SK74597A3 - Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons - Google Patents

Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons Download PDF

Info

Publication number
SK74597A3
SK74597A3 SK745-97A SK74597A SK74597A3 SK 74597 A3 SK74597 A3 SK 74597A3 SK 74597 A SK74597 A SK 74597A SK 74597 A3 SK74597 A3 SK 74597A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
nucleic acid
motoneurons
adenovirus
genome
interest
Prior art date
Application number
SK745-97A
Other languages
English (en)
Inventor
Francoise Finiels
Minerva Gimenez-Ribotta
Jacques Mallet
Alain Privat
Frederic Revah
Original Assignee
Rhone Poulenc Rorer Sa
Inst Nat Sante Rech Med
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone Poulenc Rorer Sa, Inst Nat Sante Rech Med filed Critical Rhone Poulenc Rorer Sa
Publication of SK74597A3 publication Critical patent/SK74597A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka oblasti génovej terapie. Obzvlášť sa vynález týka nového spôsobu liečenia patológií nervového systému prenosom génov do medulárnych motoneurónov s použitím adenovírusových vektorov.
Doterajší stav techniky
Génová terapia a použitie modifikovaných vírusov ako vektorov na neurodegeneratívne choroby predstavujú nové terapeutické, obzvlášť sľubné prístupy na liečenie neurodegeneratívnych chorôb. Z vírusov, ktoré boli na tento účel až doposiaľ použité, možno uviesť najmä adenovírusy (Le Gal La Šalie a kol., Science 259, 988-990), herpes vírus, adeno-pridružené vírusy a retrovírusy. Štúdie popísané v rámci doterajšieho stavu techniky ukazujú, že tieto vektory, a zvlášť adenovírusy, sú schopné infikovať s veľmi vysokou účinnosťou bunky centrálnej nervovej sústavy. Tieto výsledky takto umožňujú realizovať spôsob liečenia patológií centrálnej nervovej sústavy priamou injekciou na úrovni centrálnej nervovej sústavy (zvlášť stereotaxií) rekombinantných adenovírusov obsahujúcich terapeutický gén.
Pokiaľ ide o miechu, umožňovala by génová terapia v rámci niektorých neurodegeneratívnych chorôb a úrazových stavov rovnako bojovať proti degenerácii motorických neurónov (motoneurónov) zavedením niektorých génov kódujúcich napríklad rastové faktory. Avšak tieto aplikácie sú až doteraz obmedzené neexistenciou jednoduchej metódy, umožňujúcej špecifický prenos génu na úrovni miechy. Vynález umožňuje riešiť tento problém.
Podstata vynálezu
Vynález v skutočnosti popisuje obzvlášť účinný spôsob selektívneho prenosu génov do miechy. Vynález je najmä odvodený od experimentálneho dôkazu o tom, že je možné špecificky preniesť gén na úrovni motoneurónov podaním na úrovni svalu adenovírusového vektora, v ktorom je inkorporovaný uvedený gén. V skutočnosti prihlasovateľ teraz preukázal, že adenovírusy sú obzvlášť výhodným spôsobom absorbované na úrovni neuromuskulámych spojov (motorické doštičky) a vedené až do bunkových teliesok motoneurónov (ventrálna rohovina miechy) retrográdnym transportom pozdĺž motoneuronálnych axónov. Intramuskulárne podanie adenovírusových vektorov podľa vynálezu takto tvorí nový, veľmi špecifický spôsob infekcie motoneurónov retrográdnym transportom, umožňujúci veľmi presne zacieliť medulámu oblasť, v ktorej má byť uskutočnený zákrok a v ktorej bol lokalizovaný úrazový stav alebo/a v ktorom bola lokalizovaná degenerácia.
Spôsob podľa vynálezu je obzvlášť výhodný vzhľadom k tomu, že umožňuje pri presnom sledovaní kartografie neuromuskulámych spojov infikovať špecifickým a unilaterálnym spôsobom motoneuróny rôznych funkčných medulámych oblastí. Aplikácia podľa vynálezu sa ukazuje byť o mnoho menej traumatizujúca než stereotaxická injekcia do medulámeho parenchýmu, ktorá by v každom prípade bola difúznejšia a nereštriktívna k neurónom motorického typu.
Prvý predmet vynálezu takto spočíva v použití rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do medulámych motoneurónov intramuskulámym podaním.
Ako už bolo uvedené vyššie, je spôsob podľa vynálezu obzvlášť výhodný vzhľadom k tomu, že umožňuje presne zacieliť motoneuróny každej funkčnej medulámej oblasti. Takto podľa miesta poruchy, ktorá má byť liečená, sa aplikácia uskutočňuje do svalu nesúceho nervovú väzbu s uvedeným miestom poruchy. V rámci vynálezu je teraz možné rozumnou voľbou rôznych injekcií špecificky a unilaterálne infikovať veľký počet medulámych motoneurónov rozdelených v rôznych úrovniach. V rámci výhodného uskutočnenia spôsobov podľa vynálezu umožňuje podanie do svalu horných končatín (bicepsy, tricepsy) prenos génov do motoneurónov vcervikálnej úrovni. Podanie do svalov hrudníka (pektorálne svaly) umožňuje prenos génov do motoneurónov v hrudnej oblasti, zatiaľčo podanie do svalov dolných končatín (svaly tvoriace súčasť svalov lýtka) umožňuje prenos génov do motoneurónov v bedemej a krížovej oblasti. Je samozrejmé, že aj ostatné svaly môžu byť použité na podanie na úrovni uvedených motoneurónov, pričom môžu byť zacielené (zamerané) aj ostané motoneuróny. K tomuto účelu je možné použiť presnú kartografiu neuromuskulámych spojov na stanovenie v závislosti na cielenej medulámej oblasti, ktorý zo svalov alebo ktoré zo svalov sú najvhodnejšie na podanie v každom jednotlivom prípade. Takéto kartografie sú odborníkovi v danom odbore k dispozícii (viď najmä Nicholopoulos a kol.,
J.Comp.Neurol. 217, 78-85, Peyronnard et Charon, Exp. Brain. Res. 50, 125-132).
V závislosti nä medulámej oblasti, ktorá sa ukáže byť vhodná na infikovanie môže byť takto vybraný jeden alebo niekoľko svalov, o ktorých je známe, že môžu byť inervované uvažovanou medulámou oblasťou.
Intramuskuláme podanie adenovírusu môže byť uskutočnené rôznymi spôsobmi.
V rámci prvého spôsobu uskutočnenia sa toto podanie praktikuje injekciou do niekoľkých bodov jedného a toho istého svalu tak, aby sa dosiahlo zainteresovania veľkého počtu motorických doštičiek. Tento spôsob uskutočnenia podania je obzvlášť účinný v prípadoch, kedy nemožno identifikovať bod vnorenia nervu do uvažovaného svalu. V prípade, že takéto miesto vnorenia nervu do svalu možno spoľahlivo identifikovať, potom sa podanie výhodne uskutočňuje jednou alebo niekoľkými injekciami na úrovni uvedeného bodu alebo v blízkosti uvedeného bodu. Pri tomto spôsobe realizácie podania je účinnosť prenosu najvyššia, lebo na úrovni neuromuskulámeho spoja sa absorbuje veľké množstvo podaného vektora.
Pri prvej výhodnej forme uskutočnenia vynálezu sa teda intramuskuláme podanie uskutočňuje injekciami do niekoľkých bodov jedného a toho istého svalu.
V rámci inej výhodnej formy uskutočnenia vynálezu sa intramuskuláme podanie uskutočňuje injekciou alebo injekciami na úrovni bodu vnorenia nervu do svalu alebo v blízkosti uvedeného bodu vnorenia nervu.
V rámci ďalšieho predmetu vynálezu sa vynález týka použitia rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do cervikálnych, medulámych motoneurónov podaním do svalu horných končatín (príklad: bicepsy, tricepsy).
V rámci ďalšieho predmetu vynálezu sa vynález týka použitia rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do hrudných medulárnych motoneurónov podaním do svalov hrudníka (príklad: pektorálne svaly).
V rámci ďalšieho predmetu vynálezu sa vynález týka použitia rekombinantného adenovirusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do bedrových alebo/a krížových medulárnych neurónov podaním do svalov dolných končatín (napríklad do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka).
Spôsob podľa vynálezu môže byť uskutočnený s použitím adenovírusov rôzneho pôvodu. V skutočnosti boli charakterizované rôzne sérotypy adenovírusov, ktorých štruktúra a vlastnosti sa trochu menia. Z týchto sérotypov sa v rámci vynálezu výhodne použijú ľudské adenovírusy typu 2 alebo 5 (Ad 2 alebo Ad 5) alebo adenovírusy živočíšneho pôvodu ( o tom viď francúzska patentová prihláška FR 9305954). Z adenovírusov živočíšneho pôvodu, ktoré sú použiteľné v rámci vynálezu, možno citovať adenovírusy psieho, hovädzieho, mačacieho (príklad: Mav1, Beard a .kol., Virology 75 (1990) 81), ovčieho, prasačieho, vtáčieho alebo aj opičieho (príklad: SAV) pôvodu. Výhodným adenovírusom živočíšneho pôvodu je psí adenovírus, obzvlášť výhodný adenovírus CAV2 (kmeň manhattan alebo A26/61 (ATCC VR-800) ako príklad).
V rámci výhodnej formy uskutočnenia vynálezu sa ako adenovírus použije adenovírus ľudského pôvodu. Podľa inej výhodnej formy uskutočnenia vynálezu sa ako adenovírus použije adenovírus živočíšneho pôvodu.
Genóm adenovirusu obsahuje najmä opakovanú inverznú sekvenciu (ITR) na každom konci, enkapsidačnú sekvenciu (Psi), skoré gény a neskoré gény. Základné skoré gény sú obsiahnuté v oblastiach E1, E2, E3 a E4. Z týchto génov sú gény obsiahnuté v oblasti E1 (najmä E1a a E1b) nevyhnutné na replikáciu vírusu. Napríklad oblasti E4 a L5 sa uplatňujú pri propagácii vírusu. Základné neskoré gény sú obsiahnuté v oblastiach L1 až L5. Genóm adenovirusu Ad5 bol v celom rozsahu sekvenovaný a je odborníkom prístupný (napríklad génová banka M73260). Rovnako tak boli sekvenované i časti alebo celok genómu adenovírusov rôznych sérotypov (Ad2,
Ad7, Ad 12, atď.). Adenovírusové vektrory použité v rámci realizácie vynálezu obsahujú sekvencie ITR, sekvenciu umožňujúcu enkapsiidáciu a zainteresovanú nukleovú kyselinu.
V rámci výhodnej formy uskutočnenia vynálezu. je genóm . použitých adenovírusov zbavený celej alebo časti oblasti E1. Oblasť E1 je totiž podstatná na replikáciu vírusu a jej inaktivácia vedie k tvorbe defektného vírusu, pokiaľ ide o jeho replikáciu, t.j. k tvorbe vírusu, ktorý je neschopný vlastnej replikácie v infikovaných bunkách. Uvedená oblasť E1 alebo akákoľvek iná uvažovaná vírusová oblasť môže byť inaktivovaná ľubovoľnou známou technikou a hlavne úplným vypustením, substitúciou, čiastočnou deléciou alebo adíciou jednej alebo niekoľkých báz do uvažovaného génu alebo do uvažovaných génov. Takéto modifikácie môžu byť uskutočnené in vitro (na izolovanej DNA) alebo in situ, napríklad s použitím techník génového inžinierstva, alebo tiež pôsobením mutagénnych činidiel. Výhodné je, keď je genóm adenovírusu zbavený časti oblasti E1 zodpovedajúcej zvyškom 454 až 3328 (fragment Pvull-Bglll) alebo 382 až 3446 (fragment Hinfll-Sau3A).
V rámci obzvlášť výhodnej formy uskutočnenia vynálezu je genóm použitého adenovírusu rovnako zbavený celej alebo časti oblasti E3 alebo/a E4. Prihlasovateľ teraz preukázal, že je možné konštruovať vektory nesúce tieto rôzne typy delécií. Takéto dodatočné delécie umožňujú zvýšiť bezpečnosť vektora a zväčšiť jeho kapacitu.
Zainteresovaná nukleová kyselina môže byť vložená na rôzne miesta genómu adenovírusu. Výhodne je táto nukleová kyselina vložená na úrovni oblastí E1, E3 alebo E4. Jednako len je zrejmé, že môžu byť použité aj iné miesta. Prístup k nukleotidovej sekvencií genómu umožňuje odborníkovi identifikovať alebo vytvoriť reštrikčné miesta použiteľné na uvedený účel.
Defektné rekombinantné adenovírusy podľa vynálezu môžu byť pripravené ľubovoľnou známou technikou (Levrero a kol., gene 101 (1991) 195, EP 185537, Graham, EMBO J. 3 (1984) 2917). Uvedené defektné adenovírusy môžu byť predovšetkým pripravené homologickou rekombináciou medzi adenovírusom a plazmidom nesúcim okrem iného sekvenciu zainteresovanej DNA. Táto homologická rekombinácia sa realizuje po ko-transfekcii uvedeného adenovírusu a plazmidu vo vhodnej bunkovej rade. Použitá bunková rada výhodne musí (i) být transformovateľná uvedenými prvkami a musí (ii) obsahovať sekvencie schopné komplementovať časť genómu defektného adenovírusu, výhodne v integrovanej forme za účelom vyvarovanie sa rekombinačných rizík. Ako príklad takejto bunkovej rady možno uviesť radu z obličiek ľudského embrya 293 (Graham a kol., J.Gen.Virol. 36 (1977) 59), ktorá predovšetkým obsahuje v integrovanej forme vo svojom genóme ľavú časť genómu adenovírusu Ad5 (12 %).
Prvá metóda spočíva v transfekcii (defektného) rekombinantného vírusu, pripraveného in vitro v kompetentnom bunkovom rade, t.j. nesúceho v polohe trans všetky funkcie, ktoré sú nevyhnuté na komplementovanie defektného vírusu. Tieto funkcie sú výhodne integrované v genóme bunky, čo redukuje rekombinačné riziká a udeľuje bunkovému radue zvýšenú stabilitu. V prípade adenovírusov, v ktorých je deficitná iba oblasť E1, je výhodne použitým bunkovým radom rad 293.
Druhá metóda spočíva v ko-transfekcii vo vhodnom bunkovom rade DNA defektného rekombinantného vírusu pripraveného in vitro a. DNA jedného alebo niekoľkých vírusov alebo plazmidov helper. Pri tejto metóde nie je nevyhnutné disponovať kompetentným bunkovým radom schopným komplementovať všetky defektné funkcie rekombinantného adenovírusu. Časť týchto funkcií je v skutočnosti komplementovaná vírusom alebo vírusmi helper. Tento vírus alebo vírusy helper sú samotné defektné.
Stratégie konštrukcie vektorov odvodených od adenovírusov boli rovnako opísané v patentových prihláškach FR93/05954 a FR93/08596.
Multiplikované adenovírusy sa potom izolujú a purifikujú klasickými technikami molekulárnej biológie, ako to bude ďalej ilustrované v príkladovej časti.
Na použitie týchto adenovírusov v rámci vynálezu sú adenovírusy výhodne združené s farmaceutický prijateľným nosičom alebo nosičmi za vzniku injikovateľnej formulácie. Môže sa jednať hlavne o soľné roztoky (fosforečnan sodný, hydrogénfosforečnan sodný, chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid vápenatý alebo chlorid horečnatý, atd. alebo zmesi takýchto solí) majúce sterilný izotonický charakter, alebo o suché kompozície, získané hlavne lyofilizáciou, ktoré po pridaní sterilizovanej vody alebo fyziologického roztoku umožňujú rekonštitúciu injikovateľných roztokov. Dávky použitého vírusu v rámci danej konkrétnej aplikácie sú závislé na rôznych faktoroch, hlavne na mieste (sval) podania, počte injekcií, géne, ktorý má byť exprimovaný alebo tiež na zvolenej dobe liečenia. Vo všeobecnosti sú rekombinantné adenovírusy podľa vynálezu formulované a podávané vo forme dávok obsahujúcich medzi 104 a 1014 pfu, výhodne medzi 106 a 1010 pfu. Jednotka pfu („plaque forming unit“) zodpovedá infekčnej potencii vírusového roztoku a je stanovená s použitím infekčie príslušnej bunkovej kultúry, pričom sa obyčajne po 15 dňoch stanoví počet kolónií infikovaných buniek. Techniky stanovenia titru virálneho roztoku sú v odbornej literatúre dostatočne dokumentované.
Spôsob podľa vynálezu je obzvlášť výhodný na liečenie medulárnych poranení alebo chorôb spôsobených degeneráciou motoneurónov. Medulárne traumy zodpovedajú hlavne sekciám na úrovni motoneurónov, ktoré ich zbavujú ich prívodných ciest z vrchných centier a spôsobujú ich degeneráciu. Prenos génov kódujúcich rastové faktory do motoneurónov v stave lézie retrográdnym transportom.podľa vynálezu teraz ponúka možnosť obmedziť alebo dokonca eliminovať takúto degeneráciu. V prípade neuropatie motoneurónov možno uviesť napríklad amyotrofnú laterálnu sklerózu, spinálne amyotrofie typu I (Werdning-Hoffmanova ochorenie), typu II alebo typu III (Kugelberg-Welanderove ochorenie) a bulbárne spinálne amyotrofie (ako napríklad Kennedyho ochorenie). Prenos génov kódujúcich rastové faktory alebo ďalšie známe molekuly určené na stimulovanie neurotrofného účinku na motoneuróny v stave degenerácie podľa vynálezu ponúkajú tiež nový smer liečenia tohto typu patológií. Účinnosť spôsobu podľa vynálezu môže byť predovšetkým manifestovaná na živočíšnych modeloch. Model čiastočnej alebo úplnej sekcie miechy, myš Wobbler (živočíšny model na štúdium amyotrofnej laterálnej sklerózy (Leestma J.E., Am.J.Pathol., 100, 821-824)); myš mnd („motoneurónová degenerácia“: živočíšny model na štúdium amyotrofnej laterálnej sklerózy (Messer a kol., 1992, Genomics, 18, 797-802) alebo myš pmm („progresívne motoneurónové neuropatie“: živočíšny model na štúdium motoneuronálnej degenerácie v priebehu jej rozvoja), ako to bude ďalej ilustrované v príkladovej časti. Inkorporácia, tolerancia a neškodnosť vo vzťahu k ľudským pacientom môžu byť testované na modeloch in vitro kultúr ľudských embryonálnych medulárnych neurónov.
V tomto ohľade zainteresovaná nukleová kyselina inkorporovaná do adenovírusových vektorov podľa vynálezu kóduje prednostne neuroaktívnu látku, t.j. látku schopnú realizovať priaznivý účinok na nervové bunky. Môže sa jednať o látku schopnú kompenzovať deficit endogénnej látky alebo redukovať prebytok endogénnej látky, alebo tiež o látku udeľujúcu bunkám nové vlastnosti. Môže sa predovšetkým jednať o rastový faktor, neurotrofný faktor, cytokinín, neurotransmiter alebo tiež o enzým alebo o neurotransmiterový alebo hormonálny receptor.
Z rastových faktorov možno prednostne uviesť stimulačné faktory kolónií (G-CSF, GM-CSF, M-CSF, CSF, atď) alebo rastové faktory fibroblastov (FGFa, FGFb) alebo vaskuláme bunky (VEGF). Z neurotrofných faktorov možno ako výhodné faktory uviesť najmä ciliámy neurotrofný faktor (CNTF), maturačné faktory gliálnych buniek (GMFa, b), GDNF, BDNF, NT3, NT5, atď Výhodnými cytokinínmi sú interleukíny a interferóny, zatiaľ čo z enzýmov sa prednostne používajú biosyntézne neurotransmiterové enzýmy (tyrozín-hydroxyláza, acetylcholín-transferáza, kyselina glutamová-dekarboxyláza), lyzozomálne enzýmy (hexosaminidázy, - arylsulfatázy, glukocerebrosidáza, HGPRT), enzýmy uplatňujúce sa pri detoxifikácii voľných radikálov (peroxid-dismutáza I, II alebo III, kataláza, glutation-peroxidáza). Z receptorov možno okrem iného použiť receptory androgénov (uplatňujúce sa pri Kennedyho ochorení).
Uvedené rôzne faktory môžu byť použité v natívnej forme alebo vo forme variantov alebo fragmentov, ktoré majú účinnosť rovnakého typu.
Taktiež je možné prenášať antimediátorové sekvnecie.
Nukleová kyselina môže byť prírodného alebo umelého pôvodu. Môže sa jednať najmä o genómovú DNA (gDNA), komplementárnu DNA (cDNA), hybridné sekvencie alebo syntetické alebo polosyntetické sekvencie. Táto nukleová kyselina môže byť ľudského, živočíšneho, rastlinného, bakteriálneho alebo vírusového pôvodu a podobne. Nukleová kyselina môže byť získaná ľubovoľnou známou technikou, vytriedená najmä z bánk, chemickou syntézou alebo tiež komplexnými metódami zahrňujúcimi chemickú alebo enzymatickú modifikáciu sekvencií získaných uvedeným vytriedením z bánk.. Výhodne sa jedná o komplementárnu a genómovú nukleovú kyselinu cDNA resp. GDNA.
Vo všeobecnosti nukleová kyselina zahrňuje tiež promočnú oblasť funkčnej transkripcie do motoneurónov, ako aj oblasť situovanú v polohe 3’ zainteresovaného génu, ktorá špecifikuje signál transkripčného konca a miesto polyadenylácíe. Súbor týchto prvkov tvorí expresnú kazetu. Pokiaľ ide o uvedenú promočnú oblasť, môže sa jednať o promočnú oblasť prirodzene zodpovednú za expresiu uvažovaného génu v prípade, že je táto oblasť schopná funkcie v infikovanej bunke. Môže sa tiež jednať o oblasti rôznych pôvodov (zodpovedné za expresiu ostatných proteínov alebo dokonca syntetických proteínov). Môže sa predovšetkým jednať o promočné sekvencie eukaryotických alebo virálnych génov. Tak napríklad sa môže jednať o promočné sekvencie pochádzajúce z genómu bunky, ktorá má byť infikovaná. Rovnako tak sa môže jednať o promočnú sekvenciu pochádzajúcu z genómu vírusu, vrátane použitého adenovírusu. V tomto ohľade možno uviesť napríklad promotory génov E1A, MLP, CMV, RSV, atď. Okrem toho môžu byť tieto promočné oblasti modifikované adíciou aktivačných sekvencií, regulačných sekvencií alebo sekvencií umožňujúcich tkanivovo špecifickú a majoritnú expresiu (promotory GFAP, enoláza, atď.). Inak v prípade, že heterológna nukleová kyselina neobsahuje promočnú sekvenciu, môže byť vložená do genómu vírusu až za takou promočnou sekvenciou.
Predmetom vynálezu je tiež spôsob prenosu nukleových kyselín do motoneurónov, ktorého podstata spočíva vtom, že zahrňuje muskuláme podanie adenovírusového vektora, v ktorého genóme je zabudovaná uvedená nukleová kyselina. Výhodne sa spôsob podľa vynálezu realizuje injekciou alebo injekciami do niekoľkých bodov jedného a toho istého svalu alebo v prípade, kedy je možné určiť miesto vnorenia nervu do svalu, jednou alebo niekoľkými injekciami na úrovni uvedeného miesta vnorenia nervu alebo v blízkosti uvedeného miesta vnorenia nervu.
V nasledujúcej časti popisu bude vynález bližšie objasnený pomocou príkladov uskutočnenia vynálezu, pričom tieto príklady majú iba ilustračný charakter a nijako neobmedzujú rozsah vynálezu, ktorý je jednoznačne vymedzený definíciou patentových nárokov.
Stručný opis obrázkov
Obr. 1 (fotografia A):
Značenie beta-galaktozidázy v pozdĺžnych rezoch (50 pm) potkanej miechy v bedrovej oblasti po intramuskulámej injekcii adenovírusu-beta-galaktozidázy do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka:
-difúzne značenie mnohých metoneuronálnych bunkových teliesok (na fotografii A vyznačené značkou v tvare prázdneho gréckeho písmena delta),
- intenzívnejšie značenie niekoľkých motoneurónov na úrovni bunkového telieska a neuritov, demonštrujúce typickú morfológiu motoneurónov (na fotografii A vyznačené značkou v tvare plného gréckeho písmena delta).
Obr. 2 (fotografia B): rovnaký objekt ako na fotografii A, avšak s použitím väčšieho zväčšenia:
Značenie beta-galaktozidázy v pozdĺžnych rezoch (50 pm) -potkanej miechy v bedrovej oblasti po intramuskulámej injekcii adenovírusu-beta-galaktozidázy do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka.
Obr. 3 (fotografia C):
Kombinované značenie beta-galaktozidázy a imunocytochemické značenie CGRP (Calciton Gene Related Peptide) v pozdĺžnych rezoch (50 pm) potkanej miechy v bedrovej oblasti po intramuskulámej injekcii adenovírusu-beta-galaktozidázy do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka.
Príklady uskutočnenia vynálezu
1. Injekcia adenovírusu-beta-galaktozidázy do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka neporanenej potkana alebo potkany, ktorý podstúpil hrudnú hemisekciu miechy
Tento príklad opisuje prenos génu b-gal na úrovni bedrových motoneurónov podaním do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka adenovírusu, v ktorom je zabudovaný uvedený gén.
. Štúdia bola realizovaná na modeli čiastočnej alebo úplnej miechy potkana uskutočnenej v spodnej oblasti za účelom ochromenia jednej alebo dvoch zadných končatín zvieraťa. Táto sekcia zbaví motoneuróny ich prívodných ciest vedúcich z vyšších centier a spôsobí ich degeneráciu. Podanie bolo uskutočnené tak, aby sa dosiahlo infekcie motoneurónov v stave lézie retrográdnym transportom.
Adenovírusovým vektorom použitým v tomto príklade je vektor Ad.RSV.beta-gal. Tento vektor je zbavený sekvencií nevyhnutných na jeho replikáciu, aj keď predsa len obsahuje sekvencie nevyhnutné na preniknutie do buniek určených na infikovanie, ako aj všetky podstatné sekvencie nevyhnutné na enkapsidáciu tohto adenovírusu. Uvedený vektor rovnako nesie pod kontrolou promótora RSV gén beta-galaktozidázy z Escherichia coli. Konštrukcia defektného rekombinantného adenovírusu Ad.RSV.beta-gal bola opísaná v literatúre (Stratford-Perricaudet a kol., J.CIin.Invest. 90 (1992) 626). Stručne povedané je adenovírus Ad.RSBbGal defektným rekombinantným adenovírusom (s delečnou oblasťou E1 a E3) získaným homologickou rekombináciou in vivo medzi mutantným adenovírusom Ad-d1324 (Thimmappaya a kol., Celí 31 (1982) 543) a plazmidom pAd.RSVbGal (Akli a kol.) 1993).
Uvedený plazmid pAd.RSVbGal obsahuje v orientácii od 5' do 3':
-fragment Pvull zodpovedajúci ľavému koncu adenovírusu Ad5 obsahujúci: sekvenciu ITR, začiatok replikácie, enkapsidačné signály a amplifikátor E1 A,
-gén kódujúci beta-galaktozidázu pod kontrolou promótora RSV (vírus Rousovho sarkómu) a
- druhý fragment genómu adenovírusu Ad5, ktorý umožňuje homologickú rekombináciu medzi plazmidom pAd.RSVbGal a adenovírusom d1324.
Po linearizácii enzýmom Clal sa plazmid pAd.RSVbGal a adenovírus d1324 ko-transfekujú do radu 293 v prítomnosti fosforečnanu vápenatého na umožnenie homologickej rekombinácie. Takto generované rekombinantné adenovírusy sa selektujú purifikáciou na purifikačnej platni. Po izolácii sa DNA rekombinantného adenovírusu amplifikuje v bunkovje rade 293, čo vedie k supemantantu obsahujúcemu nepurifikovaný defektný rekombinantný adenovírus majúci titer asi 1O10 pfu/ml. Vírusové častice sa potom purifikujú odstredením vgradiente chloridu cézneho s použitím známych techník (o tom viď najmä Graham a kol., Virology 52 (1973) 456). Adenovírus sa potom použije v purifikovanej forme fosfátového soľného roztoku (PBS).
Bezprostredne potom, čo pokusné zviera podstúpilo (alebo nepodstúpilo) hemisekciu miechy (v spodnej hrudnej oblasti, čo má za účinok ochrnutie jednej alebo oboch zadných končatín), boli aplikované do svalu tvoriaceho súčasť svalov lýtka tri injekcie adenovírusu Ad-RSV-b-Gal (107 pfu/ml injekcií). Do každého miesta bolo aplikované Hamiltonovou injekčnou striekačkou 9 μΙ adenovírusu.
Pokusné zvieratá sa potom utratili (infúzia 4 % formaldehydu) štyri dni po injekcii, čo je minimálna doba, počas ktorej môže dôjsť k retrográdnemu transportu zo svalu do miechy. V cervikálnej, hrudnej a bedrovej oblasti boli potom z miechy vyrezané tri rezy, pričom každý z týchto rezov mal hrúbku 50 pm a bol vedený v pozdĺžnom smere miechy. Získané rezy boli potom spracované za účelom vyvolania beta-galaktozidázy, čo umožňuje zviditeľniť bunky, ktoré boli infikované vírusom. Ďalšie rezy boli podrobené imunocytochemickému značeniu CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide), čo umožňuje špecifické značenie motoneurónov.
Beta-galaktozidáza bola vyvolaná zo svojho substrátu, X-Gal, pričom produkt reakcie poskytne modré zafarbenie.
CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) je neurotransmiter, ktorý je špecifickým značkovačom motoneurónov. Tento CGRP je vyvolaný imunocytochemicky so sekundárnou protilátkou kopulovanou s peroxidázou, pričom sa ako substrát enzýmu použije diaminobenzidín. Produkt reakcie poskytne gaštanovo hnedé zafarbenie.
Vyvolanie beta-galaktozidázy umožňuje dokázať prítomnosť infikovaných motoneurónov, výlučne v bedrovej oblasti, v stave lézie v prípade potkanov podrobených vyššie uvedenej hemisekcii a zo strany zodpovedajúcej injekcii.
Získali sa dva typy značenia, a to difúzne značenie bunkového telieska veľkého počtu motoneurónov a intenzívnejšie značenie bunkového telieska a neuritov obmedzenejšieho počtu motoneurónov (fotografia A a B). Tento rozdiel intenzity značenia je pravdepodobne spôsobený skutočnosťou, že iba obmedzený počet motoneurónov, ktoré boli veľmi blízko miestu injekcie, mohol absorbovať vírus intenzívnym spôsobom.
Kombinácia imunocytochemického značenia CGRP a vyvolania beta-galaktozidázy umožnila dokázať dvojakým zafarbením, že takmer všetky CGRP-pozitívne bunkové telieska (t.j. motoneuróny) boli infikované vírusom (viď fotografia C).

Claims (13)

1. Použitie rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do cervikálnych medulámych motoneurónov podávaním do svalov horných končatín (napríklad bicepsy, tricepsy).
2. Použitie rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na » prenos uvedenej nukleovej kyseliny do hrudných medulárnych motoneurónov podávaním do svalov hrudníka (napríklad hrudné svaly).
3. Použitie rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do bedrových alebo/a krížových medulámych motoneurónov podávaním do svalov dolných končatín (napríklad sval tvoriaci súčasť ♦ svalov lýtka).
4. Použitie rekombinantného adenovírusu, ktorého genóm je zbavený celej alebo časti oblasti E1 a celej alebo časti oblasti E3 alebo/a E4 a obsahuje zainteresovanú nukleovú kyselinu na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do medulámych motoneurónov intramuskulámym podaním.
5. Použitie rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme nukleovú kyselinu NT3 na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na prenos uvedenej nukleovej kyseliny do medulámych motoneurónov intramuskulámym podaním.
6. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 5, vyznačujúce sa tým, že adenovírusom je adenovírus ľudského pôvodu.
7. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 5, vyznačujúce sa tým, že adenovirusom je adenovírus zvieracieho pôvodu.
8. . Použitie podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúce sa t ý m, že zainteresovaná nukleová kyselina je vložená do genómu adenovírusu na úrovni oblasti Ε1, E3 alebo E4.
9. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že zainteresovaná nukleová kyselina kóduje látku schopnú mať priaznivý účinok na nervové bunky.
10. Použitie podľa nároku 9, vyznačujúce sa tým, že zainteresovaná nukleová kyselina kóduje rastový faktor, neurotrofný faktor, cytokinín, neurotransmiter alebo enzým alebo receptor.
11. Použitie podľa nároku 9, v y z n a č u j ú c e s a t ý m, že zainteresovaná nukleová kyselina naviac obsahuje signály umožňujúce expresiu látky v motoneurónoch.
12. Použitie podľa niektorého z nárokov 1 až 5, vyznačujúce sa tým, že sa intramuskulárne podanie uskutoční injekciou do niekoľkých bodov jedného a toho istého svalu.
13. Použitie rekombinantného adenovírusu obsahujúceho vo svojom genóme nukleovú kyselinu kódujúcu neurotrofný faktor na prípravu farmaceutickej kompozície určenej na liečbu amyotrofnej laterálnej sklerózy prenosom uvedenej nukleovej kyseliny do medulárnych motoneurónov intramuskulárnym podaním.
SK745-97A 1994-12-13 1995-12-12 Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons SK74597A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9415014A FR2727867B1 (fr) 1994-12-13 1994-12-13 Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux
PCT/FR1995/001650 WO1996018740A1 (fr) 1994-12-13 1995-12-12 Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK74597A3 true SK74597A3 (en) 1997-12-10

Family

ID=9469770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK745-97A SK74597A3 (en) 1994-12-13 1995-12-12 Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6632427B1 (sk)
EP (1) EP0797677A1 (sk)
JP (1) JPH10510428A (sk)
AU (1) AU712775B2 (sk)
BR (1) BR9510090A (sk)
CA (1) CA2208224A1 (sk)
CZ (1) CZ180697A3 (sk)
FI (1) FI972491A0 (sk)
FR (1) FR2727867B1 (sk)
HU (1) HUT77258A (sk)
NO (1) NO972712D0 (sk)
SK (1) SK74597A3 (sk)
WO (1) WO1996018740A1 (sk)

Families Citing this family (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6465253B1 (en) 1994-09-08 2002-10-15 Genvec, Inc. Vectors and methods for gene transfer to cells
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
US5770442A (en) * 1995-02-21 1998-06-23 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same
US6127525A (en) * 1995-02-21 2000-10-03 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same
JP4051416B2 (ja) 1995-06-15 2008-02-27 クルーセル ホランド ベスローテン フェンノートシャップ 遺伝子治療に使用されるヒト組換えアデノウイルス用のパッケージングシステム
BR9806912A (pt) 1997-01-17 2000-05-16 Rhone Poulenc Rorer Sa Processos para liberar um ou mais ácidos nucleicos em neurÈnios motores de mamìferos, para produzir proteìna em neurÈnios motores de mamìferos, para induzir nós periféricos ou colaterais de extremidades de axÈnios motores, para proteger contra degeneração axÈnica, para tratar um dano ao sistema nervoso, e, para tratar esclerose lateral amiotrófica.
FR2761258B1 (fr) * 1997-03-26 1999-06-11 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de stimulation de la regeneration nerveuse
US20030017138A1 (en) 1998-07-08 2003-01-23 Menzo Havenga Chimeric adenoviruses
US6929946B1 (en) 1998-11-20 2005-08-16 Crucell Holland B.V. Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6492169B1 (en) 1999-05-18 2002-12-10 Crucell Holland, B.V. Complementing cell lines
US20050232900A1 (en) * 1999-05-18 2005-10-20 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
WO2001036603A2 (en) * 1999-11-17 2001-05-25 Avigen, Inc. Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders
US7235233B2 (en) 2000-09-26 2007-06-26 Crucell Holland B.V. Serotype 5 adenoviral vectors with chimeric fibers for gene delivery in skeletal muscle cells or myoblasts
CA2471812C (en) * 2001-12-21 2012-09-04 The Salk Institute For Biological Studies Targeted retrograde gene delivery to motor neurons
US6998118B2 (en) * 2001-12-21 2006-02-14 The Salk Institute For Biological Studies Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection
ES2335657T3 (es) * 2002-04-25 2010-03-31 Crucell Holland B.V. Medios y metodos para la produccion de vectores de adenovirus.
BRPI0710800A2 (pt) * 2006-04-25 2012-01-17 Univ California administração de fatores de crescimento para o tratamento de distúrbios de snc
ES2658626T3 (es) 2009-02-12 2018-03-12 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor neurotrófico derivado de células gliales (GDNF) por inhibición de transcrito antisentido natural a GDNF
EP2396038B1 (en) 2009-02-12 2015-10-21 CuRNA, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
EP2963116B1 (en) 2009-03-04 2020-11-11 CuRNA, Inc. Treatment of sirtuin 1 (sirt1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to sirt 1
ES2656290T3 (es) 2009-03-16 2018-02-26 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor nuclear (derivado de eritroide 2) similar al 2 (NRF2) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a NRF2
WO2010107740A2 (en) 2009-03-17 2010-09-23 Curna, Inc. Treatment of delta-like 1 homolog (dlk1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlk1
US20120046236A1 (en) 2009-05-06 2012-02-23 Opko Curna Llc Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp
US9155754B2 (en) 2009-05-06 2015-10-13 Curna, Inc. Treatment of ABCA1 gene related diseases by inhibition of a natural antisense transcript to ABCA1
KR101749356B1 (ko) 2009-05-18 2017-07-06 큐알엔에이, 인크. 재편성 인자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 재편성 인자 관련된 질환의 치료
EP2432882B1 (en) 2009-05-22 2019-12-25 CuRNA, Inc. TREATMENT OF TRANSCRIPTION FACTOR E3 (TFE3) and INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE 2 (IRS2) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO TFE3
WO2010138806A2 (en) 2009-05-28 2010-12-02 Curna, Inc. Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene
CA2765700C (en) 2009-06-16 2021-01-05 Opko Curna, Llc Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene
EP2443238B1 (en) 2009-06-16 2017-03-22 CuRNA, Inc. Treatment of paraoxonase 1 (pon1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pon1
JP6073133B2 (ja) 2009-06-24 2017-02-01 クルナ・インコーポレーテッド 腫瘍壊死因子受容体２（ｔｎｆｒ２）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｔｎｆｒ２関連疾患の治療
KR101807324B1 (ko) 2009-06-26 2017-12-08 큐알엔에이, 인크. 다운 증후군 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 다운 증후군 유전자 관련된 질환의 치료
JP6128848B2 (ja) 2009-08-05 2017-05-17 クルナ・インコーポレーテッド インスリン遺伝子（ｉｎｓ）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるインスリン遺伝子（ｉｎｓ）関連疾患の治療
WO2011031482A2 (en) 2009-08-25 2011-03-17 Curna, Inc. Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap
US9173895B2 (en) 2009-12-16 2015-11-03 Curna, Inc. Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (MBTPS1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MBTPS1
CA2782375C (en) 2009-12-23 2023-10-31 Opko Curna, Llc Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2
WO2011079261A2 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Curna, Inc. Treatment of hepatocyte growth factor (hgf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to hgf
WO2011090741A2 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Opko Curna, Llc TREATMENT OF TUMOR PROTEIN 63 (p63) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO p63
JP5993744B2 (ja) 2009-12-29 2016-09-14 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド 核呼吸因子１（ｎｒｆ１）に対する天然アンチセンス転写物の阻害による核呼吸因子１関連疾患の治療
US8946181B2 (en) 2010-01-04 2015-02-03 Curna, Inc. Treatment of interferon regulatory factor 8 (IRF8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IRF8
US8912157B2 (en) 2010-01-06 2014-12-16 Curna, Inc. Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene
RU2611191C2 (ru) 2010-01-11 2017-02-21 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных со связывающим половые гормоны глобулином (гспг), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к гспг
JP5981850B2 (ja) 2010-01-25 2016-08-31 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド ＲＮａｓｅＨ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるＲＮａｓｅＨ１関連疾患の治療
CN102844435B (zh) 2010-02-22 2017-05-10 库尔纳公司 通过抑制吡咯啉‑5‑羧酸还原酶1(pycr1)的天然反义转录物而治疗pycr1相关疾病
TWI644675B (zh) 2010-04-09 2018-12-21 可娜公司 藉由抑制纖維母細胞生長因子２１（ｆｇｆ２１）之天然反義轉錄物以治療ｆｇｆ２１相關疾病
KR101992076B1 (ko) 2010-05-03 2019-06-21 큐알엔에이, 인크. 시르투인 (sirt)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 시르투인 (sirt) 관련된 질환의 치료
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
EP3299464B1 (en) 2010-05-26 2019-10-02 CuRNA, Inc. Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1
NO2593547T3 (sk) 2010-07-14 2018-04-14
CA2813901C (en) 2010-10-06 2019-11-12 Curna, Inc. Treatment of sialidase 4 (neu4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to neu4
US9222088B2 (en) 2010-10-22 2015-12-29 Curna, Inc. Treatment of alpha-L-iduronidase (IDUA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IDUA
US20130210893A1 (en) 2010-10-27 2013-08-15 Curna, Inc. Treatment of interferon-related developmental regulator 1 (ifrd1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ifrd1
JP6071893B2 (ja) 2010-11-23 2017-02-01 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド Ｎａｎｏｇへの天然アンチセンス転写物の阻害によるｎａｎｏｇ関連疾患の治療
US9593330B2 (en) 2011-06-09 2017-03-14 Curna, Inc. Treatment of frataxin (FXN) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to FXN
WO2013138374A2 (en) 2012-03-15 2013-09-19 Curna, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
WO2015171918A2 (en) 2014-05-07 2015-11-12 Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Compositions and uses for treatment thereof
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
SG11201702682PA (en) 2014-10-03 2017-04-27 Cold Spring Harbor Lab Targeted augmentation of nuclear gene output
CA3000971A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
CA3005245A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of alagille syndrome
CA3005090A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of liver diseases
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
EP3389725B1 (en) 2015-12-14 2022-04-06 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of central nervous system diseases
JP7054675B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-14 コールド スプリング ハーバー ラボラトリー 網膜色素変性症１８と網膜色素変性症１３の処置のための組成物と方法
JP7049248B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-06 コールド スプリング ハーバー ラボラトリー 常染色体優性精神遅滞－５とドラベ症候群の処置のためのアンチセンスオリゴマー
AU2018322319B2 (en) 2017-08-25 2021-08-05 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
EP3818083A2 (en) 2018-07-03 2021-05-12 Elstar Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
US20230287410A1 (en) 2020-05-11 2023-09-14 Stoke Therapeutics, Inc. Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
KR20240004462A (ko) 2021-04-08 2024-01-11 마렝고 테라퓨틱스, 인크. Tcr에 결합하는 다기능성 분자 및 이의 용도
CA3214540A1 (en) 2021-04-22 2022-10-27 Pasi A. Janne Compositions and methods for treating cancer
WO2023178311A1 (en) * 2022-03-18 2023-09-21 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods for treating disorders under hypothermia and compositions relating to the same

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
WO1993007270A1 (en) * 1991-10-01 1993-04-15 Genentech, Inc. Production of gpa neurotrophic factor
ZA935355B (en) * 1992-08-07 1995-01-23 American Home Prod Recombinant andenovirus vaccines
WO1994008026A1 (en) * 1992-09-25 1994-04-14 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Adenovirus vectors for the transfer of foreign genes into cells of the central nervous system, particularly in brain
EP0705344B8 (en) * 1993-06-24 2006-05-10 Advec Inc. Adenovirus vectors for gene therapy
DK0667912T3 (da) * 1993-07-13 2008-11-10 Centelion Defekte adenovirusvektorer og anvendelse heraf i genterapi

Also Published As

Publication number Publication date
BR9510090A (pt) 1998-07-14
FR2727867B1 (fr) 1997-01-31
AU712775B2 (en) 1999-11-18
MX9704102A (es) 1997-09-30
CZ180697A3 (en) 1997-09-17
FI972491A (fi) 1997-06-12
AU4350296A (en) 1996-07-03
EP0797677A1 (fr) 1997-10-01
FI972491A0 (fi) 1997-06-12
HUT77258A (hu) 1998-03-02
FR2727867A1 (fr) 1996-06-14
CA2208224A1 (fr) 1996-06-20
NO972712L (no) 1997-06-12
NO972712D0 (no) 1997-06-12
JPH10510428A (ja) 1998-10-13
WO1996018740A1 (fr) 1996-06-20
US6632427B1 (en) 2003-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK74597A3 (en) Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons
US6669942B2 (en) Defective adenoviruses including a therapeutic gene and an immunoprotectove gene
Facchiano et al. Promotion of regeneration of corticospinal tract axons in rats with recombinant vascular endothelial growth factor alone and combined with adenovirus coding for this factor
US6245330B1 (en) Recombinant adenoviruses coding for glial-derived neurotrophic factor (GDNF)
US6685934B1 (en) Recombinant adenoviruses coding for basic fibroblast growth factors (BFGF)
JP2012139220A (ja) 複製欠損アデノウイルスｔｎｆベクター
AU699867B2 (en) Recombinant adenoviruses for gene therapy in cancers
JP3835809B2 (ja) 組み換えアデノウイルスおよび眼疾患の治療のための遺伝子療法におけるそれらの使用
Joung et al. Effective gene transfer into regenerating sciatic nerves by adenoviral vectors: potentials for gene therapy of peripheral nerve injury
Fong et al. Rapid and efficient gene transfer in human hepatocytes by herpes viral vectors
US20040224409A1 (en) Recombinant adenoviruses coding for brain-derived neurotrophic factor (BDNF)
US7018628B1 (en) Vectors derived from baculovirus and use for transferring nucleic acids into nerve cells of vertebrates
US6552003B2 (en) Muscle reinnervation and motor axon sprouting by administering DNA sequences encoding NT-3 and CNTF
IL112993A (en) Recombinant viruses, their preparation and their use in gene therapy
US6099831A (en) Viral recombinant vectors for expression in muscle cells
AU703793B2 (en) Recombinant adenoviruses coding for brain-derived neurotrophic factor (BDNF)
JP2003527816A (ja) バキュロウイルス由来のベクター及び脊椎動物の神経細胞に核酸を導入するための該ベクターの使用
MXPA97004102A (en) Transfer of genes in the medular motoneurons by means of adenovira vectors
KR100720201B1 (ko) 트랜스진의 신경-특이성 발현을 위한 음성 조절요소의 용도
KR20000070272A (ko) 수질 운동 뉴런 중으로의 아데노바이러스 벡터 매개-유전자전달방법
Robbins et al. Vectors for Gene Transfer to Joints
AU2928202A (en) Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons