978-10-15 |
| LU74738A1 (fi) | 1976-11-11 |
| IE42552L (en) | 1976-10-11 |
| DK145318C (da) | 1983-04-05 |
| DE2515966C3 (de) | 1979-11-22 |
| FR2307271A1 (fr) | 1976-11-05 |
| DK149876A (da) | 1976-10-12 |
| US4070495A (en) | 1978-01-24 |
| SE420355B (sv) | 1981-09-28 |
| DD123628A5 (fi) | 1977-01-05 |
| AR210757A1 (es) | 1977-09-15 |
| NL7603628A (nl) | 1976-10-13 |
| SE7602728L (sv) | 1976-10-12 |
| CS205019B2 (en) | 1981-04-30 |
| HU176928B (hu) | 1981-06-28 |
| DE2515966B2 (de) | 1979-03-22 |
| FI760911A (fi) | 1976-10-12 |
| CH621629A5 (fi) | 1981-02-13 |
| DE2515966A1 (de) | 1976-10-21 |
| ES446836A1 (es) | 1977-06-01 |
| JPS51126893A (en) | 1976-11-05 |
| CA1052675A (en) | 1979-04-17 |
| SU904536A3 (ru) | 1982-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI59677C (fi) | Pao foerhand faergade objektglas foer blodundersoekning | |
| DE69334079T2 (de) | Fluoreszenzfarbstoff, der Pyryliumsalze oder ähnliche Salze enthält, Nachweisverfahren von Nukleinsäuren durch seine Verwendung | |
| EP0461392B1 (de) | Testträger zur Bestimmung von Ionen | |
| JP6586070B2 (ja) | 核酸を含有する細胞または別の生体材料を分析する方法 | |
| KR100463129B1 (ko) | 신규화합물과그용도 | |
| JPH027427B2 (fi) | ||
| CN109081836A (zh) | 一种基于半花菁结构的汞离子近红外荧光探针及其制备方法和应用 | |
| DE3304795C2 (fi) | ||
| EP2320230A1 (en) | Reagent for detecting abnormal cell in cervix of uterus, and method for detecting abnormal cell in cervix of uterus by using same | |
| IE42551B1 (en) | Process for the large-scale production of pre-coated microscope slides | |
| CN105647512B (zh) | 一种Cu2+荧光探针、制备方法及其应用 | |
| CN108358814A (zh) | 一种基于水杨酰腙衍生物的aie荧光探针及其制备方法、应用 | |
| EP1668162B1 (en) | Detection of immobilized nucleic acid | |
| EP0183717B1 (en) | Single dye replacement for romanowsky plural dye variable compositions in human biopsy specimen constituent identifications | |
| DE69733554T2 (de) | Kovalent immobilisierte fluorionophore als optische ionensensoren | |
| CN108314650A (zh) | 一种用于尿液中金属离子含量检测的有机化合物及应用 | |
| Zhang et al. | A novel water-soluble naked-eye probe with a large Stokes shift for selective optical sensing of Hg 2+ and its application in water samples and living cells | |
| CN108358843A (zh) | 一种用于检测水环境中稀土离子含量的有机化合物及应用 | |
| Moser et al. | Fluorimetric measurements and chromatin condensation patterns of nuclei from 3T3 cells throughout G1 | |
| Klut et al. | Further use of fluorochromes in the cytochemical characterization of phytoplankton | |
| EP2362890A2 (en) | Anthraquinone based near ir emitting compounds and uses thereof | |
| CN108484501A (zh) | 一种用于水环境中检测金属离子含量的有机化合物及其应用 | |
| Kass | Identification of normal and leukemic granulocytic cells with merocyanine 540 | |
| EP0457184B1 (de) | Naphtholderivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung | |
| Diaz et al. | Nuclear dyes and cytoplasmic staining |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |