SU617015A3

SU617015A3 - Способ получени 6- -(-)- амино- -(п-оксифенилацетамидо) пенициллановой кислоты,ее гидрата или соли

Info

Publication number: SU617015A3
Application number: SU762375570A
Authority: SU
Inventors: Боузард Даниэль; Вебер Абрахам
Original assignee: Бристоль Мейерз Компани (Фирма)
Priority date: 1974-11-19
Filing date: 1976-06-22
Publication date: 1978-07-25
Also published as: LU73809A1; PL104400B1; AR207879A1; HU173561B; RO68606A; CS189740B2

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-0-(-)-а-АМИНО-а (п-ОКСИФЕНИ11АЦЕТАМИДО)ПЕНИЦИЛЛАНОЮЙ КИСЛОТЫ, ЕЕ ГИДРАТА ИЛИ СОЛИ

ционных заболеваний птиц и животных, включа человека, вызьшаемых ,грамм-положительными и грамм-отрмцательными бактери ми.

Пример 1. 0,5 мг/мл 6-D-(-)-а-амино-а- ( - ацетоксифенилацетамидо)пенициллановой кислоты (п-ацетоампициллин) расзвор ют в 10 мг/мл раствора грубых пшеничных отрубей (Шнло), содержащего 0,1 М калиевого фосфатного буфера.

Раствор инкубируют при 37° С с взбалтыванием н образцы дл хроматографии отбирают через интервалы в 0,2, 48 и 24 часа. {Детворы 5 мел нанос т на полоски ватманской бумаги N 1, суивт и про вл ют растворителем, содержащим 80 вес.ч. бутклацетага, 15 вес.. н бушнола , 40 вес. ч. уксусной кислоты и 24 вес. ч. воды. Затем полоски подвергают бисавтотрафии на пластинках,засе нных bacillus subtilis при рН - 6,6.

Биохроматограмма указывает, что п-ацетоксиампициллин устойчив в сол ном растворе, ж) быстро гидролизуетс в л-гидроксиформу пшеничной эстеразой.

П р и м е р 2. Приготовл ют реакционны смеси, KOToptie взбалтывают при 28° С и через интервалы в iO; 1/2,1,2, 3,4J и 6 часов и отбирают образцы, как свшсано и-примере 1.

1) 25 мг обезжиренных отрубей (пшеничные отруби Шило обработанные ацетоном и высушенные ), 4,5 мл 0,1 М калиевого фосфатного

буфера с рН 6,0 и 0,5 мл содержащих 5 мг/мл 6-D- (-)-а-амино-а- («-ацетоксифениламидо) пенициллановой кислоты в том же буфере;

2)25 мг обезжире1шых отрубей, 4,5 мл 0,1 М калиевого фосфатного буфера с рН 7,0 и 0,5 мл содержащих 5 мг/мл и-ацетоксиампициллина в том же буфере;

3)25 мг обезжиренных отрубей, 4,5 мл 0,1 М калиевого фосфатного буфера с рН 7,5 и 0,5 мл, содержащих 5 мг/мл п-ацетоксиампициллина в том же буфере.

4)59 мг обезжиренных отрубей, 4,5 мл 0,1 М калиевого фосфатного буфера с рН 6,0 и 0,5 мл содержащих 5 мг/мл «-ацетоксиампициллина в том же буфере.

5)50 мг обезжиренных отрубей, 4,5 мл 0,1 М калиевого фосфатного буфера с рН 7,0 и 0,6 мг/мл, содержащих 5 мг/мл «-адетокстампициллина в том же буфере.

6)50 мг обезжиренных отрубей, 4,5 мл 0,1 М калиевого фосфатного буфера с рН 7,5

и 0,5 мл содержащего 5 мг/мл п-ацеток сиампициллина в ЮМ же буфере.

В таблице приведены результаты биохроматографировани продуктов взаимодействи обезжиренных отрубей с «-ацетоксиампициллиномЛучшие результаты получены с реакционной смесью N 5, полна конверси в «-гидроксиамшщиллине закончилась через 2 часа при концентрации энзима 10 мг/мл и рН 7,0.

23

12

2 3 4 5 6

П р и м е р 3. Реакционную смесь содержа1цую 50 мг обезжиренных отрубей (Шило), 2,5 мг 6-О(-)-а-амино-а-(л-ацетофенилацетамидо ) пешщиллановой кислоты и 5,0 мл воды взбалтывают при 28° С и Хроматографируют через 1,2 и 3 часа, как огассано в примере 1.

Результаты биохроквтогракш показьшают 100%-ную конверсию п-ацетоампнциллина и л-гидроксиампициллина за три часа, рН реакци91

95

100

77

98

77

104

86

онной смеси остаетс посто нным 5,7, несмотр на отсутствие буфера.

П р и м е р 4. Смешивают 20 г,обезжиренных отрубей (Шило), 1,0 г 6-0-(-)-а-амино-а- (л-ацетокшфенилацетамидо) пешщиллановой кислоты и 2 л 0,01 М водного калийного фосфатного буфера с рН 7. Смесь перемешивают пр 28°С и отбирают образцы каждый час, как описано в примере 1.

Биохроматограммы показьгоают 100% конверсию за три .часа, затем смесь центрифугируют . Верхний слой жидкости собирают рН довод т сол ной кислотой до 4,0 и лиофилизуют. Лиофилизированный раствор снова обрабатьтают ,как описано выше,и найдено, что он содержит около 900 мг п-гидроксиампициллина..

6,0 г лиофилизированного раствора взмучивают в 20 мл .воды. К получившейс смеси добавл ют 6 н. HCI дл постепенного снижени рН до 2,0. Перемешивание продолжают еще 15 мин и твердые вещества отфильтровьшают, фильтрат обрабатьюают активированным углем (1,0 г) и рН довод т до 4,5. Кристаллизаци - oj№JH час. Кристаллы отфильтровьшают, промывают водой и ацетоном, сушат и получают 180 мг тригидрата 6-D- (-) -а-амино-а- (и-оксифенилацегамидо ) пенициллановой кислоты, т. пл. (раз ).

Найдено,%: С 45,87; Н 5,71; N 10,48; HjO 13,68.

Q HieNjOs

Вычислено,%: С 45,82; Н 6,01; N 10,02; НзО 12,89.

Claims

1. Оюсоб получени 6-0-(-)-а:-амино-й-/ -окстфеиилацетамидо ) пенициллановой кислоТЫ , ее гидрата или соли, отличаю щи йс тем, что, с целью упрощени процесса и повышени качества целевого продукта, водный раствор 6- D- (-) -а-амино-а- (и-ацетоксифенилацетамидо ) пеницилдановой кислоты обрабатывают эстеразой из пшеничных отрубей при рН от 5,0 до 7,5 при температуре 28-37°С и выдел ют целевой продукт в виде свободной кислоты , ее гидрата или соли.

2.Способ по п. 1,отличающийс тем,что обработку осуществл ют при рН

0 от 5,5 до 6,0,

3.Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и йс тем, 4to обработку ос)ацествл ют в присутствии буфера при рН 7,0.

4.Отособ по JI. 1, о т л и ч а ю щ и й5 D тем, TIO процесс ведут при концентрации эстертзы в общем объеме раствора 10 мг/мл.

Источники информации, прин тые во внимавше при зкспертизе:

1. Выложенна за вка № ФРГ № 1942693, кл. 12р, 4/01, 1970.

2.Патент CCCPN 309520, М.кл. С.07 D499/44,

2S 1968.

3.Патент Англии № 1339605, кл. С 2А, 1973.