CN113897344B - 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物 - Google Patents

一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN113897344B
CN113897344B CN202111292939.6A CN202111292939A CN113897344B CN 113897344 B CN113897344 B CN 113897344B CN 202111292939 A CN202111292939 A CN 202111292939A CN 113897344 B CN113897344 B CN 113897344B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lysozyme
chromatographic column
culture medium
constant temperature
liquid culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111292939.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113897344A (zh
Inventor
陈生红
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Laikang Bioengineering Co ltd
Original Assignee
Zhejiang Laikang Bioengineering Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Laikang Bioengineering Co ltd filed Critical Zhejiang Laikang Bioengineering Co ltd
Priority to CN202111292939.6A priority Critical patent/CN113897344B/zh
Publication of CN113897344A publication Critical patent/CN113897344A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113897344B publication Critical patent/CN113897344B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01017—Lysozyme (3.2.1.17)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物，其中的活性成分溶菌酶选用白色链霉菌和/或枯草芽孢杆菌的菌体种子采用发酵工艺制备而成。本发明的溶菌酶来源天然，无毒副作用，且溶菌酶组合物制备方法可工业化，具有推广应用价值。

Description

一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及一种溶菌酶组合物。
背景技术
溶菌酶也称为细胞壁溶解酶，是一种可以使细胞壁水解稳定碱性蛋白水解酶。它主要作用于细菌细胞壁，即作用于其肽聚糖中的N-乙酰葡萄糖胺及N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键，通过对其进行水解促进细菌细胞壁中的多糖分解成糖肽，降低细菌细胞壁稳定性，破坏其结构，最后导致细胞壁裂解细胞中的内容物流出胞外，致使细菌溶解。由于溶菌酶是有着上述溶菌作用的蛋白质，且对人体无毒副作用，因此还可用于食品业来制作防腐剂材料。溶菌酶是存在于人体体液或者组织中的非特异性免疫因子，有着抗菌、抗病毒和多种药理作用。
溶菌酶作为单核、中性粒细胞和巨噬细胞产物，对革兰氏阳性菌有着很显著抗菌性。此外，溶菌酶是一种存在于生物体内的碱性蛋白酶，其也是一种非特异性免疫因子，在抑制和杀死病原体时一般不会有抗药性的情况发生。溶菌酶的这种与抗生素不同的抑菌机制己经得到重视，并应用于食品及药品当中。也有文献证明溶菌酶可作为免疫调节和免疫激活剂在免疫系统中起着重要作用。
溶菌酶能结合诱导炎症反应发生的各种酸性物质，且能作为抗菌增效剂增强抗生素和其他药物的疗效，改善组织基质的黏多糖代谢，增强机体抗感染的能力，有效缓解机体炎症反应。此外血小板在溶菌酶作用下被激活，组织局部循环障碍被解除，脓液得以分解，加快了组织再生和血液凝固速度，瘢痕形成，因炎症反应导致的组织损伤得以较快修复。内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中一种成分，只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层，覆盖于细胞壁的黏肽上。研究人员发现，氨苄西林等抗生素单独使用可导致埃希氏大肠杆菌溶解释放大量内毒素，诱导巨噬细胞释放大量白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子TNF-α。而将β-内酰胺类抗生素与溶菌酶配合使用后，细菌内毒素释放量大幅减少，TNF-α和IL-6等促炎因子的释放量随之减少。有研究报道，患有结肠炎的仔猪在饲喂蛋源溶菌酶后，IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)和TNF-α等基因表达量显著下调，相应炎症因子分泌量显著降低。
目前，采用发酵工艺制备的溶菌酶的抗炎作用有待提升，亟需一种具有良好抗炎效果的发酵工艺制备的溶菌酶组合物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有显著抗炎作用，毒副作用小，采用发酵工艺制备的溶菌酶组合物。
本发明解决上述问题所采用的技术方案是，提供一种具有抗炎效果的溶菌酶的发酵制备方法，其包括以下步骤：
(1)取液体培养基A置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按2-6％v/v的接种量接入白色链霉菌和/或枯草芽孢杆菌的菌体种子；
(2)在25-45℃，200-300r/min的恒温振荡器中连续培养20-30h；
(3)取步骤(2)培养的种子液接种于装有灭菌液体培养基B的锥形瓶中，在25-45℃，200-300r/min的恒温振荡器中连续培养20-30h；
(4)将步骤(3)培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于层析柱中，再用pH值为6.0-7.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.1-0.3ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品。
优选的，所述步骤(1)中取30mL液体培养基A置于锥形瓶中。
优选的，所述步骤(1)中液体培养基A为含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液。
优选的，所述步骤(1)中的白色链霉菌为白色链霉菌LA-7。
优选的，所述步骤(1)中的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌YT-25。
优选的，所述步骤(1)中按5％v/v的接种量接入白色链霉菌和/或枯草芽孢杆菌的菌体种子。
优选的，所述步骤(1)中按2.5％v/v的接种量接入白色链霉菌的菌体种子，同时按2.5％v/v的接种量接入枯草芽孢杆菌的菌体种子。
更优选的，所述步骤(1)中按2.5％v/v的接种量接入白色链霉菌LA-7的菌体种子，同时按2.5％v/v的接种量接入枯草芽孢杆菌YT-25的菌体种子。
优选的，所述步骤(2)中在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h。
优选的，所述步骤(3)中液体培养基B为含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液。
优选的，所述步骤(3)中取1mL步骤(2)培养的种子液接种于装有100mL灭菌液体培养基B的锥形瓶中。
优选的，所述步骤(3)中在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h。
优选的，所述步骤(4)中使用的层析柱为Sephedex G-50。
优选的，所述步骤(4)中使用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱。
本发明的第二方面提供一种溶菌酶组合物，其包括上述发酵制备方法得到的溶菌酶。
优选的，所述溶菌酶组合物中进一步包括药学上可接受的辅料。
优选的，所述溶菌酶组合物的剂型为口服制剂或注射剂。
本发明的第三方面还提供一种上述溶菌酶组合物在制备抗炎药物中的应用。
本发明具有积极有益的效果：令人惊奇的是，经过反复多次试验，本发明意外发现使用白色链霉菌LA-7和/或枯草芽孢杆菌YT-25发酵制备得到的溶菌酶产物具有优异的抗炎性能，其抗炎效果远优于现有技术已知的其它菌种发酵得到的溶菌酶以及蛋清溶菌酶。另外，本发明的溶菌酶来源天然，无毒副作用，且溶菌酶组合物制备方法可工业化，具有推广应用价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作更进一步的说明，但本发明的实施方式不限于此。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1、发酵工艺制备溶菌酶L1(白色链霉菌LA-7)
取30mL液体培养基A(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液)置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按5％v/v的接种量接入白色链霉菌LA-7的菌体种子；在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；取1mL上述步骤培养的种子液接种于装有100mL灭菌液体培养基B(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液)的锥形瓶中，在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；将上述步骤培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于Sephedex G-50层析柱中，再用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品L1。
实施例2、发酵工艺制备溶菌酶L2(枯草芽孢杆菌YT-25)
取30mL液体培养基A(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液)置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按5％v/v的接种量接入枯草芽孢杆菌YT-25的菌体种子；在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；取1mL上述步骤培养的种子液接种于装有100mL灭菌液体培养基B(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液)的锥形瓶中，在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；将上述步骤培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于Sephedex G-50层析柱中，再用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品L2。
实施例3、发酵工艺制备溶菌酶L3(白色链霉菌LA-7+枯草芽孢杆菌YT-25)
取30mL液体培养基A(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液)置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按2.5％v/v的接种量接入枯草芽孢杆菌YT-25的菌体种子，同时按2.5％v/v的接种量接入白色链霉菌LA-7的菌体种子；在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；取1mL上述步骤培养的种子液接种于装有100mL灭菌液体培养基B(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液)的锥形瓶中，在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；将上述步骤培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于Sephedex G-50层析柱中，再用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品L3。
对比例1、发酵工艺制备溶菌酶L4(溶杆菌S2-6b)
取30mL液体培养基A(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液)置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按5％v/v的接种量接入溶杆菌S2-6b的菌体种子；在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；取1mL上述步骤培养的种子液接种于装有100mL灭菌液体培养基B(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液)的锥形瓶中，在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；将上述步骤培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于Sephedex G-50层析柱中，再用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品L4。
对比例2、发酵工艺制备溶菌酶L5(灰色链霉菌S-35)
取30mL液体培养基A(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液)置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按5％v/v的接种量接入灰色链霉菌S-35的菌体种子；在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；取1mL上述步骤培养的种子液接种于装有100mL灭菌液体培养基B(含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液)的锥形瓶中，在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h；将上述步骤培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于Sephedex G-50层析柱中，再用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品L5。
试验例1、本发明发酵工艺制备的溶菌酶抗炎效果试验
1、细胞炎症模型建立
实验分组：配制LPS浓度分别为0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L和4mg/L的DMEM细胞培养液。在24孔板中加入充分混匀的细胞悬浮液1mL(每孔1×105个细胞)，培养24h后移去培养基，按上述分组加入1mL样品溶液，培养24h，每组设置3个复孔。采用Griess试剂盒测定上述细胞上清液的NO含量，选择NO释放量与对照组有显著性差异的LPS浓度进行后续实验。
2、NO含量测定
在24孔板中加入充分混匀的细胞悬浮液1mL(每孔1×105个细胞)，培养24h，弃去培养基，进行分组实验，每组设3个复孔。实验分组如下：正常对照组(不加药物和LPS)、LPS模型组(1mg/L LPS)、试验组1(1mg/L LPS+1mg/mL实施例1的溶菌酶L1溶液)、试验组2(1mg/L LPS+1mg/mL实施例2的溶菌酶L2溶液)、试验组3(1mg/L LPS+1mg/mL实施例3的溶菌酶L3溶液)、试验组4(1mg/L LPS+1mg/mL对比例1的溶菌酶L4溶液)、试验组5(1mg/L LPS+1mg/mL对比例2的溶菌酶L5溶液)和试验组6(1mg/L LPS+1mg/mL蛋清溶菌酶L6溶液)。除正常对照组以外，其余各组先加入1ml含1mg/L LPS的DMEM细胞培养液(即LPS加入量均为1mg)，培养24h，弃去培养液，再按上述分组加入总计1ml的含溶菌酶的各组样品DMEM细胞培养液(即溶菌酶溶解于DMEM细胞培养液，每个试验组中活性成分溶菌酶的总加入量均为1mg)，培养24h，收集细胞上清液，采用Griess试剂盒测定不同样品对RAW264.7细胞释放NO的含量，具体试验结果如下表1所示。
表1本发明发酵溶菌酶对RAW264.7细胞释放NO含量的影响
试验组 NO含量(μmol/L)
正常对照组 5.8
LPS模型组 37.2
试验组1(实施例1溶菌酶L1) 17.9
试验组2(实施例2溶菌酶L2) 16.2
试验组3(实施例3溶菌酶L3) 10.4
试验组4(对比例1溶菌酶L4) 24.9
试验组5(对比例2溶菌酶L5) 25.8
试验组6(蛋清溶菌酶L6) 27.4
如上表1试验结果所示，本发明采用特定发酵用菌种(白色链霉菌LA-7和/或枯草芽孢杆菌YT-25)，通过发酵工艺制备的试验组1-3的溶菌酶(L1-L3)可以显著降低RAW264.7细胞的NO释放量，其对RAW264.7细胞炎症改善作用明显优于其他发酵用菌种(例如试验组4-5中对比例1-2制备的溶菌酶L4-L5)。特别是在菌体种子的接种总量不变的基础上，使用白色链霉菌LA-7和枯草芽孢杆菌YT-25复合菌种发酵制备的溶菌酶L3较单独使用白色链霉菌LA-7或枯草芽孢杆菌YT-25菌种发酵制备的溶菌酶L1或L2，对RAW264.7细胞的NO释放量进一步降低，证明上述特定复合菌体发酵制备得到的溶菌酶产生了难以预期的优异抗炎效果，有望在产业上推广应用。

Claims (4)

1.一种具有抗炎效果的溶菌酶的发酵制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取液体培养基A置于锥形瓶中，灭菌冷却至30℃后，按2.5% v/v的接种量接入白色链霉菌LA-7的菌体种子，同时按2.5% v/v的接种量接入枯草芽孢杆菌YT-25的菌体种子；
（2）在25-45℃，200-300r/min的恒温振荡器中连续培养20-30h；
（3）取步骤（2）培养的种子液接种于装有灭菌液体培养基B的锥形瓶中，在25-45℃，200-300r/min的恒温振荡器中连续培养20-30h；
（4）将步骤（3）培养的发酵液通过陶瓷膜微滤，滤液通过超滤浓缩截流分子量10-30kDa的组分获得浓缩液，将浓缩液置于层析柱中，再用pH值为6.0-7.0的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.1-0.3ml/min的流速对层析柱进行洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥后获得溶菌酶产品；
所述步骤（1）中液体培养基A为含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨和2％葡萄糖的水溶液；所述步骤（3）中液体培养基B为含有1％酵母浸粉，2％胰蛋白胨，1％无氨基酵母氮源，0.00004％生物素和1％甘油的水溶液；
所述步骤（4）中使用的层析柱为Sephedex G-50。
2.根据权利要求1所述的发酵制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h。
3.根据权利要求1所述的发酵制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中在30℃，250r/min的恒温振荡器中连续培养24h。
4.根据权利要求1所述的发酵制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中使用pH值为6.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液以0.2ml/min的流速对层析柱进行洗脱。
CN202111292939.6A 2021-11-03 2021-11-03 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物 Active CN113897344B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111292939.6A CN113897344B (zh) 2021-11-03 2021-11-03 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111292939.6A CN113897344B (zh) 2021-11-03 2021-11-03 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113897344A CN113897344A (zh) 2022-01-07
CN113897344B true CN113897344B (zh) 2023-09-08

Family

ID=79027416

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111292939.6A Active CN113897344B (zh) 2021-11-03 2021-11-03 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113897344B (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1060679A1 (ru) * 1982-03-12 1983-12-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии Питательна среда дл выращивани @ @ @ -28-продуцента лизоцима
EP0280032A2 (de) * 1987-01-23 1988-08-31 Hoechst Aktiengesellschaft Bakterienlysierendes Enzymprodukt aus Streptomyceten, seine Herstellung und seine Verwendung zur Konservierung von Käse
US4828998A (en) * 1984-11-08 1989-05-09 Hoechst Aktiengesellschaft Bacteriolytic enzyme product from streptomyces, a process for its preparation, and a strain suitable for this purpose
CN1740327A (zh) * 2005-09-23 2006-03-01 福州恒丰量子生物科技有限公司 一种动植物和微生物细胞壁溶解酶反应液及其应用
CN102102095A (zh) * 2010-11-30 2011-06-22 浙江大学 一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法
CN106906197A (zh) * 2017-04-25 2017-06-30 浙江艾杰斯生物科技有限公司 发酵工艺制备溶菌酶的方法
CN107058266A (zh) * 2017-04-25 2017-08-18 浙江艾杰斯生物科技有限公司 一种通过发酵工艺制备溶菌酶的方法
CN113521262A (zh) * 2021-07-30 2021-10-22 浙江莱康生物工程有限公司 一种具有抗炎效果的溶菌酶制剂

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1060679A1 (ru) * 1982-03-12 1983-12-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии Питательна среда дл выращивани @ @ @ -28-продуцента лизоцима
US4828998A (en) * 1984-11-08 1989-05-09 Hoechst Aktiengesellschaft Bacteriolytic enzyme product from streptomyces, a process for its preparation, and a strain suitable for this purpose
EP0280032A2 (de) * 1987-01-23 1988-08-31 Hoechst Aktiengesellschaft Bakterienlysierendes Enzymprodukt aus Streptomyceten, seine Herstellung und seine Verwendung zur Konservierung von Käse
CN1740327A (zh) * 2005-09-23 2006-03-01 福州恒丰量子生物科技有限公司 一种动植物和微生物细胞壁溶解酶反应液及其应用
CN102102095A (zh) * 2010-11-30 2011-06-22 浙江大学 一种利用海洋链霉菌发酵制备溶菌酶的方法
CN106906197A (zh) * 2017-04-25 2017-06-30 浙江艾杰斯生物科技有限公司 发酵工艺制备溶菌酶的方法
CN107058266A (zh) * 2017-04-25 2017-08-18 浙江艾杰斯生物科技有限公司 一种通过发酵工艺制备溶菌酶的方法
CN113521262A (zh) * 2021-07-30 2021-10-22 浙江莱康生物工程有限公司 一种具有抗炎效果的溶菌酶制剂

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Amino Acid Sequence of a Lysozyme (B-Enzyme) from Bacillus subtilis YT-25;Kaeko Kamei等;《J. Biochem》;第104卷;第832-836页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113897344A (zh) 2022-01-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2011230685B2 (en) Anti-allergic agent
FI110324B (fi) Uudet polysakkaridit ja niiden valmistus
CN101037661A (zh) 假交替单胞菌及其用途
CN100484963C (zh) 干酪乳杆菌胞外多糖及其粗品、制备方法和应用
EP0716688A1 (en) Process for the preparation and purification of high molecular weight hyaluronic acid
CN1884308A (zh) 一种生产壳寡糖的方法
CN113897344B (zh) 一种具有抗炎效果的溶菌酶组合物
EP0459367B1 (en) Method for preparing an antitumor dextran
CN1306025C (zh) 一种培养基、其制备方法及培养乳酸链球菌素的方法
EP0491114B1 (en) A process for preparing new non-covalent polysaccharide-protein associations having pharmacological activity
CN110699409B (zh) 一种发酵生产平阳霉素的方法
JPS58318B2 (ja) 制癌性物質の製造方法
CN1033394A (zh) 氨基脱氧甘露糖醇的制法
CN109608523B (zh) 一种高纯度替考拉宁的生产工艺
CN107058266A (zh) 一种通过发酵工艺制备溶菌酶的方法
CN114009765B (zh) 一种具有抑菌功能的红豆杉发酵液制品及其制备方法
HU210826B (en) Process for the preparation of an extracellular exopolymer and pharmaceutical compositions containing the same
Premjet et al. High bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum ATCC 10245 in a new culture medium with a sulfite pulping waste fraction
GB2079785A (en) Process for cultivation of hemolytic streptococcus pyogenes
KR100279844B1 (ko) 치주염 원인세균인 포필로모나스 진지발리스 세포를 용균시키는 용균효소 와이유205와 그를 생산하는 미생물
KR100497751B1 (ko) 수용성 다당을 생산하는 애그로박테리움 신균주, 수용성다당 및 이를 제조하는 방법
Савицкая et al. CREATION OF AN IMMOBILIZED PROBIOTIC BASED ON BACTERIAL CELLULOSE FOR THE CORRECTION OF THE INTESTINAL MICROBIOME
CN116083507A (zh) 一种基于调控代谢合成速度的纳他霉素培养基及其培养工艺
CN118048413A (zh) 一种具有保健作用的微生物多糖工艺方法
CN115316654A (zh) 一种具有降血压作用的松露发酵液制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant