SU1470185A3

SU1470185A3 - Способ получени производных инденопиримидинов

Info

Publication number: SU1470185A3
Application number: SU874202197A
Authority: SU
Inventors: Стевен Хирч Кеннет; Дэвид Джонс Чарльз; Виктор Крумкалнс Эрикс; Грант Саундерс Дональд
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани (Фирма)
Priority date: 1986-03-31
Filing date: 1987-03-30
Publication date: 1989-03-30
Also published as: EP0240263B1; CN87102424A; AU581809B2; AR245109A1; ES2042552T3; HU196379B; CA1265140A; ATE78251T1; JPS62238275A; DK161187D0; KR870008857A; PH23398A; DE3780338D1; DK165245C; EP0240263A3; IL81978A; DK161187A; IE59762B1; EP0240263A2; PT84553B

Description

1

Изобретение относитс к способу получени п роизводных инденопиримиди- ;нов - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретени - способ получени Жовых производных инденопиримиди- нов-малотоксичных соединений,облада- Ю1ЦИХ более высокой способностью подав- :л ть действие фермента ароматазы.

ы

: П р и м е р 1. 8-Хлор-5-(4-хлор- фенил) -5Н-индено D ,2-1)Зпиримидин.

Раствор 4,0 rot. ,о/,бис(4-хлорфе- нил) -5-пиримидинметанола в 25 мл ме- тансульфокислоты перемешивают в атмосфере азота в течение 18 ч. Раствор вливают в раствор бикарбоната натри :h экстрагируют этилацетатом. Органи- |ческий экстракт промывают насыщенным jbacTBopoM хлористого натри , высуши- |вают над сульфатом магни и выпарива ;Ют в вакууме. После перекристаллиза- |Ции из смеси этилацетат/изооктан по- Глучают 1,95 г желаемого указанного IB названии продукта, имеющего т,пл. Il58-163 c. Рассчитано, %: С 65;,20, Н 3,22;

:N 8,94.

С,тН,„С1,.К2.

Найдено, % , С 65,03 Н 3,29; N 8,73.

: В примерах 2-6 нижеследующие сое- 1динени получают из соответствующего пиримидинметанола согласно методике, описанной в примере 1. I П р и м е р 2. 5-(4-Хлорфенш1)- |5Н-индено 1,2-d пиpимидин, выход 73%, т.пл. 140-140,5°С.

Рассчитано,%: С 73,25; Н 3,98; N 10,05.

С,Н,, CIN.

Найдено,%: С 73,29; Н 3,72; N 9,87.,,

П р и м е р 3, 8-Х,пЬр-5-фенил-5Ниндено 1 )2-d}пиpимидин, выход 0,3%, т.пл. 13.5,5-137 0.

Рассчитано, %: С 73,25; Н 3,98| N.10,05.

,,C1N.

Найдено, %: С 72,19; Н 3,81; N 9,877

П р и м е р 4. 5-(4- Фторфенил)8- (трифторметил)-5Н-индено 1,2-d пиримидин , выход 0,8%, т.пл., 146 .

Рассчитано,%: С 65,46; Н 3,05; N 8,48.

С ..

Найдено,%: С 65,18; Н 3,11; N8,21. „

П р и м е р 5. 8-Фтор-5 4-(три- фторметил) фенил -5К-индено 1,2-d пиримидин, выход 33%, т.пл. 169... 1704. ,

Рассчитано, %: С 65,46; Н 3,05; N 8,48.

.

Найдено.%: С 65,7-4; Н 3,23; N 8,48.

П р и м е р 6. 8-Фтор-5-(4-фтор- фенил)-5Н-индено 1,2-d пиримидин, выход 77,7%, т.пл. 172-174 с. 5 Рассчитано,%: С 72,85; Н 3,60; N 10,00.

C,,H,,.

Найдено: %: С 73,04; Н 3,87; N 9,96.

10 П р и м е р 7. 5-Фенш1-5-Н-инде-: но 1,2-dЗпиpимидин.

10 г w. ,о;.-дифенил-5-пиримидинмета- нола перемешивают в 50 мл серной кислоты в течение: примерно 18ч. Раст- 15 вор вливают в лед. Полученный твер.ч дый продукт извлекают путем фильтрации . В результате получают 11 г желаемого указанного в названии продукта . После перекристаллизации из прос- 20 того диэтилового эфира получают материал с т.пл. 148-150 С.

Рассчитано,%: С 83,58; Н 4,95; N 11,49.

CnH,N,,.

5 Найдено, %: С 83,33; Н 5,17; N11,11.

В примерах 8-16 нижеследукнцие соединени получают из соответствующего пиримидинметанола согласно методи- 0 ке, описанной в примере 7.

Пример., 8. 5-(2,4-Дихлор- фенил)-5Н-икдено D,2-dlпиpимидин, выход 80%, т.пл. 107-108°С.

П р и м е р 9, 5-(3-Фторфенил)- 5 -5Н-индено 1,2-djпиримидин, выход 21%, т.пл. 121°С„ Спектр протонного ЯМР соответствует структуре желаемого продукта.

Пример 10. 5-(2,5-Дихлорфе- 0 нил)-5Н-индено D,2-d пиримидин, т.пл. ..

Рассчитано, %: С 65,20; Н 3,22| N 8,94.

с,7Н,оСин.

5 Найде.чо, %: С 65,31; Н 3,22: N 9,07.

Пример 11. 5-(3,4-Дих.аорфе- нил)-5Н-индено 1,2-d пиримидин. :ьгход 42%, т.пл.

0 Рассчитано,%: С 65,20; Н 3,22; N 8,94, ,

C,,H,Cl2N

Найдено,%: С 65,29; Н 3,25; N 8,66.

5Пример 12. 5-(4-Хлорфенил)7-метокси-5Н-индено 1,2-d пиpимидин, выход 58%, т.пл. .

Рассчитано,%: С 70,02; Н 4,24;

N 9,07.

C,sH,,ClN40.

Найдено, %: С 69,85; Н 4,50;

N 8,84.

Пример 13. 5-(4-Фторфенил)-7- s метокси-5Н-индено l ,2-d пиримидин,

выход 74%.

Рассчитано, %: С 73,96; Н 4,48; N 9,38.

Найдено, % N 9,51.

С 73,70; Н 4,44;

.14701856

жащие 0,1 мкМол 4-андростен-З,17-дио- на , 100000 dpm 1 ,2/ H/ aндpocтeндиo- нa, микросомы и систему генерировани NAD PH. Концентраци испытываемых ингибиторов составл ла от 5 до 10000 нМол. В данном испытании ароматизаци андростендиона приводит в результате к образованию , 10 который вьщел ют путем экстракции образцов хлороформом и обработки водной фазы древесным углем дл удалени свободного стероида. Подсчет осуществл лс с помощью сцинтилл ционного

Пример 14. 5-(2-Фторфенил)-

5.Н-инденоГ1,2-с1 пиримидин, выход 67%,J5 спектрометра, процент ингибировани

, « , «г- . i/Nr«i TT T Toiuf П-ПЯПМР.НИЯ ПйННЫХ

т.пл. 124-125 С.

Рассчитано,%: С 77,83; Н 4,23; N 10,68.

С „ Н „ FN 2..

Найдено,%: С 77,95; Н 4,32; N 10,82.

Пример 15. 5-(4-Фторфенил)- 5Н-индено 1,2-d пиримидин, выход 87%, т.пл. 128 С. Спектр протонного ЯМР соответствует структуре желаемого продукта.

П р и м е р 16. 5-(3-Хлорфенил)- 8-метокси-ЗН-индено 1,2-d пиримидин, выход 2,6%, т.пл. 147°С.

Рассчитано, %: С 70,02; Н 4,24; N 9,07.

.

Найдено,%: С 69,74; Н 3,95; N 8,85.

Проведены биологические испытани производных инденопиримидинов, полученных описываемым способом.

Соединени , отвечакщие насто щему изобретению, используютс дл предупреждени или дл лечени завис щих от зкстрогена заболеваний, включающих рак молочной железы, млекопитающих животных, благодар их способности ингибировать ферментную арома- тозу. Было показано, что данные соединени имеют значительно меньщую веро тность индуцировани увеличени печеночнйх микросомных ферментов, таких как цитохром Р-450. Способность

определ ют путем сравнени данных результатов с образцами, инкубируемыми без ингибитора. Силу действи оп- . редел ют исход из концентрации инги- 20 битора (нМол), необходимой дл 50%-ного ингибировани ферментной активности (ЕСуд), когда концентраци субстрата (андростендиона) составл ла О,1 мкМол.

25 Ниже представлены значени ЕС о некоторых соединений формулы .(I). |(ингибирование ароматазы, определ еКонцентраци соединени (нМол)-неингибировать ароматазу была продемон- обходима дл 50%-ного ингибировани

стрирована путем использовани модификации выделенной ичниковой микросомы крысы согласно методу Броди. В данной испытательной системе ичниковые миюросомы получены от крыс, подвергнутых обработке гонадостропн- ном сыворотки беременной конематки. Подвергаемые испытанию соединени ввод т в реакционные ампулы, содерактивности ароматазы, когда концентраци субстрата составл ет 0,1 мкМол.

Благодар способности соединений, отвечающих предлагаемому способу, ин- 55 гибировать ферментную ароматазу они способны ингибировать синтез экстро- гентов в организме мпекопитакщих животных , и ввиду этого эти соединени наход т полезное применение дл леспектрометра , процент ингибировани

i/Nr«i TT T Toiuf П-ПЯПМР.НИЯ ПйННЫХ

определ ют путем сравнени данных результатов с образцами, инкубируемыми без ингибитора. Силу действи оп- редел ют исход из концентрации инги- битора (нМол), необходимой дл 50%-ного ингибировани ферментной активности (ЕСуд), когда концентраци субстрата (андростендиона) составл ла О,1 мкМол.

Ниже представлены значени ЕС о некоторых соединений формулы .(I). |(ингибирование ароматазы, определ еКонцентраци соединени (нМол)-необходима дл 50%-ного ингибировани

активности ароматазы, когда концентраци субстрата составл ет 0,1 мкМол.

Благодар способности соединений, отвечающих предлагаемому способу, ин- гибировать ферментную ароматазу они способны ингибировать синтез экстро- гентов в организме мпекопитакщих животных , и ввиду этого эти соединени наход т полезное применение дл лечени завис щих от экстрогена заболеваний , таких как рак молочной железы

Активность данных соединений в услови х ин виво продемонстрирована на нижеследующих испытательных системах .

Ингибирование синтеза зкстрогена у крыс.

Несозревших самок крыс Вистар I(весом 45-55 г) раздел ют на контроль ные и испытываемые группы, по 2-8 кры- ;сы в каждой группе. Испытываемые сое- :динени ввод т в течение семи дней Iежедневно в кукурузном масле, ввод Осуществл ют с помощью желудочного ;зонда через нос. Контрольные живот- 1Йые получают кукурузное масло, не со- I держащее испытываемого соединени . I Начина с четвертого дн испытани всех животных подвергают обработке испытываемым соединением и в половину {контрольных животных ввод т путем подкожной инъекции 1,0 мг тестостерон пропионата в кукурузном масле. В орга низМ остальных контрольных животных ввод т лишь эквивалентный объем Iкукурузного масла. На -седьмой день Iиспытани в организм тех крыс, кото- |рых подвергают обработке тестостерон- гЬропионатом, ввод т путем подкожной Гинъекции 100 мк Ci (Н/ -тестостерона Iв 50 мкл смеси солевой раствор - эта- нол в соотношении 3:1.

Спуст два часа животных умерщвл - путем обезглавливани . Извлекают |матку, очищают .от посторонней соеди- |Нительной ткани и взвешивают. Под-.... |Вергнутые обработке кукурузным маслом |животные имеют небольшой вес матки и про вл ют себ как нестимулированные или отрицательные контрольные животные . В контрольной группе живот- , ных, подвергнутых обработке тесто- стеронпропионатом, экстрогены, обра- зующиес за счет ароматизации, стимулируют матку, что приводит в результате к увеличению ее веса. Соединени , ингибирукщие ароматизацию, привод т в результате к значительно более низкому, весу матки, чем у группы контрольных крыс, подвергнутых обработке тестостероном.

Яичники крыс, подвергнутых обра- . ботке / {{/-тестостероном, извлекают, очищают от посторонней ткани и гомо- генизируют в 2,5 мл 1,0 м1 1ол буферного раствора фосфата к.али содержащего 3,0 мМол MgCl 6HjO, 320 мМол

д s 0 5 о

s

0

сахарозы и 0,25 % тритона Х-100 (полиэтиле нгликоль-п ар а-изооктилфенил о-, вый простой эфир. Ром и Хаас) при величине рН 6,5. Яичниковые стероиды экстрагируют 1,5 мп смеси толуол/ /этанол в соотношении 9:1, к которой добавл ют 25-100 мкг (каждого) наме- ченногр экстрадиола, эстриола и эст- рона и примерно 1000 dpm/ эстра- диола. Образцы подвергают вихревому перемешиванию,, центрифугируют со скоростью 500 об/мин в течение 10 мин, а органическую фазу перенос т в коническую ампулу. Остаточный продукт подвергают дополнительно двум экстракци м аналогичным образом. Объединенные органические экстракты выпаривают дл последующей тонкослойной хроматографии.

Яичниковые белки осаждают путем добавлени 5,0 мл этанола в остальную водную фазу. После инкубировани в течение ночи при температуре образцы центрифугируют со скоростью 1500 об/1-шн в течение 1.0 мин.. Поверхностный слой удал ют и твердый оса док раствор ют в 0,3 нормальном гидрате окиси кал:и .

Определение белка осуществл ют согласно методу Брэдфорда, , Органический остаток от каждой /указанной экстракции снова раствор ют в смеси дихлорметан/метанол в соотношении , 9: 1 . Раствор каждого образца подвергают разделению на сили. кагелевых пластинах методом тонко-, слойной хроматографии с использова- нием флюоресцентного индикатора. Пластинки про вл ют первый раз смесью дихлорметан/этилацетат/метанол/уксусна кислота в Соотношении 160:38: :1,5:0 5 5 в области в пределах 3 см. сверху-пластинки. После сушки воздухом пластинки про вл ют второй раз смесью дихлорметан/метанол/гидрат окиси аммони в соотношении 1.30s 19; 1,, Пластинки высушивают воздухо.ч к наблюдают в пол ризованном з льтрафио- летовом свете 254 нм.

Просматриваемые визуально п тна отмечают и на пластинки нанос т путем распьшени примулин (0,001% в смеси ацетон вода в соотношении 4:1), что позвол ет идентифицировать дополнительные стероиды в ультрафиолетовом свете 365 нм. П тна соскребают с пластины с помощью пипетки Пастера, заполненной стекл нной ватой, уста

новленной на вакуумной линии. Стерон ды элюируют непосредственно в сцин- тилл ционные ампулы путем ввода 0,2 мл дихпорметана с последукидими двум промывками каждый раз по 2, 2,0 мл метанола. Органический растворитель выпаривают, и в сцинтилл цион |ные ампулы ввод т 10,0 мл сцинтип- л ционной жидкости. Образцы аналиэи- руют методом жидкостной сцинтилл ци онной спектрометрии и внос т поправки на основе восстановлени С-сте1 и- ода..

В табл. 1 приведены данные веса матки, выраженные как соответствующие веса матки обработанных лекарством (Д.Т)., нестимулированных, получивших кукурузное масло, контрольных (ис), и стимулированных, получив ших кукурузное масло, контрольных (SC) животных, которые рассчитаны по формуле: % 100 (DT - UC)/(SC- ис). Данные экстрогенов выражены в процентах, определ емых дл обрабо- танных тестостероном контрольных животных.

Ингибирование опухоли молочной железы , вызванной диметилбензантраценом (ДМБА).

I Индуцируют опухоль молочной железы у самок крыс Spraque Dawley 50-60- дневного возраста путем ввода через, зонд, вставленный в нос, 20 мг 7,12- диметилбенз(а) антрацена (ДМБА). Примерно через шесть недель после ввода ДМБА провод т пальпацию молочных же- лез с недельными интервалами дл обiнаружени по влени опухолей. После по влени одной или нескольких опухо- лей, которце удалось измерить, животных отбирают на экспериментирование. Была сделана попытка равномерно распределить животных в обрабатываемых и контрольных группах по размеру опу- холей, так что не начинают проводить эксперименты ни с одной из групп, у которой средний размер опухоли значи- тельно бы превышал средний размер другой какой-либо группы. Кажда i контрольна и испытываема группа включала по 5-8 крыс. Каждое испытываемое соединение ввод т в кукурузном масле раз в день. Каждый эксперимент включает группу контрольных крыс7 имекщих опухоли, в организм которых Ввод т контрольное масло, как носитель , через зонд, вставленный в нос. Опухоли измер ют в начале эксперимен

с ю

ff 20 25

30

лп j

35

50

5

тов, и обычно их площадь составл ет примерно 15-100 мм. Площадь каждой опухоли рассчитывают, умножа самый короткий и самый длинный диаметры опухоли. Обработку животных и измерение опухолей продолжают в течение 4-6 недель, и определ ют конечную площадь опухолей. Изменение средней площади опухоли измер ют при вводе каждого соединени (и у контрольных животных) при каждой дозе.

Анализируют среднее изйе ение опухоли, иепользу t-испытание Дан . нетта (Dunnett st-test).

Результаты зтих испытаний приведены в табл. 2.

На примере 8-хлор-5-(4-хлординнл)- 5Н-индено 1,2-d1 пиримидина показано, что в дозе 50 мг/кг соединени по изобретению не вызьгаают в течение трех недель каких-либо признаков токсичности . Так как така концентраци в несколько раз больше концентрации при которой соединени по изобретению не эффективны дл уменьшени размера опухоли, соединени по изобретению имеют большую границу безопасности между эффективной дозой против рака и самой низкой токсичной дозой. Таким образом производные инденопирим мидинов, полученные в услови х описываемого способа, могут быть отнесены к категории малотоксичных.

Ниже приведены примеры рецептур. Пример 1. Приготавливают . твердые желатиновые капсулы, использу нижеследующие ингредиенты, мг/на капсулу:

8-Хлор-5-(4-хлорфенил)- 5Н-индено- 1,2-d пиримидин250 Высушенный крахмал 200 Стеарат магни 10 Всего 460 Указанные ингредиенты смешивают и ввод т в твердые желатиновые капсулы в количестве 460 мг.

Пример 2. Капсулы, кажда содержаща по 20 мг медикамента, приготавливают следующим образом, мг/на капсулу:

8-ФТОР-5- 4-(трифторметил )фенилЗ-5Н-индено

fl ,2-ё пиримидин20

Крахмал89

Микрокристалллическа

целлюлоза89

Стеарат магни 2

Всего200

Активный ингредиент, целлюлозу, крахмал и стеарат магни перемешива- ют пропускают через стандартное аме риЛанское сито 45 меш (0,35 мм) и ввод т в твердые желатиновые капсулы в количестве 200 мг. jn р и м е р 3. Капсулы, ка.жда сс ;ср™ал;аг1 100 мг активного ингреди- eHi a, приготавливают следующим об- , мг/на капсулу;

; 5-Фенил-5И-индено 1 ,2-d пиримидин100

;Полиоксиэтиленсорбитан- ;моноолеат, мкг50

; Порошок крахмала250

Указанные ингредиенты тщательно пе)ремешива.ют и смесь ввод т в твер- дьф желатиновые капсулы,.

При м- в р 4. Таблетки, кажда с Ь одержанием 10 мг активного ингре- , приготавливают следзтощйм об- раЬом, мг/на таблетку;

I 8 -Хлор-5-(4-хлорфенил) ; 5Н-индено D,2-ё пиримидин- { 5-ол 10

Крахмал ,45

Микрокристаллическа целлюлоза35

Поливинилпирролидон (в виде 10%-ного водного )4

Натрийкарбоксиметилкрахмал 4,5 Стеарат магни 0,5

Тальк1

Всего-100

Активный ингредиент 5 крахмал и ... це1плюлозу пропускают через стандартное американское сито 45 меш (0,35 мм и тщательно перемешивают. -Раствор поливинилпирролидона перемешивают с образующимис порошками, которые затем пропускают через сита (стандартное американское) 45 меш (0,35 мм Об разующиес гранулы высушивают при 50 -60 С и пропускают через стандарт- HQie американское сито 18 меш (1,00 мм

атём натрийкарбоксиметилкрахмал, Iсгеарат маг-ни .и тальк, пропущенные

американское сито № 60 меш .(0,25 мм), ввод т в гранулы., которые по1сле перемешивани прессуют и табле тирующей машине с образованием таблеток , весом кажд.а 100 мг.

П р и м е р 5. Приготавливают ре- це|птуру таблеток, использу указан- нМе ниже ингредиенты, мг/на таблетку

(4-Фторфенил)-5Н- индено-- 1,2- пиримидин-5- . илДацетамид250

Микрокристаллическа целлюлоза400

Плавленна двуокись кремни 10

Стеаринова кислота . 5 Всего665

Данные компоненты перемешивают и прессуют в форме таблеток весом кажда 665 мг.

П р и м е р 6. Свечи, содержащие кажда по 25 мг активного ингредиента , -приготавливают следующим образом мг/на свечу: . , 5,8-Дифтор-5-(2-хлор- 4-фторфенил)-5Н-индено ,2-d пиридин25

Глидериды насыщенных жирных кислот до 2000 Активный ингредиент пропускают через стандартное американское сито 60 меш (0,25 мм) и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных, исполь зу дл этого минимально необходимое количество тепла. Затем смесь вливают в форму дл свечи, обеспечивающую номинальную массу свечи 2 г, и охлаждают ,

Пример. Суспензии, содержащие (кажда ).по 5 мг медикамента на 5 миллилитровую дозу, приготавливают следующим образом (на 5 мл суспензии ) :

5-(4-Трифторметил- фенил)-8-(трифторметил 5К-индено 1, пиримидин , мг

Натрийкарбоксиметил-. целлюлоза, мг Сироп, мл Раствор бензойной кислоты, мл

Ароматизирующее средство Желаемое

колкче-

Окрашивающее средство

ство

Желаемое количество До 5

Очищенна вода, мп

Данный медикамент пропускают че« рез американское стандартное сито 45 меш (0,35 мм) и смешивают с нат- рийкарбоксиметилцеллюлозой и сиропом до образовани однородной пастообразной массы.

Раствор бензойной кислоты, арома- тиэирунлдее средство и окрашивающее средство разбавл ют некоторым количеством воды и ввод т с перемешива- .нием в эту массу. Затем добавл ют воду в количестве, достаточном дл получени необходимого объема.

П р ме р 8. Приготавливают - раствор аэрозол , содержащий следующие компоненты, мас.%:

5-(4-Хлорфенил)-8-ме- X токси-5Н-индено 1,2-4

пиримидин-5-ол о 25 Этанол29 75

Растворитель 22 (хлордифторметан) 70 Активное соединение смешивают с этанолом, и смесь ввод т в порцию растворител , охлаждают до температу ры -30 С и перенос т в наполн ющее устройство. Затем в емкость из нержа веющей стали ввод т необходимое количество этого препарата и дополнительно развод т остальной порцией раство рител .. К емкости подсоедин ют клапанное устройство.

Проведенные испытани показали, что производные инденопирамидина, полученные в услови х описываемого способа, малотоксичны, значительно активнее тормоз т новообразовани молочнЫх железах, чем аминоглютет- мид (2-12 раз), значите льно уменьают размер новообразований в дозе

-.2

1470185

14

10-30 мг/кг, в то врем как аминоглю- тетимид в дозе 90 мг/кг незначительно уменьшает размер новообразований.

Claims

Формулаизобретени

, с

Способ получени производных ин- денопиримидинов общей формулы II

- 1

1

где R водород, хлор, фтор, метокси

или трифторметил;

20 ( - водород, хлор, фтор или трифторметил;

R - водород.или хлор, отличающийс тем, что

ег.,о6-дифенил-5-пиримидинметанол общей формулы

г он /л

kr-s:/ I

25

30

к

где k,R и Rj имеют указанные зна- 35 чени , подвергают дегидратации.

Таблица 1

мг/кг X 7 дней; ; (DT - UC)/(SC-UC); + Значительно отлично от контрольного, ,Q5,

мг/кг, вводима ежедневно через зонД, вставленный

в нос; + Статистически от контрольного, ,05,

Таблица2