SU841572A3 - Способ получени белковых компонентовКРОВи - Google Patents

Description

1 . , . Изобретение относитс  к медицине, а именно к гематологии..

Известен способ получени  белковых компонентов крови путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах - сополимерах, содержащих- этилен и ангидрид малеиновой кислоты , с последующим элюированием целевого продукта с .помощью физиологически приемлемой соли Lll.

Однако известный способ-не позволет получить препарат высокой степени чистоты. .

Цель, изобретени  - повышение степени чистоты препарата.Поставленна  цель достигаетс  тем что способ получени  белковых компонентов крови осуществл ют путем аД сорбции крови на поперечно сшитых полиэлектролитах - сополимерах, содержащих этилен и ангидрид малеиново кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приемлемой соли, жидкую плаз му крови подвергают- в,заимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве 0,025-0,1% с содержанием боковых динизших-алкил-амино-низших .-алкильных функциональных групп.

При этом динизший-алкил-амино низша  функциональна  группа - диметиламинопропил .

Способ осуществл ют следующим образом .

. Исходную плазму получают в свежезамороженном виде. До фракционировани  полиэлектролитом-сополимером

плазму оттаивают нагревом до 35°С. Соответствующий полиэлектролит-сополимер добавл ют к плазме в концентрации примерно 0,025-0,1%, предпочтительно 0,035-0,05% при рН 7,5-8,5. Смесь перемешивают около 10 мин, . в это врем  препарат, содержащий факtop IX, селективно адсорбируетс  полиэлектролитным сополимером. Остающа с  жидка  плазма содержит факторы II, IX и X. Нераствор ющиес  в воде, прперечНо сшитые полиэлектролиты-сополимеры содержат этилен и ангидрид малеиновой кислоты с содержанием боковых функциональных динизщих-алкил-амино-низших алкильных групп.

Основной сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты

-(АМК), получают взаимодействием этилена и ангидрида малеиновой кислоты в npHcyTCTBjjH перекисного катализатоpa в соответствующем растворителе. Сополимер предпочтительно содержит, основном, эквимол рные количества этленового и ангидридного остатков .

Основной сополимер типа АМК можно подвергать взаимодействию с низшим-алкил-амино-бис-низшим алкил-амином содержащим две первичные аминогруппы с получением попот--5чно сшитого сополимера типа АМК. боковые функциональные динизший-алкил-амино-низшие алкильные группы можно, добавл ть в попречно сшитый сополимер путем взаимодействи  динизшего-алкил-аминонизшего алкил-амина с частью всего количества остающихс  ангидридных групп полимера типа АМК.

Предпочтительно полизлектролитсополимер также перевод т в соль хлористоводородной кислоты.

Предпочтительной функциональной динизший-алкил-амино-низшей алкильной группой  вл етс  диметиламинопропил , предпочтительным сшивающим агентом .- метилиминобиспропиламин.

Предпочтительным по.лиэлектролит.о.м -сополимером  вл етс  такой, который содержит около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и около 90 боковых диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 единиц ангидрида малеиновой кислоты в полимере типа АМК.

Могут быть использованы и другие сшивающие агенты, например дивинилбензол и этилендиамин, а также функ циональные группы, например диметиламиноэтил и диэтиламинобутил.

После адсорбции фактора IX фактор VIII, оставшийс  в плазме, может быть далее концентрирован и вьщелен известными способами. Адсорбированны препарат на основе фактора IX легко выдел етс  путем элюировани  из полиэлектролита-сополимера промывкой водным раствором хлористого натри  мол рности приблизительно 1-3. Около 0,035 вес.% полиэлектролитного сопопимера , содержащего около 5 метилиминобиспропиламиновых сшивающих групп и. около 90 диметиламинопропиламиновых функциональных групп на 100 единиц ангидрида малеиновой кислоты , в сополимере типа АМК примен ют дл  селективной адсорбции препарата на основе фактора IX при рН 8.

Адсорбированный препарат на основе белковых компонентов крови элюируют из полиэлектролита-сополимера промывкой 1,7 М- NaCl при рН б.Элюат затем диализируют против 0,1 М NaCl при и дл  хранени  сушат замораживанием .

Пример 1. Полиэлектролит-сополимер , состо щий из продукта взаимодействи , в основном, эквимол рных частей этилена и ангидрида малеиновой кислоты (АМК), поперечно сшитого метилиминобиспропиламином (МИБПА), подвергают взаимодействию с диметиламинопропиламйном (ДМАПА) с получением около 5 С1х1ивающих групп - МИБПА и около 90 боковых групп ДМАПА на 100 еди|{иц ангидрида малеиновой кислоты в сбполимере типа АМК с переводом затем в соль .хлористоводородной кислоты. :

1 л обыкновенной плрзмы человека с помощью одномол рной;; гидроокиси натри  довод т, до рН 8, добавл   затем 0,35 г полиэлектролита-сополимера , после чего смесь|перемешивают 20 мин, фильтруют, и пфлучают фильт5 Рат в виде обедненной фактором IX

плазмы. Жмых промывают;дистиллированной водой дл  удалени извлеченного из плазмы белка.

Q Полиэлектролит-сополимер можно также подвергать взаимодеЯствии с помощью дивинилбензола 3 качестве средства, образующего поперечные св зи , и диметил-аминоэти.памина в качествё поставщика функциональных групп. Можно также использовать этилендиами- но- и диэтиламинобутиламин в назван ных количествах.

Затем из полиэлектролитного сополимера элюируют препарат на-основе фактора IX., содержащего факторы II,. IX и X, промывкой 25 мл 1,7 М .хлористого натри  при рН 6 , о (рН довод т до этого значени  0,1 :М лимонной кислотой ) в течение 20 . Сополимерный шлам фильтруют, фильтрат собирают в каче.стве желаемого состава на основе фактора IX. В серии семи повторных прогонов фракционировани  по 1 л, с применением пpeдлaгae |oIo способа, получают в.среднем 483 ± 48 единиц белковых компонентов фактора IX на 1 л при степени чистоты с показателем 178 ±33.

Одной, единицей факт:|ора IX считаетс  количеств.о этого фактора в 1 мл смешанной обыкновенно цельной плаз- . мы. Индекс степени чифготы рассчитываетс  как соотношение общего количества белка в исходнрй плазме и общего количества белка |в целом препарате , содержащем фактор IX, умноженное на соотношение едфчиц фактора IX целевом препарате на :основе фактора I X и единиц фактора I f в исходной

плазме.. ,

Пример -2. Примен ют 0,4 г/мл полиэлектролит-сополи1 ера состава по примеру 1 дл  примешивани  к обыкновенной человеческой плазме в течение

20 мин при рН 7,4 дл jвыделени  препарата , содержащего фак|бр IX, аналогично способу примера I1.

В таблице приведен л результаты замеров адсорбции факторов в пересчете

на исходную плазму. i

Фактов

Адсорбци , %

Эти результаты говор т о высокой селективности относительно адсорбции факторов II,.1X и X при полном исключении факторов VII и VI И в пересчете на соответствующие количества этих факторов в исходной плазме .

Пример 3. Согласно описанному в примере 1 способу, сополимер, содержащий этилен и ангидрид малеиновой кислоты (АМК) поперечно сшитый метилиминобиспропиламином (МИБПД) и затем подвергаемый взаимодействию с ди.бутиламинобутиламином (ДБАБЛ) вместо диметиламинопропиламина (ДМАПА дает подобные результаты.

Предлагаемый способ позвол ет получить препарат высокой степени чистоты .

Claims (2)

1.Способ получени  белковых компонентов крови путем адсорбции крови на поперечно сшитых полиЗлектролитах-сополимерах , содержащих этилен и

0 ангидрид малеинокой кислоты, с последующим элюированием целевого продукта с помощью физиологически приегллемой соли, отличающийс  тем, что, с. целью повышени  чистоты

5 препарата, жидкую плазму крови подвергают взаимодействию при рН 7,5-8,5 с полиэлектролитом в количестве от 0,025-0,1% с содержанием боковых динизших-алкил-амино-низших-алкиль0 . ных функциональных групп.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а. ющ и и с   тем, что динизша -алкил-амино-низша  функциональна  группа диметиламинопропил .

5

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 3455001, кл. 260-112, 1969.