SU1398774A3 - Способ получени @ , @ -бис-(4-хлорфенил)-4/5/-имидазолметанола - Google Patents

Abstract

Изобретение качаетс  замещенных имидазола, в частности получени  oi , об-бис- (4-хлорфенш1)-4 (5)-имидазолметансла , обладающего способностью ин- гибировать фермент ароматазу, что может быть использовано дл  лечени  и профилактики эстроген-зависимых заболеваний , в особенности рака молочной лселезы у млекопитающих. Цель - создание нового вещества указанного класса с нехарактерной дл  него активностью. Синтез ведут из соединений формул I и II: N CH-NH-CH C-C(0)OZ (I) С1

Description

со со

00

J

СП

Изобретение относитс  к способу получени  новых производных имидазола ( Обладающих способностью ингибировать фермент ароматазу, которые могут быть использованы дл  лечени  и профилак- Гики экстроген-эанисимых заболеваний, В особенности рака молочной железы у млекопитающих.

Цель изобретени  - синтез новых ПРОИЗВОДНЫХ имидазола, обладающих ак- |гивностью в качестве ингибиторов аро- 1| атазы, свойство, которое не про вл - ta соединени  аналогичного строени .

Пример. Д(5)-/бис(4-фтор- фенил)ме тил/-1Н-имида зол.

Прибавл ют 9,2 г п-щрида натри  в биде 57%-ной дисперсии в масле к раст ору 22 г имидазола в 200 мл диметил- ||юрмамида при перемешивании. После Окончани  реакции, что видно по прекращению вспенивани , при перемешивании прибавл ют 22 г 4,4-дифтордифе- нилметилхлорида. Смесь два часа пере- р ешивают при комнатной температуре. 1и затем 1,5 ч нагревают на паровой бане. Смесь выпивают в смесь льда с водой, прибавл ют эфир и раздел ют слои. Водный слой промывают эфиром, объединенные эфирные экстракты про- мывают водой, сушат над сульфатом магни , фильтруют и выпаривают. Остаток ;хроматографируют на силикагеле, элюи- ;ру  последовательно 10% этилацетата IB толуоле, 20% этилацетата в толуоле и смесью 1:1 этилацетата и толуола (по 2 л каждой смеси), чтобы получить ; 1,2 г 2-/6ИС-(4-фторфанил)метил/ими- дазола (,44, силикагелевые пластины дл  тех, элюирование смесью 1:1 этилацетата и толуола), 14,5 г 1-/бис ( 4-фторфенил)мвтил/имидазола (Rf «. 0,30) и 1,99 г целевого 4(5)-/бис- (4-фторфенил)мети.п/имидазола (Rf 0,15). Структуры были подтверждены , ЯМР и ИК-спектроскопией.

П р и м е р 2, 4 (з)-/(4-хлорфенил) (4-фторфенил)метил/имидазола.

Работают по методике примера 1, целевое соединение получают из имида- зола и 4-хлорфенил-4-фторфенилметил- хлорида с выходом 3,1%,

И р и м е р 3.ci ,а;,-Бис-(4-хлорфенил )-4 (5) -имидазолметанол.

Готов т реактив Гринь ра из 4,7 г магниевых опилок, каталитического количества (четыре капли) 1,2 дибром- этана в 2 мл диэтилового эфира и

с

5

0 5 О c 0 5

О

5

25,0 г 4-бромхлорбензола в 100 мл тет- рагидрофурана. После примерно двух часов перемешивани  прибавл ют 5,0 г метил-4-имидазолкарбоксилата в виде раствора в 50 мл тетрагидрофурана. Смесь кип т т с обратным холодильником в течение часа. Отгон ют тетра- гидрофуран и оставшуюс  смесь выливают в лед ной раствор хлористого аммони  и экстрагируют этилацетатом. После выпаривани  экстракта получают желтое масло, которое очищают хроматографией на силикагеле, элюиру  с градиентом этилацетата 15%-ный метанол в этилацетате. Соответствующие фракции собирают, объедин ют, вьшаривают и кристаллизуют из этилового эфир - гексана, получают 6,47 г целевого продукта. Перекристаллизовывают 1 г материала из бензола, получают 540 мг продукта,с т.пл. 110-113 С. Анализ дл  С, Н С1,, j Вычислено: С 60,41; Н 3,79; N 8,78; С1 22,21.

Найдено,%: С 59,99; Н 4,03; N 8,54; С1 22,29,

Соединени  изобретени   вл ютс  полезными дл  профилактики и лечени  эстроген-зависимых заболеваний, включа  рак молочной железы у млекопитающих , благодар  их способности

ингибировать ароматазу была показана при применении модификации метода Броди, выделенных микросом  ичников крыс. В этой тестовой системе микросомы  ичников получали из крыс, обработанных гонадотропиновой сьгоорот- кой беременных кобыл. Испытуемые соединени  прибавл ли в реакционные колбы , содержащие О,1 мкМ 4-андростен- 3,17-диона, 100000 дпм 1,2(Н)-андро- стендиода, микросомы и NADPH генерирующую систему. Концентраци  испытуемых ингибиторов находилась в интервале между 0,005 и ЮмкМ.. В этом опыте ароматизаци  андростендиона приводит в результате к получению ( Н)-Н20, которую вьздел ют экстракцией образцов хлороформом и обработкой водной фазы активированным углем дл  удалени  свободного стероида. Образцы обсчитывают на жидкостном сцинтилл ционном спектрометре и определ ют процент ин- гибировани  по сравнению результатов с контрольными образцами, инкубированными без ингибитора. Мощность определ ют , основьша сь на концентра

ции ингибитора в мкМ, требующейс  дл  получени  50% ингибировани  ферментов активности (), когда концентраци  субстрата (андростендиона) составл ет 0,1 мкМ. Величины ЕС дл  некоторых соединений приведенной выше формулы сведены в табл.1.

Благодар  своей способности инги- бировать фермент ароматаэу соедине- ки  предлагаемого изобретени  способны ингибировать синтез эстрогенов у млекопитающих, что делает эти соединени  полезными при лечении эстроген- зависимых заболеваний, таких как рак молочной железы. Эта активность была показана in vivo на следующей тесто вой системе,

Ингибирование синтеза эстрогена у крыс.

Неполовозрелые самки крыс Вистар (45-55 г) были разделены на контрольную и тестовые группы по 4-5 животных в каждой. Испытуемые соединени  вводили семь дней ежедневно путем ис- кусственного кормлени  в кукурузном масле. Контрольные животные получали кукурузное масло без испытуемого соединени . Начина  с четвертого дн  испытаний всем животным, обработанным испытуемым соединением, и половине контроль ных животных делают подкожную инъекцию ,О мг тестостерон пропиона- та в кукурузном масле. Оставшиес  г контрольные животные получают только эквивалентный объем.кукурузного масла На седьмой день испытаний крысы, обработанные тестостерон пропионатом, получают подкожно 100 мкКю (Н)-тестостерона в 50 мкл смеси 3:1 (объем/ объем) солевого раствора и этанола.

Через два часа животных умерщвл ют отрезанием головы. Изолируют матку обрезают чуждую соединительную ткань и взвешивают. Как суммировано в табл.2 у животных, обработанных кукурузным маслом, вес матки меньше, вни представл ют собой нестимулированный или негативный контроль. У контроль- нь1Х животных, обработанных тестостерон пропионатом, эстрогены, продуцированные ароматизацией, стимулируют матку, привод  в результате к увеличению ее веса. Соединени , которые ингибируют прохождение ароматизации, заметно снижают вес матки по сравнению с контролем, обработанным тесто- стеронОм.

Яичники крыс, обработанных ( Н)- тестостероном, вырезают, очищают от чужеродной ткани и гомогенизируют Р 2,5 мл 1,0 мМ калийфосфатного буфера, содержащего 3,0 мМ , 320мМ сахарозы и 0,25% Тритона Х-100 (п- изооктилфениловый эфир полиэтиленгли- кол . Ром энд Хаас) при рН 6,5. Экстрагируют стероиды  ичников I,5 мл смеси 9:1 (объем/объем) толуола и этанола , к которой было прибавлено 250

ю 5

0

00 мкг каждого чз немеченных экстра- диола-, эстриола и эстерона, и прибли15 зительно 1000 дпм ( )-эстрадиола. Образцы подвергают вихревому перемешиванию , центрифугируют при 500 g в течение 10 мин и органическую фазу перенос т в коническую колбу. Провод т две дополнительных экстракции по той же методике. Собранные органические экстракты вьтаривают дл  последующей тонкослойной хроматографии.

Осаждают белки  ичников добавлением 5,0 мл этанола к оставшейс  водной фазе. После инкубировани  в течение ночи при 4°С образцы центрифугируют при 1500 g в течение 10 мин. Надосадочный слой отбрасывают и шарик осадка раствор ют в 0,3 н гидрок- сидс кали . Определ ют белок по методике Бретфорда.

Повторно раствор ют органический Остаток из каждой из проведенных выще

р; экстракций в смеси 9:1 (объем/объем) дихлорметана и метанола. Раствор каждого образца нанос т на отдельную си- лик агелевую пластину дл  тонкослойной хроматографии, котора  содержит флюо0 ресцирующий .индикатор. Пластины про вл ют сначала смесью 160:38:1,5:0,5 (объем/объем/объем/объем) дихлорметан- этилацетат(-метанол)уксусна  кислота на рассто нии 3 см от верхней части

5 пластины. После суппси на воздухе пластины про вл ют вторично в смеси 180:19:1 (объем/объем/объем) дихлор- метан(метанол)гидроксид аммони . Пластину сушат на воздухе и исследуют

Q при 254 нм в УФ-свете.

Отмечают видимые п тна и пластины обрызгивают примулином (0,001% в смеси 4: объем/объем ацетон-вода) по методике Райта, котора  позвол ет вден5 тифицировать дополнительные стероиды

при 365 нм УФ-света. 1

П тна соскабливают с пластины, использу  пипетку Пастера, заполнен

w стекловатой, присоединенную к вакуумной линии. Стероиды элюируют непосредственно в сцинтилл цнонные колбочки добавлением 0,2 мл дихлорметана после двух промывок, кажда  по мл метанола. Выпаривают органический растворитель и в колбочки добавл ют 10,0 мл сцинтилл ционной ЖИДКОСТИ (Бексан-Риди Сола NA), Об- рйзды анализируют с помощью жидкост- н0й сцинтилл ционной спектрометриио КЬррекдию делают на основе извлече- ()--стероида о Концентрации сте- рЬидов выражают как фемтомоли на мил- литрами белка.

Соединени .предлагаемого изобретени  могут быть введены любым из многочисленных путей, включа  ораль- НЬ1Й, подкожный, внутримышечный, внут- ривенный, через кожу и ректальный, соединени  обычно примен ют в виде (}:|армацевтических композиций. Такие к|омпозиции готов т по хорошо известным методикам и они состо т из пример но 1-95 мас.%, по крайней мере, одно- активного соединени  указанной вы- Ше формулы (I).

Такие фармацевтические композиции содержат в качестве активного ингредиента соединение указанной выше формулы и фармацевтически приемлемый носитель . При изготовлении композиций Активный ингредиент должен быть хо- смешанным с носителем, или разбавл етс  носителем, - или же заключен внутри носител , который может быть 4 виде капсул, мешочков, бумаги или Другого контейнера, Когда носитель служит в качестве разбавител , он может быть твердым, полутвердым или Жидким материалом, который работает как носитель, экципиент или среда дл  активного ингредиента. Так, композиции могут быть в виде таблеток, пилюль , порошков, лосьонов, саше, облаток , эликсиров, эмульсий, растворов, сиропов, суспензий, аэрозолей (как и твердой, так и в жи;чкой среде), ма- шей, содержащих по крайней мере 10 мас.% активного соединени , м гких или твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов дл  инъекций и стерильных расфасованных порошков.

Некоторыми примерами подход щих носителей, экципиентов и разбавителей  вл ютс  лактоза, декстроза, сахароза , сорбит, маннит, крахмалы, камедь

фосфат кальци , альгинаты, силикат кальци , микрокристаллическа  целлюлоза , поливинилпирролидон, целлюлоза, трагант, желатин, сироп, метилцеллю- лоза, мети- и пропилоксибензоаты, тальк, стеарат магни , вода и минеральное масло о Композиции могут дополнительно содержать смазки, смачивающие агенты, эмульгаторы и суспензирующие агенты, консерванты, подсла- щиватели или ароматизирующие агенты. Композиции могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить быстрое поддерживающее или замедленное выделение активного ингредиента после введени  пациенту при использовании процедур, известных на данном уровне техники.

Дл  орального введени  соединени  предлагаемого изобретени  могут быть смешаны с носител ми и разбавител ми, сформованными в таблетки или заключенными в желатиновые капсулы. Альтернативно смеси могут быть растворены в жидкост х, таких как 10%-ный вод- ньй раствор глюкозы, изотонический солевой раствор, стерильна  вода или т.п., и введены внутривенно или инъекцией . При желании такие растворы могут быть лиофилизированы и хранитьс  в стерильной ампуле, чтобы их можно бьшо легко перевести при добавлении стерильной воды в раствор дл  внутри-

мышечной инъекции.

Соединени  предпочтительно формуют в виде единичных форм дозы, кажда  доза содержит примерно от 1 до 500 мг обычно 5-300 мг активного ингредиента. Термин единична  форма

5

дозы относитс  к физически дискретным единицам, пригодным дл  однородной дозировки люд м и другим млеко питающим. Кажда  единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное дл  получени  же-паемого терапевтического эффекта, вместе с требуемым фармацевтическим носителем.

50

Активные соединени   вл ютс  эффективными в широком интервале доз. Например , дневные дозировки обычно на- ход тс  примерно в интервале 0,05 - gg 300 мг/кг веса тела. При лечении взрослых людей предпочтительным  вл етс  примерно интервал 0,1 - 50 кг/кг в виде единичной дозы или отдельных доз. Однако должно быть пон тно, что

количество действительно вводимого соединени  должно определ тьс  врачом в зависимости от релевантных условий,, включа  состо ние пациента, выбор с вводимого соединени , возраст, вес и реакцию индивидуального пациента, т жесть симптомов у пациентов и выбор пути введени , поэтому приведенные вьше интервалы ни в коей мере не огра 10 ничивают область изобретени .

Дл  более полной иллюстрации работы предлагаемого изобретени  привод тс  примеры рецептур. Примеры  вл - . ютс  иллюстративными и ни в коей ме- 15 ре не ограничивают область изобретени . В рецептурах примен ютс  любые из фармацевтических соединений указанной вьше формулы.

Полученные соединени  относ тс  к 20 категории малотоксичных.

Соединение примера 3 сравнивают с (оЬ,(-бис- (2-метилфенил) -1 Н-имидазол- 4-метанол)по методике испытаний in

vitro,ЕС so дл  соединени  предлагае- 25 мого изобретени  составл ет 0,028 MKMj а дл  сравнительного соединени  - 1,075 мкМ. Это доказьшает преимущество в отношении биологической активности предлагаемых соединений перед 30 известными.

Концентраци  соединени  в мкМ, требующа с  дл  достижени  50%-ного ингибировани  активности аромата- зы при концентрации субстрата О, 1 мкМ.

Вли ние соединени  формулы (I) на уровень стероидов и вес матки приведено в та бл.2.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  ы, ,о.-бис-(4-хлор- фенил)-4 (5)-имвдазолметанола формулы

   ОН

   о т

   щ и и с   тем, что

   соединени  формулы

   --TrCOOZ

   J 1T-J

   н

   где Z - С,- С4-алкил; подвергают взаимодействию Гринь ра формулы

   где X - хлор или бром;

   с вьщелением целевого продукта,

   Т а б л и ц а 1

   f ci (4-Хлор- ф.енил) -4 (5) имидазолметанол

   Контроль, обработанный тестостероном

   Контроль - кукурузное масло

   мг/кг п.о. искусственное кормление. Фетмомоли на мшшиграмм белка.

   Существенное различие по сравнению с контролем, обработанным тестостероном , рН 0,05.

   Составитель Г.Жукова Редактор Г.Гербер Техред Л.Кравчук корректор М.Шароши

   Заказ 2609/58

   Тираж 370

   ВНИИПИ Государственного комитета СССР

   по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб.,,д. 4/5

   Таблица 2

   217,8

   0,40

   0,07

   0,165

   93,0

   Подписное