SU1760985A3 - Способ получени иммобилизованных клеток микроорганизмов или их частей - Google Patents

Способ получени иммобилизованных клеток микроорганизмов или их частей Download PDF

Info

Publication number
SU1760985A3
SU1760985A3 SU894614585A SU4614585A SU1760985A3 SU 1760985 A3 SU1760985 A3 SU 1760985A3 SU 894614585 A SU894614585 A SU 894614585A SU 4614585 A SU4614585 A SU 4614585A SU 1760985 A3 SU1760985 A3 SU 1760985A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
parts
microorganisms
cells
gel
suspension
Prior art date
Application number
SU894614585A
Other languages
English (en)
Inventor
Бенде Зоотан
Эгреши Андреа
Харшаньи Илона
Саяни Бела
Шишак Чаба
Original Assignee
Реанал Финомведьсердьяр (Инопредприятие)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Реанал Финомведьсердьяр (Инопредприятие) filed Critical Реанал Финомведьсердьяр (Инопредприятие)
Application granted granted Critical
Publication of SU1760985A3 publication Critical patent/SU1760985A3/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

Использование: биотехнологи . Сущность изобретени : органический растворитель с растворимостью в водеО.1-2,85 г/100 г, в зкостью при 20°С 0,455-7,0 сП, температурой кипени  77,6-205,2°С используют в качестве жидкой гелеобразующей среды, котора  не оказывает вредных воздействий на клешни микроорганизмов или их части. К суспензии спор Streptomyces savendulae АТСС 12950 добавз ют водный раствор агара , полученную смесь ввод т по капл м в холодный органический растворитель с помощью насоса в присутствии азотз с целью предупреждени  слипани  гелевых шариков друг с другом. Гелевые шарики формируют из полученной смеси со скоростью осаждени  капель 0,05-10 см/с. 2 табл.

Description

Изобретение относитс  к области биотехнологии , а именно к усовершенствованному способу иммобилизации микроорганизмов или их частей, используемых в процессах ферментации, в составе гел .
Известны многочисленные способы иммобилизации клеток микроорганизмов 1. Недостатки этих способов заключаютс  в сложности формировани  частиц гел , а также невозможности разложени  клеток в этих гел х.
Наиболее близким к предложенному способу  вл етс  способ получени  иммобилизованных клеток микроорганизмов, включающий суспендирование клеток в растворе полисахарида и получение частиц re- л  путем внесени  суспензии в растительное масло. Недостатком способа
 вл етс  ингибирующее действие растительного масла на процессы размножени  клеток и на их способность продуцировать различные соединени  2.
Целью изобретени   вл етс  повышение продуцирующей способности клеток или их частей, а также увеличение роста клеток.
Способ заключаетс  в суспендировании клеток микроорганизмов или их частей в водном растворе агара, введении суспензии в органический растворитель дл  образовани  частиц гелч с включенными клетками или их частицами, отделении и промывке частиц гел . В качестве органического растворител  используют растворители со следующими параметрами: растворимостью в воде 0,1-4,0 г на 100 г воды, в зкостью
0,455-7,0 сП при 20 С и температурой кипени  77,6-205,2°С. Введение суспензии в охлажденный до 0-10°С органический растворитель осуществл ют по капл м при скорости оседани  капель от 0,5 до 3,4 см/сек. ,
Способ позвол ет значительно увеличить продуктивность иммобилизованных клеток (продуцирование антибиотиков клетками продолжаетс  в течение 13 дней с трехкратной сменой культуральной среды), э также повысить эффективность роста клеток .
Способ иллюстрируетс  следующими примерами осуществлени .
П р и м е р 1. Образуют суспензию спор, содержащую 5 х 10 спор/см3, с помощью стерильной дистиллированной воды из 7-8- дневной культуры на скошенном агаре Streptomyces tavencfulae ATCC 12950. Добавл ют 10 мл3 полученной суспензии спор к 90 см водного раствора агара с концентрацией 4 мас.%, стерилизованного ранее при 121°С в течение 30 минут и затем охлажденного до 50°С. Полученную смесь ввод т по капл м с помощью перистальтического насоса в 1000 холодного (5°С) изоокта- нола (2-этилгексанол). В этих операци х используютс  стерилизованные инструменты, Азот пропускают через изооктановую среду медленным потоком с целью предупреждени  слипани  гелевых шариков друг с другом . Введение азота продолжают в течение 4-5 минуг после завершени  выкапывани , а затем геловые шарики отфильтровывают и промывают до удалени  растворител  стерильной дистиллированной водой, содержащей 0,02 мас.% Tween 80. Гелевые шарики правильной сферической формы диаметром 1-5 мм получены в результате этого.
Подобные результаты получают, когда изооктанол по вышеприведенному процессу замен ют на этилацетат, циклогексэнол, н-амиловый спирт, бензиловый спирт, эти- лацетоацетат или н-бутилацетат. Параметры растворителей даны в таблице 1.
П р и м е р 2. Суспензию спор Streptomyces agrillaceum ATCC 12956, куль- тиоируемых на среде со скошенным агаром, содержащей 0,5 мас.% попо ч з сои, 1.0 мас.% глюкозы и 2,0 мас.% рото нистсго агара, примен ют дл  инокул ции культуральной среды, простерилизованной дл  этого при 121°С в течение 20 минут и затем охлажденной до комнатной температуры, следующего состава, мас.%:
Мука из лесного ореха2,0
Гидролизованный казеин0,2
Глицерин4,0
Хлорид натри 0,3
Зх
Карбонат кальци 0,5
(Величина рН культуральной среды, заполненной водопроводной водой, составл ет до стерилизации 7,0).
Культуру встр хивают в течение 48
часов при 32°С на качалке со скоростью 360 об/мин, добавл ют 10 см3 полученной вегетативной культуры к 90 см 4%-ного водного раствора агара с температурой 0 45°С, и гелевые шарики формируют из полученной смеси, как описано в примере 1. ПримерЗ.
Streptomyces diastatochomogenes, разновидность РО-31/М G 00366/спорулируют 5 на среде скошенного агара следующего состава , мас.%:
Дрожжевой экстракт0,1
М сной экстракт0,1
Триптон0,2
0 Fe04
Глюкоза1.0
Na2HPCM0,713
КН2Р040,363
Промытый волок5 нистый агар2,0
(Величина рН культуральной среды, дополненной водопроводной водой, до стерилизации составл ет 7,0).
Спорулированную примерно в течение 0 7-8 дней культуру отмывают стерильной дистиллированной водой или физиологическим раствором и регулируют концентрацию суспензии спор до 3 х 106 спор/см3. Полученную суспензию спор затем обраба 5 тывают так, как описано в примере 1, дл  получени  шариков из агарового гел 
П р и м е р 4. Клеточную суспензию, содержащую 8 х 10 клеток/см3 стерильной дистиллированной воды, готов т из 4-днев- 0 ной культуры со скошенным агаром Rhodococcus sp, NCAIM 8001003. Добавл ют 10 см3 суспензии спор к 90 см3 стерильного теплового (45°С) водного раствора агара и формируют гелевые шарики из сме- 5 си так, как описано в примере 1.
Культуральную среду состава, мас.%; Холестерин21,0
Сахар0,5
0Соева  мука0,7
Сырой лецитин подсолнечника0 ,5 Tween и 600,2 КН2Р040,1
5СаСОз0,1
Nad0,1
MgS04-7H700.05
Struktol B 0200,1
стерилизуют при 121°С в течение 25 минут и затем охлаждают до комнатной температуры (величина рН культуральной среды до стерилизации составл ет 6,0). Культурзль- ную среду инокулируют гелевыми шариками , полученными по вышеописанному, и затем встр хивают на плоском шейкере в течение 3 дней при 30°С со скоростью 300 об/мин. Уровень холестеролоксидазы в полученном бульоне определ ют методом Allain и др.
П р и м е р 5. Штамм Streptomyces rubibaclens спорулируют на среде со скошенным агаром с составом, описанным в примере 1. Примерно 4-5-дневную спору- лированную культуру отмывают стерильной дистиллированной водой или физиологическим сол ным раствором и регулируют концентрацию суспензии спор до примерно 5 х 106 спор/см3. Шарики из агарового гел  формируют из полученной суспензии спор так, как описано в примере 1.
Культура л ьную среду состава, мас.%:
Дрожжевой экстракт 0,1
М сной экстракт0,1
Триптон0,2
FeS04ЗхЮ 4
Глюкоза1,0
Агар2,0
стерилизуют при 121 °С в течение 25 минут и затем охлаждают до комнатной температуры . (Величина рН культуральной среды составл ет 7,2 до стерилизации). Культу- ральную среду инокулируют гелевыми шариками, полученными согласно вышеописанному примеру и культуру встр хивают на плоском шейкере в течение 5-6 дней при 28°С со скоростью 280 об/мин. Полученный антибиотик детектируют известным методом тонкослойной хроматографии.
П р и м е р 6. Штамм Micromonospora inyoensis ATCC 27600 спорулируют на среде со скошенным агаром состава, приведенного в примере 3.
Примерно 7-8 дневную культуру отмывают стерильной дистиллированной водой или физиологическим сол ным раствором и суспензи  спор с концентрацией примерно 6 х 10б спор/см образована. Шарики из агарового гел  формируют из этой суспензии спор так, как описано в примере 1.
Полученные гелевые шарики используют дл  инокул ции стерильной жидкой куль- туральной среды состава, данного Б примере 5, и культуру встр хивают на плоском шейкере в течение 5-6 дней при 28°С со скоростью 280 об/мин.
Полученный антибиотик может быть детектирован известным методом, с использо- ваиием Bacillus subtiiis в качестве измерительного микроорганизма.
П р и м е р 7. 10 см вегетативной культуры Streptomyces arglllaceus ATCC 12956, описанной в примере 2, добавл ют к 90 см 4%-ного раствора агара и из половины этой
смеси получают частицы гел  по способу в соответствии с примером 1. Вторую половину приготовленной смеси добавл ют по капл м к стерильному подсолнечному маслу, охлажденному до 0-10°С. Частицы гел  промывают , как это описано в примере 1, дл  удалени  растворител , соответственно масла (следует отметить, что растворитель при промывке удал етс  полностью, тогда как мабло при аналогичной обработке остаетс  на поверхности частиц в виде тонкой пленки). Культуральную среду, описанную в примере 2, засевают промытыми частицами и контролируют рост и продуцирующую способность клеток, иммобилизированных в геле , Полученные результаты приведены в табл.2.
Из приведенных в табл. 2 данных видно, что в то врем , как при использовании частиц гел , осажденных по способу в соответствии с насто щим изобретением иммобилизированные на них клети прекрасно размножаютс  и продуцируют антибиотики (интенсивное продуцирование антибиотиков позвол ет трижды осуществ
л ть смену культуральной среды), микроорганизмы , иммобилизированные на частицах гел , осажденных растительным маслом, размножаютс  медленно и слабо и вообще не продуцируют антибиотиков. Это однозьачно подтверждает ингибирующее действие растительного масла, используемого по известному способу.
Примерб. 10 см суспензии остатков клеток Mlcrococcus lysocieistus, продуцирующих полинуклеотид фосфорилазу, с удаленными стенками смешивали с 90 см 4%-ного раствора агара при температуре 50°С. Частицы гел  получали из этой смеси таким же образом, как это описано в примере 1.
Способ позвол ет повысить продуктивность клеток в процессе синтеза антибиотиков , а также увеличить рост клеток.

Claims (1)

  1. Формула изобретени  Способ получени  иммобилизованных клеток микроорганизмов или их частей, включающий -/спендирование в водном
    растворе полисахарида, введение суспензии в органическую среду дл  образовани  частиц гол  с включенными клетками или их част ми, отделение и промывку частиц гел , отличающийс  тем, что, с целью повышени  продуцирующей способности
    клеток или их частей, а также увеличени  роста клеток, в качестве полисахарида используют агар, а в качестве органической среды - органические растворители с растворимостью в воде 0,1-2,85 г/100 г воды,
    в зкостью 0,455-7,0 сП при 20°С и температурой кипени  77.6-205,2°С, а суспензию ввод т в органическую среду, охлажденную до 0-10°С, по капл м при скорости оседани  капель 0,5-10,0 см/с.
    Характеристики растворителей
    х)
    Логарифм константы распределени  каждого растворител , измеренной в смеси Н-октан:вода
    Таблица 2 Свойства клеток, иммобилизованных известным и предложенным способами
    Таблица 1
SU894614585A 1988-07-27 1989-07-26 Способ получени иммобилизованных клеток микроорганизмов или их частей SU1760985A3 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU883987A HU202579B (en) 1988-07-27 1988-07-27 Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1760985A3 true SU1760985A3 (ru) 1992-09-07

Family

ID=10966373

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU894614585A SU1760985A3 (ru) 1988-07-27 1989-07-26 Способ получени иммобилизованных клеток микроорганизмов или их частей

Country Status (6)

Country Link
JP (1) JPH0276581A (ru)
DE (1) DE3924446A1 (ru)
FR (1) FR2634785A1 (ru)
HU (1) HU202579B (ru)
IT (1) IT1230999B (ru)
SU (1) SU1760985A3 (ru)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4208482A (en) * 1976-04-23 1980-06-17 Anheuser-Busch, Incorporated Immobilization of glucose isomerase
US4399219A (en) * 1981-01-29 1983-08-16 Massachusetts Institute Of Technology Process for isolating microbiologically active material
NL8103168A (nl) * 1981-07-01 1983-02-01 Tno Werkwijze voor het uitvoeren van een enzymatische reaktie.
SE441009B (sv) * 1982-03-08 1985-09-02 Kjell Nilsson Sett att immobilisera levande biomaterial i perlformiga polymerer
JPS61260883A (ja) * 1985-05-15 1986-11-19 Kikuchi Keiji 生酵母菌包括寒天ビ−ズの製造法ならびにアルコ−ルの連続製造法
PT83746B (pt) * 1985-11-15 1988-08-17 Gist Brocades Nv Processo para a preparacao de novos biocatalisadores imobilizados e para a producao de etanol por fermentacao

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Иммобилизованные ферменты /Под ред. И.В.Березина и др. М., МГУ, 1976. т. 1, с. 243-259. 2. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы /Под ред. Дж.Вудворда, 1988, М.:Мир, с. 157-160. *

Also Published As

Publication number Publication date
DE3924446A1 (de) 1990-02-01
FR2634785A1 (fr) 1990-02-02
JPH0276581A (ja) 1990-03-15
IT1230999B (it) 1991-11-08
HU202579B (en) 1991-03-28
HUT50866A (en) 1990-03-28
IT8921320A0 (it) 1989-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Veelken et al. Production of tylosin and nikkomycin by immobilized Streptomyces cells
SU735177A3 (ru) Способ получени пуллулана
JPS61135583A (ja) ストレプトミセス科の菌から得られる溶菌性酵素生成物、その製法およびそれに適する菌株
SU1760985A3 (ru) Способ получени иммобилизованных клеток микроорганизмов или их частей
CA1327536C (en) Process for the production of microbial cellulose
JPH07246097A (ja) トレハロースの製造方法
SU539538A3 (ru) Способ получени метаболита "а 27 106
JP3220839B2 (ja) 酵母プロトプラストによる細胞表層物質の生産方法
US3686072A (en) L-asparaginase from erwinia
SU1661214A1 (ru) Штамм бактерий SеRRатIа маRсеSсеNS - продуцент эндонуклеазы
JPH06125774A (ja) レバンサッカラーゼ酵素、その製造方法、それを産生する微生物およびそれを含む組成物
RU2081169C1 (ru) Штамм бактерий alcaligenes species - продуцент нитрилазы
US3061522A (en) Process for the production of demethyltetracyclines
RU2627182C1 (ru) Штамм Aneurinibacillus migulanus и его применение для получения грамицидина С
KR880002315B1 (ko) 히아론산과 스트렙토 키나제를 동시에 생산하기 위한 스트렙토코커스속 미생물의 배양방법
CH393638A (fr) Procédé de préparation d'un nouvel antibiotique
JPS6250473B2 (ru)
JP3796540B2 (ja) 黄色色素の製造方法
Farid et al. Production of rifamycin B and SV by free and immobilized cells of Amycolatopsis mediterranei
JPH04128289A (ja) Fr900506物質の製造法
JPH0631280B2 (ja) Ws7739物質およびその製造法
JP3327982B2 (ja) 新規な抗生物質mi481−42f4−a関連物質
JPH044868B2 (ru)
JPH046356B2 (ru)
CN117701463A (zh) 枯草芽孢杆菌菌株、菌剂、表面活性剂、制备方法及应用