SU1705347A1 - Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина - Google Patents
Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина Download PDFInfo
- Publication number
- SU1705347A1 SU1705347A1 SU904780738A SU4780738A SU1705347A1 SU 1705347 A1 SU1705347 A1 SU 1705347A1 SU 904780738 A SU904780738 A SU 904780738A SU 4780738 A SU4780738 A SU 4780738A SU 1705347 A1 SU1705347 A1 SU 1705347A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- thymine
- cells
- deoxyadenosine
- dna
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в частности к производству биологически активных соединений . Целью изобретени вл етс повышение активности штамма. Штамм Escherlchla coll получен из музейного ти- минзависимого штамма путем отбора наиболее активных вариантов при последовательном выращивании на агари- зованной среде Адамса с тимином (1 мкг/мл), затем с тиминарабинозидом (5 мкг/мл) в качестве источника тимина и на среде, содержащей тимин (1 мкг/мл) и инозин (1 мг/мл) в качестве единственного источника углерода. Штамм E.coll БМТ-2Д/1А депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под коллекционным номером В КМ СВ-319Д и характеризуетс тем. что его поко щиес клетки способны осуществл ть трансформацию аденина в 2 -деэок- сиаденоэин, использу в качестве доноров углеводной части молекулы целевого продукта 2 -дезоксинуклеозиды, образующиес при гидролизе ДНК. Активность клеток при 60°С и рН 7,0 составл ет 1.2 мкмоль продукта (мин) мг клеток (в расчете на сухую массу). 1 табл. ё
Description
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в частности к производству биологически активных соединений .
Способы получени 2 -дезоксиаденози- на основываютс на ферментативном гидролизе его природного источника - ДНК до смеси четырех 2 -де.зоксинуклеозидов с последующим выделением целевого продукта тем или иным хроматогрэфическим методом . Общий недостаток этих способов заключаетс в относительно низком выходе 2 -дезоксиаденозина. Это обусловлено тем. что он вл етс лишь одним из четырех нук- леозидных компонентов ДНК. Например, согласно способа 1. предусматривающего
гидролиз ДНК ферментным препаратом, полученным из Actlnomyces coellcolor, в гид- ролизате методом жидкостной хроматогра- фии обнаруживаетс 2 -дезоксиаденозин в количестве 15,5% от массы исходной ДНК.
При гидролизе ДНК сырой биомассой гриба Splcaria vlolacea БМ-205 2 в гидроли- зате обнаруживают 20% 2 -дезоксиаденози- на по массе от вз той в реакцию ДНК.
Известен способ получени 2 -дезокси- аденозина, позвол ющий резко (до 54,9%) повысить выход целевого продукта из ДНК. Он заключаетс в применении штамма бактерий Erwinla herblcola ЦМПМ В-3275 3. клетки которого при инкубации их с гидро- лизатом ДНК и аденином при 55-60°С и рН
VJ
О
ел
OJ
4 VI
6,75-7,25 трансформируют нуклеозиды ДНК - 2 - дезоксигуанозин, 21 - дезоксици- тидин и 2 - деэокситимидин в 2 -дезоксиа- денозин, что обеспечивает более полную утилизацию вз той в реакцию ДНК и, таким образом, более высокий выход целевого продукта.
Недостатком известного штамма Erw. herblcola ЦМПМ В-3275 вл етс сравнительно низка активность его клеток в реакции синтеза 2 -дезоксиаденозина из аденина и гидролиэата ДНК, составл юща 0,4 мкмоль/мин/мг клеток. Это приводит к затрате 3,63 г клеток на получение 1 г целевого продукта.
Целью изобретени вл етс повышение активности штамма.
Штамм Е. coli 2Д/1А получен из музейного тиминзависимого штамма Е. coll W3110 путем отбора наиболее активных вариантов при последовательном выращивании на агаризованной среде Адамса с тимином (1 мкг/мл), затем с тиминарабино- зидом (5 мкг/мл) в качестве источника тими- на и на среде, содержащей тимин (1 мкг/мл) и инозин (1 мг/мл) в качестве единственного источника углерода.
Штамм Е. coll БМТ-2Д/1А депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под коллекционным номером ВКМ CR- 319Д и характеризуетс следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки .
Под микроскопом клетки имеют вид лр мых палочек с закругленными концами (1.1-1,5)х(2.0-6,0)мкм. Встречаютс отдельно или парами. Спор и капсул не образуют, Клетки обладают подвижностью. По типу движени перитрихи. Грамотрицательные.
В бульоне Хоттингера к 24 ч (37°С) рост выражен в виде легкого помутнени . На дне пробирок образуетс комковатый осадок, который полностью взмучиваетс при встр хивании (S-форма).
На м сс-пептонном агаре и агаризованной среде Адамса (37°С, 3 сут) колонии гладкие , слабо выпуклые, легко сливающиес . Консистенци в зка . Цвет колоний сероватый . Поверхность блест ща , рельеф однородный . Кра колоний слегка волнистые.
На агаризованной дифференциальной среде Эндо штамм растет в виде полупрозрачных колоний без изменени цвета среды .
Диапазон температуры роста 7-40 С. Оптимальна температура 36-37°С.
Диапазон рН роста 5,5-8.5. Оптимум роста наблюдаетс при рН среды 7.0-7.5.
Физиолого-биохимические признаки.
Факультативный анаэроб, В процессе роста сбраживает до кислоты с незначительным выделением газа глюкозу, арабинозу, трегалозу, мальтозу, маннит, глицерин. Не усваивает сахарозу, лактозу, рафинозу, сорбит , дульцит.
В качестве единственного источника углерода может использовать ацетат, но не 0 цитрат и инозит.
Желатину не разжижает.
Крахмал не гидролизует.
Молоко не свертывает.
Гидролизует РНК.
5 Гемолитическими свойствами не обладает . Не токсичен и не патогенен дл теплокровных животных.
Усваивает аммонийный и нитратный азот. Наиболее активный рост биомассы 0 обеспечивают органические источники азота (пептон, дрожжевой и кукурузный экстракты , ферментализат БВК).
Продуцирует индол и каталаэу.
Не образует уреазу и оксидазу. 5 Содержание Г + Ц в составе ДНК 50,3 ±0.5 моль.% (определено оптическим методом).
Штамм сохран ет жизнеспособность не менее года при хранении в холодильнике 0 (+4°С) на полноценной агаризованной среде (МПА. среда Хоттингера) подслоем вазелинового масла, а также в лиофильно-высу- шенном состо нии.
Интактные клетки Е.соП БМТ-2Д/1Аоб- 5 л а да ют способностью трансгликозилиро- вать аденин до 2 -дезоксиаденозина с использованием в качестве доноров углеводного фрагмента 2 -дезоксинуклеозиды ДНК с эффективностью 1,2 мкмоль 2 -дезок- 0 сиаденозина/мин/мг клеток (в расчете на сухую массу).
Активность клеток измер ют путем пр мого определени количества 2 -дезоксиа- денозина, образующегос при инкубации 5 сырой биомассы клеток со смесью аденина с гидролизатом ДНК. С этой целью реакционную смесь (1,0 мл), содержащую 13,5 мг аденина, 0,37 мл гидролизата ДНК и 1 мг клеток, инкубируют при 60°С в течение 10 0 мин. После инкубации реакционную смесь центрифигируют (8000 д. 10 мин) и надоса- дочную жидкость хроматографируют на тонкослойной пластинке SHufol-UV254 в охлажденной (+4°С) воде. Целевой продукт 5 обнаруживают в УФ-свете, идентифициру сравнением с положением образца-свидетел , и элюируют 0,05 М К-фосфатным буфером (рН 7.0). Оптическую плотность элюата измер ют на спектрофотометре. Концентрацию 2 -деэоксиаденозина рассчитывают,
использу коэффициент мол рной экстин- ции при длине волны 260 нм. равный 14380.
Эффективность штамма E.coll БМТ- 2Д/1А в сравнении с другими штаммами микроорганизмов представлена в таблице.
Сравнительна оценка эффективности наиболее активных из 120 проверенных штаммов микроорганизмов представлена в таблице.
Из данных таблицы следует, что эффек- тивность клеток E.coll БМТ-2Д/1А в несколько раз выше любого из проверенных штаммов микроорганизмов.
Использование штамма E.coll БМТ- 2Д/1А иллюстрируетс следующими приме- рами.
П р и м е р 1. Культуру штамма E.coli БМТ-2Д/1А внос т петлей с кос ка в колбу емкостью 250 мл, содержащую 50 мл питательной среды (МПБ с 0,5%-ным дрожже- вым экстрактом), и культивируют на биологической качалке (180 об/мин) в течение 20 ч при 37°С. После осаждени клеток центрифугированием (5000 д,10 мин) получают 0,5 г сырых клеток (0,1 г в расчете на сухую массу) с активностью 1,1 мкмоль/мин/мг сухой биомассы.
П р и м е р 2. Клетки E.coll БМТ-2Д/1А, выросшие в 2-х 250 мл колбах, засевают в лабораторный ферментер АК-3 емкостью 3 л, содержащий 2 л питательной среды. Ферментацию ведут 12 ч при 37°С с аэрацией 0,8 л/мин на 1 л среды.
После окончани культивировани клетки собирают центрифугированием, получа 20 г сырых клеток (4 г в расчете на сухую массу) с активностью 1,2 мкмоль2 -дезокси- аденозина/мин/мг сухой биомассы.
Дл приготовлени гидролизата ДНК к 0,8 г ДНК молок лососевых рыб в 25 мл 0,05 М натрий-ацетатного буфера (рН 5,0) прибавл ют 0,15 мл 0,25 М хлорида магни , 1,5 мл этанола и сырую биомассу Splcaria vlolacea БМ-205 в количестве 0,5 г (в расчете на сухую массу). Смесь довод т водой до 30 мл и инкубируют 30 ч при 60°С, После фильтрации получают 30 мл гидролизата, содержащего 2 -дезоксизденоэин. 2 -дезоксити мидин, 2 -дезоксигуанозин и 2 -дезоксици- тидин, в концентраци х, соответственно. 22,9 мМ, 24,2 мМ, 15,2 мМ и 17,5 мМ.
Смесь общим объемом 80 мл. содержащую 1,1 г аденина, полученный выше гидро- лизат ДНК, 0,65 г клеток E.coll БМТ-2Д/1А (в расчете на сухую массу), инкубируют 1,5 ч при 60°С. После удалени клеток центрифугированием (8000 g , 10 мин) супернатант кип т т 5 мин и нанос т на колонку (100 мл) со смолой АВ-17-2М в ОН-форме. Колонку промывают водой. Фракции, содержащие 2 -дезоксиаденозин (0,6 л), собирают, упаривают до 25 мл и продукт кристаллизуют на холоду. Получают 0,49 г кристаллического 2 -дезоксиаденозина. Выход целевого продукта в расчете на исходную ДНК составл ет 61,2 мас.%.
При хроматографировании на тонкослойных пластинках Sllufol-UV254 в системе растворителей хлороформ:этанол (4:1) и n-бутанол: 25%-ный водный аммиак (7:2) подвижность целевого продукта совпадает с Rf заведомо известного препарата 2 -дезок- сиаденозина.
Т.пл. целевого продукта 192-193°С.
Элементный анализ дл СюЖзМвОз, .2.
Найдено, %: С 47,92; Н 5,19; N 27,60.
Вычислено, %: С 47.81; Н 5,18; N 27,89.
Использование штамма обеспечивает по сравнению с известным штаммом-прототипом следующие преимущества:
повышение активности биокатализатора в реакции синтеза 2 -дезоксиаденозина из гидролизата ДНК и аденина с 0,4 до 1,2 мкмоль/мин/мг;
снижение расхода клеток на получение 1 г 2 -дезоксиаденозина с 3,63 до 1.3 г;
повышение выхода целевого продукта с 54,9 до 61,2 мас.% от исходной ДНК.
Claims (1)
- Формула изобретениШтамм бактерий Escherlchla coll BKM СР-319Д, предназначенный дл получени 2 -дезоксиаденозина.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904780738A SU1705347A1 (ru) | 1990-01-09 | 1990-01-09 | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904780738A SU1705347A1 (ru) | 1990-01-09 | 1990-01-09 | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1705347A1 true SU1705347A1 (ru) | 1992-01-15 |
Family
ID=21490730
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904780738A SU1705347A1 (ru) | 1990-01-09 | 1990-01-09 | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1705347A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117363553A (zh) * | 2023-12-07 | 2024-01-09 | 天津科技大学 | 一种生产2’-脱氧腺苷的基因工程菌及其构建方法与应用 |
-
1990
- 1990-01-09 SU SU904780738A patent/SU1705347A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Авторское свидетельство СССР N 986102.кл. С 12 Р 19/38.1981. 2. Авторское свидетельство СССР № 1258079,кл. С 12 Р 19/40,1984, 3. Авторское свидетельство СССР № 1398399,кл. С 12 Р 19/40, 1988. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117363553A (zh) * | 2023-12-07 | 2024-01-09 | 天津科技大学 | 一种生产2’-脱氧腺苷的基因工程菌及其构建方法与应用 |
CN117363553B (zh) * | 2023-12-07 | 2024-02-20 | 天津科技大学 | 一种生产2’-脱氧腺苷的基因工程菌及其构建方法与应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0483755B1 (en) | Process for preparing trehalulose and isomaltulose | |
JPS58165786A (ja) | クロストリジウム・アセトブチリカムのブタノールおよびアセトン高生産性突然変異体の創製方法 | |
US3979261A (en) | Production of glucose isomerase by bacillus coagulans | |
RU2381270C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Clostridium acetobutylicum - ПРОДУЦЕНТ БУТАНОЛА, АЦЕТОНА И ЭТАНОЛА | |
KR930005869B1 (ko) | 시티딘 및/또는 데옥시시티딘의 제조 방법 | |
SU655327A3 (ru) | Способ получени глюкозоизомеразы | |
WO2023025292A1 (zh) | 一种凝结芽孢杆菌及其催化生产2'-脱氧腺苷的方法 | |
SU1705347A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, предназначенный дл получени 2Ъ-дезоксиаденозина | |
US2978384A (en) | Method for the production of 1-glutamic acid | |
KR930006994B1 (ko) | 우리딘의 제조방법 | |
SU469266A3 (ru) | Способ плучени 7-амино-дезацетоксицефалоспорановой кислоты | |
JPH07246097A (ja) | トレハロースの製造方法 | |
RU2455352C1 (ru) | ШТАММ Bacillus amyloliquefaciens - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ Bacillus amyloliquefaciens | |
SU1661209A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI дл получени рибавирина | |
US4264734A (en) | Process for producing antibiotic desacetyl 890A10 | |
SU1114697A1 (ru) | Способ получени биомассы кормовых дрожжей | |
SU1705338A1 (ru) | Штамм дрожжей CaNDIDa ReQUINII - продуцент алкогольдегидрогеназы | |
KR0177478B1 (ko) | 에리스리톨 생성능을 갖는 칸디다속 균주 및 이를 이용한 에리스리톨의 제조방법 | |
CN117721042A (zh) | 一种产衣霉素复合物的菌株及其应用 | |
JP2002253291A (ja) | 2−デオキシリボース5−リン酸の製造方法 | |
JP3026312B2 (ja) | キチン分解物の製造法 | |
JPH03143393A (ja) | 糖転移活性の強いα―ガラクトシダーゼの製造法 | |
RU2183218C2 (ru) | Штамм гриба aspergillus niger вкпм f - 790 - продуцент глюконовой и лимонной кислот | |
Kundu et al. | STANDARDIZATION OF OPTIMAL CULTURAL CONDITIONS OF AN ANTIBIOTIC PRODUCING SOIL ACTINOMYCETES FOR LARGE SCALE ANTIBIOTIC PRODUCTION | |
JPH05310766A (ja) | 新規抗生物質mi481−42f4−a及びその製造方法 |