JPS61135583A - ストレプトミセス科の菌から得られる溶菌性酵素生成物、その製法およびそれに適する菌株 - Google Patents

ストレプトミセス科の菌から得られる溶菌性酵素生成物、その製法およびそれに適する菌株

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JPS61135583A
JPS61135583A JP60248152A JP24815285A JPS61135583A JP S61135583 A JPS61135583 A JP S61135583A JP 60248152 A JP60248152 A JP 60248152A JP 24815285 A JP24815285 A JP 24815285A JP S61135583 A JPS61135583 A JP S61135583A
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lytic enzyme
enzyme product
streptomyces
product obtained
fermentation
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ゲールハルト・ヴエーネル
ハルトムート・フエルスコウ
パウル・プレーフエ
エーリツヒ・リユツク
ゲルト―ヴオルフハルト・フオン・リモン・リピンスキー
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Hoechst AG
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ストレプトミセスによる溶菌性酵素生成物の産生は知ら
れておりそして例えば西ドイツ特許公開公報第２．０１
１．９５５号、同第２，０４０，４４０号および第２，
１４６，５９７号に記載されている。これらの知られた
方法は、特に溶菌性酵素生成物の収率に関して非常に高
価につく。
フェリコラ−（ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　）種のストレプ
トミセスによる溶菌性酵素生成物の形成はこれまで開示
されていない。例えば菌株ＤＳＭ　４０２５５型に関す
る我々の研究では何ら成果が得られなかった。
今驚くべきことに、ストレプトミセス・コエリコラ−（
５ｔｒｅｐｔ、ｏｍｙｃｅｓ　ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　
）種の１菌株から非常に活性な溶菌性酵素生成物が高い
収率で産生されることが見出された。この菌株は西ドイ
ツ微生物収集機関であるＤＰｉＭに寄託番号ＤＳＩＪ３
０３０の下に寄託されている。本発明はこの菌株および
それらが溶菌性酵素生成物を形成する場合はその突然変
異体および変株に関する。
本発明の他の局面おＬび好ましい態様＆裏以下に記載さ
れる。
本発明による菌株は土壌試料から単離された。
選択の指標（工ｐ）１３〜７で細菌を溶解させうる酵素
生成物の分泌であつ友。
本発明による菌株は慣用の培養基中で生育しその中で溶
菌性酵素生成物上産生する。細胞を分離した後に培養上
澄み液中に溶菌性酵素生成物が残存し、そこからアルコ
ール沈澱、イオン交換クロマトグラフィー限外濾過お工
びゲル濾過のような慣用の蛋白質濃縮および精製法によ
り単離されうる。
溶菌性酵素生成物の本発明による製法の一つの利点を工
、簡単な組成の培養基中において高い収率で溶菌性酵素
生成物が得られることにあ°る。
と見なされうる。甜菜糖糖蜜を培養基１！当り５〜５０
？、好ましくは１０〜２０９の量で添加することが特に
良いことが判明し友。
培養基にカルシウムイオンを容易く溶解しうる無毒性の
カルシウム塩、好ましくは安価な塩化カルシウムの形態
で添加することによりさらに収率上昇が達成される。ａ
、０５〜１モルのカルシウム濃度が好ましく、１００〜
５００ミリモルの濃度、例えば０．２〜（Ｌ５重量％の
塩化カルシウム２水化物の添加なる形態が特に好ましい
。
本発明により得られる溶菌性酵素生成物は３以下から９
以上までのめ範囲において安定でかつ活性である。緩衝
混合物中室温で１６時間保温培養後でｐｉ（３〜９の範
囲における最大活性の少くとも８０チがなお保有されて
い友。
溶菌性酵素生成物の活性の至適温度は５０〜６０℃でめ
る。この範囲内にわたり、最大活性の少くとも９０チが
得られる。低い温度で出発すると６０℃までの温度上昇
に伴い活性はゆっくり増大する。室温では最大活性の約
１０％、３０℃では約６０俤、４０’Ｃでは約６０チで
ある。より高い温度では活性は速やかに゛低下する。
６５℃では最大活性の約３０％そして７０’Ｃでは１０
％である。
溶菌性酵素生成物の作用に対する至適−は４．５〜５で
ある。活性ば２約４．２５〜５．５の範囲内で少くとも
８０％である。声４では最大活性のなお約６５１ｐＨ五
５では２５チ、≠５．５では約７５チそしてｐＨ６では
約４０％である〇本発明による溶菌性酵素生成物はダラ
ム陽性およびダラム陰性細菌に非常によく動く。それゆ
えこのものは（商業上入手しうるリゾチームのように）
食品の保存、感染の防止およびグロトグラスト調製に使
用されうる。以下の実施例により本発明′に二つ詳細に
説明する。百分率表示は別に断わりなければ重液による
ものとする。
実施例　１ ストレプトミセス・コエリコラーの培養大豆ひきわり２
チ、マンニット２％および寒天１．５％を含有する寒天
斜面培地にストレプトミセス・コエリコラ−Ｄ８Ｍ　３
０３０　ｔ−接徨しそして６０℃で１０日間培養した。
Ｑ、　９　％　ＮａＣ２および非イオン系界面活性剤０
．０１％の滅菌溶液１゜＋１＋ｊｔ−斜面培地に加えそ
して胞子全洗い流した。
この胞子懸濁液ＣＬ２ｄｇ３００ｍ容量の培養フラスコ
中の培養基１００−の振盪培養の几めの接種物質として
使用し友。
第１表に示される培養基第１〜３号が調製され、接種さ
れそして３０℃および１６０　ｒｐｍにて振盪された。
２．４および６日後に試料を採取し、細胞？遠心分離除
去しそして培養上澄み液中の溶菌性酵素生成物の活性全
測定し几（第２表）。
溶菌性酵素生成物の最高収量は、グルコース、大豆ひき
わりおよびカゼインペプトンに加え甜菜糖糖蜜２％を含
有する栄養浴液３を用いて得られた。
第１表：培養基 培地番号 チ　　　　　　　１　２　５ グルコース　　　　　　２１ マンニット　　　　　　　　　２ 大豆ひきわり　　　　　　２　１　　α５カゼインペプ
トン　　　　　　　　　α５糖、蜜　　　　　　　　　
　１２ 第２表：培養上澄み液中における溶菌性酵素生成物の活
性（Ｕ〜） 発酵時間　　　培地番号 実施例　２ カルシウム添加による収量増大 グルコース１％、糖蜜２チ、大豆ひきわり（Ｌ５饅、カ
ゼインペグトンｌ１５慢およびＣａＣＬｚ　ｘ　２Ｈ２
０ＣＬ５％を含有する栄養培地上でストレグ）１セス・
コエリコラーＤＡＭ　３０５０　ｔ−実施例１に記載さ
れた方法で培養した。ＣａＣＬ２の添加により培養上澄
み液中の溶菌性酵素生成物の収量に関し２．４および６
日後で７６８Ｕ／ｄ、２４６２Ｕ廓お工び４７１５Ｕ〜
なるかなりの増大が達成され友。
実施例　３ 発酵 実施例１で得られ友ストレプトミセス・コエリコラ−Ｄ
ＳＭ５０５０の胞子懸濁液１０１１Ｑ−８７の発酵器中
の培養基５！発酵用の接種物質として使用し念。
発酵条件： 培養基：　　グルコース　１チ 糖蜜　　　２慢 大豆ひきわり　　　Ｃｌ３チ カゼインペプトン　　（Ｌ５％ ＣａＣＬｚ　Ｘ　２８２０　　　　１２％−値：６．３ 温　度：　　３６℃ 攪拌速度：　　５００　ｒｐｍ 空気供給、：　　３７／分 発酵期間４日間後には蔗糖濃度（糖蜜からの）はお工そ
ゼロに低下し友。細胞を遠心分離に工り除去しそして培
養上澄み液からアルコール沈澱、イオン交換クロマトグ
ラフィー、限外濾過およびゲル濾過により溶菌性酵素生
成物？単離した。
下記第３表においては、上澄み液中に見出される溶菌性
酵素生成物の活性が収率１００％に等しいと設定された
。従って「収率」の欄に示されるチ数は第１欄に示され
る単離法七用いて回収された割合を指す。
「方法」なる欄は次の意味を示す。
０＝単離なしく培養上澄み液の活性） １＝エタノール沈澱および緩衝液中への沈澱の溶解２＝
カチオン交換クロマトグラフィー ３＝限外濾過 ４＝ゲル濾過 溶菌性酵素生成物の活性測定を１次のようにして実施さ
れた。
αＩＭｈｆＲナトリウム緩衝液（ｐＨ５，０）１プ当り
α２Ｗｌｉのミクロコツカス・ルテウス（ＭｉＣｒＯ−
ｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ　）　ＡＴＣＣ４６９Ｂ　
（ペーリンが−・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　
Ｍａｎｎｈｅｉｍ　）社製品）全含有する懸濁液２．８
ｄ中に溶菌性酵素生成物を含有する試料α２　ｔｎｌ　
ｆピペットで加えそして２５℃で混濁の低下ｉ４５０ｎ
ｍでの吸光計測により測定し友。［１００１７分なる吸
光低下が１Ｕと定義される。
蛋白質の測定はＬｏｗｒｙ氏他のｒ　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、
　Ｃｈｅｍ、　Ｊ第１９３巻第２６５頁（１９５１）記
載の方法により実施され友。
実施例　４ 溶菌活性 第４表に示される微生物を２４時間培養し。
細胞を遠心分離により除去しく　１５００９にて５分間
）、（ＬＩＮ酢酸す）　ＩＪウム緩衝液（ｐ）１５．０
）を用いて２回洗いそしてこの酢酸緩衝液中によく懸濁
させ友。溶菌性酵素生成物の前記した活性測定はこの懸
濁液中にて実施される。第４ａ表にはグラム陽性細菌、
そして第４ｂ表にはダラム陰性細菌が示される。比較物
としてはそれぞれ卵リゾチームが用いられる。
実施例　５ ミルク中における溶菌活性 実際に近い試験系として第５表に示された細菌の２４時
間令培養物１プに低温殺菌され九全乳９プおよび４００
Ｕの溶菌性酵素生成物を含有する溶液１１１Ｌｔ５！ｌ
−加え、そして直後、１時間後、および２０時間後試料
を採取しそしてその中の生存する細菌数上測定した。比
較値としては溶菌性酵素生成物を含有する溶液の代りに
滅菌水１ｒＬｔｔ試験系に用いる。
第　　５　　ノ 細菌数の測カ グラム　　　　細　　　菌　　　　　　　　　　　　　
時間後（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｉｍｐｌ
ｅｘ）ＡＴＣＣ６９４６２０ｈ＋バチルス・サブチリス
　　　　　　　　　　　　　　　１ｈ（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）　　　　　　　　　　　　　　
２０ｈ＋ラクトバチルス・カゼイ１ｈ （Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ）　ＡＴＣ
Ｃ１１４４！＋　　　　　２０ｈ＋クロストリノウム・
ペクチノｌルム　　　　　　　　　　１ｈ（Ｃｌｏｓｔ
ｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｃｔｉｎｏｖｏｒｕｍ）　　　　　
　　　　　２０ｈ−エシェリヒア・コリ　　　　　　　
　　　　　　　　　　　１ｈ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
　　ｃｏｌｉ）　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２０ｈ−エシェリヒア・コリ　　　　　　
　　　　　　　　　　　　１ｈ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ　　ｃｏｌｉン　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　２０ｈ−クレプシエラ・プノイモニアエ　
　　　　　　　　　　　　　１ｈ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌ
ａ　ｐｎｅｕｍｏｎｌａｅ）　　　　　　　　　　　　
　２０ｈ−、ｉｌｉ”、− ３３，０００＆５　　　　　　１２０ ９５０　　　　　　　　　５３０　　　　　　　　　　
Ｂ４Ｏ１，３００１，５００２，０００ １，２００１４０３００ ５，１４２３８ ３４０２０２３・ ２．４００　　　　　　　　　　　１６　　　　　　　
　　　　Ｂ２１．１００　　　　　　　　５５０　　　
　　　　　１３０比較例 菌株ＤＥＩＭ　５０５０　ｋ西ドイツ特許公開公報第２
．１４６，５９７号に記載されたストレプトミセス・グ
ロビスポリウム（Ｓ、　ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｉｕｍ）　
ＡＴＣＣ２１５５３と溶菌性酵素生成物の収量について
比較した。第６表において「培地Ａ」は実施例２におい
て定義された培地を意味しそして「培地Ｂ」は西ドイツ
特許公開公報第２，１４６，５９７号（カナダ特許第９
５Ｆ！、、６５９号）の「参照例１」に記載された液体
培地で意味する。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）ストレプトミセス・コエリコラー（Ｓｔｒｅｐｔｏ
    −ｍｙｃｅｓ　ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）ＤＳＭ３０３０
    の発酵により得られる溶菌性酵素生成物。 ２）ストレプトミセス・コエリコラーＤＳＭ３０３０の
    菌株を用いることからなるストレプトミセス科菌の発酵
    による溶菌性酵素生成物の製法。 ３）発酵培地が甜菜糖糖蜜を含有することからなる前記
    特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４）発酵培地がカルシウムイオンを含有することからな
    る前記特許請求の範囲第２または第３項記載の方法。 ５）食品の保存、感染の防止およびプロトプラスト調製
    への前記特許請求の範囲第１項記載の溶菌性酵素生成物
    または前記特許請求の範囲第２〜４項記載の方法により
    得られる溶菌性酵素生成物の使用。 ６）ストレプトミセス・コエリコラーＤＳＭ３０３０お
    よび溶菌性の酵素生成物を形成するその突然変異体およ
    び変種。
JP60248152A 1984-11-08 1985-11-07 ストレプトミセス科の菌から得られる溶菌性酵素生成物、その製法およびそれに適する菌株 Pending JPS61135583A (ja)

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DE3440735.9 1984-11-08

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