SU1661209A1 - Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина - Google Patents
Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина Download PDFInfo
- Publication number
- SU1661209A1 SU1661209A1 SU894724352A SU4724352A SU1661209A1 SU 1661209 A1 SU1661209 A1 SU 1661209A1 SU 894724352 A SU894724352 A SU 894724352A SU 4724352 A SU4724352 A SU 4724352A SU 1661209 A1 SU1661209 A1 SU 1661209A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- ribavirin
- strain
- escherichia coli
- ribavirine
- preparation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в частности к производству противовирусных соединений, и касаетс нового штамма бактерий, используемого дл получени рибавирина. Целью изобретени вл етс новый, экспериментально полученный, штамм бактерии ESCHERICHIA COLI ВКПМ В-4834 с повышенной активностью клеток в реакции синтеза рибавирина. Рибавиринсинтезирующую активность измер ют путем пр мого определени количества рибавирина, образующегос при инкубации сырой биомассы клеток с изанозином и ТК.
Description
Чи
Ё
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в частности к производству противовирусных соединений .
Целью изобретени вл етс новый экспериментально полученный штамм бактерии Escherichla coll БМТ-ЗД/1А с повышенной активностью клеток в реакции синтеза рибавирина, в св зи с чем его используют дл получени этого противовирусного нуклеозида.
Штамм E.coll БМТ-ЗД/1А получен из музейного тиминзависимого штамма E.coli п 3110 путем отбора наиболее активных вариантов при последовательном выращивании на плотной агаризованной среде АдамСа с тимином (1 мкг/мл), затем с тими- нарабинозидом (5 мкг/мл) в качестве источ- ника тимина и наконец на среде, содержащей тимин (1 мкг/мл) и гуанозин (1 мг/мл) в качестве источника углерода.
Штамм E.coli БМТ-ЗД/1А депонирован в коллекции промышленных микроорганизмов под коллекционным номером ВКПМ В- 4834 и характеризуетс следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки .
Под микроскопом клетки имеют вид пр мых палочек с закругленными концами (1,1-1,5)х(2-6) мкм. Встречаютс отдельно или парами. Спор и капсул не образуют. Клетки обладают подвижностью. По типу движени - перитрихи. Грамотрицатель- ные.
В бульоне Хоттингера к 24 ч (37° С) рост выражен в виде легкого помутнени . На дне пробирок образуетс комковатый осадок, который полностью взмучиваетс при встр хивании (S-форма).
На МПА и агаризованной среде Адамса (37° С, 3 сут) колонии гладкие, слабо выпуклые , легко сливающиес . Консистенци в зО
о
k
ю о ю
ка . Цвет колоний сероватый. Поверхность блест ща , рельеф однородный. Кра колоний слегка волнистые.
На агаризованной дифференциальной среде Эндо штамм растет в виде полупрозрачных колоний без изменени цвета среды .
Диапазон температуры роста 7-40° С. Оптимальна температура 36-37° С.
Диапазон рН роста 5,5-8,5. Оптимум роста наблюдаетс при рН среды 7-7,5. Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. В процессе роста сбраживает до кислоты с незначительным выделением газа глюкозу, араби- нозу, трегалозу, мальтозу, маннит, глицерин. Не усваивает сахарозу, лактозу, оафинозу сорбит, дульцит.
В качестве единственного источника углерода может использовать ацетат, но не цитрат и инозит.
Желатину не разжижает. Крахмал не гидролизует. Молоко не свертывает. Гидролизует РНК.
Гемолитическими свойствами не облагает Не токсичен и не патогенен дл теплокровных животных,
Усваивает аммонийный и нитратный азот. Наиболее активный рост биомассы обеспечивают органические источники азота (пептон, дрожжевой и кукурузный экстракты , ферментолизат БВК).
Продуцирует индол, каталазу. Не образует уреазу и оксидазу. Содержание Г+Ц в составе ДНК 50,3±0,5 мол.% (определено оптическим методом ).
Штамм нетоксичен и непатогенен дл теплокровных животных.
Культура сохран ет жизнеспособность не менее года при хранении в холодильнике (4° С) на полноценной агаризованной среде (МПА, среза Хоттингера) под слоем вазелинового масла, а также в лиофильно- высушенном состо нии.
Штамм E.coli БМТ-ЗД/1Аслособен синтезировать рибавирин с эффективностью 1,05 ммоль/ч/r клеток (в расчете на сухую массу).
Рибавиринсинтезирующую активность измер ют путем пр мого определени количества рибавирина, образующегос при инкубации сырой биомассы клеток с гуано- зином и ТК. С этой целью реакционную смесь (1 мл), содержащую 10 мМ К-фосфат- ный буфер (рН 7), 15 кг клеток, гуанозин и ТК в концентраци х 0,3 М, инкубируют при 60° С в течение В ч. После инкубации реакционную смесь центрифугируют (SOOOg, 10 мин)
и надосадочную жидкость хроматографиру; ют на тонкослойной пластинке Silufol . UV254 (Kavalier, ЧССР) в системе растворителей изопропано-хлороформ -25% водный
аммиак (10:5:2). Целевой продукт обнаружен в УФ-свете, идентифициру сравнением с положением образца-свидетел , и элюируют водой. После внесени в элюат фосфатного буфера (рН 7) его оптическую
0 плотность замер ют на спектрофотометре.
Концентрацию рибавирина рассчитывают,
использу коэффициент мол рной экстинции при длине волны 207 нм, равный 11600.
В таблице дана сравнительна оценка
5 эффективности наиболее активных из 80 проверенных штаммов микроорганизмов.
П р и м е р 1. Культуру штамма E.coli БМТ-ЗД/1А внос т петлей с кос ка в колбы емкостью 250 мл, содержащие 50 мл МАБ с
0 0,5%-ным дрожжевым экстрактом и 0,5% NaCI, культивируют на биологической качалке (180 об/мин) в течение 16 ч при 37° С. Приготовленным посевным материалом в количестве 5% засевают лабораторный фер5 ментер АК-3 емкостью 3 л, содержащий 2 л питательной среды того же состава. Ферментацию ведут 12 ч при 37° С с аэрацией 0,8 л/мин на 1 л среды.
По окончании культивировани клетки
0 собирают центрифугированием (SOOOg, 10 мин), получа 3,5 г клеток (в расчете на сухую массу) с рибавиринсинте- зирующей активностью 1 ммоль рибавири- на/ч/г.
5П ри м е р2. Клетки E.coli БМТ-ЗД/1А,
выросшие в двух 250 мл колбах, согласно примеру 1, используют в качестве посевного материала и засевают ими лабораторный ферментер АК-3 емкостью 3 л, содержащий
0 2 л питательной среды следующего состава, г/л: 6 Na2HPO i; 3 КН2Р04,- 0,5 NaCI; 1 МЩС1; 0,125 MgS04x 7H20; 40 ферментализат БВК. Начальное значение рН 7,5. Ферментацию ведут 12 ч при 37° С и аэрацией 0,8 л/мин
5 на 1 л среды.
По окончании культивировани клетки
собирают центрифугированием
(8000д, 10 мин), получа 8 г клеток (в рас- чете на сухую массу) с рибавиринсинтезиру0 ющей активностью 1,05 ммоль/ч/г сухой массы.
10 мл смеси, содержащей 0,3 М ТК, 0,3 М гуанозина, 10 мМ К-фосфатный буфер (рН 7), инкубируют с перемешиванием 30 ч при
5 60° С. После осаждени клеток центрифугированием (SOOOg, 10 мин) их дважды промывают 10 мл воды. Супернатанты объедин ют и нанос т на колонку (2,5x4 см) с ионообменной смолой Dowex 50w x 8 в Н+-форме. Ко- лонку промывают водой. Фракции,
содержащие рибавирин (200 мл), объедин ют и нанос т на колонку (1,15x4 см) с ионообменной смолой Dowex 1x8 в ОН-форме. Промыва колонку водой, получают раствор рибавирина (340 мл), который упаривают до объема 6 мл, прибавл ют 30 мл этанола и упаривают досуха. Остаток раствор ют в 5 мл этанола при нагревании с обратным холодильником на вод ной бане. После кристаллизации на холоде рибавирин собирают на стекл нном фильтре и сушат до посто нной массы при 60° С в течение 18ч в суховоздушном шкафу. Получено 0,491 г хроматографически чистого целевого продукта , что соответствует выходу 67% от теоретически возможного.
При хроматографировании на тонко- слойных пластинках Silufol-UV254 в системах растворителей изопропанол-хло- роформ - 25% аммиак (10:5:2) и н-бутанол - 25% аммиак (7:2) подвижность целевого
Штамм микроорганизмов
Рибавиринсинтезирующа
активность, ммоль/ч/r сухой
массы
Е. coll БМТ-ЗД/IA
E.coll 3110
Е. coll БМ-11
E.coll ВКПМ В-4109
Е. coli БМТ-2Д/1А E.coll ЦМПМ В-2752 Erwlnla herblcola ЦМПМ В-3275 Erwlnia herbicola БМ-47/3
Примечание. Относительна эффективность других штаммов не превышает 10 %.
продукта совпадает с Rf контрольного пре- парата рибавирина.
Т.пл. целевого продукта 163-166° С. Элементный анализ дл , М 244.
Найдено, %: С 39.85; Н 4,99: N 22,70. Вычислено. %: С 39,34; Н 4,95; N 22,94. 1н-ЯМР(ДМСО - de),7M.g. от ТМС: 8,87 с (1Н, Н-5); 7,82 с (1Н. KlH2); 7,62 с (1Н,
CONH2);5,82fl(1H,H-l ,j1 A 3,6 Гц); 5,55 уш.с(1Н.ОН-2 ). 5.17 уш.сПН.ОН-З ); 4,90
уш.с(1Н, ОН-5 );4,37дд(1Н, Н-2 . Л , 3
4,8 Гц);4.17дд(1Н, Н-31 , Л, I 4.8 Гц);
3,97 м (1 Н, Н-4 ); 3.63 дд(1Н. Н-5 ,Л. I
3,6 Гц. J;, 5 12 Гц);3,52дд(1Н.Н-5 .
Js . 4 4,8 Гц).
Claims (1)
- Формула изобретени Штамм бактерий Escherichia coli ВКПМ-В-4834 дл получени рибавирина.Относительна эффективность . %100 28,6 14.3 10,519 21,913,3 10.5
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894724352A SU1661209A1 (ru) | 1989-07-24 | 1989-07-24 | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894724352A SU1661209A1 (ru) | 1989-07-24 | 1989-07-24 | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1661209A1 true SU1661209A1 (ru) | 1991-07-07 |
Family
ID=21463520
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894724352A SU1661209A1 (ru) | 1989-07-24 | 1989-07-24 | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1661209A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2480218C1 (ru) * | 2011-12-06 | 2013-04-27 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Промышленности И Торговли Российской Федерации | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-β-D-РИБОФУРАНОЗИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-КАРБОКСАМИДА |
-
1989
- 1989-07-24 SU SU894724352A patent/SU1661209A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Shirae H., Jokozeki К., Uchlgyama M., Kubota К., Enzymatic production of ribavirin from purine nucleosides by Brevibacterium acetylicum ATCC 954/ - Agrlc. Biol. Chem. - 1988, v. 52, № 7, p. 1777-1783. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2480218C1 (ru) * | 2011-12-06 | 2013-04-27 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Промышленности И Торговли Российской Федерации | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-β-D-РИБОФУРАНОЗИЛ-1,2,4-ТРИАЗОЛ-3-КАРБОКСАМИДА |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0483755B1 (en) | Process for preparing trehalulose and isomaltulose | |
EP0029329B1 (en) | Enzyme inhibitor produced by cultivation of a streptomyces microorganism, a process for producing it and a culture of the microorganism | |
CN110791462B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在发酵生产腺苷中的应用 | |
SU1435159A3 (ru) | Способ получени L-карнитина | |
US3979261A (en) | Production of glucose isomerase by bacillus coagulans | |
Tudor et al. | Characterization of bdellocysts of Bdellovibrio sp | |
DE69732875T2 (de) | Herstellung und Verwendung von L-Ribose-Isomerase | |
IL24529A (en) | Process for preparing cephalosporin derivatives | |
JPS6156086A (ja) | α−オキシ酸およびその塩の微生物学的製造法 | |
JPS61135583A (ja) | ストレプトミセス科の菌から得られる溶菌性酵素生成物、その製法およびそれに適する菌株 | |
SU1661209A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина | |
JPH0564597A (ja) | 発酵法によるリボフラビンの製造法 | |
JPH07246097A (ja) | トレハロースの製造方法 | |
JP2876417B2 (ja) | D―ソルボースの製造方法 | |
SU1705347A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина | |
JP2876416B2 (ja) | D―プシコースの製造方法 | |
ICHIMURA et al. | CV-1, a new antibiotic produced by a strain of Streptomyces sp. I. Fermentation, isolation and biological properties of the antibiotic | |
JPS60209598A (ja) | 2′‐クロロペントスタチン化合物およびその製法 | |
SU960258A1 (ru) | Штамм аRтнRовастеR SpecIeS ВСТИ-5-продуцент нуклеотидов и рибозо-5-фосфата | |
KR102197825B1 (ko) | 그라미시딘 s의 생산 및 정제방법 | |
JPH08280396A (ja) | トレハロースの製造法 | |
JPH0998779A (ja) | トレハロース合成酵素、その製法及びそれを用いたトレハロースの製造法 | |
US3275526A (en) | Method for producing orotidine | |
SU1705338A1 (ru) | Штамм дрожжей CaNDIDa ReQUINII - продуцент алкогольдегидрогеназы | |
WO1995016785A1 (en) | Use of thermophilic bacteria to manufacture triazole nucleosides |