SU1531857A3 - Способ получени пептидов - Google Patents
Способ получени пептидов Download PDFInfo
- Publication number
- SU1531857A3 SU1531857A3 SU833611593A SU3611593A SU1531857A3 SU 1531857 A3 SU1531857 A3 SU 1531857A3 SU 833611593 A SU833611593 A SU 833611593A SU 3611593 A SU3611593 A SU 3611593A SU 1531857 A3 SU1531857 A3 SU 1531857A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- gln
- arg
- ser
- ala
- leu
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 29
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 12
- -1 BOC-amino Chemical group 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 claims description 2
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 9
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FVBVEHVQVWFUKG-UMSGYPCISA-N 4-[[dithiocarboxy-[(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl]amino]methyl]benzoic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)CN(C(S)=S)CC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 FVBVEHVQVWFUKG-UMSGYPCISA-N 0.000 claims 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 1
- ORTFAQDWJHRMNX-UHFFFAOYSA-N hydroxidooxidocarbon(.) Chemical compound O[C]=O ORTFAQDWJHRMNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 claims 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 2
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 abstract 1
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 abstract 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003269 fluorescent indicator Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 238000011141 high resolution liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение касаетс пептидов и, в частности получени соединений общей ф-лы I: H-TYR-ALA-ASP-ALA-ILE-PHE-THR-ASN-SER-TYR-ARG-LYS-VAL-LEU-GLY-GLN-LEU-SER-ALA-ARG-LYS-LEU-GLN-ASP-ILE-MET-R-X, где X-OH или NH2
R=а)-SER-ARG-GLN-GLN
б)-SER=ARG-GLN-GLN-GLY-GLU-SER
в)-SER-ARG-GLN-GLN-GLU-SER-ASN -GLN-GLU
г)-SER-ARG-GLN-GLN-GLY-GLU-SER-ASN-GLN-GLU-ARG-GLY-ALA
д)-SER-ARG-GLN-GLN-GLY-GLU-SER-ASN-GLN-GLU-ARG-GLY-ALA-ARG-ALA-ARG-LEU, которые способны вызывать секрецию природного гормона роста, что может быть использовано в медицине. Цель изобретени - создание новых малотоксичных и активных пептидов. Их синтез ведут присоединением к полимерной смоле МБГА или полистирольной смоле N-защищенной аминокислоты общей формулы BOC-HN-C(R1 R2)COOH, где R1-H
R2-CH3, -CH2OH,-CH2CH(CH3)2, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH. Затем продукт деблокируют и провод т постепенное наращивание пептидной последовательности в соответствии с формулой I. Далее отщепл ют носитель и деблокируют полученный пептидилполимер общей формулы X1TYR(X2)-ALA-ASP(X3)-ALA-ILE-PHE-THR(X4)-ASN-SER(X4)-TYR(X2)-ARG(X5)-LYS(X6)-VAL-LEU-GLY-GLN-LEU-SER(X4)-ALA-ARG(X5)-LYS(X6)-LEU-LEU-GLN-ASP(X3)-ILE-MET-R-X, где X - O-CH2-бензилполистирольна смола или NH-смола МБГА
X1 - бензилоксикарбонил
X2- 2,6-дихлорбензил
X3 - сложный бензиловый эфир
X4 - бензил
X5 - тозил
X6 - 2C1-Z
R -см.выше. Новые вещества оказывают вли ние на секрецию гипофизарных желез, что может быть использовано дл промотировани роста теплокровных и холоднокровных животных в сельском хоз йстве, а также в диагностической практике. 2 табл.
Description
Изобретение относитс к способу получени пептидов новых биологически активных соединений, которые могут Hi, 1ти применение в медицине.
Цель изобретени - разработка способа получени новых производных пептидов - малотокскчных, обладающих способностью вызывать секрецию природного GH, но более доступных соединений .
Пример 1. Синтез PGRF(l-44) свободной кислоты, имеющей формулу
см
H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn- Sei-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln- Leu-Seг-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-. Лsp-lle-Met-Ser-Лrg-Gln-Gln-Gly- Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala- Arg-Ala-Arg-7 eu, осуществл етс поэтапно с использованием пептидного синтезатора Бекмана 990 на основе хлорметилированной смолы, котора поставл етс из Lab, Systems Inc., с содержанием 0,9 Мэкв С1/г. GoeflH- нение BOG-Leu со смолой получа от согласно процедуре, описанной ниже, и это приводит в результате к заме- щению примерно 0,22 ммоль Leu на 1 г смолы. Все используемые растворители тщательно дегазируют путем пропускани инертного газа, предпочтительно гели , с тем чтобы гарантировать от- сутствие кислорода, который может нежелательно окисл ть серу группы Met.
После сн ти защиты и нейтрализации пептидную цепь поэтапно встраивают в смолу. Сн тие защиты, нейтра- лизащш и введение каждой аминокисло обычно осуществл ют согласно процедуре , описанной в табл. 1.
Дл реакции соединени на 1 г смолы используют 1 ммоль BOG-защищенной аминокислоты в хлористом метилене плюс 1 экв. 0,5 М flGGl в хлористом - метилене или 30% ДМР в хлористом метилене , реакци протекает в течение 2 ч. При соединении с Arg используют смесь 10% ДМГ с хлористым метиленог:, используют как защитную группу с гид роксильной боковой цепью дл Ser и ТЬГо 2-хлор-бензилоксикарбонил (2G1- Z) используют как защитную группу дл боковой цепи Lys. ToS используетс д защиты гуанидиногруппы Arg, и Gin или Asp карбоксильна группа защищен как Bzl эф1ф. Гидроксильна фенольна группа Туг защищена как 2,6-дихлор- бензиле По окончании данного синтеза получают следующее соединение:
X,-Туг(Х)-Ala-Asp(Хз)-А1а-11е- Ihl-Thr(X)-ABn-Ser(X5)-Tyr(Xj)- Arg(Xg)-Lys(Х)-Val-Leu-Gly-Gln- Leu-Ser(Xj)-Ala-Arg(X6)-Lys(X)-
Leu-Leu-Gln-Asp(X,)-Ile-Met-Ser(X5)- Arg(Xg)-Gln-Gln-Gly-Glu(X,)-Ser(X5)- Asn-Gln-Glu(X,)-Arg(X6)-Gly-Ala- Arg(Xg)-Ala-Arg(Xg)-Leu-X,
где X, - бензилоксикарбонил;
X - 2,6-дихлорбензил;
X, - сложный бензиловый эфир;
Х - бензил;
о
5
5 О
0
5
0
5
Х - тозил;
Хб - 2C1-Z;
X - X-0-GHi-бензолполистирольный
смол ной носитель.
После того как последн Туг группа соединена со смолой, BOG удал ют посредством 45% TFA в . Дл того, чтобы отп1епить и сн ть 3auiji- ту с оставшейс защищенной пептидом смолы, ее обрабатывают 1,5 мл анизола , 0,25 МП метилэтилсульфида (MES) и 10 мл фтористого водорода (HF) на 1 г пептида - смолы при температуре -20 G в течение 30 мин и при 0°G также в течение 30 мин. После удалени HF в высоком вакууме оставшуюс смолу - пептид промывают поочередно обезвоженным диэтиловым эфиром и хлороформом , и пептид затем экстрагируют дегазированной 2 н. уксусной кислотой. В результате лиофилизации экстракта уксусной кислоты получают белое м гкое вещество, Отщепленньп и лишенный запц1ты пептид затем раствор ют в 30%-ной уксусной кислоте и подвергают гель-фильтрации на тонком
геле Sephadex G-50, I
Данный пептид затем дополнительно очищают посредством катионообмен- ной хроматографии с использованием карбоксиметилцеллюлозы GM-32 Wliatman (18x18 см, УСЛОЯ ), и с использованием вогнутого наклона, образуемого путем закапывани 1 л 0,4 М , рН 6,5, в колбу дл смешивани , содержащую 400 мл 0,01 М NIIjOAc, рН 4,5. Окончательную очистку осуществл ют посредством распределительной хроматографии на носителе Phacmain тонкого порошка Sephadex G-50 с использованием системы растворителей EtOH: пиридин: 0,2%NHOAc 4:1:1:7о Хроматографичес- кие фракции тщательно раздел ют методом тонкослойной (TLG) хроматографии с использованием 0,25 мм толщины предварительно покрытых стекл нных пластин , силикагел 60 без флюоресцентного индикатора, про вление осуществл етс с помощью системы растворителей: 1-бутанол, пирилин, уксусна кислота, вода 6:6:1,2:4,8. Пластины TLG око1гчательно про вл ютс посредством 2 г нингидрпна в 50 мт уксусной кислоты и 950 NUI 1-бутанола. Величина R составл ет 0,46А. Собирают лишь те фракции, KtiTtipbie не показывают значительную степень иис.тоты.
5
Выход продукта 80 мг на каждый 1 г полистироловой смолы.
Аминокислотный анализ осуществл ют после гидролиза в запа нных трубках уже известным в данной области методом с использованием аминокислотного анализатора Liguimat с целью проверки правильности получаемой последовательности , при этом получают следующие результаты: Agx (3,62), Thr (0,75), Ser (3,5), Glx (6,83), Gly (2,87), Ala (5,10), Val (0,9), Met (1,23), He (1,84), Leu (5,045), Tyr (2,09), Phe (0,91), Lys (2,31), Arg (6,61), Анализ подтверждает правильную последовательность,
Определ ют вращение плоскости пол ризации света, и получают следующие результаты: ы, -65,6+1 (С 1,30%-на уксусна кислота).
Пример 2. Осуществл ют поэтапно синтез PGRF(1-40) формулы Н- Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn- Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln- Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln- Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly- Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala- OH,
использу пептидный синтезатор Бек- мана 990 на основе хлорметилирован- ной смолы. Синтез осуществл ют аналогично примеру 1. Выход продукта со тавл ет 37 мг на каждый 1 Г смолы. В результате обработки методами тонкослойной хроматографии (TLC) и жидкостной хроматографии высокого разрешени (HPLG) пептид абсолютно чист. Величина R,, измеренна аналогично примеру 1, составл ет 0,414.
Аминокислотный анализ осуществл ют после гидролиза с целью проверки правильности получаемой последовательности , при этом получают следующие результаты: Agx (3,89), Thr (0,88), Ser (3,66), Glx (7,04), Gly (3,07), Ala (4,02), Val (0,96), Met (1,01), He (1,86), Leu (4,28), Tyr (2,0), Phe (0,86), Lys (2,24) и Arg (4,15). Анализ подтверждает правильную последовательность. cCj .p -64,0+1
Пример 3. Осуществл ют поэта но синтез PGRF(1-34) - свободной кислоты , имеющей формулу H-Tyr-Ala-Asp Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg Lys- Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys- Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln- Gln-Gly-Glu-Ser-OH с использованием
318576
пептидного синтезатора Бекмлна 990 на основе хлорметилированной смолы. Синтез провод т аналогично примеру 1. Выход продукта 121 мг на каждый 1 г смолы. В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешени пептид, как показал анализ, пра0 ктически чистьй продукт. Величина R составл ет 0,500.
Аминокислотный анализ осуществл ю- ют после гидролиза с целью проверки правильности получаемой последователь5 ности, при этом получают следующие результаты: Agx (2,87), Thr (0,78), Ser (3,78), Glx (5,11), Gly (1,93), Ala (3,03), Val (0,88), Met (0,96), He (1,88) , Leu (4,14), Tyr (2,05), Phe .
0 (1,07), Lys (2,29) и Arg (3,22). Анализ подтверждает правильную последовательность . -60,8-t-l.
П p им e p 4a Осуществл ют поэтапно синтез PGRF (1-31)-свободной кис5 лоты, имеющей формулу
H-Tyr--Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn- Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu- Seг-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gin-Asp-11е- Met-Ser-Arg-Gln-Gln-OH с использоваQ нием пептидного синтезатора Бекмана 990 на основе хлорметилированной смолы . Синтез провод т аналогично примеру 1. Выход продукта составл л 143 мг на каждый 1 г смолы, В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешени пептид, как показал анализ, представл ет собой практически чистый продукт. Величина R/ равна 0,536,
Аминокислотный анализ осутцествл - юг после гидролиза с целью проверки правильности получаемой последовательности . Анализ показывает следующие результаты: Agx (2,73), Thr (0,75), Ser (2,77), Glx (3,95), Gly (0,98), Ala (3,06), Val (0,80), Met (0,98), He (1,77), Leu (4,28), Tyr (2,23), Phe (1,14), Lys (2,34)
и Arg (3,22). Анализ подтверждает 0г 7
правильную последовательность. j,
-65,
П p и M e p 5. Осуществл ют поэтапно синтез GRFO-44j-aмидa, имеющего следующую формулу: Н-Туг-А1а- Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-ArgLys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala- Arg-Lys-Leu-Leu- Gin-Asp-Ile-Met- Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Cl lias
5
Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NHi с использованием пептидного синтезатора Бекмана 990 на основе 6 г смолы МВНА, с использованием тех же операций (изложенньк в виде табл. 1), что и в примере 1. Смолу- пептид обрабатывают 10%-ньгм анизоло в HF плюс MCS, как и в примере 1. После отделени смолы и ее промывки пептид экстрагируют уксусной кислотой и затем лиофилизируют. После очистки методом гель-фильтрации, ионообменной хроматографии и затем распределительной хроматографии получают 321,4 мг пептида, выход которого составл ет 54 мг на 1 г смолы . В результате обработки методом тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешени данный пептид, как показал анализ, представл ет собой практически чистый продукт. Величина R, составл ла .
Аминокислотный анализ осуществл - ют после гидролиза с целью проверки правильности получаемой последовательности , при этом получают следующие результаты: Agx (3,75), Thr (0,80), Ser (3,60), Glx (6,98), Gly (3,16)., Ala (5,04), Val (0,77), Met (1,02), He (1,79), Leu (5,41), Tyr (2,03), Phe (0,84), Lys (2,39) и Arg (6,43). Анализ подтверждает правильную последовательность. ut.3-p -63,1+1.,
П р и м е р 6. Осуществл ют поэтано синтез PGRF(1-40 -амида, имеющего формулу H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe- Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly- Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln- Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu- Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-NH , использу пептидный синтезатор Бекмана 990 на основе МВНА смолы Синтез осуществл ют аналогично примеру 3. Выход продукта 60 мг на каждый 1 г смолы. В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешени получаемый пептид, как показал анализ, представл ет собой практически чистый продукт. Величина Rf составл ет 0,464.
Аминокислотный анализ осуществл ют после гидролиза с целью проверки правильности получаемой последовательности , анализ показывает следующие результаты: Agx (3,76), Thr (0,8
5
0
5 Q 5
0
5
Ser (3,68), Glx (6,89), Gly (3,12), Ala (4,08), Val (0,88), Met (1,36), He (1,76), Leu (4,24), Tyr (2,00), Phe (0,80), Lys (2,32) и Arg (4,16). Анализ подтверждает правильную последовательность , oi- -62,.
Пример 7. Осуществл ют поэтапно синтез GRFf1-37)-свободной кислоты , имеющей формулу Н-Туг-А1а- Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr- Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Glu-Leu-Ser- Al a-Arg-Lys-Le u-Leu-G In-Asp-He-He t- Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn- Gln-Glu-OH, с использованием пептидного синтезатора Бекмана 990 на основе хлорметилированной смолы. Синтез осуществл ют аналогично примеру 1. Выход продукта 29 мг на каждый 1 г смолы. В результате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрещени получаемый пептид, как показал анализ, представл ет собой практически чистый продукт. Величина R.J составл ет 0,421.
Аминокислотный анализ осуществл ют после гидролиза с целью проверки правильности пол% чаемой последовательности , анализ показывает следующие результаты: Agx (3,92), Thr (0,79), Ser (3,62), Glx (7,05), Gly (1,97), Ala (3,17), Val (1,03), Met (1,0), He (1,91), Leu (4,37), Tyr (1,86), Phe (0,76), Lys (2,15), и Arg (3,40). Анализ подтверждает правильную последовательность. Гос1 -61,7+1.
П р и м е р 8. Осуществл ют поэтапно синтез GRF (1-37)-амида, имеющего формулу H-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile- Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val- Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu- Leu-Gln-Asp-He-Met-Ser-Arg-Gln-Gln- Glu- Ser-Asn-cUn-G u-Glu-NH, использу пептидный синтезатор Бекмана 990 на основе МВНА смолы. Синтез осуществл ют аналогично примеру 1. Выход продукта 25 мг на каждый 1 г смолы. В резз льтате обработки методами тонкослойной хроматографии и жидкостной хроматографии высокого разрешени получаемый пептид, как показал анализ, представл ет собой практически чистый продукт. Величина RI составл ет 0,507.
Аминокислотный анализ осуществл ют после гидролиза с целью проверки правпльности получаог-юй послеповательности ,анализ показывает следующие рзультаты: Agx (4,02) , Thr (0,80) , Ser
(3,49), Glx (6,90), Gly (1,92), Ala (3,08), Val (1,05), Met (1,01), He (1,77), Leu (4,05), Tyr (2,02), Phe (1,14), Lys (2,50) и Arg (3,27). Анализ подтверждает правильную последовательность , ol- -63,3jf1.
Провод т биологические испытани полученных пептидов,
Дл определени эффективности пептида в ускорении вьщелени гормона роста провод т анализ в услови х ин витро с использованием синтетического GRF (1-40) из примера 2 в сопоставлении с равномол рными концентраци ми экстрагированного и очищенного естественного GRF (1-40) ив сопоставлении с контрольным стандартом GRF, имеющим уже известную эффективность в ускорении вьщелени гомона из гипофизарных клеток. Контрольный стандарт представл ет собой препарат, полученный от гипоталамуса крысы, который дает половину от максимальной реакции в отношении вьщелени GH при анализе многослойно биопр бы гипофизарной клетки.
Используют культуры, включающие клетки гипофизарных желез крысы, которые были предварительно удалены за 4-5 дней. Обе культуры определ емой стандартной среды и культуры, которые рассматриваютс оптимальными дл секреции гормона роста, используютс дл сравнительного испытани общеприн тым образом. Инкубацию подвергаемого испытанию вещества осущест- вл ют в течение 3-4 ч, аликвоты среды выращивани удал ют и подвергают обработке с целью определени их содержани в иммунореактивном (irGH) хорошо охарактеризованным методом радиоиммунопробы.
Биоактивность аналогов hpGRF in vitro (изучение клеток гипофиза крыс) относительные эффективности аналогов hp GRF-44-NH с исключенным окончанием - СООН даны в табл. 2.
Полученные результаты подтверждают низкую токсичность пептидов, синтезированных в услови х предлагаемого способа, и биологическую активность, выражающуюс в способности вызывать секрецию природного гормона роста.
.
ю
15 20 25 30
5 дО ДЗ
д
5
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ получени пептидов общей формулы 1A-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn- Ser-Tyr-Arg-Ile-Val-Leu-Gly-Gln- Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp- Ile-Met-R-x, где X - ОН, R-Ser-Arg-Gln-Gln; Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser; Ser-Asn-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn- Gln-Glu;Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln- Glu-Arg-Gly-Ala;Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln- Glu-Arg-piy-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu, отличающийс тем, что, -защищенную аминокислоту общей формулы IIBoc-HN-G(R,Rj)COOHгде R,-H;R -CHjrCH OH, -GHjGH(CH5)2 , -CH CH GGNHj, .СООН ,присоедин ют к полимерной смоле МБГА или бензилполистирольной, деблокируют и осуществл ют постепенное наращивание пептидной последовательности в соответствии с общей формулой I и от полученного при этом пептидилпо- лимера общей формулы III (Х)-Ala-Asp(X,)-Ala-Ile-Phe- Thr(X)-Asn-Ser(X4)-Tyr(X)-Arg(Xf)- Lys(Xg)-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser(X4)- Ala-Arg(Xf)-Lys(Xg)-Leu-Leu-Gln- Asp(Xj)-Ile-Met-R-X, где X - 0- GHj- бензилполистирольнасмола; Ш - смола КБГДХ( - бензилоксикарбонил; Xii-2,6 - дихлорбензкл; XJ, - сложный бензиловый эфир; Х - бензил; Ху - тозил; Х, - 2G1-Z;R - имеет указанные значени ,отщепл ют полимер-носитель и защитные группы.Приоритет по признакам: 16.06о82 при R - Ser-Arg-Gln-Gln; Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser; Ser- Asn-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu. R - -Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn- Gln-Glu-Arg-Gly-Ala; 15.09.82 при R-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn- Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu.Таблица 1ЭтапРеагенты -и операцииПромывка CHjClj (2 раза) 50% трифторуксусна кислота + 5% 1,2-этандитиол в 1-кратно) 50% трифторуксусна кислота (TFA)+ + 5% 1,2-этандитиол в (1-кратно)Промывка CH,Cl2(3 раза) Промывка (2 раза) 10% триэтиламин () в СН,С12, нейтрализаци (2 раза) Промывка (2 раза) 10% триэтиламин () с , нейтрализаци (2 раза) Промьшка CHjOH (2 раза) Промывка (2 раза) ВОС -аминокислота (1 ммоль/г смолы) плюс эквивалентное количество ди- циклогексилкарбодиимида (ДСС) в CHjClПромывка CHjCl (1-кратно) 50% диметилформамид в (2- кратна промывка) Промывка 10% триэтнпамином (Et3N) в (1-кратно) npoNflbiBKa СИ ОН (2 раза) Промывка (2 раза) 25% уксусный ангидрид в (2 мл/ смолы) Промывка (2 раза) Промывка CHjOH (2 раза)Дл соединени Asn и Gin в данный этап введен 1,136 М избыток 1-оксибензотриазола (HOBt).Таблица 2Врем смешивани , мин0,5 0,520,0 0,5 0,50,5 0,50,5 0,5 0,51200,5 0,50,5 0.5 0,520,0 0,5 0,5
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8200812 | 1982-06-16 | ||
| US06/418,248 US4517181A (en) | 1982-09-15 | 1982-09-15 | Mammalian PGRF |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1531857A3 true SU1531857A3 (ru) | 1989-12-23 |
Family
ID=26766557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU833611593A SU1531857A3 (ru) | 1982-06-16 | 1983-06-15 | Способ получени пептидов |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0107890B1 (ru) |
| KR (1) | KR900006711B1 (ru) |
| AU (1) | AU548590B2 (ru) |
| CA (1) | CA1247599A (ru) |
| DD (1) | DD217808A5 (ru) |
| ES (1) | ES8504673A1 (ru) |
| FI (1) | FI79716C (ru) |
| GR (1) | GR78614B (ru) |
| IL (1) | IL68893A0 (ru) |
| NO (1) | NO166486C (ru) |
| NZ (1) | NZ204456A (ru) |
| PH (1) | PH21001A (ru) |
| PT (1) | PT76843B (ru) |
| SU (1) | SU1531857A3 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4518586A (en) * | 1983-01-13 | 1985-05-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs III |
| US4581168A (en) * | 1983-02-21 | 1986-04-08 | Sanofi | Synthesis of hpGRF (Somatocrinin) in liquid phase and intermediate peptides |
| AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
| PT79094B (en) * | 1983-08-29 | 1986-08-14 | Salk Inst For Biological Studi | Grf analogs |
| FR2567524B1 (fr) * | 1984-07-10 | 1987-11-27 | Sanofi Sa | Procede de synthese de la somatocrinine en phase liquide et peptides intermediaires |
| CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
| FR2599038B1 (fr) * | 1986-05-26 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Procede de preparation de nonacosapeptides et peptides intermediaires |
-
1983
- 1983-06-02 NZ NZ204456A patent/NZ204456A/en unknown
- 1983-06-06 IL IL68893A patent/IL68893A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-06-09 PT PT76843A patent/PT76843B/pt unknown
- 1983-06-10 GR GR71635A patent/GR78614B/el unknown
- 1983-06-14 NO NO832148A patent/NO166486C/no not_active IP Right Cessation
- 1983-06-14 PH PH29053A patent/PH21001A/en unknown
- 1983-06-15 FI FI832176A patent/FI79716C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 DD DD83252054A patent/DD217808A5/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-15 ES ES523277A patent/ES8504673A1/es not_active Expired
- 1983-06-15 SU SU833611593A patent/SU1531857A3/ru active
- 1983-06-15 KR KR1019830002655A patent/KR900006711B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-06-16 EP EP83303490A patent/EP0107890B1/en not_active Expired
- 1983-06-16 AU AU15843/83A patent/AU548590B2/en not_active Expired
- 1983-06-16 CA CA000430533A patent/CA1247599A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT76843A (en) | 1983-07-01 |
| KR900006711B1 (ko) | 1990-09-17 |
| FI832176L (fi) | 1983-12-17 |
| PH21001A (en) | 1987-06-22 |
| DD217808A5 (de) | 1985-01-23 |
| FI79716B (fi) | 1989-10-31 |
| NO832148L (no) | 1983-12-19 |
| KR840006328A (ko) | 1984-11-29 |
| AU548590B2 (en) | 1985-12-19 |
| ES523277A0 (es) | 1985-04-16 |
| FI832176A0 (fi) | 1983-06-15 |
| NO166486C (no) | 1991-07-31 |
| ES8504673A1 (es) | 1985-04-16 |
| EP0107890A1 (en) | 1984-05-09 |
| PT76843B (en) | 1986-01-15 |
| NO166486B (no) | 1991-04-22 |
| FI79716C (fi) | 1990-02-12 |
| EP0107890B1 (en) | 1986-01-29 |
| AU1584383A (en) | 1983-12-22 |
| GR78614B (ru) | 1984-09-27 |
| NZ204456A (en) | 1987-05-29 |
| IL68893A0 (en) | 1983-10-31 |
| CA1247599A (en) | 1988-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1426455A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| SU1530097A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| US4116951A (en) | [Asn2 ]-thymosin α1 and analogs thereof | |
| SU1435157A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| SU849998A3 (ru) | Способ получени циклических пептидов | |
| US4148788A (en) | Synthesis of thymosin α1 | |
| SU1575944A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| CA1055930A (en) | Synthesis of salmon calcitonin | |
| JPS61118400A (ja) | 成長ホルモン放出性因子類似体及びその製造方法 | |
| JPH085916B2 (ja) | 新規カルシトニン誘導体 | |
| SU1477248A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| SU1423000A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| SU1531857A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
| US4098777A (en) | Process for the preparation of pyroglutamyl-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn | |
| DE3586940T2 (de) | Polypeptid und dessen Verfahren zur Herstellung. | |
| EP0051205A1 (de) | Neues Tridekapeptid, Verfahren zu seiner Herstellung und Verwendung | |
| EP0001449B1 (de) | Somatostatinanaloge und diese enthaltende pharmazeutische Präparate sowie deren Herstellung | |
| US4304692A (en) | Synthesis of biologically active peptides | |
| US4058512A (en) | Synthetic peptides having growth promoting activity | |
| DE3876022T2 (de) | Calcitonin-derivate und deren salze. | |
| GB1590668A (en) | Process for the preparation of thymosin a1 and an analogue | |
| JPS6393796A (ja) | ペプチド合成の脱保護基用薬剤 | |
| EP0478775B1 (en) | Peptide derivatives | |
| EP0360481B1 (en) | New pentapeptide and a process for the preparation thereof | |
| RU2073010C1 (ru) | Способ синтеза лизин-вазопрессина в растворе |