SU1625332A3 - Способ получени полипептида, обладающего иммуногенными свойствами НВ @ А @ - Google Patents
Способ получени полипептида, обладающего иммуногенными свойствами НВ @ А @ Download PDFInfo
- Publication number
- SU1625332A3 SU1625332A3 SU854011814A SU4011814A SU1625332A3 SU 1625332 A3 SU1625332 A3 SU 1625332A3 SU 854011814 A SU854011814 A SU 854011814A SU 4011814 A SU4011814 A SU 4011814A SU 1625332 A3 SU1625332 A3 SU 1625332A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- dna
- particles
- dhfr
- hbs
- fragment
- Prior art date
Links
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims abstract description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 24
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 claims description 20
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 18
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims 1
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 claims 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 abstract description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 abstract description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 abstract 2
- 108010077480 Albumin Receptors Proteins 0.000 abstract 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 3
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 2
- 101150010882 S gene Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 2
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710149086 Nuclease S1 Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 101150106093 gpt gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108010045897 polyalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к области медицины и может быть использовано дл получени вакцин. Изобретение касаетс композиции, содержащей частицы , имеющие иммунологические свойства , характерные дл антигена HBSAg. Эти частицы отличаютс тем, что содержат также рецептор полимеризован- ного альбумина человека. Их получают путем трансформации человеческих или животных клеток вектором, содержащим последовательность ДНК, кодирующую S- и пред-5-участки генома вирусного гепатита В, причем данна последовательность ДНК находитс под контролем промотора, обеспечивающего эффективную транскрипцию данной последовательности в человеческие или животные клетки, трансформируемые данным вектором . (Л
Description
Изобретение относитс к области медицины и может быть использовано дл получени вакцин против гепатита В.
Композици , используема дл приготовлени вакцин, отвечающа изобретению , содержит почти сферические полипептидные частицы (или образована из этих частиц), которые обладают им- муногенными и иммунологическими свойствами , характерными дл антигена HBS Ag и имеют размеры 18-25 нм, особенно 20-22 мм, и плотности, позвол ющие их выделение в интервале плотности 1,20-1,22 г/мм в градиенте плотности на основе CsCl, и такую степень полной чистоты, что отсутствуют частицы Dane s ( и антигены HBS, включа НВС. Предлагаема композици отличаетс тем, что указанные сферические частицы содержат также рецептор поли- меризованного человеческого альбуми - на. В частности, полипептидные частицы , отвечающие изобретению, могут содержать значительные пропорции ч полипептидов, имеющих мол.вес пор дка 34000 дальтон, и такие полипепти- ды составл ют по количеству более 10%, предпочтительно более 20% от общего количества полипептидов указанных частиц.
Пример 1. Построение векторов .
А. Построение плаэмиды pSVS,
С& IsD
СП
СО
со
1C
см
Плазмида pSVS позвол ет выразить S участок (пред-S участок и S ген) под контролем раннего промотора вируса SV 40.
Фрагмент Bglll 2,3 кв выдел ют из рСРЮ. Плазмида рСРЮ содержит двух- звенный полимер (димер) от головной до хвостовой части генома HBV. Этот фрагмент начинаетс с дес ти нуклео- тидов перед АТС пред-S участка и завершаетс 1,1 кв после стоп кодона ТАА гена S. Он содержит путативную точку полиаденилировани информационной рибонуклеазы (mRNA) рецептора , и инициируемую точку транскрипции гена S.
Используют ранний промотор SV 40, содержащийс в плазмиде PSV 2 gpt (АТСС 37145), в котором ген gpt
Е. coli слит с PVuII Hindlll фрагмента размером 348 п.о. раннего участка SV 40. Этот фрагмент включает ранний и поздний промоторы иного происхождени , чем репликаци SV 40 точку ини- циировани транскрипции ранних вестников , и 72 основные пары, которые повтор ютс последовательно.
Фрагмент Bglll размером 2,3 кв пар оснований от рСРЮ вставл ют в единственную точку Hindlll плазмиды pSV посредством св зывани концов фрагмента ДНК, которые имеют тенденцию к раскрытию посредством ДНК поли меразы Кленова. После изучени ре- комбинантных плазмид отбирают клон (pSV H44), в котором участок, кодирующий HBS, ориентирован относительно промотора SV 40 таким образом, что обеспечивает его выражение. Такое построение подтверждаетс ограничительными картами. Была определена нуклеотидна последовательно на стыке двух фрагментов SV 40 и HPV.
Плазмида pSVS построена из трех фрагментов, полученных от трех плазмид: фрагмент 2,5 кв PVuI - XLol, полученный от pSVH4; фрагмент 1,9 кв Xhol BglHI, полученный от рСРЮ; фрагмент 1,0 -BamHI, PVuI от pBR 322
Полученна в результате плазмида
pSVS (5,4 кв) отличаетс от pSV H4 отсутствием участка gpt и от последовательностей SV 40 ДНК, следующих за данной последовательностью, нали- чием фрагмента EcoRI - BamHI плазмиды pBR 322.
Б„ Построение плаэмиды pSVS.
Фрагмент, содержащий dhfr.
0
5
$
5
5
0
0
Плазмиду pHTV dhfr после линейного выравнивани ферментом PVuI частично расщепл ют ферментом Hindlll с освобождением некоторых фрагментов, из которых один фрагмент 4400 Ьр. (пар оснований) содержит LTR от MMTV, с ДНК от dhfr, интрон от tAg от SV 40, точку полиаденилировани в ранних генах SV 40, фрагмент EcoRI- PVuI плазмиды pBR 322.
Фрагмент HBV ДНК.
Плазмиду pSVS фрагментируют посредством PVuI, затем Hindlll с высвобождением таким образом фрагмента 4676 п.о., содержащего PVuI-PVuII Фрагмент, содержащий источник репликации pBR 322; источник репликации и ранний промотор вируса SV 40; фрагмент Bglll размером 2,3 т.п.о. от HBV, содержащий участки, кодирующие пред-S и S ген, а также сигнал полиаденилировани этого гена; фрагмент BamHI - Hindlll плазмиды pBR 322.
Лигирование данных фрагментов,,
После очистки данные две фрагмента соедин ют по сайтам PVuI и Hindlll так что восстанавливаетс устойчивость pBR 322 к ампициллину.
В рекомбинантном векторе зоны транскрипции S участка и гена dhfr ориентированы в одинаковом направлении и разделены примерно 300 п.о. плазмиды pBR 322.
ДНК, кодирующую dhfr, получают также от pSV2 dhfr (ATCC 337146), pSV3 dhfr (ATCC 37147) или pSVS dhfr (ATCC 31148).
Расположение гена dhfr таким образом, что он находитс под контролем слабого промотора (LTR от MMTV) и гена HBV таким образом, что он находитс под контролем сильного промотора (раннего промотора SV 40), повышает эффективность экспрессии гена.
Пример 2. Трансфекци животных клеток.
Перенос и выражение плазмиды pSVS dhfr в СНОо Трансформируют клетки СНО dhfr плазмидой pSVS dhfr, продукт этих клеток испытывают методом радио- иммуноанализа (RIA) в поверхностном слое клеточных культур. 60% клонов dhfr представл ет собой HBS Ag. Скорость синтеза HBS Ag была относительно , низкой между 1 и 20 мг/106 клеток в течение 24 ч.
Увеличение последовательностей HBS.
Культивирование клонов СНО HBS kg1 в присутствии метотриксате (МТХ), аналога фолиевой кислоты в ингибиторе dhfr обуславливает увеличение числа воспроизведений гена dhfr, что приводит к увеличению количества фермента dhfr.
Концентрации МТХ составл ют 50, 100 или 140 нМ на первом этапе и 1,5,10 или 25 мкмоль на втором этапе Суммарно отбирают примерно 150 стойких к МТХ клонов дл продуцировани HBS Ag, при этом увеличение синтеза HBS Ag в значительной степени мен етс от одного клона к другому как на первом, так и на втором этапе.
Число копий последовательности HBV на клетку в различных клонах опрдел ют путем гибридизации целлюлозного фильтра согласно методике с использованием в качестве пробы клонированной HBV - ДНК, меченой г32р„ Дл одинаковой дозы МТХ это число значительно мен етс от одного клона к другому в пределах от 100 до 500.
, Последовательности HBV присутствуют в интегрированной форме,рефоре- тические профили дл разных клонов в основном сопоставимы.
Количество специфических РНК последовательностей HBV анализируют путем молекул рной гибридизации, оно пропорционально скорости продуцировани HBS АЈ. Более того, дл одинаковой дозы МТХ (50 нм) количество специфических РНК посто нно в различных анализируемых клонах. Вы влено два класса РНК. Один основной 2,1 т.п.о0 и другой неосновной 2,5 т.п.Оо Изучение этих РНК посредством карты S1 нуклеазы показывает наличие основного участка инициировани на пред-S в положении 3157, соответствующем РНК 2,1 т.п.о., и другого неосновного инициировани в промоторе SV 40, соответствующего РН 2,5 т.п.о,
П р и м е р 3, Анализ частиц HBS Ag
Анализ осуществл ют на частицах, полученных 37БА5„ Поверхностные слои соответствующие нескольким сборам в стационарной фазе в течение 24 ч, соедин ют вместе. Частицы HBS Ag очищают путем двух последовательных
5
0
5
100°С
ультрацентрифугирований в градиенте плотности CsCl с последующим скоростным ультрацентрифугированием ,в сахарозном градиенте. Частицы HBS Ag имеют плотность 1,20. В электронном микроскопе обнаруживают, что они представл ют собой сферические частицы средним диаметром 22 нм, морфологически аналогичные частицам человеческого происхождени . Частиц трубчатой формы не обнаруживают.
После диссоциации частиц при
в течение 5 .мин в присутствии ДТТ полипептиды анализируют методом электрофореза на полиакриламидном геле в присутствии SDS. Гель окра- пивают сол ми серебра. Наблюдают три полосы, соответствующие полипептидам 22 300, 26 100 и 34000 дальтон. Относительна интенсивность окрашивани этих трех полос позвол ет определ ть пропорции трех белков, составл ющие 54, 19 и 27%. После мечени 35 S метионином в услови х in vivo очищенные частицы подвергают иммуно- осаждению посредством анти-HBS сыворотки , а затем белки анализируют посредством электрофореза. На авторадиограмме обнаруживают три описанные полипептида в тех же пропорци х.
Наличие рецептора дл pHSA на поверхности частиц обнаруживают методом радиоиммуноанализа в твердой фазе . Рецепторы обнаружены в поверхностном слое, а также на очищенных частицах.
П р и м е р 4. Определение иммунизации .
После ввода в препарат частиц гидрата окиси алюмини до концентрации 0,1% этот препарат используют дл иммунизации мышей Balb/c. Иммунологическа сила клеточных частиц 5 идентична иммунологической силе вакцины от гепатита В, выпускаемого под торговой маркой HBV ACB (и получаемого из сыворотки людей - доноров с содержанием естественного HBS Ag). 0 50%-на эффективна доза составл ет 0,04 мкг дл клеточных частиц и 0,03 мкг дл HBVAC (торгова марка института Пастера).
Таким образом, вектор pSVS после интеграции в клеточную ДНК .позвол ет осуществить синтез и выделение пустых оболочек вируса HBV в форме час- тиц 22 нм. Удаление большей части генома HBV и, в частности гена, кода0
5
0
5
рующего белок капсид, исключает продуцирование полностью инфекционных вирусных частиц. Этот вектор несет также звено транскрипции гена бурой водоросли dhfr, которое после ввода в dhfr обеспечивает их увеличение в присутствии МТХ за счет увеличени гена.
Синтез HBS Ag за счет блоков СНО вл етс очень стабильным даже при отсутствии МТХ. И эта стабильность сохран етс в течение шести мес цев , что составл ет примерно 300 генераций. В некоторых случа х наблюдаетс еще небольшое самопроизвольное увеличение продуцируемой HBS Ag
Кроме того, изобретение позвол ет получить клоны, которые образуют им- муногенные частицы со значительной
генетической стабильностью, j
Частицы HBS Ag 22 мм, синтезированные клетками СНО, имеют такую же иммуногенность, как и HBV АСВ, который вл етс препаратом частиц сывороточного происхождени . Скорости продуцировани HBS Ag сопоставимы со скорост ми продуцировани при промышленном использовании. Присутствие pHSA рецептора на поверх0
5
0
5
0
ности этих частиц вл етс дополнительным аргументом,дл использовани этой системы при получении вакцины против гепатита В„
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ получени полипептида, обладающего иммуногенными свойствами HBS Ag,предусматривающий конструирование рекомбинантной плазмидной ДНК со вставной части ДНК вируса гепатита Ё под контролем вирусного промотора, трансформацию полученной ДНК штаммов культивируемых клеток животного, отбор штаммов продуцентов, культивирование, выделение и очистку целевого продукта, отличающийс тем, что конструируют рекомбинантную плазмидную ДНКрЗУБ dhfr со вставкой Bglll фрагмента вируса гепатита В размером 23 кв под контролем раннего промотора SV 40, трансформируют полученной ДНК штамм СНО dhfr, а отбор штамма-продуцента осуществл ют в присутствии МТХ в концентрации 50, 100, или 150 нмоль, затем в концентрации 5,10 или 20 ммоль и блот-гибридизацией с используемой в качестве ДНК - зонда НВК - ДНК, меченной 3ip.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR8403564A FR2560890B1 (fr) | 1984-03-07 | 1984-03-07 | Composition utile pour la fabrication de vaccins contenant des particules portant l'antigene de surface du virus de l'hepatite b et le recepteur de l'albumine serique humaine polymerisee, cellules animales capables de produire de telles particules et procede pour leur obtention |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1625332A3 true SU1625332A3 (ru) | 1991-01-30 |
Family
ID=9301807
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU854011814A SU1625332A3 (ru) | 1984-03-07 | 1985-11-06 | Способ получени полипептида, обладающего иммуногенными свойствами НВ @ А @ |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP0156712B1 (ru) |
JP (1) | JPH08839B2 (ru) |
KR (1) | KR930003609B1 (ru) |
AT (1) | ATE141168T1 (ru) |
AU (1) | AU598181B2 (ru) |
CA (1) | CA1262532A (ru) |
DE (1) | DE3588117T2 (ru) |
FR (1) | FR2560890B1 (ru) |
SU (1) | SU1625332A3 (ru) |
WO (1) | WO1985003876A1 (ru) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL79740A0 (en) * | 1986-08-17 | 1986-11-30 | Yeda Res & Dev | Hepatitis vaccine |
FR2608052B1 (fr) * | 1986-12-10 | 1990-04-13 | Pasteur Vaccins | Procede de preparation d'un vaccin contre l'hepatite b et vaccin obtenu |
DE10299017I2 (de) * | 1987-06-22 | 2005-05-25 | Medeva Holdings Bv | Hepatitis-B-Oberfl{chenantigen enthaltendes Peptid. |
EP0304578B1 (en) * | 1987-06-22 | 2001-10-24 | Medeva Holdings Bv | Peptide comprising hepatitis B surface antigen |
WO1988010301A1 (en) * | 1987-06-22 | 1988-12-29 | Mccormick And Jones Engineering Ltd. | Hepatitis b surface antigen vaccine |
EP0328123A1 (en) * | 1988-02-09 | 1989-08-16 | Eugene Tech International, Inc. | Heterogeneous, pre-S rich hepatitis B surface antigen |
EP0491077A1 (en) * | 1990-12-19 | 1992-06-24 | Medeva Holdings B.V. | A composition used as a therapeutic agent against chronic viral hepatic diseases |
FR2711670B1 (fr) | 1993-10-22 | 1996-01-12 | Pasteur Institut | Vecteur nucléotidique, composition le contenant et vaccin pour l'immunisation à l'encontre d'une hépatite. |
JP4085231B2 (ja) * | 2000-02-28 | 2008-05-14 | 株式会社ビークル | タンパク質中空ナノ粒子とそれを用いた物質運搬体、ならびに細胞への物質導入方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4113712A (en) * | 1976-03-08 | 1978-09-12 | The Green Cross Corporation | HBsAG Particle composed of single polypeptide subunits and the preparation procedure |
CA1100037A (en) * | 1977-03-11 | 1981-04-28 | Chung-Mei Ling | Hb.sub.c ag coated on solid phase |
YU44186B (en) * | 1978-12-22 | 1990-04-30 | Biogen Nv | Process for obtaining recombinant dnk molecules |
JPS5610119A (en) * | 1979-07-05 | 1981-02-02 | Alpha Therapeutic Corp | Manufacture of b type hepatitis infection preventive vaccine |
DE3176404D1 (en) * | 1980-04-22 | 1987-10-08 | Pasteur Institut | Vaccine against viral hepatitis b, method and transformed eucaryotic cells for the preparation of this vaccine |
FR2480780B1 (fr) * | 1980-04-22 | 1985-12-06 | Pasteur Institut | Procede de transformation de cellules, notamment eucaryotes, par un adn circulaire tel que celui du virus de l'hepatite b et preparations contenant les produits d'expression desdits adn |
ZW18282A1 (en) * | 1981-08-31 | 1983-03-23 | Genentech Inc | Preparation of polypeptides in vertebrate cell culture |
JPS5936698A (ja) * | 1982-08-20 | 1984-02-28 | Science & Tech Agency | B型肝炎ウイルス遺伝子を組込んだ組換えdnaおよび形質転換動物細胞 |
US4847080A (en) * | 1984-03-07 | 1989-07-11 | New York Blood Center, Inc. | Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipide vesicle carriers |
WO1985004103A1 (en) * | 1984-03-09 | 1985-09-26 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic hepatitis b virus vaccine including both t cell anc b cell determinants |
NL8401066A (nl) * | 1984-04-04 | 1985-11-01 | Stichting Centraal Lab | Werkwijze ter bereiding van preparaten, die de humorale en cellulaire immuunreaktiviteit vergroten. |
-
1984
- 1984-03-07 FR FR8403564A patent/FR2560890B1/fr not_active Expired
-
1985
- 1985-03-07 WO PCT/FR1985/000044 patent/WO1985003876A1/fr unknown
- 1985-03-07 JP JP60501078A patent/JPH08839B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-07 EP EP85400444A patent/EP0156712B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-07 CA CA000475890A patent/CA1262532A/fr not_active Expired
- 1985-03-07 EP EP95120494A patent/EP0732104A1/fr not_active Withdrawn
- 1985-03-07 AU AU40610/85A patent/AU598181B2/en not_active Expired
- 1985-03-07 DE DE3588117T patent/DE3588117T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-07 AT AT85400444T patent/ATE141168T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-11-06 KR KR1019850700290A patent/KR930003609B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-11-06 SU SU854011814A patent/SU1625332A3/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЕР № 0038765, кл. С 12 N 15/00, 1983. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA1262532A (fr) | 1989-10-31 |
AU598181B2 (en) | 1990-06-21 |
AU4061085A (en) | 1985-09-24 |
EP0156712B1 (fr) | 1996-08-14 |
KR850700214A (ko) | 1985-12-26 |
KR930003609B1 (ko) | 1993-05-08 |
JPS61500971A (ja) | 1986-05-15 |
DE3588117D1 (de) | 1996-09-19 |
FR2560890B1 (fr) | 1987-10-16 |
EP0156712A1 (fr) | 1985-10-02 |
JPH08839B2 (ja) | 1996-01-10 |
DE3588117T2 (de) | 1997-03-20 |
FR2560890A1 (fr) | 1985-09-13 |
ATE141168T1 (de) | 1996-08-15 |
WO1985003876A1 (fr) | 1985-09-12 |
EP0732104A1 (fr) | 1996-09-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2634371B2 (ja) | 脊椎動物細胞内でb型肝炎表面抗原をコードするdnaを発現するベクター | |
EP1294893B1 (en) | Modification of hepatitis b core antigen | |
US6306625B1 (en) | Method for obtaining expression of mixed polypeptide particles in yeast | |
Kann et al. | Effect of core protein phosphorylation by protein kinase C on encapsidation of RNA within core particles of hepatitis B virus | |
EP0013828B1 (en) | Recombinant DNA, hosts transformed with it and processes for the preparation of polypeptides | |
CA2025598C (en) | Chimaeric hepadnavirus core antigen proteins | |
US4977092A (en) | Expression of exogenous polypeptides and polypeptide products including hepatitis B surface antigen in yeast cells | |
Kuhröber et al. | DNA vaccination with plasmids encoding the intracellular (HBcAg) or secreted (HBeAg) form of the core protein of hepatitis B virus primes T cell responses to two overlapping Kb-and Kd-restricted epitopes. | |
JPH10508468A (ja) | ウイルスコートタンパク質融合体としての植物中でのペプチドの発現 | |
AU2001266163A1 (en) | Modification of hepatitis B core antigen | |
US5098704A (en) | Hepatitis surface antigen particle vaccine | |
SU1625332A3 (ru) | Способ получени полипептида, обладающего иммуногенными свойствами НВ @ А @ | |
US5324513A (en) | Composition useful for the fabrication of vaccines | |
CA1270780A (en) | Flavivirus antigen | |
JPH09248191A (ja) | 融合タンパク質およびその粒子、診断試薬 | |
JP2702899B2 (ja) | 肝炎b型ウイルスワクチン | |
CA1341021C (en) | Hepatitis surface antigen particle vaccine | |
EP0182442B1 (en) | Recombinant dna molecules and their method of production | |
Bisht et al. | Expression and purification of dengue virus type 2 envelope protein as a fusion with hepatitis B surface antigen in Pichia pastoris | |
US4741901A (en) | Preparation of polypeptides in vertebrate cell culture | |
EP1117803B1 (en) | Method for the production of (poly)peptides by using truncated variants of the sv40 large t antigen with an intact n terminus | |
Voronkova et al. | Chimeric bacteriophage fr virus-like particles harboring the immunodominant C-terminal region of hamster polyomavirus VP1 induce a strong VP1-specific antibody response in rabbits and mice | |
US5077213A (en) | Recombinant vaccinia virus | |
JPH01503514A (ja) | 免疫原性ポリペプチドとその精製法 | |
Stockley et al. | [34] Use of fusions to viral coat proteins as antigenic carriers for vaccine development |